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170 p., {EN]The alpha-glucans, polysaccharides made of repetitive units of glucose, play a role as energy storage, as with intracellular glycogen, or as structural components, as with the capsular alpha-glucans surrounding the pathogenic Mycobacterium tuberculosis. Bacterial glycogen provides survival advantage during starvation periods whereas the mycobacterial capsule is critical in mediating host-pathogen interactions.The tetrameric enzyme ADP-glucose pyrophosphorylase (AGPase) catalyzes and controls: I) the initial step of glycogen biosynthesis and II) the synthesis of ADP-Glucose as precursor for the capsular alpha-glucanbio synthesis. In this work we disclose the cryoEM structures of the paradigmatic AGPase from Escherichia coli and Mycobacterium tuberculosis. The former, solved in the presence of the main positive and negative allosteric regulators, reveal distinct physiological conformational states that have different availability for ATP. Biochemical and microbiological evidence that support the latter show that single point-mutants in the catalytic and putative allosteric sites were unable to produce neither the product of reaction nor glycogen and the capsular alpha-glucans., [ES]Los alpha-glucanos, polisacáridos formados por unidades repetitivas de glucosa, desempeñan un papel como almacenamiento de energía, como ocurre con el glucógeno intracelular, o como componentes estructurales, como ocurre con los alpha-glucanos capsulares que rodean la bacteria patógena M. tuberculosis(Mtb). El glucógeno bacteriano proporciona una ventaja para la supervivencia durante los periodos de inanición, mientras que la cápsula de la micobacteria es fundamental en las interacciones huésped-patógeno. La enzima ADP-glucosa pirofosforilasa (AGPasa) cataliza y controla: I) el paso inicial de la biosíntesis de glucógeno y II) la síntesis de ADP-glucosa, precursor de la biosíntesis del alpha-glucanocapsular. En este trabajo presentamos las estructuras crioEM de la AGPasa de E. coli y M. tuberculosis.Las primeras, resueltas en presencia de los principales reguladores alostéricos, revelan estados conformacionales fisiológicos y distintos que presentan diferente accesibilidad por ATP. Las pruebas bioquímicas y microbiológicas que respaldan la estructura de la MtbAGPasa muestran que algunos mutantes del sitio catalítico y del posible sitio alostérico no son capaces de producir ni el producto de lareacción, ni el glucógeno, ni los alpha-glucanos capsulares.

216 p., Estudios de asociación de genoma completo han detectado polimorfismos asociados con el riesgo a padecer diabetes de tipo 1 (DM1) en ARN largos no codificantes (lncRNAs). Sin embargo, todavía se desconocen los mecanismos moleculares por los que la mayoría de estos lncRNAs contribuyen al desarrollo de la DM1.Los estudios recogidos en esta tesis doctoral confirman la presencia de lncRNAs implicados en el desarrollo de DM1. Así mismo, se ha realizado la caracterización funcional de 2 de estos lncRNAs; llamados Lnc13 y ARGI. Gracias a estos estudios se demuestra la importancia de estas moléculas no sólo en el funcionamiento celular (en esta tesis centrada en el estudio de las células ß pancreáticas), sino también en el desarrollo de diversas enfermedades como son la diabetes.

236 p., La macroautofagia es un proceso que ocurre en los organismos eucariotas, se caracteriza por la formación del autofagosoma, una estructura de doble membrana encargada de rodear los componentes celulares que se degradan cuando se fusiona con el lisosoma. En humanos, las seis proteínas LC3/GABARAP participan en varios pasos de la formación del proceso. Para llevar a cabo su función, estas proteínas establecen diferentes interacciones con lípidos. El objetivo principal de esta tesis fue estudiar el efecto de la ceramida en algunas interacciones entre estas proteínas y membranas modelo. Se demostró que la ceramida es capaz de aumentar su unión a membranas que contienen cardiolipina, lo significa que la ceramida podría tener un papel en la unión de estas proteínas solubles a mitocondrias durante la mitofagia. Se describió que este efecto tendría lugar en las zonas enriquecidas en cardiolipina, donde una baja cantidad de ceramida sería suficiente para aumentar su unión. Por último, la ceramida aumentó notablemente la capacidad fusogénica de los homólogos GABARAP y GABARAPL1, una vez anclados a la membrana, por lo que la ceramida podría estar implicada en la labor de expandir el autofagosoma.

221 p., Wnt-11 es una proteína que se encuentra altamente expresada en el cáncer de próstata metastático, donde favorece la diferenciación neuroendocrina, la supervivencia y la migración celular activando señales a través de la familia de factores de transcripción AP-1/ATF, independientes de ß-catenina. Para caracterizar los efectos de la inhibición selectiva de Wnt-11, se generaron dos anticuerpos monoclonales anti-Wnt-11, E8 y F10, que tienen el mismo epítopo en Wnt-11. Los anticuerpos reconocen Wnt-11 en contexto celular, reducen la fosforilación del efector de Wnt DVL, reducen la proliferación en esferas de células de cáncer de próstata, inhiben la migración e invasión celular y la migración de células en hipoxia. Se llevó a cabo la conjugación de E8 y F10 a nanopartículas magnéticas (MNP) y se determinó que las nanoformulaciones anti-Wnt-11 inhiben la migración celular sin afectar a la viabilidad. Tanto E8 como la nanoformulación MNP-E8 reducen el crecimiento tumoral de células PC3 en el modelo in vivo de la membrana corioalantoidea de pollo, CAM. Se caracterizó un mutante de Wnt-11 con el epítopo de los anticuerpos delecionado, y se determinó que esta región tiene un papel relevante en la función y señalización de Wnt-11. La deleción del epítopo limita la migración celular inducida por Wnt-11, reduce la fosforilación de DVL, inhibe la transcripción dependiente de ATF2 y produce una disminución en la interacción de Wnt-11 con un correceptor de Wnt. En conjunto, los resultados resaltan el papel de Wnt-11 como una posible diana terapéutica y los anticuerpos anti-Wnt-11 y sus nanoformulaciones como potenciales agentes terapéuticos para el tratamiento del cáncer de próstata metastático.

218 p., During the Spanish Civil War and the posterior dictatorship, a huge number of people disappeared during the war or in episodes of repression. A large number of victims remain unidentified. One of the main limitations of these analyses is the difficulty of obtaining informative STRs profiles from the remains, limiting the identification of missing persons. With this aim, this work focuses on multidisciplinary research to investigate the relationship between the factors (physical-chemical and biological) that influence the state of preservation (anthropological and genetic) in order to understand the influence of these factors and increase the number of identifications of victims in the context of the Spanish Civil War. For this purpose, we have collected and analyzed the physicochemical composition of the graves and performed the anthropological analysis. Subsequently, the autosomal and Y-chromosome STRs of the skeletal remains were analysed. Finally, we developed a predictive statistical model to determine the most influential variable in obtaining an informative profile of autosomal STRs (>12STRs).With this, it has been possible to demonstrate that, in addition to DNA concentration and inhibition, also organic matter influence in successfully obtaining an informative autosomal STRs profile from skeletal remains buried in mass graves of Spanish Civil War.

El 1er capítulo de resultados está sujeto a confidencialidad por la autora. 129 p., La enfermedad hepática crónica hace referencia a un amplio espectro de patologías hepáticas lenta progresión, pero potencialmente mortales. A pesar de los avances en diagnóstico y tratamiento, el estilo de vida sedentario, la adherencia a dietas poco saludables, el alcohol y el abuso de fármacos como paracetamol continúan exponiendo a las personas al desarrollo de enfermedades, lo que enfatiza la necesidad de desarrollar nuevas estrategias para abordar estos nuevos riesgos emergentes. La investigación de este trabajo se ha centrado en los desequilibrios metabólicos hepáticos que derivan del abuso de alcohol y toxicidad por paracetamol, identificando la enzima Glicina N-metiltransferasa (GNMT) como un principal afectado en el desarrollo de la enfermedad hepática crónica. Por otro lado, cada vez es mayor la evidencia que respalda el potencial regulador de los pequeños micro-ARN no codificantes en la enfermedad hepática. Estas moléculas tienen la capacidad de alterar la expresión de proteínas nivel post-transcripcional cuando se unen a sus ARNm diana, en base a estudios previos que demuestran la desregulación del micro-ARN miR-873-5p está implicado en la progresión de enfermedad hepática, este trabajo ha demostrado el potencial terapéutico de su inhibición en diferentes contextos de toxicidad hepática. El objetivo de esta investigación es explorar el potencial de biomarcadores no invasivos y comprender el papel de miR-873-5p en la regulación de GNMT y el desarrollo de enfermedades hepáticas inducidas por toxicidad derivada de alcohol y paracetamol. Estos hallazgos resaltan la importancia de GNMT en la enfermedad hepática crónica y señalan la necesidad de investigaciones adicionales para mejorar el diagnóstico y tratamiento de estas enfermedades hepáticas.

245 p., La distrofia muscular de cinturas R1 asociada a calpaína 3 (LGMDR1) o calpainopatía, es una distrofia muscular con herencia autosómico recesiva causada por mutaciones del gen CAPN3. El presente trabajo de investigación profundiza en el conocimiento de la regulación de las alteradas rutas de Wnt y mTOR en pacientes LGMDR1. La utilización de inhibidores alostéricos de GSK3ß, Tideglusib y VP0.7 ha permitido recuperar la activación de las mencionadas rutas.El estudio en el pez cebra ha revelado los genes diana específicos de FRZB en la ruta de Wnt, subrayándola relevancia de la conservación evolutiva de este mecanismo y la relación entre la ruta de Wnt y la regulación de la calpaína 3. En el modelo de ratón knock out de la calpaína 3, el cual no presenta un fenotipo distrófico, la inhibición farmacológica de la ruta de Wnt por medio de Pyrvinium, ha dado luga ra características distróficas observadas en los pacientes LGMDR1.Analizando el metabolismo en la LGMDR1, se ha identificado la participación de proteínas implicadas enla sustitución del tejido muscular por tejido adiposo observado en los pacientes, así como la relevancia deFRZB en la regulación de la función metabólica celular.

419 p., The study of tumor metabolism has uncovered a new therapeutic window for the treatment of some cancer types. In such paradigm, cell signaling and metabolic reprogramming can act in tandem for the benefit of the cancer cell. Prostate cancer (PCa), the second most common cancer diagnosed in men worldwide, is a clear example of this convergence. Previous studies conducted in our lab have shown how polyamine (PA) biosynthesis is elevated in PCa with profound implications in the progression of the disease. However, PA deprivation therapy has failed in patients in the last years and currently, in spite of the conclusive data about the contribution of PAs to cancer biology, their molecular effectors remain obscure. In this thesis, we describe a mechanism orchestrated by activating transcription factor 4 (ATF4) signaling through which PCa cells could acquire survival properties and resistance to therapies targeting polyamine metabolism. In addition, we provide solid evidence about the regulatory function of PAs in the process of mRNA splicing through changes occurring at posttranslational level. Overall, our results expand the current knowledge about the role of PAs in both physiology and disease.

200 p., El colangiocarcinoma (CCA) es un conjunto de tumores que se originan en la vía biliar y debido a su carácter asintomático, se diagnostican en fases muy avanzadas, limitando sustancialmente las posibles opciones terapéuticas. Por ello, existe la urgente necesidad de descubrir los mecanismos moleculares involucrados en el desarrollo y progresión del CCA con el fin de encontrar nuevas dianas terapéuticas, así como biomarcadores para su diagnóstico precoz y para poder predecir su pronóstico. Durante los últimos años, se ha observado que el receptor scavenger MARCO tiene un papel clave en la polarización de los macrófagos y en consecuencia en la respuesta inmune adaptativa. Evidencias recientes en tumores sólidos como el carcinoma de mama, colon y melanoma indican que el receptor MARCO se expresa en macrófagos asociados a tumor (TAMs) tipo M2 inmunosupresores en el microambiente tumoral, contribuyendo a la inmunosupresión y al desarrollo y progresión de estos cánceres. Sin embargo, el papel de MARCO en la etiopatogenia del CCA permanece prácticamente desconocido. Nuestros datos en muestras de pacientes con CCA intrahepático (iCCA) indican que MARCO se encuentra en TAMs involucrados en procesos asociados a la inmunosupresión y a la remodelación de la matriz extracelular. Además, elevados niveles de expresión de MARCO en muestras de iCCA están asociados con un peor pronóstico y también se relacionan con una disfuncionalidad de los linfocitos T. En este sentido, los ratones deficientes de MARCO (Marco-/-) han demostrado tener una protección frente al desarrollo y progresión del iCCA en diferentes modelos experimentales murinos, y estudios proteómicos llevados a cabo con células de iCCA murinas y macrófagos residentes del hígado demuestran una regulación de procesos clave implicados en la colangiocarcinogénesis.

268 p., Los factores de transcripción E2F son cruciales en la regulación de genes involucrados en la progresión del ciclo celular, la replicación del ADN, la reparación de daño al ADN o la duplicación de los orgánulos. En este trabajo se realizó un análisis bioinformático con el fin de encontrar nuevos genes diana de los E2F que pudieran estar asociados al ciclo celular y al cáncer. En dicho análisis se identificó a TEDC2 (Tubulin Epsilon and Delta Complex 2), proteína centriolar poco caracterizada, como potencial diana de los E2F. Observamos que las muestras tumorales con una elevación de los niveles de TEDC2 se correlacionaban con un peor pronóstico. El gen TEDC2 se co-expresa y presenta codependencia con otros genes que participan en la duplicación centriolar y en mitosis. Demostramos que la expresión de TEDC2 está regulada durante el ciclo celular con un máximo en la entrada de fase S, momento en el que E2F1 se une al promotor de TEDC2, activando su transcripción. Respecto a su localización subcelular, TEDC2 se localiza en el material pericentriolar y en el anillo del midbody, para lo que requiere dos dominios de localización. TEDC2 interacciona con proteínas del ciclo del centrosoma, destacando a CEP295 y a las tres proteínas con las que forma el complejo TED: TEDC1 y las tubulinas ¿ y ¿. Predicciones de la estructura del complejo TED sugieren que TEDC1 ejerce de puente entre el heterodímero de las tubulinas ¿ /¿ y TEDC2. Por último, experimentos de silenciamiento mostraron que TEDC2 es indispensable para la correcta duplicación de los centriolos y la función del centrosoma

197 p., A pesar de décadas de investigación el VIH aún no ha podido ser erradicado. La existencia de anticuerpos ampliamente neutralizantes se presume una herramienta potente para conseguir una cura funcional o como modelos para una vacuna. En el presente trabajo de Tesis, se estudian los mecanismos de unión de algunos anticuerpos anti-MPER, siendo el propio MPER uno de los puntos de vulnerabilidad del VIH. Para ello, se recurre a la técnica de MP-SPR, que permite conocer con gran precisión algunos de las constantes cinéticas de la unión en un entorno de membrana, requisito necesario para una presentación del epítopo en un entorno semejante a la forma nativa. Además, se estudia cómo mutaciones del anticuerpo 10E8, el cual ya ha sido utilizado en ensayos clínicos, influyen en la manera de unión a su epítopo, así como la correlación entre estas mutaciones y su polirreactividad. En segundo lugar se estudia si la longitud de la membrana y/o una mayor longitud de la región transmembrana de MPER influye en el reconocimiento del anticuerpo 10E8 nativo. Finalmente, se comprueba si esta misma estrategia es aplicable a otros anticuerpos anti-MPER y la correlación con su potencia y polirreactividad.

277 p., El cáncer de próstata (CaP) es el segundo cáncer con mayor índice de mortalidad en hombres en la actualidad. Estos fallecimientos se deben a la falta de un buen pronóstico que permita anticipar los casos que van a recidivar. Estudios previos han establecido firmas basadas en genes metabólicos que permiten diferenciar los pacientes con alto riesgo de recurrencia de los indolentes. Por ello, como primer objetivo de esta tesis, se mejoraron y validaron en una cohorte externa de pacientes estas firmas metabólicas. El análisis de los genes que constituyen dichas firmas descubrió una serie de alteraciones metabólicas no asociadas con ningún proceso oncológico hasta ahora y con funciones metabólicas muy diversas. Entre ellas, destacó la represión de ASPA observada en aquellos pacientes que presentaban recurrencia. De todas las alteraciones metabólicas, ASPA, era la que mayor poder pronóstico presentaba. Así, el análisis a nivel molecular de la contribución de ASPA al CaP nos permitió descubrir que es un gen que se reprime en los fibroblastos por acción de TGFß, cuando estos se convierten en fibroblastos asociados al tumor. Esta represión de ASPA genera la acumulación de su sustrato el NAA que provoca la repolarización de macrófagos hacia un fenotipo protumoral. Estos macrófagos protumorales contribuyen a la progresión tumoral y justifican que niveles bajos de ASPA se asocien a peor pronóstico de los pacientes de CaP.

265 p., Las modificaciones postraduccionales (MPTs) son un conjunto de modificaciones covalentes y reversibles que sufren las proteínas tras su biosíntesis, considerándose un mecanismo relevante en la diversificación funcional, coordinación de vías de señalización y modulación del proteoma. Recientemente, la atención se ha centrado en el estudio de las MPT similares a la ubiquitina en el desarrollo de diversas patologías para comprender mejor su etiología y proponer nuevas terapias basades en su regulación. Sobre esta base, el presente trabajo se centra en el estudio de NEDD8 (célula precursora neuronal expresada, regulada negativamente durante el desarrollo 8), una proteína de 8 kD que se conjuga covalentemente en los residuos de lisina de sus proteínas diana en un proceso denominado nedilación. Los sustratos más conocidos son las culinas, un grupo de enzimas ligasa de ubiquitina, aunque también se ha descrito substratos diferentes a las culinas modulando su estabilidad, localización y función. Este trabajo muestra que la nedilación está incrementada e involucrada en el desarrollo de varias patologías através de la desregulación del proteoma, particularmente en enfermedades hepáticas como la del hígado graso no alcohólico (EHGNA), el cáncer infantil hepatoblastoma (HB), así como en la hiperactivación del sistema inmunológico como se ve en pacientes graves con infección por coronavirus (COVID-19). Por lo tanto, se propone el tratamiento farmacológico del MLN4924 dirigido a la inhibición de la nedilacion mediante la modulación de NAE1 (enzima 1 activadora de NEDD8), como terapia efectiva para restaurar la homeostasis del proteoma alterado en la enfermedad. El tratamiento con MLN4924 mejora la EHGNA al aumentar la oxidación de ácidos grasos vía la inactivación de la ruta de mTOR disminuyendo la acumulación de lípidos hepáticos; reduce el fenotipo maligno de las células de HB, induciendo la muerte de las células tumorales; y, por último, activa la respuesta inmunosupresora en

164 p., Las mutaciones sin sentido generan codones de terminación prematura (PTC) y son alteraciones genéticas frecuentes en cáncer y en enfermedad. Las proteoformas que surgen de estas variantes de PTC suelen ser menos estables y muestran una función proteica disminuida. En esta tesis doctoral, se ha estudiado in silico la distribución de PTC asociada a cáncer y la influencia del reinicio de traducción mediado por mutaciones sin sentido en genes supresores tumorales de forma global. Hemos descrito y caracterizado a nivel molecular una nueva proteoforma de PTEN derivada del reinicio de traducción a partir de la Met35 que hemos designado PTEN M35. Igualmente, hemos descubierto que la isoforma corta de VHL pVHL19 se genera a través del reinicio de traducción mediado por mutaciones sin sentido en la Met54. Además, esta tesis a demostrado que el reinicio de traducción mediado por mutaciones sin sentido tiene lugar en MMADHC en la Met62 y la Met116. Por último, para variantes de los tres genes estudiados con mutaciones PTC, se ha realizado un estudio de reconstitución de la biosíntesis de la proteína mediante readthrough (lectura a través) traduccional, utilizando principalmente el aminoglucósido geneticina (G418) como inductor. Los resultados de esta tesis indican que PTC en PTEN, VHL y MMADHC son susceptibles a reconstitución mediante readthrough, y que dicha reconstitución depende de la naturaleza del PTC, el contexto nucleotídico y la expresión basal de la proteína.

El Anexo 3 y resultados están sujetos a confidencialidad por el autor. 329 p., The study of biomarkers and their detection in human fluids represents one of the best ways to improve the diagnosis and prevention of diseases. The use of human fluids for biomarker analysis can facilitate a friendly and non-invasive diagnosis of various pathologies that affect daily life. Early and accurate detection of these diseases is crucial, otherwise they can lead to serious conditions. In addition to its role in diagnosis, the study of biomarkers also contributes to improve treatments, as it helps to monitor response, identify new drug targets and explore therapeutic alternatives. Based on this premise, bibliographic knowledge, and previous studies of -omics technologies carried out by our research group, the present PhD thesis uses the immobilization of molecules on solid supports as a tool for the detection of biomarkers in human fluids. In this PhD thesis, we developed antibody microarrays (AbMAs) directed against human MMP-9 as a useful tool to detect this biomarker of ocular surface inflammation in tear samples. Moreover, multiplexed AbMAs were used to also detect the tear biomarkers CST4 and S100A6, providing a more complete panel of biomarkers for ocular diseases and improving patient diagnosis. In addition, we applied molecule immobilization technologies to develop a rapid test that detects collagenase activity in human synovial fluid samples by digesting an immobilized fluorescently labeled gelatin. This assay could aid in the diagnosis of diseases in which elevated extracellular matrix degradation is observed and could be used as a rapid test in primary health care. Additionally, we applied the microarray platform to study protein-protein interaction, specifically analyzing the interaction between PD-1 and PD-L1. This study demonstrates the functionality of microarrays not only in biomarker detection, but also in the analysis of protein dynamics. In conclusion, the results of the present PhD thesis deepen the existing knowledge of humoral biomarke

Los capítulos 5 y 6 están sujetos a confidencialidad por la autora. 140 p., El trabajo aquí presentado proporciona nuevas herramientas para optimizar nuevos biocatalizadores heterogéneos, abriendo un nuevo camino para el control racional de la orientación de las enzimas. Además, introdujimos un ensayo múltiple diseñado para seguir la cinética de las transaminasas. A través de estos esfuerzos, presentamos dos dispositivos diseñados para la selección de diversas enzimas, químicas de inmovilización y soportes. Esta contribución mejora el panorama en constante evolución del diseño de procesos enzimáticos. Además, los microdispositivos y la detección fluorométrica ofrecen un marco dinámico para una investigación profunda de los biocatalizadores, elucidando la complicada interacción entre los soportes de inmovilización, las configuraciones de los reactores y los modos operativos.

467 p., El cáncer de próstata (CaP) es el segundo cáncer más frecuente en los hombres y ocupa el sexto lugar entre las causas de muerte relacionadas con el cáncer en todo el mundo. A pesar de las prometedoras respuestas clínicas a las terapias actuales, el 15% de los pacientes sigue experimentando recaídas y desarrolla una enfermedad metastásica agresiva, lo que limita las opciones de tratamiento. Para mejorar las estrategias de tratamiento del cáncer de próstata metastásico, es crucial identificar marcadores moleculares pronósticos de recaída y comprender la biología subyacente que impulsa el desarrollo de capacidades agresivas en las células cancerosas de próstata. La comunicación celular desempeña un papel fundamental en el correcto funcionamiento de los procesos biológicos, e implica interacciones entre distintos tipos de células y la matriz extracelular (MEC) en un microentorno específico. La comunicación puede ser directa, implicando interacciones célula-célula o célula-MEC, o indirecta, mediada por diversas moléculas secretadas. En esta tesis doctoral, hemos descrito cómo la alteración transcripcional de PGC1 afecta a genes implicados en la comunicación celular directa (integrinas) e indirecta (proteínas secretadas) en un modelo específico de supresión de tumores CaP. Además, hemos identificado a CTHRC1 como un potencial factor en el pronóstico y progresión del CaP a través del análisis in silico de genes relacionados con la comunicación celular y hemos investigado su expresión diferencial, regulación transcripcional y el impacto de su alteración en la agresividad de las células de CaP.

128 p., El Trastorno del Espectro Autista (TEA) es una condición del neurodesarrollo que presenta diversos síntomas, entre los que destacan los déficits en comunicación y comportamiento social y la presencia de movimientos repetitivos/restrictivos. A día de hoy no existe tratamiento y múltiples estudios en animales y humanos se han centrado en diferentes sistemas neuronales para explicar su patofisiología. En concreto, en esta tesis se han estudiado el sistema cortical de excitación e inhibición y el circuito dopaminérgico. Para ello se ha utilizado un modelo murino de autismo, que tiene el gen Cntnap2 eliminado y refleja los mismos síntomas que se han detectado en humanos. En el primer estudio, relacionado con la parte del sistema excitación/inhibición, no se encontró ninguna alteración relevante que pudiera clarificar el papel del gen Cntnap2 en las alteraciones observadas en este modelo. Por otro lado, se estudió el sistema dopaminérgico a nivel estructural y funcional y los resultados revelaron alteraciones funcionales en el modelo de autismo, que se ven reflejadas en una menor activación de las neuronas dopaminérgicas del Área Tegmental Ventral (ATV) y una liberación anómala de dopamina en el Núcleo accumbens (NAc) durante la interacción social. Además, se pudo revertir estos déficits sociales con activación quimiogenética de las neuronas dopaminérgicas del ATV, lo que confirmaba que éstas son las responsables de dichos déficits sociales.

Chaperone proteins are responsible for maintaining the quality and functionality of other proteins. Some chaperones are involved in various functions within reproductive physiology, such as maintaining the quality and functionality of gametes, among which are chaperones HSP70 family, which are expressed mainly in response to stressful situations such as heat shock, oxidative and osmotic stress, among others. Furthermore, members of this family have also been identified in the plasma membrane of the sperm and decreases in their expression compromise their motility and quality. In view of this background, this work focused on the production of recombinant proteins HSPA1A and HSPA2 from bovines (Bos taurus) for their evaluation as an additive in cryopreservation solutions for embryos and gametes. As a result, it was only possible to obtain the HSPA1A protein in a bacterial expression model; with the Escherichia coli (E. coli) Rosetta 2 (DE3) strain, approximately 112 mg of pure protein per liter was obtained, in cultures incubated at a temperature of 37 °C. On the contrary, in production cultures incubated at a temperature of 30 °C, a yield of ± 6 mg of pure protein was achieved. On the other hand, it was not possible to achieve the production of the HSPA2 protein, as a result of being able to amplify the coding sequence, so another amplification strategy must be designed and thus be able to obtain the genetic construction necessary for the generation of the recombinant strain of E. coli capable of producing this protein.

e13a2 and e14a2 are the most frequent transcript types of the BCR::ABL1 fusion gene in chronic myeloid leukemia (CML). The current goal with tyrosine kinase inhibitors (TKI) is to achieve sustained deep molecular response (DMR) in order to discontinue TKI treatment and remain in the so-called treatment-free remission (TFR) phase, but biological factors associated with these goals are not well established. This study aimed to determine the effect of transcript type on TFR in patients receiving frontline treatment with imatinib (IM) or second-generation TKI (2G-TKI). Patients treated at least 119 months with IM presented less post-discontinuation relapse than those that discontinued IM before 119 months (p = 0.005). In addition, cases with the e14a2 transcript type treated at least 119 months with IM presented a better TFR (p = 0.024). On the other hand, the type of transcript did not affect the cytogenetic or molecular response in 2G-TKI treated patients; however, the use of 2G-TKI may be associated with higher and earlier DMR in patients with the e14a2 transcript., Generalitat de Catalunya, Josep Carreras International Foundation, “La Caixa” Foundation, Depto. de Medicina, Fac. de Medicina, TRUE, pub, Descuento UCM

Introducción: La implementación de un método diagnóstico adecuado y eficiente es crucial para la detección temprana de la tuberculosis. Esto no solo permite un control efectivo de la enfermedad para evitar su transmisión y progresión hacia estadios más graves, además previene el desarrollo de resistencia a los fármacos en los pacientes. Objetivo: Evaluar la utilidad de la prueba molecular GeneXpert MTB/RIF en el diagnóstico de Mycobacterium tuberculosis complex, en comparación con la baciloscopia, utilizando el cultivo como referencia. Material y Métodos: Se realizó un estudio descriptivo, observacional y no experimental de corte transversal, se incluyeron 253 muestras de pacientes de ambos sexos y de variados rangos de edad, que fueron evaluadas mediante baciloscopia, GeneXpert MTB/RIF y cultivo. El estudio se centró en muestras procesadas en un Hospital público de la ciudad de Quito durante el período de enero de 2021 a mayo de 2022 Resultados: La prueba molecular GeneXpert MTB/RIF mostró una sensibilidad del 94,7% y una especificidad del 93,9% para el diagnóstico de Mycobacterium tuberculosis complex. Además, se identificó un caso de resistencia a la rifampicina. Conclusión: Este estudio confirma la eficacia de la prueba molecular GeneXpert MTB/RIF sobre la baciloscopia para el diagnóstico oportuno de Mycobacterium tuberculosis complex. Sin embargo, es esencial considerar las diversas condiciones de las muestras y pacientes para optimizar la precisión diagnóstica.

Better understanding of macrophyte tolerance under long exposure times in real environmental matrices is crucial for phytoremediation and phytoattenuation strategies for aquatic systems. The metal(loid) attenuation ability of 10 emergent macrophyte species (Carex riparia, Cyperus longus, Cyperus rotundus, Iris pseudacorus, Juncus effusus, Lythrum salicaria, Menta aquatica, Phragmites australis, Scirpus holoschoenus, and Typha angustifolia) was investigated using real groundwater from an industrial site, over a 90-day exposure period. A “phytobial” treatment was included, with 3 plant growth-promoting rhizobacterial strains. Plants exposed to the polluted water generally showed similar or reduced aerial biomass compared to the controls, except for C. riparia. This species, along with M. aquatica, exhibited improved biomass after bioaugmentation. Phytoremediation mechanisms accounted for more than 60% of As, Cd, Cu, Ni, and Pb removal, whilst abiotic mechanisms contributed to ∼80% removal of Fe and Zn. Concentrations of metal(loid)s in the roots were generally between 10–100 times higher than in the aerial parts. The macrophytes in this work can be considered “underground attenuators”, more appropriate for rhizostabilization strategies, especially L. salicaria, M. aquatica, S. holoschoenus, and T. angustifolia. For I. pseudacorus, C. longus, and C. riparia; harvesting the aerial parts could be a complementary phytoextraction approach to further remove Pb and Zn. Of all the plants, S. holoschoenus showed the best balance between biomass production and uptake of multiple metal(loid)s. Results also suggest that multiple phytostrategies may be possible for the same plant depending on the final remedial aim. Phytobial approaches need to be further assessed for each macrophyte species., This work has been funded by the GREENER project of the European Union's Horizon 2020 research and innovation program (Grant Agreement No. 826312). S. Curiel-Alegre pre-doctoral contract was funded by Junta de Castilla y León (ORDEN EDU/1508/2020, de 15 de diciembre).

[Resumen] La epidemiología basada en aguas residuales (EAR) es fundamental para la monitorización de patógenos responsables de enfermedades infecciosas. Esta Tesis Doctoral presenta en detalle el proyecto COVIDBENS, un programa multidisciplinar que integra las áreas de microbiología, estadística y bioinformática, implementado en el área metropolitana de A Coruña durante la pandemia de COVID-19, con el objetivo de monitorizar el virus SARS-CoV-2 en las aguas residuales de la depuradora de EDAR Bens, que da servicio a los municipios de A Coruña, Arteixo, Cambre, Culleredo y Oleiros. COVIDBENS operó como un sistema de alerta temprana de brotes de SARS-CoV-2 y de sus variantes emergentes, proporcionando información crucial para comprender la verdadera magnitud de la epidemia en la población y facilitando la toma de decisiones por parte de las autoridades. Además, se monitorizó la carga viral de SARS-CoV-2 (copias de ARN/L) a nivel local a partir de las aguas residuales de residencias de mayores ubicadas en el área metropolitana de A Coruña para prever nuevos brotes entre los residentes y evaluar la eficacia de la campaña de vacunación. Este trabajo demostró una vez más que la EAR es una estrategia rentable para prevenir brotes de enfermedades emergentes o futuras amenazas pandémicas., [Resumo] A epidemioloxía baseada en augas residuais (EAR) é fundamental para o rastrexo de patóxenos responsables de enfermidades infecciosas. Esta Tese Doutoral presenta en detalle o proxecto COVIDBENS, un programa multidisciplinar que integra as áreas de microbioloxía, estatística e bioinformática, implementado na área metropolitana da Coruña durante a pandemia de COVID-19, co obxectivo de rastrexar o virus SARS-CoV-2 nas augas residuais da depuradora de EDAR Bens, que serve aos municipios da Coruña, Arteixo, Cambre, Culleredo e Oleiros. COVIDBENS operou como un sistema de alerta temperá de gromos de SARS-CoV-2 e das súas variantes emerxentes, proporcionando información crucial para comprender a verdadeira magnitude da epidemia na poboación e facilitando a toma de decisións por parte das autoridades. Ademais, rastrexouse a carga viral de SARS-CoV-2 (copias de ARN /L) a nivel local a partir das augas residuais de residencias de maiores situadas na área metropolitana da Coruña para prever novos gromos entre os residentes e avaliar a eficacia da campaña de vacinación. Este traballo demostrou unha vez máis que a EAR é unha estratexia rendible para prever gromos de enfermidades emerxentes ou futuras ameazas pandémicas., [Abstract] Wastewater-based epidemiology (WBE) is essential for monitoring pathogens responsible for infectious diseases. This Doctoral Thesis presents in detail the COVIDBENS project, a multidisciplinary program that integrates the areas of microbiology, statistics and bioinformatics, implemented in the metropolitan area of A Coruña with the aim of monitoring SARS-CoV-2 in wastewater from the wastewater treatment plant of Bens, which serves to the municipalities of A Coruña, Arteixo, Cambre, Culleredo and Oleiros. COVIDBENS worked as an early warning system for SARS-CoV-2 outbreaks and its emerging variants, providing crucial information to understand the true magnitude of the epidemic in the population and facilitating decision-making by authorities. Furthermore, the viral load of SARS-CoV-2 (RNA copies/L) at local level was monitored from the wastewater of nursing homes located in the metropolitan area of A Coruña to predict new outbreaks among residents and to evaluate the effectiveness of the vaccination campaign. This work once again demonstrated that the WBE is a cost-effective strategy to prevent emerging diseases outbreaks or future pandemic threats.

[Resumen] La epidemiología basada en aguas residuales (EAR) es fundamental para la monitorización de patógenos responsables de enfermedades infecciosas. Esta Tesis Doctoral presenta en detalle el proyecto COVIDBENS, un programa multidisciplinar que integra las áreas de microbiología, estadística y bioinformática, implementado en el área metropolitana de A Coruña durante la pandemia de COVID-19, con el objetivo de monitorizar el virus SARS-CoV-2 en las aguas residuales de la depuradora de EDAR Bens, que da servicio a los municipios de A Coruña, Arteixo, Cambre, Culleredo y Oleiros. COVIDBENS operó como un sistema de alerta temprana de brotes de SARS-CoV-2 y de sus variantes emergentes, proporcionando información crucial para comprender la verdadera magnitud de la epidemia en la población y facilitando la toma de decisiones por parte de las autoridades. Además, se monitorizó la carga viral de SARS-CoV-2 (copias de ARN/L) a nivel local a partir de las aguas residuales de residencias de mayores ubicadas en el área metropolitana de A Coruña para prever nuevos brotes entre los residentes y evaluar la eficacia de la campaña de vacunación. Este trabajo demostró una vez más que la EAR es una estrategia rentable para prevenir brotes de enfermedades emergentes o futuras amenazas pandémicas., [Resumo] A epidemioloxía baseada en augas residuais (EAR) é fundamental para o rastrexo de patóxenos responsables de enfermidades infecciosas. Esta Tese Doutoral presenta en detalle o proxecto COVIDBENS, un programa multidisciplinar que integra as áreas de microbioloxía, estatística e bioinformática, implementado na área metropolitana da Coruña durante a pandemia de COVID-19, co obxectivo de rastrexar o virus SARS-CoV-2 nas augas residuais da depuradora de EDAR Bens, que serve aos municipios da Coruña, Arteixo, Cambre, Culleredo e Oleiros. COVIDBENS operou como un sistema de alerta temperá de gromos de SARS-CoV-2 e das súas variantes emerxentes, proporcionando información crucial para comprender a verdadeira magnitude da epidemia na poboación e facilitando a toma de decisións por parte das autoridades. Ademais, rastrexouse a carga viral de SARS-CoV-2 (copias de ARN /L) a nivel local a partir das augas residuais de residencias de maiores situadas na área metropolitana da Coruña para prever novos gromos entre os residentes e avaliar a eficacia da campaña de vacinación. Este traballo demostrou unha vez máis que a EAR é unha estratexia rendible para prever gromos de enfermidades emerxentes ou futuras ameazas pandémicas., [Abstract] Wastewater-based epidemiology (WBE) is essential for monitoring pathogens responsible for infectious diseases. This Doctoral Thesis presents in detail the COVIDBENS project, a multidisciplinary program that integrates the areas of microbiology, statistics and bioinformatics, implemented in the metropolitan area of A Coruña with the aim of monitoring SARS-CoV-2 in wastewater from the wastewater treatment plant of Bens, which serves to the municipalities of A Coruña, Arteixo, Cambre, Culleredo and Oleiros. COVIDBENS worked as an early warning system for SARS-CoV-2 outbreaks and its emerging variants, providing crucial information to understand the true magnitude of the epidemic in the population and facilitating decision-making by authorities. Furthermore, the viral load of SARS-CoV-2 (RNA copies/L) at local level was monitored from the wastewater of nursing homes located in the metropolitan area of A Coruña to predict new outbreaks among residents and to evaluate the effectiveness of the vaccination campaign. This work once again demonstrated that the WBE is a cost-effective strategy to prevent emerging diseases outbreaks or future pandemic threats.

606 p., CRM1 bestelako ehunka proteinaren, kargoren, nukleotik zitoplasmaranzko garraioa egikaritzen duen hartzailea da. Horretarako, CRM1ek poltsiko hidrofobiko bat du, zeinetara kargoen esportazio seinaleak, NESak, lotzen diren. Tesi honetan, hainbat kargo edota NES berri identifikatu eta baieztatu dira, horien artean, lehenengoz aktiboki garraiatzen den mikropeptido bat eta horren NESa identifikatu dira. Gainera CRM1 eta NESen arteko lotura testu inguru zelularrean sakontasunean aztertzeko esportazio entsegu berri bat garatu da, zeinak lotura horretan parte hartzen duen aminoazido bakoitzaren zeresana aztertzeko bidea eman duen.Bestetik, CRM1en kargo asko minbiziarekin erlazionatuta, beraz, ez da harritzekoa CRM1 minbiziarekin estuki erlazionaturik egotea. CRM1 minbizian gainadierazita zein mutaturik aurkitu da, eta jada, CRM1 inhibitzaile den selinexor minbizia jakin batzuen tratamendurako onartua izan da. Tesi honetan, CRM1en mutazio onkogenikoak NESen esportazioan duen eragina aztertu da, gainera, selinexor eta beste ituratutako farmakoen arteko sinergia posibleak bilatu dira AML zelulak erabiltzen dituen sistema modelo batean. Eta bukatzeko, CRM1en inhibitzaileek proteoma mailan duten eragina aztertzea ahalbidetuko duen proteinen gertuko biotinilazioan oinarritutako estrategia berri bat garatu da

An excessive production of lactate by cancer cells fosters tumor growth and metastasis. Therefore, targeting lactate metabolism and transport offers a new therapeutic strategy against cancer, based on dependency of some cancer cells for lactate as energy fuel or as oncogenic signal. Herein we present a family of anionophores based on the structure of click-tambjamines that have proved to be extremely active lactate carriers across phospholipid membranes. Compound 1, the most potent lactate transmembrane carrier, was studied in HeLa cells. The use of a monocarboxylate transporters (MCTs) inhibitor proved that 1 is an active lactate transporter in living cells, confirming the results obtained in phospholipid vesicles. Moreover, an additive effect of compound 1 with cisplatin was observed in HeLa cells. Identification of active lactate anionophores working in living cells opens up ways to exploit this class of compounds as molecular tools and drugs addressing dysregulated lactate metabolism., This research has been financially supported by Consejería de Educación de la Junta de Castilla y León (project BU067P20) and Ministerio de Ciencia e Innovación (project PID2020-117610RB-I00). D.A.-C., I.C.-B. and P.F. thank Consejería de Educación de la Junta de Castilla y León, European Regional Development Fund (ERDF) and European Social Fund (ESF) for their pre-doctoral (D.A.-C.) and post-doctoral (I.C.-B. and P.F.) contracts. A.A.-B. thanks to PFCHA/Becas Chile (Folio#72200156). The authors gratefully acknowledge Andrea Sancho-Medina for her contributions to transmembrane anion transport experiments.

After more than three decades of extensive investigations on supramolecular polymers, strategies for self-limiting growth still remain challenging. Herein, we exploit a new V-shaped monomer design to achieve anticooperatively formed oligomers with superior robustness and high luminescence. In toluene, the monomer-oligomer equilibrium is shifted to the monomer side, enabling the elucidation of the molecular packing modes and the resulting (weak) anticooperativity. Steric effects associated with an antiparallel staircase organization of the dyes are proposed to outcompete aromatic and unconventional B−F⋅⋅⋅H−N/C interactions, restricting the growth at the stage of oligomers. In methylcyclohexane (MCH), the packing modes and the anticooperativity are preserved; however, pronounced solvophobic and chain-enwrapping effects lead to thermally ultrastable oligomers. Our results shed light on understanding anticooperative effects and restricted growth in self-assembly., We thank the Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB858) for funding (B.M. and G.F.). B.S. thanks the MICINN/AEI of Spain for the projects EQC2018-004206-P, RED2018-102331-T, PID2019-107779GA-I00/AEI/10.13039/501100011033 and RYC-2017-21789. M. G.-V. and R.Q. thank funding from Consejería de Educación de la Junta de Castilla y León and ERDF (project BU067P20) and MICN/AEI/10.13039/501100011033 (grant PID2020-117610RB-100). S.D.-C. and I.C.-B. thank Consejería de Educación de la Junta de Castilla y León, ERDF (European Regional Development Fund) and European Social Fund for their pre- and post-doctoral contracts, respectively.Conflict of Interest Open Access funding enabled and organized by Projekt DEAL.