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Orientadores: Marta Cristina Teixeira Duarte, Rodney Alexandre Ferreira Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas Resumo: As doenças infecciosas causadas por fungos na pele humana constituem uma problemática a nível mundial e o uso de tratamentos farmacológicos convencionais tem sido insuficientes para seu controle. Assim, a busca por novos fitoterápicos vem aumentando atualmente, principalmente através de estudos que visam explorar a composição e os produtos do metabolismo das plantas medicinais. Entre as fontes promissoras destes compostos encontram-se os extratos vegetais e os óleos essenciais. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antifúngica do óleo essencial e do extrato alcoólico da espécie Porophyllum. ruderale contra a levedura Candida albicans, e os fungos dermatófitos Trichophyton rubrum e T. mentagrophytes, associados com doenças da pele, visando uma possível formulação para tratamento de micoses cutâneas. A avaliação foi realizada pelo método da microdiluição, através da determinação da Concentração inibitória mínima (CIM) e da Concentração Fungicida Mínima (CFM) do óleo e do extrato de P. ruderale, contra os patógenos alvo, e a composição química do extrato por triagem fitoquímica sendo verificada a presença de taninos, flavonoides e antocianinas e do óleo por métodos cromatografia gasosa. O óleo essencial teve um IC50 de 247,74 ?g/ mL considerando-se uma citotoxicidade moderada, entanto, o extrato etanólico foi superior a 1 mg/mL e, na formulação do gel como OE na concentração de 1,25 mg/mL apresentou um efeito inibitório sobre T. rubrum testado na temperatura de 8 °C Abstract: Infectious diseases caused by fungi on human skin are a worldwide problem, and the use of conventional pharmacological treatments has been insufficient for their control. Thus, the search for new phytotherapeutics is currently increasing, mainly through studies that aim to explore the composition and metabolism products of medicinal plants. Among the promising sources of these compounds are plant extracts and essential oils. In this context, the objective of this work was to evaluate the antifungal activity of the essential oil and the alcoholic extract of the species Porophyllum. ruderale against the yeast Candida albicans, and the dermatophyte fungi Trichophyton rubrum and T. mentagrophytes, associated with skin diseases, aiming a possible formulation for the treatment of cutaneous mycoses. The evaluation was performed by the microdilution method, through the determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimum Fungicidal Concentration (MFC) of the oil and the extract of P. ruderale, against the target pathogens, and the chemical composition of the extract by phytochemical screening being verified the presence of tannins, flavonoids and anthocyanins and of the oil by gas chromatography methods. The essential oil had an IC50 of 247.74 ?g/mL considering a moderate cytotoxicity, however, the ethanolic extract was higher than 1 mg/mL and, in the gel formulation as OE at the concentration of 1.25 mg/mL showed an inhibitory effect on T. rubrum tested at the temperature of 8 °C Mestrado Ciências Farmacêuticas - Insumos Farmacêuticos Naturais, Biotecnológicos e Sintéticos Mestra em Ciências CAPES 001

Orientadores: Glaucia Maria Pastore, Marta Cristina Teixeira Duarte Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Nos últimos anos, produtos naturais como os biossurfactantes e óleos essenciais têm sido objeto de intensa investigação científica. As suas atividades antimicrobianas e antiadesivas fazem com que eles apresentem potencial para serem utilizados para o controle de fungos fitopatógenos na agricultura e combate à micro-organismos multirresistentes e biofilmes na área médica e em indústrias de alimentos. Apesar da surfactina produzida por Bacillus subtilis possuir elevadas atividades superficiais e biológicas e ser um dos biossurfactantes mais estudados atualmente, os seus altos custos de produção e baixo rendimento tornam impraticável a sua produção em escala industrial. Deste modo, este trabalho estudou a produção contínua de surfactina e coprodução de amilases e proteases por B. subtilis utilizando manipueira como substrato em diferentes taxas de alimentação, visando à redução dos custos de processo e ao melhor aproveitamento do arsenal metabólico do micro-organismo. As suas atividades antimicrobiana e antibiofilme do biossurfactante produzido foram estudadas em conjunto com dez óleos essenciais extraídos plantas medicinais e aromáticas. Os valores de produção de biossurfactantes e atividades enzimáticas foram crescentes com o aumento da taxa de diluição empregada, encontrando-se os valores máximos de 2,9 mg.h-1, 938,3 U.mL-1 e 3,6 U.mL-1 para a produção de biossurfactantes e atividades amilolítica e proteolítica, respectivamente. O biossurfactante produzido demonstrou atividade antibacteriana contra Bacillus cereus, Rhodococcus equi e Listeria innocua e inibiu a formação de biofilmes de Staphylococcus aureus e Escherichia coli em até 92 e 78 %, respectivamente. Além disso, ele apresentou efeito sinérgico com os óleos essenciais de Aloysia gratissima e Cymbopogon winterianus para a inibição de R. equi, L. innocua e B. subtilis, com os óleos essenciais de Cinnamomum burmannii, Cymbopogon citratus e Lippia sidoides para a inibição dos fungos fitopatógenos Alternaria solani, Alternaria alternata e Mucor hiemalis e com o óleo essencial de C. winterianus para a inibição da formação de biofilme por E. coli Abstract: In recent years, natural products such as biosurfactants and essential oils have been the subject of intense scientific research. Due to their antimicrobial and anti-adhesive activities, they show potential for controlling the growth of phytopathogenic fungi in agriculture and combating multi-drug resistant microorganisms and biofilms in medicine and food industries. Despite the high superficial and biological activities possessed by surfactin produced by Bacillus subtilis, their low yields and high production costs hamper their production on a commercial scale. Thus, this work studied the continuous production of surfactin and co-production of amylases and proteases by B. subtilis LB5a using cassava wastewater as substrate varying the dilution rate, in order to reduce production costs and improve the utilization of metabolic arsenal from the microorganism. The antimicrobial and anti-biofilm activities of the biossurfactant produced were studied in blends with ten essential oils extracted from medicinal and aromatic plants. Biossurfactant production values and enzymatic activities were higher with the increase of dilution rate, reaching the maximum values of 2,9 mg.h-1, 938,3 U.mL-1 and 3,6 U.mL-1 for the production of biossurfactants and amylolitic and proteolitic activities, respectively. The biossurfactant showed antibacterial activity against Bacillus cereus, Rhodococcus equi and Listeria innocua and inhibited up to 92 e 78 % of biofilm formation by Staphylococcus aureus and Escherichia, respectively. Moreover, it presented synergistic with the essential oils of Aloysia gratissima and Cymbopogon winterianus for the inhibition of R. equi, L. innocua and B. subtilis, with the essential oils of Cinnamomum burmannii, Cymbopogon citratus and Lippia sidoides for the inhibition of the phytopathogenic fungi Alternaria solani, Alternaria alternata and Mucor hiemalis and with the essential oil of C. winterianus for the prevention of biofilm formation by E. coli Doutorado Ciência de Alimentos Doutora em Ciência de Alimentos

Orientador: Marta Cristina Teixeira Duarte Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Doenças causadas por fitobactérias contribuem significantemente para as perdas na produção de espécies vegetais de importância econômica. Ao mesmo tempo, o uso intensivo de antibióticos na agricultura e em outros setores produtivos vem ocasionando resistência bacteriana a estas drogas. Este fato tem estimulado a crescente busca por produtos de origem vegetal com atividade antimicrobiana. Extratos e óleos essenciais de diversas espécies vegetais têm sido reconhecidos e estudados empiricamente há muito tempo, mas foram cientificamente confirmados recentemente. Poucos estudos destacam a atividade de óleos essenciais contra os fitopatógenos Erwinia carotovora subsp carotovora e Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, responsáveis por doenças associadas à cultura de tomate, com importância significativa na agricultura e economia. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi investigar o emprego de óleos essenciais como antimicrobianos naturais frente a isolados de E. carotovora subsp carotovora e X. campestris pv. vesicatoria. A determinação da concentração mínima inibitória - MIC realizada pelo teste da microdiluição mostrou que os óleos essenciais de melhor atividade antibacteriana foram Cinnamomun cassia e Eugenia caryophyllata, ativos contra a maioria dos isolados bacterianos. A análise da composição química dos óleos, realizada por cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massas mostrou que os principais constituintes presentes em C. cassia e E. caryophyllata foram o trans-cinamaldeíodo e o eugenol, respectivamente. Além disso, a maioria dos óleos testados apresentou efeito bactericida e inibição moderada contra os patógenos. No entanto, a combinação (blenda) dos óleos de melhor atividade antibacteriana na proporção 1:1 não incorreu em melhora da MIC, quando comparada aos valores obtidos com os óleos essenciais brutos. A investigação dos possíveis mecanismos de ação da blenda demonstrou que para E. carotovora subsp. carotovora, o teor proteíco e lipídico extracelular aumentou após 5 e 6 h, respectivamente, e foi diretamente proporcional ao aumento na concentração dos óleos essenciais no meio. O mesmo foi observado para X. campestris pv. vesicatoria após 4 h. Os resultados indicaram que a blenda de óleos essenciais de C. cassia e E. caryophyllata, quando combinados na proporção 1:1 apresentaram efeito sobre a lise da membrana celular das bactérias, e são alternativas naturais com bom potencial para o controle dos patógenos bacterianos Abstract: Diseases caused by phytobacteria contribute significantly to the losses in the production of plant species of economic importance. At the same time, the intensive use of antibiotics in agriculture and in other productive sectors is causing bacterial resistance to these drugs. This fact has being stimulated the growing demand for vegetable products with antimicrobial activity. Extracts and essential oils of several plant species have been recognized and empirically studied for a long time, but recently have been scientifically confirmed. Few researches have highlighted the activity of essential oils against the plant pathogens Erwinia carotovora subsp. carotovora and Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, responsible for diseases associated with the culture of tomato, with significant importance in agriculture and economy. Thus, the aim of this study was to investigate the use of essential oils as natural antimicrobial against E. carotovora subsp. carotovora and X. campestris pv. vesicatoria isolates. The minimal inhibitory concentration - MIC determination carried out by the microdilution test showed that essential oils to better antibacterial activity were Cinnamomun cassia and Eugenia caryophyllata against most bacterial isolates. The chemical composition of the active essential oils by gas chromatography coupled with mass spectrometry analysis showed that the major constituent of the oils of C. cassia and E. caryophyllata were respectively, the trans-cinnamaldehyde and eugenol. Furthermore, most of the tested oils showed moderate inhibition and bactericidal effect against the plant pathogens. However, the combination (blend) of the most active oils at 1: 1 showed no improvement in MIC values compared with the values obtained with the crude oils. The investigation of the possible mechanisms of action of the blend showed that for E. carotovora, the extracellular protein and fat contents, after 5 and 6 h, increases respectively, and was directly proportional to the increase in the concentration of essential oils in the environment. The same was observed for X. campestris, after 4 h. The results indicated that the blend of essential oils from C. cassia and E. caryophyllata at 1:1 presented a possible effect on the lysis of the bacterial cell membrane, and are natural alternatives with good potential to control bacterial phytopathogens Mestrado Ciência de Alimentos Mestra em Ciência de Alimentos CNPQ 130216/2014-3

Orientador: Marta Cristina Teixeira Duarte Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A cultura do morango é de grande importância no contexto agrícola mundial, com uma produção anual que supera 4,5 milhões de toneladas. Porém, as características desta fruta a tornam altamente susceptível a fatores físicos e biológicos de deterioração, tornando-a altamente perecível e acarretando altos níveis de perdas no campo e na pós-colheita. Dentre os fatores biológicos tem destaque a ação de fungos fitopatogênicos, dentre os quais o 'Botrytis cinerea' e o' Colletotrichum gloeosporioides' tem papel principal. Dentre as alternativas naturais para controle destes fitopatógenos, os óleos essenciais de plantas medicinais e aromáticas vêm sendo investigados. Neste contexto, no presente trabalho a atividade antifúngica de óleos essenciais de nove espécies de 'Citrus' e de 'Cymbopogon citratus' foi avaliada in vitro contra 'B. cinerea' e' C. gloeosporioides'. Os óleos de 'Citrus sinensis' e 'C. citratus' foram os mais ativos in vitro (MIC ¿ 0,25 e 0,06 mg.mL-1, respectivamente) e, portanto, selecionados para os ensaios com morangos in natura, visando manter sua qualidade pós-colheita. Os ensaios foram conduzidos sob duas condições ambientais, ou seja, sob condições ambiente de armazenamento (25 ºC) e em armazenamento refrigerado (10 ºC). Aplicados na concentração 1,0 mg.mL-1 , o óleo essencial de 'C. sinensis' mostrou-se mais eficaz sob condições ambiente de armazenamento, e a mistura dos dois óleos em partes iguais em armazenamento refrigerado. Em ambas as condições, melhores resultados foram obtidos através da aplicação por contato direto. Os óleos essenciais foram ainda incorporados a um filme de revestimento composto por matriz de metil-celulose e testados in vitro quanto ao seu potencial de inibição de 'B. cinerea'. Nestas condições, o óleo essencial de 'C. sinensis' mostrou-se o mais eficiente. Através dos resultados foi possível concluir que os óleos essenciais são uma opção viável para o controle de fitopatógenos em morango e para manutenção de sua qualidade pós-colheita Abstract: The strawberry crop has great importance in agricultural world wide context, with an annual production exceeding 4.5 million tons. However, the characteristics of this fruit make it highly susceptible to physical and biological damage, making it easily perishable and causing losses in field and postharvest. Among the biological factors, the action of phytopathogenic fungi such as 'Botrytis cinerea' and "Colletotrichum gloeosporioides" have a main role. Natural alternatives have been proposed in order to replace synthetic products currently used in control of these plant pathogens, of which the essential oils from medicinal and aromatic plants have demonstrated good potential. In this context, the present study evaluated the in vitro antifungal activity of the essential oils from nine 'Citrus' species and from' Cymbopogon citratus' against 'B. cinerea' and 'C. gloeosporioides'. 'Citrus sinensi's and 'C. citratus' essential oils showed highest activities (MIC values 0.25 mg.mL-1 and 0.06 mg.mL-1, respectively) and were selected for the assays with in natura strawberries aiming at maintaining its postharvest quality. The tests were conducted under two simulated environmental conditions, ie, environment conditions of storage (25 ºC) and refrigerated storage (10 ºC). The crude essential oil of 'C. sinensis' (1.0 mg.mL-1) was the more effective in environmental conditions of storage, and the mixture of the two oils (1:1 ¿ 1.0 mg.mL-1) in refrigerated storage. In both conditions, best results were obtained when the oils were applied by direct contact. The essential oils were also incorporated into a coating film consisting of methyl cellulose matrix and tested to their 'in vitro' inhibitory potential against 'B. cinerea'. Accordingly, the essential oil of 'C. sinensis' proved to be the most effective as antifungal. The results allowed conclude that essential oils are a viable option for controlling phytopathogenic fungi in strawberry and for continuing postharvest quality Mestrado Ciência de Alimentos Mestre em Ciência de Alimentos CNPQ

Orientador: Marta Cristina Teixeira Duarte Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O fungo Aspergillus flavus é responsável pela degradação de alimentos, além de produzir aflatoxinas que são reconhecidas como potentes carcinógenos. Atualmente, frente ao aumento acelerado de cepas resistentes aos antifúngicos sintéticos e à pressão dos consumidores pela substituição destes por produtos naturais, a busca de novos antimicrobianos a partir de óleos essenciais (OE) tem se tornado uma opção promissora. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de 13 OE, provenientes de plantas medicinais e aromáticas no controle do crescimento de A. flavus CCT 0614 e produção das aflatoxinas AFB1 e AFB2. Ensaios in vitro realizados pelo teste da microdiluição mostraram que os OE de Cinamommum burmanii (MIC 0,2 mg.mL-1) e Cymbopogon citratus, C. martinii, C. winterianus, Eugenia caryophyllata e T. vulgaris (MIC 0,5 mg.mL-1) apresentaram elevada ação anti ¿ A. flavus. Em relação à produção de biomassa seca pelo fungo na presença dos OE, nas concentrações correspondentes a de mínima concentração inibitória (MIC) e 2xMIC, houve diminuição significativa em relação ao controle (p > 0,05). A avaliação do crescimento radial de A. flavus quando submetido à ação dos compostos voláteis (AV) do OE de C. burmanii a 0,2 mg.mL-1 mostrou inibição total até 336 h. Por outro lado, os OE de E. caryophyllata, T. vulgaris e C. citratus reduziram o crescimento radial do fungo quando incorporados ao meio de cultura e quando submetidos a ação dos voláteis. Os OE mais ativos foram analisados através de CG-EM, que permitiu identificar nos óleos compostos conhecidos pela ação antimicrobiana. Em seguida, o OE de C. citratus foi selecionado para estudo dos efeitos sobre a produção de aflatoxinas por A. flavus, quantificada por CLAE-FL. Os resultados mostraram que o OE de C. citratus foi capaz de reduzir a produção de AFB1 em 95% quando incorporado ao meio a 0,5 mg.mL-1, enquanto houve um aumento de cerca de 53% na produção da micotoxina a 0,25 mg.mL-1, após o mesmo período. Não foi detectada a presença da AFB2. Os resultados deste trabalho indicam que os OE estudados representam uma alternativa promissora no controle do crescimento A. flavus e o OE de C. citratus à produção de AFB1. A possibilidade de aplicação dos OE por AV é uma alternativa atrativa, pelo fato de não afetar as propriedades físicas e sensoriais do alimento Abstract: The fungus Aspergillus flavus is responsible for damage in foods, and by aflatoxins production that are recognized as potent carcinogens. Currently, due to rapid increase of resistant strains to synthetics antifungal, and consumer pressure to replacing these synthetics compounds by natural products, the search for new antimicrobial from essential oils (EO) has become a promising option. This study aimed evaluate the capacity of 13 EO from medicinal and aromatic plants in the control of growth and aflatoxins B1 and B2 production by A. flavus CCT 0614. In vitro assays performed by microdilution method demonstrated that EO of Cinnamomum burmanii (MIC 0.2 mg.mL-1) and Cymbopogon citratus, C. martinii, C. winterianus, Eugenia caryophyllata and T. vulgaris (MIC 0.5 mg.mL-1) showed strong action anti - A. flavus. In relation to fungal biomass dry weight in the presence of OE in the concentrations corresponding to minimum inhibitory concentration (MIC) and 2xMIC, occurred a significant decrease compared to control (p< 0.05). The radial growth of A. flavus was inhibited totally until 336 h when submitted to the action of the volatile compounds (AV) of C. burmanii at 0.2 mg.mL-1. In contrast, the OE of E. caryophyllata, T. vulgaris and C. citratus reduced the radial growth of the mould when were incorporated to medium (IP) and when used in AV. EO that showed higher action were analysed by CG-MS this allowed identify the compounds known by antimicrobial action. The EO of C. citratus was selected to evaluation of the effects on the aflatoxins production by A. flavus, which was quantified by HPLC-FL. The results showed that C. citratus EO (0.5 mg.mL-1) was able to reduce 95% of AFB1 production, while the production increase about 53% with 0.25 mg.mL-1 after the same period. The presence of AFB2 was not detected. The most active EO were identified by GC-MS, which show the presence of compounds with known antimicrobial activity. The results of this study indicate that the EO studied represent a promising alternative to control the growth and AFB1 production by A. flavus. The possibility of application of EO by AV is an attractive alternative, in view of the fact that it does not affect the physical and sensory properties of food Mestrado Ciência de Alimentos Mestra em Ciência de Alimentos

Orientador: Marta Cristina Teixeira Duarte Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A bactéria Staphylococcus aureus possui grande importância no cenário das doenças infecciosas. Além de ser um sério problema na clínica médica humana e animal, bem como em alimentos, a espécie ocupa posição de destaque como agente infeccioso da mastite bovina. O surgimento de cepas resistentes aos tratamentos convencionais tem tornado o problema ainda mais preocupante. Nesta perspectiva, estudos envolvendo a busca por novos antimicrobianos a partir de fontes naturais têm demonstrado o potencial de espécies vegetais como uma das ações mais promissoras. Assim, o presente trabalho teve como objetivo investigar a atividade de óleos essenciais obtidos a partir de 42 espécies medicinais e aromáticas pertencentes à Coleção de Plantas Medicinais e Aromáticas - CPMA, do Centro Pluridisciplinar de Pesquisas Químicas, Biológicas e Agrícolas - CPQBA/Unicamp sobre 109 cepas de S. aureus associados à mastite bovina. As amostras microbiológicas foram isoladas de glândulas mamárias de animais em lactação a partir de um estudo conduzido no Instituto de Zootecnia de Nova Odessa - SP. Para a determinação da Concentração Mínima Inibitória (MIC) dos óleos essenciais foi empregado o método da microdiluição, através do qual foram avaliadas concentrações entre 0,015 e 1 mg. mL-1. Os óleos essenciais de melhor potencial anti-S. aureus foram os obtidos das espécies Cymbopogon citratus, Elyonurus muticus, Tetradenia riparia e Vetiveria zizanioides, que em seguida foram combinados entre si e testados contra 38 das cepas de S. aureus, escolhidas a partir de critérios pré-determinados. A ação dos melhores óleos e suas combinações também foi avaliada sobre a formação de biofilme e a atividade anti-proliferativa sobre células tumorais e normais. Os óleos mais ativos foram ainda analisados quimicamente através da cromatografia gasosa acoplada a espectofotômetro de massas-CG-EM. Dentre as combinações testadas, observou-se que aquelas contendo três óleos foram as mais ativas contra as cepas estudadas, com MIC entre 0,03 a 0,06 mg. mL-1. Nos testes de atividade anti-proliferativa todos os óleos exerceram ação inibitória sobre as células, entretanto o óleo de Elyonurus muticus desempenhou a melhor ação inibitória sobre as diferentes linhagens. Nos testes com biofilme, notou-se que os quatro óleos e suas respectivas combinações exerceram forte ação anti-aderência na faixa de concentração testada (0,06 - 1,0 mg. mL-1). Os resultados também evidenciaram a ocorrência do fenômeno hormesis em todos os ensaios com biofilme. As concentrações sub-MIC dos óleos essenciais e combinações foram capazes de estimular em mais que o dobro a formação do biofilme em relação ao seu controle Abstract: Staphylococcus aureus species are very important in the context of infectious diseases and food industry. Cause serious problems in human and animal medicine, including bovine mastitis. The emergence of strains resistant to conventional treatments has made the problem even more disturbing. In this perspective, studies involving the search for new antibiotics from natural sources are very important. Thus, this study aimed to investigate the activity of essential oils obtained from 42 medicinal and aromatic species of the Collection of Medicinal and Aromatic Plants - CPMA, the Multidisciplinary Center of Chemical, Biological and Agricultural Research - CPQBA / Unicamp on 109 S. aureus strains associated with bovine mastitis. Microbiological samples were isolated from mammary glands of lactating animals from a study conducted in the Animal Science Institute of Nova Odessa - SP. To determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of essential oils was employed microdilution method and measured between 0.015 and 1 mg. mL-1. Essential oils with best potential anti-S. aureus were obtained from species Cymbopogon citratus, Elyonurus muticus, Tetradenia riparia and Vetiveria zizanioides, which were then combined and tested against 38 strains of S. aureus, chosen from pre-determined criteria. The action of the best oils and their combinations was evaluated for biofilm formation and the antiproliferative activity on tumor and normal cells. The most active oils were also chemically analyzed by gas chromatography coupled to spectrophotometer mass-GC-MS. Of the combinations tested, it was observed that those containing three oils were more active with MIC of 0.03 to 0.06 mg. mL-1. In the antiproliferative activity test all oils exerted inhibitory effect on the cells, though the oil Elyonurus muticus played the best inhibitory effect on different strains. In tests with biofilm it was noted that the four oils and their combinations exerted strong anti-adhesion activity in the concentration range tested (0.06 to 1.0 mg. mL-1). The results showed the occurrence of hormesis phenomenon in all tests with biofilms. The sub-MIC concentrations of essential oils and combinations were able to stimulate more than twice biofilm formation relative to control Doutorado Ciência de Alimentos Doutora em Ciência de Alimentos CNPQ

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Marta Cristina Teixeira Duarte Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: Introdução: A candidíase oral é uma infecção fúngica oportunista da cavidade oral, cujas taxas de prevalência e incidência vêm aumentando significativamente em todo o mundo. Assim, novas estratégias orientadas para gerir esta doença têm sido propostas, dentre as quais está o uso de óleos essenciais (OE) com propriedades antifúngicas. Evidências indicam que o OE de Coriandrum sativum L. (coentro) é um forte agente antifúngico contra Candida e, portanto, investigações devem dar continuidade ao conhecimento gerado. Objetivo: Este estudo buscou avaliar a atividade antifúngica e modo de ação do OE de C. sativum sobre Candida spp., e determinar os alvos moleculares afetados na expressão global do genoma humano. Material e Métodos: C. sativum foi obtido a partir do Banco de Germoplasmas do Centro Pluridisciplinar de Pesquisas Químicas, Biológicas e Agrícolas (Universidade Estadual de Campinas, SP, Brasil) cujo OE e fração ativa tiveram o perfil fitoquímico determinado por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa. Posteriormente, foram realizados testes com cinco cepas de referência de Candida: Determinação da Concentração Inibitória e Fungicida Mínima (CIM/CFM); modo de ação antifúngica (ensaio do sorbitol e ergosterol); Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) de biofilmes de Candida e testes de inibição de aderência em biofilme. Utilizou-se nistatina, anfotericina B ou caspofungina como controles positivos, além de controles negativos. Também, foi testado o efeito do OE sobre a atividade proteolítica de C. albicans. Por fim, um ensaio de farmacogenômica identificou quais alvos moleculares no genoma humano foram afetados pelo OE e fração ativa de C. sativum. Os testes foram realizados em triplicata de experimentos independentes e os dados foram tratados estatisticamente (ANOVA, pós-teste de Tukey, ?=0,05). Os dados da análise farmacogenômica foram processados nas plataformas GeneGo MetaCore® e David Bioinformatics Resources. Resultados: O perfil fitoquímico EO indicou monoterpenos (37,9%) e sesquiterpenos (62,1%) como compostos principais. Os valores de CIM/CFM para o OE variaram de 15,6 a 62,5 µg/mL. Quanto ao modo de ação, o OE de C. sativum parece se ligar ao ergosterol da membrana celular fúngica, aumentando a permeabilidade iônica e causando morte celular; entretanto, o OE não atua sobre vias de biossíntese da parede celular. Estes achados confirmam as alterações na integridade da morfologia do biofilme verificadas nas análises por MEV. Além disso, o OE apresentou atividade antiaderente em biofilme em baixas concentrações (15,6-62,5 µg/mL) contra as cepas testadas, bem como atividade contra proteases produzidas por C. albicans, sendo estatisticamente significante na CIM (p