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Os autores revisam os estudos que buscam determinantes genéticos para uma boa ou má resposta ao tratamento farmacológico da depressão, incluindo a verificação de diferenças interindividuais nos mecanismos farmacocinéticos - estudos de variantes gênicas das enzimas metabolizadoras das drogas - e farmacodinâmicos - estudos de variantes funcionais dos genes que codificam os sítios envolvidos no mecanismo de ação das drogas. Concluem que o conhecimento acerca da presença de variantes funcionais nos genes das isoformas envolvidas no metabolismo dos antidepressivos como o CYP2D6, ou nos genes codificando seus sítios de ação como a proteína transportadora de serotonina (5-HTT), podem fornecer importantes subsídios para a personalização da escolha de medicações e dosagens utilizadas no tratamento da depressão.The present article reviews the studies on genetic determinants for drug response to the treatment of depression. These investigations assess the individual differences in the pharmacokinetic mechanisms - such as the genetic variants of genes coding for drug-metabolizing enzymes - and in the pharmacodynamics, looking at the genetic variants of genes coding for drug targets. The authors conclude that the knowledge about the functional variants of the genes coding for antidepressant metabolizing enzymes such as CYP2D6, or genes coding for antidepressant targets such as the serotonin transporter protein (5-HTT), could assist in individualizing the selection of medication and dosage for depression treatment.

Este trabajo parte de la constatación del importante incremento de estudios farmacológicos que lleva asociado un estudio farmacogenético sin que exista un conocimiento muy claro de sus consecuencias. Su primer reto es dilucidar si estos estudios tienen mayores implicaciones que las determinaciones de parámetros de rutina. No se puede obviar que la genética genera cierta preocupación debido, entre otros factores, al lenguaje técnico, la desinformación, las simplificaciones que generan los medios de comunicación, y su complejidad. El segundo objetivo es definir qué figura de propiedad tienen los investigadores o las empresas patrocinantes de las muestras biológicas y los datos genéticos en los estudios de farmacogenéticaEste trabalho parte da constatação do importante incremento dos estudos farmacológicos que leva associado um estudo farmacogenético sem que exista um conhecimento muito claro de suas conseqüências. Seu primeiro objetivo é esclarecer se estes estudos tem maiores implicações que as determinações de parâmetros de rotina. Não se pode considerar obvio que a genética gera certa preocupação devido, entre outros fatores, à linguagem técnica, à desinformação, às simplificações geradas pelos meios de comunicação, e sua complexidade. O segundo objetivo é definir que figura de propriedade tem os pesquisadores ou as empresas patrocinadoras das amostras biológicas e os dados genéticos nos estudos de farmacogenéticaThis work starts stating the great increase of pharmacological studies associated with pharmacogenetic studies without clear knowledge of their consequences. The first challenge is to find out whether pharmacogenetic studies have greater implications than the determination of routine parameters. We cannot obviate that genetics engenders special worries due to several factors, such as: technical language, lack of information, media simplifications and complexity. The second goal is to define which property rights researchers or sponsor companies have on biological samples and genetic data in pharmacogenetic studies

RESUMO: A contribuirção dos Portugueses para a divulgação do tabaco no mundo ocorreu no século XVI. As folhas desta planta originária da América foram atribuídas propriedades curativas pelo médico espanhol Nicolas Monardes. Só em meados do século XX foi possível demonstrar a actividade patogénica do tabaco. Desde então, têm-se multi-plicado as evidências da sua nocividade em múltiplas patologias, particularmente cardiovascular e pulmonar. A relativa aceitabilidade social do tabaco em alguns países, como Portugal, e a dependência que lhe está associada limitam a luta antitabágica. Os custos do tabaco, económicos e para a saude, tern levado à formulação de diversas recomendaçães com o objectivo de tratar esta dependência. As grandes oriençãoes destas recomendaçãoes passam pela necessária sensibilização e motivação dos fumadores para a cessação tabágica, e pela administração de meios farmacoterapêuticos eficazes adjuvantes da abstinencia ao tabaco. Este trabalho aborda a problemática da utilização destes fármacos, em particular a terapêutica de substituição da nicotina e a bupropiona, e relem-bra a necessidade de implementar uma política de saúde vocacionada para a prevenção primária.REV PORT PNEUMOL 2002; VIII (2): 151-174 ABSTRACT: In the XVI century the Portuguese have contributed to the introduction of tobacco in the world. The tobacco plant came from America and its therapeutic properties were attributed to the leaves by a Spanish physician. The pathogenic effects of tobacco were shown only in the middle of the XX century. Since then many reports have demonstrated the harmful role of tobacco in several diseases, particularly in cardiovascular and pulmonary areas. The still existing relatively good social acceptability of tobacco in some countries, namely Portugal, and the associated dependence have limited the fight against smoking. The concerns related to the health and economic costs associated to tobacco consumption leaded to the formulation of several guidelines addressing the treatment of tobacco dependence. Such guide-lines are aimed to sensitise and motivate the smokers to the smoking cessation, and to recommend effective medicinal products which may help in the tobacco abstinence. The objective of this paper is to describe and explore the use of these drugs, in particular nicotine replacement therapy and bupropion, and to remind the need to implement a health policy directed to the primary prevention of tobacco consumption.REV PORT PNEUMOL 2002; VIII (2): 151-174 Palavras-chave: Tabaco, dependência da nicotina, mentol, farmacogenética, cessação tabágica, farmacoterapia, recomendações terapêuticas, terapêutica de substituição da nicotina, bupropiona, Key-words: Tobacco smoke, nicotine dependence, menthol, pharmacogenetics, smoking cessation, drug therapy, clinical guidelines, nicotine replacement therapy, bupropion

RESUMO: A contribuição dos Portugueses para a divulgação do tabaco no mundo ocorreu no século XVI. Às folhas desta planta originária da América foram atribuídas propriedades curativas pelo médico espanhol Nicolas Monardes. Só em meados do século XX foi possível demonstrar a actividade patogénica do tabaco. Desde então, têm-se multiplicado as evidências da sua nocividade em múltiplas patologias, particularmente cardiovascular e pulmonar. A relativa aceitabilidade social do tabaco em alguns países, como Portugal, e a dependência que lhe está associada limitam a luta antitabágica. Os custos do tabaco, económicos e para a saúde, têm levado à formulação de diversas recomendações com o objectivo de tratar esta dependência. As grandes orientações destas recomendações passam pela necessária sensibilização e motivação dos fumadores para a cessação tabágica, e pela administração de meios farmacoterapêuticos eficazes adjuvantes da abstinência ao tabaco. Este trabalho aborda a problemática da utilização destes fármacos, em particular a terapêutica de substituição da nicotina e a bupropiona, e relembra a necessidade de implementar uma política de saúde vocacionada para a prevenção primária.REV PORT PNEUMOL 2002; VIII (2): ABSTRACT: In the XVI century the Portuguese have contributed to the introduction of tobacco in the world. The tobacco plant came from America and its therapeutic properties were attributed to the leaves by a Spanish physician. The pathogenic effects of tobacco were shown only in the middle of the XX century. Since then many reports have demonstrated the harmful role of tobacco in several diseases, particularly in cardiovascular and pulmonary areas. The still existing relatively good social acceptability of tobacco in some countries, namely Portugal, and the associated dependence have limited the fight against smoking. The concerns related to the health and economic costs associated to tobacco consumption leaded to the formulation of several guidelines addressing the treatment of tobacco dependence. Such guidelines are aimed to sensitise and motivate the smokers to the smoking cessation, and to recommend effective medicinal products which may help in the tobacco abstinence. The objective of this paper is to describe and explore the use of these drugs, in particular nicotine replacement therapy and bupropion, and to remind the need to implement a health policy directed to the primary prevention of tobacco consumption.REV PORT PNEUMOL 2002; VIII (2): Palavras-chave: Tabaco, dependência da nicotina, mentol, farmacogenética, cessação tabágica, farmacoterapia, recomendações terapêuticas, terapêutica de substituição da nicotina, bupropiona, Key-words: Tobacco smoke, nicotine dependence, menthol, pharmacogenetics, smoking cessation, drug therapy, clinical guidelines, nicotine replacement therapy, bupropion

Actualmente, con el aumento de la disponibilidad de técnicas para la realización de estudios genéticos, han aparecido nuevas áreas del conocimiento como la epigenética y la farmacogenética. Estas nuevas áreas han permitido esclarecer las bases genéticas implicadas en la aparición de las enfermedades que afectan al ser humano. Dada su aplicación global, la psiquiatría no ha sido ajena al alcance de estas nuevas disciplinas, lo cual se refleja en el gran número de estudios realizados a nivel mundial que han relacionado la presencia de variantes genéticas en los individuos con la aparición de trastornos mentales específicos. De la misma forma, otros estudios han evidenciado que la efectividad de los tratamientos farmacológicos empleados en psiquiatría se correlaciona con polimorfismos en las enzimas encargadas de metabolizar dichos medicamentos. Por lo tanto, es importante que los psiquiatras conozcan los aspectos básicos de estas relaciones para obtener mejores resultados en el diagnóstico y tratamiento de los principales trastornos mentales.

Objetivo: Validar las asociaciones, encontradas previamente en tres cohortes de pacientes del Hospital General Universitario Gregorio Marañón, entre los polimorfismos rs1 128503, rs2032582 y rs1045642 del gen ABCB1 con síndrome mano-pie y diarrea en pacientes de cáncer colorrectal tratados con regímenes que contenían capecitabina y 5-Fluorouracilo, respectivamente, y entre los polimorfismos rs2297595 del gen DPYD con nauseas/vómitos, rs11615 ERCC1 y neutropenia, y rs28399433 CYP2A6 y neutropenia en pacientes de cáncer colorrectal tratados con FOLFOX o XELOX en adyuvancia. Método: Se incorporaron al estudio pacientes de cáncer colorrectal tratados con regímenes quimioterápicos que contenían capecitabina (n = 157), 5-fluorouracilo (n = 99) y pacientes tratados en adyuvancia con XELOX o FOLFOX (n = 83). Los pacientes participantes fueron reclutados en el Hospital Universitario Doce de Octubre y en el Hospital General Universitario Gregorio Marañón tras firmar consentimiento informado. Se extrajo ADN a partir de muestras de sangre. Los genotipados se realizaron mediante SNaPshot. Se realizaron tablas de contingencia para analizar las asociaciones entre genotipos y reacciones adversas. Resultados: Ninguna de las asociaciones previamente identificadas fue replicada en la cohorte de validación. Conclusiones: Los estudios farmacogenéticos con un tamaño muestral limitado deben ser validados en cohortes más numerosas, a ser posible en estudios multicéntricos, reduciendo al máximo las variables y nunca deben ser utilizados en clínica sin validar. Objective: To validate the associations previously found in three cohorts of patients from the General University Hospital Gregorio Maranon, between the polymorphisms rs1128503, rs2032582 and rs1045642 of the ABCB1 gene and the hand-foot syndrome and diarrhea in colorectal cancer patients treated with chemotherapy regimes containing Capecitabine and 5-Fluorouracil, respectively, and between the polymorphisms rs2297595 of the DPYD gene and nausea/vomiting, rs11615 of ERCC1 and neutropenia, and rs28399433 CYP2A6 and neutropenia, in colorectal cancer patients treated with FOLFOX or XELOX as adjuvant therapy. Method: Colorectal cancer patients treated with chemotherapy regimes, containing Capecitabine (n = 157), 5-Fluorouracil (n = 99) were included in the study, as well as patients treated with XELOX or FOLFOX (n = 83) as adjuvant therapy. The patients included were recruited from the Doce de Octubre University Hospital and from the Gregorio Maranon General University Hospital, and signed the informed consent form. DNA was obtained from blood samples. Genotyping was carried out with SNaPshot. Contingency tables were created for analyzing the associations between the genotypes and the adverse reactions. Results: None of the associations previously identified was replicated in the validation cohort. Conclusions: Pharmacogenetic studies with a limited sample size must be validated with bigger cohorts, if possible by means of multicentre studies, reducing the variables to the maximum and should never be used in clinical practice without validation.

La diabetes mellitus tipo II (DM II) es una enfermedad que afecta una gran cantidad de individuos. Un medicamento empleado en el tratamiento de los pacientes es la metformina. Este medicamento es transportado al interior de los hepatocitos por un transportador codificado por el gen SLC22A1. Variantes en el gen con actividad reducida pueden disminuir la cantidad de metformina disponible en el hígado y reducir la respuesta terapéutica. Se propuso evaluar diferentes parámetros bioquímicos en relación a la dosis de metformina y la presencia de variantes en el transportador. Se estudiaron 103 pacientes mayores de 18 años con diagnóstico de DM II, tratados con 1700 mg/ día de metformina por más de 6 meses. Se analizaron 5 polimorfismos en el gen SLC22A1, glucemia, HbA1c, función hepática, perfil lipídico y renal. Los niveles de HbA1c y de glucemia fueron más elevados en los pacientes que presentaban los polimorfismos R61C, G401S, M420del y G465R aunque la diferencia fue estadísticamente significativa sólo para la HbA1c en los pacien - tes que presentaban las variantes M420del y G465R ( p =0,0273 y 0,0018, respec tivamente). La presencia de polimorfismos con actividad reducida en el gen SLC22A1 afecta los niveles de glucemia y de HbA1c en pacientes con DM II cuando son tratados con metformina., Fil: Yang, Pablo. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina, Fil: Nicolas, Juan Carlos. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina, Fil: Galván, Cristian Ariel. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina, Fil: Vélez, Pablo. Centro de Excelencia en Productos y Procesos de Córdoba (CEPROCOR); Argentina, Fil: Da Ronco, Luciano. Laboratorio de Análisis Clínicos Especializados (LACE); Argentina, Fil: Díaz, Gustavo Tomás. Centro Médico San Ricardo Pampurri; Argentina, Fil: Beltramo, Dante Miguel. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina, Fil: Soria, Néstor Walter. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina

BACKGROUND: The need for an integrated view of data obtained from high-throughput technologies gave rise to network analyses. These are especially useful to rationalize how external perturbations propagate through the expression of genes. To address this issue in the case of drug resistance, we constructed biological association networks of genes differentially expressed in cell lines resistant to methotrexate (MTX). METHODS: Seven cell lines representative of different types of cancer, including colon cancer (HT29 and Caco2), breast cancer (MCF-7 and MDA-MB-468), pancreatic cancer (MIA PaCa-2), erythroblastic leukemia (K562) and osteosarcoma (Saos-2), were used. The differential expression pattern between sensitive and MTX-resistant cells was determined by whole human genome microarrays and analyzed with the GeneSpring GX software package. Genes deregulated in common between the different cancer cell lines served to generate biological association networks using the Pathway Architect software. RESULTS: Dikkopf homolog-1 (DKK1) is a highly interconnected node in the network generated with genes in common between the two colon cancer cell lines, and functional validations of this target using small interfering RNAs (siRNAs) showed a chemosensitization toward MTX. Members of the UDP-glucuronosyltransferase 1A (UGT1A) family formed a network of genes differentially expressed in the two breast cancer cell lines. siRNA treatment against UGT1A also showed an increase in MTX sensitivity. Eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 1 (EEF1A1) was overexpressed among the pancreatic cancer, leukemia and osteosarcoma cell lines, and siRNA treatment against EEF1A1 produced a chemosensitization toward MTX. CONCLUSIONS: Biological association networks identified DKK1, UGT1As and EEF1A1 as important gene nodes in MTX-resistance. Treatments using siRNA technology against these three genes showed chemosensitization toward MTX.

Se analizó la literatura científica de los últimos 10 años en las bases de datos BBCS-LILACS, Fuente Académica, IB-PsycINFO, IB-SSCI, IB-SciELO, SCOPUS y SCIRUS, estudiando las implicaciones terapéuticas de la mutación del gen ABCB1 en perros; esta mutación que consiste en la deleción de 4 pares de bases que provocan un codón de terminación prematuro, es la responsable de la ausencia de la glicoproteína P en la barrera hematoencefálica, la carencia de esta glicoproteína priva al cerebro de la protección de una bomba de eflujo frente a múltiples xenobióticos. Además, se describen los cambios farmacocinéticos y las intoxicaciones medicamentosas resultantes de esta mutación y se presenta una lista, extraída de los distintos estudios, donde se copilan algunos fármacos sustratos para la glicoproteína P y los medicamentos que pueden inhibir dicha glicoproteína, todos ellos capaces de inducir severos efectos adversos en los perros con dicha mutación. We conducted a review of the results of the studies of the last ten years from the data bases BBCS-LILACS, IB- PsycINFO, IB-SSCI, IB.SciELO, SCOPUS and SCIRUS, about the therapeutic implications of the gene mutation ABCB1 in dogs. This mutation is responsible for the absence of the glycoprotein P in the blood-brain barrier, depriving the brain of an efflux pump to protect against various xenobiotics. Furthermore, we described the pharmacokinetic changes and drug poisoning resulting from this mutation. We also present a list of drug substrates for the glycoprotein P and the medications that can inhibit said glycoprotein, all of them capable of inducing severe side effects in dogs with the mutation.

Debido a la inespecificidad de los síntomas, el cáncer gástrico (CG) es diagnosticado frecuentemente en etapas avanzadas, lo que da cuenta de los altos índices de mortalidad debido a esta neoplasia a nivel mundial. El esquema de tratamiento adyuvante o neoadyuvante en los países occidentales incluye el uso de fluoropirimidinas citotóxicas y compuestos de platino formadores de aductos en el ADN. La respuesta clínica al tratamiento con estos fármacos depende principalmente de la sensibilidad del tumor, la cual a su vez está condicionada por el nivel de expresión de los blancos terapéuticos y de las enzimas de reparación del ADN. Sumado a esto, algunos polimorfismos de línea germinal en genes asociados al metabolismo y a la respuesta a estos fármacos, han mostrado asociación con respuestas pobres y con el desarrollo de eventos adversos, incluso con resultados fatales. La identificación de biomarcadores genómicos, en la forma de polimorfismos genéticos o la expresión diferencial de genes específicos asociados a la respuesta quimioterapeútica ha sido motivo de intensa investigación como base para la aplicación de la farmacogenómica en el establecimiento de una terapia farmacológica racional y personalizada del CG. Sin embargo, ante la eventual aplicación de la farmacogenómica en el ámbito clínico, es necesario establecer el valor pronóstico real de dichos biomarcadores mediante los estudios de asociación genotipo-fenotipo, así como su prevalencia en el contexto de cada población de pacientes. Estos aspectos son indispensables al evaluar la relación costo-efectividad de la introducción de los productos de la medicina genómica predictiva en el tratamiento del CG. Gastric cancer (GC) is often diagnosed at later stages due to the lack of specificity of symptoms associated with the neoplasm, causing high mortality rates worldwide. The first line of adjuvant and neoadjuvant treatment includes cytotoxic fluoropyrimidines and platin-containing compounds which cause the formation of DNA adducts. The clinical outcome with these antineoplastic agents depends mainly on tumor sensitivity, which is conditioned by the expression level of the drug targets and the DNA-repair system enzymes. In addition, some germ line polymorphisms, in genes linked to drug metabolism and response to chemotherapy, have been associated with poor responses and the development of adverse effects, even with fatal outcomes in GC patients. The identification of genomic biomarkers, such as individual gene polymorphisms or differential expression patterns of specific genes, in a patient-by-patient context with potential clinical application is the main focus of current pharmacogenomic research, which aims at developing a rational and personalized therapy (i.e., a therapy that ensures maximum efficacy with no predictable side effects). However, because of the future application of genomic technologies in the clinical setting, it is necessary to establish the prognostic value of these genomic biomarkers with genotype-phenotype association studies and to evaluate their prevalence in the population under treatment. These issues are important for their cost-effectiveness evaluation, which determines the feasibility of using these medical genomic research products for GC treatment in the clinical setting.

Tesis Univ. Granada. Programa de Doctorado de Farmacia Asistencial

Actualmente, con el aumento de la disponibilidad de técnicas para la realización de estudios genéticos, han aparecido nuevas áreas del conocimiento como la epigenética y la farmacogenética. Estas nuevas áreas han permitido esclarecer las bases genéticas implicadas en la aparición de las enfermedades que afectan al ser humano. Dada su aplicación global, la psiquiatría no ha sido ajena al alcance de estas nuevas disciplinas, lo cual se refleja en el gran número de estudios realizados a nivel mundial que han relacionado la presencia de variantes genéticas en los individuos con la aparición de trastornos mentales específicos. De la misma forma, otros estudios han evidenciado que la efectividad de los tratamientos farmacológicos empleados en psiquiatría se correlaciona con polimorfismos en las enzimas encargadas de metabolizar dichos medicamentos. Por lo tanto, es importante que los psiquiatras conozcan los aspectos básicos de estas relaciones para obtener mejores resultados en el diagnóstico y tratamiento de los principales trastornos mentales. Nowadays, with the increased availability of techniques for genetic studies, there are new areas of knowledge, such as epigenetics and pharmacogenetics. These new areas clarify the genetic basis involved in the occurrence of diseases that affect humans. Given its global application, psychiatry has not been outside of the scope of these new disciplines. The large number of worldwide studies have linked the presence of genetic variants in individuals with signs of mental disorders. Furthermore, other studies show that the effectiveness of pharmacological treatments used in psychiatry are correlated with polymorphisms in the enzymes that metabolize these medicines. Therefore, it is important that psychiatrists know the basics of these relationships to get better outcomes in diagnosis and treatments of the major mental disorders.

Introdução: O câncer consiste em um problema de saúde publica mundial, com estimativa de 27 milhões de casos novos e 17 milhões de mortes por câncer no ano de 2030. No Brasil, as estimativas para o câncer no ano de 2014, apontam a ocorrência de aproximadamente 580 mil casos novos. As fluoropirimidinas são usadas nos principais esquemas quimioterápicos direcionados a tumores do trato gastrointestinal. Nos últimos anos muito se tem investigado sobre causas de respostas individuais diferenciadas em relação ao tratamento quimioterápico; dessa forma têm-se buscado uma terapia individualizada que possa maximizar a eficácia dos medicamentos e minimizar os efeitos adversos associados aos fármacos. Objetivamos buscar a associação do INDEL (rs16430) do gene TYMS com o padrão de resposta ao tratamento oncológico de fármacos com base em fluoropirimidinas, de maneira a contribuir para o desenvolvimento da medicina personalizada. Material: Estudadas 151 amostras de sangue periférico de pacientes oncológicos tratados com fluoropirimidinas, da população da região amazônica brasileira com elevado grau de mistura interétinica. Foi genotipado um polimorfismo INDEL (rs16430) no gene TYMS envolvido na resposta ao tratamento com uso de fluoropirimidinas. Resultados: A investigação relatou que a maioria dos pacientes tinha doença avançada no momento do diagnóstico; 32,7% receberam tratamento com intenção paliativa; e 22,8% tratamento neoadjuvante. Nossos resultados evidenciam que o polimorfismo INDEL no gene TYMS demonstrou ter um efeito de proteção à progressão tumoral (p=0,033). Pacientes tratados com fluoropirimidinas que eram homozigotos selvagens (INS/INS) apresentaram uma proteção à progressão tumoral de 24% comparado com outros genótipos desse polimorfismo. As estimativas de ancestralidade genômica global da amostra investigada foram: 62,4% europeia; 25,2% nativo americana e 12,4% africana. Foi possível estabelecer uma correlação inversa entre o aumento da ancestralidade ameríndia e a presença de metástase (p=0,024). Conclusão: Estudos farmacogenéticos podem proporcionar uma terapia personalizada reduzindo mortalidade por toxicidades e aumentando a eficácia terapêutica, desta forma proporcionando um tratamento oncológico com melhores resultados clínicos. Cancer is a public health problem worldwide, with an estimated of 27 million new cases and 17 million cancer deaths in 2030. In Brazil, estimates for cancer in 2014, indicate the occurrence of approximately 580 000 new cases. Fluoropyrimidines are used in the main chemotherapy regimens targeted to tumors of the gastrointestinal tract. Recently, much has been investigated on causes of different individual responses to chemotherapy.Thus, it has been sought an individualized therapy that can maximize drug efficacy and minimize adverse effects associated with drugs. We aimed to seek the association of an INDEL polymorphism (rs16430) in TYMS gene with the pattern of response to chemotherapy drugs based on fluoropyrimidines, in order to contribute to the development of personalized medicine. We studied 151 samples of cancer patients treated with fluoropyrimidine, from a population of the Brazilian Amazon region with high interethnic admixture. An INDEL polymorphism (rs16430) was genotyped in TYMS gene that is involved in the response to treatment using fluoropyrimidines. The research reported that most patients had advanced disease at diagnosis, of which 32.7% were treated with palliative intent, and 22.8% neoadjuvant treatment. Our results show that the INDEL polymorphism in the TYMS gene appears to have a protective effect on tumor progression (p = 0.033). Patients treated with fluoropyrimidine who were wild homozygous (INS / INS) had a 24% protection to tumor progression compared to other genotypes of this polymorphism. Estimates of global genetic ancestry of the sample investigated were: 62.4% European, 25.2% Amerindian and 12.4% African. It was possible to establish an inverse correlation between the increase of Amerindian ancestry and metastasis (p = 0.024). Pharmacogenetic studies can provide a personalized therapy toxicity reducing mortality and improving therapeutic efficacy, thereby providing a cancer therapy with better clinical results.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz O cancro da mama é uma patologia de alta incidência e mortalidade no sexo feminino tanto em Portugal como no resto do mundo. Esta monografia vai centrar-se no estudo da influência que os polimorfismos genéticos das enzimas metabólicas, dos transportadores de efluxo e dos receptores de estrogénio, têm na resposta à terapia com o tamoxifeno para o cancro da mama. Os estudos que analisaram o papel do genótipo do citocromo P450 2D6 (CYP2D6) na resposta a este fármaco são controversos, a maioria destes defende que indivíduos metabolizadores lentos (PM) e intermédios (IM) revelam piores resultados do que os metabolizadores extensivos (EM), embora apenas num dos estudos com maior impacto se tenha observado a mesma associação. O polimorfismo CYP2C19*2 demonstrou ser benéfico na população Holandesa, já nas populações Japonesa, Alemã e Polaca não influenciou a eficácia terapêutica. Noutro polimorfismo do mesmo gene, o CYP2C19*17, foram observados resultados contraditórios tanto quanto ao seu valor preditivo como prognóstico. No gene CYP3A4, o alelo T para o polimorfismo CYP3A4*22 foi associado a maiores concentrações de tamoxifeno e dos seus metabolitos e o polimorfismo CYP3A4*1B foi associado a maior risco de desenvolvimento de cancro do endométrio. Na análise do gene CYP3A5, apenas um estudo observou uma correlação, sendo esta inesperada, do alelo *3 (que codifica para actividade nula da enzima) com melhores resultados terapêuticos. A mesma situação se revelou para a sulfotransferase 1A1 (SULT1A1), em que o polimorfismo SULT1A1*2 (origina reduzida actividade catalítica da enzima) foi correlacionado com menor tempo livre de doença. Os polimorfismos ao nível dos receptores de estrogénio demonstraram ter um papel importante na modulação da resposta terapêutica com o tamoxifeno ao nível de efeitos secundários e reacções adversas. Adicionalmente, o genótipo ESR1 (gene estrogen receptor-1) PvuII T/T em associação com pelo menos um alelo wt (tipo selvagem) UGT2B15 demonstraram originar pior resposta ao tratamento. Face às várias limitações apresentadas nos estudos analisados, são necessários estudos com maior amostragem e maior controlo sobre variáveis que possam inviabilizar os estudos por forma a abrir caminho para a medicina personalizada.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The Pampa Biome has a great biodiversity of plants, among them the Family Malvaceae. Despite the medicinal use of many of these plants, studies on the biological activity of these are still very scarce. This is the case of the plant known as "erva de ovelha", which is traditionally used in therapy against prostate cancer, used as tea and prepared from two species of the genus Pavonia, highlighting the Pavonia xanthogloea. Therefore, this study aimed to identify bioactive compounds in the extract and five fractions of P. xanthogloea, evaluating their antioxidant and antitumor action in the lineage of prostate cancer DU145. Additionally, the potential cytotoxic effect via pharmacogenetic studies on human red blood cells (RBCs) bearers of different genotypes of the polymorphism found in the gene of the enzyme superoxide dismutase manganese dependent (Ala16Val-SOD2). These RBCs afterwards were exposed to extract and fractions of P. xanthogloea. The results were arranged and shown as three scientific papers. Manuscript 1: The chemical composition of the extract and fractions (ethyl acetate, hexane, n-butanol, aqueous and dichloromethane) was determined by liquid chromatography of high efficiency. The antioxidant activity was determined by DPPH assay. The antioxidant activity and the cytotoxicity evaluated by exposure of human lymphocytes exposed to different concentrations of extract/fractions with and without sodium nitroprusside and H2O2. Tiliroside was found in all extracts. The aqueous and ethyl acetate fractions showed high antioxidant capacity. The crude extract (ethanol) and hexane, n-butanol and aqueous fractions reverts the ROS levels generated by H2O2. The crude extract and hexane, ethyl acetate and n-butanol fractions do not cause cytotoxicity. The aqueous fraction was cytotoxic at concentration of 300 μg/mL. The reversal of the cytotoxicity caused by SNP was dependent on the concentration and extract/fraction. The dichloromethane fraction was cytotoxic at all concentrations. The results suggest potential medicinal use of this species. Manuscript 2: The study evaluated in vitro the hemolytic effect of chelerythrine (CHE), alkaloid extracted from Zanthoxylum rhoifolium, and the possible pharmacogenetic influence of SOD2-Ala16Val in RBCs. The CHE inhibits protein kinase C activity decreasing the RBCs deformation and causing oxidative stress. Blood was collected from healthy subjects previously genotyped for the polymorphism Ala16Val-SOD2. The CHE was incubated with RBCs (1 × 109 cell/mL) at concentrations 0.1 μM, 2 μM and 8 μM. Pharmacogenetic effect was evaluated through spectrophotometric analysis of indicators of oxidative stress, lipid peroxidation, catalase, advanced oxidation protein products (AOPP) and nitrate/nitrite (NOx), and hemolysis. The RBCs were maintained under controlled conditions. The response to treatment with CHE was genotype dependent and AA RBCs were more sensitive than VV. The SOD2 plays an important role in erythropoiesis and causes an impact on the quality of RBC. Therefore, the results presented here suggest toxicogenetic influence of SOD2 in hemolytic assay using human cells. Manuscript 3: To evaluate the antitumor effect viability assays of (24 hour exposure) and cell proliferation (72 hour exposure) were performed by MTT assay and spectrophotometric analisys. The pharmacogenetic effect through the hemolysis assay by spectrophotometry. Blood was collected from healthy subjects previously genotyped for the polymorphism Ala16Val-SOD2. Both erythrocytes and tumor cells were grown under controlled conditions. Study the pattern of hemolysis associated with different genotypes of the polymorphism Ala16Val-SOD2 suggests pharmacogenetic effect. When hemolysis assay was performed for different concentrations of extract and fractions of P. xanthogloea the anti-hemolytic protective effect observed was independent of the gene SOD2. Cytotoxic and antiproliferative activity was observed in the cell lineage of prostate cancer DU145 was dependent on the type of extract/fraction and concentration, highlighting n-butanol fraction that showed strong antiproliferative activity. These results showed great similarity to antitumor activity of doxorubicin chemotherapeutic and also seem to be associated with tiliroside isolated from P. xanthogloea. The overall results match with the popular use of P. xanthogloea regarding the prostate cancer therapy. However, further investigations should be performed to evaluate the antitumor action mechanisms of P. xanthogloea. O Bioma Pampa possui uma grande biodiversidade de plantas, entre as quais as da Família Malvaceae. Apesar do uso medicinal de muitas destas plantas, estudos sobre a atividade biológica das mesmas ainda são muito escassos. Este é o caso da planta conhecida como erva de ovelha , que é tradicionalmente utilizada na terapia contra o câncer de próstata, na forma de chá e preparado a partir de duas espécies do gênero Pavonia, com destaque a Pavonia xanthogloea. Portanto, o presente estudo teve como objetivo principal identificar compostos bioativos do extrato e cinco frações de P. xanthogloea, avaliando a sua ação antioxidante e antitumoral na linhagem de câncer de próstata DU145. Adicionalmente, o potencial efeito citotóxico via estudos farmacogenéticos em células sanguíneas vermelhas (RBCs) humanas, portadoras de diferentes genótipos do polimorfismo encontrado no gene da enzima superóxido dismutase dependente de manganês (Ala16Val-SOD2). Estas RBCs posteriormente foram expostas ao extrato e frações da P. xanthogloea. Os resultados obtidos foram organizados e apresentados sob a forma de três artigos científicos. Manuscrito 1: A composição química do extrato e frações (acetato de etila, n-butanol, hexano, aquosa e diclorometano) foi determinada por cromatografia de líquida de alta eficiência. A capacidade antioxidante foi determinada pelo ensaio do DPPH. A atividade antioxidante e a citotoxicidade avaliada através da exposição de linfócitos humanos expostos a diferentes concentrações de extrato/frações com e sem nitroprussiato sódico e H2O2. O tilirosídeo foi encontrado em todos os extratos. As frações aquosa e acetato de etila mostraram alta capacidade antioxidaente. O extrato bruto (etanólico) e frações hexano, aquosa e n-butanol revertem os níveis de ROS gerados pelo H2O2. O extrato bruto e frações hexano, acetato de etila e n-butanol não causam citotoxidade. A fração aquosa foi citotóxica na concentração de 300 μg/mL. A reversão da citotoxicidade causada pelo SNP foi dependente do extrato/fração e da concentração. A fração diclorometano foi citotóxica em todas as concentrações. O resultado sugere potencial uso medicinal desta espécie. Manuscrito 2: O estudo avaliou in vitro o efeito hemolítico da Queleritrina (CHE), alcaloide extraído da Zanthoxylum rhoifolium, e da possível influência farmacogenética da SOD2-Ala16Val em RBCs. A CHE inibe a atividade da proteina quinase C diminuindo a deformação das RBCs e causando estresse oxidativo. O sangue foi coletado de sujeitos saudáveis, previamente genotipados para o polimorfismo Ala16Val-SOD2. A CHE foi incubada com RBCs (1 × 109 cell/mL) nas concentrações 0.1 μM, 2 μM and 8 μM. O efeito farmacogenético foi avaliado através de análises espectrofotométricas de indicadores do estresse oxidativo, lipoperoxidação, catalase, produtos avançados da oxidação de proteínas (AOPP) e nitrato/nitrito (NOx), e hemólise. As RBCs foram mantidas em condições controladas. A resposta ao tratamento com CHE foi genótipo dependente e, RBCs AA foram mais sensíveis que as VV. A SOD2 tem um importante papel na eritropoiese e causa impacto na qualidade das RBC. Portanto, os resultados aqui apresentados sugerem influência toxicogenética de SOD2 em ensaio hemolítico utilizando células humanas. Manuscrito 3: Para avaliar o efeito antitumoral foram feitos ensaios de viabilidade (24 horas de exposição) e proliferação celular (72 horas de exposição) e análise espectrofotométrica pelo ensaio MTT. O efeito farmacogenético através do ensaio de hemólise, por espectrofotometria. O sangue foi coletado de sujeitos saudáveis, previamente genotipados para o polimorfismo Ala16Val-SOD2. Tanto os eritrócitos quanto as células tumorais foram cultivadas em condições controladas. O estudo do padrão de hemólise associado aos diferentes genótipos do polimorfismo Ala16Val-SOD2 sugere efeito farmacogenético. Quando foi realizado ensaio de hemólise para diferentes concentrações do extrato e frações de P. xanthogloea o efeito anti-hemolítico protetor observado foi independente do gene da SOD2. Atividade citotóxica e antiproliferativa observada na linhagem celular de câncer de próstata DU145 foi dependente do tipo de extrato/fração e concentração, com destaque a fração butanol que apresentou intensa atividade antiproliferativa. Estes resultados apresentaram grande similaridade a atividade antitumoral do quimioterápico doxirrubicina e também parecem estar associados ao tilirosídeo, isolado da P. xanthogloea. O conjunto dos resultados condizem com o uso popular da P. xanthogloea em relação a terapia do câncer de próstata. Entretanto, investigações complementares devem ser feitas para avaliar os mecanismos de ação antitumorais da P. xanthogloea.

The aim of this study was the development and the validation of two pharmacogenetic tests for determination of the personalized dosage of drugs used in clinical settings (Warfarin and PEG-Interferone/Ribavirin) in which genetic testing is necessary and recommended. Warfarin (Coumadin®) is a widely prescribed anticoagulant used for treatment and prevention of thrombotic disorders. Although highly efficacious, Warfarin’s narrow therapeutic index and wide inter-individual variability in dose response make its dosing difficult. The standard procedure to define the personalized dose is an iterative process that can take weeks or months and exposes the patients to an increased risk of over- or underanticoagulation and thus to serious side effects like thromboembolism or bleeding. The anticoagulation effect of the Coumadin® drug therapy is influenced by combination of genetic and non-genetic factors , which account for more than half of the inter-individual variation in Warfarin doses required to achieve a therapeutic level of anticoagulation or therapeutic INR (Prothrombin International Normalized Ratio). Since 2011, the FDA requires the product label to include a recommended daily Warfarin dose (mg/day) for therapeutic INR, which is to be based on the genotypes of CYP2C9 and VKORC1. In addition, Genome-Wide Association Studies (GWAS) have confirmed that CYP2C9, VKORC1 and CYP4F2 are the main genetic factors determining the effective Warfarin dose in Caucasians. Therefore, knowledge of the genetic profile provides a means to assess the differential risk of adverse reactions and allows the personalization of the therapy, e.g. lowering the dosage for patients with the alleles CYP2C9 *2 and *3 or that are homozygous for the A-allele (A/A) of the rs9923231 polymorphism in the VKORC1 gene. The goal of this study was to develop an innovative genotyping system assessing the gene polymorphisms that mainly determine the clinical response to Warfarin. Four polymorphisms were investigated: rs9923231 in the VKORC1 gene, rs1799853 and rs1057910 in the CYP2C9 gene and rs2108622 in the CYP4F2 gene. To evaluate already available systems and decide on the method to be used for the test we performed a benchmarking of the tests present in the market. The genotyping is performed using a multiplex PCR in combination with a Reverse Line Blot hybridization assay (mPCR/RLB). To ensure specific amplification the test uses the SSP-PCR (Sequence Specific Primer PCR) approach. The high specificity of this PCR method was confirmed by direct sequencing. The test identifies and differentiates SNPs using ASO probes (Allele Specific Oligonucleotide) that recognize the different alleles. The hybrid formed between the amplified target DNA sequence and the complementary probes is detected by a colorimetric reaction using biotin-streptavidin and alkaline phosphatase. In the first part of the study several parameters like assay temperature, typology of hybridization and washing solutions, incubation time and probe design were analyzed in order to assess their influence on the assay’s performance. Next, the amplification protocol was defined and the conditions of the RLB assay were set up. The kit prototype was then validated on 125 samples, which had been previously genotyped with a standard method (TaqMan® Drug Metabolism Genotyping Assay, Life Technologies), and the analytical sensitivity of the assay was determined. All tested samples were accurately genotyped (100% diagnostic specificity and sensitivity) and the method efficiently worked in a broad range of DNA concentrations. Sensitivity tests demonstrated that the method developed in this study, provided reliable results within a DNA concentration range of 1 ng/reaction to 500 ng/reaction. The shelf life of the reagents was determined to be at least twelve months. In addition, the assay was shown to work on/with the following combinations of probe support materials (a nylon membrane and a nitrocellulose blotting membrane) and PCR master mixes (three commercial available master mixes). A software was developed that automates and facilitates interpretation of the RLB (strip) patterns. After completion, the system, GENEQUALITY AB WARFARIN TYPE cod. 04-74A-20 (AB ANALITICA), was notified to the Ministero della Salute and was CE IVD marked for commercialization in the European Community. As this system is the only assay on the market that analyzes the CYP4F2 gene in combination with the CYP2C9 and the VKORC1 gene, it represents the most complete approach for determining the genetic factors influencing Warfarin dosage in Caucasians. The Hepatitis C virus (HCV) infection is a major health problem with more than 170 million infected individuals worldwide (2-2.5% of the world’s population). Approximately 30% of the infections are cleared spontaneously, whereas 40% of the patients develop a chronic infection that can lead to cirrhosis, hepatocellular carcinoma and end-stage liver disease. The current standard of care is a combination treatment with pegylated interferon (PEG-INF) and Ribavirin (RBV), but its efficacy and tolerability are limited. Many efforts have been made to identify the factors that influence host resistance to HCV infection and treatment outcome. Several Genome-Wide Association Studies (GWAS) have demonstrated independently that variations in the IL28B (Interleukin 28B) gene are strongly associated with spontaneous clearance of the virus, early viral kinetics and with the varying PEG-INF/RBV therapy response in different populations. Particularly, polymorphism IL28B rs12979860 influences the prospect of recovery from an HCV infection. Patients homozygous for allele rs12979860-C show a two- to threefold higher SVR (Sustained Virological Response) rate compared to persons with a non-CC genotype when undergoing Peg-INF/RBV treatment, have a higher probability of spontaneous clearance of the virus and, during therapy, display a stronger reduction of virus RNA levels, which is reflected in higher RVR (Rapid Virological Response) and EVR (Early Virological Response) rates. Other studies reported an association of certain functional variants of the ITPA (Inosine Triphosphatase) protein with the reduction of hemoglobin during Peg-INF/RBV therapy. These allelic variants of the ITPA gene decrease the enzymatic activity of ITPA, thus protecting from RBV-induced anemia. The aim was to develop an innovative system to genotype the most significant genetic polymorphisms important for the prediction of treatment response and risk of adverse reactions in patients infected with HCV. Four polymorphisms were investigated in this study: rs12979860 and rs8099917 in the IL28B gene and rs7270101 and rs1127354 in the ITPA gene. Human genomic DNA was extracted from peripheral blood using an automated system (EZ1, Qiagen). Genotyping of the genetic variants was performed combining multiplex PCR with a Reverse Line Blot hybridization assay (mPCR/RLB). For amplification (PCR) of the target sequences, biotinylated primers were used. The primers were designed and analyzed in silico using bioinformatics alignment tools like “blat” (UCSC) and ClustalW, excluding genomic sequences that contain SNPs, SINEs/LINEs or other repetitive elements and all primer binding sites that show a sequence similarity of more than 95% with other genomic sequences. Due to the fact that a sequence that is highly homologous to the target region in IL28B gene is located on the same chromosome 15.000 bp upstream, the SSP-PCR approach was adopted in order to ensure a high specificity of the amplification. To evaluate the efficacy of the SPP-PCR, the amplification products were analyzed by direct sequencing. Subsequently, the protocol for the multiplex amplification was set up. Probes recognizing the different alleles of each investigated SNP (two ASO, Allele Specific Oligonucleotide, per SNP) were designed and their specificity analyzed under varying experimental conditions. This allowed estimation of the effect of parameters like temperature and time of incubation on the assay performance. The analytical sensitivity of the assay was determined using a range of DNA concentrations between 0.5 ng/µl and 200 ng/µl. The diagnostic specificity of the test was assessed analyzing 160 samples of a known genotype. The test provided a result within a DNA concentration of 1 ng/reaction to 400 ng/reaction and all tested samples were accurately genotyped. This underlines the reliability and specificity of the assay. The shelf life of the reagents was determined to be at least eight months and the compatibility of the assay with other amplification master mixes or probe supports (membranes) was tested. The system, GENEQUALITY IL28B-ITPA TYPE cod. 04-47A-20 (AB ANALITICA), was notified to the Ministero della Salute and CE IVD marked for commercialization in the European Community. RLB is a convenient way to identify up to 8 targets in 20 individual specimens simultaneously. It is more flexible and less costly than DNA microarrays while providing the same specificity and sensitivity. The system developed in this study, GENEQUALITY IL28B-ITPA TYPE, code 04-47A-20 (AB ANALITICA), allows analysis of the most important host genetic factors influencing the efficacy of the Peg-INF/RBV therapy and determining the risk of RBV-induced anemia. It is the only assay on the market that analyzes ITPA and IL28B polymorphisms together and therefore represents the most complete approach for determining the genetic constitution in regard to the IL28B and the ITPA gene for personalized management of patients with Hepatitis C. A genotype-phenotype correlation analysis was performed to evaluate the association between IL28B and ITPA polymorphisms and the therapy outcome in a sub-group of patients (N=52). Genetic analysis of the IL28B polymorphism rs12979860 revealed that 27% of the patients carried the C/C genotype, whereas 56% and 17% carried the C/T and the T/T genotype, respectively. The T/T genotype of the IL28B polymorphism rs8099917 was in 40% of patients, whereas 48% carried T/G and 12% the G/G. No association was found between variants of the IL28B polymorphisms and SVR rates: 57% of patients with IL28B rs12979860-CC and 52% with IL28B rs8099917-TT achieved SVR and 43% and 48%, respectively, failed to clear the HCV virus. For analysis of the influence of ITPA, the patients were subdivided into the following three groups: normal ITPase activity (100% ITPA), mild ITPase deficiency (60% ITPA- 60% ITPase activity) and moderate to severe ITPase deficiency (≤30% ITPA, ≤30% ITPase activity). These groups reflected the individual Composite ITPase Deficiency Variable based on the genotypes of the ITPA polymorphisms rs7270101 and rs1127354. Patients with normal ITPase activity were compared to the groups of patients with mild ITPase deficiency and moderate to severe ITPase deficiency by statistical analysis. The results showed that the predicted ITPase deficiency correlated to a reduction of median Hb levels at 4, 12 and 24 weeks of treatment. A statistically significant difference was observed between the groups with normal ITPase activity and moderate to severe ITPase deficiency (≤30% ITPA) at 4 and 24 weeks (Dunnett’s Multiple Comparison Test: T4, p < 0.0001; T24, p < 0.0451). This clearly shows that patients with an at least by 70% decreased ITPase activity are protected from anemia throughout the treatment.

Nos últimos anos, novos anticoagulantes têm sido desenvolvidos com o objetivo de minimizar as dificuldades encontradas no manejo clínico das drogas convencionais, porém não existem dados publicados sobre a sua farmacogenética. Diante da hipótese de que os polimorfismos relacionados à sua metabolização possam ser fonte de variabilidade genética, o presente estudo objetiva realizar inferências de epidemiologia molecular dos polimorfismos nos genes CyP3a4 (rs2246709) e CyP2j2 (rs890293), relacionados ao metabolismo do Rivaroxaban, um novo inibidor direto do fator Xa. São analisadas 136 amostras de indivíduos saudáveis de uma população do Norte do Brasil que apresenta um elevado grau de mistura interétnica. Para alcançar o objetivo farmacogenético foi realizada, em paralelo, análise de ancestralidade genômica nos indivíduos investigados. Os resultados demonstraram diferenças significativas entre os genótipos do CyP3a4 observados no estudo, quando comparados a todas as populações ancestrais para o polimorfismo 99365719 a>G (P G ( P < 0.05). The mixed population of northern Brazil, therefore, showed differences in the distribution of genotype frequencies in relation to ancestral groups, forming our population. The same finding was not observed for the CyP2j2 gene polymorphism. It is noteworthy that the polymorphism in the CyP3a4 gene in the investigated sample is influenced by indivi- dual ethnic European contribution. Considering the high miscegenation featuring local people, and the advancement of Pharmacogenomics in current medicine, such data can contribute to a better understanding of the pharmacogenetics of that new anticoagulant.

El tacrolimus (Tac) es un inmunosupresor ampliamente usado para prevenir el rechazo en el trasplante renal. Los pacientes reciben una dosis inicial estándar y se miden los niveles sanguíneos, con ajuste de la dosis hasta alcanzar una concentración dentro del rango aceptado. Existe una gran variabilidad interindividual en las dosis necesarias para alcanzar ese nivel diana en sangre, y muchos pacientes requieren varias modificaciones de la dosis hasta alcanzarlo. Uno de los principales determinantes de estas diferencias es un polimorfismo del gen CYP3A5 que determina que alrededor del 80 % de los caucásicos sean metabolizadores lentos y requieran dosis menores que los metabolizadores rápidos. Se ha propuesto que los pacientes trasplantados reciban dosis iniciales de Tac con base en el genotipo CYP3A5. Para que este procedimiento fuese aceptado por los clínicos, deberían demostrarse sus ventajas frente al procedimiento actual, más allá de un menor tiempo para alcanzar la dosis óptima. Por ejemplo, menor tasa de nefrotoxicidad y rechazo o menor coste por necesitar, entre otros, menos modificaciones de la dosis de Tac y menos terapia de inducción con anticuerpos.

El tacrolimus (Tac) es un inmunosupresor ampliamente usado para prevenir el rechazo en el trasplante renal. Los pacientes reciben una dosis inicial estándar y se miden los niveles sanguíneos, con ajuste de la dosis hasta alcanzar una concentración dentro del rango aceptado. Existe una gran variabilidad interindividual en las dosis necesarias para alcanzar ese nivel diana en sangre, y muchos pacientes requieren varias modificaciones de la dosis hasta alcanzarlo. Uno de los principales determinantes de estas diferencias es un polimorfismo del gen CYP3A5 que determina que alrededor del 80 % de los caucásicos sean metabolizadores lentos y requieran dosis menores que los metabolizadores rápidos. Se ha propuesto que los pacientes trasplantados reciban dosis iniciales de Tac con base en el genotipo CYP3A5. Para que este procedimiento fuese aceptado por los clínicos, deberían demostrarse sus ventajas frente al procedimiento actual, más allá de un menor tiempo para alcanzar la dosis óptima. Por ejemplo, menor tasa de nefrotoxicidad y rechazo o menor coste por necesitar, entre otros, menos modificaciones de la dosis de Tac y menos terapia de inducción con anticuerpos. Tacrolimus (FK-506) is an immunosuppressant widely used to prevent kidney transplant rejection. Patients receive an initial standard dose and tacrolimus levels are measured in blood. If necessary, the dose is adjusted to reach a blood concentration within the accepted range. There is great interindividual variability in the dose required to achieve the target blood level, and many patients require multiple modifications of the dose to reach the range. One of the main determinants of these differences is a CYP3A5 gene polymorphism that determines that about 80% of Caucasians are poor metabolisers and require lower doses compared to the extensive metabolisers. It has been proposed that transplanted patients could receive an initial Tacrolimus dose based on the CYP3A5 genotype. This could reduce the time to achieve the optimal blood level, reducing the number of dose modifications. However, to be accepted by clinicians and translated to the clinical practice this adapted dose procedure should give additional advantages such as a significant reduction of the rates of nephrotoxicity and rejection, or a lower cost due to less dose modifications of Tacrolimus and less antibody induction therapy.

Journal Article; A workshop was convened to discuss best practices for the assessment of drug-induced liver injury (DILI) in clinical trials. In a breakout session, workshop attendees discussed necessary data elements and standards for the accurate measurement of DILI risk associated with new therapeutic agents in clinical trials. There was agreement that in order to achieve this goal the systematic acquisition of protocol-specified clinical measures and lab specimens from all study subjects is crucial. In addition, standard DILI terms that address the diverse clinical and pathologic signatures of DILI were considered essential. There was a strong consensus that clinical and lab analyses necessary for the evaluation of cases of acute liver injury should be consistent with the US Food and Drug Administration (FDA) guidance on pre-marketing risk assessment of DILI in clinical trials issued in 2009. A recommendation that liver injury case review and management be guided by clinicians with hepatologic expertise was made. Of note, there was agreement that emerging DILI signals should prompt the systematic collection of candidate pharmacogenomic, proteomic and/or metabonomic biomarkers from all study subjects. The use of emerging standardized clinical terminology, CRFs and graphic tools for data review to enable harmonization across clinical trials was strongly encouraged. Many of the recommendations made in the breakout session are in alignment with those made in the other parallel sessions on methodology to assess clinical liver safety data, causality assessment for suspected DILI, and liver safety assessment in special populations (hepatitis B, C, and oncology trials). Nonetheless, a few outstanding issues remain for future consideration. Yes

Dissertação de mestrado em Biotecnologia Farmacêutica, apresentada à Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra Drug addiction is a chronic disease which affects millions of people worldwide with critical social and economical impact, besides the health burden. Repetitive exposure to drugs of abuse induces long-lasting neuroadaptative changes that promote drug-seeking behaviors. The causes of vulnerability to addiction, although its complexity, have been pointed to be in association with environmental, social and/or genetic factors. Pharmacogenetics and more recently pharmacogenomics developments with technical genetic resources, such as candidate gene and genome-wide analysis approaches, have played an important role unraveling the possible responsible genetic variants, like SNP or VNTR that may influence the vulnerability or having a protective effect in chemical dependence. Since drug addiction is a complex disease spectrum, genetic results may be seen as contradictory in some studies, but some genetic variants have been proven to be consistently associated to disease. For example, 136A allele of ADH4 gene, coding for alcohol dehydrogenase, has been associated with increased susceptibility to alcohol dependency while the ADH1B*2 variant has shown to confer a protective effect for alcohol dependence. The use of Next Generation Sequencing (NGS) platforms allowing massively parallel sequencing for assessing entire genome in a few days will probably grow, with a widespread use for obtaining a huge amount of genetic information as a powerful tool for deeper understanding and for development of novel therapeutic approaches to drug addiction. A dependência de drogas é uma doença crónica que afecta milhões de pessoas em todo o mundo com impacto social e económico crítico, além do problema de saúde em si. A exposição repetida ao abuso de drogas induz alterações neuroadaptativas duradouras que promovem comportamentos de busca de drogas. As causas da vulnerabilidade para a dependência, apesar da sua complexidade, têm sido apontados para a associação com factores ambientais, sociais e / ou genéticas. A farmacogenética e, mais recentemente desenvolvimentos na farmacogenómica com recursos técnicos genéticos, como as abordagens de gene candidato e genome-wide analysis, têm desempenhado um papel importante para desvendar as possíveis variantes genéticas responsáveis, como SNP ou VNTR que podem influenciar a vulnerabilidade ou ter um efeito protector na dependência química. Como a dependência de drogas é uma doença complexa, os resultados genéticos podem ser considerados contraditória em alguns estudos, mas algumas variantes genéticas têm sido consistentemente associadas à doença. Por exemplo, o alelo 136A do gene ADH4, que codifica para a álcool-desidrogenase, tem sido associado com um aumento da susceptibilidade à dependência do álcool, enquanto a variante ADH1B * 2 demonstrou conferir um efeito protector para a dependência do álcool. O uso de sequenciamento de plataformas de próxima geração (NGS) permitindo sequenciamento paralelo em massa para avaliar o genoma inteiro em poucos dias, irá provavelmente crescer, com um uso generalizado para a obtenção de uma enorme quantidade de informação genética como uma ferramenta poderosa para a compreensão mais profunda e para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para dependência de drogas.

Orientador: Carmen Silvia Passos Lima Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A cisplatina (CDDP) associada à radioterapia (RT) é utilizada no tratamento de portadores de células escamosas de cabeça e pescoço (CCECP). Já é conhecido que tanto a resposta ao tratamento como seus efeitos colaterais variam de indivíduo para indivíduo. Uma possível explicação para o fato pode ser a variabilidade genética no metabolismo da CDDP. O objetivo deste estudo foi o de verificar se habilidades herdadas no reparo de lesões do DNA, mediadas pelas enzimas ERCC1, XPC, XPD e XPF, alteram os efeitos terapêuticos, colaterais e a concentração de CDDP urinária em pacientes com CCECP. Foram avaliados, de forma prospectiva, pacientes consecutivos com CCECP do Hospital de Clínicas da UNICAMP, que receberam terapêutica com CDDP associada à RT. Os genótipos dos polimorfismos XPC Lys939Gln, XPD10 Asp312Asn, XPD23 Lys751Gln, XPF T30028C e ERCC1 C118T foram analisados por meio da reação em cadeia da polimerase e digestão enzimática em DNA de sangue periférico. A resposta ao tratamento foi avaliada por meio de exame clínico e por tomografia computadorizada do pescoço. Os efeitos colaterais ao tratamento foram graduados por meio de questionário e exames laboratoriais. As toxicidades renal e auditiva foram avaliadas por meio do clearance de creatinina estimado, da taxa de filtração glomerular com EDTA-51Cr e de audiometria tonal limiar, respectivamente, antes e após o tratamento. As dosagens urinárias da CDDP foram realizadas por cromatografia líquida de alta eficiência. O significado estatístico das diferenças entre grupos foi calculado pelos testes da probabilidade exata de Fisher ou qui-quadrado, regressão logística múltipla e ANOVA. Portadores do alelo Gln do polimorfismo XPC Lys939Gln estiveram sob chance de 0,11 vezes (intervalo de confiança [IC] 95%: 0,03-0,40) menor de ototoxicidade. Pacientes com o alelo Asn e com o genótipo Asn/Asn do polimorfismo XPD10 Asp312Asn estiveram sob chance de 0,38 vezes (IC 95%: 0,14-0,99) menor de náuseas, e 8,50 (IC 95%: 1,02-70,70) e 12,29 vezes (IC 95%: 1,19-126,04) maior de resposta completa ao tratamento e ototoxicidade, respectivamente. Portadores do genótipo CC do polimorfismo XPF T30028C estiveram sob chance de 0,13 (IC 95%: 0,02-0,74) e 0,06 vezes (IC 95%: 0,007-0,67) menor de náuseas e vômitos, respectivamente. E, pacientes com o alelo T do polimorfismo ERCC1 C118T estiveram sob chance de 0,33 vezes (IC 95%: 0,11-0,97) menor de vômitos. Concluímos que estes polimorfismos desempenham papéis importantes na obtenção de resposta à terapêutica e na ocorrência de efeitos colaterais. Acreditamos que estes resultados possam constituir a base preliminar para o tratamento personalizado futuro de pacientes com CCECP Abstract: Cisplatin (CDDP) associated with radiotherapy (RT) is used in treatment of patients with head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). It is well known that both response to treatment and side effects vary among individuals. A possible explanation for this may be the genetic variability in metabolism of CDDP. The aim of this study was to access if inherited ability to repair DNA damage, mediated by ERCC1, XPC, XPD and XPF enzymes change the therapeutic side effects and urinary concentration of CDDP in HNSCC patients. We evaluated prospectively, 90 consecutive HNSCC patients of UNICAMP¿s Hospital, who received CDDP associated RT as neoadjuvant, definitive or palliative treatment. Genotypes of XPC Lys939Gln, XPD10 Asp312Asn, XPD23 Lys751Gln, XPF T30028C and ERCC1 C118T polymorphisms were analyzed by polymerase chain reaction and restriction enzyme digestion of peripheral blood DNA. Treatment response was assessed by clinical examination and computed tomography of neck. Treatment side effects were ranked through questionnaire and laboratory tests. Renal and hearing toxicities were assessed using, respectively, estimated creatinine clearance and glomerular filtration 51Cr-EDTA and pure tone threshold audiometry, before and after treatment. Urinary doses of CDDP were performed by high performance liquid chromatography. Statistical significance of differences between groups was calculated by Fisher's exact probability test or chi-square, logistic regression and ANOVA. Carriers of Gln allele of XPC Lys939Gln polymorphism had a 0.11-fold (95% confidence interval [CI]: 0.03-0.40) decreased risk of ototoxicity. Patients with Asn allele and Asn/Asn genotype of XPD10 Asp312Asn polymorphism had a 0.38-fold (95% CI: 0.14-0.99) decreased risk of nausea, and had a 8.50 (95% CI: 1.02-70.70) and 12.29-fold (95% CI: 1.19-126.04) increased risks of complete response to treatment and ototoxicity, respectively. Carriers of CC genotype of XPF T30028C polymorphism had a 0.13 (95% CI: 0.02-0.74) e 0.06-fold (95% CI: 0.007-0.67) decreased risks of nausea and vomiting, respectively. And, patients with T allele of ERCC1 C118T polymorphism had a 0.33-fold (95% CI: 0.11-0.97) decreased risk of vomiting. We concluded that these genetic polymorphisms have important roles in complete response rate and in occurrence of side effects. We believe that this data may constitute preliminary basis of future personalized treatment of HNSCC patients Mestrado Fisiopatologia Médica Mestra em Ciências

Projeto de Pós-Graduação/Dissertação apresentado à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas Diferenças inter-individuais na eficácia e toxicidade da medicação são comuns entre os pacientes. Estima-se que a genética possa explicar entre 20 a 95 por cento da variabilidade na resposta aos fármacos. Porém associados à genética, existem fatores tais como, a idade, sexo, doenças secundárias e outros fatores ambientais que afetam a absorção, distribuição, metabolização e excreção dos fármacos podendo levar, habitualmente, à ocorrência de reações adversas. Estas reações são responsáveis por milhões de hospitalizações e milhares de mortes por ano apenas nos Estados Unidos. Identificação e caracterização de um grande número de polimorfismos genéticos (biomarcadores) nas enzimas metabolizadoras e transportadoras dos fármacos pode fornecer um conhecimento aprofundado sobre os mecanismos de diferenças inter- individuais na resposta à droga. O uso de novas tecnologias moleculares, nomeadamente de sequenciação do genoma, e de diagnóstico para avaliar o perfil genético e os biomarcadores das doenças abrem novos caminhos para permitir a cada doente o esquema de tratamento que lhe pode trazer os melhores resultados. Este esquema de tratamento, além de diminuir o número de reações adversas evita a exposição do paciente a um longo período de terapia baseado na tentativa e erro. Para os doentes, a medicina personalizada detém a promessa de terapêuticas mais eficazes e com menos efeitos secundários, podendo assim, ser poupados à perspetiva de um tratamento com efeitos adversos significativos e pouco ou nenhum efeito terapêutico Farmacogenética e farmacogenómica são duas áreas que emergiram para investigar a variabilidade individual na resposta aos fármacos. A indústria farmacêutica utiliza, cada vez mais, técnicas relacionadas com a farmacogenómica e com a farmacogenética e a informação que delas resulta para o processo de desenvolvimento de novos fármacos, promovendo a prescrição de um medicamento apropriado na dose certa para cada paciente. Inter-individual differences in the efficacy and toxicity of medication are common among patients. It is estimated that genetic factors can account for 20 to 95 percent of variability in drug responses. However associated with genetic, there are factors such as age, sex, secondary diseases and other environmental factors that affect the absorption, distribution, metabolism and excretion of drugs and may lead to adverse reactions. These reactions are responsible for millions of hospitalizations and thousands of deaths each year in the United States. Identification and characterization of a large number of genetic polymorphisms (biomarkers) in metabolizing enzymes and transporters of drugs can provide a thorough understanding of the mechanisms of inter-individual differences in drug response. The use of new molecular technologies, in particular genome sequencing, diagnosis for assessing the genetic profile and assessing biomarkers of disease open new paths to individualize each patient's treatment plan, optimizing it’s results. This treatment schedule, while decreasing the number of adverse reactions avoids exposing the patient to a long-term therapy based on trial and error. For patients, personalized medicine holds the promise of more effective therapies with fewer side effects, and may thus spare the prospect of a treatment with significant adverse effects and little or no therapeutic effect Pharmacogenetics and pharmacogenomics are two areas that have emerged to investigate the individual variability in response to drugs. The pharmaceutical industry uses increasingly techniques related to pharmacogenetics and pharmacogenomics and the information that follows them to the process of drug development, promoting the prescription of appropriate medication in the right dose for each patient.

Orientador: Carmen Silvia Passos Lima Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A cisplatina (CDDP) associada à radioterapia (RT) é utilizada no tratamento de portadores de células escamosas de cabeça e pescoço (CCECP). Já é conhecido que tanto a resposta ao tratamento como seus efeitos colaterais variam de indivíduo para indivíduo. Uma possível explicação para o fato pode ser a variabilidade genética no metabolismo da CDDP. O objetivo deste estudo foi o de verificar se habilidades herdadas na apoptose de células pela via extrínseca, mediadas pelas enzimas FASL, FAS, CASP8 e CASP3, alteram os efeitos terapêuticos, colaterais e a concentração de CDDP urinária em pacientes com CCECP. Foram avaliados, de forma prospectiva, 90 pacientes consecutivos com CCECP do Hospital de Clínicas da UNICAMP, que receberam CDDP associada à RT como tratamento neoadjuvante, definitivo ou paliativo da doença. Os genótipos dos polimorfismos FASL C-844T, FAS G-1377A, FAS A-670G, CASP8 -652 6N Ins/ Del e CASP3 IVS1 -15G>T foram analisados por meio da reação em cadeia da polimerase e digestão enzimática em DNA de sangue periférico. A resposta ao tratamento foi avaliada por tomografia computadorizada do pescoço, de acordo com os critérios Response Evaluation Criteria in Solid Tumors 1.1 (RECIST 1.1). Os efeitos colaterais ao tratamento foram graduados por meio de questionário e exames laboratoriais, de acordo com os critérios do National Cancer Institute. As toxicidades renal e auditiva foram avaliadas por meio do clearance de creatinina estimado, da taxa de filtração glomerular com EDTA-51Cr e de audiometria tonal limiar, respectivamente, antes e após o tratamento. As dosagens urinárias da CDDP foram realizadas por cromatografia líquida de alta eficiência. O significado estatístico das diferenças entre grupos foi calculado pelo teste da probabilidade exata de Fisher ou qui-quadrado. A regressão logística múltipla foi feita para obter a razão das chances e a ANOVA por transformação em postos foi realizada para medidas repetidas. O genótipo FASL -844TT foi associado com maior frequência de anemia dos graus 2, 3 ou 4 e menor perda auditiva unilateral. O genótipo FAS -670GG foi associado com menor frequência de náuseas dos graus 2 ou 3, maior frequência de anemia dos graus 2, 3 ou 4, de linfopenia dos graus 3 ou 4 e maior perda auditiva unilateral. Já o genótipo FAS -670AG e o genótipo GG foram associados a menor frequência de linfopenia dos graus 3 ou 4 e maior perda auditiva unilateral. Nossos resultados sugerem que os polimorfismos FASL C-844T e FAS A-670G modulam os efeitos colaterais, como náuseas, mielossupressão e acuidade auditiva, em pacientes com CCECP tratados com CDDP e RT. Acreditamos que estes resultados possam contribuir para definir o tratamento personalizado futuro de pacientes com CCECP Abstract: Cisplatin (CDDP) associated with radiotherapy (RT) is used in treatment of patients with head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). It is well known that both response to treatment and side effects vary among individuals. A possible explanation for this may be the genetic variability in metabolism of CDDP. The aim of this study was to access if inherited ability of cells to apootose the extrinsic, mediated by enzimas FASL, FAS, CASP8 e CASP3 enzymes change the therapeutic side effects and urinary concentration of CDDP in HNSCC patients. We evaluated prospectively, 90 HNSCC patients of UNICAMP¿s Hospital, who received CDDP-associated RT as neoadjuvant, definitive or palliative treatment. Genotypes of FASL C-844T, FAS G-1377A, FAS A-670G, CASP8 -652 6N Ins/ Del e CASP3 IVS1 -15G>T polymorphisms were analyzed by polymerase chain reaction and restriction enzyme digestion of peripheral blood DNA. Treatment response was assessed by computed tomography of the neck, according to Response Evaluation Criteria in Solid Tumors 1.1 (RECIST 1.1). Treatment side effects were ranked through questionnaire and laboratory tests, according to the National Cancer Institute. Renal and hearing toxicities were assessed using, respectively, estimated creatinine clearance and glomerular filtration 51Cr-EDTA and pure tone audiometry, before and after treatment. Urinary doses of CDDP were performed by high performance liquid chromatography. Statistical significance of differences between groups was calculated by Fisher's exact probability test or chi-square. Multiple logistic regression was performed to obtain the odds ratio and ANOVA with rank-transform method for performed for repeated measurements. The FASL -844TT genotype was associated with higher frequency of grade 2, 3 or 4 anemia and lower unilateral auditory accuity loss. The FAS -670GG genotype was associated with lower frequency of grade 2 or 3 nausea, higher frequency of grade 2, 3 or 4 anemia, grade 3 or 4 linfopenia, and higher unilateral auditory accuity loss. The FAS -670AG and GG genotypes were associated with lower frequency of grade 3 or 4 linfopenia and higher unilateral auditory accuity loss. Our results suggest that the FASL C-844T e FAS A-670G polymorphisms modulate the side effects, such as nausea, mielossupression and auditory accuity in HNSCC patients treated with CDDP and RT. We believe that these results may subscribe to define the future personalized treatment of HNSCC patients Mestrado Clínica Médica Mestra em Clínica Médica

Introducción: La frecuencia cardiaca (FC) elevada en reposo es un factor de riesgo alto en pacientes con insuficiencia cardiaca y su control es una estrategia terapéutica en estos pacientes, en especial tras los estudios realizados con Ivabradina. La Ivabradina es un fármaco bradicardizante selectivo que inhibe la corriente If en el nódulo sinoauricular. Dos proteínas fundamentales en el efecto de la Ivabradina son el canal HCN4, codificado por el gen HCN4, por ser su diana farmacológica y el citocromo P450 isoforma 3A4 por ser la principal enzima que la metaboliza. A la vista de lo anterior, planteamos la hipótesis de que pueden existir variantes en las secuencias de estos genes que tengan algún efecto sobre la FC en los pacientes tratados con Ivabradina. Como fase preliminar para el desarrollo de esta hipótesis este estudio se plantea el desarrollo de la metodología que permita identificar variantes genéticas en los genes mencionados. Objetivos: Desarrollo de metodología para el análisis genético de HCN4 y de tres SNPs del gen CYP3A4. Métodos: Los métodos empleados incluyeron: diseño de cebadores específicos para los genes HCN4 y CYP3A4, optimización de condiciones de PCRs y de la reacción de secuenciación y análisis de las secuencias obtenidas. Para los pasos anteriores se han usado muestras de 11 pacientes en tratamiento con Ivabradina. Resultados: En el análisis de la secuenciación de todos los exones codificantes del gen HCN4 se han identificado las siguientes variantes sinónimas: L12L g1030C>G (rs201193660), L520L g39660C>T (rs12909882), P852P g45728G>C (rs117819825) y P1200P g46772A>G (rs529004). En relación con los 3 polimorfismos de CYP3A4 estudiados (*1B, *22 y *1G), se identificaron variaciones genotípicas en CYP3A4*1G (20% presentan la variante en heterocigosis). Conclusiones: La metodología desarrollada ha permitido la identificación de polimorfismos en ambos genes. La metodología desarrollada posibilita el estudio farmacogenético de respuesta a la Ivabradina en nuestro entorno que evalúe la relevancia funcional de estos polimorfismos. Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Biotecnoloxía avanzada. Curso 2013/2014

Resums pendents

Projeto de Pós-Graduação/Dissertação apresentado à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas A medicina personalizada tem, como objetivo principal, a maximização da eficácia e a minimização dos riscos de toxicidade das drogas farmacêuticas para cada indivíduo. Atualmente, uma das maiores contribuições para esta individualização das terapêuticas advém da farmacogenómica, vertente científica que estuda a forma como os genes interferem nas respostas dos organismos a uma determinada droga. Um dos grandes estímulos para o avanço da farmacogenómica foi a sequencição do genoma humano, facilitando o estudo do efeito das variações genéticas na formação das enzimas e proteínas correlacionadas com a metabolização e transporte pelo organismo das substâncias presentes nos medicamentos. A presente revisão bibliográfica tem como objetivo principal uma visão geral sobre o estado da arte da farmacogenómica, com a introdução dos seus conceitos básicos, exemplificação de como os polimorfismos genéticos podem modular a suscetibilidade do indivíduo a determinadas patologias ou influenciar a eficácia e a segurança terapêutica das mesmas e, ainda, entender a aplicabilidade destes conhecimentos na prática clínica. Para a sua elaboração foi realizada uma pesquisa bibliográfica entre Janeiro e Agosto de 2014, nas bases de dados Pubmed, ScienceDirect e Scielo. Dos artigos sujeitos aos critérios de inclusão foram selecionados 46 artigos base. Deste estudo bibliográfico pode concluir-se que a farmacogenómica se aproxima a passos largos, se não da individualização terapêutica pessoa a pessa, pelo menos da definição de grupos de indivíduos com perfis genéticos semelheantes, para os quais a resposta a fármacos é mais homogénea. Personalized medicine has as a main objective to maximize the effectiveness and minimizing the risk of toxicity of pharmaceutical drugs for each individual. Currently, one of the largest contributions to this individualization of therapies comes from pharmacogenomics, a science that studies how genes affect the responses of organisms to a given drug. A major stimulus for the advancement of pharmacogenomics was the sequencing of the human genome, which allowed the study of the effect of genetics variations in the formation of enzymes and proteins correlated with the metabolism and transport of drugs. This review aims to present an overview on the state of the art of pharmacogenomics, with the introduction of its basic concepts, how genetic polymorphisms may modulate individual’s susceptibility to certain diseases or influences the therapeutic efficacy and safety of drugs, and discuss the applicability of this knowledge in the clinical practice. A literature search was done between January and May 2014, performed in Pubmed, ScienceDirect and Scielo, resulting in the selection of 45 papers satisfying the inclusion criteria. From this bibliographical review it can be concluded that Pharmacogenomics has reached a state in which it makes possible, if not an individual tuning of the pharmaceutical regímen, at leats the definition of groupings of individuals with similar genetic profiles and a corresponding more homogeneous response to drugs.

A base genética das reacções alérgicas a fármacos pode relacionar -se com genes nas vias de activação ou inactivação que afectam a farmacocinética ou farmacodinâmica, no reconhecimento e resposta do sistema imunológico (imunogenética) ou nos mecanismos de lesão e reparação tecidular. O objectivo deste trabalho é apresentar uma revisão actua lizada da imunogenética das reacções alérgicas a fármacos, de acordo com o provável mecanismo fisiopatológico envolvido, com particular ênfase na relação entre determinados polimorfismos do HLA e a alergia do tipo IV. Para além de uma melhor compreensão dos mecanismos imunológicos, esta é uma área com imediata aplicabilidade clínica, como no caso da prevenção primária de reacção de hipersensibilidade ao abacavir através do rastreio do HLA-B*5701 e a outros fármacos, como a carbamazepina nas populações asiáticas. Numa área em que, cada vez mais, a investigação assume um carácter de cooperação internacional, o papel do especialista em Imunoalergologia é essencial para o correcto diagnóstico dos doentes com alergias a fármacos e registo das reacções em bases nacionais e internacionais. The genetic basis of drug allergy can be related to activation or inactivation pathways that affect the pharmacokinetics or pharmacodynamics, in the immune system recognition and response, or in the lesion and tissue repair mechanisms. The aim of this article is to present an up-to-date review of drug allergy immunogenetics according to the probable physiopathological mechanism involved, with particular emphasis on the relation between several HLA polymorphisms and type IV allergy. Besides a better understanding of the immunological mechanisms, this is a field with immediate clinical applicability, as in the primary prevention of abacavir-mediated hypersensitivity reactions through HLA -B*5701 screening, and of other drugs as carbamazepine in the Asian population. In a field where, more and more, investigation is performed with the need for international cooperation, the role of the Allergy and Clinical Immunology specialist is essential for the correct diagnosis of patients with drug allergy and registry in national and international databases.

Tesis Univ. Granada. Programa de Doctorado de Farmacia Asistencial

A farmacogenética (ou farmacogenômica) trata da influência dos fatores genéticos sobre a resposta aos medicamentos. Pacientes tomando uma dose padronizada de determinado medicamento podem não responder, responder apenas parcialmente ou experimentar reações adversas, e boa parte dessa variabilidade interindividual se deve a fatores genéticos ou hereditários. A farmacogenética busca identificar variações individuais que afetem o metabolismo ou o mecanismo de ação dos medicamentos, comprometendo sua eficácia ou segurança. Dessa forma, a contribuição terapêutica da farmacogenética é oferecer subsídios para a implementação da medicina personalizada, baseada nas características genéticas individuais.

La dopamina B-hidroxilasa cataliza la conversión de dopamina en norepinefrina y es blanco promisorio de intervenciones farmacológicas. Polimorfismos del gen DBH son responsables de las diferencias individuales en el tono dopaminérgico y adrenérgico de los sistemas nervioso central y autónomo. Ya que las mutaciones defectuosas de la enzima y sus frecuencias varían entre las etnias, se justifican los estudios conducentes a la caracterización genotípica y fenotípica de la enzima en mestizos colombianos.

El artículo explica la relación que debe existir entre la bioética y los derechos humanos para preservar la dignidad humana, específicamente en los casos de investigación científica y experimentación clínica con seres humanos; en tal sentido este analiza el Proyecto de Ley del expediente 17.777. A fin de legitimar la función crítica de la bioética, la filosofía ofrece una argumentación racional sobre la justicia que vincula ética y derecho This article explains the link that must exist between bioethics and human rights to preserve human dignity, especially in cases of scientific research and clinical experimentation with human beings; in this sense it analyzes the Proyecto de Ley del expediente 17.777. In order to legitimize the critical role of bioethics, philosophy provides a rational argument about justice that links ethics and law.

Introducción: la dopamina β-hidroxilasa cataliza la conversión de dopamina en norepinefrina y es blanco promisorio de intervenciones farmacológicas. Polimorfismos del gen DβH son responsables de las diferencias individuales en el tono dopaminérgico y adrenérgico de los sistemas nervioso central y autónomo. Ya que las mutaciones defectuosas de la enzima y sus frecuencias varían entre las etnias, se justifican los estudios conducentes a la caracterización genotípica y fenotípica de la enzima en mestizos colombianos. Métodos: determinamos las frecuencias de los alelos -2073C>T, -970C>T, 444A>G y 1603C>T del gen DβH en 143 adultos sanos, rasgos mestizos, ambos sexos y no consanguíneos. La genotipificación se hizo por PCR-real time y minisecuenciación (SnaPshot). Resultados: las frecuencias de los genotipos polimórficos fueron: -2073C>T (CC 61,5%, CT 32,9%, TT 5,6%), -970C>T (CC 49,6%, CT 43,4, TT 7%) y 444A>G (AA 42%, AG 41,2%, GG 16,8%). Las tres mutaciones están en desequilibrio de ligamiento (D'=1) pero no se sustituyen mutuamente (r²T, -970C>T, 444A>G and 1603C>T DβH gene in 143 healthy adults, mestizo features, both sexes and nonconsanguineous. PCR-real time and minisequencing (SnaPshot) tecnhiques were used for the genotyping. Results: the frequencies of polymorphic genotypes were: -2073C>T (CC 61,5%, CT 32,9%, TT 5,6%), -970C>T (CC 49,6%, CT 43,4, TT 7%) and 444A>G (AA 42%, AG 41,2%, GG 16,8%).The three alleles are in linkage disequilibrium (D'=1) but they do not replace each other (r²T, -970C>T, 444A>G e 1603C>T do gene DβH em 143 adultos sãos, traços mestiços, ambos sexos e não consanguíneos. A genotipificação se fez por PCR-real time e minisequência (SnaPshot). Resultados: as frequências dos genotipos polimórficos foram: -2073C>T (CC 61,5%, CT 32,9%, TT 5,6%), -970C>T (CC 49,6%, CT 43,4, TT 7%) e 444A>G (AA 42%, AG 41,2%, GG 16,8%). As três mutações estão em desiquilibrio de ligamiento (D'=1) mas não se substituem mutuamente (r²

Los objetivos de la presente Tesis doctoral fueron describir 1) la relación entre los genotipos CYP2D6 y CYP2C9 y el fenotipo hidroxilador de dextrometorfano y losartán en mestizos ecuatorianos, así como 2) las diferencias de estas variables entre esta población ecuatoriana y una española. Participaron 318 voluntarios sanos no emparentados de Ecuador. Se analizaron las variantes alélicas CYP2D6 (CYP2D6*2, *3, *4, *5, *6, *10, *17, *29, *35, *41, y el número de copias) y los alelos CYP2C9 (CYP2C9*2,*3, *4, *5, *6), así como, los niveles plasmáticos de dextrometorfano y su metabolito (dextrorfano), y los niveles urinarios de losartán y su metabolito ácido carboxílico (E3174). Sólo el 0,9% fueron clasificados como metabolizadores lentos y un 0% ultrarrápidos. Estos y las frecuencias de los alelos CYP2D6 nulas (14%) o de actividad aumentada (0.8%) fueron menores que en los españoles, a excepción de los alelos de función reducida (5,1%). Del mismo modo, las frecuencias de CYP2C9*2 (5,4%) y *3 (1,5%) también fueron más bajos que en la población española, y el índice urinario losartan/E3174 fue mayor en sujetos CYP2C9*1/*3 que en sujetos con genotipo CYP2C9*1/*1. Los datos indican que la variación interindividual de los fenotipos hidroxiladores de dextrometorfano y losartán está influenciada por los polimorfismos genéticos CYP2D6 y CYP2C9 en los ecuatorianos. Además, los resultados también muestran una variabilidad interétnica en el metabolismo de los substratos CYP2D6 y CYP2C9, dadas las diferencias encontradas entre los ecuatorianos y españoles., The present doctoral thesis was aimed at describing 1) the relationship between the CYP2D6 and CYP2C9 genotypes and the dextromethorphan and losartan hydroxylation phenotypes in Ecuadorian mestizos, as well as 2) the differences in these variables bewteen this Ecuadorian population and a Spanish one. The participants were 318 unrelated healthy volunteers from Ecuador. Genotyping of CYP2D6 (CYP2D6 *2, *3, *4, *5, *6, *10, *17, *29, *35, *41, and copy number) and CYP2C9 (CYP2C9*2, *3, *4, *5, *6) as well as the plasma levels of dextromethorphan and its metabolite (dextrorphan), and urinary losartan and its carboxylic acid metabolite (E3174) were analyzed. Only 0.9% and were classified as poor metabolizers and 0% was ultrarapid. These and the frequencies of CYP2D6 alleles related to null (14%) or increased activity (0.8%) were lower than in Spaniards, with the exception of that of reduced function alleles (5.1%). Similarly, the frequencies of CYP2C9*2 (5.4%) and *3 (1.5%) were also lower than in the Spanish population, and the urinary losartan/E3174 ratio was higher in CYP2C9*1/*3 carriers than in subjects with the CYP2C9*1/*1 genotype. Present data show that interindividual variation in dextromethorphan and losartan hydroxylation phenotypes is influenced by CYP2D6 and CYP2C9 genetic polymorphisms in Ecuadorians. Furthermore, results also show interethnic variability in the metabolism of CYP2D6 and CYP2C9 substrates, given the differences found between Ecuadorians and Spaniards.

En México habitan más de 62 grupos nativos, cuyo fondo genético es diferente a la población Mestiza Mexicana. Por lo tanto, es difícil inferir con claridad su respuesta a fármacos. La distribución de polimorfismos con implicaciones funcionales en las enzimas del CYP450, permitirá determinar el riesgo de toxicidad o falla terapéutica en éstas poblaciones. El objetivo del estudio fue determinar la frecuencia de polimorfismos en los genes CYP1A2, CYP2C9/19 y CYP3A4, en ocho poblaciones indígenas del noroeste de México. Se estudiaron 506 indígenas, en los que se determinó la frecuencia de CYP1A2*1F, CYP2C9*2, *3 y *6, CYP2C19*2 y *3 y CYP3A4*1B, mediante PCR-RFLP y PCR en tiempo real. Además, se estimó la ancestría mediante 15 marcadores STR. La frecuencia de CYP1A2*1F fue del 0.53 al 0.92. El alelo CYP2C9*2 solo se presentó en los Seris (0.026) y Mayos (0.057) y fue dependiente del componente ancestral europeo. CYP2C9*3 se presentó con una frecuencia del 0 al 0.104. La variante CYP2C19*2 se presentó con una frecuencia del 0.026 al 0.433. CYP2C9*6 y CYP2C19*3 no se detectaron en este estudio. CYP3A4*1B se observó con una frecuencia del 0 al 0.115. La frecuencia de los polimorfismos genéticos es diferente a la descrita en población Mestiza Mexicana y en población Asiática. Lo anterior tiene implicaciones terapéuticas importantes que deben considerarse para la optimización farmacológica en la población indígena mexicana., In Mexico inhabit more than 62 Native Amerindian groups, whose genetic background is different to the Mexican Mestiza population. Therefore, it is difficult to clearly infer their expected drugs response. The distribution of polymorphisms with functional implications in CYP450 enzymes, will determine the risk of toxicity or therapeutic failure in these populations. The aim of this study was to determine the frequency of polymorphisms in genes CYP1A2, CYP2C9/19 and CYP3A4, in eight indigenous populations from Northwest Mexico. A total of 506 indigenous were genotyped for the CYP1A2*1F, CYP2C9*2, *3 and *6, CYP2C19*2 and *3, and CYP3A4*1B, by PCR-RFLP assay and real-time PCR. Additionally, was to performed molecular evaluation of ancestry by 15 STRs markers. The frequencies for CYP1A2*1F were of 0.53 - 0.92. CYP2C9*2 was found only in Seris (0.026) and Mayos (0.057) indigenous groups, and was dependent on the European ancestral component. The frequency of CYP2C9*3 allele was 0 - 0.104. The CYP2C19*2 variant was found in range of 0.026 - 0.433. CYP2C9*6 and CYP2C19*3 were not detected in this study. CYP3A4*1B was detected with a frequency of 0 - 0.115. The allelic frequencies of CYP450 were different from those described in Mexican Mestizo and Asian population. These results have important therapeutic implications that should be considered for drug optimization in Mexican indigenous population.

[ES] En los últimos años diversos grupos médicos han realizado avances importantes en el campo de los trasplantes, logrando evitar en gran medida el rechazo agudo, pero tras el primer año, el éxito de los trasplantes no ha mejorado de forma sustancial. Los resultados de la investigación permiten suponer que la variabilidad genética y el estrecho índice terapéutico de los fármacos inmunosupresores, sería la causa de este rechazo. El proyecto Farmacogenética del trasplante: seguridad y eficacia de la terapia inmunosupresora, financiado por la Conselleria de Sanidad de la Comunidad Valenciana, intenta estudiar estas variaciones genéticas. En el marco de este proyecto, nos encontramos con la carencia de programas adecuados para realizar los análisis complejos que requiere el tratamiento de la información farmacogenética, y nos lleva al objetivo de esta tesina, que es el desarrollar un diseño informático para realizar consultas elaboradas, en tiempo real, con datos estadísticos de diferentes variables categorizadas; que permitan emitir valoraciones iniciales de los datos directamente, para poder relacionar los polimorfismos de los genes estudiados con: a) niveles plasmáticos de los fármacos inmunosupresores; b) eficacia del tratamiento; y c) reacciones adversas frente al mismo., [EN] Recent medical research have achieved the reduction of acute transplant rejection, however chronic rejection does not reveal the same improvement. Preliminary studies have shown that genetic factors may be implicated in the interindividual variability of the pharmacokinetic or pharmacodynamic characteristics of immunosuppressive drugs. The project Farmacogenética del trasplante: seguridad y eficacia de la terapia inmunosupresora, financed by the Conselleria de Sanidad de la Comunidad Valenciana, aims to investigate this genetic variations. During the development of the aforementioned project, the research team noticed the lack of appropriate software for data analysis. Thus, in this project framework the objective of the present master thesis is, to create software capable of caring out statistical analyses in real time. Therefore, by a unique evaluation of data the studied polymorphisms are directly related with: a) plasmatic levels in immunosuppressive drugs, b) efficiency of the treatment, and c) adverse reactions.

FACEPE; CNPq A infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) pode promover a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). Os antirretrovirais reduziram as mortes relacionadas a AIDS. Os antirretrovirais são absorvidos e metabolizados em diversas células. Existe variabilidade na resposta a esses medicamentos. Portanto, polimorfismos genéticos em vias farmacocinéticas podem afetar o resultado terapêutico. O objetivo do presente estudo foi avaliar se diferentes perfis genéticos estão relacionados com a falha virológica de antirretrovirais de primeira linha, definida como presença de carga viral detectável no sangue apesar de um ano de terapia. Foram recrutados 187 pacientes em tratamento na região metropolitana de Recife – PE para um estudo de caso controle (160 sucessos e 27 falhas). Foram analisadas variáveis clínicas e epidemiológicas, como sexo, idade e massa corporal, medicamentos prescritos, carga viral e contagem de células T CD4+. Sete polimorfismos em cinco genes (ABCB1, ABCC1, CYP2B6, SLC22A1 e SLCO3A1) foram genotipados. Não foram observadas associações entre os polimorfismos dos genes CYP2B6, SLC22A1 e SLCO3A1 com a falha virológica. Análises por regressão logística indicaram que polimorfismos nos genes ABCB1 (rs1045642) e ABCC1 (rs212091) estiveram significativamente associados com a ocorrência de falha de esquemas contendo inibidores de protease (OR=5,01, p=0,045 e OR=6,50, p=0,02, respectivamente). Os resultados poderão contribuir para o entendimento da variabilidade na resposta ao tratamento anti-HIV e ajudar a identificar pacientes em risco de falha, auxiliando na orientação da escolha do primeiro esquema terapêutico.

FACEPE e CNPq A Terapia Antirretroviral Altamente Ativa (HAART) é a única alternativa terapêutica eficaz para indivíduos que vivem com o vírus da imunodeficiência humana (HIV). Contudo, as reações adversas têm sido a maior limitação deste tratamento. A Farmacogenética investiga porque indivíduos diferentes respondem de forma desigual aos mesmos tratamentos. Assim, polimorfismos genéticos podem possuir papel importante no surgimento de reações adversas em pacientes em HAART. O objetivo do presente estudo foi investigar se a presença de polimorfismos genéticos estava envolvida com o desenvolvimento de reações adversas aos medicamentos anti-HIV. Foram selecionados 250 pacientes em tratamento em Recife-PE para um estudo caso-controle, cujas reações adversas mais frequentes foram: resistência à insulina, dislipidemia, erupção cutânea e neurotoxicidade. Foram levados em consideração oito polimorfismos em seis genes (RETN, APOB, APOA5, CCHCR1, NR1I2 e NR1I3), além de variáveis clínicas: idade, massa corporal, sexo e etnia. O alelo A do polimorfismo rs2307424 (G>A) no NR1I3 foi associado com menor susceptibilidade à neurotoxicidade (OR= 0,93 [0,54-1,6] e p= 0,01) do gene NR1I3. O genótipo G/G está associado com risco de neurotoxicidade (p=0,04). Não houve evidências de que polimorfismos nos genes RETN, APOB, APOA5, CCHCR1 e NR1I2 estejam associados com o desenvolvimento de reações adversas à HAART.

Cuando se habla de farmacogenética o polimorfismos es importante buscar el eslabón que vincule la ciencia básica con la práctica clínica. Existen muchos factores que pueden mediar en la respuesta medicamentosa tales como: la edad, función orgánica y metabólica del paciente, presencia de tratamientos concomitantes, posibles interacciones medicamentosas e inclusive el tipo de patología. El conocer las características genéticas individuales de la población, a partir de una serie de exámenes o procedimientos, facilitaría optimizar y ajustar dosis para una respuesta medicamentosa dada y/o tomar las previsiones necesarias con respecto al comportamiento fisiopatológico del paciente. El estudio de la farmacogenética evidencia el rol de la herencia (polimorfismo genético) en la respuesta individual a la terapia establecida facilitando seleccionar el fármaco y la dosis individual para cada paciente en su situación precisa.