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O pró-fármaco olmesartana medoxomila (OLM) é um anti-hipertensivo representante da classe dos bloqueadores seletivos dos receptores da angiotensina II (BRA). No Brasil, encontra-se disponível sob a forma de comprimidos revestidos (Benicar®). Foi aprovado pelo FDA em 2002. Não existe monografia disponível para este fármaco em nenhum código oficial. Desse modo, este trabalho objetivou o desenvolvimento de métodos analíticos para quantificação da OLM na substância química de referência (SQR) e forma farmacêutica, estabelecer a cinética de dissolução in vitro para os comprimidos revestidos deste fármaco e por fim investigar a presença de diferentes estruturas polimórficas da SQR deste anti-hipertensivo. A determinação da faixa de fusão, a espectrofotometria na região do infravermelho (IV), assim como a espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) de 1H e 13C permitiram a identificação da SQR. Os métodos por espectrofotometria na região do ultravioleta (UV), cromatografia em camada delgada (CCD), cromatografia a líquido de alta eficiência (CLAE) e cromatografia capilar eletrocinética micelar (MECC) foram utilizados para análise qualitativa do fármaco no produto acabado. A determinação quantitativa foi realizada através do desenvolvimento e validação de método indicativo da estabilidade por CLAE e MECC, avaliando-se os parâmetros descritos pelas guias de validação como: especificidade, robustez, linearidade, limites de detecção e quantificação, precisão e exatidão. Determinou-se ainda, a intercambialidade dos mesmos, através de análise estatística por ANOVA (p = 0,05), e comprovou-se que ambos podem ser utilizados para análise qualitativa e quantitativa da OLM em matéria-prima e produto acabado. O teste de dissolução foi desenvolvido e validado de acordo com o guia proposto pelo USP Fórum, utilizando como meio de dissolução 900 ml de uma solução a 0,5% (p/V) de lauril sulfato de sódio pH 6,8, a 37 ± 0,5 °C, pás a 50 rpm e quantificação por CLAE e espectrofotometria na região do UV. A análise do teor de OLM dissolvida, realizada por ambos os métodos, não apresentou diferença estatística (p > 0,05). Os perfis de dissolução do Benicar®, medicamento referência, e do Olmetec®, outra formulação disponível no mercado, foram considerados semelhantes, após aplicação do método modelo-independente (f1 e f2) e eficiência de dissolução. Avaliou-se, também, a cinética de dissolução de ambas as formulações através da aplicação de métodos modelo-dependentes. Os perfis de dissolução do Benicar® e Ometec® foram descritos pelos modelos propostos por Hixson-Crowell e de ordem zero, respectivamente. Os valores calculados para t50% e t80%, obtidos através da aplicação da equação de ordem zero, foram semelhantes aos valores experimentais encontrados no perfil de dissolução de ambos os produtos. As técnicas de espectrofotometria por reflexão difusa no IV com transformada de Fourier (ATRFTIR), difração de raios-X de pó (XRPD), calorimetria exploratória diferencial (DSC), termogravimetria (TGA) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) permitiram a identificação de uma forma amorfa e outra polimórfica da SQR da OLM, diferentes daquela descrita na literatura. Logo, de acordo com os resultados obtidos, todos os métodos propostos podem ser utilizados para no controle de qualidade da OLM em SQR e produto acabado. The prodrug olmesartan medoxomil (OLM) is a selective angiotensin II receptor blocker (ARB). In Brazil, it is available as coated tablets (Benicar®). It was approved by FDA in 2002. There is no monograph available for this drug in any official code. According to this, the main purpose of this study was to develop a quality control analytical methodology for OLM in bulk material and dosage form, to establish in vitro dissolution kinetic for OLM coated tablets, and to investigate the crystalline behavior of OLM bulk material. The investigation of melting range and application of techniques such as infrared spectrophotometry (IR), as well as the 1H and 13C nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy were used to identify OLM. Ultraviolet (UV) spectrophotometry, thin-layer chromatography (TLC), highperformance liquid chromatography (LC) and micellar electrokinetic chromatography (MEKC) were used for qualitative analysis of the drug in coated tablets. The quantitative determination was carried out through the development and validation of a stability-indicating LC and MEKC methods, evaluating the parameters described in the guidelines such as: specificity, robustness, linearity, detection and quantitation limits, precision, and accuracy. The results were compared statistically by ANOVA (p = 0.05), and no difference was found between them for both bulk material and coated tablets. A dissolution test was developed and validated according to the guideline proposed by the USP Forum, using 900 ml of dissolution medium containing 0.5% of sodium lauryl sulfate (w/V) pH 6.8, at 37 ± 0.5 °C, paddle at 50 rpm, and quantitation by LC and UV spectrophotometry. The resulting dissolution profiles did not show statistical difference (p > 0.05) between methods. The dissolution profiles of Benicar®, reference formulation, and Olmetec®, another commercial formulation available, were considered similar, using model independent (f1, f2, and dissolution efficiency) methods. The dissolution kinetic of both formulations, using model dependent approaches, revealed that Benicar® followed the Hixson-Crowell model, while Olmetec® the zero-order model. The calculated values of t50% and t80%, obtained from zero-order equation, were similar of experimental values found in the dissolution profile for both products. The attenuated total reflectance Fourier transformed infrared (ATR-FTIR) spectrophotometry, along with differential scanning calorimetry (DSC), thermogravimetry (TG), X-ray powder diffraction (XRPD), and scanning electron microscopy (SEM) allowed to identify one amorphous and other polymorphic forms of OLM. According to the obtained results, all proposed methods could be used in the quality control of OLM bulk material and coated tablets.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Cetirizine is an antihistamine of second-generation used to relieve physical symptoms of allergic rhinitis. The benefits of possessing initial fast action, delayed effect and less cholinergic and sedative activity, comparing with other compounds of the same class are highlighted. The drug is commercially available as tablets, oral solution and compounded capsules. There are no official monographs, up to this moment, to control the quality of this drug in its pharmaceutical forms. In the present work, methods for the quantification and dissolution evaluation of the drug in tablets and capsules were developed and validated. Comparative studies among some commercially formulations and a preliminary stability study of tablets were also conducted. UV spectrophotometry, liquid chromatography, and capillary electrophoresis methods were developed and validated for quantitative determination, and showed linearity, precision and accuracy. The selected conditions for the dissolution test were 900 mL of 0.1 N HCl as medium, using paddles for tablets and basket for capsules, with rotation speed of 50 rpm. The comparative study presented that some products showed quality deviations. Moreover, we observed that important characteristics for solid oral pharmaceutical formulations were modified after three months storage at 40ºC ± 2ºC and 75% ± 5% relative humidity. A cetirizina é um anti-histamínico de segunda geração utilizado no alívio dos sintomas físicos da rinite alérgica, apresentando a vantagem de possuir rápido início de ação, efeito prolongado e menor atividade colinérgica e sedativa, quando comparada com os demais compostos da mesma classe. Encontra-se comercialmente disponível na forma de comprimidos, solução oral e cápsulas manipuladas. Não existem, até o momento, monografias em códigos oficiais para controlar a qualidade desse fármaco em suas formas farmacêuticas. Neste trabalho foram desenvolvidos e validados métodos de quantificação e de avaliação da dissolução do fármaco em comprimidos e cápsulas. Estudo comparativo entre algumas formulações disponíveis comercialmente, bem como estudo preliminar da estabilidade dos comprimidos, foram também realizados. Os métodos desenvolvidos e validados para determinação quantitativa foram: espectrofotometria na região do ultravioleta, cromatografia líquida e eletroforese capilar, os quais apresentaram linearidade, precisão e exatidão. As condições selecionadas para o teste de dissolução foram 900 mL de HCl 0,1N como meio, utilizando pá para comprimidos e cesta para cápsulas, com velocidade de rotação de 50 rpm. O estudo comparativo realizado demonstrou que alguns produtos apresentaram desvios da qualidade. Verificou-se, também, que características importantes para formas farmacêuticas sólidas de uso oral foram alteradas após três meses de armazenamento a 40ºC ± 2ºC e 75% ± 5% de umidade relativa.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Brazil is one of the countries with the highest prevalence of congenital toxoplasmosis in the world and the treatment of the infection is done through the association of sulfadiazine (SDZ), pyrimethamine and folinic acid. However, SDZ is commercially available only astablets, which turns difficult the treatment of children. In this context, the objective of this work was to develop and to determine the stability of formulations for pediatric use, with adequate characteristics and excipients compatible with the age group. To achieve our goal, SDZ suspensions at 100 mg/mL were prepared, using the active pharmaceutical ingredient (API, suspension A) or crushed tablets (suspension B). The formulations were prepared, after careful choice of excipients and concentrations to be used and stored under refrigeration for 30 days for stability evaluation. The physical stability of the suspensions was analyzed through the organoleptic characteristics, pH, particle size and viscosity. The chemical stability was verified through the SDZ content, which was determined by an ultra-high performance liquid chromatography (UPLC) method developed and validated in this study. The dissolution of the formulations was also investigated, as well as the microbiological stability, for the latter it was necessary to inactivate the antimicrobial action of the formulation components, to avoid false-negative results. The pH of the suspensions remained in the neutrality range and unchanged during the study (p>0.05). It was observed a decrease in particle size during the study (p0,05). Houve diminuição do tamanho de partícula em cada formulação ao longo do tempo, sendo que a formulação B (50,63 ± 2,65 μm) apresentou tamanho de partícula significativamente maior em relação à formulação A (35,2 ± 5,26 μm). Adicionalmente, foi possível identificar a presença de cristais na suspensão A, advindos da própria SDZ, entretanto, não houve alteração dessa característica ao longo do período de análise. Ambas as formulações se apresentaram-se como fluidos não-Newtonianos e não houve alteração estatisticamente significativa na viscosidade, durante 30 dias. As suspensões A e B apresentaram teores próximos de 100% sem apresentar variação estatística, o que comprovou a estabilidade química de 30 dias. Além disso, apresentaram mais de 80% de dissolução em 15 minutos, sem diferença estatística significativa quando comparadas as porcentagens de SDZ dissolvida logo após a preparação e ao final do estudo, assim como, entre as formulações A e B. Não foi observado crescimento microbiano (

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Fundação de Apoio à Tecnologia e Ciência - FATEC Denosumab (DmAb) is monoclonal antibody (mAb) that inhibits proliferation and activity of osteoclasts cells, that is commercially available in Brazil as Prolia® and Xgeva®, for treatment of bone diseases. Structurally, it is composed of two heavy chains and two light chains, having a molecular mass of 147 kDa. Fragment crystallizable (Fc) region of heavy chains contain N-glycosylation sites, where are linked structures with sialic acid residues. In this study, a capillary zone electrophoresis (CZE) method was developed and validated to quantitate DmAb and its charge variants in biopharmaceutical products. Uncoated fused-silica capillaries (50 μm i.d., 56 cm effective length) were employed, and the background electrolyte (BGE) solution was a 300 mmol/L epsilon-aminocaproic acid (EACA) and 2 mmol/L triethylenetetramine (TETA) buffer at pH 4.8 and 0.03% (v/v) Tween 20. DmAb samples were analyzed at a concentration of 5 mg/mL, spiked with the internal standard. Equally, the sialic acids levels of DmAb were determined by an reversed-phase liquid chromatography method with fluorescence detection (RP–HPLC–F), with a Kinetex® EVO C18 column (5 μm i.d., 100 Å, 250 mm × 4.6 mm). The sialic acids were released from DmAb biomolecules in a 0.5 mol/L sodium bisulfate solution (80 °C, 20 min), followed by derivatization reaction with the 40 mg/mL O-phenylenediamine (OPD) reagent (80 °C, 40 min). Besides, the in vitro bioassay was validated using RAW 264.7 macrophage cells (ATCC® TIB−71TM) that differentiated into osteoclasts. The DmAb potency were evaluated by its capacity of inhibits osteoclast cells proliferation induced in vitro. The CZE separation was obtained with a migration time approximately 11.3 min for DmAb. The CZE method demonstrated to be specific, accurate (101.61%) and robust, and were applied in conjunction with the size exclusion and reversed-phase liquid chromatographic (SE–HPLC and RP–HPLC) methods, previously validated, and with in vitro bioassay to quantitate DmAb in seven batches of Prolia®, giving mean values of content/potencies between 98.44% and 101.52%. These results were compared, demonstrating significant correlation (r > 0.98). The analytical methods enabled also to monitor charge variants, high-molecular-weight (HMW) proteins and fragments from DmAb. The RP−HPLC‒F method showed three separated peaks related to sialic acids of the DmAb biomolecule, with retention times of 9.2, 10.9, e 12.0 min. Pharmaceutical products Prolia® and Xgeva® showed 0.16 and 0.17 μg sialic acids/mg DmAb, respectively. Finally, after validation studies, the in vitro bioassay demonstrated to be specific, accurate (102.33%) and robust to evaluation of DmAb potency and were applied in conjunction with the SE–HPLC method to quantitate DmAb in six batches of Prolia®, giving mean values of content/potencies of 100.80% e 100.87%, respectively. Therefore, it is suggested that the analytical methods and the in vitro bioassay can be applied in conjunction to analyze DmAb biotechnology-derived products, establishing analytical tools that will assure the quality of the products and basis for future studies of biosimilarity of DmAb. O denosumabe (DmAb) é um anticorpo monoclonal (mAb) que inibe a proliferação e atividade de células osteoclásticas e encontra-se disponível comercialmente no Brasil como Prolia® e Xgeva®, para tratamento de doenças ósseas. Estruturalmente, apresenta duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, com massa molecular de 147 kDa. A região região do fragmento cristalizável (Fc) das cadeias pesadas apresenta sítios de N-glicosilação, onde se ligam estruturas com resíduos de ácido siálico. Neste trabalho, desenvolveu-se e validou-se método por eletroforese capilar de zona (ECZ) para a avaliação de DmAb e suas variantes de carga em produtos biofarmacêuticos. Foi utilizado capilar de sílica fundida não revestido (50 μm d.i., 56 cm) e solução eletrolítica composta de tampão ácido épsilon-aminocaproico (EACA) 300 mmol/L e trietilenotetramina (TETA) 2 mmol/L, pH 4,8, adicionado de Tween 20 0,03% (v/v). As amostras de DmAb foram analisadas na concentração de 5 mg/mL, adicionadas de padrão interno. Paralelamente, determinou-se o conteúdo de ácidos siálicos da biomolécula de DmAb por cromatografia líquida em fase reversa com detecção por fluorescência (CL‒FR‒F), utilizando coluna C18 Kinetex® EVO (5 μm d.i., 100 Å, 250 mm × 4,6 mm). Os resíduos de ácidos siálicos foram liberados da molécula de DmAb por reação com bissulfito de sódio 0,5 mol/L (80 ºC, 20 min), seguida de derivatização com ortofenilenodiamina (OPD) 40 mg/mL (80 ºC, 40 min). Além disso, o bioensaio in vitro foi validado utilizando células de macrófagos RAW 264,7 (ATCC® TIB−71TM) que se diferenciaram em osteoclastos. A potência do DmAb foi avaliada pela capacidade de inibir a formação osteoclástica induzida in vitro. A separação eletroforética foi obtida com tempo de migração de 18,1 min para o DmAb. O método por ECZ demonstrou-se específico, exato (101,61%) e robusto e foi então aplicado em conjunto com métodos por cromatografia líquida por exclusão molecular e em fase reversa (CL‒EM e CL‒FR), previamente validados, e com o bioensaio in vitro, para quantificação de DmAb em sete lotes de Prolia®, fornecendo valores médios de teores/potências entre 98,44% e 101,52%. Estes resultados foram comparados, demonstrando correlação significativa (r > 0,98). Os métodos analíticos também permitiram monitorar a presença de variantes de carga, proteínas de alta massa molecular e fragmentos de DmAb. No método por CL‒FR‒F, foram separados três picos cromatográficos referentes aos ácidos siálicos da biomolécula de DmAb, com tempos de retenção de 9,2, 10,9, e 12,0 min. Os produtos biofarmacêuticos Prolia® e Xgeva® apresentaram 0,16 e 0,17 μg ácidos siálicos/mg DmAb, respectivamente. Por fim, após estudos de validação, o bioensaio in vitro demonstrou-se específico, exato (102,33%) e robusto para avaliação de potência de DmAb e foi aplicado em conjunto com método por CL‒EM para quantificação de DmAb em de seis lotes de Prolia®, fornecendo valores médios de teores/potências de 100,80% e 100,87%, respectivamente. Sendo assim, sugere-se que os métodos analíticos e o bioensaio in vitro sejam aplicados em conjunto para análise dos produtos biotecnológicos de DmAb, estabelecendo uma ferramenta analítica que assegurará a qualidade dos produtos e que servirá de base para futuros estudos de biossimilaridade de DmAb.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Rivaroxaban (RIV) is an oral anticoagulant with the mechanism of action based on the inhibition of the factor Xa of the coagulation cascade. It is clinically used for the prophylaxis and treatment of thromboembolic diseases and nonvalvular atrial fibrillation. In the present research, a stability-indicating micellar electrokinetic capillary chromatography (MEKC) method was validated for the analysis of RIV in tablets dosage forms, and the results were compared to those of the anti-factor Xa bioassay and the reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) method. Besides, the chiral-HPLC was optimized to separate the enantiomers. The MEKC method was performed on a fused-silica capillary (effective length 40 cm and 50 μm i.d.), maintained at 25ºC, and the separation voltage was 30 kV. The background electrolyte solution consisted of 75 mM MES buffer and 25 mM sodium dodecyl sulphate (SDS) solution at pH 2.0. Injections were carried out using a pressure mode at 50 mbar for 60 s, with detection by a photodiode array detector set at 202 nm. The migration time was 2.81 min and the method was linear over the concentration range of 0.5 – 50 μg/mL (r² = 0.9991). The detection limit (DL) and quantitation limit (QL) were 0.16 μg/mL and 0.54 μg/mL, respectively. Specificity and stability-indicating capability of the method were established in degradation studies, which also showed that there was no interference of the excipients. The accuracy was 100.67% with bias lower than 1.60%. The proposed method was applied to the quantitative analysis of RIV in tablet dosage forms and the results were correlated to those of the anti-factor Xa assay and the validated RP–HPLC method showing values 0.66% higher and 0.59% lower, respectively, with non-significant differences (p > 0.05). The results show that the MEKC could constitute an alternative for the analysis of the tablets. Then, the chiral-HPLC was performed to separate the enantiomers, which were subjected to the anti-factor Xa assay and cytotoxicity test, showing low activity for the R-enantiomer and lower toxicity. The results of the physicochemical methods were compared to those of the anti-factor Xa assay, which showed non-significant differences (p > 0.05). Besides, the analytical capability of each method was emphasized, and only the chiral RP-HPLC was able to detect and quantify the enantiomeric forms. In this context, the present research represents a contribution to guarantee the quality, to assure the safety and therapeutic efficacy of the pharmaceutical products, and to establish bases for advances in the study of the generic drug containing RIV. A rivaroxabana (RIV) é um anticoagulante de uso oral que apresenta mecanismo de ação baseado na inibição do fator Xa (FXa) da cascata de coagulação. É indicada para prevenção e tratamento da trombose venosa profunda (TVP) e para pacientes com fibrilação arterial não-valvar. No presente trabalho foi desenvolvido e validado método por cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) para avaliação de RIV em comprimidos, e os resultados foram comparados com aqueles fornecidos pelo bioensaio da atividade antifator Xa e pelo método por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR). Além disso foi otimizado método por cromatografia líquida quiral (CL-quiral) para separação dos enantiômeros. O método por MEKC foi executado com capilar de sílica fundida (40 cm de comprimento efetivo x 50 μm d.i.), mantido a temperatura de 25ºC e a tensão aplicada foi de 30 kV. A solução eletrolítica foi composta de ácido morfolinoetano sulfônico (MES) 75 mM e dodecilsulfato de sódio (SDS) 25 mM, em pH 2,0. O tempo de injeção foi de 60s com pressão de 50 mBar, e detecção por arranjo de diodos (DAD) a 202 nm. O tempo de migração da RIV foi de 2,81 min e a linearidade do método determinada na faixa de concentração de 0,50 − 50 μg/mL (r2 = 0,9991). Os limites de detecção e quantificação foram 0,16 e 0,54 μg/mL, respectivamente. A especificidade foi avaliada em estudos de degradação, e demonstrou-se também, que não houve interferência dos excipientes. A exatidão foi de 100,67%, com erro relativo inferior a 1,60%. A média dos teores encontrados pela aplicação do método proposto foi 0,66% maior e 0,59% menor, em relação aos resultados do bioensaio da atividade antifator Xa e do método por CL-FR, respectivamente, com diferenças não significativas (p > 0,05). Demonstrou-se que o método por MEKC representa alternativa para a análise de comprimidos de RIV. Executaram-se, então, estudos por CL-quiral e os enantiômeros separados foram submetidos a avaliação da atividade biológica e citotoxicidade, observando-se que a forma S é ativa e a R apresenta baixa atividade e menor citotoxicidade. Os resultados obtidos pelos métodos físico-químicos foram comparados com os fornecidos pelo ensaio biológico do antifator Xa, demonstrando que não apresentam diferença significativa (p > 0,05). Além disso, destacou-se a capacidade analítica de cada método, e que somente a cromatografia quiral possibilita a análise qualitativa e quantitativa das formas enantioméricas. Neste contexto, a pesquisa representa contribuição analítica para assegurar a qualidade, contribui para garantir a segurança e eficácia terapêutica dos produtos farmacêuticos, e estabelece bases para avanços no estudo de medicamento genérico contendo RIV.

Ebastine (EBA) is a second-generation antihistamine with poor water solubility. It is used in the treatment of allergic rhinitis and chronic idiopathic urticaria. For oral administration of drugs, there is a preference for solid dosage forms and the therapeutic efficacy of them is directly related to their solid state. Therefore, it is very important to control these properties during the various phases of the development of drug products. The aim of this work was to evaluate the impact of different crystal habits of EBA on the physico-chemical characteristics of the drug. Four not reported new crystal habits of EBA were obtained through the slow solvent evaporation technique, using different solvents and temperatures. The EBA crystals and raw material were analyzed by solid state techniques including X-ray powder diffraction and single crystal diffraction, differential scanning calorimetry, thermogravimetry, Fourier transform infrared, scanning electron microscopy, intrinsic dissolution rate and powder dissolution. The crystalline structure of EBA was determined through single crystal X-ray diffraction. The powder dissolution results indicated significant difference between dissolution profiles and dissolution efficiency from EBA raw material and the new crystals obtained, suggesting the possible influence of distinct crystal habits on the bioavailability of this drug. A ebastina (EBA) é um anti-histamínico de segunda geração com baixa solubilidade aquosa. É utilizada no tratamento de rinites alérgicas e urticária idiopática crônica. Para a administração de fármacos pela via oral existe uma preferência pelas formas farmacêuticas sólidas, e a eficácia terapêutica destes está diretamente associada às suas propriedades no estado sólido. Portanto, é muito importante controlar essas propriedades durante as várias fases do desenvolvimento de um medicamento. O propósito desse trabalho foi avaliar o impacto de diferentes hábitos cristalinos de EBA sobre as características físico-químicas do fármaco. Foram obtidos quatro novos hábitos cristalinos de EBA, ainda não reportados, por evaporação lenta, em diferentes solventes e temperaturas de evaporação. A matéria-prima de EBA e os cristais foram analisados por técnicas de caracterização no estado sólido, incluindo difração de raios X de pó e de monocristal, calorimetria exploratória diferencial, termogravimetria, espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier, microscopia eletrônica de varredura, velocidade de dissolução intrínseca e dissolução em pó. A estrutura cristalina da EBA foi determinada através da difração de raios X de pó e de monocristal. Os resultados da dissolução em pó indicaram diferença significativa entre os perfis de dissolução e entre a eficiência de dissolução dos cristais obtidos e da matéria-prima de EBA, sugerindo a possibilidade da influência de diferentes hábitos cristalinos na biodisponibilidade do fármaco.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Interleukin 11 (IL-11) is an endogenous cytokine that directly stimulates the proliferation of hematopoietic stem cells and megakaryocytic progenitor cells and induces megakaryocytic maturation. With advances in biotechnology, particularly with the advent of recombinant DNA technology has been enabled the expression of the IL-11 gene in Escherichia coli and thus the large-scale production of interleukin-11 Recombinant human (rhIL-11), which is clinically indicated, especially for severe thrombocytopenia to prevent and reduce the need for platelet transfusions following myelosuppressive chemotherapy in patients with non-myeloid malignancies at high risk of serious trompocitopenia. The analysis for CZE method were performed on a fused-silica capillary (effective length, 40 cm; 50 μm i.d.), using electrolyte solution consisted of 50 mM dihydrogen phospate solution at pH 3.0. The capillary was maintained at 25º C, the applied voltage was 20 kV. Injections were performed using a pressure mode at 50 mbar for 45 s, with detection by photodiode array detector set at 196 nm. The SE-LC method was carried out on a BioSep-SEC-S 2000 column (300 mm x 7.8 mm i.d.), maintained at 30ºC. The mobile phase consisted of 0.02 M 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid and 0.5 M sodium chloride buffer, pH 6.0, run isocratically at a flow rate of 0.9 mL/min, and using a photodiode array (PDA) detection at 220 nm. Chromatographic separation was obtained with retention times of 10.31 min, and 8.12 min, and was linear over the concentration range of 1-300 μg/mL (r2 = 0.9992) and 1-200 μg/mL (r2 = 0.9996), respectively, for CZE and SE-LC. The limits of detection and quantitation were 0.21 and 1.0 μg/mL, respectively, for the CZE and 0.23 and 1.0 μg/mL, for the SE-LC. The specificity of the methods has been verified and confirmed by studies of degradation or interference of the excipients. Equally, the accuracy was 100.37% and 99.81%, with bias lower than 1.13% and than 0.43%, respectively, for CZE and SE-LC. Moreover, the in vitro cytotoxicity test of related proteins and higher molecular weight forms showed significant differences (p< 0.05) compared to intact molecule. The validated methods were applied for the determination of rhIL-11 and related proteins in biotechnology-derived products, and the results were correlated to those of a validated reversed-phase LC method (RP-LC) and an TF-1 cell culture assay, with significant correlation (p> 0.05). Thus, we suggest the application of methods developed and validated by CZE and SE-LC to improve quality control of rhIL-11 biotechnology-derived product, thereby contributing to ensure their safety and therapeutic efficacy. A interleucina 11 (IL-11) é uma citocina endógena que estimula diretamente a proliferação de células tronco-hematopoiéticas e progenitoras megacariocíticas e induz o amadurecimento megacariocítico. Com os avanços na área da biotecnologia, especialmente com o advendo da tecnologia do DNA recombinante, possibilitou-se a expressão do gene da IL-11 em Escherichia coli, e assim a produção em grande escala da interleucina-11 humana recombinante (rhIL-11), a qual é clinicamente indicada, principalmente, para a prevenção de trombocitopenia grave e redução da necessidade de transfusões de plaquetas após quimioterapia mielossupressiva em pacientes com neoplasias malignas não mielóides com alto risco de trompocitopenia grave. Neste trabalho foram desenvolvidos e validados métodos por eletroforese capilar de zona (ECZ) e cromatografia líquida por exclusão molecular (CL-EM) para a avaliação de rhIL-11 em produtos biofarmacêuticos. No método por ECZ, utilizou-se capilar de sílica fundida (40 cm de comprimento efetivo x 50 μm d.i.) e solução eletrolítica composta de 50 mM de fosfato de sódio dihidrogenado, pH 3,0. O capilar foi mantido a temperatura de 25ºC, e a tensão aplicada foi de 20 kV. O tempo de injeção foi de 45 s, com pressão de 50 mBar, e detecção por arranjo de diodos (DAD), em 196 nm. Para o método por CL-EM utilizou-se coluna BioSep-SEC-s-2000 (300 mm x 7,8 mm d.i.), mantida a 30ºC. A fase móvel foi constituída de tampão ácido 2-(N-morfolino)etanosulfônico 0,02 M e cloreto de sódio 0,5 M, pH 6, com vazão isocrática de 0,9 mL/min., por detector DAD em 220 nm. A rhIL-11 foi eluída nos tempos de 10,31 e 8,12, sendo linear na faixa de concentração de 1-300 μg/mL (r2 = 0,9992) e 1-200 μg/mL (r2 = 0,9996), respectivamente, para o método por ECZ e por CL-EM. Os limites de detecção e quantificação foram 0,21 e 1,0 μg/mL, para o método por ECZ e 0,23 e 1,0 μg/mL por CL-EM. A especificidade dos métodos foi verificada e confirmada por estudos de degradação e de interferência dos excipientes. A exatidão foi 100,37 e 99,81%, com bias inferior a 1,13 e 0,43%, respectivamente, para os métodos por ECZ e CL-EM. Além disso, realizou-se o teste de citotoxicidade in vitro das formas degradadas, apresentando, para as amostras submetidas às condições ácidas e fotolíticas, diferença significativa (p< 0,05) em relação à molécula íntegra. Os métodos propostos foram aplicados para a avaliação do teor/potência e dos produtos de degradação de rhIL-11 em formulações biofarmacêuticas, e os resultados foram correlacionados com o método validado por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) e bioensaio em células TF-1, apresentando correlação significativa (p> 0,05). Assim, sugere-se que os métodos desenvolvidos e validados por ECZ e CL-EM sejam aplicados para aprimorar o controle da qualidade do produto biotecnológico de rhIL-11, contribuindo, desse modo, para garantir sua segurança e eficácia terapêutica.

Febuxostat is a novel non purine drug indicated for the treatment of hyperuricemia in gout. A reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) method was validated for the determination of febuxostat in pharmaceutical dosage forms. The LC method was carried out on a XTerra C18 column (150 mm x 3.9 mm I.D.), maintained at 25 ºC. The mobile phase consisted of water (pH 3.5) acetonitrile (40:60, v/v), run at a flow rate of 0.8 mL/min and using photodiode array (PDA) detection at 316 nm. The chromatographic separation was obtained with retention time of 3.9 min, and was linear over the range of 0.25 - 30 μg/mL (r2=0.9995). The specificity and stability-indicating capability of the method was proven through degradation studies were carried out by LC and MS and showing also, that there was no interference of the excipients and degradation products in the quantification of the drug. Moreover, the in vitro cytotoxicity test of the degraded products showed significant differences (p