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Small ruminant lentiviruses, caprine arthritis encephalitis virus, and Maedi-Visna virus cause diseases that result in significant productive losses, mostly in dairy animals. These viruses belong to the Retroviridae family, Lentivirus genus, and constitute a heterogeneous group, which may generate implications for the diagnosis and control of small ruminant lentiviruses. Losses caused by them are associated with reproductive failure, short productive life, and decreased milk production by the infected animals. In addition, these viruses may reduce milk quality, affecting the production of dairy products such as cheese. Small ruminant lentiviruses lead to indirect losses, decreasing herd value and forcing the development of epidemiological trade barriers for animal germplasm. Control of small ruminant lentiviruses is important to promote optimal milk production and to reduce costs with medicine and technical assistance. This control may vary in caprine and ovine populations of each country, according to seroprevalence, variety of breeds, and peculiarities of the practiced management. [Lentiviroses de pequenos ruminantes: perdas produtivas e econômicas, consequências da doença]. Resumo: Os lentivírus de pequenos ruminantes, o vírus da artrite encefalite caprina e o vírus Maedi-Visna causam enfermidades que ocasionam perdas produtivas significativas, principalmente em animais com aptidão leiteira. Esses vírus pertencem à família Retroviridae e ao gênero Lentivirus e formam um grupo genético heterogêneo, o que pode ocasionar implicações para o diagnóstico e o controle dos lentivírus de pequenos ruminantes. As perdas causadas pelos lentivírus de pequenos ruminantes estão relacionadas com falhas reprodutivas, vida produtiva curta e diminuição da produção leiteira dos animais infectados. Além disso, esses vírus podem promover a redução da qualidade do leite, afetando a produção de laticínios, tal como o queijo. Os lentivírus de pequenos ruminantes levam a perdas indiretas, reduzindo o valor dos rebanhos e forçando o desenvolvimento de barreiras comerciais epidemiológicas para germoplasma animal. O controle dos lentivírus de pequenos ruminantes é importante para promover uma maior produção de leite e reduzir os custos com medicamentos e assistência técnica. Esse controle pode variar de acordo com a população caprina e ovina de cada país em termos de soroprevalência, variedade de raças e particularidades do manejo adotado Made available in DSpace on 2017-12-13T23:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CNPC2017Small.pdf: 1670203 bytes, checksum: 5d9c7dcc05716a34e4a1afee7e3668d5 (MD5) Previous issue date: 2017-12-13 [ALICE ANDRIOLI PINHEIRO].

Background: Contagious agalactia is an infectious disease caused by Mycoplasma agalactiae (M. agalactiae) that occurs in small ruminants leading to productive and economic losses. Due to the similarity of clinical signs presented in Caprine Arthritis Encephalitis (CAE), which is a viral disease, a differential diagnosis is important. Therefore, this study aimed to investigate the presence of anti-Mycoplasma agalactiae antibodies in dairy goat flocks in Ceará State and possible correlation with CAE. Materials, Methods & Results: The research was performed in four mesoregions in Ceará State (Metropolitan Region of FortalezaMRF; Northeast Ceará - NeC; North Ceará - NC; Sertões in Ceará - SC), from which 16 productions located in 10 cities with the highest representativeness for goat milk production within the State or mesoregion were sampled. A total of 417 females and 69 males (486 animals) of breeds with dairy production aptitude, pure or crossbreed, maintained in semi-intensive or intensive systems, were tested. Blood serum was obtained by venipuncture of the jugular vein with vacuum pressure syringe followed by centrifugation at 1,500 g for 10min. Antibodies against the caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) were detected with micro technique of agarose gel immunodiffusion (AGID) and Western Blot (WB). The anti-Mycoplasma agalactiae antibodies were detected with commercial kit of enzymatic immunoassay (IDEXX Laboratories). Seroprevalence of M. agalactiae in dairy goat flocks in Ceará State was 0.62% (3/486). From the total of 16 visited productions, 18.75% (3/16) had seropositive animals for M. agalactiae located in MRF, NC and SC mesoregions. CAE was diagnosed in 56.25% (9/16) of productions with AGID and in 81.25% (13/16) with WB. In addition, 5.2% (25/486) of animals were seropositive for CAE with AGID and 16.6% (80/486) with WB. Animals that reacted positive for M. agalactiae were all females of pure breed with milk production aptitude in distinct mesoregions submitted to intensive rearing system. None of these animals was positive in neither test (AGID or WB) for CAE. Therefore, no correlation of results obtained in diagnosis of M. agalactiae by ELISA and CAEV by AGID or WB (P < 0.05) was identified. However, two out of three productions that were positive for M. agalactiae presented positive results for CAEV with frequencies of 10% and 20%. Discussion: Seroprevalence of M. agalactiae in Ceará State was low in comparison with other Brazilian states and even other countries. However, the presence of the pathogen in more than one mesoregion indicates that the disease occurs in different locations within the State. Therefore, flocks in Ceará are susceptible to the infection, which may be favored by uncontrolled commerce that occurs with deficient surveillance, associated with the importation of animals to improve flock genetic quality. The presence of the pathogen in dairy goats may contribute to significant losses in the local production. On the other hand, CAE was diagnosed in nearly all productions proving the dissemination of this lentivirus infection among dairy goat flocks in Ceará State. Although an association between these diseases was not identified, the presence of a retrovirus in the organism may favor co-infection with another micro-organism, promoting the deficiency in the immune system of the host. In conclusion, M. agalactiae is present in different mesoregions of the Ceará State and control measures should be adopted in short term to prevent pathogen dissemination and, consequently reduce economic and productive losses in the local dairy goat production. No correlation was identified between the prevalence of infection by CAEV and M. agalactiae in this study. [Mycoplasma agalactiae in dairy goat flocks bred in Ceará State of Ceará in association with Caprine Arthritis Encephalitis Virus]. Made available in DSpace on 2018-02-27T00:42:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CNPC2018Mycoplasma.pdf: 384799 bytes, checksum: 41ca4219fc4691d2ffc562158295282c (MD5) Previous issue date: 2018-02-26 [ALICE ANDRIOLI PINHEIRO].

Os lentivírus de pequenos ruminantes, vírus da artrite encefalite caprina e vírus maedi visna, pertencem a família Retroviridae. São relacionados genética e antigenicamente, causam doenças crônicas e progressivas, levando a perdas produtivas e econômicas. A transmissão interespécie desses vírus pode ser preocupante devido a recombinação genética desses lentívirus. O estudo da proteômica desses vírus torna-se necessário para o conhecimento da função dos genes. A análise proteômica sorológica (SERPA) associada a espectrometria de massas (EM), dentre muitas possibilidades, permite o conhecimento de proteínas de valor diagnóstico. Com isso objetivou-se delinear o perfil proteíco-imunogênico bidimensional de lentivírus de pequenos ruminantes caracterizando proteínas detentoras de alto valor diagnóstico do antígeno dos lentivírus de pequenos ruminantes. Primeiramente realizou-se explant de células de membrana sinovial caprina e posteriormente, com o subcultivo das células, a produção do antígeno de três cepas virais MVV K1514, CAEV Cork e LVC-CE. Essas amostras foram submetidas à eletroforese bidimensional e western blot. Proteínas imunorreativas foram escolhidas para o sequenciamento através de espectrometria de massas. Como o resultado elaborou-se o perfil proteíco-imunogênico bidimensional das cepas de LVPR, inclusive da cepa viral do estado do Ceará (LVC-CE), dados inéditos para o país. Seis proteínas tiveram sequencias homologas compatíveis com proteínas de CAEV e MVV, referentes às proteínas p28, p19 e p15. Demonstrou-se a similaridade da resposta imune entre as cepas estudadas. A técnica SERPA associada à EM permitiu a identificação e caracterização peptídica das proteínas imunogênicas das cepas padrão CAEV Cork e MVV K1514, e da amostra de LVPR nativa do estado do Ceará. Abstract: The small ruminant lentiviruses (SRLV), the caprine arthritis encephalitis virus and maedi visna virus belong to Retroviridae family. They are related genetically and antigenically, and induce chronic and progressive disease which leads to productive and economic losses. The interspecific transmission is worrying due to the genetic recombination of these viruses. The proteomic study is necessary in order to know the genes function. Serological proteome analysis (SERPA) in association with mass spectrometry, besides others possibilities, allow knowing high-value proteins for diagnosis. The aim of this study was to determine the two-dimensional proteinimmunogenic profile and characterize the high-value proteins for diagnostic of different strains of SRLV. Initially, goat synovial membrane cells were explanted and subculture for antigen production of three viral strains CAEV Cork, MVV K1514 and LVC-CE. These samples were submitted to two-dimensional electrophoresis and western blot. Immunoreactive proteins were chosen in order to be sequenced by mass spectrometry. The results showed two-dimensional protein-immunogenic profile of the SRLV strains. Six proteins had homologous sequences compatible to protein CAEV and MVV, related to protein p28 and p15. The SERPA in association with mass spectrometry allowed the immunogenic protein identification and peptide characterization of the two standard strains, CAEV Cork and MVV K1514, and also the national one isolated in Ceará state. Dissertação (Mestrado em Zootecnia) - Centro de Ciências Agrárias e Biológicas, Universidade Estadual Vale do Acaraú, Sobral. Orientador: Raymundo Rizaldo Pinheiro; Coorientadora: Alice Andrioli Pinheiro.

Abstrract: This study was conducted in order to evaluate the transmission of caprine lentivirus to sheep using different experimental groups. The first one (colostrum group) was formed by nine lambs receiving colostrum from goats positive for small ruminant lentiviruses (SRLV). The second group (milk group) was established by nine lambs that received milk of these goats. Third was a control group, consisting of lambs that suckled colostrum and milk of negative mothers. Another experimental group (contact group) was formed by eight adult sheep, confined with two naturally infected goats. The groups were monitored by immunoblotting (IB), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), agar gel immunodiffusion (AGID) and nested polymerase chain reaction (nPCR). All lambs that suckled colostrum and milk of infected goats and six sheep of the contact group had positive results in the nPCR, although seroconversion was detected only in three of the exposed animals, with no clinical lentiviruses manifestation, in 720 days of observation. There was a close relationship between viral sequences obtained from infected animals and the prototype CAEV-Cork. Thus, it was concluded that SRLV can be transmitted from goats to sheep, however, the degree of adaptation of the virus strain to the host species probably interferes with the infection persistence and seroconversion rate.

Resumo: A maioria das pesquisas para diagnóstico e avaliação da lentiviroses se baseia na identificação, direta ou indireta, da proteína viral no sangue, leite, sêmen, saliva ou tecidos. Trabalhos com proteômica avaliando as lentiviroses são escassos. A princípio, a análise, detecção e/ou avaliação do vírus são realizadas a partir, principalmente, de amostras de sangue, sendo a maioria dos estudos realizados relacionada ao HIV. O perfil proteico do plasma seminal de pequenos ruminantes associado com índices reprodutivos já foi determinado, mas trabalhos correlacionando a presença dessas proteínas no sêmen à Artrite Encefalite Caprina (CAE) são escassos. Na primeira fase desse trabalho foi avaliada a atividade das metaloproteinases (MMPs) no sangue por meio da zimografia (eletroforese unidimensional) e, na segunda fase, o trabalho objetivou analisar o perfil proteico do plasma seminal de caprinos soropositivos cronicamente para a CAE e identificar proteínas presentes no plasma seminal relacionadas com a enfermidade que possam ser utilizadas no futuro como possíveis marcadores da doença. Para tanto, foi realizada a eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida (2D-PAGE) e espectrometria de massa de amostras de plasma seminal de reprodutores soropositivos crônicos para a CAE. A zimografia mostrou alta atividade das MMPs (MMP-2 e MMP-9) no grupo soropositivo. A avaliação seminal mostrou não haver diferença estatística para os parâmetros volume, motilidade e vigor (respectivamente, 0,97A ± 0,61; 82,78A ± 7,52; 3,89A ± 0,58) entre grupos; porém existente para a concentração espermática (4,22B ± 0,71). A análise bidimensional dos géis mostrou grande número de spots em ambos os grupos avaliados, porém com maior número nos animais soropositivos. A cronicidade da CAE em reprodutores caprinos pode ter sido a responsável pela maior expressão e atividade das proteínas no sangue (MMP-2 e pro-MMP-2) e plasma seminal. A espectrometria de massa permitiu identificar no plasma seminal proteínas de resposta imune, relacionadas, possivelmente, ao quadro crônico da doença. Abstract: The most research for diagnosis and evaluation of lentiviruses are based on the identification (direct or indirect) of the viral protein in the blood, milk, semen, saliva or tissues. Works with proteomics evaluating lentiviruses are scarce. At first, virus's analysis, detection and assessment are made from mainly blood samples, most of the studies related to HIV. Studies have conducted the protein profile of seminal plasma of small ruminants associating with reproductive parameters but works correlating the presence of these proteins in the semen with Caprine Arthritis Encephalitis (CAE) are scarce. The first phase of this work aimed to evaluate the activity of matrix metalloproteinases (MMPs) in the blood by zymography (1DPAGE). In the second phase, the study aimed to analyze the protein profile of seropositive CAE goats and to identify proteins related with the disease that may be used as markers in the future. Two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry was used on samples of seropositive goat bucks chronically infected with CAE. The zymography showed high activity of MMPs (MMP-2 and MMP-9) in the seropositive group. Semen evaluation showed no difference with volume, motility and vigor parameters (respectively, 0.97A ± 0.61; 82.78A ± 7.52; 3.89A ± 0.58); however, there was significant difference of sperm concentration between groups (4.22B ± 0.71). The two-dimensional analysis revealed a great number of spots in both groups, however there was a higher number in seropositive animals. CAE chronicity in bucks may have been responsible for greater expression and activity of proteins in seminal plasma. Mass spectrometry allowed the identification of immune response proteins in seminal plasma, possibly related to the chronic state of the disease. Tese (Doutorado) - Universidade Estadual do Ceará, Faculdade de Veterinária, Fortaleza. Orientação: Maria Fátima da Silva Teixeira; Coorientação: Ângela Maria Xavier Eloy (CNPC).

Animal agglomerations at commercial events such as trade fairs represent an important facilitator in infectious disease transmission. Thus, it is crucial to understand the epidemiology of infectious diseases in small ruminants. The objective of this study was to examine lentiviral presence in goats and sheep traded at the animal fair of Tabira city (Sertão region of Pernambuco) and identify possible risk factors associated with infection. We collected serum samples from 233 crossbred goats and 119 crossbred sheep, belonging to 12 breeders, at the Tabira livestock fair from November 2014 to June 2015. An epidemiological questionnaire was used to analyze the risk factors. Agar gel immunodiffusion (AGID) and western blotting (WB) were performed to diagnose small ruminant lentivirus (SRLV) infection. In the AGID test, we used maedi-visna virus (MVV) antigens for sheep and caprine arthritis/encephalitis virus (strain Cork) (CAEV-Co) antigen for goats. The WB analysis used CAEV-Co antigen for both species. Variables from the questionnaire were analyzed with univariate and multivariate statistics. One seropositive goat but no sheep was identified via AGID. According to the WB results, 15/233 goats (6.44%; CI95% = 3.94 - 10.35%) and 8/119 sheep (6.72%; CI95% = 3.45 - 12.71%) were seropositive, totaling 23/352 reactive animals (6.53%; CI95% = 4.39 - 9.61%) from 12 herds. Annual vermifugation of the animals was a significant risk factor (odds ratio = 5.9; CI95% = 1.7-19.8; p = 0.04) for disease in goats, but no variables associated with infection risks were identified in sheep. We concluded that SRLV was present in goats and sheep at the animal fair. Western blots were more sensitive than AGID for SRLV diagnosis. Practices aiming to improve sanitary management may reduce the risk of infection in goats. All studied herds included animals identified as seropositive for SRLV. Therefore, we recommend adopting measures that increase disease diagnosis while intensifying traffic control and surveillance of animal agglomerations. [Caracterização epidemiológica e fatores de risco associados às lentiviroses em pequenos ruminantes comercializados em feira de animais no Sertão de Pernambuco, semiárido brasileiro]. Resumo: Aglomerações de animais em eventos comerciais do tipo feiras de negócios representam um importante elo na transmissão de doenças infecciosas, resultando na importância do conhecimento acerca da epidemiologia das doenças de pequenos ruminantes. Desta forma, o objetivo desse estudo foi determinar a presença das lentiviroses em caprinos e ovinos comercializados na feira de animais da cidade de Tabira, Sertão de Pernambuco, bem como a identificação de possíveis fatores de risco associados à enfermidade. Foram coletadas amostras de soro de 233 caprinos e 119 ovinos, sem raça definida, pertencentes a doze proprietários, na feira de animais vivos do município no período de novembro de 2014 a junho de 2015. Foi aplicado questionário epidemiológico para análise dos fatores de risco. O diagnóstico da infecção por Lentivirus de Pequenos Ruminantes (LVPR) nas espécies foi realizado pela Imunodifusão em ágar-gel (IDGA) e Western Blotting (WB). Na IDGA foram utilizados antígenos de Vírus Maedivisna (MVV) para ovinos e de vírus da Artrite-Encefalite Caprina (CAEV), cepa CAEV- Cork para caprinos, e no WB foi utilizado a cepa CAEV- Cork como antígeno para ambas espécies. As variáveis obtidas no questionário foram submetidas a análises estatísticas univariada e multivariada. Pela técnica de IDGA foi possível identificar um caprino soropositivo. Não foi detectada positividade nos ovinos. No WB 15/233 (6,44%; IC95% = 3,94 ? 10,35%) caprinos e 8/119 (6,72%; IC95% = 3,45 ? 12,71%) ovinos foram soropositivos, totalizando 23/352 (6,53%; IC95% = 4,39 ? 9,61%) animais reagentes. Os doze rebanhos estudados apresentaram animais soropositivos. Vermifugar os animais anualmente (odds ratio = 5,9; IC 95% = 1,7 ? 19,8; p = 0,04) foi identificado como fator de risco para enfermidade em caprinos. Não foram identificadas variáveis associadas ao risco de infecção em ovinos. Concluiu-se que os LVPR estão presentes em caprinos e ovinos comercializados na feira de animais. A técnica de WB apresentou maior sensibilidade que a IDGA para diagnóstico dos LVPR. Melhorias nas práticas de manejo sanitário podem reduzir o risco de infecção nos caprinos. Todos os rebanhos estudados apresentaram animais soropositivos para lentiviroses de pequenos ruminantes (SRLV), sendo recomendado adotar medidas que possibilitem aumentar o diagnóstico da doença e intensificar o controle de trânsito e fiscalização das aglomerações animais. Made available in DSpace on 2017-09-24T00:13:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CNPC2017Epidemiological.pdf: 316153 bytes, checksum: 8fa86a42b6c56141e3e96d2c615455cf (MD5) Previous issue date: 2017-09-22

Resumo: A artrite-encefalite caprina (CAE) e a maedi-visna (MV) acometem caprinos e ovinos, respectivamente. Durante anos, os agentes etiológicos dessas enfermidades foram considerados como específicos a cada espécie animal. Entretanto, análises filogenéticas têm demonstrado a heterogeneidade desse vírus, reunindo diferentes genótipos e subtipos em um grupo denominado de lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR). Sendo assim, o principal objetivo deste trabalho foi avaliar a transmissão interespecífica do lentivírus de caprinos para ovinos, a partir de quatro grupos experimentais. O primeiro (grupo colostro) foi formado por nove cordeiros que receberam colostro de cabras positivas para LVPR. O segundo (grupo leite) foi estabelecido por nove cordeiros que receberam leite dessas cabras. O terceiro foi um grupo controle, constituído por dez cordeiros que mamaram colostro e leite de suas mães negativas. Já o quarto grupo (grupo contato) foi formado por oito ovinos adultos confinados com duas cabras naturalmente infectadas, propiciando a análise de transmissão horizontal. Os grupos foram monitorados por immunoblotting (IB), ensaio imunoenzimático (ELISA), imunodifusão em gel de agarose (IDGA) e reação em cadeia da polimerase do tipo nested (nPCR). Todos os cordeiros que mamaram colostro e leite de cabras infectadas e seis ovinos do grupo contato apresentaram resultados positivos na nPCR, apesar de soroconversão somente ter sido detectada em três dos 26 animais expostos, não havendo manifestação clínica de lentiviroses, em 720 dias de observação. Análises filogenéticas demonstraram estreita relação entre sequências virais obtidas dos animais infectados e sequência do protótipo lentiviral caprino CAEV-Cork. Dessa forma, concluiu-se que os lentivírus foram transmitidos de caprinos para ovinos, entretanto, o grau de adaptação da cepa viral à espécie hospedeira provavelmente interfere na persistência da infecção, taxa de soroconversão e manifestação da doença. Outras avaliações ainda foram conduzidas nos grupos colostro e controle, para estudo da transferência de imunidade passiva colostral contra LVPR, em cordeiros. Determinaram-se as concentrações de proteína sérica total (PST), albumina (ALB), globulinas (GLOB) e imunoglobulina G (IgG). Em ambos os grupos, as menores médias de PST, GLOB e IgG foram observadas ao nascimento e as maiores médias foram constatadas às 24 horas de vida, devido à absorção de imunoglobulinas colostrais. Para o grupo colostro, a transferência de imunidade também pôde ser constatada pelas provas de imunodiagnóstico. Ao nascimento, os animais estavam soronegativos. Com 24 horas, todos foram reagentes nos três testes sorológicos. Posteriormente, resultados negativos começaram a ser observados, a partir dos 15 dias de idade, pela prova de IDGA. Já pelo teste de ELISA, todos os animais permaneceram reagentes até os 50 dias de vida. Apenas o IB foi capaz de detectar anticorpos anti-LVPR aos 70 dias. Esses dados estão de acordo com a sensibilidade e especificidade de cada prova sorológica e demonstram que aos 90 e 120 dias de idade, anticorpos colostrais anti-LVPR não mais são detectados no soro de cordeiros, com o emprego dessas metodologias. [Interspecies transmission of lentiviruses from goats to sheep]. Caprine arthritis-encephalitis (CAE) and maedi-visna (MV) affect goats and sheep, respectively. For many years, the etiological agents of these diseases were considered specific to each animal species. However, phylogenetic analyses have demonstrated the heterogeneity of these viruses, bringing the various genotypes and subtypes in a group called small ruminant lentiviruses (SRLV). Thus, the main objective of this study was to evaluate the transmission of caprine lentivirus to sheep, using four experimental groups. The first (colostrum group) was formed by nine lambs receiving colostrum from goats positive for SRLV. The second (milk group) was established by nine lambs that received milk of these goats. The third was a control group, consisting of lambs that suckled colostrum and milk of negative mothers. The fourth group (contact group) was formed by eight adult sheep, confined with two naturally infected goats. The groups were monitored by immunoblotting (IB), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), agar gel immunodiffusion (AGID) and nested polymerase chain reaction (nPCR). All lambs that suckled colostrum and milk of infected goats and six sheep of the contact group had positive results in the nPCR, although seroconversion was detected only in three of the exposed animals, with no clinical lentiviruses manifestation, in 720 days of observation. Phylogenetic analysis showed a close relationship between viral sequences obtained from infected animals and the prototype CAEV-Cork. It was concluded that SRLV have been transmitted from goats to sheep, however, the degree of adaptation of the virus strain to the host species probably interferes with the infection persistence, seroconversion rate and disease manifestation. Further analyzes were also conducted in colostrum and control groups for the study of passive immunity against SRLV in lambs. The concentrations of total serum protein (TSP), albumin (ALB), globulin (GLOB) and immunoglobulin G (IgG) were determined. In both groups, the lowest averages of TSP, GLOB and IgG were observed at birth and the highest averages were observed at 24 hours of life, due to absorption of colostral immunoglobulins. For colostrum group, transfer of immunity could also be detected by immunodiagnostic tests. At birth, the animals were negative. After 24 hours, all animals were positive in three serological tests. Negative results were first observed 15 days after birth by the AGID test. As for ELISA testing, all animals remained reagent until 50 days old. Only IB was able to detect anti-SRLV at 70 days. These data are consistent with the sensitivity and specificity of serological tests and show that at 90 and 120 days of age, colostral antibodies to SRLV are no longer detected in the serum of lambs, with the use of these methodologies. Made available in DSpace on 2017-08-10T23:54:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CNPC2014Transmissaointerespecies.pdf: 5495599 bytes, checksum: bd6b7f9d3ad8ba469284a7f987035cf8 (MD5) Previous issue date: 2015-02-05 Tese (Doutorado em Ciência Animal nos Trópicos) - Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Salvador. Orientador: Joselito Nunes Costa; Co-orientador: Raymundo Rizaldo Pinheiro (CNPC).

As enfermidades de um modo geral são consideradas fatores limitantes para as criações de pequenos ruminantes, uma vez que as mesmas promovem perdas consideráveis. A toxoplasmose tem como agente etiológico o Toxoplasma gondii, protozoário pertencente ao Filo Apicomplexa que acomete todos os animais homeotérmicos, inclusive o homem. Nos caprinos, a principal repercussão clínica e econômica é o aborto. Algumas enfermidades podem favorecer a instalação da toxoplasmose nos rebanhos, dentre as quais a Artrite Encefalite Caprina (CAE), doença infecciosa, multissistêmica, causada por um retrovírus do gênero Lentivírus, que acomete caprinos de todos os sexos, idades e raças. Objetivou-se com este estudo determinar o perfil soroepidemiológico de Toxoplasma gondii em caprinos do Ceará e avaliar a associação com a Artrite Encefalite caprina. Foram avaliados soro de 833 animais. A prova sorológica utilizada para detecção de anticorpos anti-T. gondii foi o ELISA. Para a detecção de anticorpos anti-CAEV utilizou-se a técnica de Imunodifusão em Gel de Agarose - IDGA e o Western Blot. Os resultados obtidos mostram ocorrência de 63,9% (532/833), para toxoplasmose. Os animais que apresentaram-se positivos foram submetidos ao teste de Avidez a fim de determinar a fase de infecção (crônica e/ou aguda). Os resultados do teste de avidez evidenciaram que 75,0% (398/532) apresentavam infecção crônica, enquanto 25,0% (133/532) apresentavam quadro de infecção aguda. Os resultados obtidos pelo IDGA para a CAE mostraram que 3,7% (31/833) dos animais examinados encontravam-se positivos para esta enfermidade. As propriedades avaliadas que apresentaram pelo menos um animal reagente tiveram todas as amostras submetidas ao ?Western Blot? para confirmar os resultados. Ao todo foram testadas 193 amostras das quais, 41,5% (80/193) tinham anticorpos contra o vírus. Estes resultados demonstram que as ocorrências da toxoplasmose e da CAE foram alta nos rebanhos estudados, indicando a necessidade crescente da adoção de medidas de manejo a fim de controlar a disseminação destas doenças. [Sero-epidemiological profile of Toxoplasma gondii in goats in Ceará and evaluation of its association with caprine arthritis-encephalitis]. Abstract: The diseases are generally considered limiting factors for the creation of small ruminants, since they promote considerable losses. The etiologic agent of Toxoplasmosis, the protozoan Toxoplasma gondii, belongs to the Phylum Apicomplexa that affects all warm-blooded animals, including human. In goats, the main clinical sign which has the most important economic impact is abortion. Some diseases may favor the installation of toxoplasmosis in herds. Among them is the caprine arthritis encephalitis (CAE), an infectious and multisystemic disease, caused by a retrovirus of the genus Lentivirus, which affects goats of all genders, ages and races. The objective of this study was to determine the sero-epidemiology of Toxoplasma gondii in goats in Ceará and a possible association with the caprine arthritis encephalitis. Sera from 833 animals were evaluated. The serological test used to detect anti-T.gondii was ELISA. For the detection of anti-CAEV antibodies it was used the Agar Gel immunodiffusion - AGID and Western Blotting. The results show the occurrence of 63.9% (532/833) of toxoplasmosis. Animals that were positive were subjected to Avidity testing to determine the stage of infection (chronic and/or acute). The avidity test results showed that 75.0 % (398/532) of the animals had chronic infection, whereas 25.0% (133/532) had acute infection. The results obtained by AGID showed that 3.7% (31/833) of examined animals were found to be positive for CAE. The evaluated properties that had at least one reactant animals had all samples submitted to the Western Blot to confirm the results. As a whole, from 193 samples, 41.5% (80/193) had antibodies against the virus. These results show that the occurrence of toxoplasmosis and CAE were high in the evaluated herds, indicating the growing need to adopt management measures to control the spread of these diseases. Dissertação - (Mestrado em Zootecnica. Área de Concentração: Produção Animal) - Universidade Estadual Vale do Acaraú, Sobral. Orientador: Luiz da Silva Vieira (CNPC); Co-orientador: Antonio Cezar Rocha Cavalcante (CNPC).

Resumo: O escopo deste trabalho foi realizar um estudo zoosanitário e determinar a prevalência da Artrite-Encefalite Caprina (CAE) no rebanho de caprinos nos estados do Ceará (CE), Rio Grande do Norte (RN) e Sergipe (SE). Para tanto, foram coletadas amostras de sangue de 2.249 animais, sendo 738 do CE, 1.072 do RN e 439 de SE. Dos 38 criatórios pesquisados no Ceará, nove apresentaram pelo menos um animal soropositivo, com prevalência de 23,7%, enquanto a prevalência de caprinos sororeagentes para a Artrite-Encefalite Caprina (CAE) foi de 3,3% (24/738). Do total de amostras de soro de caprinos coletadas no RN, 1,0% (11/1.072) apresentaram anticorpos contra o vírus da CAE. Sergipe apresentou uma prevalência de 0,7% (3/439). Foi observada que o CE apresentou percentual de positividade significativamente maior em comparação aos demais estados (p

Resumo: Está consolidado que o vírus da artrite encefalite caprina (CAEV) está presente no sêmen, tanto na forma livre (RNA viral) no líquido seminal, como na forma de DNA pró-viral integrado às células não espermáticas. Estudos sugerem, ainda, que a presença do CAEV no sêmen pode não ter correlação positiva com o diagnóstico no sangue e que o patógeno pode ser detectado no plasma seminal antes mesmo da conversão sorológica. Além disso, os órgãos sexuais masculinos podem contribuir para a eliminação do DNA pró-viral do CAEV no ejaculado, e a transmissão do vírus pela via reprodutiva foi recentemente comprovada utilizando-se a inseminação artificial. Se considerada a adoção de testes de diagnósticos realizados diretamente no sêmen, pode-se diminuir o risco da entrada ou da disseminação do CAEV nos rebanhos pela via reprodutiva, especialmente na inseminação em que o número de fêmeas que podem receber sêmen contaminado é expressivamente maior. Neste contexto, objetivou-se com esta revisão fazer um levantamento bibliográfico e apontar perspectivas de utilização do sêmen para o diagnóstico da artrite encefalite caprina (CAE). [Caprine arthritis encephalitis virus by semen: diagnosis and transmission]. Abstract: It is well established that the Caprine Arthritis Encephalitis Virus (CAEV) is found in semen, either in free form (RNA) in the seminal fluid or in the integrated proviral DNA in leukocytes and macrophages present in the semen. Studies also suggest that the presence of CAEV in semen may not have a positive correlation with the blood diagnosis, and that the pathogen can be detected in seminal plasma even before the seroconvertion. Furthermore, male sexual organs may contribute to the DNA proviral elimination of CAEV in the ejaculate and transmission of the virus by reproduction was recently demonstrated using artificial insemination. If considered the adoption of diagnostic tests performed directly in semen, it can reduce the risk of entry of the virus or the spread of CAEV in flocks through reproduction, especially insemination, in which the number of females receiving contaminated semen is significantly higher. In this context, the aim of this report was to review the literature and point out perspectives for the use of semen in the diagnosis of caprine arthritis-encephalitis (CAE).

Resumo: A Artrite Encefalite Caprina (CAE) é uma enfermidade infectocontagiosa causada por um vírus pertencente ao gênero lentivírus, denominado de vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV). O CAEV é encontrado em vários tecidos, como o nervoso, o pulmonar, o da glândula mamária e do trato genital masculino e feminino. Desta forma, objetivou-se com este trabalho identificar a presença do CAEV, pelas técnicas de diagnóstico moleculares, em ovócitos e fluido uterino, visando avaliar a possibilidade de transmissão do CAEV pela reprodução. Foram selecionadas 13 cabras comprovadamente infectadas, as quais foram submetidas à eutanásia para coleta do aparelho reprodutor, aspiração do fluido uterino e dissecção dos ovários para coleta de ovócitos. Para identificação do CAEV nas amostras coletadas, na forma de provírus e na forma livre, foram realizadas as técnicas de PCRn e RT-PCRn, respectivamente. Observaram-se que 53,8% dos ovócitos foram positivos à técnica de RT-PCRn, enquanto apenas 9,1% foram positivos à PCRn. A técnica de RT-PCRn também identificou o vírus no fluido uterino de 46,1% das fêmeas testadas. Embora as 13 cabras em experimento fossem portadoras do CAEV, 30,8% apresentaram resultados negativos na PCRn e RT-PCRn em todas as amostras analisadas (ovócito e fluido uterino). Conclui-se que a PCRn e a RT-PCRn podem ser utilizadas no diagnóstico da CAE tendo os ovócitos e o fluido uterino como materiais de análise, e que a presença do CAEV nestes materiais aponta para o risco da transmissão do CAEV através das tecnologias reprodutivas aplicadas às fêmeas. [Caprine Arthritis Encephalitis virus is detected in oocytes and uterine fluid by nested PCR and nested RT-PCR]. Abstract: Caprine arthritis-encephalitis (CAE) is an infectious disease caused by the caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV), belonging to the lentivirus genus. The presence of the virus has been observed in the nervous system, respiratory tract and mammary gland, and also in the male and female genital tract. The objective of this study is to identify the virus in oocyte and uterine fluid of infected goats by molecular diagnostic techniques, in order to assess the possibility of CAEV transmission with reproduction. Thirteen infected goats were selected and submitted to euthanasia for the collection of the reproductive system, aspiration of the uterine fluid and dissection of ovaries for oocyte collection. In order to identify the CAEV in the collected material, in the protovirus and free forms, it was submitted to the nRT-PCR and nPCR techniques, respectively. As a result, it was observed that 53.8% of oocytes were positive to nRT-PCR, while only 9.1% were positive to nPCR. The nRT-PCR also identified the virus in the uterine fluid of 46.1% of the tested females. Even though the 13 goats had CAEV, 30.8% presented negative results in nPCR and nRTPCR in all of the analyzed samples (oocyte and uterine fluid). This work concludes that nRT-PCR and nPCR can be used in the diagnosis of CAE for the analysis with oocytes and uterine fluid, and that the presence of CAEV in these materials points out to the risk of CAEV transmission through reproductive technologies used in females.

Resumo: A artrite-encefalite caprina (CAE) e a Maedi-Visna (MV) são doenças de curso progressivo, que acometem caprinos e ovinos, respectivamente. Durante anos, o agente etiológico viral dessas enfermidades era considerado como específico a cada espécie. Entretanto, análises filogenéticas têm demonstrado a heterogeneidade desse vírus, reunindo diferentes genótipos e subtipos em um grupo denominado de lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR). Além disso, diversos estudos revelaram a ocorrência da infecção de caprinos e ovinos por um mesmo subtipo, evidenciando a ocorrência de transmissão cruzada. Dessa forma, o objetivo deste trabalho é abordar as principais características etiopatogênicas dos LVPR, fatores epidemiológicos para a sua ocorrência, diagnóstico, bem como os desafios para os programas de sanidade frente à possibilidade de transmissão interespécie. [Interspecies transmission of small ruminant lentiviruses: review and challenges]. Abstract: Caprine arthritis-encephalitis (CAE) and Maedi-Visna (MV) are diseases with progressive course, affecting goats and sheep, respectively. For many years, the etiological agent of these viral diseases was considered specific to each species. However, phylogenetic analyzes have demonstrated the heterogeneity of this virus, bringing the various genotypes and subtypes in a group called small ruminant lentiviruses (SRLV). Moreover, several studies revealed the occurrence of infection of goats and sheep by the same subtype, indicating the occurrence of cross transmission. Thus, the objective of this review is to discuss the main features of etiological and pathogenic about SRLV, epidemiological factors for its occurrence, diagnosis, and the challenges for health programs facing the possibility of interspecies transmission.

Resumo: O estudo sobre a possibilidade de veiculacao do lentivirus caprino pela inseminacao artificial e transferencia de embriao, tem grande importancia nos programas de controle da artrite encefalite caprina (CAE) influindo diretamente no comercio e importacao de germoplasmas. Foram avaliados neste experimento a presenca do CAEV em amostras de semen, embriao, fluido uterino, e banho de lavagem dos embrioes, atraves do isolamento viral e reacao em cadeia da polimerase Nested, os fatores que influenciam na presenca do virus no semen, bem como o uso da TE como instrumento de controle da CAE. Comprovou-se a presenca do CAEV no semen e fluido uterino, indicando o risco da transmissao do virus pela monta natural, IA e tambem a possibilidade de transmissao materno fetal. Como o CAEV nao foi detectado no embriao e nos meios de lavagem e foram obtidas crias sadias atraves da TE, o uso desta tecnica, desde que sejam seguidas as normas sanitarias e EITS, e uma alternativa mais segura no aproveitamento do material genetico de reprodutores e matrizes infectados pelo CAEV. Abstract: The study on its possibilities for serving the caprine lentivirus by artificial insemination (AI) and embryo transfer (ET) has big importance in control programs caprine arthritis encephalitis (CAE) directly influencing trade considerations of Germplasm. Abaliados this experiment were the presence of CAEV in samples of semen, embryos, uterine fluid, and bath wash embiões through viral isolation and polymerase chain reaction Nested, the factors that influence the presence of virus in semen and using the TST as a tool to control the CAE. Proved the presence of CAEV in semen and uterine fluid, indicating the risk of virus transmission by natural mating, AI and the possibility of maternal fetal transmission. As the CAEV was not detected in the embryo and in the means of washing and healthy pups were obtained by ET, this technique, provided they followed the health standards of IETS is a safer alternative in the use of genetic material and breeding matrices infected CAEV Made available in DSpace on 2017-08-10T23:47:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CNPC2001VIrusdaartriteeencefalite.pdf: 20104647 bytes, checksum: bf554ff441fa6e5686b26e75dc222672 (MD5) Previous issue date: 2001-10-15 Tese (Doutorado) - Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte. Orientadora: Aurora Maria Guimarães Gouvea.

Resumo: Objetivando avaliar a resposta superovulatória e a qualidade embrionária pós-colheita em animais soropositivos para o vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV), foram utilizadas 18 cabras adultas da raça Saanen, sendo 12 soropositivas (G1) e seis soronegativas (G2).Não se observou diferenças significativas (P>0,05) entre o G1 e G2 quanto à resposta do estro, 100,0% vs. 83,0%; ao início do estro (hora) em relação ao momento da retirada das esponjas, 35,0±9,5 vs. 31,2±10,7; à duração do estro (hora), 27,0± 5,4 vs. 28,8±10,7; à taxa de ovulação, 10,8±5,7 vs. 10,8±8,6; e à porcentagem de estruturas recuperadas, 72,0 vs. 67,0 e de embriões viáveis 99,0 vs. 95,0, respectivamente. Considerando que a transferência de embriões é uma técnica segura para o controle da CAEV e diante da resposta satisfatória dos animais soropositivos, em especial, quanto as porcentagens de embriões recuperados e viáveis, concluí-se que animais geneticamente superiores mesmo que soropositivos para a CAEV podem ser usados como doadores de embriões. [The influence of caprine arthritis encephalitis on superovulatory response]. Abstract: The objectives of this work were to determine the ovulation rate and the embryo viability in seropositive animals to Caprine Arthritis Encephalitis Virus infection (CAEV). Eighteen goats of the Saanen breed were used, 12 CAEV-seropositives (G1) and six CAEV-seronegatives (G2). No statistical difference (P>0.05) was observed between groups (G1 and G2) in relation to estrus response, 100.0% vs. 83.0%; onset estrus (hours), 35.0+9,5 vs. 31.2+10.7; estrus duration (hours), 27.0+5.4 vs. 28.8+10.7; ovulation rate, 10.8+5.7 vs. 10.8+8.6; recovery rate of embryos, 72.0% vs. 67.0%; and viable embryos, 99.0% vs. 95.0%, respectively. Considering the embryo transfer is a safe technique for the control of CAEV and due to the fact that the seropositive female show a satisfatory response for embryo recovery rate and viability, we conclude that the CAEV-seropositive animals may be used as embryo donors

With the objective of detecting the presence of caprine lentivirus (CLV) in ewe milk and in ram semen, ten matrixes and four reproducers experimentally infected with CLV were used. Samples of ewe milk were collected during the four months of lactation, five collections per animal, totaling 50 samples. Regarding the rams, eight semen collections were made per animal, during one year of experimentation, totaling 32 samples. The milk and semen samples were submitted to DNA extraction and the nested polymerase chain reaction test (nPCR) to detect CLV proviral DNA. Eight (16%) of the milk samples were positive in nPCR originating from two ewes. Only one (3.12%) semen sample was positive. The amplification products were sequenced, and were confirmed to be a CLV genomic sequence. Thus, the presence of CLV proviral DNA in sheep milk and semen was demonstrated, confirming the feasibility of infection between species, and alerting to the risk of spreading infections. [Lentivírus caprino em leite e sêmen de ovinos]. Resumo: Com o objetivo de detectar a presença do lentivírus caprino (LVC) no leite de ovelhas e no sêmen de carneiros, utilizaram-se 10 matrizes e quatro reprodutores infectados experimentalmente com o LVC. Foram coletadas amostras de leite das ovelhas durante os quatro meses de lactação, ocorrendo cinco coletas por animal, totalizando 50 amostras. Quanto aos carneiros, realizaram-se oito coletas de sêmen por animal, durante um ano de experimentação, totalizando 32 amostras. As amostras de leite e de sêmen foram submetidas à extração de DNA e à prova de reação em cadeia da polimerase do tipo nested (nPCR) visando à detecção de DNA proviral do LVC. Oito (16%) amostras de leite foram positivas na nPCR oriundas de duas ovelhas. Apenas uma (3,12%) amostra de sêmen apresentou positividade. Produtos da amplificação foram sequenciados, confirmando-se tratar de sequência genômica do LVC. Dessa forma, demonstrou-se a presença do DNA proviral do LVC em leite e sêmen de ovinos, confirmando a viabilidade da infecção entre espécies e, assim, alertando sobre o risco de que a infecção seja disseminada. Made available in DSpace on 2017-09-24T00:12:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CNPC2017Caprine.pdf: 376528 bytes, checksum: 3ae3a9af4fdd105cae76695fa5801913 (MD5) Previous issue date: 2017-09-22 [ALICE ANDRIOLI PINHEIRO].