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Orientadores: Laura Sterian Ward, Andre Almeida Schenka Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Objetivo: Avaliar a relação da angiogênese em carcinomas invasivos iniciais da mama com fatores clínico-patológicos indicativos de recorrência. Casuística e Métodos: Em 92 casos de pacientes com neoplasia maligna invasiva e inicial da mama e submetidas à pesquisa de comprometimento do linfonodo-sentinela (LS) pesquisou-se a imunoexpressão de VEGF-A, CD34 e D2-40 nos cortes dos tecidos tumorais previamente fixados e incluídos em parafina. Esta expressão foi analisada em relação ao estado do LS e às características clínico-patológicas, incluindo a classificação atual de risco para recidiva. Resultados: Não houve associação entre a imunoexpressão do VEGF-A e a avaliação da angiogênese com o estado do LS, nem tampouco com as demais características clínico-patológicas, incluindo grupos de risco para recidivas. Apenas o tamanho do tumor primário e a idade da paciente foram indicadores de acometimento linfonodal. O coeficiente linear de Spearman não indicou correlação da imunoexpressão dos marcadores entre si. A deteccção de linfáticos pela imunocoloração com anti-D2-40 possibilitou a alteração da classificação de risco em quatro pacientes. Conclusões: Não houve associação entre microdensidade de vasos sanguíneos (CD34) e linfáticos (D-2-40) ou da imunoexpressão de VEGF-A, com variáveis clínico-patológicas clássicas indicativas de maior recidiva, nos carcinomas analisados nesse estudo. Porém, a imunocoloração com anti-D2-40 aprimorou a determinação de invasão linfática, considerada fator de maior risco de recidiva em neoplasias malignas da mama com LS negativo Abstract: Objective: To evaluate the relationship between early breast cancer angiogenesis and clinicopathological factors indicative of recurrence. Methods: Immunoexpression of VEGF-A, CD34 and D-2-40 was assessed in formalin-fixed, paraffin-embedded sections of primary breast cancer specimens from 92 patients submitted to sentinel lymph node (SN) investigation. The expression of these markers was confronted to SN status, clinicopathological features and the current risk groups classification. Results: No association between the immunoexpression of the three markers and SN status, clinicopathological features or risk assessment was detected. Only tumor's size and patient¿s age were predictors of SN status. There was no correlation among the three markers by the Spearman¿s linear correlation coefficient. The use of D2-40 as a marker of lymphatic vessels improved vascular invasion detection, changing the current risk groups classification in four patients. Conclusions: There was no association between tumoral microvascular (MVD) and lymphatic density (LVD), or immunoexpression of VEGF-A, with classical clinicopathological variables of tumour recurrence in this study. However, immunostaining for D2-40 proved to be useful in improving assessment of vascular invasion, an adverse feature in early breast cancer without node involvement Doutorado Clínica Médica Doutor em Clínica Médica

Orientador: Laura Sterian Ward Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Idade, sexo, perfil alimentar e perfil de genes relacionados à interação com o meio ambiente são reconhecidos fatores de predisposição ao câncer. Assim, a dieta é considerada um fator importante em 20 a 50% de todos os casos de câncer, atuando ao lado de outros fatores como idade, predisposição genética, hábitos de vida, tabagismo, sedentarismo e agressores ambientais. Os genes da família da Glutationa S- Transferase constituem um dos mais primitivos mecanismos de defesa de todos os seres vivos contra as agressões ambientais, mas pouco se sabe acerca de sua interação com outros fatores de risco. O objetivo deste estudo foi correlacionar os polimorfismos dos genes GSTM1, GSTT1 e GSTP1, em pacientes com câncer de tireóide, ovário e próstata, com os hábitos alimentares da população de Campinas. A elevada miscigenação da população brasileira provê um modelo único para este tipo de estudo já que diminui o viés da etnicidade na distribuição de polimorfismos populacionais. Foram genotipados 883 indivíduos - controle e 395 pacientes com câncer de tireóide, próstata e ovário para GSTM1, GSTT1 e GSTP1. Os pacientes foram submetidos a um questionário de avaliação de seus hábitos alimentares, exercício físico, fumo e condições de saúde. A avaliação do perfil alimentar mostrou que ambos os grupos, de pacientes e de controles, possuíam alimentação rica em gorduras e açúcares, com conteúdo insuficiente de fibras, frutas e vegetais. Ambos os grupos apresentavam insuficiente atividade física, mas não houve diferença entre pacientes e controles em relação ao perfil alimentar ou ao exercício físico. Já o hábito de fumar era mais freqüente entre pacientes com câncer (30.89%) do que nos controles (23.99% - X2; p

Orientador : Laura Sterian Ward Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A susceptibilidade a carcinógenos químicos tem um importante papel no desenvolvimento da maioria dos cânceres. Diversos polimorfismos de enzimas metabolizadoras de drogas em humanos influenciam esta susceptibilidade individual. Os genes que incluem as isoenzimas do sistema glutationa s-transferase (GST) apresentam um polimorfismo hereditário. Os genes GST mu 1 (GSTM1) and GST theta 1(GSTT1) possuem uma variante alélica nula nos quais o gene inteiro está ausente e, portanto, não existe codificação ou produção da respectiva enzima. O genótipo nulo para ambas enzimas foi associado com diferentes tipos de cânceres. Para observar a influência da herança dessas enzimas no risco do câncer da tiróide, utilizamos uma multiplex-PCR que inclui o gene p-globina como um controle de DNA na reação de PCR para comparar 300 indivíduos normais de nossa população com 116 pacientes portadores de lesões tiroidianas. Desses casos, 49 eram de bócio benigno e 67 de doenças malignas: 50 carcinomas papilíferos e 17 carcinomas foliculares. A comparação entre tecidos de tumores da tiróide e 35 amostras correspondentes de sangue periférico de pacientes com câncer demonstraram padrão idêntico, sugerindo que o sistema GST não está envolvido no processo de desdiferenciação folicular. Não houve diferença estatística entre a prevalência da deleção dos genes GSTT1 e GSTM1 em indivíduos normais e em pacientes com bócio. Entretanto, os pacientes com carcinoma papilífero (10%) e pacientes com carcinoma folicular (17%) apresentaram uma prevalência de genótipo nulo mais elevada do que os indivíduos da população normal (5%) (p= 0,0479). Demonstramos que a herança de um genótipo nulo combinado para GSTM1 e GSTT1 é responsável por um aumento de 2.6 vezes no risco de câncer. Sugerimos que estes resultados podem ser usados como marcadores na susceptibilidade ao câncer da tiróide, auxiliando na seleção dos indivíduos de risco que merecem investigação e conduta mais rigorosa de seus bócios Abstract: Susceptibility to chemical carcinogens plays an important role in the development of most cancers. Several polymorphisms of human drug-metabolizing enzymes influence this individual susceptibility. The genes that encode the isoenzymes of the glutathione s-transferase (GST) system present a polymorphic inheritance. The GST mu 1 (GSTMl) and GST theta 1(GSTTl) genes have a null allele variant in which the entire gene is absent. The null genotype for both enzymes has been associated with many different types of tumors. In order to look for the influence ofthe inheritance pattern of these enzymes on thyroid cancer risk we used a triplex PCRi that included p-globin gene as a DNA quality control in the PCR reaction to compare 300 normal individuaIs of our population to 116 goiter patients. There were 49 cases of benign goiters and 67 cases of malignant diseases: 50 papillary and 17 follicular carcinomas. Comparison between thyroid tumor specimens and normal corresponding samples of 35 cancer patients demonstrated identical patterns, suggesting that the GST system is not involved in the process of follicular dedifferentiation. There was no statistical difference between the prevalence ofthe deleted alleles in the normal individuaIs and in the goiter patients. However, papillary carcinoma patients (10%) and follieular carcinoma patients (17%) presented a higher prevaIenee of the null genotype than the normal population individuaIs (5%) (p= 0,0479). We found a 2.6 increased risk of thyroid caneer associated with the GSTT1 and GSTMl combined null inheritance, suggesting that this may be a usefuI marker for thyroid caneer susceptibility Mestrado Ciências Básicas Mestre em Clínica Médica

Orientador: Laura Sterian Ward Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Tanto a Doença de Graves (DG) como o Carcinoma Diferenciado da Tiroide (CDT) são patologias de etiologia multifatorial e envolvem uma interação entre meio ambiente e fatores genéticos de predisposição. Ambas apresentam nítida preferência pelo sexo feminino. Por isso, variações no metabolismo do estrógeno poderiam estar associadas a esta preferência, pois, seus metabólitos podem causar dano ao material genético. Os objetivos foram determinar a influência dos polimorfismos dos genes CYP17A1, HSD-17?1, CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1, COMT e SULT1E1 no risco para a DG e para o CDT. Para tanto, foi estudado 282 pacientes com DG (234 mulheres e 48 homens; 39,80±11,69 anos), 292 pacientes com CDT (248 mulheres e 44 homens; 42,23±14,81 anos), comparados com 308 controles (246 mulheres e 62 homens; 36,86±12,95 anos). Para o estudo dos polimorfismos, utilizou-se a técnica TaqMan SNP Genotyping. Alterações polimórficas nos genes CYP17A1 (p=0,0421), CYP1A1 m1 (p=0,0328), CYP1A2*1F (p=0,0085), CYP1B1 códon 119 (p

Orientadores: Ubirajara Ferreira, Valéria Cagnon Quitete Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O tratamento do câncer de bexiga urotelial não músculo invasivo (CBNMI) com Bacilo Calmette-Guerin (BCG) tem efeito comprovado na redução de recidiva tumoral, embora ocorram efeitos colaterais de intensidades variadas, desde sintomas irritativos leves até reação sistêmica grave e o impacto na progressão tumoral seja controverso. Neste cenário a enterotoxina B do Staphylococcus aureus (EBS) destaca-se como alternativa promissora na terapêutica do CBNMI. Assim, os objetivos principais do presente estudo foram comparar e caracterizar os efeitos morfológicos, antiangiogênicos e o balanço entre proliferação e apoptose das imunoterapias com BCG, EBS e BCG-EBS no tratamento do CBNMI de ratos induzidos quimicamente. Um total de 75 ratas da linhagem Fisher 344 foram utilizadas. Para a indução do câncer, 60 animais foram anestesiados e receberam uma dose intravesical de 1,5mg/kg de N-metil-N-nitrosouréia (MNU) a cada 15 dias, nas semanas 0, 2, 4 e 6 (4 doses). Os outros 15 animais receberam 0,3ml de solução fisiológica intravesical e constituíram o grupo Controle (CT). Após o período de indução com MNU, os animais foram divididos em 5 grupos (15 animais cada): grupo MNU: recebeu o mesmo tratamento que o grupo CT - 0,3 ml de solução fisiológica intravesical; grupo BCG: recebeu dose intravesical de 106 UFC (2x106 UFC/mg) de BCG; grupo EBS: recebeu dose intravesical de 10?g/ml de EBS; grupo BCG-EBS: recebeu tratamento simultâneo com BCG e EBS nas mesmas concentrações que nos grupos BCG e EBS; todos por 6 semanas consecutivas. Após 15 semanas de protocolo, os animais foram sacrificados e as bexigas urinárias coletadas e submetidas às análises histopatológica, imunohistoquímica e Western Blotting. Os resultados demonstraram que as alterações histopatológicas mais frequentes em cada grupo foram carcinoma papilífero e carcinoma in situ no grupo MNU, hiperplasia papilífera nos grupos BCG e EBS e hiperplasia plana no grupo BCG-EBS. Não houve toxicidade relevante. Os índices apoptótico e proliferativo foram aumentados em todos os grupos de tratamento. Contudo, esses índices foram menores nos grupos BCG, EBS e BCG-EBS em relação ao grupo MNU. Intensas imunorreatividades para VEGF, MMP-9 e IGFR-1 foram verificadas no grupo MNU; moderadas nos grupos BCG e EBS; e fracas nos grupos BCG-EBS e Controle. Em contraste, intensa imunorreatividade para endostatina foi verificada nos grupos Controle e BCG-EBS em relação aos demais grupos experimentais. Assim, pode-se concluir que o tratamento associado BCG-EBS foi mais eficaz em restaurar o equilíbrio entre os processos de apoptose e proliferação celular e as alterações histopatológicas do que os tratamentos isolados com BCG e EBS. Além disso, a diminuição da proliferação celular e das alterações histopatológicas correlacionaram-se com o aumento da reatividade para endostatina e diminuição das reatividades para VEGF, IGFR-1 e MMP-9. A associação entre BCG e EBS abre uma nova perspectiva terapêutica no CBNMI Abstract: PURPOSE: Compare and characterize effects of intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG), Staphylococcal Enterotoxin B (SEB) and BCG plus SEB treatments in the non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC). METHODS: Seventy-five female Fisher 344 rats were anesthetized and 15 of them received 0.3 ml of saline (Control group), 60 animals received 1.5 mg/kg dose of N-methyl-N-nitrosourea (MNU), all intravesically every other week for 6 weeks. The rats were divided into 5 groups: MNU and Control groups received 0.3 ml of saline; BCG group received 106 CFU dose of BCG; SEB group received 10 ?g/ml dose of SEB and BCG-SEB group received simultaneous BCG and SEB, all intravesically for 6 weeks. After 15 weeks, all urinary bladders were collected for histopathological, immunological and Western Blotting analyses. RESULTS: Papillary carcinoma (pTa) and high-grade intraepithelial neoplasia (carcinoma in situ) were more often in MNU group, papillary hyperplasia in BCG and SEB groups and flat hyperplasia in BCG-SEB group. No significant toxicity was observed. Apoptosis and cellular proliferation indexes decreased in BCG, SEB and BCG-SEB groups compared to MNU group. Intensified VEGF, MMP-9, Ki-67 and IGFR-1 immunoreactivities were verified in the MNU group; moderate in the BCG and SEB groups; and weak in the BCG-SEB and Control groups. In contrast, intense endostatin immunoreactivity was verified in the Control and BCG-SEB groups. CONCLUSIONS: BCG and SEB presented similar anti-angiogenic effects. BCG-SEB treatment showed an additional activity compared to monotherapy, being more effective in restoring apoptosis and cellular proliferation balance, correlating with increased endostatin and decreased VEGF, MMP-9, Ki-67 and IGFR-1 reactivities Doutorado Fisiopatologia Cirúrgica Doutor em Ciências

Several molecular markers have been studied in order to differentiate prostate cancer (PCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH). They tried to help the traditional methods in the patient evaluation (PSA and digital rectal exam). This study analyzed the LSP1 gene expression by RT-PCR in BPH and prostate cancer patients. We tried to identify the specific pattern of each pathology related to the gene expression. Fifty patients more than forty years old were selected based on PSA levels > 4ng/ml or altered digital rectal exam. Twenty five healthy patients with less than thirty years old were selected as a control group. Blood sample analyses were performed as prostatic core biopsies. The final pathology was the gold standard for diagnosis defining three study groups: PCa, 24 patients; BPH, 26 patients and control, 25 patients. The study analysis was performed based on intervals of LSP1 RT-PCR expression, defined as ≥ 1, from 0.5 to 1 and < 0.5. A second study phase analyzed LSP1 expression in prostatic tissues from specimens of twenty three patients. The results in blood sample showed a clear difference in intervals of LSP1 expression for the study groups. The BPH patients presented the higher expression, prostate cancer patients with median expression and control group with the lower one. The relative risk of BPH in LSP1 expressions ≥ 1 is eleven times greater than prostate cancer. Although, it is not a specific marker for prostate cancer or benign hyperplasia. The LSP1 analysis represents a promising complementary purpose to PSA. Marcadores biomoleculares capazes de diferenciar o câncer de próstata da hiperplasia prostática benigna têm sido pesquisados na tentativa de auxiliar ou mesmo suplantar a eficiência dos métodos tradicionais de avaliação dos pacientes (PSA e toque prostático). O estudo em questão tem como objetivo a análise semi-quantitativa por RT-PCR do biomarcador (gene) LSP1 em hiperplasia prostática benigna (HPB) e câncer de próstata. Procurou-se identificar qual o padrão de expressão do LSP1 nessas patologias e sua aplicabilidade clínica. Foram selecionados cinqüenta pacientes com mais de 40 anos, com indicação de biópsia prostática por toque retal alterado ou níveis de PSA > 4ng/ml. Vinte e cinco pacientes com menos de trinta anos de idade foram incluídos como controle para o estudo. Foram coletadas amostras de sangue para análise do LSP1 e realizadas biópsias transretais. O resultado da análise patológica final foi considerado como padrão ouro ( standard ) para definir os três grupos: câncer de próstata (24 pacientes) e hiperplasia prostática benigna (26 pacientes) e controle (25 pacientes). Os grupos de estudo foram analisados quanto aos intervalos de expressão do LSP1: ≥ 1, de 0.5 a 1 e < 0.5. Em uma segunda etapa, foi analisada expressão do LSP1 em amostras de tecidos prostáticos. Os resultados mostraram nítida diferença nos intervalos de expressão para amostras do sangue em cada grupo de estudo. Sobretudo para HPB e pacientes normais. Portadores de câncer de próstata apresentaram expressão intermediária. A incidência de HPB para expressões superiores a 1.0 é onze vezes maior que a de câncer de próstata. Apesar de não ser específico para só uma patologia, o LSP1 representa uma proposta promissora como método complementar ao PSA. Mestre em Genética e Bioquímica

Orientador: Laura Sterian Ward Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Como a maior parte dos carcinomas diferenciados tem um excelente prognóstico, alguns autores consideram o tratamento convencional, isto é, a tireoidectomia total seguida de ablação actínica de remanescentes glandulares, excessivo. Combinações de fatores específicos do paciente e do tumor foram propostas para classificação prognóstica, mas na prática são pouco utilizadas. Os resultados de alguns trabalhos sugerem relação entre a expressão dos genes MUC, p53 e NIS e a evolução clínica das neoplasias tireoidianas. Com o objetivo de investigar a utilidade clínica de marcadores imonoistoquímicos de prognóstico, estudamos 67 nódulos tireoidianos, incluindo 57 carcinomas, dos quais incluiu 34 (50,74%) carcinomas papilíferos, sendo 21 (31,3%) casos do tipo histológico clássico, 7 (10,4%) da variante de células altas e 6 (9%) da variante folicular. Avaliamos também 16 (23,9%) carcinomas foliculares, 4 (6%) medulares e 3 carcinomas anaplásicos (4,5%). Dez casos (14,9%) foram obtidos de pacientes submetidos à cirurgia com o diagnóstico de doenças benignas da tiróide (3 casos de bócio nodular, 4 adenomas foliculares e 3 tecidos tireoidianos normais). Todos os pacientes foram submetidos a um mesmo protocolo de tratamento e acompanhados por 66±28 meses (mediana de 63 meses) sendo classificados como apresentando evolução favorável ou desfavorável. Consideramos de evolução desfavorável os 19 pacientes que possuíam evidência de recorrência local ou à distância ou que foram a óbito durante o seguimento pela doença. Realizamos estudos imunoistoquímicos da detecção das proteínas NIS, p53 e MUC1 comparando-os com a evolução dos pacientes. Mostramos que pacientes com carcinomas bem diferenciados, ausência de metástases, estadio II e estadiamento T2 têm uma evolução melhor em relação aos pacientes com carcinomas pouco diferenciados, presença de metástases, estadio IV e estadiamento T4. Não encontramos relação entre a expressão das proteínas NIS, p53 e MUC1 e a evolução dos pacientes estudados Abstract: Because most differentiated thyroid carcinomas have an excellent prognosis, some authors have been claiming that these patients have been over-treated. Combinations of patient-and tumor-specific factors have been proposed for prognostic stratification, but no clinicpathologic staging was demonstrated to be useful at the present time. In order to investigate the clinical utility of immunohistochemistry markers, we studied 67 thyroid nodules including 50 thyroid carcinomas. There were 34 (50,74%) papillary carcinomas, including 21 (31,3%) cases of the classical histological type, 7 (10,4%) tall cell variants and 6 (9%) of the follicular variant type. Also, there were 16 (23,9%) follicular carcinomas, 4 (6%) medullary and 3 anaplastic carcinomas (4,5%). Ten patients (14,9%) were submitted to surgery because of benign thyroid diseases (3 nodular goiter cases, 4 follicular adenomas and 3 thyroid tissues normal). All patients were submitted to a similar management protocol and followed-up for 66±28 months (median of 63 months) and classified as presenting a good or a bad evolution. We considered as presenting a bad evolution 19 patients that presented evidence of local or distant recurrence and the patients that died during the follow-up. Immunohistochemical expression of NIS, p53 and MUC1 proteins was compared to patient¿s evolution. We showed that patient with well differentiated thyroid carcinomas, absence of distant metastases, stage II and staging T2 have a better evolution in relation to the patients with poorly differentiated thyroid carcinomas, presence of metastases, stage IV and staging T4. We were able to find relation between the expression of proteins NIS, p53 and MUC1 and prognostic of the studied patients Doutorado Clínica Médica Doutor em Clínica Médica

Orientador: Laura Sterian Ward Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O desenvolvimento de métodos moleculares de rastreamento de indivíduos com risco de desenvolver câncer entre os portadores de nódulos na tiróide é uma questão urgente de Saúde Pública. O objetivo deste trabalho é analisar a utilidade do perfil genotípico de GSTP1, GSTO1 e p53 na identificação de risco para câncer de tiróide e na sua resposta terapêutica. Comparamos amostras de sangue periférico de 157 controles com 142 indivíduos com nódulos: 44 benignos (30 bócios e 14 adenomas foliculares- AF) e 98 malignos (77 carcinomas papilíferos- CP e 21 carcinomas foliculares- CF). Todos os pacientes foram tratados e seguidos de acordo com o mesmo protocolo. Os pacientes com câncer da tiróide apresentavam mais freqüentemente os polimorfismos de GSTP1 (câncer = 27.5% versus controle = 5.7% - p

Orientador: Laura Sterian Ward Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Fenômenos autoimmunes são freqüentemente relacionados com carcinoma diferenciado de tireóide. Entretanto, o significado da agressão autoimune que a glândula destes pacientes sofre sobre a evolução do tumor ainda é controverso. Neste estudo, foram avaliados 173 pacientes com carcinoma diferenciado de tiróide (123 de tipo papilifero e 50 de tipo folicular) submetidos à cirurgia seguida por ablação actúúca, acompanhados em média por seis anos. Uma avaliação dos fatores que influíram no prognóstico revelou que idade avançada, sexo masculino, tamanho maior do nódulo, tumor de tipo folicular, presença de metástase ao diagnóstico, grau de diferenciação e estadiamento estavam correlacionados positivamente com a ocorrência dos eventos morte, metástase e/ou recorrência da doença. Ao contrário, a presença de anticorpos e antecedentes de doença autoiniune prévia estavam correlacionados negativamente com estes eventos. A presença de metástase a distância aumentou a chance de um menor tempo de sobrevida dos pacientes com carcinoma papilifero (8.366 vezes) e também com carcinoma folicular (7.373 vezes). Entretanto, as análises uni e multivariada demonstraram que a presença de acometimento de linfonodos cervicais não influenciou a evolução dos pacientes com carcinoma diferenciado de tiróide. Pacientes com antecedentes de doença autoimune tiroidiana prévia apresentavam melhor evolução do que os pacientes em que não havia história de um doença tiroidiana de etiologia autoimune (p

Orientador : Laura Sterian Ward Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O câncer de pele não-melanocítico é o mais comum do mundo ocidental e sua incidência tem aumentado rapidamente, particularmente nos indivíduos claros, com pouca proteção da pigmentação. Análise de perda de heterozigozidade alélica na região 9p21-p22, onde se encontram os genes supressores tumorais CDKN2a/p16INK4a, p19ARF e p15INK4b, tem sido freqüentemente descrita em muitos tumores malignos, incluindo o melanoma familiar. Perdas e ganhos em outras regiões do cromossoma nove também têm sido freqüentemente observados e podem indicar mecanismos adicionais no processo de tumorigênese da célula basal. Usando DNA extraído de tecido tumoral e tecido normal correspondente, examinamos 13 lesões pré-malignas e 58 tumores cutâneos malignos. Os casos benignos e pré-malignos incluíram 4 de queratose solar, 3 de queratoacantoma, 3 de nevo melanocíticos, 2 doenças de bowen e 1 neurofibroma. Tumores de pele malignos incluíram 14 carcinomas espinocelulares, 40 carcinomas basocelulares e 4 melanomas. Foram usados 4 pares de primers para amplificar repetições de microssatélites no cromossomo 9. Identificamos 8 casos (20%) de desequilíbrio alélico entre os carcinomas basocelulares, sendo 2 casos de perda de heterozigozidade alélica e 6 casos de instabilidade microssatélite. Nenhum evento foi detectado nas lesões pré-malignas ou nos outros casos malignos. Essa dependência fenotípica sugere que exista uma grande distinção entre as duas mais importantes formas de cânceres de pele não-melanocítico na sua tendência de apresentar instabilidade microssatélite no cromossomo 9 no CBC Abstract: Non-melanoma skin cancer is the most common malignancy in human beings, and the incidence continues to increase. Loss of heterozigozity analysis in the 9p21-p22 region, that harbors the CDKN2a/p16INK4a, p19ARF, and p15INK4b tumor suppressor genes, have been frequently described in a wide range of human malignancies, including familial melanomas. Also, losses and gains in other regions of chromosome 9 have been frequently observed and may indicate additional mechanisms in basal cell tumorigenesis. Using DNA extracted from tumor and matched normal tissues, we examined 13 premalignant and 58 malignant skin tumors. Benign cases included 4 solar keratosis, 3 keratoachantomas, 3 melanocitic nevi, 2 Bowen¿s disease and 1 neurofibroma. Malignant skin tumors included 14 squamous cell, 40 basal cell carcinomas and 4 melanomas. Using 4 sets of primers to amplify polymorphic microsatellite repeats on chromosome 9, we identified 8 cases (20%) of allelic imbalance among basal cell carcinomas, 2 cases of loss of heterozigozity and 6 cases of microsatellite instability. No events were detected among the premalignant or the other malignant cases. This phenotype-dependency suggest that there is a major distinction between the two most important forms of non-melanoma skin cancers in their tendency to present microsatellite instability in chromosome 9 Mestrado Ciências Básicas Mestre em Clínica Médica

Orientadores : Miriam Aparecida da Silva Trevisan, Jose Vassallo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Os dados de 135 pacientes com carcinoma diferenciado de tireóide em atendimento no Hospital das Clínicas da UNICAMP, na Disciplina de Endocrinologia, foram analisados com o objetivo de caracterizar esta população, observar a freqüência de achados clínicos e anatomopatológicos, e verificar a relação dos mesmos com o prognóstico. Existe na literatura relatos da influência de proto-oncogenes e de genes supressores tumorais na evolução de diversas neoplasias. Por este motivo estudamos também a expressão do PCNA (Antígeno Nuclear de Proliferação Celular) e das proteínas p53 e bcl-2 em parte da nossa casuística e procuramos verificar se estes achados eram significativos na evolução destes casos. Os estudos imuno-histoquímicos foram realizados de acordo com a técnica de HSU e cols. (1981), modificada. Os testes estatísticos empregados foram: exato de Fisher, Quiquadrado, Mann-Whitnney, curvas de sobrevida de Kaplan-Meier e Log Rank. Foram também realizadas análises univariada e multivariada. Os resultados mostraram que os carcinomas foram folicular em 28.9% e papilífero em 71.1% dos pacientes; 78.5% eram do sexo feminino e 21.5% do masculino;a idade ao diagnóstico variou entre 9 e 76 anos (média=42.5;DP=17.1 e mediana=43). Quando separados pelo tipo histológico, observamos para os 96 casos de carcinoma papilífero: 75 (78.1%) do sexo feminino e 21 (21.9 %) do masculino ; 87 (90.6%) brancos e 9 (9.4%) não brancos; 68 (70.8%) tinham idade menor ou igual a 45 anos e 28 (29.2%) maior que 45 anos;a idade ao diagnóstico variou entre 9 e 75anos (média=37.3 anos, DP=15.4 e mediana=35.5), e para os 39 carcinomas foliculares: 31 (79.5%) do sexo feminino e 8 (20.5 %) do masculino; 30 (76.9%) brancos e 9 (23.1%) não brancos; 8 (20.5%) tinham idade menor ou igual a 45 anos e 31 (79.5%) maior que 45 anos;a idade ao diagnóstico variou entre 20 e 76 anos (média=55.4 anos, DP=14.3 e mediana=58). o tamanho do nódulovariou entre 0.4 e 11 cm: nos papilíferos entre 0.4 e 7cm (média=3; DP=1.6; mediana 3) e nos foliculares entre 1.5 e 11cm (média=5.5; DP=2.4; mediana=5). Encontramos associações significativas entre: idade e tipo histológico; idade e grau de diferenciação do tumor; tamanho do nódulo e tipo histológico; tamanho do nódulo e grau de diferenciação; metástases ao diagnóstico e tipo histológico folicular; metástases ao diagnóstico e grau de diferenciação; ocorrência de eventos e tipo histológico folicular; ocorrência de eventos e grau de diferenciação. Utilizando-se a medida contínua dos nódulos notamos que foram maiores no grupo com idade maior que 45 anos, tanto no papilífero quanto no folicular. Quando comparadas as curvas de sobrevida (Log Rank) foi notada a influência das variáveis: idade, tamanho do nódulo, tipo histológico e grau de diferenciação. Na análise univariada as variáveis idade, tamanho do nódulo, tipo histológico e grau de diferenciação foram as que melhor explicaram a ocorrência de eventos (regressão de metástases, remissão incompleta, recidiva ou metástases e morte). Na análise multivariada os fatores sexo, idade e grau de diferenciação mostraram ser os mais importantes na ocorrência de eventos. Em parte da nossa casuística, 63 casos, sendo 42 do tipo papilífero e 21 do folicular, avaliamos a expressão do PCNA e das proteínas p53 e bcl-2, procurando verificar se estavam relacionadas à evolução dos casos. Concluímos que os marcadores estudados não apresentaram influência no prognóstico do carcinoma diferenciado da tireóide, e que nestas neoplasias os fatores anteriormente estabelecidos (idade, tamanho do nódulo, tipo histológico, grau de diferenciação) são os mais importantes Abstract: The data of 135 patients with thyroid differentiated carcinoma, ftom the Hospital das Clínicas da UNICAMP, Endocrinology Service, were analysed in order to characterize this population, to observe the ftequence of clinical and anatomopathologic features and their association with the prognosis. The literature reports the interference of proto-oncogenes and tumor supressor genes in the evolution of several neoplasias. We studied the PCNA expression as well as the p53 and bcl-2 proteins, in some patients of our casuistry, in order to verify their possible significance in the clinical evolution. The immunohistochemical studies were made according to the technique of HSU et aI (1981), modified. The statistical analysis included: the tests Fisher exact, qui square and Mann-Whitnney tests, and survival curves of Kaplan- Meier and Log Rank. Univariate and multivariate analysis were used too. Our results showed: the thyroid carcinomas were follicular in 28.9% and papillary in 71.1%; 78.5% were female and 21.5% were male; the age at diagnosis ranged from 9 to 76 years (mean=42.5; SD=17.1; median=43). Divided according to the histologic type, the 96 cases of papillary carcinoma were: 75 (78.1%) female and 21 (21.90-10m) ale; 87 (90.6%) white and 9 (9.4%) not white; 68 (70.8%):S 45 years of age and 28 (29.2%) older than 45; the age at diagnosis ranged ftom 9 to 75 years (mean=33.3; SD= 15.4 median=35.5), as to the follicular carcinomas we observed: 31 (79.5%) female and 8 (20.5%) male; 30 (76.9%) white and 9 (23.1%) not white; 8 (20.5%):S 45 years ofage and 31 (79.5%) older than 45; the age at diagnosis ranged ftom 20 to 76 years (mean=55.4; SD=14.3; median=58). The tumor size ranged ftom 0.4 to 11cm: in the papillary tumors ftom 0.4 to 7cm (mean=3; SD=1.6; median=3) and in the follicular tumors ranged ftom 1.5 to llcm (mean=5.5; SD=2.4; median=5). We found significatant associations between: age and histologic type, age and differentiation degree, tumor size and histologic type and between tumor size and differentiation degree. We found positive associations between: the presence of distant metastases at the time of diagnosis and follicular type and differention degree. In addition, there was also association between occurrence of events (metastases regression, incomplete remission, recurrence or metastases and death) and follicular type, as well as with differentiation degree. Comparing the survival curves (Log Rank) we see the influence of the variables: age, nodule size, histologic type, differentiation degree. Using the univariate analysis, the variables age, tumor size, histologic type and differentiation degree can better explain the occurrence of events. On the order hand, multivariate analysis showed that sex, age and differentiation degree were the more important factors, when we study the occurrence of events. In 63 patients from our population, 42 papillary carcinomas and 21 follicular carcinomas, we evaluated the PCNA expression, as well as the p53 and bcl-2 proteins, searching correlation with the prognosis. We concluded that the markers we sudied do not influence the prognosis of the differentiated thyroid carcinoma and that in these neoplasias the factors previously established (age, nodule size, histologic type, differentiation type) are still the most important Doutorado Medicina Interna Doutor em Ciências Médicas