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A presente dissertação é desenvolvida no âmbito do Mestrado Profissional em Gestão e Avaliação da Educação (PPGP) do Centro de Políticas Públicas e Avaliação da Educação da Universidade Federal de Juiz de Fora (CAEd/UFJF). O caso de gestão estudado discutiu os desafios do processo de implementação do Programa Multicêntrico de PósGraduação em Bioquímica e Biologia Molecular na Universidade Federal de Juiz de Fora campus Governador Valadares (PMBqBM/UFJF-GV). Os objetivos definidos para este estudo foram descrever e analisar os processos de regulamentação e de funcionamento do programa e propor um Plano de Ação Educacional para o fortalecimento do PMBqBM em âmbito geral e no campus GV. Assumimos como hipótese a estruturação das responsabilidades e competências nas instâncias de decisão e no âmbito do funcionamento dos cursos como ação necessária ao fortalecimento do programa, o que compreende a melhoria da capacidade de definir e regulamentar as atribuições dos representantes de cada instância e de aperfeiçoar os sistemas de interação e comunicação entre seus membros. Utilizamos como metodologia o estudo de caso e a pesquisa qualitativa e como instrumentos a análise documental e a realização de entrevistas com roteiro semiestruturado. Os resultados nos mostraram que questões relacionadas à promoção da interação nas instâncias de decisão e de atuação, à efetividade da atividade de nucleação e à definição de responsabilidades sobre a gestão e operacionalização de trâmites acadêmico-administrativos merecem atenção. Esses temas são abordados no Plano de Ação Educacional elaborado com vistas ao fortalecimento do PMBqBM como um todo e no campus GV. The present dissertation was developed on the Professional Master’s Degree in Educational Management and Assessment (PPGP) at the Center for Public Policies and Assessment in Education of the Federal University of Juiz de Fora (CAEd/UFJF). The case study in question discussed the challenges in the process of implementation of the Multicentric Graduate Program in Biochemistry and Molecular Biology at UFJF, Governador Valadares campus (PMBqBM/UFJF-GV). The objectives defined are to describe and analyze the processes of regulating and functioning of the program and to propose an educational action plan to strengthen the PMBqBM as a whole and within the GV campus. We assume as hypothesis the structuring of responsibilities and competences in the decision-making spheres as a necessary course of action to the strengthening of the program. Such conditions comprehend the capacity of defining and regulating the attributions of the representatives of each sphere and the capacity to improve interactional and communicational systems among its members. We have applied the methodology of case study and qualitative research and, as instruments, document analysis and semi structured interviews. The results have shown that the issues related to the promotion of interaction in the instances of decision-making and operationalization of academicadministrative proceedings deserve attention. These themes are dealt with on the education action plan elaborated aiming at the strengthening of the PMBqBM as a whole and within the GV campus.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The role of local factors in follicular selection in mammals is not fully understood. The aim of the present study was to identify local factors, receptors and intracellular signaling pathways involved in bovine dominant follicle selection and subordinate follicles atresia. In the first study, the pattern of mRNA expression and function of FGF10 and its receptor FGFR2b was evaluated during bovine follicle deviation. FGF10 and FGFR2b were significantly more expressed in theca and granulosa cells retrieved from subordinate follicles, respectively. Intrafollicular FGF10 treatment in the larger follicle dose-dependently inhibited follicle growth and significantly reduced estradiol secretion. In granulosa cells, FGF10 treatment decreased CYP19A1 and cyclin D2 mRNA expression whereas FGFR2b tended to be more expressed after treatment. In theca cells, a significant increase in FGF10 expression was observed in FGF10-treated follicles. In a second study, BMPRs, BMP15 and GDF9 expression was evaluated in cows ovariectomized when the size of the largest and second largest follicle did not have a significant difference (D2), had slight difference (D3) or marked difference (D4). At day 2 of follicular wave, it was observed a significant increase in BMPR1A expression whereas BMPR-2 and - 1B tended to be more expressed in future subordinate follicles. At day 3, when dominant and subordinate follicles are reliably identified, BMPR-2 and 1B were more expressed in subordinate follicles. At day 4, BMPR1B (mRNA and protein) was significantly more expressed in granulosa cells from atretic follicles. The increased BMPR1B expression during atresia was confirmed in granulosa cells from follicles induced to atresia with FGF10 or estradiol receptor antagonist treatment. Similar levels of BMP15 and GDF9 proteins were observed in follicular fluid from dominant and subordinate follicles. In a third study, we aimed to identify intracellular signaling pathways differentially activated in granulosa cells during deviation. Phosphorylated MAPK was more abundant in the future dominant follicle, but did not differ between follicles at the expected moment and after follicular deviation. Subordinate follicles phosphorylated STAT3 levels tended to increase at day 3 and were significantly greater at day 4 in comparison to dominant follicles. In conclusion, present results suggest that decreased FGF10 and FGFR2b expression allows dominant follicle growth and differentiation whereas increased FGF10 signaling in the subordinate follicle induces atresia. The patterns of BMPR- 2, -1B and -1A indicate that these receptors play roles during follicle deviation. Phosphorylated MAPK abundance is an early marker of follicle dominance, but is not differentially regulated during and after deviation. The functional status of STAT3 suggests that this pathway is involved in granulosa cell death. O controle local da seleção folicular em mamíferos ainda é pouco compreendido. O objetivo do presente estudo foi identificar fatores locais, receptores e rotas de sinalização envolvidas na seleção do folículo dominante e atresia dos subordinados em bovinos. Em um primeiro estudo, avaliou-se a regulação e função do FGF10 e do seu receptor FGFR2b durante a divergência folicular. A expressão de FGF10 e FGFR2b foi significativamente maior nas células da teca e granulosa, respectivamente, provenientes dos folículos subordinados. A injeção intrafolicular de FGF10 inibiu o crescimento folicular de maneira dose dependente e reduziu significativamente a síntese de estradiol. Nas células da granulosa, a injeção de FGF10 diminuiu a expressão de RNAm de CYP19A1 e ciclina D2, enquanto que uma tendência de aumento da expressão do receptor FGFR2b foi observada. Nas células da teca, um aumento significativo na expressão de FGF10 foi observado nos folículos tratados com FGF10. Em um segundo estudo, o padrão de expressão dos receptores de BMPs e das proteínas BMP15 e GDF9 foram avaliados em vacas ovariectomizadas em diferenes dias em relação ao inicio da onda folicular, comparando os dois maiores folículos antes (dia 2), durante (dia 3) ou após a divergência folícular (dia 4). No dia 2 da onda folicular, foi observada maior expressão do receptor BMPR-1A e tendências a maior expressão dos receptores BMPR-2 e -1B nos futuros folículos subordinados. No dia 3, quando os folículos dominantes e subordinados são identificados, a expressão de BMPR-1B e -2 foi maior nos folículos subordinados. No dia 4, o receptor BMPR1B (RNAm e proteína) foi significativamente mais expresso nas células da granulosa de folículos atrésicos. O aumento da expressão do BMPR1B durante a atresia folicular foi confirmado nas células da granulosa de folículos induzidos à atresia através do tratamento com FGF10 ou inibidor dos receptores de estradiol. A abundância de BMP15 e GDF9 no fluído folicular não diferiu entre folículos dominantes e subordinados. Em um terceiro estudo, buscou-se identificar rotas de sinalização diferentemente ativas nas células da granulosa durante a divergência. Os níveis de MAPK fosforilada foram significativamente superiores nos futuros folículos dominantes (dia 2), mas não diferiram entre os dois maiores folículos durante ou após a divergência. Folículos subordinados apresentaram maiores níveis de STAT3 fosforilada em relação aos seus respectivos dominantes em todos os pares de folículos coletados, sendo observado um aumento significativo em folículos atrésicos coletados no dia 4. Em conclusão, os resultados sugerem que a expressão reduzida de FGF10 e do receptor FGFR2b possibilitam o crescimento e diferenciação do folículo dominante, enquanto que o aumento da sinalização do FGF10 no folículo subordinado está associado com a atresia. O perfil de expressão dos receptores BMPR-2, -1B e -1A indica que os mesmos apresentam funções na regulação da divergência folicular em bovinos. A fosforilação da MAPK é um marcador inicial de dominância folicular, mas não é diferentemente regulada durante e após a divergência, enquanto que o padrão de ativação da STAT3 sugere que essa via está envolvida na morte das células da granulosa.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Angiotensin II (AngII), progesterone (P4) and prostaglandins (PGs) are essential for ovulation of a fertile oocyte. This study sought to understand how these factors are linked together during the ovulatory process. To this end, first we characterized the pattern of expression of genes of interest to the renin-angiotensin system in follicular cells and AngII concentration in the fluid during the periovulatory period. Cows were ovariectomized at various times after GnRH injection to obtain pre (at the time of GnRH treatment) and periovulatory follicles (3, 6, 12, and 24 h after GnRH treatment). Theca and granulosa cells were separated and processed to real time RT-PCR Herein we demonstrated that the gonadotropin surge stimulates the follicular secretion of AngII and theca cells expression of mRNA for AGTR2 receptors. Next, we assessed whether AngII can modulate the secretion of steroids and PGs by follicular cells using in vitro culture of theca and granulosa cells of bovine ovaries from abattoir. In this study we found that AngII in synergism with LH stimulates the synthesis of PGE2 and PGF2α and P4 by granulosa cells. The role of AngII and PGs as mediators of nuclear maturation of oocytes in ruminants induced by gonadotropins had already been demonstrated. However, a similar action performed by P4 is still controversial in cattle. In this work, using in vitro and in vivo models, we evidenced that P4 not only participates in this process, but it is also an intermediate factor between AngII and PGs in the cascade of events. With the present work is possible to conclude that AngII, P4 and PGs are "linked" mediators of the preovulatory gonadotropin surge. These data allowed us to propose a unified model for both, ovulation and the resumption of nuclear maturation of oocytes. In this model the preovulatory gonadotropin surge up regulates the production of AngII and follicular expression of AGTR2 receptors, stimulating the secretion of P4 and the release of PGE2 and PGF2α, culminating with the ovulation of a fertile gamete. A angiotensina II (AngII), progesterona (P4) e prostaglandinas (PGs) são fatores essenciais para que ocorra a ovulação de um oócito fértil. Este trabalho buscou entender se esses fatores interagem durante o processo de ovulação e maturação oocitária. Para tanto, primeiramente caracterizamos a expressão de genes de interesse para o sistema renina angiotensina em células foliculares e a concentração de AngII no fluido folicular durante o período periovulatório. Para tanto, folículos pré-ovulatórios de vacas foram coletados em diversos momentos após a administração intramuscular de GnRH. Após a coleta, o líquido folicular e as células da teca e granulosa foram separadas para realização da técnica de RT-PCR em tempo real. Neste estudo, foi observado que o pico de gonadotrofinas estimula a secreção folicular de AngII e a expressão de RNAm para receptores do tipo AGTR2 nas células da teca. Em seguida, avaliamos se a AngII é capaz de modular a secreção de esteróides e PGs pelas células foliculares. Células foliculares bovinas obtidas a partir de ovários de abatedouro foram cultivadas in vitro na presença de LH, AngII e/ou saralasina. Com este experimento, foi verificado que a AngII em sinergismo com LH estimula a síntese de P4, PGE2 e PGF2α pelas células da granulosa. O papel da AngII e PGs como mediadoras da maturação nuclear de oócitos em ruminantes induzida por gonadotrofinas já havia sido demonstrado. No entanto, uma ação similar realizada pela P4 ainda possuía caráter questionável em bovinos. No presente trabalho, utilizando modelos in vitro e in vivo, foi evidenciado que a P4 não só participa desse processo, mas também é um fator intermediário entre AngII e PGs na cascata de eventos. Ao final deste trabalho foi possível concluir que AngII, P4 e PGs são mediadores conectados da ação do pico pré-ovulatório de gonadotrofinas. Esses dados nos permitem propor um modelo unificado de eventos tanto para a ocorrência da ovulação quanto para a retomada da maturação nuclear do oócito. Neste modelo, o pico pré-ovulatório de gonadotrofinas aumenta a secreção folicular de AngII e a expressão de receptores AGTR2, os quais estimulam a secreção de P4 e por consequência de PGE2 e PGF2α, culminando com a ovulação de um gameta fértil.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The manipulation of oocytes enclosed in follicles Ovarian Pre-Antral, allows increasing the reproductive potential of females from the isolation and cultivation. The follicular viability can be affected negatively correlated with age, malnutrition, exposure to radio or chemotherapy and health conditions. The alternatives are to use these research for development of culture media which provides the maintenance of viability allows the activation and follicular development in vitro, for subsequent fertilization. Physiologically various growth factors are involved in the process of folliculogenesis, many of which have so far not been tested in goats. Among them the Sphingosine 1-phosphate (S1P) and Leukemia Inhibitory Factor (LIF), since, follicular development were obtained with these factors in other species, allowing follicular growth and ant apoptotic effect on ovarian tissue. The aim of this study was to evaluate the addition of different concentrations of S1P and the LIF to culture media separately, evaluating the maintenance of viability, activation and follicular development. Thus, the preantral follicle cultured with S1P in situ LIF for 7 days and follicular development as possible to maintain viability, activation and growth of preantral follicle in vitro. Concluding that the S1P 1 ng/ml LIF and 10ng/ml, were the concentration that the maintenance of viability and follicular activation of in situ and grown in vitro for 7 days improved the viability, activation and preantral follicular growth. A Manipulação de Oócito Incluso em Folículos Ovariano Pré-Antral (MOIFOPA) possibilita o aumento do potencial reprodutivo das fêmeas a partir do isolamento e cultivo de FOPA. A viabilidade folicular pode sofrer influências negativas com a idade, desnutrição, exposição a rádio ou quimioterápicos e condições sanitárias adversas. As alternativas para aproveitamento desses FOPA são pesquisas voltadas para elaboração de meios de cultivos que proporcione o manutenção da viabilidade a possibilite a ativação e o desenvolvimento folicular in vitro, para posterior fertilização. Fisiologicamente vários fatores de crescimento estão envolvidos durante o processo da foliculogênese, muitos dos quais até o momento não foram testados em cabras. Dentre eles, a Esfingosina 1-fosfato (S1P) e o Fator Inibidor da Leucemia (LIF), uma vez que, o desenvolvimento folicular foram obtido com esses fatores em outras espécies, possibilitando crescimento folicular e efeito anti-apoptótico no tecido ovariano. O objetivo desse trabalho foi avaliar a adição de diferentes concentrações de S1P e o do LIF separadamente aos meios de cultivo, avaliando a manutenção da viabilidade, ativação e desenvolvimento folicular. Dessa forma, os FOPA cultivados in situ com S1P e LIF por 7 dias possibilitaram desenvolvimento folicular conforme a manutenção da viabilidade, ativação e crescimento dos FOPA in vitro. Concluindo que a S1P 1ng/ml e o LIF 10ng/ml, foram as concentração que condicionaram a manutenção da viabilidade e a ativação dos FOPA in situ cultivados in vitro por 7 em dias melhor mantiveram a viabilidade, ativação e crescimento folicular.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The aim of this study was to evaluate the effect of fibroblast growth factor 10 (FGF10) on bovine oocyte meiotic resumption in an in vitro oocyte and follicular cells co-culture system. At first, an oil-free culture system able to maintain a stable osmolality of the medium without the negative interference of the oil was established. The maintenance of osmotic equilibrium confirms that fourwell plate with water in the central hole can be a feasible alternative to replace oil for scientific experimentation and embryo culture. The embryo development rate in the alternative system (near 30% blastocyst) was similar to that obtained in the conventional system (33% blastocyst). Afterwards, the role of FGF10 on bovine oocyte meiotic resumption was evaluated in a co-culture of oocytes and follicular cells in the presence of angiotensin II (10-11M AngII). All tested concentrations of FGF10 inhibited the resumption of meiosis induced by AngII (P ≤ 0.05). The highest germinal vesicle breakdown (GVBD) rate was observed when FGF10 was absent (45.3%). At concentrations of 10, 100, and 1000ng mL-1 FGF10, the rates of GVBD were 30.2, 29.6 and 27%, respectively. In a second experiment, oocytes were co-cultured with follicular hemisections to test if FGF10 (100ng mL-1) acts directly on COCs or through follicular cells to inhibit AngII (10-11M)-induced meiotic resumption. The AngII-induced GVBD (62.6%) was inhibited when FGF10 was added to in vitro co-culture system (37.8%; P ≤ 0.05). However, FGF10 did not affect meiotic resumption of COCs cultured without AngII in the presence or absence of follicular cells. The third experiment tested if FGF10 inhibits progesterone-induced meiotic resumption. The addition of FGF10 did not affect the meiotic resumption rate induced by progesterone (41.1% and 41.7% GVBD with and without FGF10, respectively; P ≥ 0.05). However, indomethacin (10μM) blocked (20.1% GVBD; P ≤ 0.05) progesterone positive effect suggesting that this steroid, like AngII, acts through cyclooxygenases pathway to induce meiotic resumption. Results show that FGF10 interacts with follicular cells to inhibit AngII but not progesterone-induced meiotic resumption of bovine oocytes. O presente trabalho teve por objetivo averiguar o papel do fator de crescimento fibroblástico 10 (FGF10) no reinício da meiose de oócitos bovinos, utilizando um modelo in vitro de co-cultivo de oócitos e células foliculares. Em um primeiro estudo, foi estabelecido um sistema de cultivo capaz de manter a osmolalidade dos meios constante na ausência de óleo. A adição de água entre os poços de placas de cultivo foi eficiente na prevenção da evaporação dos meios sendo uma alternativa na experimentação científica e produção in vitro de embriões. Com este sistema, se obteve uma taxa média de 30% de desenvolvimento embrionário, resultado similar ao obtido no sistema convencional (33% blastocistos). Após o estabelecimento do sistema, avaliou-se a participação do FGF10 no reinício da meiose de oócitos bovinos e sua interação com a maturação nuclear induzida por angiotensina II (AngII; 10-11M) e progesterona (100ng mL-1). Todas as concentrações de FGF10 testadas foram eficientes na inibição do reinício da meiose induzido por AngII (P ≤ 0,05). As maiores taxas de rompimento de vesícula germinativa (RVG) foram observadas na ausência de FGF10 (45,3%). Nas concentrações de 10, 100, e 1000ng mL-1 de FGF10, as taxas de RVG foram 30,2, 29,6 e 27%, respectivamente. Após o estabelecimento da dose ideal, foi verificado que a adição de FGF10 (100ng mL-1) ao cultivo de complexos cumulus-oócitos acarretou em diminuição na taxa de reinício da meiose somente na presença de células foliculares e AngII (37,8% e 62,6% de RVG com e sem FGF10, respectivamente; P ≤ 0,05). A partir dos resultados dos experimentos anteriores, o terceiro experimento foi delineado para testar se o FGF10 é capaz de inibir o reinício da divisão meiótica induzido por progesterona. A adição de FGF10 não afetou a taxa de reinício da meiose induzida pela progesterona (41,1% e 41,7% de RVG com e sem FGF10, respectivamente; P ≥ 0,05). Entretanto, a adição de indometacina (10μM) bloqueou (20,1% de RVG; P ≤ 0,05) o efeito positivo da progesterona. Este bloqueio demonstra que a progesterona, assim como já foi demonstrado para AngII, utiliza a via das ciclooxigenases para induzir o reinício da meiose e este evento parece não ser regulado pelo FGF10. Os resultados demonstram que o FGF10 interage com as células foliculares para inibir o reinício da meiose estimulado pela AngII mas não pela progesterona.