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Bovine lactoferrin (bLf) is known to damage the outer membrane of Gram-negative bacteria by binding to bacterial lipopolysaccharide (LPS). We report that LPS is released from bacterial outer membranes also when apo- or metal-saturated Lf is separated from bacterial cells by a dialysis membrane. This process occurs in phosphate-buffered saline with no added Ca[sup 2+] and Mg[sup 2+] and is hindered by addition of these cations. The effect of bLf is similar to that induced by EDTA and has been ascribed to chelation of Ca[sup 2+] . In fact, it may be envisaged that Ca[sup 2+] -binding sites on LPS have different affinities and that bLf can remove those ions that are more weakly bound. Ca[sup 2+] binding does not alter Lf iron-binding properties significantly or its UV and CD spectral features but brings about changes in the FT-IR bands due to carboxylate residues. Ca[sup 2+] binding is characterized by an apparent dissociation constant of 6 µM and a stoichiometry of 1.55 Ca[sup 2+] per Lf molecule; it enhances bLf stability towards chemical and thermal denaturation. The increase in stability takes place in both the apo- and iron-saturated forms but not in the desialilated protein, indicating that the carboxylate groups of the sialic acid residues present on two of the glycan chains are involved in Ca[sup 2+] binding.Key words: lactoferrin, calcium, antibacterial activity, lipopolysaccharides, protein stability, denaturation.La lactoferrine bovine endommage la membrane externe des bactéries à Gram négatif en se liant au lipopolysaccharide (LPS) bactérien. Dans cet article, nous montrons que le LPS est également libéré des membranes externes bactériennes lorsque la lactoferrine, libre ou saturée d'un ion métallique, est séparée des bactéries par une membrane à dialyse. Ce processus se produit dans un tampon phosphate ne contenant pas de Ca[sup 2+] ni de Mg[sup 2+] et il est entravé par l'addition de ces cations. L'effet de la lactoferrine bovine est semblable à celui de l'EDTA et il est attribué à la chélation du Ca[sup 2+] . On peut supposer que les sites de liaison du Ca[sup 2+] sur le LPS ont différentes affinités et que la lactoferrine bovine retire les ions qui y sont liés plus faiblement. La liaison du Ca[sup 2+] à la lactoferrine ne modifie pas significativement sa capacité de lier le fer, ni les caractéristiques de son spectre dans l'ultraviolet et de son spectre de dichroïsme circulaire, mais elle entraîne des changements des bandes du spectre infrarouge à transformée de Fourier attribuables aux groupes carboxyle. La liaison du Ca[sup 2+] se caractérise par une constante de dissociation apparente de 6 µM et une stoechiométrie de 1,55 ions Ca[sup 2+] par molécule de lactoferrine. Elle augmente la stabilité de la lactoferrine bovine envers la dénaturation chimique ou thermique. La stabilité de la lactoferrine libre ou saturée de fer est augmentée, tandis que celle de la protéine désialylée ne l'est pas, ce qui montre que les groupes carboxyle des résidus d'acide sialique de deux glycanes interviennent dans la liaison du Ca[sup 2+] .Mots clés : lactoferrine, calcium, activité antibactérienne, lipopolysaccharide, stabilité, protéine, dénaturation.[Traduit par la Rédaction] [ABSTRACT FROM AUTHOR]