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Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Agrobiología. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas Antimicrobial peptides (PA) are essential components in the defense mechanisms of living organisms. They are molecules 12-100 a, cationic and amphipathic with antimicrobial and cytotoxic properties. Additionally, immunomodulatory properties attributed to them, therefore, the PA represent a therapeutic alternative against strains of microorganisms with multidrug resistance. However, it is unknown whether the plant PA (PAPs) have this activity in mammals. Therefore, the aim of this study was to evaluate the immunomodulatory effect of PAPs (chemically synthesized) the Thi2.1 thionine of Arabidopsis thaliana and g-methionine defensin Capsicum chinense on internalization of Staphylococcus aureus in bovine mammary epithelial cells (bMEC). Bovine mammary epithelial cells (bBMEC) infected with Staphylococcus aureus: To do this, a model of host-pathogen interaction is established. For each evaluation BMEC and S. aureus were treated with the PAPs (0.1-10 ?g/ml) independently. Viability assays (trypan blue exclusion, MTT bBMEC and S. aureus growth kinetics, MTT and count CFU) were performed. For bMEC internalization assays were pretreated with PAPs (24 h) prior to infection with S. aureus. On gene expression of the innate immune response (RII) of bMEC (RT-qPCR), secretion of cytokines (ELISA), NO production (NO2 concentration) and: then the effect was evaluated PAPs presence of the TLR2 receptor (flow cytometry). Based on the results, a cytotoxic effect of PAP Thi2.1 and g-thionin on the feasibility of the bMEC and S. aureus was discarded. The Thi2.1 thionin concentrations of 5 and 10 g/ml inhibited the internalization of S. aureus in 20% CMEB. Furthermore, g-thionin defensin showed an inhibitory effect on the more pronounced (40%) at the concentration of 0.1 mg/ml internalization. Los péptidos antimicrobianos (PA) son componentes esenciales en los mecanismos de defensa de los seres vivos. Son moléculas de 12-100 aa, catiónicos y anfipáticos con propiedades antimicrobianas y citotóxicas. Adicionalmente, se les han atribuido propiedades inmunomoduladoras, por lo cual, los PA representan una alternativa terapéutica contra cepas de microorganismos con resistencia a múltiples fármacos. Sin embargo, se desconoce si los PA de plantas (PAPs) tienen esta actividad en los mamíferos. Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto inmunomodulador de los PAPs (sintetizados químicamente) la tionina Thi2.1 de Arabidopsis thaliana y la defensina g-tionina de Capsicum chinense sobre la internalización de Staphylococcus aureus en células de epitelio mamario bovino (CEMB). Para ello, se estableció un modelo de interacción hospedero-patógeno: células de epitelio mamario bovino (CEMB) infectadas con Staphylococcus aureus. Para cada evaluación las CEMB y S. aureus se trataron con los PAPs (0.1-10 ?g/ml) de manera independiente. Se realizaron ensayos de viabilidad (CEMB: MTT y exclusión de azul tripano; S. aureus: cinética de crecimiento, MTT y conteo de UFCs). Para los ensayos de internalización las CEMB se pre-trataron con los PAPs (24 h) previo a la infección con S. aureus. Posteriormente se evaluó el efecto de los PAPs: sobre la expresión de genes de la respuesta inmune innata (RII) de las CEMB (RT-qPCR), la secreción de citocinas (ELISA), la producción de NO (concentración de NO2) y la presencia del receptor TLR2 (citometría de flujo). Con base en los resultados, se descartó un efecto citotóxico de los PAP Thi2.1 y g-tionina sobre la viabilidad de las CEMB y S. aureus. La tionina Thi2.1 a las concentraciones de 5 y 10 g/ml inhibe la internalización de S. aureus en las CMEB en un 20%.

Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Agrobiología. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas Early life stress impacts the development of the central nervous system (CNS) and the immune system and increases the vulnerability to suffer a wide spectrum of diseases in adulthood. Glial cells (microglia and astrocytes) are the CNS immune cells and secrete pro- and anti- inflammatory cytokines. During development these cytokines are trophic factors that contribute to the maturation of neurons. The aim of this work was to analyze the immediate effects of early life stress using Maternal Separation model (MS), on the activation and cellular density of astrocytes and microglia, as well as to examine the expression of cytokines in the hippocampus and their presence in the circulation of male rat pups at postnatal day (PD) 15. MS induces in the hippocampal hilus a pre-activated state (60%) in the microgial cells. The number of astrocytic cells was decreased (20%) in the MS group compared to control group. It was found an increased expression of IL-1b mRNA (~2 fold) in the hippocampus of the MS group compared to control under basal conditions. Stress-induced expression of IL-1b was significantly higher in MS than in control basal group and MS control (~20 fold). The expression of IL-6 mRNA was unchanged in both groups under basal and stress-induced conditions and the expression of TNF-a mRNA was significantly increased in basal conditions (~1.2 fold) and control group augment level expression after an event to stress (~2.5 fold). Circulating IL-6 decreased in basal conditions in the MS group (3.8 pg/ml) and increased after stress in the MS group (7.1 pg/ml). No changes were found in the circulating concentrations of TNF-a in basal or stress-induced conditions in both groups. El estrés durante las primeras etapas de la vida afecta el desarrollo del sistema nervioso central y el sistema inmunológico, produciendo alteraciones fisiológicas y conductuales que perduran hasta la edad adulta. En el SNC las células microgliales y neurogliales combaten infecciones y daños mediante la secreción de citocinas pro- y anti-inflamatorias. Estas proteínas actúan como factores tróficos durante el desarrollo y maduración de las neuronas. El objetivo de este trabajo fue analizar el papel del estrés postnatal con el modelo de la Separación Materna (SM), sobre la activación de las células gliales y la expresión de citocinas pro-inflamatorias en el hipocampo y la secreción de citocinas periféricas circulantes en crías de rata al día postnatal 15 (PN15). La SM indujo de manera significativa (60%) un estado pre-activado de las células microgliales en el hilus del giro dentado (GD) del hipocampo. Mientras que la densidad celular de los astrocitos en el GD del hipocampo disminuyó significativamente en el grupo SM (20%) al PN15. Se presentó un aumento significativo de la expresión basal (2.3 veces) e inducida por un evento de estrés del gen de la citocina pro-inflammatoria IL-1b (20.5 veces) en el hipocampo de animales SM; mientras que el gen del TNF-a incrementó en los niveles basales (1.2 veces) en el grupo SM y aumentó después del evento de estrés en el grupo control (2.5 veces). Con respecto a la IL-6 no se encontraron diferencias significativas. En la citocinas periféricas circulantes de los mismos animales se encontró una concentración basal de IL-6 baja (3.8 pg/ml) y un aumento significativo después del evento de estrés (7.1 pg/ml) en el grupo SM; mientras que para el TNF-a no se observaron diferencias significativas.

Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Agrobiología. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas Bovine mastitis is considered one of the most expensive in dairy cattle diseases. One of the main pathogens causing this disease is Staphylococcus aureus. Some strains are able to survive and internalize in various cell types, including cells of bovine mammary epithelium (BMEC). The short-chain fatty acid (SCFA) have different properties among which its immunomodulatory and anti-inflammatory effects. Recently it demonstrated that SCFA recognize receptors in the membrane of BMEC, which were called GPR43 GPR41 and (G protein-coupled receptor). Studies in our working group showed that various salts of AGCC (propionate, butyrate and hexanoate) reduce the internalization of S. aureus in the CBSS. On this basis, the aim of this study was to evaluate the expression of GPR41 and GPR43 receptors in bovine mammary epithelial cells treated with salts AGCC (acetic, propionic, butyric, hexanoic and octanoic) and infected with S. aureus. In none of the conditions and under no treatment was possible to identify any amplification product for the GPR41 receptor. However, it was found that infection was able to induce the expression of GPR43 receptor. Moreover, the five AGCC evaluated (at various concentrations) induce expression of GPR43 receptor. In most treatments, except hexanoate, SCFA reverse the inductor effect of infection, this in a manner dependent on the concentration. Furthermore, the Bordetella pertussis toxin PTX (200 ng/ml) did not affect bacterial growth or viability of BMEC (4 h). Invasion assays S. aureus in BMEC showed that treatment with 200 ng/ml PTX toxin inhibits endocytosis of the bacteria up to 84%. La mastitis bovina es considerada una de las enfermedades más costosas dentro de la ganadería lechera. Uno de los principales agentes patógenos causantes de esta enfermedad es Staphylococcus aureus. Algunas de las cepas tienen la capacidad de internalizarse y sobrevivir en diversos tipos celulares, entre ellos las células de epitelio mamario bovino (CEMB). Los ácidos grasos de cadena corta (AGCC) cuentan con diversas propiedades entre las que destacan sus efectos inmunorreguladores y antiinflamatorios. Recientemente se demostró que los AGCC reconocen receptores en la membrana de las CEMB, los cuales fueron denominados GPR41 y GPR43 (receptores acoplados a proteínas G). Estudios realizados en nuestro grupo de trabajo demostraron que diversas sales de AGCC (propionato, butirato y hexanoato) reducen la internalización de S. aureus en las CEMB. Partiendo de ello, el objetivo de este trabajo fue evaluar la expresión de los receptores GPR41 y GPR43 en células de epitelio mamario bovino tratadas con sales de AGCC (acético, propiónico, butírico, hexanoico y octanoico) e infectadas con S. aureus. En ninguna de las condiciones y bajo ningún tratamiento se logró identificar algún producto de amplificación para el receptor GPR41. Sin embargo, se observó que la infección fue capaz de inducir la expresión del receptor GPR43. Además, los cinco AGCC evaluados (a diferentes concentraciones) inducen la expresión del receptor GPR43. En la mayoría de los tratamientos, a excepción del hexanoato, los AGCC revierten el efecto inductor de la infección, esto de una manera dependiente de la concentración. Por otro lado, la toxina PTX de Bordetella pertussis (200 ng/ml) no afectó el crecimiento bacteriano ni la viabilidad de las CEMB (4 h). Los ensayos de invasión de S. aureus en las CEMB mostraron que el tratamiento con 200 ng/ml de la toxina PTX inhibe la endocitosis de la bacteria hasta en un 84%.

Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Agrobiología. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas Mastitis (inflammation of the mammary gland) bovine is mainly caused by Staphylococcus aureus, facultative intracellular bacterium, which allows it to evade the immune system of the host. The short-chain fatty acid (SCFA) possess anti-inflammatory and immunoregulatory properties. It has been demonstrated that in primary cultures of bovine mammary epithelial cells (BMEC) sodium butyrate reduces invasion (~ 50%) of S. aureus and modulates gene expression of the innate immune response. The objective of this study was to determine the effect of propionate, hexanoate and sodium octanoate BMEC invasion by S. aureus and in the regulation of gene expression of inflammatory and antimicrobial response. SCFA salts (0.25 to 10 mM) did not affect bacterial growth (2h). Hexanoate did not affect the viability of the CBSS, while propionate fell slightly to 24 h; however, octanoate (≥5 mM) decreased it to 24 h, this being more evident at 48 h. Invasion assays S. aureus in BMEC showed reduced hexanoate propionate and invasion in a 27-55% and 39-65% respectively. Octanoate induced invasion of 0.0625 to 0.5 mM; however, he inhibited from 0.75 to 3 mm. There was no relationship between the production of nitric oxide and bacterial invasion. The analysis of gene expression showed that octanoate propionate and, in conjunction with infection, stimulated the expression of tracheal antimicrobial peptide (TAP) and decreased to BNBD5 (β-defensin). Hexanoate inhibited expression of both genes during infection. The three AGCC inhibited mRNA expression of tumor necrosis factor (TNF-α). La mastitis (inflamación de la glándula mamaria) bovina es causada principalmente por Staphylococcus aureus, bacteria facultativa intracelular, que le permite evadir el sistema inmune del hospedero. Los ácidos grasos de cadena corta (AGCC) poseen propiedades antiinflamatorias e inmunorreguladoras. Se ha demostrado que en cultivos primarios de células epiteliales mamarias bovinas (CEMB) el butirato de sodio reduce la invasión (~50%) de S. aureus y modula la expresión de genes de la respuesta inmune innata. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto del propionato, hexanoato y octanoato de sodio en la invasión de CEMB por S. aureus y en la regulación de la expresión de genes de la respuesta inflamatoria y antimicrobiana. Las sales de los AGCC (0.25-10 mM) no afectaron el crecimiento bacteriano (2 h). El hexanoato no afectó la viabilidad de las CEMB, mientras que el propionato la disminuyó ligeramente a las 24 h; sin embargo, el octanoato (≥5 mM) la disminuyó a las 24 h, siendo esto más evidente a las 48 h. Los ensayos de invasión de S. aureus en las CEMB mostraron que el propionato y hexanoato redujeron la invasión en un 27-55 % y 39-65 %, respectivamente. El octanoato indujo la invasión a 0.0625-0.5 mM; sin embargo, a 0.75-3 mM la inhibió. No hubo relación entre la producción de óxido nítrico y la invasión bacteriana. El análisis de la expresión de genes mostró que el propionato y el octanoato, en conjunto con la infección, estimularon la expresión del péptido antimicrobiano traqueal (TAP) y disminuyeron la de BNBD5 (β-defensina). El hexanoato inhibió la expresión de ambos genes durante la infección. Los tres AGCC inhibieron la expresión del ARNm del factor de necrosis tumoral (TNF-α).

Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. Maestría en Ciencias en Biología Experimental Persina, an ecetogenin with cytotoxic properties, isolated from avocado leaves and fruits, which is reported to be present in a single variety of Creole avocado (P. americana Mill. Var. Guatemalensis) and in several avocado cultivars among which Hass and El Fuerte, its presence in Mexican Creole avocado (P. americana Mill. var. drymifolia) has not been reported, since it has been widely used in traditional medicine in our country since pre-Hispanic times. To determine if Mexican Creole avocado has persina and if there is a phenological variation in its content, 2:1 v/v chloroform-methanol extracts of three genotypes were made. The extracts were resuspended in hexane to be analyzed in Gas Chromatophraphy coupled to Mass Spectrometry, where the presence of persine was detected, through the interpretation of its mass spectrum, which appears in your retention time of 17.1 min in the chromatograms. La persina, una ecetogenina con propiedades citotóxicas, aislada de hojas y frutos de aguacate, la cual se reporta su presencia en una sola variedad de aguacate criollo (P. americana Mill. var. guatemalensis) y en varios cultivares de aguacate entre los que destacan el Hass y el Fuerte, no ha sido reportada su presencia en el aguacate criollo mexicano (P. americana Mill. var. drymifolia), siendo que este ha sido ampliamente utilizado en la medicina tradicional en nuestro país desde la época prehispánica. Para determinar si el aguacate criollo mexicano tiene persina y si existe una variación fenológica en su contenido, se elaboraron extractos cloroformo-metanolicos 2:1 v/v, de tres genotipos. Los extractos se resupendieron en hexano para ser analizados en Cromatofrafia de Gases acoplada a Especttrometria de Masas, donde se detectó la presencia de persina, mediante la interpretación de su espectro de masas, la cual aparece en tu tiempo de retención de 17.1 min en los cromatogramas.

Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Agrobiología. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas Bovine mastitis is considered one of the most important diseases in dairy farming worldwide. This condition is characterized by an inflammatory response of the mammary gland of multifactorial origin, mainly caused by bacterial infections. Staphylococcus aureus is the prevalent isolates pathogen most often in cases of mastitis (> 70%), it has the characteristic of being a facultative intracellular pathogen, invading epithelial cells by a mechanism of endocytosis. In a previous study it showed that the bovine prolactin (bPRL, 5 ng / ml) stimulates endocytosis of S. aureus (ATCC 27543) by bovine mammary epithelial cells (CBSS), and together with the infection, regulates elements of the response innate immune in CBSS. The expression of these elements depends on the activation of the transcription factor NF-kB, and has recently been shown to activate NF-kB bPRL factor in bovine mammary epithelium regulating the expression of proinflammatory cytokines. However, activation of this transcription factor is regulated by the PRL during the infectious process with S. aureus is itself known. Based on the above, the objective of this study was to determine the regulation of signaling pathway NF-kB during endocytosis of S. aureus in bovine mammary epithelial cells stimulated with bPRL. The results showed that the bPRL induces activation of NF-kB in the CBSS. While S. aureus inhibits nuclear translocation of this factor, even in bPRL (5 ng / ml), which promotes the endocytosis of the bacteria. Regarding the regulation of expression of elements of the innate immune response, the data showed that bPRL (5 ng / ml) induces the expression of mRNA of TNF-a, TAP, iNOS, besides NO production in the CBSS. La mastitis bovina es considerada una de las enfermedades de mayor relevancia en la ganadería lechera a nivel mundial. Esta patología se caracteriza por una respuesta inflamatoria de la glándula mamaria de origen multifactorial, ocasionada principalmente por infecciones bacterianas. Staphylococcus aureus es el patógeno prevalente que se aísla con mayor frecuencia en casos de mastitis (> 70%), éste posee la característica de ser un patógeno facultativo intracelular, invadiendo a las células epiteliales por un mecanismo de endocitosis. En un trabajo previo se demostró que la prolactina bovina (bPRL, 5 ng/ml) estimula la endocitosis de S. aureus (ATCC 27543) por células epiteliales mamarias bovinas (CEMB), y en conjunto con la infección, regula elementos de la respuesta inmune innata en las CEMB. La expresión de estos elementos depende de la activación del factor transcripcional NF-kB, y recientemente se ha demostrado que la bPRL activa al factor NF-kB en el epitelio mamario bovino regulando la expresión de citocinas proinflamatorias. Sin embargo, se desconoce sí la activación de este factor de transcripción es regulado por la PRL durante el proceso infeccioso con S. aureus. Con base en lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue determinar la regulación de la vía de señalización de NF-kB durante la endocitosis de S. aureus en células de epitelio mamario bovino estimuladas con bPRL. Los resultados mostraron que la bPRL induce la activación de NF-kB en las CEMB. Mientras que S. aureus inhibe la translocación nuclear de este factor, aún en presencia de bPRL (5 ng/ml), lo cual favorece la endocitosis de la bacteria. Con respecto a la regulación de la expresión de elementos de la respuesta inmune innata, los datos mostraron que la bPRL (5 ng/ml) induce la expresión de los mRNA de TNF-a, TAP, iNOS, además de la producción de NO en las CEMB.

Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Agrobiología. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas Antimicrobial peptides (PA) are widely distributed in the five kingdoms, its function is to protect living beings against pathogenic organisms. The development of biotechnology has allowed explore the effect of PA on animal pathogens using alternative systems for heterologous expression. Previous reports in the laboratory have shown that the use of bovine endothelium is an appropriate expression pattern PA plant. We assessed the antimicrobial capacity of the g-thionine of Capsicum chinense expressed by bovine endothelial cells, demonstrating its activity on the fungus Candida albicans and the tumor cell line HeLa (Anaya-Lopez et al., 2006a) and activity antimicrobial Thi2.1 of thionine Arabidopsis thaliana also expressed by endothelial cells, which is active against Gram-positive pathogenic bacteria, such as Staphylococcus aureus various cases of bovine mastitis (Ochoa-Zarzosa et al., 2008a), Gram negative pathogenic bacteria such as Escherichia coli, enteropathogenic (responsible for diarrhea in humans) against fungi such as C. albicans and to human tumor cells (Loeza-Angeles et al., 2008). In this sense, the use of PA represents a new strategy for treating infectious diseases, as an alternative to the indiscriminate use of antibiotics and consequently the selection of resistant to them (Brogden, 2005) strains. Recently it has been reported that PA as puroindolines wheat, magainin-2 frog and buforin frog, have antibacterial ability against intracellular pathogens (Takeshima et al., 2003; Capparelli et al., 2007; Imura et al., 2008). Los péptidos antimicrobianos (PA) están ampliamente distribuidos en los cinco reinos, su función es proteger a los seres vivos contra organismos patógenos. El desarrollo de la Biotecnología ha permitido explorar el efecto de los PA sobre microorganismos patógenos de animales empleando sistemas alternativos heterólogos para su expresión. Reportes previos en el laboratorio han mostrado que el empleo del endotelio bovino es un modelo adecuado de expresión de PA de plantas. Se ha evaluado la capacidad antimicrobiana de la g-tionina de Capsicum chinense, expresada por las células endoteliales bovinas, demostrándose su actividad sobre el hongo Candida albicans y la línea tumoral HeLa (Anaya-López et al., 2006a), así como la actividad antimicrobiana de la tionina Thi2.1 de Arabidopsis thaliana expresada también por células endoteliales, la cual presenta actividad contra bacterias patógenas Gram positivas, como lo son diversos aislamientos de Staphylococcus aureus de casos de mastitis bovina (Ochoa-Zarzosa et al., 2008a), bacterias patógenas Gram negativas como Escherichia coli enteropatogénica (responsables de diarreas en humanos), contra hongos como C. albicans y hacia células tumorales de humano (Loeza-Ángeles et al., 2008). En este sentido, el empleo de los PA representa una nueva estrategia de tratamiento de las enfermedades infecciosas, como alternativa al uso indiscriminado de antibióticos y en consecuencia a la selección de cepas resistentes a los mismos (Brogden, 2005). Recientemente se ha reportado que los PA como las puroindolinas del trigo, la magainina-2 de rana y la buforina de sapo, tienen capacidad antibacteriana en contra de patógenos intracelulares (Takeshima et al., 2003; Capparelli et al., 2007; Imura et al., 2008).

Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Instituto de Investigaciones sobre los Recursos Naturales. Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Doctorado en Ciencias Biológicas Endothelial cells have a key role in the inflammatory response. Different approaches in vitro have demonstrated that endothelial cells can be invaded by many microorganisms, such as Staphylococcus aureus. In this work we evaluated the effect of the pro- inflammatory cytokines TNF-α (2.5 ng/ml) and IL-1β (20 ng/ml) on the S. aureus phagocytosis and intracellular survival in bovine endothelial cells (BEC). Simultaneously, we performed assays with S. epidermidis with the aim to compare the BEC response toward a pathogen bacterium versus an opportunistic-pathogen bacterium. BEC were able to phagocytize both S. aureus and S. epidermidis, although with a different pattern. The BEC treatment with TNF-α or IL-1β increased S. aureus phagocytosis, but decreased that of S. epidermidis. These cytokines activate signaling pathways such as those that involve NF-κB, JNK, and p38. Therefore the participation of each of these molecules in S. aureus and S. epidermidis phagocytosis was evaluated. S. aureus phagocytosis is associated with the activity state of NF-κB whereas S. epidermidis phagocytosis is associated with the basal activity of JNK and p38. Interestingly, we found that S. aureus activated the nuclear translocation of NF-κB. It is known that the protein A (SpA) of S. aureus binds to TNFR1 and activates NF-κB in airway epithelial cells. The treatment of CEB with SpA decreased their phagocytic capacity, although this behavior was reversible because the phagocytic capacity of BEC was recovered when BEC were cultured for a period of 2 and 6 h without additional treatment. The recovery of the phagocytic capacity was improved by treatment of BEC with TNF-α or IL-1β after a culture period of 2 h. BEC were also able to kill intracellular staphylococci. Las células endoteliales juegan un papel clave en la respuesta inflamatoria. Estudios in vitro han demostrado que las células endoteliales pueden ser invadidas por diferentes microorganismos patógenos, entre ellos Staphylococcus aureus. La infección de la glándula mamaria bovina por esta bacteria, induce la expresión de citocinas pro- inflamatorias como el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) y la interleucina 1 beta (IL- 1β), por lo que en este trabajo se evaluó el efecto de estas citocinas sobre la fagocitosis y supervivencia intracelular de S. aureus (bacteria patógena) y Staphylococcus epidermidis (bacteria patógena oportunista) en células endoteliales de bovino (CEB). Las CEB fueron capaces de fagocitar tanto a S. aureus como a S. epidermidis, aunque con un patrón diferente. El tratamiento de las CEB con el TNF-α (2.5 ng/ml) o con la IL-1β (20 ng/ml) indujo un incremento en la fagocitosis de S. aureus y una disminución en la fagocitosis de S. epidermidis. Estas citocinas activan vías de señalización que involucran al factor de transcripción NF-κB, a la cinasa JNK y a la cinasa p38. Por lo tanto, se analizó la participación de cada una de estas moléculas en la fagocitosis de ambas bacterias. La fagocitosis de S. aureus está asociada con la activación de NF-κB, mientras que la fagocitosis de S. epidermidis está asociada con la activación de JNK y de p38. De manera interesante, se encontró que S. aureus activa la translocación de NF-κB al núcleo. Se sabe que la proteína A de S. aureus (SpA) se une al receptor 1 de TNF (TNFR1) y esto activa a NF-κB en células epiteliales de pulmón. El tratamiento de las CEB con SpA disminuyó la capacidad fagocítica de las CEB, aunque de manera reversible, ya que después del tratamiento con SpA y después de un tiempo de incubación sin tratamiento adicional, la capacidad fagocítica de las CEB se recuperó.