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Baculoviruses are bioinsecticides widely used in Brazil and in the world and can replace, assist or reduce the consumption of agrochemicals in agricultural crops. They are part of the Baculoviridae family, a family of viruses that contain a double-stranded, supercoiled, circular DNA genome. The genome size varies between 80-180 kb and encodes 90-180 genes, of which only 38 are present in all baculoviruses sequenced to date. They are insect-specific pathogens and are divided into four genera, Alphabaculovirus and Betabaculovirus contain members that are infective for lepidopteran larvae, Gammabaculovirus contain members that are infective for Hymenopteran larvae, and Deltabaculovirus which contain members that are infective for dipteran larvae. In addition, as a distinct characteristic, they present two viral phenotypes during a complete cycle of infection, one responsible for the primary oral infection and which is protected within the body from occlusion, active principle of baculovirus-based bioinsecticides and another phenotype responsible for the spread of secondary infection along the body of the insect. In the present work, the genome of a new baculovirus isolated from the rice and wheat pest of the Mythimna sequax species that causes an economic impact on these crops was characterized. Scanning electron microscopy confirmed the characteristic polyhedral occlusion body of Alphabaculoviruses, hence the virus was named Mythimna sequax nucleopolyhedrovirus (MyseNPV). The virus genome showed 148,403 bp, G + C content of 40.3% and 169 genes were noted, 13 of which are exclusive to this baculovirus. It is a member of the genus Alphabaculovirus and is closely related to seven other baculoviruses that infect insects of the family Noctuidae, including the viruses that infect insects of the genus Mamestra and the species Helicoverpa armigera. Although there are five recognized species among those closely related, only three were true species, MyseNPV being potentially one of them. The other viruses were just viral isolates. This was reinforced by the similarity of the chitinase and cathepsin gene locus between the true species. A selection analysis was performed for each gene shared by all MyseNPV-related genomes using an individual dN/dS analysis. A total of 221 different genes were found with only 152 shared by the eight genomes. Only three genes underwent positive selection in this group, hoar, bro-d and MyseNPV-127. The fp25k, p28, cathepsin, vlf-1 are those that undergo the greatest purification selection of those 152 genes. That said, the increase in the number of fully sequenced baculoviruses is beneficial for a better understanding of baculoviruses and their evolution, potentially helping the use of baculoviruses both as a biopesticide and expression vectors. Os baculovírus são bioinseticidas amplamente utilizados no Brasil e no mundo e podem substituir, auxiliar ou reduzir o consumo os agroquímicos comuns em lavouras agrícolas. Fazem parte da família Baculoviridae, uma família de vírus que contém genoma de DNA circular, superenovelado de fita dupla. O tamanho do genoma varia entre 80-180 kb e codifica para 90-180 genes, destes apenas 38 estão presentes em todos os baculovírus sequenciados até a data. Eles são patógenos específicos para insetos e são divididos em quatro gêneros, Alphabaculovirus e Betabaculovirus contém membros que são infectivos para larvas de lepidópteros, Gammabaculovirus contém membros que são infectivos para larvas de himenópteros e Deltabaculovirus que contém membros infectivos para larvas de dípteros. Além disso, como característica distinta, apresentam dois fenótipos virais durante um ciclo completo de infecção, um responsável pela infecção oral primária e que está protegido dentro do corpo de oclusão, princípio ativo de bioinseticidas a base de baculovírus e outro fenótipo responsável pelo espalhamento da infecção secundária ao longo do corpo do inseto. No presente trabalho, foi caracterizado o genoma de um novo baculovírus isolado da praga de arroz e trigo da espécie Mythimna sequax que causa impacto econômico nessas culturas agrícolas. Microscopia eletrônica de varredura confirmou o corpo de oclusão poliédrico característico dos Alphabaculovirus, por isso o vírus foi denominado Mythimna sequax nucleopolyhedrovirus (MyseNPV). O genoma do vírus apresentou 148.403 pb, conteúdo G + C de 40,3% e foram anotados 169 genes, sendo 13 exclusivos deste baculovírus. Trata-se de um membro do gênero Alphabaculovirus e está proximamente relacionado a outros sete baculovírus que infectam insetos da família Noctuidae, incluindo os vírus que infectam insetos do gênero Mamestra e da espécie Helicoverpa armigera. Apesar de haver cinco espécies reconhecidas dentre os proximamente relacionados, apenas três eram espécies verdadeiras, sendo MyseNPV potencialmente uma delas. Os outros vírus eram apenas isolados virais. Isso foi reforçado pela similaridade do lócus dos genes da chitinase e cathepsin entre as espécies verdadeiras. Realizou-se uma análise de seleção para cada gene compartilhado por todos os genomas relacionados ao MyseNPV por meio de uma análise de dN/dS individual. Um total de 221 genes diferentes foram encontrados com apenas 152 compartilhados pelos oito genomas. Apenas três genes sofriam seleção positiva neste grupo, hoar, bro-d e MyseNPV-127. O fp25k, p28, catepsina, vlf-1 são aqueles que sofrem maior seleção de purificação daqueles 152 genes. Dito isso, o aumento no número de baculovírus completamente sequenciados é benéfico para o melhor entendimento dos baculovírus e a sua evolução, podendo ajudar potencialmente o uso de baculovírus tanto como biopesticida, como vetores de expressão.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES The Spodoptera genus, Guenée (1852) contains important polyphagous pests of agriculture. In Brazil, the occurrence of S. cosmioides used to be sporadic, although in recent years it has emerged as a primary pest in monocultures such as soybean, corn, and cotton. Here a new baculovirus isolated from S. cosmioides was characterized. The virus was found in extracts of dead black armyworm with signals of viral infection caused by baculovirus and named Spodoptera cosmioides nucleopolyhedrovirus isolated CNPSo-72 (SpcoNPV-CNPSo-72). SpcoNPV-CNPSo-72 occlusion bodies (OB) had a polyhedral shape with several occluded virions and multiple nucleocapsids per envelope. The new virus was lethal to healthy third-instar S. cosmioides larvae with an LC50 of 2.9 x 103 OB/ml, but not to larvae of S. frugiperda at the tested concentrations. The genome of the new virus was sequenced using Roche 454 technology, and the sequencing produce 14,499 reads that were assembled into a single circular contig of 147,763 bp with a G+C content of 44.8%. We annotated 161 ORFs and found only 20 genes as unique in baculovirus and five homologous regions. About 86% of the genome was composed of protein coding sequences, while 13% represent intergenic spaces and homolog regions. We found the 38 currently defined baculoviral core genes in the genome of SpcoNPV-CNPSo-72 and also a set of 26 genes shared between infectious baculoviruses in lepidopterans (members of genera Alphabaculovirus and Betabaculovirus). Interestingly, we found homologs of cathepsin and chitinase, which were much likely to the observed host tegument liquefaction when healthy larvae were exposed to virus OBs, as a post mortem phenotype similar to other viruses that infect members of Spodoptera. The virus also presented a tRNA-coding gene that corresponded to the amino acid arginine (Arg). We carried out a phylogenetic analysis of the new species based on the core genes and found that the new virus is closely related to members of Alphabaculovirus, especially those infectious to Spodoptera. We also performed a gene content comparison SpcoNPV-CNPso-72 and those most closely related and found 241 different genes, with only 119 genes shared among all analyzed species. Moreover, we applied the evolutive model of kimura-2-parameter adjusted to conserved regions of lef-8, lef-9, and polyhedrin and the number of substitutions per site suggested that SpcoNPV could constitute a new species within gens Alphabaculovirus. Baculoviruses are pathogens that lethally infect insect larvae and their study allows for a better understanding of the evolution of large DNA viruses, providing bases for the improvement of viruses as a tool in biological control like the discovery of genes associated with both specificity and host range. O gênero Spodoptera, Guenée (1852) contém importantes pragas agrícolas polífagas. No Brasil, a ocorrência de S. cosmioides costumava ser esporádica, embora nos últimos anos tenha emergido como praga primária em monocultivos tais como soja, milho e algodão. No presente trabalho, um novo baculovírus isolado de S. cosmioides foi caracterizado. O vírus foi encontrado em extratos de lagartas-preta-da-soja mortas com sinais de infecção por vírus e, após análises preliminares denominado Spodoptera cosmioides nucleopolyhedrovirus isolado CNPSo-72 (SpcoNPV-CNPSo-72). Os corpos de oclusão (OBs) do vírus apresentavam formato poliédrico com diversos vírions oclusos e com múltiplos nucleocapsídeos por envelope. O novo vírus é letal para larvas de S. cosmioides sadias no terceiro instar com uma LC50 de 2,9x103 OB/ml, mas não para S. frugiperda nas concentrações testadas. O genoma do novo vírus foi sequenciado usando a tecnologia 454 da Roche e o sequenciamento produziu 14.499 leituras que foram montadas em uma única sequência circular de 147.763 bp com conteúdo de G+C de 44,8%. Foram anotadas 161 ORFs hipotéticas com apenas 20 genes não encontrados em outros genomas de vírus da família Baculoviridae e cinco regiões homólogas. Cerca de 86% do genoma era composto por sequências codificadoras de proteínas, enquanto 13% representam espaços intergênicos e regiões repetitivas. Os 38 ‘genes core’ de baculovírus foram encontrados no genoma do SpcoNPV-CNPSo-72 e também o conjunto dos 25 genes compartilhados entre baculovírus infecciosos em lepidópteros (membros dos gêneros Alphabaculovirus e Betabaculovirus). Além disso, foram encontrados genes homólogos de catepsina e quitinase envolvidos na liquefação do tegumento do hospedeiro, como o observado no fenótipo post mortem de lagartas infectadas, semelhante a outros vírus que infectam indivíduos do gênero Spodoptera. Ainda o vírus possuía um gene de tRNA correspondente ao amino ácido arginina (Arg). A análise filogenética da nova espécie foi realizada com o alinhamento dos core genes e mostrou que o novo vírus está intimamente relacionado a membros de Alphabaculovirus, especialmente os infecciosos para lagartas do gênero Spodoptera. Foi realizada a comparação de conteúdo gênico entre o genoma de SpcoNPV-CNPso-72 e dos vírus mais proximamente relacionados em um Diagrama de Venn. Um total de 241 genes foram encontrados considerando os cinco genomas estudados e incluem Sper-NPV-251, SeMNPV-US1, SperNPV-CNPSo-165, SfMNPV-19. Somente 119 genes foram compartilhados no genoma de todas as espécies analisadas. O modelo de Kimura-2 parâmetros ajustado foi aplicado em regiões conservadas dos genes lef-8, lef-9 e poliedrina, e o valor obtido para o número de sustitítuições por sítio sugeriu que SpcoNPV constitui uma nova espécie dentro da família Baculoviridae. Baculovírus são patógenos que infectam lentamente larvas de insetos e seu estudo permite um melhor entendimento da evolução dos grandes vírus de DNA, fornecendo bases para o aprimoramento dos vírus como ferramenta no controle biológico, como a descoberta de genes associados à especificidade e ao espectro de hospedeiro.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES We described a novel baculovirus isolated from the polyphagous insect pest Rachiplusia nu. The virus presented pyramidal-shaped occlusion bodies (OBs) with singly-embed nucleocapsids and a dose mortality response of 6.9 × 103OBs/ml to third-instar larvae of R. nu. The virus genome is 128,587 bp long with a G + C content of 37.9% and 134 predicted ORFs. The virus is an alphabaculovirus closely related to Trichoplusia ni single nu-cleopolyhedrovirus, Chrysodeixis chalcites nucleopolyhedrovirus, and Chrysodeixis includens single nucleopolyhedrovirus and may constitute a new species. Surprisingly, we found co-evolution among the related viruses and their hosts at species level. Besides, auxiliary genes with homologs in other baculoviruses were found, e.g. a CPD-photolyase. The gene seemed to be result of a single event of horizontal transfer from lepidopterans to alphabaculovirus, followed by a transference from alpha to betabaculovirus. The predicted protein appears to be an active enzyme that ensures likely DNA protection from sunlight. Descrevemos um novo baculovírus isolado da praga polífaga Rachiplusia nu. O vírus apresentou corpos de oclusão em forma de pirâmide (OBs) com um único nucleocapsídeos por envelope e uma dose de mortalidade de 6,9 × 103OBs / ml a larvas de terceiro instar de R. nu. O genoma do vírus possui 128.587 pb de comprimento, com um teor de G + C de 37,9% e 134 ORFs preditas. O vírus é um alphabaculovirus intimamente relacionado com Trichoplusia ni single nucleopolyhedrovirus, Chrysodeixis chalcites nucleopolyhedrovirus e Chrysodeixis includens nucleopolyhedrovirus. Surpreendentemente, encontramos co-evolução entre os vírus relacionados e seus hospedeiros em nível de espécie. Além disso, foram encontrados genes auxiliares com homólogos em outros baculovírus, por exemplo uma CPD fotoliase. O gene pareceu ser o resultado de um único evento de transferência horizontal de lepidópteros para alphabaculovírus, seguido por uma transferência de alfa para betabaculovírus. A proteína prevista parece ser uma enzima ativa que garante a proteção do DNA contra a luz solar.

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Baculoviruses are insect viruses largely used as vectors for gene expression and biopesticides. These viruses can efficiently infect larvae of several agricultural pests worldwide, causing a lethal disease. In this work, a novel baculovirus isolated from the larval stage of Urbanus proteus (L.), the bean leafhopper caterpillar was found in the 1980s and the complete genome was characterized. This was an important pest of several legumes in Brazil and belongs to the butterfly family Hesperiidae, from where no baculovirus genome sequence has been described. This new virus was shown to have the smallest genome among all alphabaculoviruses sequenced to date, with 105,555 bp and 119 putative ORFs. Ten unique genes, seven bro genes and the 38 baculovirus core genes were found. UrprNPV was found to be related to the Adoxophyes-infecting baculoviruses AdorNPV and AdhoNPV, with high genetic distance and long branch length. Interestingly, few individual core gene-based phylogenies were found to support the relationship of UrprNPV to both AdorNPV and AdhoNPV. Importantly to note that the increase in the number of completely sequenced baculoviruses points to an interesting way of understanding baculoviruses and their evolution, potentially helping the use of baculovirus, both as biopesticide and expression vectors. Os baculovírus são vírus de insetos amplamente utilizados como vetores de expressão gênica e biopesticidas. Esses vírus podem infectar eficientemente larvas de várias pragas agrícolas em todo o mundo, causando uma doença letal. Neste trabalho, foi encontrado um novo baculovírus isolado do estágio larval de Urbanus proteus (L.), a lagarta desfolhadora do feijão nos anos de 1980 e foi caracterizado o seu genoma completo. Esta foi uma importante praga de várias leguminosas no Brasil e pertence à família das borboletas Hesperiidae, de onde não foi descrita nenhuma sequência genômica de baculovírus. Este novo vírus mostrou ter o menor genoma entre todos os alphabaculovírus sequenciados até o momento, com 105.555 pb e 119 ORFs. Foram encontrados dez genes únicos, sete genes bro e os 38 genes compartilhados entre todos os baculovírus. Verificou-se que UrprNPV estava relacionado com os baculovírus que infectam o gênero Adoxophyes, AdorNPV e AdhoNPV, com alta distância genética e comprimento longo do ramo. Curiosamente, poucas filogenias baseadas nos genes compartilhados individuais apoiaram a relação de UrprNPV com ambos, AdorNPV e AdhoNPV. É importante ressaltar que o aumento no número de baculovírus completamente sequenciados aponta para uma forma interessante de entender os baculovírus e a sua evolução, podendo ajudar potencialmente o uso de baculovírus tanto como biopesticida e vetores de expressão.