Search

Nádorový supresorový protein p53 patří mezi nejdůležitější regulátory buněčného cyklu při poškození DNA. Kromě zástavy buněčného cyklu a navození apoptózy, interaguje protein p53 s jinými proteiny a DNA. Mutace genu TP53 kódující protein p53 jsou společným znakem lidské rakoviny. Tato bakalářská práce zkoumá přírodní látky z čaje, které by mohly hrát pozitivní roli v aktivaci proteinu p53 u nádorových onemocnění a uplatnit se v podpoře léčby těchto onemocnění. V teoretické části bakalářské práce byly popsány sekundární struktury DNA, konkrétně struktura a vlastnosti G-kvadruplexů, dále protein p53 a jeho vazebná aktivita k sekundárním strukturám DNA. Byly popsány vybrané přírodní látky vyskytující se v čajích a potravinách – kyselina gallová a apigenin. Cílem experimentální části této práce bylo ověřit schopnost těchto látek interagovat s G-kvadruplexy in vitro a tím je stabilizovat v kvasinkovém modelu a posoudit následný vliv na intenzitu účinku transkativace proteinu p53. Interakce kvartérních struktur s G4 ligandy byla ověřena in vitro pomocí ThT fluorescenčního testu a luciferázového reportérového testu. Bylo zjištěno, že G4 ligandy o koncentraci 30 M po 20 hodinách inkubace nevykazovaly výraznější vliv na testované kvasinkové kultury. Při koncentraci G4 ligandů 60 M bylo pozorováno navýšení produkce proteinu p53, vlivem buněčného stresu způsobeného přítomností G4 ligandů., The tumor suppressor protein p53 belongs to the most important regulator of the cell cycle in case of DNA damage. Apart from stopping the cell cycle and inducing apoptosis, protein p53 interacts with other proteins and DNA. Mutation of the TP53 gene encoding the protein p53 are a common feature of human cancer. This Bachelor thesis investigates natural substances from tea which could play a positive role in the activation of protein p53 in cancer and be used to support the treatment of these diseases. In the theoretical part of the Bachelor thesis, the secondary structures of DNA were described, specifically the structure and properties of G-quadruplexes, as well as protein p53 and its binding activity to the secondary structure of DNA. Selected natural substances found in tea and food were described – gallic acid and apigenin. The aim of the experimental part of this work was to verify the ability of these substances to interact with G-quadruplexes in vitro and thus to stabilize them in the yeast model and to assess the subsequent effect on measuring the effect of protein p53 transactivation. The interaction of quaternary structures with G4 ligands was verified in vitro by using the ThT fluorescence assay and the luciferase reporter assay. It was found that G4 ligands at 30 M concentration after 20 hours of incubation did not show a significant effect on the tested yeast cultures. At a 60 M concentration of G4 ligands, an increase in protein p53 production was observed due to cellular stress caused by the presence of G4 ligands.

Nádorový supresorový protein p53 patří mezi nejdůležitější regulátory buněčného cyklu při poškození DNA. Kromě zástavy buněčného cyklu a navození apoptózy, interaguje protein p53 s jinými proteiny a DNA. Mutace genu TP53 kódující protein p53 jsou společným znakem lidské rakoviny. Tato bakalářská práce zkoumá přírodní látky z čaje, které by mohly hrát pozitivní roli v aktivaci proteinu p53 u nádorových onemocnění a uplatnit se v podpoře léčby těchto onemocnění. V teoretické části bakalářské práce byly popsány sekundární struktury DNA, konkrétně struktura a vlastnosti G-kvadruplexů, dále protein p53 a jeho vazebná aktivita k sekundárním strukturám DNA. Byly popsány vybrané přírodní látky vyskytující se v čajích a potravinách – kyselina gallová a apigenin. Cílem experimentální části této práce bylo ověřit schopnost těchto látek interagovat s G-kvadruplexy in vitro a tím je stabilizovat v kvasinkovém modelu a posoudit následný vliv na intenzitu účinku transkativace proteinu p53. Interakce kvartérních struktur s G4 ligandy byla ověřena in vitro pomocí ThT fluorescenčního testu a luciferázového reportérového testu. Bylo zjištěno, že G4 ligandy o koncentraci 30 M po 20 hodinách inkubace nevykazovaly výraznější vliv na testované kvasinkové kultury. Při koncentraci G4 ligandů 60 M bylo pozorováno navýšení produkce proteinu p53, vlivem buněčného stresu způsobeného přítomností G4 ligandů., The tumor suppressor protein p53 belongs to the most important regulator of the cell cycle in case of DNA damage. Apart from stopping the cell cycle and inducing apoptosis, protein p53 interacts with other proteins and DNA. Mutation of the TP53 gene encoding the protein p53 are a common feature of human cancer. This Bachelor thesis investigates natural substances from tea which could play a positive role in the activation of protein p53 in cancer and be used to support the treatment of these diseases. In the theoretical part of the Bachelor thesis, the secondary structures of DNA were described, specifically the structure and properties of G-quadruplexes, as well as protein p53 and its binding activity to the secondary structure of DNA. Selected natural substances found in tea and food were described – gallic acid and apigenin. The aim of the experimental part of this work was to verify the ability of these substances to interact with G-quadruplexes in vitro and thus to stabilize them in the yeast model and to assess the subsequent effect on measuring the effect of protein p53 transactivation. The interaction of quaternary structures with G4 ligands was verified in vitro by using the ThT fluorescence assay and the luciferase reporter assay. It was found that G4 ligands at 30 M concentration after 20 hours of incubation did not show a significant effect on the tested yeast cultures. At a 60 M concentration of G4 ligands, an increase in protein p53 production was observed due to cellular stress caused by the presence of G4 ligands.

Nádorový supresorový protein p53 patří mezi nejdůležitější regulátory buněčného cyklu při poškození DNA. Kromě zástavy buněčného cyklu a navození apoptózy, interaguje protein p53 s jinými proteiny a DNA. Mutace genu TP53 kódující protein p53 jsou společným znakem lidské rakoviny. Tato bakalářská práce zkoumá přírodní látky z čaje, které by mohly hrát pozitivní roli v aktivaci proteinu p53 u nádorových onemocnění a uplatnit se v podpoře léčby těchto onemocnění. V teoretické části bakalářské práce byly popsány sekundární struktury DNA, konkrétně struktura a vlastnosti G-kvadruplexů, dále protein p53 a jeho vazebná aktivita k sekundárním strukturám DNA. Byly popsány vybrané přírodní látky vyskytující se v čajích a potravinách – kyselina gallová a apigenin. Cílem experimentální části této práce bylo ověřit schopnost těchto látek interagovat s G-kvadruplexy in vitro a tím je stabilizovat v kvasinkovém modelu a posoudit následný vliv na intenzitu účinku transkativace proteinu p53. Interakce kvartérních struktur s G4 ligandy byla ověřena in vitro pomocí ThT fluorescenčního testu a luciferázového reportérového testu. Bylo zjištěno, že G4 ligandy o koncentraci 30 M po 20 hodinách inkubace nevykazovaly výraznější vliv na testované kvasinkové kultury. Při koncentraci G4 ligandů 60 M bylo pozorováno navýšení produkce proteinu p53, vlivem buněčného stresu způsobeného přítomností G4 ligandů., The tumor suppressor protein p53 belongs to the most important regulator of the cell cycle in case of DNA damage. Apart from stopping the cell cycle and inducing apoptosis, protein p53 interacts with other proteins and DNA. Mutation of the TP53 gene encoding the protein p53 are a common feature of human cancer. This Bachelor thesis investigates natural substances from tea which could play a positive role in the activation of protein p53 in cancer and be used to support the treatment of these diseases. In the theoretical part of the Bachelor thesis, the secondary structures of DNA were described, specifically the structure and properties of G-quadruplexes, as well as protein p53 and its binding activity to the secondary structure of DNA. Selected natural substances found in tea and food were described – gallic acid and apigenin. The aim of the experimental part of this work was to verify the ability of these substances to interact with G-quadruplexes in vitro and thus to stabilize them in the yeast model and to assess the subsequent effect on measuring the effect of protein p53 transactivation. The interaction of quaternary structures with G4 ligands was verified in vitro by using the ThT fluorescence assay and the luciferase reporter assay. It was found that G4 ligands at 30 M concentration after 20 hours of incubation did not show a significant effect on the tested yeast cultures. At a 60 M concentration of G4 ligands, an increase in protein p53 production was observed due to cellular stress caused by the presence of G4 ligands.

Nádorový supresorový protein p53 patří mezi nejdůležitější regulátory buněčného cyklu při poškození DNA. Kromě zástavy buněčného cyklu a navození apoptózy, interaguje protein p53 s jinými proteiny a DNA. Mutace genu TP53 kódující protein p53 jsou společným znakem lidské rakoviny. Tato bakalářská práce zkoumá přírodní látky z čaje, které by mohly hrát pozitivní roli v aktivaci proteinu p53 u nádorových onemocnění a uplatnit se v podpoře léčby těchto onemocnění. V teoretické části bakalářské práce byly popsány sekundární struktury DNA, konkrétně struktura a vlastnosti G-kvadruplexů, dále protein p53 a jeho vazebná aktivita k sekundárním strukturám DNA. Byly popsány vybrané přírodní látky vyskytující se v čajích a potravinách – kyselina gallová a apigenin. Cílem experimentální části této práce bylo ověřit schopnost těchto látek interagovat s G-kvadruplexy in vitro a tím je stabilizovat v kvasinkovém modelu a posoudit následný vliv na intenzitu účinku transkativace proteinu p53. Interakce kvartérních struktur s G4 ligandy byla ověřena in vitro pomocí ThT fluorescenčního testu a luciferázového reportérového testu. Bylo zjištěno, že G4 ligandy o koncentraci 30 M po 20 hodinách inkubace nevykazovaly výraznější vliv na testované kvasinkové kultury. Při koncentraci G4 ligandů 60 M bylo pozorováno navýšení produkce proteinu p53, vlivem buněčného stresu způsobeného přítomností G4 ligandů., The tumor suppressor protein p53 belongs to the most important regulator of the cell cycle in case of DNA damage. Apart from stopping the cell cycle and inducing apoptosis, protein p53 interacts with other proteins and DNA. Mutation of the TP53 gene encoding the protein p53 are a common feature of human cancer. This Bachelor thesis investigates natural substances from tea which could play a positive role in the activation of protein p53 in cancer and be used to support the treatment of these diseases. In the theoretical part of the Bachelor thesis, the secondary structures of DNA were described, specifically the structure and properties of G-quadruplexes, as well as protein p53 and its binding activity to the secondary structure of DNA. Selected natural substances found in tea and food were described – gallic acid and apigenin. The aim of the experimental part of this work was to verify the ability of these substances to interact with G-quadruplexes in vitro and thus to stabilize them in the yeast model and to assess the subsequent effect on measuring the effect of protein p53 transactivation. The interaction of quaternary structures with G4 ligands was verified in vitro by using the ThT fluorescence assay and the luciferase reporter assay. It was found that G4 ligands at 30 M concentration after 20 hours of incubation did not show a significant effect on the tested yeast cultures. At a 60 M concentration of G4 ligands, an increase in protein p53 production was observed due to cellular stress caused by the presence of G4 ligands.

Předmětem diplomové práce je produkce PHA kopolymerů termofilními gram-pozitivními bakteriemi rodu Aneurinibacillus. Teoretická část je věnována obecné charakterizaci PHA materiálů, jejich vlastnostem, využití a také produkci PHA polymerů bakteriemi. Experimentální část práce se zabývá produkcí PHA kopolymerů pomocí vybraných termofilních bakterií rodu Aneurinibacillus. Nejprve byla stanovena specifická enzymová aktivita PHA syntáz a poté byl proveden screening produkce PHA kopolymerů za využití vybraných laktonů (-valerolakton, -hexalakton, -valerolakton) a diolů (1,6-hexandiol, 2,3-butandiol a 1,4-butandiol). Tyto experimenty byly provedeny se šesti termofilními bakteriemi rodu Aneurinibacillus, které byly izolovány z kompostů a aktivovaných kalů. Testované kultury prokázaly schopnost inkorporace zajímavých monomerů do struktury PHA, mezi které patří 4-hydroxyvalerát (obsah dosahoval až 69,3 % celkového množství PHA), 5-hydroxyvalerát (až 47,1 %) nebo 4-hydroxyhexanoát (až 31,9 %). Následně byla pro vybrané bakteriální producenty realizována bližší charakterizace získaných PHA materiálů pomocí některých charakterizačních metod (DSC, SEC-MALS, FT-IR). Závěr experimentální části práce je věnován screeningu produkce PHA kopolymerů v laboratorních bioreaktorech pro nejspolehlivější producenty., The subject of the diploma thesis is the production of PHA copolymers by thermophilic Gram-positive bacteria of the genus Aneurinibacillus. The theoretical part is devoted to the general characterization of PHA materials, their properties, use, and also to the production of PHA polymers by these bacteria. The experimental part deals with the production of PHA copolymers using selected thermophilic members of the genus Aneurinibacillus. Firstly, the specific enzyme activity of PHA synthases was determined, and then the production of PHA copolymers was screened using selected lactones (-valerolactone, -hexalactone, -valerolactone) and diols (1,6-hexanediol, 2,3- butanediol and 1,4-butanediol). These experiments were performed with six thermophilic producers by the members of the genus Aneurinibacillus, which were isolated from compost and activated sludge. Tested microbial strains have demonstrated the ability to integrate interesting monomers into the PHA structure, including 4-hydroxyvalerate (represented up to 69.3% of the total PHA), 5-hydroxyvalerate (up to 47.1%), or 4-hydroxyhexanoate (up to 31.9%). Subsequently, a closer characterization of the obtained PHA (which were gained by the production of the best producers) using advanced methods (DSC, SEC-MALS, FT-IR) was performed. Finally, the screening of the PHA copolymers production was performed in laboratory bioreactors.