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Orientador: Juliana Alves Macedo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A hipertensão arterial atinge mais de um bilhão de pessoas no mundo e é considerada um alto fator de risco para doenças cardiovasculares. Dentre os mecanismos de regulação da pressão sanguínea, destaca-se o Sistema Renina- Angiotensina-Aldosterona (SRAA), por sua atuação na elevação da pressão arterial (PA) por meio de vaso constrição e reabsorção de sódio, o que o torna o principal alvo para tratamento medicamentoso, principalmente por inibição da atividade da Enzima Conversora de Angiotensina I (ECA). Tendo sido o captopril o primeiro medicamento desenvolvido com esse mecanismo de ação, os inibidores de ECA impedem a conversão da angiotensina I em angiotensina II, interrompendo a cascata de reações do SRAA que culminariam na elevação da PA. Além do tratamento convencional, é possível encontrar, na medicina popular recomendações para o consumo de diversas plantas, in natura ou chás, para o controle da PA, sendo que diversos estudos correlacionam esta atividade anti-hipertensiva ao teor de fenólicos totais, ou mais especificamente, ao teor de flavonoides, presentes nessas plantas. O presente projeto buscou desenvolver processos para produção de extratos fenólicos de resíduos industriais de uvas tintas e de pele de amendoim; assim como avaliar o potencial dos extratos para inibição da atividade da ECA, como mecanismo de redução potencial da pressão arterial. Foram preparados seis extratos para cada amostra de resíduo, sendo três formas de extração (aquoso, etanólico com tempo de reação de 1 hora e etanólico em 5 horas), com um extrato controle e um submetido à biotransformação enzimática para cada método. Para caracterização foram utilizados os métodos de Folin-Ciocalteu, Dowd e pH diferencial, para teores de fenólicos totais, flavonoides totais e antocianinas monoméricas, respectivamente. Para a capacidade antioxidante foram utilizados os métodos DPPH, ORAC e FRAP. Para o potencial anti-hipertensivo foi utilizado o método para determinar a capacidade de inibição da ECA. Os valores de fenólicos totais nos extratos do bagaço de uva tinta variaram entre 17,6 e 54,1 mg GAE/g, enquanto que nos extratos da pele de amendoim os valores ficaram entre 81,1 e 234,6 mg GAE/g. Os melhores resultados foram encontrados para a extração alcoólica. Os extratos etanólicos em 5 horas (UTe5, UEe5, PAe5 e PEe5) foram escolhidos paras os demais testes. Os valores para a capacidade antioxidante pelo método ORAC variaram entre 607±21,2 e 1844±78,4 mg TE/g, com maiores valores para os extratos de amendoim. A inibição da ECA foi de 16,45% e 37,86% para os extratos de uva (100 ?g/mL) e de 47,52% e 39,95% para os extratos de amendoim (50 ?g/mL). A extração enzimática apresentou redução no teor de fenólicos totais e potencial antioxidante nos extratos da pele de amendoim e não apresentou alteração nesses valores nos extratos de uva tinta. Enquanto que, para o potencial de inibição da ECA, o extrato biotransformado de uva tinta apresentou valor duas vezes superior que o respectivo controle. Os resultados indicam a viabilidade de utilização desses resíduos para obtenção de compostos bioativos com capacidade antioxidante e potencial anti-hipertensivo Abstract: High Blood Pressure (HBP) reaches more than one billion people around the world, and it’s taken as a high risk factor for cardiovascular diseases. Between the mechanisms for blood pressure (BP) regulation Renin-Angiotensin-Aldosterone System (RAAS) stands up due to its action for BP elevating through blood vessel constriction and sodium reabsorption, which makes it as the main target for drug treatment, mainly by Angiotensin I Converting Enzyme (ACE) activity inhibition. Having captopril as the first developed drug for this action mechanism, ACE inhibitors prevent the conversion of angiotensin I to angiotensin II, and stop reactions cascade which would lead to a blood pressure elevation. Beyond traditional treatments, it’s possible to find, in the popular medicine, recommendation for different plants consumption in order to control BP. Many studies make correlation between this antihypertensive activity to total phenolic content, mainly flavonoids, found in those plants. This project searched to develop processes for phenolic extracts production from industrial byproducts of red grapes and peanut skin, as well as to evaluate their potential for ACE activity inhibition, as a mechanism to potential reduction of BP. It was prepared six extracts for each sample, being three extraction methods (water, ethanoic in 1h incubation time, and ethanoic in 5h incubation time), with one control extract and one enzymatic processed extract for each method. For characterization were used Folin-Ciocalteu, Dowd, and differential pH methods, for total phenolic, total flavonoid, and monomeric anthocyanins contents, respectively. For antioxidant capacity were used DPPH, ORAC, and FRAP methods. For anti-hypertensive potential was used capacity ACE inhibition determination method. Total phenolic content fluctuated between 17.6 and 54.1 mg GAE/g for the red grape extracts, and between 81.1 and 234.6 mg GAE/g for the peanut skin extracts. Better results were found for alcoholic extraction. Ethanoic extracts in 5h incubation time were chosen to continue the tests. Values found for antioxidant capacity by ORAC method were between 607±21.2 and 1844±78.4 mg TE/g, with bigger values for peanut skins extracts. Values for ACE inhibition were 16.45% and 37.86% for red grape extracts (100 ?g/mL), and 47.52% and 39.95% for peanut skin extracts (50 ?g/mL). Enzymatic treatment presented a reduction of total phenolic content and antioxidant capacity on peanut skin extracts, and didn’t show alteration for these parameters on red grape extracts. In other hand, bioprocessed red grape extract showed double capacity for ACE inhibition, compared to its control. Found results indicate it’s viable to use these byproducts for obtaining bioactive compounds with antioxidant capacity and anti-hypertensive potential Mestrado Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos Mestre em Alimentos e Nutrição CAPES 001

Orientador: Gilberto de Nucci Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Compostos farmacológicos que liberam óxido nítrico (NO) têm sido utilizados para avaliar o amplo papel do NO na fisiopatologia e terapêutica de diversas doenças. Estudos demonstram que a deficiência de NO está envolvida com a gênese e evolução de diversos estágios de doenças como, por exemplo, a hipertensão. Deste modo, a adição de uma molécula de NO em drogas previamente estudadas vem sendo praticada por diversos pesquisadores na última década. Estes pesquisadores buscam associar as propriedades farmacológicas de cada droga com as atividades proporcionadas pelo NO exógeno. No presente trabalho, comparamos a farmacocinética e a farmacodinâmica do enalapril com as de um nitro-derivado do enalapril (NCX899), em Beagles machos não anestesiados. Os efeitos do enalapril e NCX899 na hipertensão arterial, bradicardia e vasoconstrição periférica induzida pela inibição aguda da síntese de NO em cães anestesiados também foram investigados. Na avaliação farmacocinética, os cães receberam NCX899 (4 µmol/Kg) ou Enalapril (4 µmol/Kg) pela via intravenosa. Em seguida, as concentrações plasmáticas dos analitos e metabólitos foram quantificadas pelo método de cromatografia líquida de alta eficiência, acoplada à espectrometria de massa (LCMS- MS). No grupo NCX899, a área sob a curva (ASC0-24h) foi 29,18 ± 4,72, 229,37 ± 51,32 e 5159,23 ± 514,88 µgh/l para os analitos nitro-enalapril, enalapril e enalaprilato, respectivamente. No grupo Enalapril, a ASC0-24h foi de 704,53 ± 158,86 e 4149,27 ± 847,30 µgh/l para os analitos enalapril e enalaprilato, respectivamente. As análises estatísticas entre os grupos demonstraram uma diferença significativa para o analito enalapril, mas não para o analito enalaprilato, o metabólito ativo. Entretanto, o NCX899 e o Enalapril foram efetivos de maneira semelhante na inibição da atividade da enzima conversora de angiotensina sérica. Em cães anestesiados, a administração intravenosa do inibidor da síntese de NO, o N?-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME; 0,1-10 mg/kg), elevou significativamente a pressão arterial e causou bradicardia. O composto NCX899 atenuou significativamente a hipertensão arterial, bradicardia e vasoconstrição periférica, enquanto o Enalapril não apresentou efeito significativo. Além disso, nossos estudos também demonstraram que o NCX899 pode atuar não só como anti-hipertensivo, mas também auxiliar na inibição da agregação plaquetária. Assim, concluímos que o nitro-derivado do enalapril (NCX899) apresenta uma relação farmacocinética/farmacodinâmica similar ao composto enalapril. No entanto, ao contrário do Enalapril, o NCX899 apresenta um efeito protetor nas alterações cardiovasculares induzidas pela inibição aguda de NO Abstract: Pharmacological compounds that release nitric oxide (NO) have been useful tools for evaluating the broad role of NO in physiopathology and therapeutics of several diseases. Studies show that lack of NO can cause several diseases such as hypertension. Thus, the addition of a NO molecule in drugs previously studied has been reported by some researchers in the last decade. They look for the combination of the pharmacologic properties of each drug, plus exogenous NO properties. This work has compared the pharmacokinetics and pharmacodynamics of enalapril and a NO-releasing enalapril molecule (NCX899) in conscious male Beagles. The effects of both enalapril and NCX899 in the arterial hypertension, bradycardia and peripheral vasoconstriction induced by acute NO inhibition in anesthetized dogs have also been investigated. In the pharmacokinetic evaluation, dogs received either NCX899 (4 µmol/Kg) or Enalapril (4 µmol/Kg) intravenously. Later, the plasma concentrations of the analytes and metabolites were quantified by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS-MS). In the NCX899 group, the area under time-course curve (AUC0-24h) was 29.18 ± 4.72, 229.37 ± 51.32 and 5159.23 ± 514.88 µgh/l for the nitro-enalapril, enalapril and enalaprilat analytes, respectively. In the Enalapril group, the AUC0-24h was 704.53 ± 158.86 and 4149.27 ± 847.30 µgh/l for the enalapril and enalaprilat analytes, respectively. The statistical analysis between both groups showed a significant difference for the enalapril analyte, but not for enalaprilat, the active metabolite. Moreover, NCX899 and Enalapril were equally effective on inhibiting the activity of serum angiotensin-converting enzyme. In anesthetized dogs, intravenous administration of the NO synthase (NOS) inhibitor N?-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME; 0.1-10 mg/kg) significantly elevated arterial blood pressure with concomitant bradycardia. The compound NCX899 significantly attenuated arterial hypertension, bradycardia and peripheral vasoconstriction, whereas Enalapril had no significant effect. In addition, our work showed that NCX899 also has properties of inhibiting the activity of platelets aggregation. In conclusion, our results showed that the NO-releasing derivative of enalapril NCX899 presents a pharmacokinetic / pharmacodynamic relationship similar to the enalapril compound. Moreover, different from Enalapril, NCX899 presented protective effect in the cardiovascular alterations induced by acute NOS inhibition Doutorado Doutor em Farmacologia