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ilustraciones, fotografías, gráficas, tablas En este estudio se presenta la primera transformación de variedades de soya colombiana para conferirle tolerancia a glufosinato de amonio. El cassette empleado contiene únicamente el gen bar con modificación de uso codónico para soya, de modo que la selección de la transformación se realiza con el mismo herbicida. La transformación es mediada por Agrobacterium tumeficiens, se emplea la cepa EHA 105. En el proceso de selección in vitro se usa el componente activo del herbicida, la fosfinotricina, en una concentración de 1 mg/L. Como resultado se individualizaron 31 transformantes primarios potencialmente transgénicos, se evaluaron y 26 dieron resultados PCR positivos para el gen Bar. (Texto tomado de la fuente). This study presents the first transformation of Colombian soybean varieties to confer tolerance to glufosinate ammonium. The cassette used contains only the bar gene with modification of codonic use for soybean, so that the selection of the transformation is made with the same herbicide. The transformation is mediated by Agrobacterium tumefaciens, strain EHA 105 is used. In the in vitro selection process, the active component of the herbicide, phosphinothricin, is used at a concentration of 1 mg / L. As a result, 31 potentially transgenic primary transformants were identified, evaluated and 26 gave positive PCR results for the bar gene. Maestría Magíster en Ciencias Agrarias Genética y fitomejoramiento Ciencias Agronómicas

Los plátanos y bananos son cultivos sensibles al déficit hídrico. Las sequías cada vez más prolongadas sugieren la necesidad de obtener plantas tolerantes a este factor; la selección temprana de estas plantas, comparada con la selección en campo, permite ahorrar tiempo y trabajar con mayores volúmenes de individuos. Para ello es conveniente contar con cultivares patrones cuya respuesta al déficit hídrico in vitro sea favorable. El objetivo del presente trabajo fue determinar la respuesta de cultivares de Musa spp. con diferente composición genómica al estrés hídrico inducido in vitro con polietilenglicol 6000 (PEG-6000). Se estudiaron los cultivares ‘Pelipita’ (ABB), ‘Manzano’ (AAB) y ‘Grande naine’ (AAA). El estrés se indujo con 30 g/L de PEG-6000 en medio de cultivo semisólido de multiplicación. A los 30 días se evaluaron variables indicadoras de estrés morfológicas (altura y número de brotes por explante), fisiológicas (masa fresca y masa seca) y bioquímicas (contenido prolina, peróxido de hidrógeno y malondialdehido). En el cultivar ‘Pelipita’ se afectó solamente la altura de las plantas, mientras que en los demás se afectaron todas las variables excepto la masa seca en el ‘Manzano’. En este último y en el ‘Grande naine’ se incrementó la prolina, el peróxido de hidrógeno y el malondialdehido, lo que evidenció un mayor estrés oxidativo y daño en las membranas celulares. Los cultivares estudiados, pudieran emplearse como controles de tolerancia (‘Pelipita’) y sensibilidad (‘Grande naine’ y ‘Manzano’) en la selección in vitro de plantas tolerantes a la sequía, en futuros programas de mejoramiento genético. Bananas and plantains are crops very sensitive to water deficit. Increasingly prolonged drought condition suggests the need for tolerant plants to this factor. The early selection of these plants in in vitro conditions save time and allow working with large volumes of individuals. This requires having genotypes with favorable response to in vitro water deficit. The aim of this work was to determine the response of Musa spp. cultivars, with different genotype contribution, to in vitro water stress induced by polyethylene glycol 6000 (PEG-6000). Cultivars ‘Pelipita’ (ABB), ‘Manzano’ (AAB) and ‘Grande naine’ (AAA) were cultured in semisolid multiplication medium supplemented with PEG-6000 30 g/L. Different stress indicator traits were evaluated after 30 days (morphological: height and number of shoots per explant; physiological: fresh and dry weight; and biochemical: proline, hydrogen peroxide and malondialdehyde content). As results, osmotic stress affected only plant height in ‘Pelipita’ cultivar. However, in the other cultivars all variables were affected, except dry weight in ‘Manzano’. Moreover cv. ‘Grande naine’ and ‘Manzano’ increased proline, hydrogen peroxide and malondialdehyde content. These results indicate that osmotic pressure could induce oxidative stress and cell membrane damages in these cultivars. The obtained results suggested that these genotypes could be used as a tolerant (‘Pelipita’) and sensitive (‘Grande naine’ and ‘Manzano’) controls in in vitro selection of drought-tolerant plants in future breeding programs.

La mancha negra del nopal; provocada por Pseudocercospora opuntiae es una enfermedad difundida entre los sistemas productivos de nopal. El proceso de patogénesis, comprende un período de incubación de 90 días y el desarrollo de los síntomas puede ocurrir en 25 días. Sin embargo, aún es limitada la información del patosistema de P. opuntiae en Opuntia sps. El presente estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto de productos extracelulares y esporas de P. opuntiae sobre plántulas de nopal en condiciones in vitro. Se evaluó tres genotipos provenientes de embriones cigóticos y dos genotipos de selección a campo caracterizados como tolerante (T) y resistente (R) a P. opuntiae. Se inoculó plántulas de Opuntia in vitro con el extracto extracelular y una suspensión de 108 conidios ml, se evaluó el daño a los 15, 30, 45 y 60 días posterior a la inoculación (dpi). Después de 60 dpi se presentaron los síntomas en explantes inoculados con el hongo puro, mientras los productos de excreción del hongo en medio líquido mostraron capacidad de provocar síntomas similares al inóculo fúngico. Estos resultados demuestran que P. opuntiae infecta explantes de Opuntia bajo condiciones de cultivo in vitro, lo que podría ser una herramienta importante en la selección de genotipos resistentes de Opuntia sps. a la mancha negra. Palabras clave • • The black spot cactus is caused by Pseudocercospora opuntiae a disease spread among production systems. The process of pathogenesis, comprising an incubation period of 90 d. and the development of symptoms can occur in 25 d.; however, is still limited information pathosystem P. opuntiae in Opuntia sps. This study aimed to evaluate the effect of extracellular products and spores of P. opuntiae on cactus pear under in vitro conditions. Three genotypes from zygotic embryos and two genotypes product of field selection which were characterized as tolerant (T) and resistant (R) to P. opuntiae were evaluated. Opuntia in vitro seedlings were inoculated with the extracellular extract and a suspension of 108 conidia m/l, the damage at 15, 30, 45 and 60 d. post-inoculation (dpi) were evaluated. After 60 dpi symptoms occurred in explants inoculated with pure fungus, while the excretion products of the fungus in liquid medium showed ability to induce symptoms similar to fungal inoculum. These results demonstrate that P. opuntiae infected Opuntia explants under in vitro culture conditions, which could be an important tool in the selection of resistant genotypes to black spot in Opuntia sps. Fil: Ochoa, María Judith. Universidad Nacional de Santiago del Estero. Facultad de Agronomía y Agroindustrias. Fil: Rivera López, Luis. Fil: Gómez Leyva, Juan Florencio.

La producción y exportación de ñame se han visto afectadas negativamente en las últimas décadas como consecuencia de la incidencia de antracnosis, la cual se ha manejado con genotipos con algún grado de resistencia, sin alcanzar un manejo eficiente de está. Con el fin de contribuir en el mejoramiento genético del Dioscorea alata se evaluó la respuesta de cultivos embriogénicos de ñame al hongo Colletotrichum gloeosporioides y a su filtrado. Cultivos embriogénicos fueron inducidos a partir de explantes foliares de la variedad “Pico de botella” en presencia de 2,4-D. Las masas proembriogénicas (MPEs) obtenidas fueron multiplicadas y posteriormente expuestas a diferentes concentraciones del filtrado, al igual que establecidas en forma de un cultivo dual entre éstas y una muestra de micelio del hongo. Ambos experimentos evidenciaron un alto grado de susceptibilidad de los tejidos inducidos a la presencia del hongo.

Se estudió la respuesta morfo-fisiológica al estrés osmótico de brotes obtenidos vía organogénica de líneas de maíz LE-13, LE-14, LE-16 y LE- 46, durante tres ciclos de selección in vitro. El estrés osmótico fue inducido con polietilenglicol (PEG-8000) adicionado al medio básico MS (1962). A partir de plántulas in vitro se disecaron secciones de coleóptilo (explante) y se sembraron en medio sólido. Se encontraron diferencias significativas entre las líneas con respecto a: longitud de coleóptilo, altura de plántula y número de hojas. Durante la inducción de organogénesis, se encontró un efecto significativo del genotipo x pH, posición del explante, consistencia del medio y del genotipo x período de subcultivo. En la etapa de multiplicación y alargamiento de brotes el tiempo entre subcultivos (15 d) influyó significativamente en número de explantes con brotes (83 %). Estos brotes desarrollaron mayor altura, número de hojas y peso fresco, en comparación con LE-16 y LE-46. Durante la multiplicación bajo estrés osmótico en medio líquido con PEG durante tres ciclos de selección, se observó un efecto significativo de la interacción genotipo x PEG sobre altura y número de hojas por brote; genotipo x ciclo sobre número de hojas y peso fresco, y PEG x ciclo sobre peso fresco. En el segundo experimento se observó un efecto significativo de las variables antes señaladas, mas el genotipo x PEG sobre los potenciales hídrico, osmótico y ajuste osmótico total y genotipo x PEG x ciclo de selección sobre el contenido total de proteína soluble. Con base en las variables cuantitativas evaluadas, las mejores líneas fueron LE-14 y LE-16 debido a que presentaron mayor ajuste osmótico y características morfo-fisiológicas superiores asociadas con la acumulación de polímeros insolubles y prolina en el tejido del brote. Lo cual muestra que la selección in vitro es viable para elegir los mejores genotipos._______The morpho-physiological response to the osmotic stress of shoots obtained via organogenic of maize lines: LE-13, LE-14, LE-16 and LE- 46, was studied during three cycles of in vitro selection. Osmotic stress was induced with polyethylene glycol (PEG-8000) it was added to basic culture medium MS (1962). From in vitro plantlets sections of coleoptile were dissected (explants) and they were placed in the solid medium. Significant differences between the lines were found by way of: length of coleoptile, height of plantlet and number of leaves. During the organogenesis induction, was a significant effect of genotype x pH, position of the explants, consistency of medium and genotype x period of subculture. In the stage of multiplication and elongation of shoots the time between subcultures (15 d) influenced significantly in number of explants with shoots (83 %). These shoots developed a greater height, number of leaves and fresh weight, in comparison with LE-16 and LE-46. During the multiplication under osmotic stress in liquid medium with PEG through three cycles of selection, a significant effect of the interaction was observed between genotype x PEG on height and number of leaves by shoots; genotype x cycle on number of leaves and fresh weight, and PEG x cycle on fresh weight. In the second experiment a significant effect of the variables before indicated was observed plus genotype x PEG on the water, and osmotic potential, and total osmotic adjustment; genotype x PEG x cycle of selection on the total soluble protein content. Among the quantitative variables evaluated, the best lines were LE-14 and LE-16 because they presented superior morpho-physiological characteristics associated with a greater osmotic adjustment and the insoluble polymer accumulation and proline in the tissue of the shoots. This shows that the in vitro selection is viable to choose the best genotypes.

Allelic diversity is a fundamental requirement for successful plant breeding programs. When gene pool is limited, several mechanisms are available for variability enrichment, for example, obtaining somaclonal variants through in vitro techniques. Somaclonal variation is a natural phenomenon that occurs in the procedures of plant tissue culture, through is possible to recover mutants with or without adaptive advantages. When this phenomenon is used to generate mutants with specific traits, through the use of an agent of artificial selection, the process is called in vitro selection. When looking for generating plant material that is resistant/tolerant to diseases, the agent of choice may be the causative organism, its parts, or its metabolic products, including toxins. Considerations of cost, simplicity and efficiency, make this technique particularly suitable for developing countries. In this paper, we review the scientific basis underpinning this method. Resumen.- La diversidad alélica es un requisito fundamental para el éxito de los programas de fitomejoramiento. En casos en los que la reserva de genes es escasa existen varios mecanismos para aumentarla artificialmente, incluyendo la obtención de variantes somaclonales a través de técnicas de cultivo de tejidos vegetales in vitro. La variación somaclonal es un fenómeno natural que ocurre en los procedimientos de cultivo de tejidos, a través del cual pueden recuperarse mutantes con o sin ventajas adaptativas. Cuando este fenómeno se utiliza para generar mutantes con características prediseñadas, a través del uso de un agente de selección artificial, el proceso se denomina selección in vitro. Si lo que se busca es producir material vegetal con resistencia y/o tolerancia a enfermedades, el agente de selección puede ser el microorganismo etiológico, sus partes, o sus productos metabólicos, incluidas sus toxinas. Consideraciones de costo, sencillez y eficacia, hacen que esta técnica sea particularmente apta para los países en vía de desarrollo. En este documento se revisan los fundamentos científicos que la sustentan.

RESUMEN: Se evaluó el efecto del filtrado crudo del hongo Phytophthora infestans, agente causal del tizón tardío de la papa, y la respuesta de resistencia en callos en dos variedades de papa: Diacol Capiro (susceptible) y Diacol Monserrate (con resistencia de campo). También se estandarizaron en estas dos variedades los procesos de inducción, multiplicación de callos y regeneración de vitroplantas a partir de los mismos. Con la combinación hormonal 2,4D (1 mg/l) y BAP (2 mg/l) se obtuvo la mejor respuesta para inducir la formación de callos a partir de bojas jóvenes en los dos genotipos. La adición de tiosulfato de plata (1.0 mg/l) y ácido cítrico (50 mg/l) fue muy importante para la multiplicación de los callos de la variedad Diacol Capiro, tanto para incrementar el crecimiento como para evitar la muerte del tejido. El porcentaje de regeneración de plantas a partir de los callos fue superior en Diacol Monserrate. Sin embargo, ambas variedades mostraron buena capacidad regenerativa de los calles hasta los cuatro subcultivos evaluados. La dilución del filtrado crudo (concentrado veinte veces en rotoevaporador) que permitió la diferenciación de las variedades por la respuesta de resistencia a nivel de callos fue una parte del filtrado y cinco de medio de cultivo (1:5). Con este trabajo se propone un esquema de selección in vitro a partir de callos para ser usado en programas de mejoramiento para la resistencia a Phytophthora infestans. ABSTRACT: The effect of the culture filtrate of Phytophthora infestans fungus, which is the causal agent of potato late bligth, and the resistance response at the callus level of two potatoes varieties, Diacol Capiro (susceptible) and Diacol Monserrate (field resistance), was evaluated. Whith the hormonal combination 2,4D (1 mg/l) and BAP (2 mg/l) was the best to induce callus formation of young leaves for the two genotypes. To the callus multiplication the addition of silver thiosulfate (1.0 mg/l) and citric acid (50 mg) was very important in Diacol Capiro to increase the growth and to avoid tissue death. The percent of the regeneration was higher in Diacol Monserrate but both varieties showed good regenerative capacity in callus with four subcultures. The dilution of the culture filtrate (twenty times rotoevapored) that best show the differential response resistance was 1:5. With this work we are presenting a scheme of in vitro selection to use in breeding programs to Phytophthora infestans resistance. COL0001084 COL0008227

RESUMEN: En la incidencia de enfermedades sobre el cultivo de la papa, el tizón tardío causado por el hongo Phytophthora infestans es notablemente marcado en el ámbito mundial. En este trabajo se realizaron experimentos dirigidos a evaluar diferentes parámetros para la selección in vitro de plántulas de papa empleando el medio derivado del hongo y a estudiar la posibilidad de usar esta metodología como herramienta para la selección de resistencia en clones nuevos de papa. La cepa del hongo empleada fue caracterizada con los genes de virulencia 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 11. Se evaluaron para este patógeno las condiciones de crecimiento en cultivo líquido (se estudió la composición del medio y el tiempo de incubación) y para el filtrado del hongo la termoestabilidad y la concentración apropiada para inducir la respuesta de resistencia. El efecto fitotóxico del filtrado del hongo se determinó mediante el método de inmersión de raíces de vitroplantas de las variedades Diacol Monserrate y Diacol Capiro, reportadas como resistente y susceptible, respectivamente. De acuerdo con los resultados el mejor crecimiento del hongo se alcanzó con el medio MS modificado según Dieter (1986), a los veinte días de cultivo, 21 "C y oscuridad constante. Se corroboró además el carácter termoestable del medio derivado y se encontró que la dilución adecuada pura la selección de las vitroplantas fue 47 ml/100 ml del cultivo filtrado concentrado veinte veces, la cual permitió elaborar una escala de evaluación de acuerdo con las afecciones en las variedades de papa estudiadas. ABSTRACT: In the incidence of disease on the potato crop, the late blight caused by the fungus Phytophthora infestans is notably marked in the world. In this work we carried out experiments to evaluate the parameters for the in vitro selection of potato seedlings using the culture filtrate of the pathogen and it was evaluated to study the possibility of using this methodology as a tool to the selection of resistant in new clones of potato. The strain of the fungus with 1, 2, 3,4,6,7,8,9,11 genes of virulence were characterized. For this pathogen we evaluated the conditions of growing in liquid culture (we studied the composition of the medium and incubation time) and for the culture filtrate we analyzed the thermostability and adequate concentration to induce response of resistance. The fitotoxic effect of the culture filtrate was determined using roots immersion method from vitroplants of two varieties of potatoes. the Diacol Capire which is reported susceptible and Diacol Monserrate which is resistant. According to the result the best fungi growth was reached with MS medium modified by Dieter (1986), at the 20th day after culture, under 21 °C and constant darkness. We ascertained the thermostable character in the culture filtrate and it was found that the best dilution for the selection was 47 mi/100 ml of the culture filtrate concentrated twenty times, which allowed us to elaborate a scale of evaluations according with the affections of the potato varieties that we studied. COL0001084