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A sepse bacteriana constitui a causa mais frequente de óbitos neonatais, e seu diagnóstico é complexo devido à inexistência de um teste laboratorial definitivo. O presente estudo desenvolveu uma técnica de amplificação quantitativa (qPCR) do gene 16S rDNA de bactérias tanto para o diagnóstico de sepse neonatal, quanto para avaliar se a qPCR é capaz de monitorar o tratamento. Para ser recrutado o RN deveria apresentar ao menos dois sinais/sintomas sugestivos de sepse, e dois parâmetros laboratoriais alterados. Amostras de sangue foram colhidas no tempo zero (suspeita de sepse), 48 horas e sete dias após o início da antibioticoterapia. Foram analisados 73 RN (21 RNT e 52 RNPT) com suspeita de sepse neonatal. A hemocultura foi positiva em 32 RN (43,8% - sepse confirmada) e negativa em 41 (56,2% - sepse clínica), enquanto a qPCR foi positiva em 65 RN (89%) e negativa em oito casos (11%). Dentre os 32 RN com sepse confirmada (11 RNT e 21 RNPT), neutrofilia foi encontrada em 22 (68,75%), CRP elevada em 21 (65,62%), plaquetopenia em 15 (46,87%) e leucopenia em 14 (43,75%). Foram analisadas 200 amostras dos 73 casos suspeitos, considerando os três tempos de coleta, resultando em 36 hemoculturas positivas (18,0%) e 135 qPCR positivas (67,5%). Nas 36 hemoculturas positivas houve 38 isolamentos. Bactérias Gram-positivas foram encontradas em 32 amostras (84,21%) e Gram-negativas em seis (15,78%). Staphylococcus coagulase negativa predominou dentre as Gram-positivas (75,0%). No grupo de 32 RN com sepse confirmada a qPCR foi positiva em 30 (30/32 - 93,7%). Em 14 casos (47%) a qPCR antecipou o diagnóstico de sepse quando comparada à hemocultura e foi positiva no tempo zero em 22 casos (68,75%), enquanto a hemocultura foi positiva em 11. Dos 41 casos de sepse clínica, a qPCR foi positiva em 35 (85,4%); em 26 casos (74,3%) já no tempo zero. O teste de McNemar encontrou discordância entre os resultados das hemoculturas e qPCR (p

Objetivos: Determinar a taxa de prevalência de colonização materna por Estreptococo do grupo B na população de gestantes com idade gestacional de 35 semanas ou mais frequentadoras do pré-natal em dois hospitais (Hospital Universitário Júlio Muller - HUJM e Hospital Beneficente Santa Helena) na cidade de Cuiabá, Mato Grosso. Materiais e Métodos: Entre outubro de 2011 e 2013 foram avaliadas 258 gestantes no HUJM e do Hospital Santa Helena. Após concordarem e assinarem o TCLE, as gestantes de 35 semanas ou mais que não tinham sido submetidas ao exame ginecológico e não estavam em uso de antibióticos e atendiam aos critérios de inclusão, foram submetidas a coleta de swab vaginal e retal conforme protocolo estabelecido. Acondicionado em meio de transporte Stuart e no laboratório cultivado em caldo Granada bifásico IGBL. Após 24 horas, amostras com coloração laranja ou avermelhada foram consideradas positivas, caso contrário, nova leitura com 48 horas de cultivo. Os dados foram submetidos a análise estatística utilizando o EPI-Info da OMS. Resultados: Das 258 amostras 13,95% foram positivas para o EGB com IC (95%) de 9.70% a 18.21%. A avaliação estratificada pela idade gestacional predominou nas gestantes de 36 semanas com 35% de positividade, 10.87% para 37 semanas. E 5.88% para 35 semanas. No trabalho de parto prematuro 33.33% e na amniorrexe prematura 28,57% dos casos eram positivos para o EGB. Os demais parâmetros analisados não mostraram significância estatística. Conclusões: A taxa de prevalência da colonização pelo EGB de uma forma global foi estimada em 13.95%, sendo mais elevada na idade gestacional de 36 semanas com taxa de 35%. Este trabalho deve mudar as políticas públicas de saúde na cidade de Cuiabá Purpose: To determine the prevalence rate of maternal colonization by Group B Streptococcus in the population of pregnant women in the gestational age of 35 or more weeks, attending prenatal care in two hospitals (HUJM - Hospital Universitário Júlio Muller and Hospital Santa Helena), in the city of Cuiabá, Mato Grosso. Materials and methods: Between October 2011 and October 2013, 258 pregnant women were assessed in HUJM and Hospital Santa Helena. After agreeing and signing the FCCT (Free and clarified Consent Term), those pregnant women of 35 weeks or more, who had not undergone gynecological examination, who were not on antibiotics and who also met the inclusion criteria, were subjected to vaginal and rectal swab collection, according to the established protocol. Stowed in Stuart transport medium and cultivated in IGBL biphasic Granada Broth in the laboratory. After 24 hours, samples with orange or reddish colors were considered positive, otherwise, new evaluation with a 48-hour culture was done. Data were submitted to statistical analysis, using OMS\' EPI-Info. The results: From the 258 given samples, 13.21% were positive for EGB, CI (95%) from 9.70% to 18.21%. Evaluation stratified by gestational age was predominant in pregnant women of 36 weeks with 35% positivity rate, 10.87% of pregnant women of 37 weeks and 5.88% of women of 35 weeks. During preterm labor 33.33% and in premature rupture of membranes, 28.57% cases were positive for GBS. Other analyzed parameters showed no significant statistically. Conclusion: The overall prevalence rate of GBS colonization was estimated at 13.95%, being higher in the gestational age of 36 weeks, with a rate of 35%. The present work should change public health policies in the city of Cuiabá

O sistema NADPH oxidase humano é responsável pela geração de reativos intermediários do oxigênio e defeitos neste sistema resultam na Doença Granulomatosa Crônica (DGC). Nesta tese de doutorado, investigamos o efeito do IFN-g sobre eventos pós-transcricionais em pacientes com DGC ligada ao X, ocasionada por defeitos de splicing. Os dados obtidos sugerem que o uso do IFN-g in vitro interfere no processamento da mensagem causando aumento da expressão de transcritos do gene CYBB e NCF1 em células B-EBV de indivíduos sadios e pacientes DGC analisados. Observamos também que o IFN-g dimunui a expressão dos genes THOC4 NONO, SF3A1, SRRM1 e UPF3A e promove aumento de expressão de SRSF10, SNRPA1 e C2 em células B-EBV de paciente X-DGC secundária a defeitos de splicing. Identificamos que o IFN-g e o TNF-α aumentam a expressão das proteínas envolvidas no processo do splicing. Concluímos que o IFN-g aumenta a expressão de genes importantes para uma resposta eficiente do sistema imunológico, incluindo os do sistema NADPH oxidase, além de promover aumento da expressão de genes e de proteínas relacionados ao processo de splicing, que podem estar relacionados aos efeitos benéficos observados no uso do IFN-g em pacientes com DGC ligada ao X, ocasionada por defeitos de splicing. The human phagocyte NADPH oxidase is responsible for the generation of reactive oxygen intermediates and defects in this system result in Chronic Granulomatous Disease (CGD). In this PhD Thesis, we investigated the effect of IFN-g on post-transcriptional events in normal individuals and patients with X-linked CGD, caused by splicing defects. The obtained data suggests that the use of IFN-g in vitro interferes in the message processing causing an increase of expression of CYBB and NCF1 gene transcripts in B-EBV cells of healthy individuals and analyzed CGD patients. We also observed that IFN-g decreases the expression of THOC4, NONO, SF3A1, SRRM1 and UPF3A, and increases the expression of SRSF10, SNRPA1 and C2 genes in cells from X-CGD patients, due to splicing defects. We identified that IFN-g and TNF-α induce expression of proteins involved in the splicing process. We conclude that IFN-g increases the expression of important genes for an effective immune response, including the NADPH oxidase system genes, and promotes augment of gene and protein expression related to the splicing process, which may be related to the beneficial effects related to the use of IFN-g in CGD patient caused by splicing defects.

O rotavírus é a principal causa de diarréia em crianças em todo o mundo. Infecta também adultos, mas não há dados completos sobre a sua incidência nesse grupo nem sobre o papel de anticorpos preexistentes na proteção contra o vírus. O objetivo do trabalho foi avaliar a presença de anticorpos IgA e IgG anti-rotavírus SA-11, por ELISA, em amostras de soro de adultos saudáveis e sua ação neutralizante frente ao vírus, em ensaios de neutralização. Por Immunoblotting foi avaliado o reconhecimento de proteínas virais pelos anticorpos séricos. Observou-se que os títulos das amostras foram muito variáveis, sendo os de IgG superiores aos de IgA. Todas as amostras mostraram-se capazes de neutralizar o vírus em diferentes níveis, porém não foi possível estabelecer uma correlação com os títulos de anticorpos. Foi observado que anticorpos da classe IgG reconhecem mais proteínas virais que os da classe IgA. Este trabalho pode ser considerado mais um passo na elucidação do papel dos anticorpos séricos IgA e IgG anti-rotavírus na infecção em adultos. Rotavirus has been considered the leading cause of diarrhea in children worldwide. The virus also infects adults but there is no conclusive data neither on the incidence of infection on this group nor on the role of pre-existing antibodies. The aim of the work was to evaluate the presence of anti-rotavirus SA-11 IgA and IgG by ELISA in serum samples of healthy adults and the serum neutralizing ability against the virus by neutralization assays. Immunoblotting was used to evaluate viral proteins recognition by serum antibodies. The antibody titers were extremely variable where IgG titers are greater than IgA ones. All samples were able to neutralize the virus in different levels but it was not possible to establish a correlation between antibody titers and neutralization ones. Immunoblotting assays revealed that IgG antibodies recognize more viral proteins than IgA did. This work can be considered a valuable step for elucidating the role of serum anti-rotavirus IgG and IgA antibodies in adults infection.

Atualmente, a coqueluche representa um crescente problema de saúde pública em países desenvolvidos. Embora ainda não existam evidências de um aumento do número de casos de coqueluche no nosso país, não se pode descartar a hipótese de uma futura re-emergência da doença, pois dados epidemiológicos de algumas regiões revelam um aumento da incidência, indicando que provavelmente ocorra uma baixa notificação de novos casos ao Ministério da Saúde. A maioria dos casos ainda ocorre em lactentes menores de seis meses de idade, ou seja, crianças ainda não completamente imunizadas. Diversos trabalhos demonstraram a aquisição de anticorpos IgG reativos com Bordetella pertussis pelo recém-nascido através da passagem transplacentária, mas a partir dos dois meses de vida, observa-se um declínio substancial do título destes anticorpos. Neste caso, outro modo de conferir proteção ao neonato é através da transmissão de anticorpos IgA específicos pelo aleitamento materno, que poderia suprir a falta de anticorpos IgG até que o esquema de vacinação esteja completo. Os objetivos deste trabalho foram analisar a transferência passiva de anticorpos IgG e IgA anti-B. pertussis para o recémnascido a termo e investigar a habilidade destes anticorpos em neutralizar a patogenicidade bacteriana em um modelo experimental in vivo utilizando camundongos desafiados por via intracerebral com B. pertussis viável. Foram coletadas 40 amostras pareadas de sangue materno, de cordão umbilical e de colostro. Foram demonstrados títulos equivalentes de anticorpos IgG anti-B. pertussis entre as amostras de soro materno e de cordão (medianas de 1:225 e 1:265, respectivamente) com taxa de transferência de 118%. Foram observados títulos variáveis de anticorpos IgA específicos nas amostras de colostro materno com mediana de 1:74. O Immunoblotting realizado com extrato bruto de B. pertussis e Pools de soro materno, de soro de cordão e de colostro com alto e baixo título de anticorpos específicos revelou um perfil de reconhecimento idêntico entre os Pools de soro materno e dos respectivos neonatos. Os Pools de colostro apresentaram, em seu perfil de reconhecimento, diferentes intensidades que variaram de acordo com os títulos de anticorpos IgA específicos. No desafio intracerebral com B. pertussis, embora todos os Pools de soro materno, de cordão e de colostro tenham apresentado capacidade significativa de neutralizar a patogenia bacteriana quando comparados ao controle positivo, os Pools com alto título de anticorpos revelaram maior capacidade neutralizante. Os Pools de soro e colostro absorvidos com B. pertussis e, portanto, sem anticorpos IgG e IgA específicos, protegeram 30% dos animais testados e anticorpos IgG purificados, apresentando alto título de anticorpos anti-B. pertussis (1:2.560), protegeram 65% dos camundongos. Nossos dados confirmaram a transferência de anticorpos reativos com B. pertussis para o neonato via placenta e aleitamento materno e sua eficácia na neutralização da patogênese bacteriana, o que pode proteger a criança contra infecções respiratórias causadas por Bordetella pertussis. Pertussis is currently considered an important public health problem in developed countries. Although there is no evidence of an increase in the number of pertussis cases in our country, can not rule out the hypothesis of a future re-emergence of disease, as epidemiological data from some regions show an increase in incidence, indicating that probably there is a low report of new cases to the public health authorities. Most cases still occurs in infants under six months of age, i.e. children not fully immunized. Several works have demonstrated the acquisition of IgG antibodies reactive with Bordetella pertussis by the newborn through placental transfer, but by age of two months it was observed a substantial decay of titers these antibodies. In this case, another way to confer protection the neonate is through the transmission of IgA antibodies via breast-feeding, which could supply the lack of IgG antibodies until the vaccination schedule will be completed. The aims of this work were to analyze the passive transfer of IgG and IgA anti-B. pertussis antibodies to term newborns and to investigate the ability of these antibodies to neutralize the bacterial pathogenicity in an experimental model in vivo using mice intracerebrally challenged with viable B. pertussis. It was collected 40 paired samples of maternal blood, cord umbilical blood and colostrum. Equivalent titers of anti-pertussis IgG antibodies were demonstrated between maternal and cord serum samples (medians of 1:225 and 1:265, respectively) with transfer rate of 118%. It was observed variable specific IgA titers in maternal colostra with a median of 1:74. Immunoblotting performed with B. pertussis crude extract and Pools of maternal serum, cord serum and colostrum with high and low specific antibody titers revealed an identical recognition profile between paired maternal and newborn serum Pools. Colostrum Pools presented, in their recognition profile, different intensities that varied according to specific IgA antibody titers. In the intracerebral challenge with B. pertussis, although all maternal and cord serum and colostrum Pools presented a significant bacterial neutralizing ability when compared with positive control group, Pools with high antibody titers revealed higher neutralizing capacity. Serum and colostrum Pools absorbed with B. pertussis and, thus, without specific IgG and IgA antibodies, protected 30% of the animals tested and purified IgG antibodies, presenting a high anti-pertussis antibody titer (1:2,560), protected 65% of the mice. Our data confirmed the transfer of antibodies reactive with B. pertussis to the neonate via placenta and breast-feeding and their effectiveness in bacterial pathogenesis neutralization, which could protect infants against respiratory infections caused by Bordetella pertussis.

A diarréia por rotavírus tem sido umas das principais causas de mortalidade infantil. Pesquisas, que relatam a presença de IgA no leite e colostro humanos reativos com o rotavírus. Nosso objetivo foi avaliar a presença de anticorpos IgA anti-G3P[2] em amostras de leite e colostro e anti-G9P[8] em amostras de leite pela técnica de ELISA, verificar sua capacidade neutralizante e analisar a reatividade pelo Immunoblotting. Todas as amostras apresentaram anticorpos detectados pelo ELISA e neutralização do vírus G3P[2] e G9P[8]. Não foi observada correlação entre os títulos de ELISA e os neutralizantes para G3P[2], mas para o sorotipo G9P[8] foi possível estabelecer uma correlação significante. As amostras reconheceram frações do antígeno viral no ensaio de Immunoblotting, mas não foi possível estabelecer uma correlação entre altos títulos e alguma fração antigênica específica. Este trabalho fornece subsídios para avaliações das estratégias de vacinação. The rotavirus diarrhea is one of the main causes of infant mortality. Studies have shown the presence of IgA in milk and colostrum reactive with human rotavirus. Our aim was to evaluate the presence of IgA anti-G3P[2] in milk and colostrum samples and anti-G9P[8] in milk ones, evaluate the IgA reactivity by ELISA and evaluate the IgA reactivity by immunoblotting. In addition, this work aimed to verify the neutralizing all titles of the samples. All of them had antibodies reactive with G3P[2] and G9P[8] and showed varied neutralization titles. There was a significant correlation between anti-G9P[8] IgA titers and the neutralizing ones, but the same was not observed for serotype G3P[2]. All samples recognized some viral antigenic fraction in immunoblotting test, but it was not possible establish a correlation between high antibodies levels and some specific antigenic fraction. This approach may be important for studies concerning vaccination strategies.

A imaturidade do sistema imune adaptativo ao nascimento envolve alterações funcionais das células apresentadoras de antígenos. O objetivo foi avaliar a ativação via TLR-4 e resposta de monócitos de sangue de cordão umbilical de recém-nascidos (RN) pré-termo ³34 e ³34 and < 37 weeks (Group 2) and term NB (Group 3). The results show high production of IL-8, TNF-a, IL-1b and IL-6 and a significantly lower production of IL-10 by neonatal monocytes. NF-kB factor presented similar activation among neonates and adults. p38, ERK-1/2 and IRAK-4 molecules were more activated in monocytes of newborns from Group 1 as compared to newborns from Group 3 and adults. The phagocytic ability of monocytes and neutrophils from newborns showed a reduced competence. The H2O2 production was reduced in monocytes and neutrophils only in preterm newborns. The results suggest a functionally distinct neonatal immune profile, revealing an imbalance of the innate immune response, with a lower efficiency in the control of this response, which could lead to a predisposition to sepsis.

O sistema imune neonatal tem sido considerado funcionalmente imaturo e recentes estudos sugerem que a suscetibilidade do neonato às infecções pode ser devido a alterações funcionais de células apresentadoras de antígenos que podem levar a deficiências secundárias nas respostas adaptativas. A ativação das células apresentadoras de antígenos é desencadeada pela estimulação de receptores, como os Toll-like Receptors (TLRs) e alterações na ativação desses receptores podem levar a uma subsequente redução da ativação de proteínas da via de sinalização intracelular e consequente alterações dos níveis das citocinas pró- e anti-inflamatórias, contribuindo assim, para uma resposta imune ineficiente do neonato. O Toll-like receptor 2 (TLR-2) é um receptor essencial para o reconhecimento seletivo de vários antígenos bacterianos e virais, em especial, o peptideoglicano, que compreende cerca de 50% da parede celular de bactérias Grampositivas, como os estafilococos, que são agentes infecciosos que prevalecem nas Unidades de Terapia Intensiva Neonatal. O objetivo deste estudo foi avaliar a ativação e resposta de monócitos de sangue do cordão umbilical de recém-nascidos pré-termo saudáveis < 34 semanas de gestação (Grupo 1), recém-nascidos pré-termo : 34 e < 37 semanas de gestação (Grupo 2) e recém-nascidos a termo (Grupo 3) e de adultos saudáveis, como controles, após a estimulação de TLR-2 ex-vivo com Pam3CSK4. Após a estimulação dos monócitos, foram determinados os níveis de expressão dos marcadores de ativação celular, os níveis das citocinas pró- e anti-inflamatórias e a expressão de moléculas envolvidas na sinalização intracelular. A caracterização das populações leucocitárias, bem como a capacidade fagocítica de Staphylococcus aureus e geração de burst oxidativo por monócitos e neutrófilos foram analisados por Citometria de Fluxo. Os resultados demonstraram que as células dendríticas e monócitos de neonatos expressam TLR-2 em níveis semelhantes aos de adultos. A expressão adequada de TLR-2 sugere um reconhecimento antigênico eficiente que é refletido em uma ativação apropriada das moléculas da cascata de sinalização e uma potente produção de citocinas pró-inflamatórias, apesar da reduzida produção de IL-10. Fagócitos neonatais apresentaram capacidade fagocítica de S. aureus reduzida em relação aos adultos e geração do burst oxidativo semelhante entre os grupos, no entanto neonatos prétermo apresentaram produção de peróxido de hidrogênio deficiente, o que poderia contribuir com uma reduzida morte intracelular deste microrganismo. Em conclusão, o recém-nascido não apresenta uma imaturidade funcional, mas sim, um desequilíbrio em sua resposta imune inata, com uma aparente menor produção de fatores antiinflamatórios, o que pode levar a predisposição à sepse The neonatal immune system has been considered functionally immature and recent studies suggest that susceptibility of the neonate to infections may be due to functional alterations in antigen-presenting cells that can prompt to secondary deficiencies in adaptive responses. The activation of antigen-presenting cells is triggered by stimulation of receptors such as Toll-like receptors (TLRs) and changes in the activation of these receptors may lead to a subsequent reduction in the activation of intracellular signaling pathway proteins and consequent changes in pro- and anti-inflammatory cytokine levels, thus contributing to an inefficient immune response of the neonate. Toll-like Receptor 2 (TLR-2) is an essential receptor for the selective recognition of several bacterial and viral antigens, in particular, peptidoglycan, which comprises about 50% of the Gram-positive bacteria cell wall, such as staphylococci, which are infectious agents that prevail in Neonatal Intensive Care Units. The aim of this study was to evaluate the activation and response of monocytes derived from umbilical cord blood of healthy preterm newborns

A transmissão vertical do HIV-1 da mãe para criança foi significativamente reduzida com o uso de terapias antirretrovirais, resultando um aumento do número de crianças que foram expostas ao vírus. Estudos evidenciam a expressão de receptores Toll-like (TLR) em células trofoblásticas que pode ser uma ferramenta importante para regular a diferenciação e ativação de células do sistema imunológico, orquestrando um ambiente imunorregulador, contribuindo para o sucesso gravidez e proteção do feto. Considerando que as consequências da infecção por HIV-1 no microambiente placentário, na mãe e no recém-nascido (RN) não são bem entendidos, salienta-se a necessidade de investigar estratégias que possam potencializar a resposta imune inata, neste contexto. Com isso, no presente trabalho, foram avaliados as células mononucleares (CMN) do sangue periférico e cordão umbilical (RN) de parturientes infectadas por HIV-1 e parturientes-RN não infectados, a secreção de TNF-a, IL-10 e IFN-a induzida por agonistas de TLRs extracelular (TLR2, TLR4 e TLR5) e agonistas de TLRs intracelulares (TLR3, TLR7, TLR7/8, TLR9). Além disso, como sensor da resposta imune inata foi avaliado o perfil de resposta de células dendríticas mielóides (mDC) e plasmocitóides (pDC), após ativação com ligantes relacionados com resposta antiviral (TLR7, TLR7/8 e TLR9). No microambiente placentário foi verificada a expressão de CD123, TLR8, CD14/CD16 e HLA-G de amostras da decídua e vilo de mães infectadas por HIV-1 e grupo controle. Os resultados mostraram que as CMNs de mães infetadas por HIV-1 e de seus RNs têm um déficit na secreção TNF-a após ativação pelas vias de TLR2, TLR5, TLR3, TLR7, contudo, preservada para estimulação TLR7/TLR8 (composto CL097), principalmente pelas células de recém-nascidos. Além disso, apenas a ativação com CL097 foi eficaz para induzir a secreção IL-10 e IFN-a pelo grupo infectado, tanto na mãe quanto no RN. O CL097 também foi capaz de induzir a expressão de RNAm para o fator regulador de interferon-7 (IRF-7), IFN-a e TNF-a em níveis similares entre os grupos, confirmando o potencial de ativação TLR7/8. A ativação via TLR7/TLR8 foi capaz de controlar o déficit na da produção de TNF-a pelas mDC, mas não reverteu a resposta funcional de IFN-a por pDCs nas mães e RN infectados por HIV-1. No tecido placentário infectado por HIV-1, houve aumento da expressão de TLR8, CD123, e HLA-G. Os achados mostraram a importância da via TLR8 tanto na resposta sistêmica como no microambiente placentário, ressaltando a importância dos ligantes naturais e/ou sintético no papel adjuvante para melhorar a resposta antiviral na interação materno-fetal. Mother-to-child transmission of HIV-1 has been significantly reduced with the use of antiretroviral therapies, resulting an increased number of HIV1-exposed uninfected infants. Studies have been evidenced that expression of Toll-like receptors (TLR) in trophoblast cells may be a relevant tool to regulate the differentiation and activation of immune cells, orchestrating an immunoregulatory environment, contributing to successful pregnancy and fetal protection. Since the consequences of HIV-infection in the immune innate system from placental microenvironment, mother, and newborn are not well understood, emphasize to investigate the strategies to potentiate the innate immune immune response. We evaluated in mononuclear cells (CMN) of peripheral blood and cord blood from HIV-1-infected pregnant and uninfected mother-cord blood the TNF-a, IL-10 and IFN-a secretion induced by agonists of extracellular Toll-like receptor (TLRs) (TLR2, TLR4 and TLR5) and agonists for intracellular TLRs (TLR7, TLR7/8, TLR9). Moreover, as checkpoint of innate immune response we evaluate the myeloid dendritic cells (mDC) and plasmacytoid DC (pDC) responsinevess to TLRs related to antiviral response (TLR7, TLR7/8 e TLR9). Were also evaluated expression of CD123, TLR8, CD14/CD16 and HLA-G of maternal samples of decidua and villi both infected by HIV-1.The results showed that HIV-1 infected mother-cord blood have a deficit in the TNF-a response induced by TLR2, TLR5, TLR3, TLR7 PBMC activation, but preserved for TLR7/8 (CL097) stimulation, mainly by the newborn cells. Moreover, only CL097 activation was efficacious to induce IL-10 and IFN-a secretion by the infected group, in both mother and cord blood cells. Up-regulation of IFN-a secretion level was achieved with CL097 by cord blood from HIV-infected mother compared to control mothers. CL097 stimulation was also able to induce Interferon-regulator factor-7, IFN-a and TNF-a mRNA expression in PBMC at similar levels between groups, confirming the potential of TLR7/8 activation. TLR7/TLR8 activation overcomes the impairment of TNF-a production by mDC, but maintained the dysfunctional type I IFN response by pDCs in HIV-infected pairs. Expression of TLR8, CD123 and HLA-G was increased in placental tissue from infected-mother compare to uninfected control. Our findings highlight the dysfunction of innate immune response in HIV-treated mother-newborn. Adjuvant potential of TLR8, in the systemic response as well as in the placental microenvironment, emphasizes the use of natural and /or synthetic TLR agonists to improve antiviral response at the maternal-fetal interface.

PRADO, K. M. Comparative analysis of the immunoregulatory mechanism generated by indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO) and interferon-gamma (IFN-ɣ) in maternal-placental interface between mothers who received kidney transplants and healthy mothers. 2012. 88 f. Dissertation (master thesis in Sciences in Tissue and Cell Biology) Instituto de Ciencias Biomedicas, Universidade de Sao Paulo, Sao Paulo, 2012. Many mechanisms protect the fetus against maternal immune response. Among them, special attention was given in this study to the catabolism of tryptophan by the enzyme indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO) in patients who received kidney transplants and who make use of immunosuppressive drugs. In the context of pregnancy tolerance, points out the possibility that the immunosuppression induced in pregnant renal transplant recipients compromise the activation of IDO expression and altering the profile of tolerance and gestational contributing to pregnancy complications. In this study we examined the expression of IDO and its activity in different placental compartments of healthy pregnant women and women with renal transplantation undergoing immunosuppressive therapy. IDO and IFN-γ producing cells were immunolocalizated in villous and decidual region in both groups. However, there was changes in cell type involved in this expression in the transplanted pregnant women. Reactivity to IDO is no longer observed in the villi in the syncytiotrophoblast interface region with maternal blood, but remained in other villous components to where the IDO has been associated with antimicrobial mechanisms and control of local blood flow. In the decidual region, the reactivity to IDO was present in some stromal cells and endothelium, but was replaced in the transplanted pregnant by marking predominantly in extravillous cytotrophoblast cells. Quantitatively, the levels of IDO and its activity, as well as their possible regulatory factors NF-kB, IFN-γ and IL-10 were decreased in the villous region. Decidual compartment unlike the enzymatic activity of IDO was increased in pregnant patients transplanted, but not NF-kB, IFN-γ and IL10. From the results obtained in this study, it seems plausible to speculate that the axis of immunoregulation generated by IDO IFN-γ / IL-10 in maternal-fetal interface of pregnant women with renal transplantation responds differently to insults caused by the use of immunosuppressive drugs during pregnancy. Increased levels and activity of IDO in decidual region may indicate an attempt to offset the low levels expressed in the villous region or an independent mechanism of response in the face of immunosuppression that preserves the maternal immune tolerance at the maternal-fetal interface, even in adverse as those faced by pregnant transplanted and immunosuppressed.

A diarréia é um importante problema de saúde pública no mundo inteiro e a Escherichia coli é um dos mais freqüentes microorganismos causadores desta doença. A Escherichia coli enteropatogênica (EPEC), um dos principais agentes etiológicos das diarréias infantis no nosso país, é genética e fenotipicamente relacionada com a E. coli enterohemorrágica (EHEC) que além de provocar diarréia é responsável por complicações como síndrome hemolítica urêmica (HUS) e colite hemorrágica (HC). Embora a EHEC seja considerada emergente pela OMS, no Brasil poucos casos de complicações como HUS e HC foram reportados. O mecanismo de patogenicidade comum entre EPEC e EHEC é conhecido como a lesão \"attaching and effacing\" nos microvilos do enterócito. Esta lesão é mediada por um conjunto de fatores de virulência, dentre eles a intimina. A intimina é uma proteína de membrana externa, responsável pelo íntimo contato da bactéria com o enterócito, possui uma região N-terminal que é altamente conservada e uma região C-terminal que é variável. De acordo com a região variável, existem vários subtipos de intimina, dentre eles as intiminas α β e γ. Uma infecção por EPE-C ou EHE-C induz a uma resposta de anticorpos anti-intimina no soro e no colostro. No presente trabalho, foram determinados os anticorpos contra as regiões variáveis α β e γ e a região conservada em 100 amostras de soro e em 54 colostros de adultos saudáveis da Grande São Paulo. As concentrações de IgG sérico e de IgA secretora foram determinadas por ELISA utilizando como antígeno proteínas purificadas obtidas de bactérias recombinantes de cada intimina e os resultados foram submetidos a análise estatística. Foram também realizadas absorções com as bactérias recombirrantes e ensaios de inibição de adesão. Primeiramente observamos que nossa população apresenta anticorpos séricos e secretores reativos com a região conservada e as regiões variáveis das intiminas α β e γ, e que existe uma correlação positiva entre os, diferentes grupos de dados, mostrando assim uma reatividade cruzada parcial entre os anticorpos anti-intiminas, este fato foi confirmado com as absorções e com os ensaios de adesão. A concentração de anticorpos IgA no colostro é mais alta que IgG no soro e a concentração de anticorpos anti-região conservada da intimina no soro se encontra elevada quando comparada com as outras três determinações. Em ensaio de adesão em células HEp-2, foi verificado que anticorpos anti-região variável inibem a adesão de EPEC 0127:H6 numa porcentagem maior que os anticorpos anti-região conservada. Apresença de anticorpos anti-região variável da intimina γ sugere mais uma vez a possível proteção contra a EHEC. Em conjunto, nossos resultados corroboram com a idéia de que nossa população desenvolve uma imunidade natural resultante da exposição a linhagens de E. Coli ou outras bactérias presentes no ambiente, que confere uma proteção contra. EHEC, mesmo não sendo esta bactéria tão freqüente no nosso meio. Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is a leading cause of infantile diarrhea in developing countries, and has many genetic and antigenic similarittes with enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC). EHEC can cause a variety of uman illnesses ranging from uncomplicated diarrhea to haemorrhagic colitis and haemolytic uremic syndrome. EHEC strains share with EPEC the ability to induce the attaching and effacing lesion (A/E) onto the human enterocyte membrane mediated by virulence factors codified by the patogenicity island LEE, as the type III secretion system, Esps, intimin and Tir. The infection with EPEC and EHEC induces the production of antibodies reactive with these virulence factors. Intimin is an outer membrane protein that mediates intimate attachment in the host cells, upon interaction with its- translocated receptor Tir. This protein shows high conservationin the N-terminal region and variability in the last C-terminal 280 amino acids. Many subtypes of intimins, like α, β and γ, were described according to the variable region. In this work we determined the concentration of IgG antibodies in 100 serum samples and IgA antibodies in 54 colostrum samples reactive with the variable regions α, β and γ intimins and the conserved region in healthy Brazilian adutts, living in São Paulo. The concentrations of seric IgG and secretor IgA anti-intimin antibodies were determined by ELISA with purified proteins obtained from recombinant bacteria expressing the conserved and the variable regions, and then the results were submitted to statistical analysis. Some absorptions and adhesion assays were performed with the aim of investigate cross reactions among the various antibodies. Firstly we observed that our poputation has seric and secretory antibodies reactive with conserved and variable regions of α, β and γ intimins, and there are a positive correlation among these antibodies in serum and colostrum, showing a partial cross reactivity among anti-intimins antibodies. This was confirmed by the absorptions and adhesion assays. IgA antibodies in colostrum were higher than IgG in serum, what could be related with the profective effect of breastfeeding against EPEC infection in infants. The seric antibodies anti-conserved region were higher compared to the other three determinations. The results obtained in the adhesion assays showed that the percentage of inhibition adhesion to EPEC 0127:H6 serotype with anti-variable regions antibodies was higher than anti-conserved regions. The presence of anti-γ variable region suggests the possible protection against EHEC. Taken together, our results suggest that our population develop a natural immunity as a result of the direct contact with E. coli strains or other bacteria present in the environment, which confers protection against EHEC, although it is not frequent in our population.