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Much has been discussed recently about fungal infections superficial and thorough has increased significantly and such as consequence end up cause increase of rates of morbidity and mortality of individuals nowadays although increase development of antibiotics, arsenal antifungals found for market for the treatment of fungal infection still low, as soon end up limiting patient’s treatment and may cause resistance to strains. Species of the genus Candida are the most common opportunistic agents in candidiasis-related fungal infections in species in different groups of immunodeficiency patients. Therefore, drug redirection is an important means of prospecting for new therapeutic alternatives, as these drugs have well-characterized pharmacological and toxicological properties, thus reducing the time and cost of drug development. The present study investigates the antifungal action of dexamethasone sodium phosphate (DEXA), a type of glucocorticoid whose main pharmacological actions include anti-inflammatory, anti-allergic, and anti-rheumatic. Sensitivity tests were carried out using the broth microdilution method (CLSI; M27-A3) and the checkerboard technique applied to mature and developing biofilms of two strains of C. albicans, along with the hyphal production test and analysis of the mechanism of cell death through flow cytometry. The results showed activity of dexamethasone phosphate (DEXA) against strains resistant to fluconazole (FLU), with minimum inhibitory concentrations (MIC) varying from 31.25 to 500 μg/mL, while DEXA and FLU together had a synergistic effect, causing 100% inhibition of all strains in relation to the developing biofilm. In turn, DEXA alone reduced the cell viability of the developing biofilm by 89%, while the mature biofilm showed no reduction when treated with DEXA alone or in combination with FLU. The combination also caused a decrease in the production of hyphae and changes in the level of mitochondrial depolarization, an increase in the generation of reactive oxygen species, and an increase in the externalization of phosphatidylserine. In addition, it DEXA interacted with ALS3 and SAP5, important in virulence processes. Dexamethasone disodium phosphate showed antifungal activity against strains of Candida albicans resistant to fluconazole and caused a decrease in the production of hyphae, so it can be considered a potential drug to help fight fungal infections caused by Candida albicans. Muito se tem discutido recentemente sobre infecções fúngicas superficiais e profundas que aumentaram significativamente aumentando as taxas de morbimortalidade na atualidade. Embora aumentem o desenvolvimento de drogas antimicrobianas, o arsenal encontrado no mercado para o tratamento de infecções fúngicas ainda são baixos, logo acabam limitando o tratamento do paciente. Espécies do gênero Candida são os agentes oportunistas mais comuns em infecções fúngicas em espécies de diferentes grupos de pacientes com imunodeficiência. Portanto, o redirecionamento de medicamentos é um importante meio de prospecção de novas alternativas terapêuticas, visto que esses medicamentos apresentam propriedades farmacológicas e toxicológicas bem caracterizadas, reduzindo o tempo e o custo de desenvolvimento dos medicamentos. O presente estudo investiga a ação antifúngica do fosfato de dexametasona dissódico um tipo de glicocorticoide cujas principais ações farmacológicas incluem atividade antiinflamatório, antialérgico e antirreumático. Os testes de sensibilidade foram realizados utilizando o método de microdiluição em caldo (CLSI; M27-A3) e a técnica checkerboard aplicada a biofilmes maduros e em desenvolvimento de duas cepas de C. albicans, juntamente com o teste de produção de hifas e análise do mecanismo de morte celular por citometria de fluxo. Os resultados mostraram atividade do fosfato de dexametasona contra cepas resistentes ao fluconazol (FLC), com concentrações inibitórias mínimas (CIM) variando de 31,25 a 500 μg / mL, enquanto fosfato dissódico de dexametasona e FLC juntas tiveram efeito sinérgico, causando 100% de inibição de todas as cepas em relação ao biofilme em desenvolvimento. Por sua vez, o fosfato dissódico de dexametasona sozinho reduziu a viabilidade celular do biofilme em desenvolvimento em 89%, enquanto o biofilme maduro não mostrou redução quando tratado com o fosfato dissódico de dexametasona sozinho ou em combinação com a FLC. A combinação também causou uma diminuição na produção de hifas e mudanças no nível de despolarização mitocondrial, um aumento na geração de espécies reativas de oxigênio e um aumento na externalização da fosfatidilserina. Além disso, fosfato dissódico de dexametasona interagiu com ALS3 e SAP5, importantes em processos de virulência. O fosfato dissódico de dexametasona apresentou atividade antifúngica contra cepas de Candida albicans resistentes ao fluconazol e causou diminuição na produção de hifas, podendo ser considerado um medicamento potencial para auxiliar no combate a infecções fúngicas por Candida albicans.

In recent years, an increase in the incidence of infections caused by bacteria has been reported, including Staphylococcus aureus which corresponds to 50% of infections found in various regions of the world. Currently, the drugs available for the treatment of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) are limited and this microorganism has developed resistance to practically all antibiotics indicated for its treatment. This fact is mainly associated with some of its virulence factors, such as hemolysins, staphylococcal enterotoxins, toxic shock syndrome toxin 1 (TSST-1), Panton–Valentine leukocidin (PVL) and its ability to form biofilm that presents up to a thousand times more resistance when compared to its plactonic form. Therefore, it is necessary to search for new therapeutic options and an adequate repositioning of drugs. Drug repositioning is a therapeutic alternative, as it optimizes time and reduces costs when compared to the implantation of a new molecule on the market. The aim of the study was to evaluate the antimicrobial activity of diclofenac sodium alone and in combination with oxacillin against plactonic cells, antibiofilm and biofilm formed in clinical strains of SARM. For this, the antibacterial effect was demonstrated through microdilution, following the recommendations of the protocol M07-A10, Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI) and to determine its possible mechanism of action, flow cytometry was used. MRSA strains showed Minimum Inhibitory Concentrations (MICs) ranging from 156.25 to 1250 μg/mL, synergism with oxacillin occurred in 13 strains (80%) and synergism was also seen against antibiofilm and in biofilm formed from MRSA. Cytometry tests showed that these drugs alter the integrity of the membrane and promote damage to the DNA of SARM cells, leading them to a possible apoptotic process. Nos últimos anos, tem sido relatado um aumento na incidência de infeções causadas por bactérias, dentre elas Staphylococcus aureus que corresponde a 50% das infecções constatadas em várias regiões do mundo. Atualmente, os fármacos disponíveis para o tratamento de Staphylococcus aureus resistente à meticilina (SARM) são limitados e esse microrganismo desenvolveu resistência a praticamente todos os antibióticos indicados para seu tratamento. Este fato está associado, principalmente, a alguns de seus fatores de virulência, tais como as hemolisinas, as enterotoxinas estafilocócicas, a toxina-1 do choque tóxico estafilocócico (TSST-1), a citotoxina Panton-Valentine leucocidina (PVL) e a sua capacidade de formar biofilme que apresenta até mil vezes mais resistência se compararmos a sua forma plactônica. Diante disso, faz-se necessária a busca por novas opções terapêuticas e um reposicionamento adequado de fármacos. O reposicionamento de fármacos é uma alternativa terapêutica, já que otimiza o tempo e reduz os custos se comparamos com a implantação de uma nova molécula no mercado. O objetivo do estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana do diclofenaco sódico isolado e em combinação com a oxacilina frente a células plactônicas, antibiofilme e em biofilme formado em cepas clínicas de SARM. Para isso, o efeito antibacteriano foi demonstrado por meio da microdiluição, seguindo as recomendações do protocolo M07-A10, Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI) e para determinar seu possível mecanismo de ação utilizou-se a citometria de fluxo. As cepas de SARM apresentaram Concentrações Inibitórios Mínimas (CIMs) variando entre 156,25 e 1250 μg/mL, o sinergismo com a oxacilina ocorreu em 13 cepas (80%) e o sinergismo também foi visto frente a antibiofilme e em biofilme formado de SARM. Os ensaios de citometria mostrou que esses fármacos alteram a integridade da membrana e promove danos ao DNA das células de SARM, levando-as a um possível processo apoptótico.

The occurence of invasive candidiasis in tertiary hospitals has increased significantly in recent decades, covering approximately 80% of nosocomial fungal infections. One of the factors that contribute to this percentage is the appearance of the resistance to antifungals, which can be influenced by the ability of some species of Candida spp. to form biofilms and also by the reduced therapeutic arsenal, makes it necessary to search for new alternatives to overcome this limitation. The objective of the work was to evaluate the antifungal activity of midazolam isolated and in association with azolics in relation to clinical isolates of Candida spp. resistant to fluconazole in planktonic form and in biofilm. The microdilution broth technique described by the Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI, M27-A3) was used to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Flow cytometry tests were also performed to investigate the probable mechanism of action, evaluation of DNA damage by the comet test and cytotoxicity test on L929 murine fibroblasts. Midazolam showed MIC ranging from 125 to 250 μg/mL. Midazolam showed no cytotoxicity when evaluated at concentrations of 31.5 to 500 μg/mL. It showed significant reduction in cellular viability of Candida albicans biofilm by 500 μg/mL, Candida tropicalis by 1000 μg/mL and Candida parapsilosis by 125 μg/mL. It was also found that midazolam promotes decreased cell density, damage to the mitochondrial membrane and that it provided phosphatidylserine externalization but was not able to produce reactive oxygen species and cause DNA damage. The interaction of midazolam and Candida spp. biofilm was also observed through scanning electron microscopy (SEM), where the treated cells presented alteration in their appearance, which may have been caused by the loss of rigidity of the fungal cell wall. Therefore, midazolam proved to be an antifungal potential against the isolates tested in this study. A ocorrência da candidíase invasiva em hospitais terciários vem aumentando significativamente nas últimas décadas, abrangendo aproximadamente 80% das infecções fúngicas nosocomiais. Um dos fatores que contribuem com essa porcentagem é o aparecimento de resistência aos antifúngicos, que pode ser influenciada pela capacidade que algumas espécies de Candida spp. apresentam de formar biofilmes e também pelo reduzido arsenal terapêutico, busca-se novas alternativas que visem driblar essa limitação. O objetivo do trabalho foi avaliar a atividade antifúngica do midazolam isolado e em associação com azólicos frente a isolados clínicos de Candida spp. resistentes ao fluconazol na forma planctônica e em biofilme. Utilizou-se a técnica de microdiluição em caldo, descrita pelo Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI, M27-A3), com o intuito de determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM). Realizou-se também ensaios de citometria de fluxo para a investigação do provável mecanismo de ação, avaliação de dano ao DNA pelo ensaio do cometa e teste de citotoxicidade na linhagem L929 de fibroblastos murino. O midazolam apresentou CIM que variou de 125 a 250 μg/mL. O midazolam não demonstrou citotoxicidade quando avaliada nas concentrações de 31,5 a 500 μg/mL. Apresentou redução significativa da viabilidade celular do biofilme de Candida albicans em 500 μg/mL, de Candida tropicalis em 1000 μg/mL e de Candida parapsilosis em 125 μg/mL. Verificou-se também que o midazolam promove diminuição da densidade celular, danos na membrana mitocondrial e que propiciou externalização da fosfatidilserina, mas não foi capaz de produzir espécies reativas de oxigênio e causar danos ao DNA. Observou-se também a interação do midazolam e do biofilme de Candida spp. através da microscopia eletrônica de varredura (MEV), onde as células tratadas apresentaram alteração em sua aparência, o que pode ter sido ocasionado pela perda da rigidez da parede celular fúngica. Portanto, o midazolam mostrou-se como potencial antifúngico frente aos isolados testados nesse estudo.