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Estudios realizados durante las últimas tres décadas han revelado fuertes bases biológicas de la homosexualidad y transexualidad. Los objetivos de la presente investigación fueron validar el cuestionario de Conocimientos Biológicos de la Homosexualidad y Transexualidad (CBHT) en una muestra de estudiantes del área de la actividad física de México y describir estos conocimientos en la muestra evaluada. Para ello se encuestaron a 324 estudiantes de México aplicando una encuesta sociodemográfica y el cuestionario CBHT. Los resultados revelan índices adecuados de validez y confiabilidad del cuestionario CBHT en la muestra, que los niveles de conocimientos biológicos sobre estos temas son bajos y que las variables sociodemográficas que inciden en dichos resultados son el sexo y el tener un amigo/a o conocido/a homosexual o bisexual. Se recomienda continuar con la evaluación de muestras de estudiantes de otras carreras de pedagogía y de diferentes regiones de México. Abstract. Studies conducted over the past three decades have revealed strong biological bases for homosexuality and transsexuality. The objectives of this research were to validate the Biological Knowledge of Homosexuality and Transsexuality (BKHT) questionnaire in a sample of students from the area of physical activity in Mexico and describe this knowledge in the sample evaluated. To this end, 324 students from Mexico were surveyed using a sociodemographic survey and the BKHT questionnaire. The results reveal adequate indices of validity and reliability of the BKHT questionnaire in the sample, that the levels of biological knowledge on these topics are low and that the sociodemographic variables that affect these results are sex and having a friend/a known/a homosexual or bisexual. It is recommended to continue with the evaluation of samples of students from other pedagogy careers and from different regions of Mexico.