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Many environmental factors such as soil, temperature and gravity influence plant development. The aim of this research was to evaluate the effects of hypergravity on Eruca sativa Mill. (Rocket plant). A centrifuge was used to perform hypergravity experiments. Rocket plant seeds were placed on germination paper followed by the addition of water, and subsequently subjected to intermittent hypergravity (8h hypergravity followed by 16h rest), repeated over four days. Total germination and size of seedling were evaluated before and after being cultivated in soil in a natural environment. Results showed that root growth was greater in the centrifuge group than the control group. The growth of shoots after transference to soil was also found to be higher than the control group. Additionally, the centrifuge group of rocket seeds germinated 1% more and had a material mass of almost 20% more than the control group

Hypericum perforatum is a traditional medicinal plant with wound healing and antidepressant properties. Efficiency of micropropagation is often related to the long term maintenance of tissues in culture, which may alter the secondary metabolism of plants. The objective of this study was to evaluate growth and secondary metabolism of in vitro shoots of H. perforatum on short and long term maintenance of cultures (30 and 100 days). The effect of BA and NAA supplementation was evaluated during 30 days of culture. Adventitious shoots were cultivated on MS medium supplemented with 4.4mM BA alone or in combination with 0.05mM NAA for 30 days. A hormone-free medium was used as control. Shoots cultivated for 100 days were maintained in presence of 4.4mM BA. Biomass, multiplication of shoots, contents of phenolic compounds, flavonoids and hypericin were evaluated. No difference between BA and BA+NAA was observed on growth, multiplication of shoots and levels of flavonoids at the end of 30 days of culture. Production of phenolic compounds was promoted by addition of BA+NAA to the medium, whereas hypericin was increased by the presence of BA. The time of culture (30 and 100 days) affected all the parameters analyzed, except the levels of flavonoids in the short term experiment. Hypericum perforatum é uma planta medicinal que apresenta propriedades cicatrizante e antidepressiva. Frequentemente, a eficiência da micropropagação está relacionada à manutenção dos tecidos em cultura por longos períodos, o que pode alterar o metabolismo secundário das plantas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o crescimento e o metabolismo secundário de brotações adventícias de H. perforatum mantidas por diferentes tempos de cultivo (30 e 100 dias). O efeito da adição de BA e ANA foi avaliado no período de 30 dias. As brotações foram cultivadas em meio MS suplementado com 4,4mM BA como único regulador ou em combinação com 0,05mM ANA, por 30 dias. Um meio de cultivo sem adição de reguladores foi utilizado como controle. As brotações cultivadas por 100 dias foram mantidas em presença de 4,4mM BA. A biomassa, a multiplicação dos brotos, as concentrações de compostos fenólicos, flavonoides e hipericina foram os parâmetros avaliados. Nenhuma diferença entre a adição de BA ou BA+ANA foi observada quanto ao crescimento, ao número de brotos e aos níveis de flavonoides ao final de 30 dias de cultivo. Diferenças neste período foram detectadas nos níveis de compostos fenólicos e de hipericina quando os brotos foram cultivados em presença de BA+NAA e de BA, respectivamente. O tempo de cultivo (30 e 100 dias) afetou todos os parâmetros avaliados, com exceção dos níveis de flavonoides no período de 30 dias.

O tomateiro (Solanum lycopersicum) ? constantemente atacado por diversos pat?genos, levando a perdas de produtividade. Dentre os principais pat?genos, destaca-se o fungo Alternaria solani que causa a doen?a ?pinta-preta? (?Early blight?), capaz de reduzir a produ??o e/ou levar ? forma??o de frutos de baixa qualidade. Devido ? grande susceptibilidade do tomateiro a pat?genos, as pr?ticas agr?colas incluem o uso intensivo de agroqu?micos que resultam, frequentemente, em tomates com altos n?veis residuais de pesticidas. A promo??o do crescimento e da defesa vegetal utilizando microrganismos representa uma ferramenta para o manejo do tomateiro. Dentre as diversas rizobact?rias com capacidade de modular o crescimento e a defesa vegetal, o g?nero Streptomyces vem se destacando. Estas bact?rias s?o capazes de sintetizar mol?culas que interferem tanto diretamente no crescimento, como a auxina e a ACC desaminase, quanto indiretamente, atrav?s da produ??o de antibi?ticos e sider?foros. Pretendeu-se, neste trabalho, selecionar isolados de Streptomyces (CLV04, CLV05 e CLV07) com capacidade de promover a germina??o e o crescimento de plantas de tomate, al?m de aumentar a resist?ncia vegetal contra A. solani. Os resultados demonstram que o CLV07 causou retardo na germina??o, mas n?o reduziu a taxa final de germina??o. Apesar das rizobact?rias CLV04, CLV05 e CLV07 produzirem elevados n?veis de auxina, elas causaram a redu??o do crescimento tanto da raiz quanto da parte a?rea de pl?ntulas de tomate cultivadas in vitro. O CLV07 foi eficiente na promo??o da defesa de plantas de tomate contra A. solani. Todas as rizobact?rias apresentaram antagonismo por competi??o, reduzindo o crescimento do mic?lio do fungo A. solani. Considerando todos os resultados, as diferentes bact?rias Streptomyces foram prejudiciais ? germina??o e ao crescimento inicial de pl?ntulas de tomate. Desta forma, n?o ? recomend?vel a utiliza??o destas bact?rias em sementes e pl?ntulas jovens. Contudo, o CLV07 apresenta potencial para ser utilizado para a indu??o de resist?ncia de plantas de tomate contra o pat?geno A. solani. Tomato (Solanum lycopersicum) cultures are frequently attacked by many pathogens, leading to yield losses. Among the pathogens, the fungus Alternaria solani (?Early blight? disease) can cause significant yield reductions and decreases the fruit quality. Due to the high susceptibility of tomato to fungal pathogens, the agricultural practices include the intensive use of agrochemicals, which may result in fruits with high levels of residual pesticides and higher production costs. The promotion of plant defense system represents an additional tool for disease control and plant growth management. Some rhizobacteria have been shown the ability to affect plant development and modulate plant defense against pathogens. Among those bacteria, the genus Streptomyces is able to synthesize molecules that directly interfere with growth, through auxin and ACC deaminase production, and indirectly, through antibiotics and siderophores synthesis. The aim of this work was to select Streptomyces (CLV04, CLV05 and CLV07) with the ability to promote seed germination and plant growth, as well as improve tomato plant resistance against A. solani. Results showed that CLV07 delayed the initial seed germination, but it did not impair the final germination process. However, CLV04, CLV05 and CLV07 reduced the early root and shoot growth. All these rhizobacteria produced high auxin levels. CLV07 was efficient for inducing plant resistance against A. solani. Furthermore, all CLVs showed antagonism by competition, decreasing the A. solani growth. Taking together all results, Streptomyces tested were deleterious for seed and initial plant growth, but CLV07 showed a potential to be used for inducing plant resistance. However, the inoculation of these rhizobacteria on seeds is not recommended. Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES

A batata destaca-se como o terceiro alimento mais consumido no mundo. Apesar de sua alta produtividade, in?meros problemas fitossanit?rios v?m causando perdas na quantidade e na qualidade do produto. Sua alta suscetibilidade a pat?genos, como a bact?ria necrotr?fica Pectobacterium atrosepticum, tem levado ao uso indiscriminado de agrot?xicos, causando danos ao meio ambiente e ? popula??o humana. Estudos com indutores de resist?ncia vegetal t?m representado uma alternativa para o controle de doen?as em algumas culturas atrav?s da promo??o do sistema inato de defesa contra pat?genos. Compreender as modifica??es no metabolismo vegetal relacionado ? defesa possibilita a avalia??o e o desenvolvimento de novos recursos e produtos para o manejo fitossanit?rio.Este trabalho teve por objetivo avaliar alguns dos mecanismos envolvidos no metabolismo de defesa de Solanum tuberosum em resposta ? fitopabact?ria Pectobacterium atrosepticum e aos indutores XTH e ASM. Para tal, foram realizadas an?lises de atividade das enzimas antioxidantes super?xido dismutase (SOD), catalase (CAT) e ascorbato peroxidase (APx), das enzimas relacionadas ao metabolismo de defesa, polifenoloxidase (PPO), peroxidase (POX), fenilalanina am?nia liase (PAL), e das prote?nas relacionadas ? pat?genese, ?-1,3-glucanase e quitinase. Foi determinado tamb?m o ac?mulo de compostos fen?licos e de ?cido salic?lico (AS), al?m da avalia??o da manifesta??o da doen?a provocada pela fitobact?ria em folhas pr?-tratadas com XTH. Os resultados demonstraram que o indutor XTH foi capaz de retardar a progress?o e os sintomas da doen?a provocados pela bact?ria P. atrosepticum em folhas de batata.Os indutores XTH e ASM promoveram a ativa??o das enzimas antioxidantes, assim como a indu??o de enzimas relacionadas ? defesa, anteriormente e posteriormente ? inocula??o de P. atrosepticum, diferindo do padr?o de resposta observado nas folhas tratadas apenas com a bact?ria patog?nica. Al?m disso, foi observado um aumento dos n?veis de AS livre nas folhas tratadas apenas com a fitobact?ria, diferindo dos outros tratamentos. A partir destes resultados conclui-se que o indutor XTH promove resist?ncia contra a bact?ria necrotr?fica P. atrospeticum atrav?s da ativa??o e modula??o do metabolismo de defesa em S. tuberosum. The potato is the third most important consumed food in the world. Despite its high productivity, many pest problems cause losses in the quantity and quality of the product. Its high susceptibility to pathogens such as the necrotrophic bacteria Pectobacterium atrosepticum, has led to the indiscriminate use of pesticides, causing damage to the environment and human population. Studies of plant resistance inducers represent an alternative for disease control in some cultures by promoting innate defense system against pathogens. Understanding the changes in plant metabolism related to defense enables the evaluation and development of new strategies and products to disease control. This work aimed was to evaluate some of the mechanisms involved in defense metabolism of Solanum tuberosum in response to the phytobacteria Pectobacterium atrosepticum as well as to the XTH and ASM elicitors.To this end, we analyzed the activities of antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and ascorbate peroxidase (APx), enzymes related to defense metabolism, polyphenol oxidase (PPO), peroxidase (POX), phenylalanine ammonia lyase (PAL), and pathogenesis-related proteins, ?-1,3-glucanase and chitinase. It was also determined the synthesis of phenolic compounds and salicylic acid (SA), and the assessment of disease progression caused by the phytobacteria in leaves pretreated with XTH. Our results showed that the elicitor XTH was able to delay the disease progression and symptoms caused by the bacteria P. atrosepticum.The elicitors ASM and XTH promoted the activation of the antioxidant enzymes, as well as the induction of certain enzymes related to defense before and after the bacterial inoculation, differing from the response pattern observed in the leaves treated only with P. atrosepticum. In addition, we observed an increase in free SA levels in leaves treated only with the phytobacteria, differing from the other treatments. In conclusion, the elicitor XTH promotes resistance to the necrotrophic bacteria P. atrospeticum by the defense metabolism activation and modulation of S. tuberosum.

Apesar da batata ser um dos alimentos mais consumidos do mundo, a sua produ??o apresenta s?rias dificuldades devido a doen?as causadas por fungos, bact?rias e v?rus, reduzindo a produtividade e aumentando os custos de produ??o. Assim, este trabalho teve por objetivo analisar os mecanismos envolvidos na defesa cruzada de Solanum tuberosum cv. ?gata, atrav?s a a??o de indutores bi?ticos no metabolismo de fenilpropan?ides. Plantas jovens de S. tuberosum mantidas em casa de vegeta??o foram aspergidas com indutores de defesa: extratos autoclavados de Xanthomonas axonopodis e de Ceratocystis fimbriata, al?m do indutor sint?tico Bion?. Ap?s cinco dias do tratamento, as plantas foram desafiadas com o fungo patog?nico Rhizoctonia solani, sendo analisados o progresso da doen?a e os par?metros bioqu?micos: compostos fen?licos totais, flavon?ides quercet?nicos e atividade das enzimas polifenoloxidase e peroxidases. As plantas tratadas com o indutor XTH foram resistentes ao pat?geno at? 21 dpi. O indutor bi?tico XTH foi mais eficiente que o Bion? e CTS na promo??o da resist?ncia vegetal. A atividade mais elevada da POX foi observada em 9 dpi com o tratamento XTH. A inocula??o de R. solani causou o aumento progressivo da atividade da PPO nas plantas dos tratamentos XTH e controle. Os indutores CTS e Bion? causaram a diminui??o da atividade de PPO ao longo do experimento. Os n?veis dos compostos fen?licos e dos flavonoides foram similares entre todos os tratamentos. As plantas foram mais suscet?veis ao pat?geno R. solani quando aspergidas previamente com CTS ou Bion?. O XTH apresenta um bom potencial de utiliza??o como indutor de resist?ncia, retardando o progresso da doen?a e promovendo a resist?ncia contra R. solani. Rhizoctonia solani is a pathogenic ubiquitous fungus in Solanum tuberosum cultures, causing severe losses in production. Plant resistance can be induced by molecules that promote natural plant defense system. In the present study, the efficiency of the inducers Acibenzolar-Smethyl (BION?), Ceratocystis fimbriata extract and Xanthomonas axonopodis extract against the pathogenic fungus Rhizoctonia solani in potato plants was evaluated. Plants treated with the inducer XTH were resistant to the pathogen at 21 dpi. The biotic inducer XTH was more efficient than Bion? and CTS on promoting plant resistance. The highest activity of POX was observed at 9 dpi on the XTH treatment. Inoculation of R. solani caused a progressive increase in the PPO activity in XTH- and control-plants. Both inducers CTS and Bion? caused a reduction on PPO activity over time. Levels of phenolics compounds and flavonoids were similar among all treatments. Plants were more susceptible to R. solani when induced with CTS or Bion?. XTH did not show a negative effect on plant resistance. XTH presented a good potential as inducer, delaying disease progression and promoting plant resistance against R. solani.

A esp?cie Solanum tuberosum ? uma das esp?cies vegetais de maior import?ncia no mundo, sendo a batata o quarto alimento mais consumido. Por?m, apesar do uso extensivo de pesticidas, esta cultura ainda ? muito afetada por doen?as, acarretando grandes perdas econ?micas. Uma importante alternativa ao uso de qu?micos para o manejo das pragas, ? o fortalecimento das defesas naturais da planta atrav?s da promo??o de seus mecanismos de defesa. Neste trabalho foi avaliada a incid?ncia da doen?a causada por Pectobacterium carotovorum e o metabolismo vegetal relacionados ? defesa, tal como atividade das enzimas peroxidases (POX) e polifenoloxidases (PPO), s?ntese de compostos fen?licos, flavonoides e o ac?mulo de ?cido salic?lico (AS) livre e conjugado. Foram utilizados os indutores de defesa XTH e o Bion?, bem como o bloqueador da s?ntese de etileno, AVG (aminoetoxivinilglicina), em plantas de batata cultivadas in vitro. O tratamento com Bion? n?o promoveu a resist?ncia vegetal nas plantas inoculadas com P. carotovorum. Enquanto o uso do XTH foi eficiente na promo??o de resist?ncia das plantas, retardando o progresso da doen?a causada pela fitobact?ria. Em plantas cultivadas na presen?a de Bion+AVG, foi observado um aumento na atividade de PPO em compara??o com o controle, por?m a atividade desta enzima ? semelhante entre os tratamentos XTH e Bion?. Nas plantas do tratamento XTH+AVG a atividade da PPO se mant?m semelhante ?s plantas do controle e do tratamento XTH. A atividade da POX foi promovida pelo tratamento Bion? em 24 horas p?s-inocula??o (hpi), enquanto que os tratamentos XTH+AVG e Bion+AVG induziram a maior atividade desta enzima em 72 hpi. Apesar das diferen?as observadas nas atividades de PPO e POX, estas n?o apresentaram rela??o com a incid?ncia da doen?a nas plantas. Em geral, os n?veis de AS livre nos tecidos foi 65% maior que o AS conjugado. Em 24hpi, as plantas do tratamento Bion+AVG apresentaram os maiores n?veis de AS livre (52,2 μg/g), enquanto os o tratamento XTH e AVG apresentaram os menores n?veis de AS (4,87 e 4,82 μg/g, respectivamente). Solanum tuberosum is one of the most important crops worldwide being the fourth most consumed food. Despite its importance, this crop presents a high susceptibility to a wide range of pathogens, leading to an extensive yield loss. A potential approach for disease control in potato is the understanding of the mechanisms of resistance induction and their relation to strengthening of natural plant defenses. In this work, the effect of defense inducers (XTH and Acibenzolar-S-methyl - Bion?) and ethylene blocker (aminoethoxyvinylglycine AVG) in the plant metabolism was assessed. Biochemical markers for plant defense, such as POX and PPO enzymes, synthesis of phenolic compounds, flavonoid fraction and salicylic acid accumulation were also evaluated. Bion? resulted in a negative effect upon P. carotovorum inoculated plants, whilst XTH delayed disease progression. Plants cultivated in the presence of Bion+AVG showed an increase in PPO activity comparing to the control plants, although its activity was similar between XTH and Bion? plants. POX activity was promoted by Bion? at 24 hpi, however, at 72 hpi plants showed higher POX activity within XTH+AVG and Bion+AVG treated plants, compared with non-treated plants. In general, plants presented free SA levels 65% higher than conjugated one. The highest concentrations of SA (52.2 μg/g) was found in Bion+AVG treated plants, whilst the lowest concentrations (4.8 μg/g) were found in XTH and AVG treated plants.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Luehea divaricata Mart. & Zucc., is a native species, found in the Atlantic Forest and Pampa biomes in Rio Grande do Sul state, Brazil, belonging to the Malvaceae family. Considering the need for recovery and restoration of degraded areas, the demand for seeds and seedlings of native species may register significant increases, and the contribution of research studies to native species will be of great importance for both the forestry and the environmental sectors. This study aimed to research the quality of seeds, the development of methodologies for micropropagation and in vitro conservation of Luehea divaricata and isolation of genomic DNA of the species. Physiological and sanitary quality tests of seeds stored in Kraft paper inside refrigerator, in two different periods, collected from different places of its natural habitat, were conducted. The development of methodologies for micropropagation studies were divided in different experiments, testing at first, the response of cultures initiated from epicotyl, to stimuli from different sources and concentrations of cytokinin on in vitro multiplication. Afterwards, the pulse effect treatment with concentrations of IBA on the rooting ability of in vitro nodal segments cultivated in nutrient medium MS or WPM were tested both presence or absence of activated charcoal. For acclimatization of micropropagated plants, the effect of different concentrations of sucrose in the nutrient medium WPM and two kinds of commercial substrates were evaluated. The effect of the, osmotic regulator, mannitol, presence or absence sucrose, on the performance of in vitro nodal segments, aimed at in vitro conservation of germplasm was also observed. Three protocols were tested to isolate genomic DNA from young leaves, proving its efficiency and quality by spectrophotometry quantification and digestion with the Hind III restriction endonuclease. The main results show that genotypes differ both in their physiological and sanitary quality, and maintain their viability after six months of storage in a refrigerator. For in vitro multiplication of nodal segments, the addition of cytokinins to the nutrient medium is dispensable ,and when added, promote callus formation, unwanted at such stage. The rooting of nodal segments is successful in nutrient medium WPM in the absence of activated charcoal and it was found that the pulse treatment with IBA concentrations exceeding 9μM may optimize the process. The concentration of 30 g L-1 sucrose in the nutrient medium WPM is effective in develop plants capable of acclimatization using either commercial substrate Mecplant® or H-Decker®. It is possible in vitro conservation of nodal segments under minimal growth for a period of 120 days with the use of mannitol combined with sucrose concentrations of up to 15 g L-1 in the nutrient medium ½MS. The DNA isolated protocols were effective to obtain DNA concentration and quality still with the presence of proteins and polysaccharides. The results may contribute to the existing information on the in vitro propagation of Luehea divaricata, supporting breeding programs, germplasm conservation and analysis of genetic variability in natural populations. Luehea divaricata Mart. & Zucc., é uma espécie nativa, dos Biomas Mata Atlântica e Pampa, pertence à família Malvaceae, conhecida comumente como açoita-cavalo. Considerando-se a necessidade de recuperação e restauração de áreas degradadas, a demanda crescente por sementes e mudas de espécies florestais nativas, e a contribuição de trabalhos de pesquisa com espécies nativas será de grande importância para o setor florestal e ambiental, o presente trabalho objetivou avaliar a qualidade de sementes, analisar e selecionar metodologias para a micropropagação e para a conservação in vitro de Luehea divaricata e, também, para o isolamento de DNA genômico da espécie. Foram conduzidos testes de qualidade fisiológica e sanitária de sementes conservadas em papel Kraft no interior de refrigerador, em dois períodos distintos, coletadas em diferentes pontos de ocorrência natural da espécie. No desenvolvimento de metodologias para micropropagação os estudos foram divididos em diferentes experimentos, testando-se, primeiramente, as respostas de culturas iniciadas a partir de epicótilos, aos estímulos de diferentes fontes e concentrações de citocinina na multiplicação in vitro. Na sequência, foi avaliado o efeito do tratamento pulse com concentrações de AIB sobre a capacidade de enraizamento in vitro de segmentos nodais, cultivados em meios nutritivos MS ou WPM, na presença ou ausência de carvão ativado. Na fase de aclimatização de plantas micropropagadas foram avaliados o efeito de diferentes concentrações de sacarose no meio nutritivo WPM, e, também, de dois tipos de substratos comerciais. Foi verificado adicionalmente, o efeito do regulador osmótico manitol, associado ou não à sacarose, sobre o desempenho in vitro de segmentos nodais, visando à conservação in vitro de germoplasma. Foram testados três protocolos para isolar DNA genômico a partir de folhas jovens, comprovou-se sua qualidade e eficiência, por meio de quantificação por espectrofotometria e digestão com a endonuclease de restrição Hind III. Os principais resultados obtidos demostraram que sementes de açoita-cavalo apresentam diferenças na sua qualidade fisiológica e sanitária, e mantêm a sua viabilidade após seis meses de armazenamento em refrigerador. Para a multiplicação in vitro de segmentos nodais de açoita-cavalo a adição de citocininas ao meio nutritivo e dispensável, e quando adicionadas, promovem formação de calos, indesejados nessa fase. O enraizamento in vitro de segmentos nodais é bem-sucedido em meio nutritivo WPM na ausência de carvão ativado e obteve-se que o tratamento pulse com concentrações de AIB superiores a 9μM pode otimizar o processo. A concentração 30 g L-1 de sacarose no meio nutritivo WPM é eficiente na formação de plantas passíveis de aclimatização utilizando-se substrato comercial Mecplant® ou H-Decker®. É possível a conservação in vitro de segmentos nodais de açoita-cavalo, sob condições de crescimento mínimo, pelo período de 120 dias com a utilização de manitol combinado a concentrações de sacarose de até 15 g L-1, no meio nutritivo ½MS. Os protocolos de isolamento de DNA são eficientes em obter DNA com quantidade e qualidade aceitáveis, porém, ainda com a presença de proteínas e polissacarídeos. Os resultados obtidos poderão contribuir com as informações existentes sobre a propagação in vitro de açoita-cavalo, apoiando programas de melhoramento, conservação de germoplasma e análise da variabilidade genética de populações naturais.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Eucalyptus is a genus of great importance to the economy and production of various goods. Among the species of this genus, Eucalyptus dunnii Maiden stands out the importance, especially for the states of southern Brazil, to present a good growth and resistance to frost. However, this species presents problems for the production of seedlings by cloning, mainly due to the difficulty of rooting. The objective of this research was to assess methodologies for surface disinfection, establishment, multiplication, elongation and rooting in vitro of selected genotypes of Eucalyptus dunnii. The genetic material used in this study were collected in areas of the company Stora Enso, in the county of Alegrete - RS in commercial stands of Eucalyptus dunnii about three years old, originated from the planting of seeds. After 60 days, harvested, shoots were collected from 10 selected genotypes, which were isolated from cuttings. In the laboratory, stem segments were isolated at three positions on the cuttings: top, middle and base portion, which were evaluated in procedures for surface disinfection with sodium hypochlorite. We tested different immersion times in disinfest 1.5% and in another experiment, different concentrations of immersion for 10 minutes. Subsequently, we evaluated the performance of genotypes in in vitro establishing. During multiplication were evaluated concentrations of the growth regulators 6-benzylaminopurine (BAP). At the elongation step there were two experiments, one using gibberellic acid (GA3) in varying concentrations in the presence of alpha-Naphthalene acetic acid (NAA) and BAP, and another using only NAA and BAP. In the rooting phase two experiments were conducted, using an IBA in nutrient medium and another pulse treatment with IBA and vermiculite in a liquid medium, the rooted cuttings were acclimatized in plastic cups. As a result it was possible to establish satisfactory six genotypes, and the phenol oxidation and contamination of the main causes of non-establishment of some genotypes. In the multiplication, BAP in a concentration range between 0.25 and 0.75 mg L-1 (1.11 and 3.33 μM), positively influences the formation of buds, there is a behavior varied depending on genotype. At the elongation is also genotypic influence and the use of NAA at 0.5 mg L -1 (2.69 μM) plus BAP promotes the greatest elongation of shoots. The use of GA3 in the nutritive medium of elongation may be waived, because don t promote elongation of the shoots and cause the formation of callus. AIB added to the ½ MS nutritive medium has no effect on in vitro rooting of Eucalyptus dunnii. for the use of vermiculite associated with ½ WPM liquid nutritive medium after treatment pulse with solution of IBA promote root induction in some cuttings and may be considered in further studies. Eucalyptus é um gênero de grande importância para a economia e produção de vários bens. Entre as espécies deste gênero, Eucalyptus dunnii Maiden destaca-se pela importância, principalmente para os estados da região sul do Brasil, por apresentar um bom crescimento e resistência as geadas. Entretanto, essa espécie apresenta problemas em relação à produção de mudas por clonagem, devido, principalmente, à dificuldade de enraizamento. O objetivo geral desta pesquisa foi avaliar metodologias para a desinfestação superficial, o estabelecimento, a multiplicação, o alongamento e o enraizamento in vitro de genótipos selecionados de Eucalyptus dunnii. O material genético utilizado no presente estudo foi coletado em áreas da empresa Stora Enso, localizadas no município de Alegrete - RS, em povoamentos comerciais de Eucalyptus dunnii de cerca de três anos de idade, originados do plantio de sementes. Decorridos 60 dias do abate das árvores, foram coletadas brotações de 10 genótipos selecionados, das quais foram isoladas estacas. No Laboratório, foram isolados segmentos caulinares em três posições nas estacas: ápice, porção intermediária e base, os quais foram avaliados em procedimentos de desinfestação superficial com hipoclorito de sódio. Foram testados diferentes tempos de imersão neste desinfestante a 1,5% e, em outro experimento, diferentes concentrações na imersão durante 10 minutos. Posteriormente, foi avaliado o desempenho dos genótipos no estabelecimento in vitro. Na etapa de multiplicação foram avaliadas concentrações do regulador de crescimento 6-Benzilaminopurina (BAP). Na etapa de alongamento realizaram-se dois experimentos, um utilizando ácido giberélico (GA3) em concentrações variáveis na presença de Ácido alfa-Naftaleno Acético (ANA) e BAP, e outro utilizando apenas ANA e BAP. Na fase de enraizamento foram realizados dois experimentos, um utilizando AIB no meio nutritivo e outro, com tratamento pulso de AIB e, após, plantio em copos plásticos contendo vermiculita e meio líquido, para aclimatização das estacas em sala de cultivo. Foi possível o estabelecimento in vitro satisfatório de seis genótipos, sendo a oxidação fenólica e a contaminação as principais causas do fracasso de alguns genótipos. Na multiplicação, BAP, na faixa de concentração entre 0,25 e 0,75 mg L-1 (1,11 e 3,33 μM), influencia positivamente a formação de gemas por explante, ocorrendo um comportamento variado no comprimento e número de gemas por explante conforme o genótipo. No alongamento há também influência genotípica e a utilização de ANA na concentração de 0,5 mg L -1 (2,69 μM) associada a BAP promove o maior alongamento das brotações. A utilização de GA3 no meio de alongamento pode ser dispensada, pois além de não promover o alongamento das brotações causa a formação de calos. AIB adicionado ao meio nutritivo ½ MS não tem efeito no enraizamento in vitro de microestacas de Eucalyptus dunnii. O emprego de vermiculita associado a meio nutritivo ½WPM líquido, após tratamento pulso com solução de AIB promove a indução de raiz em algumas estacas, podendo ser considerado em estudos adicionais.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Peltophorum dubium (Sprengel) Taubert is a native forest species that shows fast development with environmental and economic importance. However, studies related to the production of quality seedlings by vegetative propagation are still incipient. As a result, this study investigated methods for multiplication and in vitro root formation of Peltophorum dubium. For multiplication was evaluated the use, alone or combined, of the cytokinins 6-Benzylaminopurine (BAP), Kinetin (KIN), isopentenyladenine (2iP) and Thidiazuron (TDZ) in different concentrations and its association with the auxin alpha-naphthalene acetic acid (ANA) or activated charcoal. In the formation of roots were evaluated the auxins NAA, indole-3-butyric acid (IBA)and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) at different concentrations and the exposure time of shoots to these growth regulators and their cultivation in nutrient media MS and WPM. We evaluated also alternative substrates (vermiculite, Plantmax ® or fine sand) associated with different volumes of MS nutrient medium containing agar or not, in the in vitro root formation, with the aim of providing a more porous medium to the development of root system. There wasn t emission of adventitious shoots in the absence of cytokinins in epicotyls of Peltophorum dubium. TDZ and 2iP, at 5 or 10 μM, associated with 0.015 μM NAA in MS medium promoted the highest percentage of buds. However, the shoots showed little development, intensive formation of callus at the base and leaf chlorosis, which didn t permit its use. In the absence of cytokinin was not observed leaf chlorosis. The inclusion of 1 g L-1 of activated charcoal to the nutrient medium MS provided more vigorous shoots and the use of epicotyl containing cotyledonary nodes allowed the formation of new shoots in all treatments. When BAP was used alone was not observed the emission of adventitious buds on epicotyl; these only started to occur when we used combinations of BAP with KIN or 2iP. In MS nutrient medium, the highest callus formation was observed in the presence of 10 μM IBA, after 30 days. In nutrient medium WPM, the highest callus formation occurred in the absence of IBA. Reduced percentage of root formation in Peltophorum dubium shoots were both obtained in MS medium as in WPM, regardless of the absence or presence of IBA. In MS nutrient medium, regardless of the presence or absence of auxin and independent of the concentration of this class of growth regulators, callus formation occurred at the base of the shoots of Peltophorum dubium to 30 days in vitro culture. Both the nutrient media MS and WPM possibilite the formation of roots on shoots of Peltophorum dubium with the use of "pulse" treatments of IBA at concentrations between 0 and 20 μM for six days in nutrient medium. However, the root formation was not satisfactory. There was intense callus formation at the base of the shoots at 60 days of culture, when the vermiculite was used as substrate in the process of inducing rooting. At 60 days it was possible to obtain root formation on all substrates. The combination of MS medium supplemented with 10 μM IBA, vermiculite and agar provided 36.8% of root formation in shoots, as well as improved the quality of roots of Peltophorum dubium. The use of epicotyl containing cotyledonary nodes on MS nutrient medium, supplemented with activated charcoal reduces the callus at the base of the explants and raises the emission of adventitious shoots for 75% and provides the obtaining of more vigorous shoots and leaves without chlorosis. The auxins NAA, IBA and 2,4-D in concentrations of up to 20 μM during the whole period of culture are not efficient in promoting the in vitro formation of roots on shoots of Peltophorum dubium. The use of pulse treatment with IBA for six days and the reduction the concentration of salts from the nutrient medium after this period allows the formation of roots, independent of IBA concentration and use of MS or WPM media. Most promising results are obtained using the combination of vermiculite, nutrient medium and agar, both in percentage of root formation, and the quality of root system formed. Peltophorum dubium (Sprengel) Taubert é uma espécie florestal nativa de rápido crescimento e dotada de importância ambiental e econômica. No entanto, os estudos relacionados à produção de mudas de qualidade por meio da propagação vegetativa são, ainda, incipientes. Em virtude disso, este trabalho objetivou estudar metodologias para a multiplicação e para a formação de raízes in vitro de Peltophorum dubium. Para a multiplicação foram avaliados o emprego isolado ou combinado das citocininas 6-Benzilaminopurina (BAP), Cinetina (CIN), Isopenteniladenina (2iP) e Thidiazuron (TDZ) em diferentes concentrações, bem como sua associação com a auxina Ácido alfa-Naftaleno Acético (ANA) ou carvão ativado. Na formação de raízes foram avaliadas as auxinas ANA, Ácido 3-Indol Butírico (AIB) e Ácido 2,4-Diclorofenoxiacético (2,4-D) em diferentes concentrações, bem como o período de exposição das brotações a esses fitorreguladores e seu cultivo nos meios nutritivos MS e WPM. Foram avaliados, ainda, substratos alternativos (vermiculita, Plantmax® ou areia fina) associados a diferentes volumes de meio nutritivo MS, contendo ou não ágar, na formação in vitro de raízes, com o intuito de oferecer um meio mais poroso para o desenvolvimento do sistema radicular. Não ocorreu emissão de brotações adventícias na ausência de citocininas em epicótilos de Peltophorum dubium. TDZ e 2iP, a 5 ou 10 μM, associados a 0,015 μM de ANA, em meio MS, promoveram as maiores porcentagens de brotações adventícias. No entanto, as brotações apresentaram pequeno desenvolvimento, intensa formação de calos na base e clorose foliar, o que inviabilizou a sua utilização. Na ausência de citocininas não ocorreu clorose foliar. A inclusão de 1 g L- 1 de carvão ativado ao meio nutritivo MS proporcionou a obtenção de brotações mais vigorosas e a utilização de epicótilos contendo nós cotiledonares permitiu a formação de novas brotações em todos os tratamentos testados. Quando BAP foi utilizado isoladamente não foi observada a emissão de brotações adventícias em epicótilos; estas só passaram a ocorrer quando foram utilizadas combinações de BAP com CIN ou 2iP. Em meio nutritivo MS, a maior formação de calos foi observada na presença de 10 μM de AIB, aos 30 dias. Em meio nutritivo WPM, a maior formação de calos ocorreu na ausência de AIB. Reduzidas porcentagens de formação de raízes em brotações de Peltophorum dubium foram obtidas tanto em meio MS como em WPM, independentemente da ausência ou da presença de AIB. Em meio nutritivo MS, independente da presença ou não de auxinas e, independente da concentração utilizada, ocorreu calogênese na base das brotações de Peltophorum dubium aos 30 dias de cultivo in vitro.Tanto o meio nutritivo MS quanto o WPM possibilitaram a formação de raízes em brotações de Peltophorum dubium com a utilização de tratamentos pulse de AIB, em concentrações entre 0 e 20 μM, durante seis dias no meio nutritivo. No entanto, a formação de raízes não foi satisfatória. Ocorreu intensa formação de calos na base das brotações, aos 60 dias, quando a vermiculita foi utilizada como substrato no processo de indução ao enraizamento. Aos 60 dias foi possível obter formação de raízes em todos os substratos testados. A combinação de meio MS acrescido de 10 μM de AIB + vermiculita + ágar proporcionou 36,8% de formação de raízes nas brotações, bem como melhorou a qualidade do sistema radicular de Peltophorum dubium. A utilização de epicótilos contendo nós cotiledonares, em meio nutritivo MS, acrescido de carvão ativado, reduz a calogênese na base dos explantes e eleva a emissão de brotações adventícias para 75%, bem como proporciona a obtenção de brotações mais vigorosas e sem clorose foliar. As auxinas ANA, AIB e 2,4-D, em concentrações de até 20 μM durante todo o período de cultivo não são eficientes em promover a formação in vitro de raízes em brotações de Peltophorum dubium. O emprego de tratamento pulse com AIB por seis dias e a redução na concentração de sais do meio nutritivo após esse período permite a formação de raízes, independente da concentração de AIB e da utilização dos meios MS ou WPM. Resultados mais promissores são obtidos com a utilização da combinação de vermiculita, meio nutritivo e ágar, tanto na porcentagem de formação de raízes, como na qualidade do sistema radicular formado.

Araucaria angustifolia, conhecida como Pinheiro Brasileiro, ? uma esp?cie amea?ada de extin??o de grande import?ncia ecol?gica e econ?mica. Embora muitos esfor?os foram feitos para estabelecerem plantios comerciais desta esp?cie, ela apresenta crescimento lento e heterog?neo, com alta mortalidade. As plant-growth-promoting rhizobacteria (PGPR) representam uma classe de bact?rias de solo n?o patog?nicas que promovem efeito ben?fico no crescimento do vegetal, destacando-se as actinobact?rias do g?nero Streptomyces. O trabalho avaliou o efeito de tr?s isolados aut?ctones de Streptomyces spp. (PM1, PM4 e PM9) no desenvolvimento e no metabolismo inicial de pl?ntulas de Araucaria angustifolia com 50 dias de idade. A atividade enzim?tica da fenilalanina am?nio-liase (FAL), polifenol oxidase (PPO), peroxidase (POX) e os n?veis de compostos fen?licos, flavon?ides e clorofila foram determinados em extratos de ra?zes e folhas das pl?ntulas. As an?lises foram realizadas em 1, 3 e 9 dias ap?s a inocula??o das ra?zes com as rizobact?rias. O comprimento e a massa fresca da parte a?rea e radicular assim como o volume e densidade das ra?zes foram avaliados ap?s 100 dias da inocula??o. Todos Streptomyces spp. apresentaram compet?ncia rizosf?rica e a capacidade de produzir ?cido indol-3-ac?tico (AIA). As atividades da PPO e POX exibiram regula??o tecido-temporal na presen?a dos isolados; entretanto n?o foram alterados no per?odo analisado os n?veis de fen?licos, flavon?ides e clorofila. A atividade da FAL foi reduzida somente 9 dias ap?s a inocula??o do isolado PM9. O volume, densidade e comprimento das ra?zes foram alterados nas pl?ntulas inoculadas com as rizobact?rias durante 100 dias. PM9 foi o isolado que promoveu as maiores altera??es no metabolismo vegetal, aumentando o incremento da parte a?rea.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The cerejeira-do-Rio-Grande (Eugenia involucrata DC.) is a Brazilian forest species with traits of economic interest, especially in the forestry, horticulture, landscape, environmental and medicinal sectors. However, it has recalcitrant seeds, which begin to lose viability after two weeks of gathering. Moreover, doesn t known how its genetic variability is distributed. This study aimed to developed methodologies for in vitro culture of E. involucrata and evaluate the genetic variability in accessions maintained in situ and ex situ. In vitro propagation, besides desinfestation, we evaluated aspects of in vitro growth and development after the inoculation of the apical and nodal segments in different nutritive media. We also analyzed the effect of introduction of different growth regulators in the optimization of in vitro multiplication. For callus induction in vitro were evaluated methods of superficial desinfestation, ways of introduction of plant growth regulators, the effect of different light regimes, of the use of antioxidants and of the different cytokinins. The formation of callus on different aspects were evaluated. We tested different methods for extraction of genomic DNA from this specie using different plant tissues. We performed analysis of acess coming from populations maintained in situ and ex situ by the use of markers. It was possible to establish aseptic cultures of E. involucrate. The establishment in vitro can be accomplished with the apical and nodal segments, however, nodal segments offer the best results. The ½ MS is the most appropriate nutritive medium and helps in rooting. The use of high concentrations of TDZ associated with ANA enables shoot multiplication and the emergence of shoots from nodal segments. GA3 does not promote the elongation of shoots and is toxic in high concentrations. Callus formation was obtained in leaf discs of E. involucrata. The best way to grow is maintaining the explants in abaxial position and in the dark. Combinations of auxins and cytokinins generate the highest percentage of callus formation. The association of 2,4-D and TDZ promotes better callus formation and callus candidates to embyogeneis. It is possible to extract good quality genomic DNA from E. involucrata leaves and cambia, using the maceration with the extraction buffer concentrate to 10%. Analysis with molecular markers was efficient in the stratification of genetic variability in accessions of cherry. It was observed that the variability is evenly distributed between the accessions in different in situ populations and that in the ex situ population assessed the variability is not satisfactory. It was possible to generate consistent information to assist in the cultivation and in planning of breeding programs of the species. A cerejeira (Eugenia involucrata DC.) é uma espécie florestal brasileira com diversas características de interesse econômico, especialmente nos setores de silvicultura, fruticultura, paisagístico, ambiental e medicinal. No entanto, possui sementes recalcitrantes, as quais começam a perder sua viabilidade após duas semanas de coleta. Além disso, não existem informações sobre a variabilidade genética desta espécie. Este trabalho objetivou desenvolver metodologias para o cultivo in vitro de E. involucrata e avaliar a variabilidade genética existente em acessos desta espécie mantidos in situ e ex situ. Na propagação por técnicas de cultura de tecidos, avaliou-se a desinfestação de explantes, bem como foram estudados aspectos de crescimento e desenvolvimento in vitro após a inoculação de segmentos apicais e nodais em diferentes meios nutritivos. Também foi avaliado o efeito de diferentes fitorreguladores na otimização da multiplicação in vitro. Para a calogênese in vitro, foram avaliados métodos de desinfestação superficial, formas de inoculação dos explantes, introdução de reguladores de crescimento, os efeitos de diferentes regimes luminosos, do uso de antioxidantes e de citocininas. Foi analisada a formação de calos sobre diversos aspectos de desenvolvimento. Testaram-se diferentes métodos para a extração de DNA genômico da espécie, utilizando-se diferentes tecidos vegetais. Realizou-se a análise de acessos oriundos de populações mantidas in situ e ex situ por meio do uso de marcadores RAPD. Como resultados, foi possível estabelecer cultivos assépticos da espécie, além disso, o estabelecimento in vitro pode ser realizado com segmentos apicais e nodais, no entanto, segmentos nodais oferecem os melhores resultados. O meio ½ MS é o mais adequado e auxilia na rizogênese, além de outros aspectos de desenvolvimento das plantas. A utilização de concentrações elevadas de TDZ associadas à ANA permite a multiplicação de brotos e o surgimento de gemas adventícias em segmentos nodais. GA3 não promove o alongamento dos brotos e, em concentrações elevadas, apresenta-se tóxico. Para a calogênese in vitro, a melhor forma de cultivo é mantendo-se o explante em posição abaxial e na ausência de luz. Combinações entre auxinas e citocininas produzem os melhores índices de calogênese. O emprego da associação 2,4-D e TDZ promove a melhor formação de calos e de calos candidatos à embriogênese. É possível extrair DNA de boa qualidade a partir de folhas e câmbios de cerejeira, utilizando-se a maceração com o tampão de extração concentrado a 10%. A análise com marcadores moleculares RAPD mostrou-se eficiente na estratificação da variabilidade genética de acessos de cerejeira. Observou-se que a variabilidade está bem distribuída entre os acessos nas diferentes populações in situ e que, a população ex situ avaliada, não possui variabilidade satisfatória. Foi possível gerar informações consistentes que poderão auxiliar o cultivo e o planejamento de programas de melhoramento da espécie.

A Melissa officinalis L. (Lamiaceae) apresenta altos n?veis de compostos fen?licos, como flavon?ides e ?cido rosmar?nico. Estes compostos apresentam uma s?rie de efeitos biol?gicos, como antiinflamat?rio, inibido a atividade da ciclooxigenase e a indu??o/inibi??o do citocromos P450. O acetaminofen (APAP) ? amplamente utilizado como analg?sico e antipir?tico. Por?m consumido em altas doses pode provocar hepatotoxicidade e nefrotoxicidade. No presente estudo analisou-se as propriedades bioativas dos extratos de M. officinalis na prote??o da les?o hep?tica e renal induzida por acetaminofen, bem como, a a??o antiinflamat?ria na pleurisia induzida por carragenina. Para analisar os efeitos dos extratos aquosos na les?o hep?tica e na les?o renal foram utilizados ratos machos Wistar. Os animais foram pr?-tratados por sete dias, via intrag?strica (ig), com extratos aquosos de M. officinalis nas dosagens 500 e 250 mg/kg ou solu??o salina. Ap?s esta fase, os animais foram tratados com solu??o salina ou 800 mg/kg de APAP via intraperitoneal (ip). Foram tamb?m administrados intraperitoneal extrato na dose 200 mg/kg, 30 minutos antes de administrar o APAP ip. Para les?o hep?tica foram analisados os marcadores bioqu?micos aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT), enquanto para les?o renal foi analisado o marcador W- glutamyltransferase (GGT). Ocorreu um aumento nos n?veis de AST e ALT no soro em animais pr?-tratados com extratos via intrag?strica e via intraperitoneal, quando comparado com aqueles pr?-tratados com solu??o salina ig. e tratados com APAP ip. O aumento nos n?veis de AST e ALT no soro, e nos n?veis GGT na urina dos animais pr?-tratados com os extratos aquosos de M. officinalis e que receberam APAP, indicou um aumento na hepatotoxicidade e na nefrotoxicidade induzida por APAP. O aumento nos n?veis dos marcadores bioqu?micos de les?o hep?tica n?o foi acompanhado da presen?a de necrose na regi?o centrolobular nas an?lises histopatol?gicas.Para analisar a a??o antiinflamat?ria foram utilizados ratos f?meas Wistar. Os animais foram pr?-tratados com 2 mL/kg de solu??o salina ou de extratos aquosos de M. officinalis nas doses 200, 100 e 50 mg/kg via intraperitoneal, 30 minutos antes de ter sido induzida ? pleurisia por carragenina. Os animais pr?-tratados com 200 e 100 mg/kg de extrato e tratados com carragenina apresentaram uma a??o antiinflamat?ria, reduzindo os n?veis do exsudato, bem como, os n?veis de leuc?citos e de c?lulas polimorfonucleares. Enquanto o extrato na concentra??o 200 mg/kg induziu a redu??o de prote?nas totais no exsudato pleural, o extrato na concentra??o 50 mg/kg n?o apresentou efeito antiinflamat?rio. Os resultados sugerem que os extratos de M. officinalis n?o protegem o f?gado e o rim da toxicidade induzida por APAP. Contudo, apresentam a??o antiinflamat?ria, atrav?s de uma dose-resposta dependente, em rela??o ?s concentra??es dos extratos e dos marcadores inflamat?rios.

Melissa officinalis (melissa) apresenta elevados n?veis de compostos fen?licos com reconhecida a??o biol?gica, sendo utilizada na preven??o de v?rias doen?as, como asma br?nquica, ?lcera, inflama??es, viroses e arteriosclerose. A s?ntese de compostos com atividade biol?gica depende da qualidade da planta, sua origem geogr?fica, condi??es clim?ticas, per?odo de colheita e m?todos de estocagem. Neste trabalho pretendeu-se avaliar o uso de eliciadores em brotos cultivados in vitro e em plantas cultivadas em vaso, na promo??o da s?ntese e ac?mulo de fenilpropan?ides, bem como analisar a atividade das enzimas fenilalanina am?nia-liase e polifenol oxidase. Pretendeu-se, ainda, otimizar a micropropaga??o de M. officinalis, regenerando plantas-clone. Os meios de cultura suplementados com 0,2 mg.L-1 BA, independende da presen?a de ANA, foram mais eficientes na forma??o de m?ltiplas brota??es in vitro, sendo que a maior taxa de alongamento foi obtida no meio com 2 mg.L-1 de BA. A maior taxa de forma??o e crescimento de ra?zes foi obtida utilizando-se 1 mg.L-1 de AIB. O uso do eliciador ?cido salic?lico promoveu o aumento transit?rio dos n?veis dos compostos fen?licos e flavon?ides nas pl?ntulas in vitro, entretanto n?o foi observada a mesma resposta em plantas envasadas. A suplementa??o do meio de cultura com suspens?o de bact?rias fitopatog?nicas mortas, resultou na redu??o dos n?veis dos compostos fen?licos e o espessamento de ra?zes e ramos. Contudo, nas plantas envasadas, a suspens?o bacteriana ocasionou necrose nos bordos das folhas 24h ap?s a aspers?o. Os eliciadores n?o promoveram mudan?as significativas na atividade da fenilalanina am?nia-liase em ambos os experimentos. A atividade da polifenol oxidase teve um aumento transit?rio que coincidiu com a eleva??o dos fen?licos nas plantas eliciadas in vitro, fato este n?o observado nas plantas envasadas.