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OBJETIVOS: Realizar uma caracterização físico-química e fitoquímica do látex de Jatropha curcas e investigar o seu potencial antiangiogênico. MÉTODOS: foi realizada uma caracterização físico-química inicial do látex de J. curcas utilizando as análises termogravimétricas e a espectroscopia com a Transformada de Fourier. Depois disso, fenóis, taninos e flavonoides foram quantificados. Finalmente, o potencial do látex de J. curcas em inibir a angiogênese foi avaliado através do uso de modelo de membrana corioalantoica de embrião de galinha. Cinco grupos, cada um com 20 ovos de galinha fertilizados, tiveram a membrana corioalantoica exposta às seguintes soluções: (1) água, controle negativo; (2) dexametasona, inibidor da angiogênese; (3) Regederm®, controle positivo; (4) 25% de látex de J. curcas diluído em água; (5) 50% de látex de J. curcas diluído em água; e (6) látex bruto de J. curcas. A análise da rede vascular recém-formada foi feita por meio de imagens capturadas e quantificação do número de pixels. Análises histológicas foram realizadas para avaliar os parâmetros de inflamação, neovascularização e hiperemia. Os resultados foram analisados estaticamente com nível de significância estabelecido em p

Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2014. Paracoccidioides spp. is a thermodimorphic fungus, which causes paracoccidioidomycosis (PCM), an endemic disease in Latin America. Currently, the Paracoccidioides genus is considered a phylogenetic group containing two distinct species: P. brasiliensis and P. lutzii. However, all isolates identified to date are able to cause PCM. Iron is an essential micronutrient for all eukaryotes, since it participates as a cofactor in several metabolic pathways. However, the amount of available iron inside the host is limited to the pathogen. The host iron sources that are used by Paracoccidioides spp. and the molecular mechanisms used by the fungus to acquire iron has not been investigated. In this study, a robust growth of Paracoccidioides spp. in the presence of hemin or hemoglobin was observed. This fact was supported by the ability of the fungus to internalize protoporphyrin rings and to lyse erythrocytes. Transcriptional and proteomic analysis indicated the induction of possible hemoglobin receptors in the presence of hemoglobin and the possibility of internalization of the entire molecule by the fungus. One of these potential receptors, Rbt5, was characterized in this work. Rbt5 is a GPI-anchored protein, present at the Paracoccidioides sp. cell surface. The protein is able to bind hemin, hemoglobin and protoporphyrin and presents antigenic properties. A Paracoccidioides sp.rbt5knockdown strain was obtained in this work using antisense RNA and Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. This strain showed lower survival inside macrophages and in mouse spleen, indicating that Rbt5 may be important for the establishment of Paracoccidioides spp. infection. Furthermore, the reductive iron uptake pathway was investigated in this fungus. In silico analysis pointed that Paracoccidioides spp. could use ferric reductases, ferroxidases and zinc and iron transporters to uptake free iron or iron bound to certain molecules, such as transferrin. The genes encoding those molecules possibly involved in iron uptake were activated in the absence of the metal, which points to the importance of this pathway in conditions of iron deprivation. Genes involved in intracellular iron homeostasis were also investigated in this work and presented regulation by the metal. A ferric reductase activity was demonstrated for Paracoccidioides sp.; however, 59Fe uptake assays showed that the reductive pathway is functional only in conditions of iron deprivation and that the Paracoccidioides spp. ferric reductases are not strongly affected by platinum. Surface molecules involved in iron uptake by the fungus may be important targets for vaccines and/or antifungal drugs. Thus, this work can contribute to the development of alternative therapies for PCM treatment. Paracoccidioides spp. é um fungo termodimórfico, causador da paracoccidioidomicose (PCM), uma doença endêmica da América Latina. Atualmente o gênero Paracoccidioides é considerado um grupo filogenético, contendo duas espécies distintas: P. brasiliensis e P. lutzii. Porém, todos os isolados identificados até o momento são capazes de causar a PCM. O ferro é um micronutriente essencial para todos os eucariotos, pois participa como cofator de diversas vias metabólicas. Porém, dentro do hospedeiro, a quantidade de ferro disponível para captação pelo patógeno é limitada. As fontes de ferro do hospedeiro preferenciais de Paracoccidioides spp. e os mecanismos moleculares utilizados pelo fungo para captar ferro ainda não foram investigados. Neste trabalho, foi constatado um robusto crescimento de Paracoccidioides spp. na presença de hemina ou hemoglobina, corroborado pela capacidade do fungo de internalizar uma protoporfirina e de lisar hemácias. Análises transcricionais e proteômicas apontaram para a indução de possíveis receptores de hemoglobina na presença desta fonte de ferro e para a possível internalização de toda a molécula de hemoglobina pelo fungo. Um desses possíveis receptores, Rbt5, foi caracterizado neste trabalho. Rbt5 é uma proteína GPI-ancorada presente na superfície de Paracoccidioides sp., capaz de se ligar à hemina, protoporfirina e hemoglobina e apresenta propriedades antigênicas. Uma linhagem silenciada para o gene rbt5 foi obtida através de RNA antisentido e de transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens. Esta linhagem apresentou menor sobrevivência dentro de macrófagos e em baço de camundongo, indicando que Rbt5 pode ser importante para o estabelecimento da infecção por Paracoccidioides spp. Além disso, a via redutiva de captação de ferro foi investigada neste fungo. Análises in silico apontaram que Paracoccidioides spp. possa utilizar redutases férricas, ferroxidases e transportadores de ferro e zinco para captar ferro livre ou ligado a certas moléculas, como a transferrina. Os genes codificantes para essas moléculas possivelmente envolvidas com a captação de ferro foram ativados na ausência desse metal, o que aponta para a importância dessa via em condições de privação de ferro. Genes envolvidos com a homeostase intracelular de ferro também foram investigados neste trabalho e apresentaram-se regulados pelo metal. A atividade de redutase férrica foi demonstrada para Paracoccidioides sp., porém ensaios de captação com 59Fe apontaram que a via redutiva só é funcional em condições de privação do metal e que as redutases férricas de Paracoccidioides spp. não são fortemente afetadas por platina. Moléculas de superfície envolvidas com a captação de ferro pelo fungo podem ser importantes alvos de vacinas e/ou de drogas antifúngicas. Dessa forma, este trabalho pode contribuir para o desenvolvimento de terapias alternativas para o tratamento da PCM.

A parede celular de microrganismos patogênicos atua como uma barreira inicial no contato entre o parasito e o hospedeiro. Além de funcionar como uma barreira mecânica, ela abriga um arsenal de macromoléculas imunogênicas. Uma forma pela qual as proteínas estão associadas à parede celular é por meio de âncoras-GPI. A extremidade carboxila hidrofóbica da enzima β-1,3-glicanosiltransferase do fungo patogênico humano Paracoccidioides brasiliensis é característica de proteínas GPI-ancoradas. A montagem e o rearranjo de β-1,3- glicana são de fundamental importância porque esta molécula serve como um esqueleto sobre o qual outros polissacarídeos e proteínas da parede celular estão associados. No fungo termodimórfico P. brasiliensis, β-1,3-glicana é encontrada prioritariamente em micélio, sendo α-1,3-glicana predominante em levedura. Foram rastreadas neste trabalho possíveis interações proteína-proteína realizadas pela β-1,3-glicanosiltransferase 1 de P. brasiliensis (PbGel1p). Para isso utilizou-se a técnica de duplo-híbrido em Saccharomyces cerevisiae, rastreando-se uma biblioteca de cDNA do fungo P. brasiliensis com a enzima estudada. Adicionalmente, foi utilizado, como técnica complementar, o ensaio de pull-down, que isolou in vitro proteínas que interagem direta ou indiretamente com a PbGel1p. Foi possível rastrear 38 produtos gênicos através do sistema de duplo híbrido e isolar três proteínas pelo ensaio de pull-down, identificadas por espectrometria de massas. O papel da PbGel1p na manutenção e no remodelamento da parede celular do fungo foi indicado através da análise das interações rastreadas, como permease de α-glicosídeos, fosfatase ácida, lipase da família GDSL, septina, actina, tubulina, HSP90 e piruvato quinase. Além disso, foram sugeridos a localização da PbGel1p no núcleo das células do fungo e seu papel no silenciamento gênico mediado por alterações estruturais, por meio do rastreamento das seguintes proteínas ligantes a PbGel1p: argonauta Qde2, fator de alongamento transcricional spt6, outros fatores transcricionais e ATP-citrato sintase. Portanto, este estudo indicou, pela primeira vez, que PbGel1p tem localização múltipla e participa tanto de funções classicamente descritas para glicanosiltransferases, como o remodelamento da parede celular, quanto de funções recentemente descritas para essa família de proteínas, como o silenciamento transcricional sítio-específico. The cell wall of pathogenic microbes acts as an initial barrier that is in contact with hostile environments. Besides functioning as a mechanical barrier, it harbours an immunogenic macromolecules arsenal. One of the ways that proteins can be associated to the cell wall, it is through GPI anchor. The hydrophobic C-terminal end of the β-1,3-glucanosyltransferase enzyme of the human pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis is characteristic of GPI anchored proteins. The β-1,3-glucan assembling and rearrangement are essential since this molecule acts as a scaffold to support cell wall proteins and polysaccharides. In the thermodimorphic fungus P. brasiliensis, β-1,3-glucan is found predominantly in mycelium form and α-1,3-glucan is predominant in the yeast form. In this work, it was screened possible protein-protein interactions performed by β-1,3-glucanosyltransferase 1 of P. brasiliensis (PbGel1p). To obtain these results, a P. brasiliensis cDNA library was screened with PbGel1p using the Saccharomyces cerevisiae two hybrid system. In addition, pull-down assay was used as an in vitro complementary technique to isolate proteins that interact direct or indirectly with PbGel1p. It was screened 38 gene products using two hybrid system and it was identified 3 proteins using the pull-down assay associated with mass spectrometry. The PbGel1p role in the cell wall maintenance and remodeling was indicated through the analysis of screened interactions, like alpha-glucosides permease, acid phosphatase, GDSL lipase, septin, actin, tubulin, HSP90 and pyruvate kinase. Furthermore, nuclear localization of PbGel1p and its role in the locus-specific transcriptional silencing were suggested based on such interactions: Qde2 argonaute, transcription elongation factor spt6, others transcription factors and ATP-citrate synthase. Therefore, this study indicated, for the first time, that PbGel1p has multiple location and it participates either in roles classically described for glucanosyltransferases, as the cell wall remodeling, or in recently described functions for this family of proteins, as the locus-specific transcriptional silencing.

A poluição e contaminação dos recursos hídricos por resíduos de processos produtivos é um problema mundial que surgiu a partir da Revolução Industrial, mas apenas nas últimas décadas a preocupação com a destinação dos efluentes contaminados começou a ser uma preocupação devido à escassez de recursos naturais como, por exemplo, da água. Alguns processos podem ser utilizados no tratamento de efluentes como, por exemplo, a eletrodiálise, que é uma técnica de separação por membranas iônicas, ou seja, que possuem cargas em sua matriz, e tem sido considerada por muitos como uma das mais promissoras tecnologias limpas. Nesta técnica, os íons que não conseguem ser retidos pelas membranas catiônicas ou aniônicas são transportados da alimentação (solução diluída) para a solução concentrada por influência da corrente elétrica gerada por uma fonte através de uma diferença de potencial. A grande vantagem desse método é tratar grandes volumes de efluentes gerando como resíduo final um pequeno volume de solução contaminada com grandes concentrações de íons tóxicos. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a eletrodiálise no tratamento de efluentes sintéticos provenientes de curtumes, os quais são contaminados com cromo (VI) na forma do íon Cr2O7-2. Para tanto, as concentrações inicias de cromo hexavalente foram determinadas a partir de um estudo prévio em biorreator anaeróbio, sendo adotado os valores de 10, 65 e 100 mg/L e o eletrólito empregado foi uma solução de Na2SO4 0,25 M. Avaliou-se a densidade de corrente limite da eletrodiálise, a vazão ótima de operação do sistema, a eficiência da eletrodiálise com e sem aplicação de corrente elétrica, bem como o impacto da saturação da solução concentrada no processo. Além disso, também foram estudadas estimativas para a resistência do empilhamento e do rendimento columbiométrico. Os melhores resultados forneceram como densidade de corrente limite 0,0005 A.cm-2, vazão ótima de operação 20-60-60 L/h para eletrólito, alimentação e solução concentrada, respectivamente. Foi possível verificar que a eletrodiálise com aplicação de corrente é mais eficiente do que na ausência de corrente elétrica, tendo em média mais de 90% de extração percentual de cromo hexavalente da solução diluída, pois a corrente elétrica atuou como um agente de limpeza, removendo íons das membranas quando essas já estavam saturadas, o que permite que mais volume de efluente possa entrar na unidade para receber tratamento. Em relação à solução concentrada, que no início do processo foi água destilada, percebeu-se que a máxima concentração que essa pode ter de Cr (VI) foi aproximadamente 570 mg/L de cromo (VI), pois após esse valor não foi mais possível ter a remoção de íons da alimentação mesmo com as membranas limpas. A maior estimativa da resistência elétrica ao empilhamento encontrada foi 2,1 Ohm.cm² e do rendimento columbiométrico 0,36. Por fim, sugere-se que a eletrodiálise pode ser uma técnica promissora para tratamento de efluentes contaminados com cromo, pois quando foi aplicada corrente elétrica foi possível tratar 78 litros de efluentes, gerando como resíduo apenas 4 litros uma solução contaminada, ou seja, 5% do volume total tratado. Existe ainda a possibilidade de recuperação do metal presente nesses 4 L de resíduo final, o qual poderia voltar para o processo produtivo. Pollution and contamination of water resources by productive processes is a global problem that has emerged since the Industrial Revolution, but only in recent decades has the concern about the disposal of contaminated effluents started to be a concern due to the scarcity of natural resources such as, for example, water. Some processes can be used in the treatment of effluents, such as electrodialysis, which is a separation technique by ionic membranes, that is, that have loads in its matrix, and has been considered by many as one of the most promising clean technologies. In this technique, ions that can not be retained by the cationic or anionic membranes are transported from the feed (diluted solution) to the concentrated solution by the influence of the electric current generated by a source with a potential difference. The big advantage of this method is to treat large volumes of effluents generating as final residue a small volume of solution contaminated with large concentrations of toxic ions. Thus,this work aimed to evaluate the electrodialysis in treating of synthetic effluents from tanneries, which are contaminated with chromium (VI) in the form of ion Cr2O7-2. To this end, the initial concentrations of hexavalent chromium were determined from a previous study in anaerobic bioreactor, using values of 10, 65 and 100 mg/L and the electrolyte used was a solution of 0.25 M Na2SO4. It evaluated the current density limit of electrodialysis, the optimal flow system operation, the efficiency of the electrodialysis with and without the application of electric current, as well as the impact of the saturation of the concentrated solution in the process. In addition, estimates for stacking resistance and columbiometric yield were also studied. The best results provided as a current density limit 0.0005 A.cm-2, great flow operating 20-60-60 L / h for electrolyte, feed and concentrated solution, respectively. It was possible to verify that the electrodialysis with current application is more efficient than in the absence of electric current, having more than 90% hexavalent chromium percentage extraction of the diluted solution, since the electric current acted as a cleaning agent, removing ions of the membranes when tthese were already saturated, which allows more volume of wastewater that can enter the unit to receive treatment. Regarding the concentrated solution, which early in the process was distilled water, it was noticed that the maximum concentration that could have to Cr (VI) was approximately 570 mg/L of chromium (VI), because after this value was no longer possible to have ions removed from the feed even with the membranes clean. The highest estimate of the electrical resistance to the stacking was 2.1 Ohm.cm² and the columbiometric yield 0.36. Finally, it is suggested that electrodialysis can be a promising technique for the treatment of effluents contaminated with chromium, because when electric current was applied it was possible to treat 78 liters of effluents, generating as a residue only 4 liters a contaminated solution, that is, 5 % of total volume treated. There is also the possibility of recovering the metal present in these 4 L of final residue, which could return to the production process. Dissertação (Mestrado)

Histoplasma capsulatum é um fungo patogênico termodimórfico causador da micose sistêmica conhecida como histoplasmose. Este fungo cresce como micélio a temperaturas próximas de 25 ºC e como levedura a 37 ºC. Durante o processo infeccioso, microrganismos patogênicos devem obter nutrientes do hospedeiro para sobreviver nos tecidos do mesmo. Dentre estes nutrientes, o cobre é um íon metálico essencial por participar de reações de oxidação/redução, no transporte de elétrons e é requerido para produção de energia e melanina. O cobre em excesso entretanto é tóxico, pois produz espécies reativas de oxigênio, desloca outros metais de metaloproteínas e causa danos ao DNA e devido a isso H. capsulatum deve manter a homeostase deste metal durante a infecção. Observamos aqui que H. capsulatum, através dos níveis transcricionais dos genes Ctr4, Mac1, que estão reprimidos, e Crp1 e Ace1 que estão induzidos durante o processo infeccioso em macrófagos, enfrenta um ambiente de excesso de cobre imposto pelas células hospedeiras via cobre ATPase ATP7a. Esse excesso de cobre realizado pelos macrófagos se mostrou INF-ɣ e tempo dependentes, pois quando macrófagos não são estimulados por INF-ɣ e em tempos maiores de infecção, estes passam a impor um ambiente restritivo de cobre durante a infecção. H. capsulatum usa a bomba de efluxo de cobre Crp1 para se defender desse ambiente tóxico de cobre, pois leveduras mutantes para Crp1 foram incapazes de crescer em níveis elevados do metal. Apesar da importância de Crp1 para o fungo neste contexto, parece que existem outras proteínas que também possam estar exercendo uma função igual a Crp1 em H. capsulatum. Fica claro aqui, mais uma vez, que na relação patógeno – hospedeiro o cobre tem um papel altamente dinâmico, complexo e dependente de certas variáveis biológicas. Histoplasma capsulatum is a thermodymorphic pathogenic fungus that causes systemic mycosis known as histoplasmosis. This fungus grows as mycelium at temperatures around 25°C and as yeast at 37°C. During the infectious process, pathogenic microorganisms must obtain nutrients from the host in order to survive in infected tissues. Among these nutrients, copper is an essential metal ion, because it participates in oxidation/reduction reactions, in energy production, in the transport of electrons, its cofactor of many enzymes and metalloproteins and is required for energy and melanin production. Copper excess however, it is toxic due to the fact that produces reactive oxygen species, dislocates other metals from metalloproteins, causes damage to lipids and DNA, so because of this H. capsulatum must maintain the homeostasis of this metal during infection. We observed here that H. capsulatum, through the transcriptional levels of Ctr4, Mac1, Crp1 and Ace1, during the infectious process in macrophages, faces an environment of copper overload imposed by the host cells via copper ATPase ATP7a. This copper excess shown to be INF-ɣ and time dependent, because when macrophages are not stimulated by INF-ɣ and in greater times of infection, they impose a restrictive copper environment instead, during the infection. H. capsulatum uses the Crp1 copper efflux pump in order to respond this toxic copper milieu, since mutant yeasts for Crp1 were unable to grow at high levels of the metal. Despite the importance of Crp1 for the fungus in this context, it appears that Crp1 is not strictly necessary for the total virulence of the fungus, leading us to infer that other proteins may also be exerting a Crp1-like function in H. capsulatum. It is clear once again that in the pathogen-host relationship copper plays a complex, highly dynamic and dependent on certain biological variables role.

A espécie Vernonanthura polyanthes conhecida popularmente como assa-peixe, pertence à família Asteraceae e apresenta propriedades farmacológicas em função dos compostos bioativos que possui. Popularmente tem sido utilizada para tratar uma variedade de doenças, incluindo feridas, bronquite, pneumonia, hemoptise, tosse persistente, abscessos internos, dor gástrica e de cálculos renais. Em busca de avaliar o potencial do extrato aquoso do extrato de V. polyanthes os objetivos do presente trabalho foram: 1) identificar a atividade angiogênica; 2) realizar análise cienciométrica para identificar as tendências da utilização da técnica da membrana corioalantóide de galinha (CAM) e 3) avaliar o potencial tóxico e citogenotóxico. Para análise da atividade angiogênica foi utilizado o ensaio CAM. Para essa análise foram utilizados os seguintes tratamentos: água esterilizada, Regederm, dexametasona e o extrato de folhas de V. polyanthes nas concentrações de 10, 20 e 40 mg/ml. Como resultado as concentrações de 20 mg/ml e 40 mg/ml apresentam propriedades antiangiogênicas. Esses resultados sugerem o uso dessa planta como possível agente terapêutico que pode ser usado para o tratamento de tumores. A análise cienciométrica foi feita por meio da busca por artigos científicos no ISI – Web of Knowedge utilizando as seguintes combinações de palavras: "chorioallantoic membrane" and CAM, "chorioallantoic membrane" e "chick embryo membrane". Os resultados mostraram que a técnica CAM é um método confiável, que tem sido amplamente utilizado pela comunidade cientifica para responder diferentes processos biológicos. Em relação à avaliação da atividade tóxica e citogenotóxica do extrato aquoso das folhas de V. polyanthes, foram usados os métodos de Artemia salina e Allium cepa. Como resultados, o extrato aquoso de folhas de V. polyantes preparados nas concentrações de 20, 40 e 80 mg/ml mostraram-se tóxicos para Artemia salina, sendo a dose letal mínima (DL50) igual a 24 mg/ml. Ainda em relação à toxicicidade, o ensaio com A. cepa mostrou toxicidade dos extratos de V. polyanthes em todas as concentrações testadas (10, 20 e 40 mg/ml). As análises microscópicas do ensaio com A. cepa mostrou que os extratos aquosos de folhas de V. polyanthes são citotóxicos apenas na concentração de 40 mg/ml. Nenhuma concentração estudada apresentou significante genotoxicidade nas células de A. cepa. The specie Vernonanthura polyanthes popularly known as assa-peixe, belongs to the family Asteraceae and presents pharmacological properties in function of the bioactive compounds that it possesses. Popularly it has been used to treat a variety of diseases, including wounds, bronchitis, pneumonia, hemoptysis, persistent cough, internal abscesses, gastric pain and kidney stones. In order to evaluate the potential of the aqueous extract of V. polyanthes extract the objectives of the present study were: 1) to identify angiogenic activity; 2) perform a scientiometric analysis to identify trends in the use of chicken chorioallantoic membrane (CAM) technique and 3) evaluate the toxic and cytotoxic potential. For analysis of angiogenic activity the CAM assay was used. For this analysis, the following treatments were used: sterile water, Regederm, dexamethasone and the leaves extract of V. polyanthes at 10, 20 and 40 mg/ml concentrations. As a result, concentrations of 20 mg/ml and 40 mg/ml have antiangiogenic properties. These results suggest the use of this plant as a possible therapeutic agent that can be used for the treatment of tumors. The sciciometric analysis was done by searching for scientific articles in the ISI - Web of Knowedge using the following combinations of words: "chorioallantoic membrane" and CAM, "chorioallantoic membrane" and "chick embryo membrane". The results showed that the CAM technique is a reliable method, which has been widely used by the scientific community to respond different biological processes. In order to evaluate the toxic and cytogenotoxic activity of the aqueous extract of the leafs from V. polyanthes, the methods of Artemia salina and Allium cepa were used. As a result the aqueous extract of leafs from V. polyanthess prepared in the concentrations of 20, 40 and 80 mg / ml were toxic to Artemia salina, with the LC50 toxicity threshold being 24 mg / ml. Also in relation to toxicity, the A. salina showed toxicity of V. polyanthes extracts for all concentrations tested (10, 20 and 40 mg/ml). Microscopy analyzes of the A. salina showed that aqueous extracts of V. polyanthes leaves are cytotoxic in the concentration of 40 mg/ml. No concentration studied showed significant genotoxicity in the cells of A. salina. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O sorgo é um cereal de grande importância comercial. Todavia, essa gramínea não se adapta bem a solos de baixa fertilidade tornado a cultura dependente do uso de fertilizantes industriais. Na busca para solucionar esse problema, a os benefícios que podem ser proporcionados interação entre bactérias associadas a plantas têm sido objeto de estudo de vários trabalhos de pesquisa. No entanto, atualmente existem poucos estudos sobre bactérias isoladas do sorgo. O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização polifásica (morfológica, bioquímica e genética) de bactérias endofíticas isoladas de raízes de sorgo. Foram selecionadas um total de 24 isolados usando o meio semisseletivo de NFb-lactato, LGI-P e YMA. A caracterização foi baseada nos aspectos de morfológicos; bioquímicos com ênfase no potencial para produção de enzimas e genético pela análise da região intergênica 16S-23S rRNA. Todos os isolados foram classificados como gram-negativo e apresentaram grande resistência a antibióticos e ampla flexibilidade metabólica quanto ao uso de diferentes fontes de carbono. A maioria dos isolados (95,8%) mostrou atividade enzimática para de catalase, urease, redutase de nitrato e nitrogenase. Entre as enzimas hidrolíticas, as bactérias isoladas de sorgo apresentaram maior potencial para produção de lipases (70,8%) e celulases (50%). Mais de 90% dos isolados foram capazes de solubilizar o fosfato. A análise de similaridade permitiu identificar uma grande diversidade morfofisiológica e genética entre as bactérias isoladas das raízes de sorgo. Foi possível ainda constatar que vários isolados apresentaram mecanismo relacionado à promoção do crescimento da planta e podem ser considerados promissores como inoculantes ou como novas fontes de enzimas para uso biotecnológico. Sorghum is a cereal of great commercial importance. However, this grass does not adapt well to soils of low fertility making the crop dependent on the use of industrial fertilizers. In the quest to address this problem, the benefits that can be provided for interaction between bacteria associated with plants have been the subject of study of various research papers. However, there are currently few studies on bacteria isolated from sorghum. The objective of this work was to characterize polyphase (morphological, biochemical and genetic) of endophytic bacteria isolated from sorghum roots. A total of 24 isolates were selected using the NFb-lactate, LGI-P and YMA semi-insulin medium. The characterization was based on morphological aspects; biochemicals, directed to enzymatic potential and genetic by PCR of the 16S-23S rRNA intergenic region. All isolates were classified as gram-negative and showed high resistance to antibiotics and wide metabolic flexibility regarding the use of different carbon sources. Most of the isolates (95.8%) showed enzymatic activity for catalase, urease, nitrate reductase and nitrogenase. Among the hydrolytic enzymes, the bacteria isolated from sorghum presented higher potential to produce lipases (70.8%) and cellulases (50%). More than 90% of the isolates solubilize phosphate. The analysis of similarity allowed identify morpho-physiological and genetic diversity between the bacteria isolated from the roots of sorghum. It was also possible to verify isolates with mechanisms related to the promotion of plant growth, which can be considered as promising as inoculants or as new sources of enzymes for biotechnological use. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O látex de diversas plantas apresenta potencial biotecnológico para desenvolvimento de novos fármacos. Dentre as lactíferas, a mais conhecida e explorada comercialmente é a seringueira, a qual possui látex com propriedade angiogênica. A fração F1 do látex de seringueira originou o Regederm® , creme-gel utilizado no tratamento de lesões teciduais. Contudo, existem relatos sobre alergias a produtos a base do látex de seringueira. Por esse motivo, tem-se buscado outras espécies lactíferas produtoras de látex com menor potencial alergênico. A mangabeira (Hancornia speciosa Gomes), planta nativa do cerrado e pouco explorada comercialmente, pode ser uma alternativa, uma vez que essa planta produz um látex com menor quantidade de proteínas, biocompatível e com propriedades angiogênicas. O objetivo desse trabalho foi fracionar o látex de mangabeira e avaliar o potencial angiogênico de suas frações; visando identificar qual dessas frações tem potencial para ser utilizado como biomaterial para aplicações médicas, e também determinar quais os principais metabólitos secundários que constituem a fração angiogênica. Para avaliar o potencial angiogênico, foi realizado o ensaio utilizando membrana corioalantóide (MCA) de ovos de galinha fertilizados. Os dados obtidos a partir desta técnica foram complementados pela análise molecular da expressão de genes relacionados à remodelamento tecidual e por prospecção fitoquímica da fração responsável pela maior atividade angiogênica do látex de mangabeira. Os resultados morfométricos obtidos pelo ensaio da MCA demonstraram um aumento significativo da rede vascular nas membranas tratadas com as frações soro e F1 do látex de mangabeira, quando comparadas ao controle neutro e controle inibidor. Além da avaliação morfológica das MCAs, foram realizadas também análises histológicas as quais identificaram maior intensidade de inflamação, células do conjuntivo e angiogênese nas MCAs submetidas às frações soro e F1 do látex de mangabeira, confirmando os dados morfométricos e sugerindo a atividade regenerativa do látex de mangabeira. As análises moleculares mostraram uma expressão aumentada do gene da metaloprotease 2, associado a angiogênese, nas MCAs tratadas com a fração F1 do látex de mangabeira. Assim, de forma geral, os dados obtidos no presente estudo revelaram que a fração soro do látex de mangabeira representa um importante agente angiogênico e que este biomaterial possui potencial terapêutico para ser explorado pelas ciências médicas. A prospecção química da fração soro, responsável pela maior atividade angiogênica, revelou a presença de flavonóides e taninos. Dados da literatura destacam a importância farmacológica desses compostos por serem substâncias que possuem atividade antioxidante, antimicrobiana e de forte potencial angiogênico, sendo capazes de atuar na aceleração do processo de regeneração tecidual. A utilização do soro do látex de mangabeira como um biomaterial em aplicações médicas, representa uma área bastante promissora, em especial, devido a sua capacidade de estimulação natural da angiogênese e por apresentar biocompatibilidade com sistemas vivos. Esses resultados agregam valor econômico a H. speciosa, a qual até o presente momento, vem sendo explorada comercialmente apenas pela utilização de seus frutos pela indústria alimentícia. The latex of several plants presents biotechnological potential for the development of new drugs. Among the lactiferous, the best known and commercially explored is the rubber tree, which has latex with angiogenic properties. The F1 fraction of natural rubber latex originated Regederm®, cream-gel used in the treatment of tissue lesions. However, there are reports of allergies to products based on natural rubber latex. For this reason, researchers have been looking for other latex producing lactiferous species with less allergenic potential. The mangabeira (Hancornia speciosa Gomes), a plant native to the Cerrado and poorly explored commercially, may be an alternative, since this plant produces a latex with less amount of proteins, biocompatible and with angiogenic properties. The objective of this work was to fractionate the mangabeira latex and to evaluate the angiogenic potential of its fractions; aiming to identify which of these fractions has the potential to be used as biomaterial for medical applications, and also to determine the main secondary metabolites that constitute the angiogenic fraction. To evaluate the angiogenic potential, the chorioallantoic membrane (CAM) assay was performed on fertilized chicken eggs. The data obtained from this technique were complemented by quantitative real-time PCR of genes related to tissue remodeling and by phytochemical prospection of the fraction responsible for the highest angiogenic activity of mangabeira latex. The morphometric results, obtained by the CAM assay, showed a significant increase of the vascular network in the membranes treated with the serum and F1 fractions of the mangabeira latex when compared to the neutral control and control inhibitor. In addition to the morphological evaluation of the CAMs, histological analysis were also performed, which identified a higher intensity of inflammation, conjunctival cells and angiogenesis in the CAMs submitted to the serum and F1 fractions of the mangabeira latex, confirming the morphometric data and suggesting the regenerative activity of mangabeira latex. Molecular analysis showed increased expression of the metalloprotease 2 gene, associated with angiogenesis, in CAMs treated with F1 fraction of mangabeira latex. Thus, in general, the data obtained in the present study shows that the serum fraction of mangabeira latex represents an important angiogenic agent and that this biomaterial has therapeutic potential to be explored by the medical sciences. The chemical prospection of the serum fraction, responsible for the highest angiogenic activity, showed the presence of flavonoids and tannins. Literature data highlight the pharmacological importance of these compounds to be substances that have antioxidant, antimicrobial and strong angiogenic potential, being able to act in the acceleration of the tissue regeneration process. The use of the mangabeira latex serum as a biomaterial in medical applications represents a very promising area, in particular due to its ability to naturally stimulate angiogenesis and to present biocompatibility with living systems. These results add economic value to H. speciosa, which until the present moment has been commercially explored only by the use of its fruits by the food industry. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Punicalagin e gemin D são elagitaninos encontrados em algumas espécies de plantas de importância médica, tais como Punica granatum e Pelargonium sidoides. Para o presente estudo, punicalagin e gemin D foram isolados, respectivamente, das folhas de Lafoensia pacari e Eugenia uniflora, duas espécies de plantas medicinais brasileiras com diversas atividades biológicas, tais como, antitumoral, antioxidante e cicatrizante de feridas. No presente estudo, nós avaliamos os seguintes efeitos: genotóxico, citotóxico, antigenotóxico e anticitotóxico de gemin D utilizando o teste de Ames em Salmonella typhimurium, o teste do micronúcleo (MN) e o ensaio cometa em camundongos. Com o elagitanino punicalagin, nós investigamos os mesmos efeitos citados anteriormente utilizando os testes cometa e MN em camundongos, e também avaliamos a atividade angiogênica e antiangiogênica desse tanino utilizando o ensaio em membrana corioalantóide (MCA) do ovo embrionado de galinha. Os resultados obtidos com gemin D mostraram que esse tanino não apresentou efeito genotóxico pelos testes de Ames e MN, porém, no ensaio cometa, a maior dose de gemin D (100 mg/kg) induziu aumento de quebras no DNA em comparação com o controle negativo (p < 0.05). Na avaliação antigenotóxica, gemin D protegeu o DNA contra as ações lesivas de 4-nitroquinolina-1-óxido e azida sódica pelo teste de Ames, e também contra ciclofosfamida (CIF) no pré- e co-tratamento pelos testes cometa e MN em camundongos, entretanto, ele não protegeu o DNA no pós-tratamento. Os resultados obtidos com punicalagin mostraram que esse elagitanino não exibiu efeito genotóxico pelos testes cometa e MN em camundongos. Apenas a maior dose de punicalagin (50 mg/kg) exibiu efeito citotóxico significativo pelo teste do MN, e no co-tratamento com CIF, essa citotoxicidade foi maior do que a apresentada pelo controle positivo (CIF). O co-, pré e pós-tratamento de punicalagin com CIF em camundongos levou a uma redução significativa no número de quebras no DNA e na frequência de MN induzida por CIF, indicando efeito antigenotóxico. Utilizando o modelo MCA, punicalagin exibiu atividade angiogênica em todas as concentrações testadas, especialmente a menor concentração (12.5 µg/µL). Assim, gemin D e punicalagin demonstraram relevantes efeitos antigenotóxico e citotóxico, indicando que eles podem ser prováveis candidatos para quimioprevenção ou desenvolvimento de novas terapias para o câncer. Além disso, a atividade angiogênica apresentada por punicalagin nesse estudo poderia contribuir em processos de reparação tecidual e cicatrização de feridas, como por exemplo no tratamento de úlceras gástricas e queimaduras. Punicalagin and gemin D are ellagitannins found in some species of plants of medical importance such as Punica granatum and Geun japonicun. For this study, punicalagin and gemin D were isolated, respectively, from the leaves of Lafoensia pacari and Eugenia uniflora, two species of Brazilian medicinal plants with several biological activities, such as antitumoral, antioxidant and healing of wounds. In the present study, we evaluated the genotoxic, cytotoxic, antigenotoxic and anticytotoxic effects of gemin D using the Ames test in Salmonella typhimurium, the micronucleus (MN) test and comet assay in mice. With the punicalagin ellagitannin, we assessed the same effects mentioned above using the comet and MN tests in mice, and we also evaluated the angiogenic and antiangiogenic activities of this ellagitannin by the chick chorioallantoic membrane (CAM) angiogenic assay. The results obtained with gemin D showed that this tannin did not present genotoxic effect by the Ames and MN tests, however, in the comet assay, the highest dose of gemin D (100 mg/kg) induced increase of breaks in DNA in comparison to the negative control (p < 0.05). In the antigenotoxicity, gemin D protected DNA against the harmful action of 4-nitroquinoline-1-oxide and sodium azide by the Ames test, and also against cyclophosphamide (CPA) in pre- and co-treatment by MN and comet tests in mice, but it did not protect DNA in the post-treatment. The results obtained with punicalagin showed that this tannin exhibited no genotoxic effect by MN test and comet assay in mice. Only the highest dose of punicalagin (50 mg/kg) exhibited significant cytotoxic effect by MN test, and in the co-treatment with CPA, this cytotoxicity was enhanced. Co-treatment, pre-treatment and post-treatment of punicalagin with CPA led to a significant reduction in the number of DNA breaks and in the frequency of CPA-induced MN, indicating antigenotoxic effect. Using the CAM model, punicalagin exhibited angiogenic activity in all concentrations, mainly at the lowest concentration (12.5 µg/µL). Therefore, gemin D and punicalagin exhibited relevant antigenotoxic and cytotoxic effects, which indicate that they may be probables candidates for chemoprevention or for the development of new cancer therapies. In addition, the angiogenic activity presented by punicalagin in this study could contribute for the processes of tissue repairing and wound healing. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O Diabetes Mellitus (DM) é uma doença crônica não transmissível, com alta prevalência e alto custo social. O DM está entre as primeiras causas de mortalidade no mundo. O objetivo deste estudo foi analisar o efeito de uma intervenção educativa, baseada na teoria social cognitiva, sobre o conhecimento, parâmetros bioquímicos e antropométricos em pacientes com diabetes tipo 2. Foi realizado um ensaio clínico randomizado com 83 pacientes com DM tipo 2 não insulinodependentes, de ambos os sexos, cadastrados na Estratégia Saúde da Família (ESF), do Município de Israelândia-Go, no ano de 2015. A amostra final foi constituída por 76 participantes com DM tipo 2, distribuídos em dois grupos, intervenção (GI=38) e controle (GC=38). O GI participou de intervenção educativa, tendo como base a Teoria Social Cognitiva, no período de setembro de 2015 a fevereiro de 2016. O GC não participou da intervenção educativa, porém continuou participando das atividades mensalmente desenvolvidas pela ESF no Hiperdia. Os dados foram coletados no GC, durante as atividades no Hiperdia, e no GI, durante as atividades educativas. O estudo foi realizado em quatro etapas: etapa 1- formação dos grupos (GI e GC), etapa 2 - aplicação dos questionários (pré-intervenção), e coleta de dados bioquímicos e antropométricos, etapa 3- intervenção educativa no GI, etapa 4- aplicação dos questionários e coleta dos dados bioquímicos e antropométricos (pós-intervenção). Nas etapas 2 e 4, foram aplicados, em ambos os grupos, o Questionário de Conhecimento sobre Diabetes e avaliados parâmetros de controle: peso, índice de massa corporal (IMC), circunferência da cintura (CC), glicemia capilar e hemoglobina glicada (HbA1c). O processamento dos dados foi realizado no programa-Stata (versão SE. 64). O teste de normalidade Shapiro-Wilk foi usado para averiguar a normalidade das variáveis. Foram utilizados os testes do Qui-Quadrado e T-Student para analisar as variáveis categóricas e numéricas, respectivamente, com um nível de significância de 5%. Os resultados apontam para um aumento significativo do conhecimento em todos os aspectos abordados para GI (p

Micro-organismos patogênicos podem encontrar em nichos do hospedeiro diferentes fontes de carbono geradoras de propionil-CoA, dentre elas, o propionato. Este composto é tóxico para a célula se acumulado no seu interior, e pode ser gerado nos tecidos do hospedeiro pelo metabolismo dos aminoácidos isoleucina, valina e metionina, ou pelo metabolismo de ácidos graxos de cadeia ímpar. Portanto, durante a infecção, o metabolismo de propionil-CoA a um nutriente não tóxico e aproveitável energeticamente se faz de grande relevância. Contudo, não há estudos sobre a via de metabolização de propionil-CoA em fungo do gênero Paracoccidioides, causador da paracoccidioidomicose, uma micose sistêmica de alta incidência na América Latina. Sendo assim, para caracterização de qual via metabólica este organismo utiliza para metabolização de propionil-CoA, foi feita uma busca dos genes codificantes para enzimas do ciclo do metilcitrato no genoma de Paracoccidioides spp. e foram identificados genes codificantes para as três enzimas exclusivas desse ciclo, as quais são metilcitrato sintase, metilcitrato desidrogenase e metilcitrato liase. Após análise de crescimento e viabilidade, a qual demonstrou que Paracoccidioides lutzii utiliza propionato como fonte de carbono, foi feita a análise de expressão gênica das enzimas do ciclo do metilcitrato e observou-se que são reguladas em resposta ao propionato. Adicionalmente, a atividade enzimática da MCS demonstrou que essa enzima é ativa no interior da célula fúngica ou mesmo quando é secretada. Além disso, foi demostrada sua capacidade de atuar também como uma citrato sintase. Por fim, o perfil proteômico de P. lutzii em propionato mostrou a indução do ciclo do metilcitrato, ciclo do glioxilato, metabolismo de aminoácidos e gliconeogênese, e a repressão de vias como glicólise, fermentação e síntese de ácidos graxos, os quais demonstram o rearranjo metabólico para suprir a demanda energética celular metabolizando propionato. Neste sentido, entender os mecanismos pelo qual P. lutzii lança mão para metabolizar propionil-CoA permite a compreensão dos mecanismos de adaptação metabólica que esse fungo lança mão em diferentes nichos de colonização. Pathogens can find different carbon sources in host niches generating propionyl-CoA, among them propionate. This compound is toxic to the organism if accumulated within the cell, and can be generated in the host tissue by the metabolism of amino acids isoleucine, valine and methionine, or by the metabolism of odd-chain fatty acids. Therefore, during infection, the propionyl-CoA metabolism to nontoxic nutrient and usable energetically is of great relevance. Nonetheless, there are no studies about the propionyl-CoA metabolization pathway in fungi of the genus Paracoccidioides, causer of paracoccidioidomycosis, a systemic mycosis of high incidence in Latin America. Thus, to characterize of which metabolic pathway this fungus utilizes to propionyl-CoA metabolization, it was made a search the genes coding to enzymes of methylcitrate cycle in genome of Paracoccidioides spp. and were identified genes coding to the three exclusive enzymes of this cycle, which are methylcitrate synthase, methylcitrate dehydrogenase and methylcitrate lyase. After analysis of growth and viability, which demonstrated that Paracoccidioides lutzii utilizes propionate as carbon source, it was made gene expression analysis of enzymes of methylcitrate cycle and was observed that are regulated in response to propionate. Additionally, the enzymatic activity of the MCS showed that this enzyme is active inside of fungal cells and also when is secreted, as well as its dual capacity of to act with a citrate synthase and metylcitrate synthase. Finally, the proteomic profile of P. lutzii in propionate showed enzymes induction of methylcitrate cycle, glyoxylate cycle, amino acid metabolism and gluconeogenesis, and the repression of glycolytic pathway, fermentation and fatty acid synthesis, which demonstrated of metabolic rearrangement to supply the cellular energetic demand, metabolizing propionate. In this sense, to understand the mechanism of propionyl-CoA metabolism in P. lutzii provides data for visualization of metabolic adaptation that this fungus makes use in different colonization of niches. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES