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Quinolones and fluoroquinolones are widely used to treat uropathogenic Escherichia coli infections. Bacterial resistance to these antimicrobials primarily involves mutations in gyrA and parC genes. To date, no studies have examined the potential relationship between biochemical characteristics and quinolone resistance in uropathogenic E. coli strains. The present work analyzed the quinolone sensitivity and biochemical activities of fifty-eight lactose-negative uropathogenic E. coli strains. A high percentage of the isolates (48.3%) was found to be resistant to at least one of the tested quinolones, and DNA sequencing revealed quinolone resistant determining region gyrA and parC mutations in the multi-resistant isolates. Statistical analyses suggested that the lack of ornithine decarboxylase (ODC) activity is correlated with quinolone resistance. Despite the low number of isolates examined, this is the first study correlating these characteristics in lactose-negative E. coli isolates.

Orientador: Silvio Sanches Veiga Co-orientador: Waldemiro Gremski Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2006 Inclui bibliografia e anexos O loxoscelismo, que é o termo usado para determinar o envenenamento por picada de aranha marrom (gênero Loxosceles), tem como característica marcante o aparecimento de lesão dermonecrótica com espalhamento gravitacional e placa marmórea. Dentro os vários componentes que formam o veneno da aranha marrom, uma das moléculas mais estudadas é a esfingomielinase D, responsável pela dermonecrose. Por isso esta enzima em particular tem sido alvo de estudos de biologia molecular com o objetivo de clonagem e expressão. Nosso grupo de pesquisa produziu uma biblioteca de cDNA a partir de glândulas produtoras de veneno de L. intermedia e rastreando vários clones descobriu uma família de esfingomielinases denominadas LiRecDT (Toxina Dermonecrótica Recombinante de Loxosceles intermedia). Neste trabalho foram produzidos anticorpos policlonais em coelho e camundongo com a inoculação da isoforma L1RecDT1 e veneno total. Estes anticorpos foram utilizados para mostrar a reatividade cruzada entre os anticorpos que foram gerados para a LiRecDT1 ou veneno e as outras 4 isoformas clonadas e expressas (LiRecDT2, LiRecDT3, L1RecDT4 e LiRecDT5) e relacionou a reatividade com outros parâmetros como atividade esfingomielinásica, capacidade dermonecrótica e características histológicas da lesão como infiltrado infamatório. A reatividade com os anticorpos foi maior com a LiRecDTI, seguida pela LiRecDT2 e a LiRecDT3 teve a menor reatividade. Estes dados seguiram a mesma proporção para os parâmetros de dermonecrose e atividade esfingomielinásica e infiltrado infamatório. As LiRecDT4 e LiRecDT5 foram também testadas resultando uma reatividade intermediária, onde a LiRecDT4 teve atividade esfingomielinásica e dermonecrótica maior que a LiRecDT5, porém menor que a LiRecDT1 e muito próxima da LiRecDT2. Este trabalho também buscou a clonagem de uma sexta isoforma de proteína dermonecrótica, a LiRecDT6. Esta enzima foi rastreada da mesma biblioteca, contudo se apresentava de forma incompleta faltando uma parte da fração 5'. Para se obter o cDNA completo se realizou uma técnica de 5' RACE usando-se mRNA obtido de extrato de glândula produtora de veneno de L. intermedia. Com o auxílio desta técnica foi possível se obter o cDNA completo e comprovando-se a existência de uma sexta isoforma de esfingomielinase D no veneno de L. intermedia, reforçando dados publicados pelo grupo e da literatura sobre a existência de uma família de proteínas dermonecróticas intra-espécie. Loxoscelism (the condition produced by the bite of brown spiders) has been reported worldwide, but especially in warmer regions. Clinical manifestations include skin necrosis with gravitational spreading while systemic loxoscelism may include renal failure, hemo!ysis and thrombocytopenia. The venom contains several toxins, of which the best biochemicaNy and biologically studied is the dermonecrotic toxin, a sphyngomyelinase. Purified toxin induces cutaneous and systemic loxoscelism, especially necrotic lesions, hematotogical disturbances and renal faNure. Herein, we describe cloning, heterologous expression and purification of two novel isoforms of the dermonecrotic toxin: L,RecDT4 and LiRecDT5. The recombinant proteins stably expressed in Escherichia coli cells were purifled from culture supernatants in a single step using Ni2-chelating chromatography producing soluble proteins of 34kDa (LiRecDT4) and 37kDa (LiRecDT5). Both proteins were recognized by whole venom serum antibodies and by a specific antibody to dermonecrotic toxin. Also, recombinant isoforms with lipase activity induced experimental skin lesions and caused a massive inflammatory response in rabbit skin dermis. Nevertheless, recombinant toxins displayed differential activities of platelet aggregation, increase in vascular permeability as well as not caused death in mice. These characteristics in combination with funttional studies iliustrates that a family of dermonecrotic toxins exists, and includes two novel members that are useful for future structural and functíonal studies. They will also be useful in biotechnological ends, for example, as inflammatory and platetet aggregating studies and antigens for serum therapy source.

Submitted by Ivani Silva (ivsilva@uepg.br) on 2022-03-04T16:21:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Celio Cordeiro.pdf: 1470517 bytes, checksum: 7e3a1b9c3799e7062122859e3a7daa01 (MD5) Made available in DSpace on 2022-03-04T16:21:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Celio Cordeiro.pdf: 1470517 bytes, checksum: 7e3a1b9c3799e7062122859e3a7daa01 (MD5) Previous issue date: 2021-12-15 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A hipertensão é uma doença crônica que atinge cerca de 21,4% da população mundial, apresentando um aumento da prevalência significativo durante o final do século XX e é uma das principais causas de morte no mundo. O controle da hipertensão pode refletir a diminuição da mortalidade e melhora na qualidade de vida da população. Desta forma, desenvolver tratamentos para o controle da pressão arterial (PA) é de suma importância. Neste contexto, a estimulação transcraniana por corrente contínua (ETCC) é uma técnica de modulação neuronal cuja eficiência e segurança já foram comprovadas através de estudos realizados para o tratamento de diversas doenças. Entretanto, poucos são os estudos que avaliam os efeitos da ETCC no sistema cardiovascular. Este estudo teve como objetivo verificar os efeitos de sessão única de ETCC anódica no controle autonômico cardíaco em indivíduos pré- hipertensos durante um teste incremental realizado até a exaustão. Foram selecionados 9 participantes com PA sistólica entre 121 mmHg e 139 mmHg e a PA diastólica entre 81 mmHg e 89 mmHg, sendo submetidos a ETCC anódica e sham, seguido de teste incremental máximo (TiMÁX). A PA foi aferida em cinco momentos, após 10 minutos de repouso e 15, 30, 45 e 60 minutos após TiMÁX. Também foi analisado o tempo até a exaustão. Para este parâmetro não foi observada diferença significativa entre os tempos dos participantes das sessões ETCC e do sham. Quanto a variabilidade da frequência cardíaca (VFC) para domínio do tempo, quando analisado o RMSSD, foi encontrada diferença significativa apenas no fator tempo em relação ao repouso. Do mesmo modo, a frequência cardíaca apresentou diferença significativa apenas no fator tempo em relação ao repouso para o procedimento com 2 mA. Quando analisado o domínio da frequência para VFC foi possível verificar diferença significativa para LF, HF e razão LF/HF comparando o repouso o procedimento com 2 mA. Contudo, nenhuma diferença foi encontrada quando comparada as sessões com ETCC (2 mA) e sham. Analisando os resultados utilizando o valor de delta (∆) para pressão artéria sistólica (PAS) e pressão arterial diastólica (PAD) foi possível observar que a ETCC não tem efeito significativo sobre a PAD, mas apresentou efeito significativo sobre a PAS. Assim, foi possível concluir que a ETCC não possui efeito sobre a VFC quando comparado o procedimento com 2mA e sham, entretanto possui os dados obtidos sugerem um efeito hipotensor, sendo necessário novos estudos para explorar o efeito agudo e um possível efeito crônico. Hypertension is a chronic disease that affects approximately 21.4% of the world's population, increases its prevalence significantly during the late twentieth century and is one of the main causes of death in the world. Controlling hypertension may reflect a reduction in mortality and an improvement in the population's quality of life. Therefore, developing treatments to control blood pressure (BP) is of paramount importance. In this context, transcranial direct current stimulation (tDCS) is a neuronal modulation technique whose efficiency and safety have already been proven through studies carried out for the treatment of various diseases. However, there are few studies that assess the effects of tDCS on the cardiovascular system. This study aimed to verify the effects of a single session of anodic tDCS without cardiac autonomic control in necessary pre-hypertensive patients during an incremental test performed until exhaustion. Nine participants were selected with systolic BP between 121 mmHg and 139 mmHg and diastolic BP between 81 mmHg and 89 mmHg, with an anodic and sham tDCS being obtained, followed by a maximum incremental test (TiMAX). BP was measured in five moments, after 10 minutes of rest and 15, 30, 45 and 60 minutes after TiMAX. Time to exhaustion was also analyzed. For this parameter, no difference was observed between the times of the participants in the tDCS and the sham. As for heart rate variability (HRV) for the time domain, when analyzing the RMSSD, a difference was found only in the time factor in relation to rest. Likewise, the heart rate observed difference only in the time factor in relation to rest for the procedure with 2 mA. When analyzing the frequency domain for HRV, it was possible to verify the explanatory difference for LF, HF and LF / HF ratio comparing the rest procedure with 2 mA. However, no difference was found when comparing tDCS (2 mA) and sham sessions. Analyzing the results using the delta (∆) value for systolic blood pressure (SBP) and diastolic blood pressure (DBP) it was possible to observe that a tDCS does not have a significant effect on a DBP, but it did have a significant effect on a SBP. Thus, it was possible to conclude that tDCS has no effect on HRV when compared to the 2mA and sham procedure, however, the data have a hypotensive effect, requiring further studies to explore the acute effect and a possible chronic effect.

Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2019-07-10T14:21:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Marcelo de França Machado.pdf: 2738826 bytes, checksum: 1445b76d5268dae284bfaccbf03410d7 (MD5) Made available in DSpace on 2019-07-10T14:21:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Marcelo de França Machado.pdf: 2738826 bytes, checksum: 1445b76d5268dae284bfaccbf03410d7 (MD5) Previous issue date: 2019-03-11 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Este estudo teve por objetivo avaliar a melhora da condição cardiorrespiratória, percepção da qualidade de vida e memória de usuários de álcool e outras drogas, em tratamento, em uma Comunidade Terapêutica, após a aplicação de um Programa de Exercícios Físicos (PEF) realizado em oito semanas. Os participantes (n=33) foram distribuídos, a partir de sua adesão voluntária, ao PEF em dois grupos: grupo Voluntário (n=19) que participou do PEF; e o grupo controle (n=14) que não participou. As avaliações de massa, VO2máx, percepção da qualidade de vida e da memória foram feitas em dois momentos do estudo, no início e no final das oito semanas do PEF. De acordo com os resultados das avaliações, os indivíduos que participaram do PEF alcançaram melhoras significativas em todas as variáveis avaliadas. O aumento do VO2máx no grupo que participou do PEF físicos foi aproximadamente 13 vezes maior se comparado ao aumento no grupo controle. Na avaliação da memória em relação ao início e o final da intervenção, os participantes do PEF obtiveram um ganho de aproximadamente 16% quando comparados ao grupo controle. Na percepção da qualidade de vida, as diferenças foram em média 16% maiores no grupo que participou do PEF, chegando a 21% no domínio referente a percepção do ambiente que estavam. Conclui-se que um PEF é uma ferramenta de auxilio no tratamento de usuários de álcool e outras drogas, podendo colaborar na melhora da reabilitação dos processos cognitivos de aprendizagem e memória, e da percepção da qualidade de vida dos dependentes em tratamento. Essas melhorias proporcionadas pelo PEF, podem acelerar os resultados terapêuticos positivos e contribuir para a manutenção da sobriedade dos indivíduos durante o tratamento. This study has aimed to evaluate improvements in the cardiorespiratory condition and the perception of life quality and memory of alcohol and other drugs users, under treatment in a Therapeutic Community, after being submitted to a Physical Exercise Program (PEP), carried out in eight weeks. The participants (n = 33) were divided into two groups, starting from their voluntary accede to the PEP: voluntary group (n = 19), those who participated in the PEP and the Control group (n = 14) of those who did not participate. The evaluations of mass, VO2max and perception of life quality and memory were carried out in two moments of the study: at the beginning and at the end of the eight weeks of the PEP period. According to the results of the evaluations, the individuals who participated in the PEP have achieved significant improvements in all variables evaluated. The increase in VO2max in the group that participated of the PEP was, approximately, 13 times higher when compared to the increase of the Control group. In the memory evaluation, comparing the beginning and the end of the intervention, the participants of the PEP obtained, approximately, 16% of gain when compared to the Control group. In the perception of life quality, the differences were, on average, 16% higher for the group that participated of PEP, reaching 21% in the domain related to the perception of the environment where they were. It is concluded that a PEP is a tool of the great help in the treatment of alcohol and other drugs users, may collaborating in the rehabilitation improvements of the cognitive processes of learning and memory and perception of the life quality for dependents in treatment. These improvements provided by the PEP can accelerate positive therapeutic outcomes and contribute to the maintenance of the individuals' sobriety during treatment.

Orientador: Prof. Dr. Luiz Claudio Fernandes Coorientadora: Profa. Dra. Marcia Helena Appel Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa : Curitiba, 02/07/2018 Inclui referências: p.45-56 Resumo: Introdução: Doenças inflamatórias intestinais (DII) são doenças crônicas do tipo autoimune e inflamatória que lesionam e comprometem funcionalmente o sistema gastrointestinal. Desta forma, modelos de colite experimental são usados afim de estudar a patogênese e possíveis tratamentos para a DII. O óleo de peixe é um promissor tratamento complementar para a DII devido a sua função antiinflamatória e imunomodulatória. Objetivo: Verificar se o óleo de peixe previne colite experimental. Metodologia: Ratos Wistar jovens foram tratados oralmente com 2g/ kg/dia de óleo de peixe por 30 dias antes da indução de colite experimental com TNBS (ácido trinitobenzeno sulfônico). Os animais continuaram recebendo óleo de peixe até serem eutanasiados em dois ou sete dias após a colite com TNBS. Analisamos muco intestinal com histologia AB/PAS e muco fecal com ácido siálico. A permeabilidade intestinal foi determinada com FITC-Dextan e a inflamação com mieloperoxidase (MPO). A microscopia eletrônica de transmissão foi utilizada para observar com maior detalhe a arquitetura do epitélio intestinal. E a cromatografia líquida de alta performance (HPLC) para determinar perfil dos ácidos graxos. Resultados e Conclusão: A colite com TNBS reduziu o conteúdo de muco histológico e fecal, aumentou a atividade da MPO, indicando alta atividade inflamatória no tecido, e promoveu perda da arquitetura epitelial, com maior espaçamento intercelular e maior permeabilidade intestinal. Em adição, o óleo de peixe não preveniu estes achados. Contudo, após sete dias de colite com TNBS, os animais tratados com óleo de peixe tiveram resolução da arquitetura epitelial, com maior conteúdo de muco histológico e menor atividade inflamatória no tecido, no entanto, o tecido continuava funcionalmente comprometido dada a alta permeabilidade intestinal. Desta forma, o óleo de peixe promoveu a recuperação da mucosa intestinal após a colite com TNBS. Palavras-chave: Doenças inflamatórias intestinais. Óleo de peixe. Ômega-3. TNBS. Colite. Abstract: Introduction: Inflammatory bowel diseases (IBD) are inflammatory and autoimmune diseases of the gastrointestinal sytem that damage and impair its functions. Therefore, experimental colitis have been used to study pathogenesis and potential treatments of IBD. One potential complementary treatment is fish oil due its anti-inflammatory and immunomodulatory functions. Aim: To verify whether fish oil prevents inducedcolitis damages or not. Methodology: Young Wistar rats were orally supplemented with 2 g/kg/day of fish oil for 30 days before induced-colitis with TNBS (2,4,6- Trinitrobenzenesulfonic acid). Animals continued receiving fish oil after TNBS-colitis and were euthanatized after 2 and 7 days of TNBS-colitis. Mucus content was visualized with AB/PAS positive histology and determined in feces with sialic acid assay. Intestinal permeability was determined with FITC-Dextran and tissue inflammation with myeloperoxidase (MPO). High performance liquid chromatography (HPLC) was used to determine fatty acids profile and electron transmission microscopy to visualize colonic epithelium. Results and Conclusion: TNBS-colitis damaged the epithelium colonic architecture, reducing AB/PAS positive histology and feces mucus content. Higher MPO activity and intestinal permeability were also found. In addition, fish oil did not prevent these colonic disruptions, but enhanced the resolution of epithelium architecture and reduced MPO activity after seven days of colitis. However, tissue functionality remained impaired given higher intestinal permeability. Therefore, fish oil enhances colon mucosa resolution after experimental colitis. Keywords: Inflammatory bowel disease. Fish oil. Omega-3. TNBS. Colitis.

Orientador: Prof. Dr. Luiz Cláudio Fernandes Coorientadora: Profa. Dra. Marcia Helena Appel Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa : Curitiba, 19/01/2018 Inclui referências: p.54-66 Resumo: Introdução: Ácidos graxos poli-insaturados ômega 3 (AGPI n-3) têm sido utilizados como coadjuvantes no tratamento do câncer. Objetivo: Investigar o efeito da suplementação com 4g/dia de pacientes com câncer de mama por 14 dias antes da cirurgia com um óleo de peixe com concentração elevada de ácido eicosapentaenóico (EPA) chamado Hi-n3. Para tanto foram analisados função linfocitária e parâmetros metabólicos. Material e métodos: Ensaio clínico controlado com pacientes do sexo feminino (18-80 anos de idade), com câncer de mama e em tratamento no Hospital Erasto Gaertner em Curitiba-PR, foram divididas em dois grupos, não suplementadas (GC) e suplementadas com Hi-n3 (Hi-n3) por 14 dias previamente ao procedimento cirúrgico. Os experimentos foram conduzidos no tempo 0, antes da introdução da suplementação (T0) e 15 ao final do período de suplementação e antes da cirurgia (T15). Nos dois momentos foram coletadas amostras de sangue para determinação dos parâmetros hematológicos e para o isolamento de linfócitos. O plasma foi usado para mensurar parâmetros bioquímicos e outros parâmetros associados à caquexia relacionada ao câncer. E os linfócitos foram cultivados para determinação da proliferação e isotipados. Resultados: No GC os AGPI permaneceram inalterados, já no Hi-n3 houve alterações significativas (p0.05 Hi-n3 T0 vs. T15). Em relação aos parâmetros bioquímicos referentes à caquexia, a suplementação com Hi-n3 ocasionou redução significativa na concentração de lactato, triacilgliceróis (TAG) e proteína C reativa (PCR) (p 0.05 Hi-n3 T0 vs. T15). In relation to the biochemical parameters related to cachexia, supplementation with Hi-n3 caused significant reduction in the concentration of lactate, triacylglycerols (TAG) and Creactive protein (CRP) (p

Orientador: Prof. Dr. Luiz Cláudio Fernandes Coorientadora: Profa. Dra. Márcia Helena Appel Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa : Curitiba, 07/03/2018 Inclui referências: p.60-66 Resumo: Lactacao e considerada um periodo critico do desenvolvimento para o organismo sendo uma das janelas de programacao metabolica. Intervencoes hormonais ou nutricionais nesta fase podem pre-dispor o organismo a doencas na idade adulta, em especial a obesidade. Associado a obesidade estao diversas comorbidades, das quais se destacam a resistencia a insulina e alteracoes no metabolismo da glicose. O exercicio fisico atua como fator preventivo e de tratamento, capaz de promover alteracoes teciduais que levam a perda de peso e melhora da responsividade a insulina. O presente trabalho investigou o metabolismo da glicose no tecido muscular esqueletico (ME) e adiposo visceral em ratos obesos-induzidos por reducao de ninhada e os efeitos do exercicio fisico cronico precoce nestes animais. Ninhadas de ratos Wistar foram padronizadas em 10 filhotes por ninhada ate o 3o dia de vida, posteriormente foram reajustadas em Grupo Controle (C), 10 filhotes e Grupo Obeso-induzido (OB), 3 filhotes por ninhada. Aos 21 dias houve o desmame e a subdivisao em 4 grupos: controle sedentario (CS), controle exercitados (CE), obeso-induzido sedentario (OBS) e obeso-induzido exercitado (OBE). O protocolo de exercicio fisico consistiu em natacao 3x/semana/30min. Avaliou-se ganho de massa corporal (lactacao e 22-90 dias) e consumo alimentar (22-90 dias). Aos 85 dias foi realizado teste de tolerancia a insulina (ITT). Apos ortotanasia, 90 dias, amostras de tecido foram dissecadas, pesadas e armazenadas. Parametros plasmaticos de glicemia, colesterolemia e triacilglicerolemia foram mensurados. Musculo soleo e tecido adiposo perigonadal foram submetidos a incubacao na presenca ou ausencia de insulina (10mU/ml) com adicao de glicose (5,6 mM), 0,1 uCi / ml de D-[U-14C] glicose e 0,1 uCi / ml de 2-desoxi-D-[3H] glicose, para avaliacao da producao de lactato total e radiomarcado. A expressao proteica do GLUT4(soleo e tecido adiposo) e do PPAR?(depositos viscerais de gordura) foram determinados. O % de acido graxo (AG) do plasma, figado e gorduras perigonadal, retroperitoneal e mesenterica foi identificado e quantificado por HPLC. O conteudo de glicogenio muscular e dos depositos de gordura foi mensurado. Os dados foram expressos como media } SEM, submetidos a analise de variancia ANOVA de duas vias, tendo como fatores a obesidade e exercicio, (pos teste Bonferroni entre pares selecionados) e Teste t de Student's (p

Orientador: Prof. Dr. Luiz Cláudio Fernandes Coorientadora: Profa. Dra. Marcia Helena Appel Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa : Curitiba, 30/08/2017 Inclui referências: p. 60-70 Resumo: A obesidade tem sido apontada como um dos maiores desafios enfrentados pela saúde pública no último século, devido a seu evidente caráter patogênico. Diabetes mellitus tipo 2, hipertensão arterial, AVC e infarto agudo do miocárdio são algumas das doenças originadas a partir desta, que já é considerada uma epidemia, devido ao grande número de pessoas que afeta. Evidências indicam que a estratégia mais eficaz para sobrepujar esta situação é a mudança de hábitos, como a adição de exercícios físicos à rotina diária e/ou modificações na dieta, de maneira que a ingesta calórica não exceda seu gasto. Em vista disso, nosso trabalho teve como objetivo investigar: 1) O efeito crônico do exercício físico em parâmetros morfológicos, bioquímicos e metabólicos de ratos que foram ou não induzidos à obesidade; 2) Avaliar o efeito do destreinamento sobre as adaptações promovidas pelo exercício ao longo do tempo. Os experimentos foram divididos em dois grupos segundo a idade dos animais: G60 - animais de 60 dias e G90 - animais de 90 dias. G60 e G90 foram subdivididos em animais controle (G60C e G90C), e animais de ninhada reduzida (G60R e G90R). Estes subgrupos foram novamente subdivididos segundo a prática de exercício ou sedentários (G60CSED, G60CEXE, G60RSED, G60REXE e G90CSED, G90CEXE, G90RSED, G90REXE). Os grupos EXE realizaram três treinos por semana, durante 6 semanas, em dias alternados, com duração de 30 minutos e carga adaptada a cada animal individualmente, sendo 5% da massa corporal. A coleta de tecidos do grupo G60 ocorreu aos 60 dias de vida, enquanto o grupo G90 passou por período de destreinamento entre 60 e 90 dias, e a coleta dos tecidos deste grupo foi realizada aos 90 dias de vida. Ao final do estudo, não foi verificada diferença significativa no conteúdo de tecido adiposo branco (TAB) entre sedentários e exercitados de G60, porém notou-se que os grupos obesos exercitados de G60 apresentaram maior sensibilidade à insulina (p

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franciane Gomig.pdf: 1491620 bytes, checksum: 9e4413251eb0f4e70622124b18ded1a5 (MD5) Previous issue date: 2013-04-16 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Urinary tract infections show a high incidence in the population, mainly in women, the elderly and pregnant women. The main etiological agent is E. coli, especially in Community infections. Antimicrobial therapy is performed extensively with the Quinolones and resistance emergence is striking and upward. It is known E. coli resistance mechanisms are related with QRDR (Quinolone Resistance Region Determining) mutations in gyrA and parC genes that are the drug targets. These genes encode respectively DNA Girase and Topoisomerase IV subunits responsible for DNA supercoiling and DNA decatenating. Another resistance mechanism that come from plasmids is qnr genes encoding a protein that can protect DNA girase and Topoisomerase IV. Another plasmidial gene is aac(6´)-Ib-cr encoding an aminoglycoside acetyltransferase that can inactivate ciprofloxacin and norfloxacin. This study analyzed 58 E. coli lactose negative samples from urine, in order to draw a profile of resistance in this population from the region of Ponta Grossa and analyze the resistance mechanisms involved. There was a high resistance rate of 48%, among which 79% were resistant to all quinolones tested: nalidixic acid, ciprofloxacin, norfloxacin and ofloxacin. There was also a direct relationship between the biotypes 971 and resistance in contrast to biotype 981 and sensitivity. Therefor Quinolones are not recommended in infection due to E. coli biotype 971. On molecular analysis on the multiresistant samples mutations with aminoacid substitution were found in three positions: the gyrA gene at codons 83 and 87 and in the parC gene at codon 80 in three strains and at codon 84 on a single strain. Mutations only at gyrA gene appeared for a sample resistant just to nalidixic acid. These facts are according to the theory of mutations accumulation causing increased resistance to quinolones. Plasmidial genes qnr and aac(6´)-Ib-cr were not found in these strains. As infecções do trato urinário mostram uma elevada ocorrência na população, especialmente em mulheres, gestantes e idosos. O principal agente etiológico é a E. coli, principalmente nas infecções de origem comunitária. A terapia com antimicrobianos é realizada extensivamente com Quinolonas e o aparecimento de resistência é marcante e ascendente. Os principais mecanismos de resistência conhecidos em E. coli estão relacionados a mutações nas QRDR (Região Determinante de Resistênbcia a Quinolonas) dos genes gyrA e parC, codificadores de subunidades das enzimas DNA Girase e Topoisomerase IV, respectivamente. Essas enzimas, que são os alvos de ação das Quinolonas, são responsáveis pelo superespiralamento e decatenação do DNA. Os genes plasmidiais que também estão envolvidos nos mecanismos de resistência são os qnr que codificam proteínas protetoras das enzimas alvo e o aac(6´)-Ib-cr, que codifica uma enzima aminoglicosídio acetiltransferase capaz de inativar a ciprofloxacina e norfloxacina. Neste trabalho foram analisadas 58 amostras de E. coli lactose negativas provenientes de urina, a fim de se traçar um perfil de resistência nessa população da região de Ponta Grossa e analisar os mecanismos de resistência envolvidos. Observou-se uma elevada taxa de resistência de 48%, dentre as quais 79% foram resistentes a todas as quinolonas testadas: ácido nalidíxico, ciprofloxacina, norfloxacina e ofloxacina. Pode-se observar também uma relação direta entre os biótipos 971 e uma maior resistência e o biótipo 981 e uma maior sensibilidade, motivo pelo qual não seria recomendável o uso de Quinolonas para o tratamento de infecções causadas por E. coli biótipo 971. Pela análise molecular, para as amostras multirresistentes, foram encontradas mutações com substituição de aminoácido nos genes gyrA nos códons 83 e 87 e no gene parC uma única mutação, sendo essa no códon 80 para três cepas e no códon 84 para uma cepa. Mutações apenas no gene gyrA apareceram para amostras resistentes somente ao ácido nalidíxico. Esses dados estão de acordo com a teoria de que o acúmulo de mutações leva a um aumento da resistência às quinolonas. Os genes plasmidiais qnr e aac(6´)-Ib-cr não foram encontrados.

Orientadora : Profª. Drª. Lia Sumie Nakao Orientadora : Profª. Drª. Marcia Helena Appel Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2013 Inclui referências Área de concentração :Biologia Resumo: Quiescina/sulfidril oxidase isoforma 1b (QSOX1b) é uma enzima secretada, e catalisadora da oxidação de proteínas nascentes e mal dobradas. Esta oxidação induz a formação de pontes dissulfeto, que são cruciais para a conformação e estabilidade de diversas proteínas. A literatura propõe que a oxidação de proteínas intra e extracelular, ou aquelas de superfície celular, acarreta em mudanças no estado redox destes microambientes, e também em alterações conformacionais das micro e macroestruturas proteicas. Baseado nisso, tivemos como objetivo analisar o papel de QSOX1b recombinante de camundongo (mQSOX1b) como possível oxidase da fibronectina (FN), uma glicoproteína dimérica de matriz extracelular (MEC). Através das determinações de peróxido de hidrogênio e de tióis em ensaios cinéticos com mQSOX1b e FN reduzida (redFN), in vitro, constatamos que redFN é oxidada pela enzima. A constante de Michaelis menten medida foi de aproximadamente 456 nM (com uréia) e 290 nM (sem uréia). redFN, per se, auto fibrila, produzindo multímeros solubilizados por deoxicolato (DOC), contudo, verificamos que mQSOX1b acelera a formação destes multímeros. Estas estruturas fibrilares possuem massa molecular maior que 800 kDa, e são desfeitas por agentes redutores, mas não são desfeitas por DOC (2%), indicando que são mantidas por pontes dissulfeto. Os multímeros não afetam a interação de redFN com gelatina, como indicado por imunoensaio. Coatings com multímeros de FN (nativa e reduzida) não alteraram a capacidade adesiva de Rasm (células musculares lisas de aorta de rato), HeLa (células de câncer cervical, Henrietta Lacks) ou 3t3 (Fibroblasto de camundongo), contudo, a proliferação foi aumentada quando Rasm e HeLa foram incubados sobre natFN junto a mQSOX1b. Ao analisar a superexpressão da mQSOX1b sobre o estado redox da MEC e superfície celular nas linhagens Hek293t (células de rim de embrião humano para transfecção) e HeLa, pudemos constatar a promoção do estado mais oxidado para estes ambientes. Sendo assim, propomos para QSOX1b funções biológicas sobre a formação e remodelamento de componentes da MEC, aqui demonstrado especificamente sobre FN. Sendo assim, a presença de QSOX1 pode estar associada com o controle do crescimento e sobrevivência celular, tanto em situações fisiológicas quanto patológicas. Palavras chaves: Quiescina/Sulfidril Oxidase 1b (QSOX1b); Matriz extracelular (MEC); Fibronectina (FN); oxidação; estado redox. Abstract: Quiescin/Sulfhydryl Oxidase isoform 1b (QSOX1b) is a secreted enzyme, and catalyzes the oxidation of nascent and misfolded proteins. This oxidation leads to the formation of disulfide bonds which are critical to the conformation and stability of various proteins. The literature suggests that oxidation of intra-and extracellular proteins or those at cell surface leads to changes in the redox state of these microenvironments, as well as conformational changes in the protein micro and macrostructure. Based on that, we aimed to analyze the role of mouse recombinant QSOX1b (mQSOX1b) as a possible oxidase for fibronectin (FN), a dimeric glycoprotein of the extracellular matrix (ECM). In vitro, through enzyme kinetics assays and measurement of thiols in the presence of mQSOX1b and reduced FN (redFN), we found that redFN is oxidized by the enzyme. The KM values found were approximately 456 nM (urea) and 290 nM (without urea). FN multimers are also generated by auto fibrillation and can be solubilized by deoxycholate (DOC), however, we found that the QSOX1b accelerates the formation of these multimers. These fibrillar structures have molecular mass greater than 800 kDa, and are lost in the presence of reducing agents but not DOC (2%), indicating that multimers are maintained by disulfide bonds. The multimers forms no affect the gelatin-redFN interaction, indicated by ELISA. Coatings with multimers of FN (native and reduced FN) did not alter the adhesive capacity of Rasm, HeLa or 3T3, however, the proliferation was increased when Rasm and HeLa were incubated on natFN along mQSOX1b. Analyzing mQSOX1b overexpression influence on the ECM redox state and cell surface protein thiols at HEK293T and HeLa cells, we found more oxidized state for these environments. Therefore, we propose as biological functions to QSOX1b the formation and remodeling ECM components, here specifically FN. Thus, the presence of QSOX1 may be associated with cellular growth and survival control, probably in physiological and pathological conditions. Keywords: Quiescin/sulfhydryl oxidase 1b (QSOX1b), extracellular matrix (ECM), fibronectin (FN); oxidation; redox state.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karin Cristina.pdf: 1779954 bytes, checksum: fa7540fc1601cdb177d071d632782f2e (MD5) Previous issue date: 2009-10-05 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Chemical fertilizers and pesticides have become an important part of modern agriculture. The use of these chemical brought great benefits but also created new problems, such as disposal after use, persistence over time and accumulation in the environment, resulting significant bad consequences to public health and adverse impact on ecosystems. Maize culture deserves attention because the large amount of herbicides used. Mesotrione is a new selective herbicide developed for use in maize culture. Due it has not been used for a long time, there is little information available on the ecotoxicological risk. Only two mesotrione-degrading strains, from soil and water, both the genus Bacillus, were isolated and identified. The aim of this study was to isolate and characterize endophytic and epiphytic bacterial strains collected from maize leaves, able to biodegrade the herbicide mesotrione. Samples were collected in maize planting variety Penta without treatment with mesotrione and maize planting variety DKB 234 treated with mesotrione, at Fazenda Escola Capão da Onça, Ponta Grossa, PR. The microorganisms were isolated and cultured in mineral medium supplemented with mesotrione as sole carbon source. Of the twenty samples were isolated 347 tolerant and/or mesotrione-degrading strains. These were selected in increasing concentrations of the herbicide and had their degradation capability evalueted by VIS spectrophotometry. Ten strains were able to grow in the presence of high concentrations of mesotrione. Of these, 9 strains (7 epiphytic and 2 endophytic) were isolated from maize variety Penta without treatment with mesotrione and only 1 epiphytic strain was isolated from maize variety DKB 234 treated with mesotrione. Five strains had the ability to degrade the herbicide confirmed. One strain was identified as Acinetobacter baumanii and other as Micrococcus luteus. Just M. luteus is an endophytic strain, the others are maize epiphytics. Four mesotrione-degrading strains were isolated from maize untreated with mesotrione, only one strain of Gram-negative bacilli non fermenter was isolated from maize treated with the herbicide. The growth in high concentration of the strains that didn’t have the mesotrione degradation capability detected by spectrophotometry indicates the possibility of these strains degrade this herbicide when in association with other microorganisms consortia in the environment. The real quantitative capability of mesotrione degradation by the strains recorded by spectrophotometry may be underestimated due to the accumulation of degradation products which have the same wavelength as the mesotrione. This study reports the first isolation and characterization of mesotrione degrading strains endophytic and epiphytic from maize. Os adubos químicos e pesticidas tornaram-se parte integral da agricultura moderna. O emprego destas substâncias químicas trouxe grandes vantagens, mas também criou novos problemas, como a eliminação após o uso, a persistência ao longo do tempo e o acúmulo no ambiente, acarretando conseqüências adversas consideráveis à saúde pública e um impacto negativo nos ecossistemas. A cultura do milho merece atenção pela elevada quantidade de herbicidas usados. O mesotrione é um novo herbicida seletivo utilizado na cultura do milho. Devido sua introdução recente, há pouca informação referente ao risco ecotoxicológico do mesotrione e de seus produtos de degradação. Apenas duas linhagens bacterianas do gênero Bacillus, degradadoras do mesotrione, provenientes do solo e da água, já foram isoladas e identificadas. O objetivo deste estudo foi isolar e caracterizar linhagens bacterianas endofíticas e epifíticas, isoladas das folhas de milho, com capacidade de biodegradar o herbicida mesotrione. As coletas foram realizadas em plantação de milho variedade Penta sem tratamento com o herbicida mesotrione e em plantação de milho variedade DKB 234 com tratamento com o herbicida, na Fazenda Escola Capão da Onça, Ponta Grossa, PR. Os microrganismos foram isolados e cultivados em meio mineral com mesotrione como única fonte de carbono. Das vinte coletas foram isoladas 347 linhagens bacterianas tolerantes e/ou degradadoras. Estas foram selecionadas em concentrações crescentes do herbicida e tiveram sua capacidade de degradação investigada por espectrofotometria visível. Dez linhagens capazes de crescer na presença de altas concentrações do herbicida foram avaliadas. Destas, 9 linhagens (7 epifíticas e 2 endofíticas) foram isoladas de milho variedade Penta sem tratamento com o herbicida mesotrione e 1 foi isolada de milho variedade DKB 234 com tratamento com mesotrione. Cinco linhagens tiveram a capacidade de degradar o herbicida comprovada. Uma linhagem foi identificada como Acinetobacter baumannii e outra como Micrococcus luteus. Somente Micrococcus luteus é uma linhagem endofítica, sendo as demais epifíticas do milho. Quatro linhagens degradadoras foram isoladas de plantação de milho sem tratamento prévio com mesotrione; apenas uma linhagem de bacilo Gram-negativo não fermentador foi isolada de plantação sob tratamento com o herbicida. O crescimento, em alta concentração, das linhagens que não tiveram a capacidade de degradação do mesotrione detectada pela espectrofotometria indica a possibilidade destas linhagens participarem da degradação deste herbicida quando associadas com outros microrganismos em consórcios no ambiente. A capacidade quantitativa real de degradação do mesotrione pelas linhagens investigadas registrada pela espectrofotometria pode estar subestimada devido ao acúmulo dos produtos de degradação que possuem o mesmo comprimento de onda no espectro de absorção que a molécula de mesotrione. Este trabalho é o primeiro relato de isolamento de linhagens bacterianas degradadoras do herbicida mesotrione epifíticas e endofíticas de milho.