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Huperzia saururus is reported in Argentinean popular medicine as a memory improver. Chemical studies have shown that the main constituents of the species are Lycopodium alkaloids. On the basis of this information, a purified alkaloid extract was obtained by alkaline extraction of the aerial parts. The aim of this work was to investigate the effects of intra-hippocampal administration of the purified alkaloid extract (AE) on memory retention in vivo, using a step down test, in order to correlate with previous results obtained in vitro in an electrophysiological model. The AE administration significantly increased the latency time in comparison to control animals. For treated animals the latency time was 37.61 ± 2.84, 80.94 ± 2.37, and 180.00 ± 5.74 s for 1, 5, and 10 ng/rat, respectively versus 14.89 ± 2.38 s for controls. According to these results there is a good relationship between the ethnopharmacological use and the effects hereby showed. Fil: Vallejo, Mariana Guadalupe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacia. Cátedra de Farmacognosia; Argentina Fil: Ortega, María Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacia. Cátedra de Farmacognosia; Argentina Fil: Cabrera, Jose Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacia. Cátedra de Farmacognosia; Argentina Fil: Carlini, Valeria Paola. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacia. Cátedra de Farmacognosia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina Fil: Rubiales, Susana Elizabeth. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Agnese, Alicia Mariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacia. Cátedra de Farmacognosia; Argentina

Ghrelin is a peptide hormone produced and secreted from the stomach. Hypothalamic injection of the peptide increases food intake but it is not known if the peptide affects other brain regions. We measured several behavioral parameters such as anxiety (elevated plus maze), memory retention (step down test), and food intake after injections of different doses of the peptide in the hippocampus, amygdala, and dorsal raphe nucleus (DRN). The injection of ghrelin in the hippocampus and DRN significantly and dose dependently increased food intake in relation to controls rats, while injections into the amygdala did not affect the food intake. We also show for the first time that ghrelin clearly and dose dependently increases memory retention in the hippocampus, amygdala, and DRN. Moreover, ghrelin at different potencies induced anxiogenesis in these brain structures while the highest dose of 3 nmol/microl was effective in all of them. The comparison of sensitivity of each brain structure indicates a specific role of them for each of the behaviors studied. The results provide new insight in to the anatomical substrate and the functional role of extrahypothalamic ghrelin targets in the CNS.

The present study attempts to determine, if the effect of melanin-concentrating hormone (MCH) upon memory retention is correlated with changes in nitric oxide synthase (NOS) activity and tissue levels of nitric oxide (NO) and cGMP. We used a behavioral experiment using a step-down inhibitory avoidance test, the biochemical determinations of NO and cGMP, and electrophysiological model. Results of behavioral studies (step-down test) showed that MCH administration reverts the amnesic effects induced by N G -nitro- l -arginine ( l -NOArg). Moreover, electrophysiological studies demonstrated that l -NOArg did not block the potentiation induced by the peptide. Hippocampal NO and cGMP levels increased after MCH injection.

Ghrelin is a peptide found in the hypothalamus and stomach that stimulates food intake and whose circulating concentrations are affected by nutritional state. Very little is known about other central behavioral effects of ghrelin, and thus, we investigated the effects of ghrelin on anxiety and memory retention. The peptide was injected intracerebroventricularly in rats and we performed open-field, plus-maze, and step-down tests (inhibitory avoidance). The administration of ghrelin increased freezing in the open field and decreased the number of entries into the open spaces and the time spent on the open arms in the plus-maze, indicating an anxiogenic effect. Moreover, the peptide increased in a dose-dependent manner the latency time in the step-down test. A rapid and prolonged increase in food intake was also observed. Our results indicate that ghrelin induces anxiogenesis in rats. Moreover, we show for the first time that ghrelin increases memory retention, suggesting that the peptide may influence processes in the hippocampus.

The interaction between the neuropeptide alpha-MSH and the acetylcholinergic system as reflected by changes in cAMP and inositol 1-3-5 triphosphate(IP(3))production was investigated in an in vitro model of striatal slices. The possible involvement of D(1) receptors in cholinergic and alpha-MSH- stimulated cAMP and IP(3) production in slices of rat striatum was also examined, because it has been demonstrated that acetylcholinergic drugs induce endogenous dopamine release in the striatum. alpha-MSH, pilocarpine(PL) and the selective muscarinic M1 agonist McN-A-343 increased cAMP and IP(3) striatal levels, effects blocked by the D(1) antagonist SCH-23390, except for the effects of alpha-MSH on IP(3). The muscarinic M(2) antagonist gallamine (GL) brought about an increase in cAMP levels, an effect blocked by SCH-23390. The M(1) antagonist pirenzepine (Pz) induced a decrease both in cAMP and IP(3) content, and the nicotinic antagonist di-hydro-beta-eritroidine(DBE) only diminished cAMP production. When alpha-MSH and cholinergic agents were simultaneously added, cAMP and IP(3) levels were modified with respect to the values reached when these agents were added alone. An interaction between the acetylcholinergic system and alpha-MSH through M(1) and nicotinic receptors was also observed. These results suggest that the intracellular signaling pathways related to cAMP and IP(3) production gated by alpha-MSH and these cholinergic receptors are probably related. alpha-MSH striatum cAMP IP(3) muscarinic and nicotinic receptors an in vitro model.

The purpose of the present study was to evaluate the possible effect of melanin-concentrating hormone (MCH) on learning and memory by using the one-trial step-down inhibitory avoidance test in rats. The peptide was infused into hippocampus, amygdala, and entorhinal cortex. MCH caused retrograde facilitation when given at 0 or 4 h post-training into hippocampus, but only at 0 h into amygdala. From these results, it seems that MCH modulates memory early after training by acting on both the amygdala and hippocampus and, 4 h after training, on the hippocampus.

It has been shown that MSH administered in the ventral tegmental area (VTA) elicits excessive grooming behavior (EGB) by stimulating an acetylcholinergic pathway. The present work was performed in order to evaluate the possible participation of the GABAergic system in this behavior. VTA injection of GABA antagonist bicuculline stimulated the EGB (55.5 +/- 2.4). In contrast, this effect disappeared if the animals were pretreated with atropine (33.1 +/- 1.5). When bicuculline was injected before a 200 ng/microliters dose of MSH, the EGB increased (87.6 +/- 4.4) in comparison to MSH-treated rats (46.5 +/- 3.2). Our results suggest that GABA, ACh, and MSH interact in the VTA in the induction of EGB; an increase in MSH levels appears to stimulate cholinergic neurons. GABAergic fibers probably modulate the cholinergic discharge at the presynaptic level.

Some behavioral response of rats to spatial novelty after i.c.v. administration of melanin-concentrating hormone (MCH) were evaluated. To this purpose, an open-field test was used, as well as an elevated plus-maze to study the possible anxiolytic effect of this peptide. In the open field, the frequency of exploratory components (locomotion and rearing) increased after MCH administration in comparison to controls. Moreover, in the plus-maze, MCH increased the number of entries into the open arms as well as the time spent on them, whereas no changes in the number of entries onto the closed arms were found. The data indicate that MCH exerts an anxiolytic effect, and suggests a physiological role for this.

We have tried to investigate the possible interaction between the gabaergic system and alpha-MSH at a cellular level in an in vitro model of male albino rats tissue slices containing accumbens and caudate-putamen nuclei. Alpha-MSH alone increases cAMP levels, as does diazepam and phaclofen; however, these effects were blocked by SCH-23390. Both flumazenil and baclofen induced a decrease in the cAMP content. When both alpha-MSH and gabaergic agents were incubated together, cAMP levels were modified. It can be assumed that cAMP production by the neuropeptide and the gabaergic agents could be linked to the activation of dopaminergic D1 receptors. The latter receptors had no prominent effect on the interaction between alpha-MSH and the GABA agonists and antagonists. In summary, our results suggested that alpha-MSH and GABA system could be biochemically linked to produce a cellular effect.

This study was carried out to investigate possible interactions between some glutamatergic agonists and the peptide alpha-MSH upon the cyclic AMP levels. We used an in vitro tissue slice preparation incubated in the presence of different glutamatergic agonists such as N-methyl-D-aspartic acid (NMDA), quisqualic acid (QUIS), kainic acid (KA), and the peptide alpha-MSH together with each agonist. Slices containing caudate putamen and accumbens were chosen according to neurochemical data indicating that the striatum contains a moderate amount of MSH binding sites and also receives glutamatergic innervation. Exposure of these slices to either MSH or to the agonists NMDA or QUIS resulted in an increase in the cAMP levels in relation to controls. Nevertheless, incubation with KA resulted in no changes in the nucleotide levels. The combination of MSH/NMDA induced a reduction of cAMP levels in relation to those obtained with NMDA alone. The combinations of QUIS/MSH or KA/MSH also induced variations in the values of nucleotide in relation to the those obtained with the peptide alone or with the corresponding agonist; these changes were related to the dose of agonist used in each case. The results obtained in these experiments suggest the existence of some interaction between the peptide and the agonist used.

The present work was performed to evaluate the participation of the benzodiacepinic GABA A and GABA B components upon excessive grooming, locomotion, rearing, and stretching/yawning syndrome induced by the intracerebroventricularly α-MSH administration by using GABA A and GABA B agonists. It also aims at evaluating possible relation between changes in cAMP levels in caudate-putamen and accumbens nuclei and the behavioral responses. Injection of diazepam or baclofen reduced the total behavioral scores in a dose-related manner as well as the cAMP levels with respect to the control values (animals treated with artificial cerebrospinal fluid). When diazepam was tested in animals simultaneously injected with α-MSH, behavioral scores decreased with respect to those treated with the peptide alone. Cyclic AMP also decreased after combined treatment (MSH + diazepam).

This study was carried out to explore whether the postulated interaction between alpha-MSH and dopamine (DA) could be explained on the basis of variations in tissular cyclic AMP (cAMP) levels. We used slices containing caudate putamen and accumbens nuclei incubated in the presence of alpha-MSH, DA, or both simultaneously. Exposure of slices to alpha-MSH or DA resulted in an increase in cAMP levels. The simultaneous presence of alpha-MSH and DA resulted in a reduction in the accumulation of the cyclic nucleotide in the tissues as compared with those treated only with DA or alpha-MSH. The effect of alpha-MSH and DA on cAMP efflux was also tested. Incubation of slices with DA led to a marked increase in cAMP efflux; this efflux could be prevented if alpha-MSH was present in the medium. The results suggest that the inhibition by alpha-MSH of DA-induced striatal cAMP accumulation and efflux are a consequence of an interaction between the peptide and the neurotransmitter; DA and alpha-MSH transducing mechanisms could be biochemically linked.

The tricyclic anti-calmodulin drug trifluoperazine (TFP) inhibited growth and motility of epimastigotes of Trypanosoma cruzi, at concentrations lower than 100 microM, and motility and infectivity of the bloodstream trypomastigote form at 200 microM. Electron microscopy of TFP-treated epimastigotes showed that the major effect was at the mitochondrial level, with gross swelling and disorganization. The oligomycin-sensitive, mitochondrial ATPase was completely inhibited by 20 microM TFP, and the same drug concentration caused a 60% decrease in intracellular ATP content. The results suggest that the trypanocidal effect of TFP may be related more to mitochondrial damage than to the well-known anticalmodulin effect of the drug.

The efflux kinetics of 45Ca from rat brain cortex thin slices previously equilibrated with it, was studied in a superfusion system. Two first order kinetic components of efflux from the tissue were found: k2 = 0.0667 min-1, that was unchanged by lowering the temperature from 37 degrees C to 15 degrees, and k3 = 0.0167 min-1 at 37 degrees C, that was reduced to 0.0897 min-1 at 15 degrees C. This suggests that k2 represents efflux from the extracellular space, and k3 that from the cellular compartment. Addition of the mitochondrial uncoupler carbonyl cyanide, m-chlorophenylhydrazone (CCCP) (10(-5)M) increased the efflux fractional rate constant of 45Ca by 35%, while no change in efflux was induced by 10 mM caffeine. Veratridine (10(-5)M) drastically reduced 45Ca efflux if superfusion was with physiological salt solution (150 mM sodium present), but not if 50 mM lithium replaced an equivalent amount of sodium in the superfusion fluid. This lithium-containing solution did not affect 45Ca efflux in the absence of veratridine. These results indicate that mitochondria accumulate only a minor fraction of intracellular 45Ca; that 45Ca possibly turns over very rapidly in the endoplasmic reticulum, and that most of 45Ca is present in a different, non-mitochondrial, non endoplasmic reticular compartment, the nature of which can be only conjectured.

The scope of this study was to investigate possible relationships between He-Neon laser radiation and mitotic and phase indices in meristematic cells of Allium cepa L. bulbs. Our results indicate that mitotic index increased after irradiation depending this modification on the time exposure and the potency of the He-Neon beam. Phase indices were also modified: frequency of prophase increased, while inter- meta- and anaphase decreased: telophases remain unchanged. These variations were significative only when the preparations were irradiated a) with 5 mW for 10 min. or more, b) with 10 mW or c) when the preparations were processed 60 min. after irradiation. These findings could not be attributed to thermal changes. Modifications in RNA or protein synthesis could be responsible.

The present study investigates the effects of Sodium Nitroprusside (SNP) on isometric developed tension (IDT) and tonic component of K+ induced contracture of rat portal vein. The availability of activator calcium for the contraction was modified by changing the ionic composition of the Krebs Ringer bicarbonate medium (KRB) or by using pharmacological agents such as nifedipine or KCl. In control conditions (KRB media) magnitude of IDT was 10.61 +/- 0.56 mN (n = 13). Addition of increasing concentrations of SNP (non cumulative) diminished IDT in a dose related manner. Tonic component of 60 mM KCl evoked contracture decayed 27.04 +/- 10.9% (n = 6) after 10(-4)M SNP incubation. Relaxant effect of SNP was more pronounced in the presence of nifedipine 10(-10)M (72.35 +/- 7.5% of inhibition, n = 6). The sensitivity of the preparation to SNP was strongly reduced in conditions of diminished Ca+2 efflux (slow sodium media = KRB sucrose). Experiments here presented support the hypothesis that the vasodilator effect of SNP could be attributed to an enhanced Ca+2 efflux from the vessel.

The purpose of this study was investigate the effect of depolarizing (high K+, procaine 5mM, high K+Ca2+ free) or hyperpolarizing (K+ free)solutions on the generation and release of prostaglandins (PGs) E and F from the rat uterus. The output of PGs in the bathing solution was measured by bioassay. Results are expressed as ng/g dry weight/min. Under basal conditions in Krebs Ringer Bicarbonate medium, the total output of PGs (E + F) was 12.8 ± 0.9, 20.5 ± 2.5 and 39.1 ± 4.3 ng/dw/ min at 0–60, 60–80, 80–100 min intervals respectively, the major proportion being PGF like material in all cases. When the strips were bathed in depolarizing solution the total output increased significantly PGE being the most augmented. However, when K+ free solution was used there was a marked reduction in prostaglandins release as compared with basal conditions or depolarizing media. These results can not be attributed to osmotic effect, muscular work or neurotransmitter release from nerve endings. A close relationship between the variations in membrane potential and prostaglandins release seems to indicate that both parameters might correlate well.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2019 La degradación del aminoácido esencial L-Triptófano (Trp) se inicia con la actividad de la enzima indoleamina 2,3-dioxigenasa (IDO) y se continúa con la vía de la quinurenina (KP). IDO es altamente expresada en la placenta humana. La depleción local de L-Trp y/o la presencia de metabolitos de la KP, participan en inmunoregulación y pueden ejercer funciones antimicrobianas contra patógenos intracelulares. Se ha descrito que esta vía participa en el control de la replicación de T. cruzi, sin embargo, no ha sido estudiada en el tejido placentario humano infectado por este parásito. En esta tesis nos propusimos analizar la participación de la vía catabólica del L-Trp en la infección de la placenta humana con el agente causal de la transmisión congénita del Chagas. Para ello se utilizó un modelo experimental de infección en explantos de placenta humana a término in vitro y la expresión de proteínas de la vía de la Kyn en placentas a término provenientes de mujeres con enfermedad de Chagas (PEC), como estudio in vivo. Los explantos de vellosidades coriónicas fueron cultivados con 105 tripomastigotes de T. cruzi o sin parásitos (control) en diferentes tiempos de cultivo. Para cada ensayo, se emplearon no menos de 3 placentas distintas. En total se emplearon n = 20 placentas para los ensayos in vitro. A fin de inhibir o estimular la actividad de IDO se utilizaron diferentes compuestos como L-1-Metil-triptófano (L-1MT), Interferón-ɣ (IFN-ɣ) y Trp exógeno. También empleamos metabolitos de la KP como 3-hidroxiquinurenina (3-HK) y ácido 3-hidro antranílico (3-HAA). Se valoraron: Trp por HPLC, producción de Kyn, actividad específica de IDO y carga parasitaria (qPCR) en el explanto después de los diferentes tratamientos. Se utilizó inmunohistoquímica (IHQ) para la determinación de la expresión de proteínas IDO, AhR e IFN-ɣ. El análisis estadístico se realizó mediante ANOVA o prueba “t” de student, utilizando el software GraphPad Prism 7.0. Para evaluar la infección de los explantos se empleó un modelo lineal generalizado para cada una de las variables. Los valores de p < 0.05 fueron considerados significativos. En el transcurso de esta tesis se demostró que a ningún tiempo de cultivo se observarón diferencias significativas tanto en la actividad de IDO como en la expresión relativa de esta enzima entre explantos infectados con respecto a los no infectados. Los niveles de Kyn no se modificaron en explantos infectados respecto al no infectado, sin embargo, las concentraciones de Kyn en explantos infectados se incrementaron significativamente a partir de las 24 h de cultivo. En explantos no infectados se observó 2 un aumento de niveles de Kyn con el tratamiento de IFN-ɣ. La expresión relativa de AhR no se modificó en explantos infectados respecto a no infectados. A los fines de determinar la participación de la actividad de IDO en el control de la infección con este parásito, los explantos placentarios fueron tratados con L-1MT (principal inhibidor específico de la actividad de IDO). En esta tesis demostramos que la inhibición de la actividad de IDO incrementa la carga parasitaria en explantos placentarios, lo que se asoció a una menor concentración de Kyn en el sobrenadante de cultivo. Por otro lado, el tratamiento con IFN-ɣ indujo la actividad de IDO e incrementó las concentraciones de Kyn. El tratamiento con IFN-ɣ en explantos infectados no modificó la carga parasitaria en relación con explanto sin tratamiento, este dato sugiere que las concentraciones basales de IDO encontradas en los explantos placentarios son suficientes para limitar la infección in vitro. Posteriormente se demostró que el agregado de L-Trp exógeno al medio de cultivo aumentó la actividad de la enzima, los niveles de Kyn y colaboró en el control de la replicación parasitaria. Por otro lado, se demostró que los metabolitos de la KP (3-HK y 3-HAA) disminuyeron significativamente la carga parasitaria en los explantos placentarios, sin embargo, solamente 3-HK disminuyó el número de tripomastigotes móviles. Estos datos sugieren que los metabolitos conocidos en conjunto Kyns, podrían estar controlando la replicación del T. cruzi en la placenta. Por último, en PEC a término se observó disminución de la expresión de IDO, AhR e IFN-ɣ mostrando que la vía de la Kyn se modifica en las placentas chagásicas y sugiriendo que podría participar en la infección del tejido placentario por T. cruzi. La disminución de IDO podría tener un efecto semejante al observado en nuestros explantos placentarios tratados con inhibidor de IDO (L-1MT) lo que podría favorecer la infección con T. cruzi en el tejido placentario. Por lo que los resultados obtenidos en esta tesis tanto in vitro como in vivo nos podrían ayudar a comprender mejor cómo la placenta estaría controlando la infección por T. cruzi a través de la vía catabolitca del L-Trp por la generación de metabolistos y de esta manera, colaborar en la prevención de la transmisión congénita de Chagas. 3 Palabras claves: Trypanosoma cruzi, placenta humana, Triptófano, Indoleamina 2,3-dioxigenasa, quinureninas, 3-HK, 3-HAA 2022

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2019 La regulación temporal de procesos celulares en una escala de 24 h probablemente haya surgido como una respuesta adaptativa a los ciclos día/noche y contribuido a la evolución de osciladores circadianos en diversos organismos, desde cianobacterias unicelulares fotosintéticas hasta animales heterótrofos multicelulares. Los ritmos circadianos (del latín, circa cercano, diem día) regulan numerosos procesos fisiológicos, incluyendo ciclos de sueño/vigilia, comportamiento y actividad locomotora, ciclos de temperatura corporal, funciones inmunes, metabólicas y del sistema endocrino y procesos cardiovasculares y digestivos. En consecuencia, los estilos de vida moderna (incremento de la luz en la noche, trabajos rotativos, jet lag, etc.) que alteran el equilibrio entre el sistema circadiano y el ambiente han sido asociados con un incremento en el riesgo de cáncer, desordenes metabólicos y enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares. Durante el trabajo de esta tesis nos planteamos estudiar la regulación temporal del metabolismo en células tumorales T98G provenientes de glioblastoma humano y la implicancia del sistema circadiano en la respuesta a drogas antitumorales. Los resultados evidenciaron oscilaciones metabólicas en el contenido endógeno de glicerofosfolípidos (GFLs) y actividad in vitro de la enzima fosfatidato fosfohidrolasa como también en el estado redox de las células T98G. A su vez, estas células exhibieron una respuesta diferencial en el tiempo al ser tratadas con el quimioterapéutico Bortezomib (inhibidor del proteosoma) con mayor susceptibilidad en una ventana temporal entre las 12 y 24 h luego de la sincronización con dexametasona. Luego de alterar la expresión del activador molecular Bmal1 mediante la tecnología CRISPR/Cas9, observamos una fuerte interacción entre el oscilador metabólico/redox y la maquinaria circadiana transcripcional, dado que los ciclos redox fueron sustancialmente alterados y la respuesta temporal a la susceptibilidad al Bortezomib mostró un adelanto de fase de 6 h respecto a las células T98G control. Por otro lado, la modulación farmacológica del reloj circadiano a través de agonistas sintéticos (SR9009) de los genes reloj represores REV-ERBs evidenció efectos antiproliferativos en células T98G alterando la progresión del ciclo celular y la acumulación de lípidos en células tumorales. Por último, evaluamos la velocidad de crecimiento de tumores provenientes de células A530 derivadas del sistema nervioso periférico o B16 de melanoma murino inyectadas en ratones C57BL/6 bajos distintas condiciones experimentales. Estos resultados evidenciaron una mayor tasa de crecimiento tumoral en aquellos ratones inyectados al comienzo de la noche respecto a los animales inyectados al comienzo del día que provenían de ciclos regulares de luz: oscuridad (LO). Resultados similares fueron observados cuando los animales fueron mantenidos en oscuridad constante (OO) luego de la sincronización a un ciclo regular de LO e inyectados al comienzo del día o noche subjetiva. Página | 2 Otra serie de experimentos evidenciaron una mayor tasa de crecimiento en los tumores provenientes de células A530 que tenían disminuida la expresión de Bmal1 respecto a las células control. En conjunto, los resultados de esta tesis sugieren una fuerte interacción entre el oscilador metabólico/redox y la maquinaria transcripcional, como así también una regulación temporal por parte del reloj circadiano sobre el crecimiento tumoral. 2021-12-31 Wagner, Paula Micaela. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Guido, Mario Eduardo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Daniotti, José Luis. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Pellizas, Claudia Gabriela. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Rubiales de Barioglio, Susana Elizabeth. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacología. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba; Argentina. Pasquini, Juana Maria. Universidad Nacional de Buenos Aires. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; Argentina.

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2016 La cromatina de eucariotas está compuesta por regiones compactas (heterocromáticas) y relajadas (eucromáticas). En la planta modelo Arabidopsis, las regiones compactas están comprendidas principalmente en los centrómeros, en donde se concentran la mayoría de los transposones (TEs) del genoma. Estas regiones están enriquecidas en marcas epigenéticas represoras tales como las derivadas de la metilación del DNA (5mC) e histonas (H3K9me2). Estas estructuras son dinámicas, y se modifican frente a la infección con Pseudomonas syringae pv. tomato (Pst), condición que produce la relajación de la cromatina centromérica y la pérdida de 5mC. Otros estreses bióticos y abióticos desencadenan respuestas similares sobre estas regiones genómicas, pero curiosamente aún no existen estudios que evalúen si la decondensación y demetilación de los centrómeros afecta a la resistencia a los diferentes estrés. En esta Tesis Doctoral abordamos esta incógnita realizando distintos tipos de estudios en plantas de Arabidopsis infectadas con Pst. Como una primera aproximación, analizamos de qué manera la falta de proteínas que regulan la estructura de la cromatina centromérica (mutantes de metilación del DNA e histonas, y de remodelación de cromatina) afecta a la decondensación de cromocentros (CCs) y resistencia a Pst. Los resultados mostraron que todas las mutantes analizadas son más resistentes al patógeno. Posteriormente seleccionamos a la mutante mom1-5 para estudiar en ella el proceso de activación de defensas. Demostramos que esta mutante manifiesta predisposición a la activación de las defensas (“priming”) involucrando un mecanismo que operaría en trans. Evaluamos el comportamiento de las secuencias blanco de MOM1 y otros blancos centroméricos en plantas salvajes infectadas y encontramos que la decondensación de la cromatina centromérica se asocia a la activación y posterior represión de TEs y transgenes allí codificados, requiriendo componentes del silenciamiento génico transcripcional mediado por RNAs pequeños (smRNAs). En paralelo, detectamos un grupo de genes R (genes que codifican a proteínas de resistencia a patógenos) que en plantas salvajes infectadas poseen smRNAs homólogos que no inducirían su silenciamiento. Por el contrario, el silenciamiento sería re-direccionado hacia otras secuencias también homólogas a estos mismos smRNAs pero más abundantes (TEs centroméricos) liberando los minoritarios (R) y permitiendo su expresión. A partir de los resultados obtenidos, proponemos un mecanismo que operaría en trans, por el cual la activación transcripcional de TEs centroméricos podría afectar a la transcripción de genes R en plantas salvajes infectadas. Fil: Cambiagno, Damián Alejandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Alvarez, María Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Fil: Alvarez, María Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Barra, José Luis. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Barra, José Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Rodríguez Galán, María Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Rodríguez Galán, María Cecilia.Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Rubiales de Barioglio, Susana Elizabeth. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacología; Argentina. Fil: Rubiales de Barioglio, Susana Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba; Argentina. Fil: Palatnik, Javier Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentina.

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2016 La recombinación homóloga es un proceso esencial en el metabolismo celular de todos los organismos que permite la reorganización de genes dentro y entre cromosomas, provee una de las mayores vías de reparación de rupturas de ADN doble cadena y asegura la segregación correcta de los cromosomas en la meiosis eucariota. Fil: Borgogno, María Victoria. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina Fil: Argaraña, Carlos Enrique. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Argaraña, Carlos Enrique. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Alvarez, María Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Alvarez, María Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Rubiales de Barioglio, Susana Elizabeth. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacología; Argentina. Fil: Rubiales de Barioglio, Susana Elizabeth.Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba; Argentina. Fil: Echenique, José Ricardo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Echenique, José Ricardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Spampinato, Claudia Patricia. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Bioquímica y Farmacia; Argentina. Fil: Spampinato, Claudia Patricia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos; Argentina.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2016 Este trabajo de tesis tiene como objetivo contribuir al conocimiento de las bases neurobiológicas de los efectos de Gr a nivel del sistema nervioso central, particularmente en hipocampo, investigando el/los posibles mecanismos implicados en la modulación de la retención de la memoria. Estudios previos en nuestro laboratorio, han demostrado que Gr incrementa la retención de la memoria y la ingesta de alimentos cuando se administra localmente en esta estructura. Además, los efectos de Gr sobre la memoria se correlacionan con parámetros tales como el incremento en la actividad de la enzima óxido nítrico sintasa (NOS), con la disponibilidad del neurotransmisor serotonina (5-HT) y con la disminución del umbral para generar potenciación a largo plazo (LTP). Los experimentos de esta tesis incluyen el estudio de los posibles mediadores de la cadena bioquímica de la memoria modulados por Gr, como así también, la participación de neurotransmisores en los efectos del péptido, utilizando paradigmas conductuales, determinaciones bioquímicas y electrofisiológicas, bloqueo farmacológico de receptores y técnicas inmunohistoquímicas, a fin de definir el papel funcional de Gr sobre la memoria. Más específicamente, estudiamos si los efectos de la administración intrahipocampal de Gr sobre la memoria, dependen de la activación de su receptor específico GHS-R1a, de modificaciones en la liberación de glutamato y/o de la expresión de sus receptores, con particular atención en la subunidad NR2B del receptor NMDA. Analizamos también, si Gr modifica la liberación del neurotransmisor 5-HT y si ello se correlaciona con el incremento en la retención de la memoria. Los resultados mostraron que Gr facilita la consolidación de la memoria evaluada en una prueba de evitación inhibitoria (SDT), ejerciendo sus efectos en una ventana temporal determinada, es decir, sólo cuando es infundida inmediatamente y no a los 15 o 60 min después del entrenamiento. Se demostró también, que los efectos de Gr sobre el comportamiento y los parámetros electrofisiológicos desaparecen cuando se infunde en hipocampo un antagonista selectivo del receptor de Gr, D-Lys3-GHRP-6, previo a la infusión del péptido, indicando que los efectos observados son mediados por la activación directa del receptor de Gr (GHS-R1a) en esta estructura. En lo que a liberación de glutamato se refiere, la administración de Gr incrementa la liberación evocada de glutamato a partir de sinaptosomas hipocampales, de una manera dependiente de la dosis. En cuanto al efecto de la administración intrahipocampal de Gr sobre la expresión de la subunidad NR2B del RNMDA, el péptido incrementa el número de células inmunorreactivas-NR2B en las áreas hipocampales CA1 y DG. Con el fin de agregar información funcional sobre la participación de la subunidad NR2B del RNMDA en los efectos de Gr, se estudiaron los efectos comportamentales y electrofisiológicos del péptido en animales previamente infundidos con el antagonista específico de la subunidad NR2B, Ro 25-6981. Cuando Gr se infundió en estos animales, que presentan un deterioro en la retención de la memoria, los valores obtenidos para el tiempo de latencia alcanzan valores similares a los del grupo control, sugiriendo que Gr es capaz de revertir el efecto deletéreo del antagonista sobre la retención de la memoria. Con respecto a los parámetros electrofisiológicos, cuando Gr se infundió en animales pretratados con Ro 25-6981, en los cuales no puede generarse LTP, los valores de umbral para inducir este fenómeno aumentaron en comparación con el grupo Gr, pero fueron significativamente más bajos que los del grupo salina. Resultados previos en el laboratorio, sugirieron que los efectos de Gr dependerían de la disponibilidad de 5-HT. En consecuencia valoramos la liberación de 5-HT a partir de rebanadas de hipocampo, demostrándose que Gr inhibe la liberación de [3H]5-HT. Esta disminución en la liberación de 5-HT se correlaciona con un mayor tiempo de latencia en el SDT (indicativo de retención de la memoria). En conclusión, estos resultados refuerzan la hipótesis de que Gr podría modular los primeros eventos de la consolidación de la memoria en hipocampo, probablemente mediante el aumento de los niveles de [Ca+2]i inducido por la activación de sus receptores GHS-R1a, el incremento en la liberación de glutamato, la activación de los RNMDA con un aumento de la expresión de la subunidad NR2B, estimulando de esta manera diferentes vías moleculares que contribuyen a la facilitación en la retención de la memoria y a la inducción de LTP. Ghersi, Marisa Soledad. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Rubiales de Barioglio, Susana Elizabeth. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacología. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba; Argentina. Pérez, Mariela Fernanda. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacología. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba; Argentina. Hallak, Marta Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Molina, Juan Carlos. Universidad Nacional de Córdoba. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigación Médica Mercedes y Martín Ferreyra (INIMEC); Argentina. Perelló, Mario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular; Argentina.

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2015 Durante la realización de la presente tesis doctoral se estableció un modelo terapéutico preclínico de administración intratumoral (i.t.) de polyadenylic–polyuridylic acid (poli A:U) desnudo, un análogo sintético de ARN doble cadena viral que es reconocido sólo por TLR3 y no por otros receptores citosólicos. Se demostró que el tratamiento terapéutico con poli A:U inhibe el crecimiento tumoral y aumenta la sobrevida en los ratones portadores de tumores de melanoma murino B16 tratados. Asimismo, se demostró que dicho tratamiento puede ser empleado con éxito en similares esquemas terapéuticos en distintos modelos murinos, tanto en el background genético C57BL/6 como en el BALB/c, aportando bases para una terapia alternativa antitumoral. También se estudió la contribución particular que las células del sistema inmune ejercen en nuestro modelo preclínico. Empleando ratones nude e IL-12 p40-/-, se demostró que tanto las células T (y/o NKT) así como la subunidad IL-12p40 (compartida por IL-12 e IL-23) participan en el control del crecimiento tumoral y la sobrevida en los ratones portadores de tumores B16 tratados. Cuando se caracterizó ex vivo el infiltrado inmunológico en tumores de ratones tratados con poli A:U, se encontró un mayor infiltrado de células CD45+, de células dendríticas maduras CD11c+ (CD40+CD86+) productoras de IL-12 y de LiT CD8+, modificándose la relación CD4/CD8 en tumor. Empleando ratones reporteros Foxp3-GFP, se encontró que el tratamiento con poli A:U disminuye el número de células T reguladoras (Treg) en tumor y el porcentaje de células que expresan el marcador LAP, asociado a la producción de TGF-β. Además, se estudió la respuesta antitumoral antígeno específica empleando el modelo preclínico en ratones portadores de tumores B16 que expresan de forma estable ovalbúmina (OVA), mediante la transferencia adoptiva de células T CD4+ y CD8+ provenientes de ratones transgénicos OTI y OTII (que expresan TCR específicos para péptidos de OVA expresados en el contexto del CMH clase I y II respectivamente). Se evidenció que el tratamiento i.t. con poli A:U promueve el reclutamiento y la proliferación de LiT CD8+ antígeno específicos en ganglio drenante y favorece un perfil de respuesta Th1 antígeno específica en tumor. Por otra parte, mediante el empleo de nuestro modelo preclínico en ratones deficientes en el receptor de IFN-I (IFNAR1-/-) se demostró que se requiere la señalización de IFN-I sobre las células huésped para observar la inhibición del crecimiento tumoral y el aumento de la sobrevida generada por el tratamiento con poli A:U. Además, cuando se caracterizó ex vivo el infiltrado leucocitario en tumor en ratones IFNAR1-/-, todas esas diferencias halladas entre los tratamientos en ratones wt se pierden. Para demostrar que el tratamiento con poli A:U induce la producción endógena de IFN-β, se emplearon ratones reporteros que expresan el gen de luciferasa en lugar de la secuencia codificante de IFN-β. El estudio de la cinética de la inducción de IFN-β in vivo demostró que el tratamiento i.t. con poli A:U desnudo es capáz de inducir un pico de dicha citocina luego de 6 h y que este se produce a lo largo de sucesivas dosis. Empleando cepas de ratones reporteros de IFN-β específicos para distintos linajes como células mieloides, dendríticas, LiT y B (LysM+/loxβLuc, CD11c+/loxβLuc, CD4+/loxβLuc y CD19+/loxβLuc respectivamente), se demostró que luego del tratamiento con poli A:U las células de origen mieloide son responsables de producir la totalidad de IFN-β en el microambiente tumoral y que las células CD11c+ también contribuyen en gran parte con dicha inducción. Además, se reprodujo el modelo preclínico en ratones reporteros de IFN-β deficientes en UNC93B1 (molécula involucrada en el tráfico de TLR endosomales) y en IRF3, 5 o 7 (factores de transcripción clave en las vías de señalización de TLR). De esta manera, se demostró que la producción de IFN-β en nuestro modelo preclínico, es dependiente de IRF3 y UNC93B1 pero no de IRF7 e IRF5, confirmando que poli A:U es ligando TLR3 y contribuyendo también con algunos aspectos importantes de su señalización in vivo. Por último, se evaluó el empleo de poli A:U en combinación con un quimioterapéutico convencional como doxorrubicina, con el fin de disminuir su dosis, manteniendo la eficacia del tratamiento y disminuyendo sus efectos adversos. Para ello, se empleó doxorubicina en altas y bajas dosis i.v. en ratones portadores de tumores B16 y se mantuvieron las condiciones y el esquema experimental de administración de poli A:U. La terapia combinada poli A:U y doxorubicina bajas dosis demostró tener un efecto sinérgico favorable, respecto a los demás tratamientos empleados, para el control del crecimiento tumoral y el aumento de la sobrevida de los ratones tratados, reduciendo además los efectos tóxicos secundarios de doxorubicina evaluados mediante niveles ezimáticos y parámetros bioquímicos. La presente tesis revela el rol crucial de la inducción endógena de IFN-β, luego de la administración i.t. de poli A:U, en la modificación del tipo de infiltrado, funcionalidad de células del sistema inmune y en la respuesta inmune antitumoral que promueve el control del crecimiento tumoral y el aumento de la sobrevida de los ratones tratados Fil: Nocera, David Andrés. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Maccioni, Mariana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Maccioni, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Degano, Alicia Laura. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Degano, Alicia Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Maletto, Belkys Angelica. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Maletto, Belkys Angelica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Rubiales de Barioglio, Susana Elizabeth. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacología; Argentina. Fil: Rubiales de Barioglio, Susana Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba; Argentina. Fil: Schillaci, Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina.