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Background: Pericardium tissue allograft can be used for surgical repair in several procedures. One of the tissue engineering strategies is the process of decellularization. This process decreases immunogenic response, but it may modify the natural extracellular matrix composition and behavior. Objective: The aim of this study was to evaluate the effectiveness of cell removal, maintenance of extracellular matrix properties and mechanical integrity of decellularized human pericardium using a low concentration solution of sodium dodecyl sulfate. Methods: Decellularization was performed with sodium dodecyl sulfate and ethylenediaminetetraacetic acid. Histological analysis, DNA quantification, evaluation of glycosaminoglycans and collagen were performed. Biomechanical assay was performed using tensile test to compare the decellularization effects on tissue properties of tensile strength, elongation and elastic modulus. P < 0.05 was considered significant. Results: There was reduction in visible nuclei present in pericardium tissue after decellularization, but it retained collagen and elastin bundles similar to fresh pericardium. The DNA contents of the decellularized pericardium were significantly reduced to less than 511.23 ± 120.4 ng per mg of dry weight (p < 0.001). The biomechanical assay showed no significant difference for fresh or decellularized tissue. Conclusion: The decellularization process reduces cell content as well as extracellular matrix components without changing its biomechanical properties. Resumo Fundameto: O enxerto de pericárdio pode ser usado em muitos procedimentos de correção cirúrgica. Uma das estratégias da engenharia tecidual é o processo de descelularização. No entanto, embora esse processo diminua a resposta imunogênica, a descelularização pode modificar tanto o comportamento como a composição da matriz extracelular natural. Objetivos: Avaliar a eficácia da descelularização usando baixa concentração de dodecil sulfato de sódio na remoção celular, na manutenção das propriedades da matriz extracelular e na integridade mecânica do pericárdio humano descelularizado. Métodos: A descelularização foi realizada com dodecil sulfato de sódio e ácido etilenodiamino tetra-acético. Foi realizada análise histológica, quantificação de DNA, e avaliação de glicosaminoglicanos e colágeno. O estudo biomecânico foi conduzido pelo teste de tração para comparar os efeitos da descelularização sobre as propriedades teciduais de resistência à tração, alongamento e módulo de elasticidade. Foi considerado um valor de p < 0,05 como estatisticamente significativo. Resultados: Observou-se uma redução na quantidade de núcleos presentes no pericárdio após a descelularização, apesar de manter quantidades similares de feixes de elastina e de colágeno. As concentrações de DNA do pericárdio descelularizado foram significativamente reduzidas para menos que 511,23 ± 120,4 ng por mg de peso seco (p < 0,001). O teste biomecânico não apontou diferenças entre os tecidos fresco e descelularizado. Conclusão: A descelularização reduziu a concentração de células bem como os componentes da matriz extracelular sem afetar suas propriedades biomecânicas.

Background: Pericardium tissue allograft can be used for surgical repair in several procedures. One of the tissue engineering strategies is the process of decellularization. This process decreases immunogenic response, but it may modify the natural extracellular matrix composition and behavior. Objective: The aim of this study was to evaluate the effectiveness of cell removal, maintenance of extracellular matrix properties and mechanical integrity of decellularized human pericardium using a low concentration solution of sodium dodecyl sulfate. Methods: Decellularization was performed with sodium dodecyl sulfate and ethylenediaminetetraacetic acid. Histological analysis, DNA quantification, evaluation of glycosaminoglycans and collagen were performed. Biomechanical assay was performed using tensile test to compare the decellularization effects on tissue properties of tensile strength, elongation and elastic modulus. P < 0.05 was considered significant. Results: There was reduction in visible nuclei present in pericardium tissue after decellularization, but it retained collagen and elastin bundles similar to fresh pericardium. The DNA contents of the decellularized pericardium were significantly reduced to less than 511.23 ± 120.4 ng per mg of dry weight (p < 0.001). The biomechanical assay showed no significant difference for fresh or decellularized tissue. Conclusion: The decellularization process reduces cell content as well as extracellular matrix components without changing its biomechanical properties.

Background Bacterial contamination remains the major problem in skin banks, even after antimicrobial treatment, and results in high rates of tissue discarding. This study aimed to analyze bacterial contamination in 32 human skin allografts from the skin bank of Dr. Roberto Corrêa Chem from the Hospital Complex Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre. These samples were already discarded due to microbial contamination. The identification of the bacteria isolated from skin allografts was performed by matrix assisted laser desorption ionization–time of flight. The antimicrobial susceptibility of the isolates to six different classes of antimicrobials was determined using the disk-diffusion agar method, and the evaluation of the inhibitory potential was determined by the minimal inhibitory concentration (50/90) of antimicrobials already used in the skin bank and those that most isolates were susceptible to. Results A total of 21 (65.6%) skin samples were contaminated with Gram-positive bacteria: 1 (4.7%) with Paenibacillus sp., 12 (61.9%) with Bacillus sp., 6 (28.5%) with Staphylococcus sp., and 2 (9.5%) with Bacillus sp. and Staphylococcus sp. Several resistance profiles, including multiresistance, were found among the isolates. Most of the isolates were susceptible to at least one of the antimicrobials used in the skin bank. All isolates were susceptible to amikacin, gentamicin, and tetracycline, which demonstrated the best inhibitory activities against the isolates and were considered as potential candidates for new antimicrobial treatments. Conclusions Bacillus, Paenibacillus, and Staphylococcus were isolated from the skin allografts, thus demonstrating the predominance of Gram-positive bacteria contamination. Other factors not related to the resistance phenotype may also be involved in the persistence of bacterial isolates in the skin allografts after antibiotic treatment. Gentamicin, amikacin, and tetracycline can be considered as an option for a more effective treatment cocktail.

A disponibilidade de aloenxertos de pele é comprometida devido à contaminação microbiana que persiste às práticas de descontaminação e aos tratamentos antimicrobianos mais comumente utilizados pelos bancos de pele. Com o objetivo de obter melhor compreensão sobre os contaminantes bacterianos e fúngicos de aloenxertos de pele e a padronização de um tratamento antimicrobiano mais eficaz, o presente estudo avaliou 32 amostras de peles alógenas humanas disponibilizadas pelo Banco de Pele Dr. Roberto Corrêa Chem da Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre, que já haviam sido descartadas devido contaminação microbiana. Após isolamento, a identificação por espectrometria de massa por ionização e dessorção a laser - tempo de vôo (MALDI-TOF) revelou que os principais contaminantes foram bactérias Gram-positivas incluindo os gêneros Bacillus, Staphylococcus e Paenibacillus sp. A partir dos resultados do perfil de susceptibilidade a seis diferentes classes de antimicrobianos observou-se vários perfis de resistência, incluindo de multirresistência entre os isolados. Surpreendentemente a maioria dos isolados foi susceptível a pelo menos um dos antimicrobianos usados no banco de pele (estreptomicina e/ou penicilina). Todos os isolados foram susceptíveis à amicacina, gentamicina e tetraciclina, que também mostraram melhor potencial inibitório com base nos resultados de concentração inibitória mínima (CIM). Detectou-se através da técnica de cristal violeta que vários isolados eram formadores de diferentes níveis de biofilme. No intuito de ampliar o estudo, alguns desses isolados e isolados de peles não alógenas (incluindo bactérias Gram-negativas) foram avaliadas, no estado planctônico, quanto ao efeito bactericida de seis diferentes coqueteis antimicrobianos, sendo que as combinações de penicilina, gentamicina, ceftazidima e penicilina, gentamicina, ceftazidima, tetraciclina apresentaram os melhores resultados. Contudo, através da análise por microscopia eletrônica de varredura, observou-se que nenhum desses dois coqueteis foi capaz de eliminar por completo a contaminação por bactérias em estado de biofilme sobre peles alógenas. Através da análise por agrupamento foi identificada a espécie de isolados de Bacillus que não haviam sido identificados por MALDI-TOF, além de terem sido encontrados grupos de Bacillus sp. que se distribuíram de acordo com as a origem, sugerindo populações distintas em peles alógenas e não alógenas. Foram isolados os fungos filamentosos Paecilomyces sp., Aspergillus sp. e Penicillium sp, com CIMs a anfotericina B que variaram de 0,0625 a 4 μg/mL, sendo que 68.4% dos isolados fúngicos apresentaram valores de CIM >1 μg/mL. Diversos fatores não relacionados a expressão de resistência a antimicrobianos podem estar contribuindo para a persistência da contaminação bacteriana. Contudo, a observação de isolados multirresistentes evidencia a necessidade de um monitoramento da resistência dentro dos bancos de tecidos. The availability of skin allografts is compromised due to the microbial contamination that persists to the decontamination practices and the antimicrobial treatments most commonly used by skin banks. In order to obtain a better understanding of the bacterial and fungal contaminants of skin allografts and the standardization of a more effective antimicrobial treatment, the present study evaluated 32 samples of human allogenous skins available by the skin bank of Dr. Roberto Corrêa Chem from the Hospital Complex Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre, which had already been discarded due to microbial contamination. After isolation, identification by matrix assisted laser desorption ionization–time of flight (MALDI-TOF) revealed that the main contaminants were Gram-positive bacteria including the genera of Bacillus, Staphylococcus and Paenibacillus sp. From the results of the susceptibility profile to six different classes of antimicrobials, several resistance profiles were observed, including multiresistance among the isolates. Surprisingly, most of the isolates were susceptible to at least one of the antimicrobials used in the skin bank (streptomycin and/or penicillin). All isolates were susceptible to amikacin, gentamicin and tetracycline, which also showed a better inhibitory potential based on the results of minimal inhibitory concentration (MIC). It was detected by the crystal violet technique that several isolates formed different levels of biofilm. In order to expand the study, some of these isolates and isolates of non-allogeneic skins (including Gram-negative bacteria) were evaluated in the planktonic state for the bactericidal effect of six different antimicrobial cocktails. The combinations of penicillin, gentamycin, ceftazidime and penicillin, gentamicin, ceftazidime, tetracycline presented the best results. However, by scanning electron microscopy, it was observed that none of these two cocktails was able to completely eliminate the contamination by bacteria in biofilm on allogenous skin. Through group analysis it was identified the species of some Bacillus isolates that had not been identified by MALDI-TOF, moreover, it was observed Bacillus sp. groups which were distributed according to their origin, suggesting distinct populations in allogeneic and non-allogeneic skin. Were isolated the filamentous fungi Paecilomyces sp., Aspergillus sp. and Penicillium sp, with MICs to amphotericin B ranging from 0.0625 to 4 μg/mL, and 68.4% of the fungal isolates showed MIC values >1 μg / mL. Several factors not related to antimicrobial resistance expression may be contributing to the persistence of bacterial contamination. However, the observation of multiresistant isolates highlights the need for resistance monitoring in tissue banks.

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Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T18:31:43Z No. of bitstreams: 1 Helen Ferreira Dissertacao completa.pdf: 1601194 bytes, checksum: 0a50dbfbef2648bc746b9cd1be42c71f (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T18:31:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Helen Ferreira Dissertacao completa.pdf: 1601194 bytes, checksum: 0a50dbfbef2648bc746b9cd1be42c71f (MD5) Previous issue date: 2016-03-07 In recent years, regulation of biobanks and biorepositories of human biological samples became essential, leading research and assistance institutions to suit the standards of ethical conduct, legality and operation. This study deals with technical and operational organization of a biorepository for human skin and nerves samples of the Laboratório de Hanseníase, Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brazil.The main goal is to meet national guidelines and the institutional policy of quality systems for laboratories, as well as compose the network biobanks Fiocruz. The study was conducted based on the standard technical requirements of quality and safety ISO 15189: 2015. Samples are collected in biopsies from patients treated in the Souza Araújo Ambulatory, an assistance area of Laboratório de Hanseníase after obtaining a informed consent term, intended to aid in the diagnosis and treatment of leprosy, and also in the research projects. Samples are collected, identified and neatly stored in containers with liquid nitrogen and their associated technical information form a database created in the 2010 version Access® software. Operating procedures (SOPs) were developed and implemented in order to standardize the receiving, identification and samples storage, as well as the maintenance of the containers system. The database allows the generation of indicators that show the profile of the samples stored in biorepository, considering the number of positive cases, classification, location of all samples from each patient, and control of the material for use in diagnosis or in the project. It is estimated that, with the system standardization, the biorepository may provide adequate samples with accessible technical and traceable information to the studies, producing reliable and reproducible results, in accordance with the requirements of external regulatory agencies and the need to publish in scientific journals with high impact factor. This work contributes to the biorepository certification, and continual improvement of the scientific quality of the projects developed in the Laboratório de Hanseníase. Nos últimos anos, a regulamentação de biobancos e biorrepositórios de amostras biológicas humanas, tornou-se necessária, levando as instituições de pesquisa e de assistência a se adequarem às normas de conduta ética, legal e operacional. O presente trabalho trata da organização técnica e operacional do biorrepositório de amostras de pele e nervos do Laboratório de Hanseníase do Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil e tem como objetivos atender às diretrizes nacionais, à política institucional para implantação de sistemas da qualidade nos laboratórios e à formação da rede Fiocruz de biobancos e foi realizado baseado nos requisitos técnicos de qualidade e segurança da norma ABNT NBR ISO 15189:2015. As amostras colhidas nas biópsias realizadas em pacientes atendidos no ambulatório Souza Araújo, braço assistencial do Laboratório de Hanseníase, após obtenção do termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE), têm a finalidade de auxiliar no diagnóstico e tratamento da hanseníase e são também usadas em projetos de pesquisa. Essas amostras foram reunidas, identificadas e ordenadamente armazenadas em reservatórios com nitrogênio líquido e suas informações técnicas associadas formam o banco de dados criado no software Access® versão 2010. Foram elaborados e implantados os procedimentos operacionais (POPs) padronizando a coleta, recebimento, registro, armazenamento e também a manutenção do sistema de reservatórios. Esses POPs incluem os procedimentos e equipamentos de biossegurança individuais e coletivos utilizados no trabalho com o material biológico e com nitrogênio líquido. O banco de dados através de seus registros, possibilita gerar indicadores que mostram o perfil das amostras armazenadas no biorrepositório quanto ao número de casos positivos, classificação, localização de todas as amostras de cada paciente, controle de saída do material para uso em diagnóstico ou projeto de estudo. Estima-se que, com a padronização do sistema, o biorrepositório forneça amostras adequadas, com informações técnicas acessíveis e rastreáveis para a realização dos estudos, produzindo resultados confiáveis e reprodutíveis, de modo que atenda às exigências de órgãos regulatórios externos e à necessidade de publicar em revistas científicas com alto fator de impacto. Este trabalho contribui com a busca da certificação do biorrepositório, e a melhoria contínua da qualidade científica dos projetos desenvolvidos no Laboratório de Hanseníase.

Os Banco de Tecidos Alógenos do Sistema Musculoesquelético devem incluir nos seus procedimentos disposições especiais relativas à manipulação de tecidos por forma a evitar não só a contaminação de outros tecidos como também garantir a qualidade ambiente e a segurança do pessoal de acordo com a Lei 12/2009 de 26 de março alterada pela Lei 1/2015 de 8 de janeiro. Neste âmbito, são descritos diversos procedimentos que incluem: o controlo ambiental das áreas de colheita, processamento e preservação dos tecidos; a utilização de técnica assética cirúrgica na manipulação dos tecidos, controlo da temperatura e humidade; controlos microbiológicos das superfícies e do ar; controlo do ambiente frio para conservação dos aloenxertos; equipamentos com condições particulares de instalação e, ainda, procedimentos sobre a prevenção de contaminações.

OBJETIVO: O objetivo deste trabalho foi avaliar, retrospectivamente, os primeiros oito anos de funcionamento do Banco de Valvas Cardíacas Humanas do Hospital de Caridade da Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de Curitiba (BVCHSC), analisando aspectos relacionados às atividades de captação, processamento, armazenamento e distribuição de enxertos homólogos cardiovasculares. MÉTODO: A seleção inicial dos doadores seguiu as diretrizes nacionais para captação de órgãos humanos, além de critérios específicos do BVCHSC. Os corações foram obtidos de doadores de múltiplos órgãos, doadores em parada cardíaca e receptores de transplante cardíaco, com somatória dos tempos de isquemia inferior a 48 horas. A idade dos doadores variou desde recém-nascidos até 60 anos para as valvas aórticas e 65 para as pulmonares. Os enxertos dissecados tiveram suas dimensões mensuradas e sua morfologia avaliada, sendo classificados como categoria 0 (descartados), 1 (alterações morfológicas mínimas) ou 2 (perfeitos). Foram determinados a incidência e os germes responsáveis pela contaminação nos enxertos recebidos, assim como a eficiência da solução de descontaminação. Foram também avaliados aspectos relacionados à distribuição dos enxertos. RESULTADOS: De setembro de 1996 a fevereiro de 2005, 1059 corações provenientes de 19 Estados foram recebidos no BVCHSC. Destes, 977 (92,3%) eram de doadores de morte encefálica. Foram processados 2105 enxertos, e dentre os aórticos e pulmonares analisados, 783 eram da categoria 2, 697 pertenciam à categoria 1 e 186 foram descartados por alterações morfológicas. No total, 433 enxertos recebidos estavam contaminados, sendo a solução de antibióticos eficiente na esterilização de 330 destes casos. Quinhentos e setenta e um (27,1%) enxertos foram rejeitados em alguma fase do processo, sendo a contaminação e as alterações morfológicas as causas mais freqüentes. Foram distribuídos 1338 enxertos para 74 instituições de saúde do país, sendo mais comumente empregados na substituição da valva aórtica (529), na correção de cardiopatias congênitas (478) e durante operações de Ross (272). CONCLUSÕES: As atividades do BVCHSC durante estes oito anos de funcionamento foram satisfatórias, atingindo os objetivos propostos.

Objetivou-se de screver o aproveitamento das córneas captadas e processadas para transplante em um banco de tecidos oculares do Nordeste. Estudo transversal e retrospectivo, com amostra de 612 pessoas que tiveram suas córneas doadas e captadas, entre janeiro de 2007 a julho de 2012. Após a aprovação pelo Comitê de Ética em Pesquisa, de número 007.0.294.000-10, utilizou-se um instrumento composto por dados sociodemográficos e clínicos dos doadores. Das 1.209 córneas captadas, 868 foram utilizadas e 341 descartadas. Dos 612 doadores, 597 (97,5%) tiveram captação das córneas dos dois olhos e, dentre estas, 423 (70,9%) foramutilizadas. Necessita-se de mais estudos sobre causas de descartes de córneas e esclarecimentos quanto à conduta dos profissionais no processamento destas, visto o aumento da quantidade de doadores e o número elevado de descartes de tecidos oculares.

The aim of this study was to describe the harnessing of corneas captured and processed for transplantation in an ocular tissue bank in north-eastern Brazil. This was a transverse and retrospective study, with a sample group of 612 individuals whose corneas were donated and captured between January/2007 and July/2012. This study was approved by the Research Ethics Committee under number 007.0.294.000-10, and research was based on an instrument consisting of social, demographic and clinical data of the donors. Of the 1209 corneas captured, 868 were used and 341 were discarded. Of the 612 donors, the corneas of 597 (97.5%) were captured from both eyes, being that 423 (70.9%) of these corneas were used. Further studies are required on the reasons for discarding corneas and clarifications as to the conduct of professionals when processing corneas, considering the increase in the quantity of donors and the elevated number of discarded ocular tissue. El objetivo fue describir el aprovechamiento de las córneas capturada y procesada para trasplante en un banco de tejidos oculares del noreste. Estudio transversal y retrospectivo, con una muestra de 612 personas que tenían sus córneas donadas y capturados entre enero/2007 a julio/2012. Después de la aprobación del Comité de Ética de Investigación de número 007.0.294.000-10, se utilizó un instrumento que consiste en datos sociodemográficos y clínicos de los donantes. De las 1.209 córneas capturadas, 868 se utilizaron y 341 se desecharon. De los 612 donantes, 597 (97,5%) tenían capitación de las córneas de los dos ojos, entre estos, se utilizaron 423 (70,9%). Necesidad de ser de más estudios sobre las causas de los vertidos de la córnea y aclaraciones a la conducta de los profesionales en el procesamiento de estos, al ver el aumento en la cantidad de donantes y el elevado número de desechados de los tejidos oculares. Objetivou-se descrever o aproveitamento das córneas captadas e processadas para transplante em um banco de tecidos oculares do Nordeste. Estudo transversal e retrospectivo, com amostra de 612 pessoas que tiveram suas córneas doadas e captadas, entre janeiro de 2007 a julho de 2012. Após a aprovação pelo Comitê de Ética em Pesquisa, de número 007.0.294.000-10, utilizou-se um instrumento composto por dados sociodemográficos e clínicos dos doadores. Das 1.209 córneas captadas, 868 foram utilizadas e 341 descartadas. Dos 612 doadores, 597 (97,5%) tiveram captação das córneas dos dois olhos e, dentre estas, 423 (70,9%) foram utilizadas. Necessita-se de mais estudos sobre causas de descartes de córneas e esclarecimentos quanto à conduta dos profissionais no processamento destas, visto o aumento da quantidade de doadores e o número elevado de descartes de tecidos oculares.

Objetivo: Determinar as principais variáveis envolvidas na negativa da doação de tecido ósseo em familiares doadores de órgãos e a prevalência da doação desse tecido. Métodos: Trata-se de um estudo transversal, quantitativo. Foram estudadas variáveis referentes à solicitação da doação do tecido ósseo, compreendendo informações a respeito dos ossos que seriam captados, a reconstituição do corpo, os motivos que levaram à negativa da doação desse tecido, conhecimentos anteriores sobre doação e intencionalidade em ser doador. Resultados: Evidenciamos três fatores que influenciaram a negativa pelos familiares incluindo o desconhecimento sobre quais ossos seriam retirados (92,9%), como ocorreria a reconstituição destas estruturas (96,5%) e como se apresentaria o corpo após a captação. A prevalência de doadores de tecido ósseo foi de 17,2%. Conclusão: A decisão familiar de recusar a doação do tecido ósseo foi representada pelo desconhecimento do tema. A baixa prevalência foi devido à reduzida solicitação deste tipo de doação.

Objetivo: Determinar as principais variáveis envolvidas na negativa da doação de tecido ósseo em familiares doadores de órgãos e a prevalência da doação desse tecido. Métodos: Trata-se de um estudo transversal, quantitativo. Foram estudadas variáveis referentes à solicitação da doação do tecido ósseo, compreendendo informações a respeito dos ossos que seriam captados, a reconstituição do corpo, os motivos que levaram à negativa da doação desse tecido, conhecimentos anteriores sobre doação e intencionalidade em ser doador. Resultados: Evidenciamos três fatores que influenciaram a negativa pelos familiares incluindo o desconhecimento sobre quais ossos seriam retirados (92,9%), como ocorreria a reconstituição destas estruturas (96,5%) e como se apresentaria o corpo após a captação. A prevalência de doadores de tecido ósseo foi de 17,2%. Conclusão: A decisão familiar de recusar a doação do tecido ósseo foi representada pelo desconhecimento do tema. A baixa prevalência foi devido à reduzida solicitação deste tipo de doação. Objective: To determine the main variables involved in the refusal to donate bone tissue among relatives of organ donors, and the prevalence of bone tissue donation. Methods: This was a cross-sectional, quantitative study. Variables related to donation requests for bone tissue were studied, comprising information about the bones that would be procured, the reconstruction of the body, the reasons that led to the refusal to donate bone tissue, prior knowledge about donation, and intention to become a donor. Results: We demonstrated three factors that influenced the refusal of family members, including: lack of understanding of which bones would be removed (92.9%), how the body would be reconstructed after bone removal (96.5%), and how the body would be presented after bone procurement. The prevalence of bone tissue donation was 17.2%. Conclusion: The family decision to refuse to donate bone tissue was represented by the lack of comprehension of the subject. The low prevalence was due to the reduced request of this type of donation.

Trabalho final de mestrado integrado em Medicina (Ortopedia), apresentado à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra. Introdução: O tecido ósseo é o segundo tecido de origem humana mais transplantado. Isto deve-se sobretudo aos avanços científicos nas áreas da segurança microbiológica, imunologia e biologia de incorporação dos aloenxertos e à evolução da legislação internacional que regulamenta as transplantações de órgãos e tecidos. Este trabalho pretende conhecer a forma como tem sido abordada em alguns artigos recentes a temática da segurança dos aloenxertos disponíveis para transplantação, uma das principais preocupações presentes na legislação europeia e nacional sobre Bancos de Tecidos. Materiais e métodos: Efetuou-se uma pesquisa na PUBMED e na Base de Artigos da Biblioteca Central dos Hospitais da Universidade de Coimbra/Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra para identificar artigos sobre segurança, qualidade e legislação referentes a aloenxertos do aparelho locomotor. Consultaram-se também o website da Autoridade para os Serviços de Sangue e da Transplantação, o seu “Manual de Boas Práticas”, a legislação nacional vigente, as Diretivas do Parlamento Europeu e Comissão Europeia e a Declaração de Istambul de 2008. Procedeu-se ainda a um estudo quantitativo dos resultados analíticos dos aloenxertos preparados, conservados e disponibilizados pelo Banco de Tecidos dos Hospitais da Universidade de Coimbra entre janeiro 2009 e dezembro 2011. Resultados: Os artigos pesquisados mostram a preocupação de entidades governamentais, Bancos de Tecidos e utilizadores em que seja estabelecido maior rigor e controlo na aplicação de critérios de seleção de dadores. Evidenciam os avanços das tecnologias laboratoriais e das técnicas de esterilização e o rigor organizativo do controlo de qualidade. A harmonização e regulamentação dos critérios de seleção de dadores facilitam a aplicação de critérios de Bancos de Tecidos no Séc. XXI: Legislação e Segurança Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra / Rui Manuel de Freitas Dias segurança e qualidade. Não há relatos significativos de contaminação microbiológica dos aloenxertos, mas o aparecimento de novas doenças infeciosas, como o vírus do Nilo Ocidental, indica a necessidade de constante atualização da triagem e das técnicas de esterilização. Os resultados encontrados no estudo casuístico revelam que a taxa de contaminação e de recusa dos aloenxertos está dentro dos valores de outras unidades de transformação. Discussão: O risco de transmissão de doenças é remoto se forem cumpridos os protocolos de seleção dos dadores, da colheita e do controlo microbiológico dos aloenxertos. A exigente legislação europeia contribuiu para altos níveis de qualidade e segurança microbiológica na transplantação de órgãos e tecidos, respeitando a dignidade humana e os direitos dos cidadãos. Os Estados-Membros devem implementar diretrizes para os aspetos organizacionais, de gestão, documentação e controlo de qualidade. Conclusão: A conservação e a disponibilização dos aloenxertos para aplicação clínica só são possíveis em Bancos de Tecidos acreditados. As alterações legislativas da União Europeia originaram profundas reformas estruturais, exigindo elevados padrões de qualidade e segurança biológicas. Embora a transmissão de doenças pelos aloenxertos seja rara, são necessárias uma seleção ainda mais rigorosa do potencial dador e a uma melhoria dos sistemas de qualidade. Introduction: Bone tissue is the second most transplanted tissue of human origin. This is mostly due to scientific advances in microbiological safety, immunology and the biology of allograft incorporation, as well as to the progress of legislation regulating tissue and organ transplantation worldwide. This dissertation aims to understand how the issue of safety and biological quality of allografts for transplantation, one of the major concerns of EU and Portuguese legislation on Tissue Banking, is discussed in recent articles. Material and methods: Research was carried out in PUBMED and the Central Library of the Hospitais da Universidade de Coimbra/Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra Article database to identify articles on musculoskeletal allograft quality and safety, and relevant legislation. Also consulted were the Autoridade para os Serviços de Sangue e da Transplantação webpage, their Good Practices Manual, the relevant Portuguese legislation in place, European Parliament and European Commission Directives, and the 2008 Declaration of Istanbul. A quantitative study of the analytical results of the allografts processed, stored, and distributed by the Hospitais da Universidade de Coimbra Tissue Bank between January 2009 and December 31st 2011 was also undertaken. Outcomes: The findings show that government agencies, Tissue Banks, and their users strongly believe that criteria for donor selection should be more strictly set and monitored. Advances in laboratorial technologies and sterilization techniques are emphasized, as is the need for rigour in the adoption, management and monitoring of Quality Control Systems. The measures taken to promote harmonization and regulation of the criteria for donor selection Bancos de Tecidos no Séc. XXI: Legislação e Segurança Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra / Rui Manuel de Freitas Dias 11 facilitate the implementation of safety and quality criteria. No significant accounts of allograft microbiological contamination were found. However, the emergence of new infectious diseases, e.g. the West Nile virus, indicates the need for permanent updating of donor selection and sterilization techniques. The case study shows that the Hospitais da Universidade de Coimbra Tissue Bank allograft contamination and refusal rates are similar to those of other processing units. Discussion: Disease transmission is remote if protocols are rigorously adhered to as concerns donor selection, allograft retrieval and microbiological control. EU legislation on Tissue Banking was of paramount importance to ensure that organ and tissue transplantation is carried out with high levels of quality and microbiological security, and with respect towards human dignity and citizens rights. In compliance with the rules laid down in the European Directive, member states must operate efficient frameworks for quality and safety in all aspects of organization, management, documentation and quality control. Conclusion: Allograft storage and supply for clinical application is possible only in accredited Tissue Banks. Changes in EU legislation have produced important reforms in the structure of Tissue Banks, leading to high biological quality and safety standards. Although disease transmission via allografts is rare, an even more rigorous selection of donors and improved quality systems are still needed

O Banco de Tecidos dos HUC/CHUC iniciou as suas atividades em 1982 e, até dezembro de 2011, disponibilizou 6319 aloenxertos do aparelho locomotor para aplicação clínica em cirurgia ortopédica reconstrutiva, cirurgia maxilo-facial, Neurocirurgia, cirurgia dentária e cirurgia oftalmológica. Pretende-se apresentar os diversos tipos de aloenxertos preparados e conservados no Banco de Tecidos e analisar os critérios que levaram à não validação de 248 aloenxertos que foram colhidos entre janeiro de 2006 e dezembro de 2011. Os aloenxertos são colhidos em condições de assépsia cirúrgica em dadores não vivos, no contexto da colheita multiorgânica, e em dadores vivos, cabeças femorais excisadas no decurso das artroplastias da anca. O método de conservação mais usado é a criopreservação no vapor do azoto líquido, até -196º C. O Banco preserva também tecidos a -80º C. Nesse período de tempo foram colhidos 2459 aloenxertos, 2291 em 207 dadores não vivos, em paragem circulatória (colheitas multiorgânicas) e 168 em dadores vivos (cabeças femorais na condição de resíduo cirúrgico). Invalidaram-se 248 aloenxertos (10% do total) provenientes de 19 colheitas em dadores não vivos e de 41 colheitas de cabeças femorais, o que corresponde a uma inutilização de 24,4 % dos enxertos colhidos nos dadores vivos e 9 % dos enxertos colhidos nos dadores não vivos. Nos dadores não vivos as causas da invalidação total dos aloenxertos de 18 colheitas foram: culturas microbiológicas positivas - staphylococcus aureus, staphylococcus coagulase (-), streptococus viridans – (12 colheitas); serologia duvidosamente positiva para o antigénio do VIH (1); anticorpo positivo para VHB (1); falta de quarentena (3) e rejeição de aloenxerto renal vascularizado (1). Um aloenxerto ósseo não foi validado por danificação da embalagem. Nos dadores vivos as causas da invalidação foram: culturas microbiológicas positivas - staphylococcus aureus, corynebacterium – (2);. serologia positiva para o VHC (12), para o anticorpo do VHB (8 ) e para o HTLV1/2 (4); falta de quarentena (2); protocolos laboratoriais insuficientes (10); adenocarcinoma (2) e doença de Guillan-Barré (1). A preocupação maior dos Bancos de Tecidos é disponibilizar tecidos de origem humana biologicamente seguros e íntegros. Nesta série, registou-se uma alta taxa de invalidação de aloenxertos, mormente nos provenientes dos dadores vivos.

Objective: Is to evaluate the characteristics of the distribution of these grafts by a Tissue Bank in Brazil. Methods: Tissue Bank database from September 2006 to June 2008. The characteristics of the recipients were drawn up in the table form. The types of tissue processed were: femoral heads, metaphyseal-epiphyseal bone, cortical bone, flat or short bones and tendons. The intended purpose of the grafts was analyzed, and distribution frequencies were also obtained and analyzed. Results: Altogether, 734 units of fresh-frozen tissue were distributed and transplanted into 683 recipients. In terms of origin of the tissues, 97.9% came from multiple organ donors, and the remainder from living donors. A total of 489 units of cortical bone were transplanted, 137 of metaphyseal-epiphyseal bone, 44 of short or flat bones, 3 of tendon, 29 of particulate bone and 32 femoral heads. The mean age of the recipients was 50.3 years; 59.5% were women and 40.5% men. The tissues were used in orthopedic surgeries in 21.1% of the cases, and in oral and maxillofacial procedures in 78.9%. Conclusion: The Tissue Bank has increased the number of distributions in response to the growing demand for tissues, particularly for use in oral and maxillofacial procedures.

Um banco de tumores com organização sistematizada das informações permite a elaboração de pesquisas em câncer com conclusões sólidas e científicas. Assim, há a necessidade de um protocolo específico, cuja principal vantagem seria a de agregar informações qualificadas sobre o doador às amostras tumorais utilizadas para a pesquisa. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um protocolo de procedimentos simples, confiável e reproduzível, para adquirir e armazenar amostras de tumores do sistema músculo-esquelético. O planejamento deste protocolo tem como base os dados da literatura relacionada a bancos de tecidos neoplásicos, no período de 1969 a 2005. Descreve a captação, armazenamento das amostras e o histórico do doador. O banco de tumores com um protocolo eficiente permite armazenar amostras de tecido normal e neoplásico, além de registrar dados referentes a pacientes com lesões neoplásicas. Além disso, possibilita o fornecimento, aos pesquisadores em câncer, de amostras de tecido em condições ideais para a pesquisa. A Tumor Bank with systematic organization of data allows for the carrying out of cancer research with sound and scientific conclusions. The need thus arises for a specific protocol whose main advantage would be that of adding qualified donor information to tumor samples used in research. The purpose of this study was to develop a simple, reliable, and replicable procedures protocol to acquire and store samples of musculoskeletal tumors. The basis for the planning of this protocol comprises the information gathered in the literature relating to tumor tissue banks from 1969 to 2005. The paper describes the capture, storage, and donor background. The tumor bank with an efficient protocol allows to store both healthy and neoplastic tissue, and to record information relating to patients with neoplastic lesions. Furthermore, it enables supplying tissue samples in ideal research conditions.

A tumour bank is a consequence of the modern medicine to follow the knowledge of bio-pathology of pre-neoplastic and neoplastic diseases in order to define diagnostic criteria and accurate therapy. It can be an independent unit but it should depend on a real or virtual net in the country or in connection between different states. The informed agreement of the patient and law are integrally followed according with each country legislation and medical ethics is never overtaken for the accomplishment of diagnosis in the departments of pathology. A tumour bank works in the department of pathology, depends on trained technicians and pathologists and requires specific equipment for the different types of re-collecting, after dealing with confidentiality and law determinations. There are already some tumour bank nets in Europe (Spain, Croatia, Holland, UK, Germany) and Portugal is starting now its way.

OBJETIVO: O objetivo deste trabalho foi avaliar, retrospectivamente, os primeiros oito anos de funcionamento do Banco de Valvas Cardíacas Humanas do Hospital de Caridade da Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de Curitiba (BVCHSC), analisando aspectos relacionados às atividades de captação, processamento, armazenamento e distribuição de enxertos homólogos cardiovasculares. MÉTODO: A seleção inicial dos doadores seguiu as diretrizes nacionais para captação de órgãos humanos, além de critérios específicos do BVCHSC. Os corações foram obtidos de doadores de múltiplos órgãos, doadores em parada cardíaca e receptores de transplante cardíaco, com somatória dos tempos de isquemia inferior a 48 horas. A idade dos doadores variou desde recém-nascidos até 60 anos para as valvas aórticas e 65 para as pulmonares. Os enxertos dissecados tiveram suas dimensões mensuradas e sua morfologia avaliada, sendo classificados como categoria 0 (descartados), 1 (alterações morfológicas mínimas) ou 2 (perfeitos). Foram determinados a incidência e os germes responsáveis pela contaminação nos enxertos recebidos, assim como a eficiência da solução de descontaminação. Foram também avaliados aspectos relacionados à distribuição dos enxertos. RESULTADOS: De setembro de 1996 a fevereiro de 2005, 1059 corações provenientes de 19 Estados foram recebidos no BVCHSC. Destes, 977 (92,3%) eram de doadores de morte encefálica. Foram processados 2105 enxertos, e dentre os aórticos e pulmonares analisados, 783 eram da categoria 2, 697 pertenciam à categoria 1 e 186 foram descartados por alterações morfológicas. No total, 433 enxertos recebidos estavam contaminados, sendo a solução de antibióticos eficiente na esterilização de 330 destes casos. Quinhentos e setenta e um (27,1%) enxertos foram rejeitados em alguma fase do processo, sendo a contaminação e as alterações morfológicas as causas mais freqüentes. Foram distribuídos 1338 enxertos para 74 instituições de saúde do país, sendo mais comumente empregados na substituição da valva aórtica (529), na correção de cardiopatias congênitas (478) e durante operações de Ross (272). CONCLUSÕES: As atividades do BVCHSC durante estes oito anos de funcionamento foram satisfatórias, atingindo os objetivos propostos. OBJECTIVE: The aim of this study was to retrospectively evaluate the first eight years of activities of the Human Heart Valve Bank of Hospital de Caridade da Irmandade da Santa Casa de Curitiba (BVCHSC), analysing aspects related to procurement, processing, storage and distribution of homologous cardiovascular grafts. METHOD: Initial donor screening was achieved according the national guidelines for human organ procurement, besides specific BVCHSC criteria. Hearts were obtained from multiple organ donors, non-beating heart donors and heart transplant recipients, with total ischemic times under 48 hours. Donor ages varied from neonates up to 60 years for aortic valves and 65 years for pulmonary valves. The dissected grafts had their dimensions measured and their morphology evaluated, using a classification system with category 0 (discarded), 1 (minimal morphological alterations) and 2 (perfect). The incidence and microorganisms responsible for organ contamination were determined, as was the efficiency of the decontamination solution. Aspects related to graft distribution were also analysed. RESULTS: From September 1996 to February 2005, 1059 hearts from 19 Brazilian states were recevied at BVCHSC. From these, 977 (92.3%) were from brain-death donors. A total of 2105 grafts were processed and of the aortic and pulmonary grafts that were analysed, 783 were in category 2, 697 in category 1 and 186 were discarded due to morphological abnormalities. In total, 433 received grafts were contamined and the sterilization solution was efficient in 330 cases. 571 (27.1%) grafts were rejected during some phase of the processing, mainly due to contamination and morphological abnormalities. A total of 1338 grafts were distributed to 74 health institutions and were more commonly used for aortic valve replament (529), correction of congenital heart diseases (478) and during the Ross procedure (272). CONCLUSIONS: The activities of the BVCHSC during the initial eight years were satisfactory, fulfilling the proposed goals.

We report the microbiological contamination rate of sterilely procured 3953 tissue allografts obtained during 22 years of activity for musculoskeletal reconstruction from 1982 to 2003. From 1987 to 2000, allograft retrievals were performed in 191 cadaveric donors and in 323 living donors. In the former group 30 retrievals (15.7%) were excluded based on laboratory criteria. Among living donors 108 femoral heads (33.4%) were also excluded by the same criteria. The microbiological contamination rate of sterilely procured allografts in the operating room was 8.3% for cadaveric donors and 18.2% for living donors. A questionable positive serology for HIV antigen was registered in two non-heart-beating donors. Hepatitis C virus antibodies were positive in two other non-heart-beating donors. Hepatitis B virus serological markers were positive or questionable in more than 11 non-heart-beating donors. In living donors 20 femoral heads were excluded (6.1%) due a positive or questionable hepatitis B virus serology. One femoral head donor showed a positive HTLV-I antibody and another one a positive syphilis serology. No positive serology cases for the HIV antibodies were found. No cases were registered of transmission of viral diseases from the donor to the recipient. Our extremely rigorous criteria led to the exclusion of a considerable number of both donors and allografts.

OBJETIVOS: 1) Verificar qual o impacto da criação do Cadastro Técnico Único (CTU) para o Hospital das Clínicas da Universidade de Campinas (Unicamp) no tempo de preservação de córneas utilizadas em transplantes penetrantes eletivos, e 2) comparar a incidência de falência primária em transplantes penetrantes de córnea nos períodos pré e pós-criação do CTU. MÉTODOS: Foi realizado estudo retrospectivo no Hospital de Clínicas da Unicamp, avaliando-se 15 transplantes penetrantes de córnea consecutivos entre 1 de janeiro e 30 de abril de 2000 e 24 transplantes consecutivos entre 1 de maio e 20 de setembro de 2000 (córneas sob o controle do Cadastro Técnico Único), num total de 39 transplantes. RESULTADOS: O tempo médio entre a preparação das córneas e o transplante foi de 3,8 dias (±1,78) no período pré-CTU, e de 6,0 dias (±2,97) no período pós-CTU, representando aumento no tempo de preservação de 36,7%. Houve diferença estatisticamente significativa (p=0,02) entre os dois grupos. Nenhum caso de falência primária do enxerto foi observado entre os 39 pacientes transplantados nos dois grupos. CONCLUSÃO: Com base nestes resultados, conclui-se que a nova disposição do Sistema Estadual de Transplantes aumentou de forma estatisticamente significativa o período de permanência das córneas no meio de preservação, o que pode comprometer o tempo de vida útil do transplante, aumentar a incidência de falência primária ou levar a maior número de córneas perdidas por excederem o tempo de preservação limite, preconizado na literatura. PURPOSES: 1) To verify the impact of the creation of the Single Technical Record (STR) at the University of Campinas (Unicamp) Hospital das Clínicas, on the preservation period of corneas which were used in elective penetrating keratoplasties, and 2) to compare the primary failure incidence in cornea penetrating keratoplasties regarding the periods before and after the creation of STR. METHODS: A retrospective study was conducted at the Unicamp Hospital, which evaluated 15 consecutive cornea penetrating keratoplasties between January 1st and April 30th, 2000 and 24 consecutive penetrating keratoplasties between May 1st and September 20th of the same year (corneas under the control of the STR), totaling 39 keratoplasties. RESULTS: The mean time between cornea preparation and transplantation was 3.8 days (±1.78) in the period before STR creation, and 6.0 days (±2.97) after STR creation, representing a 36.7% increase in the preservation time. There was a statistically significant difference (p=0.02) between the two groups. No corneal primary failure was observed among the 39 transplanted patients in both groups. CONCLUSION: Based on the results of this study, it can be concluded that this new concept of the State Transplantation System has caused a statistically significant increase in the conservation period of corneas, which may reduce the period of a clear transplant due to an increased loss of endothelial cells, as well as increase the primary failure incidence or result in a high number of corneas that cannot be used due to having exceeded the preservation time recommended by the literature.

A transplantação de órgãos, tecidos e células tem vindo, progressivamente, a impor-se como soluções terapêuticas em quase todos os campos da cirurgia. A seguir ao sangue, o tecido ósseo é de longe, o tecido de origem humana mais transplantado. Nos últimos anos, tem-se observado uma crescente procura de enxertos ósseos alógenos para o tratamento de situações clínicas complexas em Ortopedia sejam de etiologia traumática, tumoral ou iatrogénica. Com efeito, para o tratamento de uma perda de substância óssea de pequena/média dimensão, os substitutos ósseos sintéticos ou de origem animal deram prova da sua eficácia clínica, com resultados comparáveis aos dos enxertos autógenos, muito embora seja dado como consensual que estes últimos continuam a ser a melhor solução, apesar de expressarem limitações quanto à quantidade disponível, bem como quanto ao carácter iatrogénico da sua colheita. Com efeito, a colheita de enxerto autógeno que pode ser causa de dor e de dano estético, muitas vezes mal compreendidos e aceites pelo paciente. Ao contrário, os enxertos alógenos estão disponíveis nos Bancos de Tecidos, sem limitações, em todos os tipos, formas e dimensões, para serem usados na cirurgia reconstrutiva de grandes defeitos ósseos e osteocartilagíneos. Salientam-se aspectos relacionados com a organização do Banco de Ossos e Tecidos dos HUC no que diz respeito à legislação que regulamenta a colheita de tecidos e órgãos no nosso país, à selecção dos dadores, ao controlo da qualidade dos enxertos, ao processamento dos enxertos, aos métodos de descontaminação e esterilização e aborda-se, também, a conservação prolongada dos enxertos por congelação e liofilização. Para além disso, considera-se a prevenção e a avaliação do risco de transmissão de doenças ao receptor como preocupações maiores dos Bancos de Tecidos. O risco de transmissão de doenças é remoto ou virtualmente nulo se forem cumpridos os critérios recomendados para a selecção dos dadores, para a colheita, controlo microbiológico e conservação dos enxertos e, ainda, se for realizada a quarentena. Assim, nos dadores em morte cerebral são colhidos enxertos ósseos, osteocartilagíneos e tendinosos e nos dadores em paragem circulatória enxertos ósseos. Neste último caso, dado que não é possível proceder à quarentena, os enxertos devem ser processados com um método complementar de esterilização.