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Candida species have been considered as important causes of nosocomial fungal infections. Their ability to form biofilms has been related to high mortality rates in patients with candidemia. Due to the capacity to colonize surfaces of catheters and other medical devices, Candida biofilms may play important roles in systemic infections, which are difficult to treat by conventional antifungal agents. Therefore, the discovery of new drugs useful in the prevention and eradication of Candida biofilms is of great interest. Essential oils are excellent sources of bioactive molecules with antifungal and antibiofilm potential. Some species of the genus Vitex have proven antifungal activity against Candida species. However, to this date, there are no reports on the antifungal activity exerted by Vitex gardneriana, which is found mainly in Brazil. This study aimed to evaluate the biotechnological potential of the essential oil from V. gardneriana in inhibiting Candida planktonic and biofilm forms. In order to assess the oil antifungal potential, Candida albicans and C. tropicalis planktonic cells and biofilms were treated with different oil concentrations and its action on cell growth, biomass formation and viability of biofilm-entrapped cells was determined. The essential oil was able in reducing significantly C. albicans (71% to 9%) and C. tropicalis (33% to 3%) planktonic growth. Regarding biofilm mass formed in the presence of the oil, all tested concentrations (2.5% to 0.039%) reduced C. albicans and C. tropicalis biomass. The same effect was not seen on the viability of C. albicans biofilm-entrapped cells, since no reduction was achieved. On the other hand, all tested concentrations reduced C. tropicalis viability. Concerning pre-formed biofilms, C. albicans biomass was reduced in most of the concentrations evaluated, whereas C. tropicalis biomass was reduced at concentrations between 2.5% and 0.625%. For both species, the oil was able in reducing the number of viable cells of pre-formed biofilms in all tested concentrations. To the best of our knowledge, this is the first report describing the V. gardneriana essential oil ability in inhibiting C. albicans and C. tropicalis planktonic and biofilm forms. Thus, the study showed that the oil action affected a major virulence factor of Candida, which can direct the new anti-Candida drugs development. Leveduras do gênero Candida são consideradas as principais causas de infecções fúngicas nosocomiais. Sua capacidade de formar biofilmes é um fator de virulência importante, estando relacionado com as taxas de mortalidade em pacientes com candidemia. Ao colonizar superfícies de cateteres e outros dispositivos médicos, os biofilmes podem causar infecções sistêmicas de difícil tratamento pelos antifúngicos convencionais. Portanto, existe uma grande necessidade da descoberta de novos agentes antifúngicos capazes de prevenir e erradicar biofilmes formados por espécies de Candida. Óleos essenciais são excelentes fontes de compostos bioativos com potencial antifúngico, além de sua comprovada capacidade antibiofilme. Algumas espécies do gênero Vitex têm demonstrado atividade antifúngica contra Candida, contudo não existem relatos sobre a espécie Vitex gardneriana, encontrada no sertão do Nordeste brasileiro. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o potencial biotecnológico do óleo essencial de V. gardneriana quanto sua ação sobre em as formas planctônicas e biofilmes de espécies de Candida relacionadas a infecções. As leveduras foram submetidas a diferentes concentrações do óleo essencial (2,5% a 0,039%) e sua atividade antifúngica avaliada em relação ao crescimento planctônico, formação de biomassa e número de células viáveis dos biofilmes. Os resultados mostram que o óleo essencial foi capaz de reduzir significativamente o crescimento planctônico de C. albicans (71% a 9%) e de C. tropicalis (33% a 3%). Em relação aos biofilmes formados na presença do óleo essencial, todas as concentrações reduziram a biomassa de C. albicans, enquanto a biomassa de C. tropicalis foi inibida nas concentrações de 2,5% a 0,312%. O número de células viáveis de C. albicans não foi reduzido, porém todas as concentrações do óleo reduziram significativamente as unidades formadoras de colônia de C. tropicalis. Quanto aos biofilmes pré-formados, em C. albicans foi observada redução da biomassa na maioria das concentrações testadas, enquanto a biomassa de C. tropicalis foi reduzida nas concentrações 2,5%, 1,25% e 0,625%. O óleo essencial reduziu o número de células viáveis dos biofilmes pré-formados de ambas as espécies em todas as concentrações testadas. Este é o primeiro relato da propriedade do óleo essencial de V. gardneriana de inibir as formas planctônicas e biofilmes de C. albicans e C. tropicalis. Deste modo, o estudo demonstrou que a ação do óleo afetou especialmente um dos principais fatores de virulência de Candida, podendo direcionar o desenvolvimento de novas drogas anti- Candida.