Search

Parvoviruses (PV) can cause outbreaks with high morbidity and mortality in dogs and cats. Even if typical cases exist in puppies and kittens, PV infection (PVI) can have many different clinical presentations, making the laboratory support necessary. The aim of this work was to evaluate retrospectively the frequency of misdiagnoses, particularly missed diagnoses, of PVI in 144 suspected cases (88 clinical cases and 56 necropsies) involving 96 dogs and 48 cats. A nested PCR test was chosen as the gold standard. An index of diagnostic suspicion (IDS) for PVI, based on parameters reported upon submittal of the samples, was introduced to classify the initial diagnoses issued by veterinarians. The agreement between the IDS of PVI and PCR results was calculated. The effect of species, age and clinical versus necroscopic presentation was evaluated by logistic regression. In 63.6% of the cases, the IDS was confirmed by the PCR, whereas in 36.4% there was a missed diagnosis or a diagnosis wrongly attributed to PVI. More accurate results were obtained for dogs, animals aged < 1 year, and necropsies. Parvovirus infection should be better investigated in patients with atypical or few clinical signs, in particular in cats and animals over 1 year old.

n/a

Canine prostatic carcinoma (PCa) is considered a relevant model for studying advanced, hormone refractory PCa in men. It has been proposed that cancer contains a minor population of cells that can selfrenew while simultaneously giving rise to tumour cells (cancer stem cells). Survivin is an acknowledged cancer therapy-resistance factor overexpressed in several tumour types, proposed as a valid cancer biomarker for human prostatic cancer for an early screening for malignancy. Sox9 is a stem cell marker expressed in several adult tissues, required for prostate development. Accumulating evidence indicates that it contributes to the development of human PCa. No studies have been published concerning the immunolocalization of survivin and Sox9 in canine prostatic hyperplasia (BPH) and neoplasia.AIM: to evaluate the patterns and levels of expression of survivin and Sox9 in canine BPH and PCa, in order to correlate their expression with malignant histological features. immunhistochemistry with specific antibodies in a set of canine BPH and PCa. Survivin nuclear and rare cytoplasmic immunostaining were present among the basal/reserve cell layer of normal and hyperplastic prostatic lobules. An increase of survivin expression was observed in PCas compared with BPHs. 6/11 PCas showed rare positive nuclei, mainly among the “basaloid” neoplastic cells in the areas with a tubular-papillary arrangement. In the areas with a solid pattern the cytoplasmic immunostaining was more diffuse. Sox9 expression was absent in normal prostatic glands and in all BPHs. 6/9 cases of PCa were highly positive. Based on the role of survivin as a stem cell marker and the main role in proliferation of nuclear survivin, the positive cells among basal cell layer in normal and HBP cases could represent transit amplifying cells maintaining some stem cell proprieties. The increased survivin expression in Pcas would indicates the molecule as a valid prognostic marker. The absence of expression of Sox9 in the normal gland and all the BPHs suggests that Sox9 is not a stem cell marker of canine adult prostatic stem cells. The high expression observed in PCas clearly suggests an important role of the molecule in canine prostatic carcinogenesis and malignant progression. Further studies should be done in order to confirm this hypothesis.

AIM OF THE STUDY : This presentation highlights the importance of using standardized methods by the fish pathologists to assess the effects of feed on reared flatfish. The liver and intestine are the most important organs for the digestion and absorption of nutrients from feed, and monitoring their histological structure is of fundamental importance in assessing the effects of nutrient mixtures.1 A critical analysis of the histological methods on feed effects w ill be presented, aiming to suggest a standardized protocol that should be adopted, on the basis of the advantages and disadvantages that have been encountered in the course of our recent research trials. MATERIAL AND METHODS : Six feeding trials have been carried out on juvenile common sole (Solea solea), Senegalese sole (Solea senegalensis) and turbot (Psetta maxima) (fed diets w ith increasing dietary protein levels;2,3 increasing dietary plant protein in replacement of fishmeal;4 increasing lipid levels5 and increasing mussel meal6, respectively). Routine histology (haematoxylin-eosin stain on formalin-fixed and paraffin-embedded sections) w as carried out to check degenerative and/or inflammatory changes. In the liver, as w ell as the graduation of the lipid content, further histochemical techniques have been applied in order to characterize the type of intracellular accumulation (OilRedO, Toluidine blue, PAS) and transmission electron microscopy (TEM), w hile in intestine in situ techniques to assess the cellular turnover and trophism of epithelial mucosa (anti-PCNA immunohistochemistry and TUNEL method for apoptosis) evaluated by image analysis and TEM w ere employed. RESULTS : The routine histological evaluation is helpful only to demonstrate degenerative-inflammatory changes and its usefulness increases w hen combined w ith a grading system for the lipidic content of the liver that revealed the most frequent degeneration assessed. To confirm the lipidic content, Toluidine Blue on semi-thin sections revealed better than OilRedO w hich run on frozen sections that require a more difficult management of the samples. IHC on intestinal sections and the evaluation of cellular kinetics and mucosal turnover are necessary tools to assess the influence of a diet on mucosal trophism. For both tissues TEM is the elective method to further characterize the type of intracellular accumulation and the early signs of cell damage. CONCLUSIONS : On the basis of our experience it is necessary to adopt a standardized approach to evaluate the effects of experimental diets on liver and intestine; in particular, investigations in liver require Toluidine Blue on semithin sections and TEM, w hile for intestine IHC together w ith digital image analysis and morphometry are suggested in addition to routine histology. BIBLIOGRAPHY : 1Raskovic et al, 2011; 2Gatta et al., 2011; 3Bonaldo et al., 2011; 4Mandrioli et al., 2012; 5Bonvini et al., 2014 (Proceedings of ISFNF); 6Bonaldo et al., 2014 (Proceedings of ISFNF).

Dal 2008 al 2013 sono state condotte sei differenti prove sperimentali in giovanili di sogliola comune (Solea solea), sogliola senegalese (Solea senegalensis) e rombo (Psetta maxima); queste ricerche sono state oggetto di pubblicazione (Gatta et al., 2011; Bonaldo et al., 2011; Mandrioli et al., 2012; Bianco et al., 2013, Bonvini et al., 2014-Proceedings ISFNF, Sirri et al., 2014). Lo scopo di questo lavoro retrospettivo è quello di commentare in modo critico e sistematico i dati ottenuti attraverso gli strumenti di indagine anatomopatologica, per proporre un algoritmo procedurale. L’indagine istologica è stata eseguita per valutare la presenza di fenomeni degenerativi e/o infiammatori; in caso di presenza di degenerazioni cellulari è stato eseguito uno scoring semiquantitativo. A ciò si sono aggiunte colorazioni istochimiche (OilRedO, blu di toluidina, PAS) per la caratterizzazione qualitativa dell’ accumulo intracellulare e l’indagine ultrastrutturale, per evidenziare la precisa localizzazione dell’accumulo di materiale e gli eventuali segni di sofferenza degli epatociti e degli enterociti. Le metodiche in situ (immunoistochimica anti-PCNA e metodica TUNEL) sono state invece impiegate per la valutazione del turnover cellulare e del trofismo della mucosa intestinale. Infine, analisi d’immagine ed analisi frattale sono state adottate per quantificare il pattern quantitativo di accumulo lipidico negli epatociti, per misurare il turnover cellulare intestinale e la risposta adattativa dello stesso. I diversi dati quantitativi ottenuti sono stati correlati ed analizzati statisticamente. L’impiego dell’istologia si è mostrato utile e sufficiente ad evidenziare eventuali fenomeni degenerativi e/o infiammatori. La colorazione istochimica blu di toluidina si è dimostrata migliore rispetto alla colorazione per i lipidi OilRedO per la conferma del tipo di contenuto intracellulare, in termini di applicabilità pratica. Le metodiche in situ impiegate per la valutazione della cinetica cellulare e del turnover della mucosa intestinale si sono dimostrate un valido strumento per studiare l’influenza della dieta sul turnover epiteliale. L’indagine ultrastrutturale si è confermata la metodica d’elezione al fine di evidenziare lievi quadri di sofferenza cellulare submicroscopici e localizzare con certezza l’accumulo lipidico. Per la quantificazione della lipidosi epatica, l’analisi d’immagine, intesa a misurare l’area occupata dai lipidi, ha mostrato una correlazione con lo scoring istopatologico e ha superato l’analisi frattale in termini di efficacia diagnostica. Infine, l’utilizzo dell’analisi frattale si è mostrato un utile strumento tecnicamente ed economicamente efficace per la quantificazione della risposta adattativa della mucosa intestinale. Sulla base dell’analisi retrospettiva condotta viene proposto pertanto questo algoritmo, che si è rivelato sensibile nel rilevare modificazioni, da intendersi come fenomeni degenerativi o adattamenti in senso iperplastico, a carico del tratto intestinale e del parenchima epatico, indotte dall’utilizzo di ingredienti o nutrienti a differenti percentuali di inclusione. L’utilizzo di questo algoritmo anatomo-patologico abbinato alla valutazione delle performance zootecniche e alla qualità del prodotto rappresenta una strategia efficace nell’individuazione delle diete maggiormente sostenibili, in grado di combinare accrescimenti ottimali e un buono stato di salute dell’animale. In considerazione della validità dello schema procedurale proposto, si suggerisce che tale algoritmo possa essere applicato anche alle specie ittiche allevate di maggior interesse a livello nazionale quali trota, branzino e orata.

I tumori perivascolari sono neoplasie che originano dalla componente non endoteliale della parete vascolare e le forme spontanee nei teleostei sono molto rare. In bibliografia sono descritti casi di emangiopericitoma epatico indotto sperimentalmente in medaka (Oryzias latipes), sheepshead minnow (Cyprinodon variegatus) e rivulus (Rivulus ocellatus) esposti a diethylnitrosamine e N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, e in specie di Poecilidi esposti a 7,12-dimethyl benz(a)anthracene. Una carpa koi (Cyprinus carpio koi) maschio d’allevamento di più di 6 anni d’età, 55 cm di lunghezza, di origine israeliana presentava sul cranio delle lesioni cutanee multifocali a carattere proliferativo, che formavano delle placche (2,2 x 1,2 cm nella regione nasale e 3,2 x 2,3 cm dorsalmente all’opercolo) a margine irregolare di colore bianco-rosato (disegno capillare/vascolare marcato). A seguito dell’eutanasia sono stati condotti esami bio-molecolari in PCR end-point dalle lesioni cutanee e dall’encefalo per escludere la presenza di CyHV-1. Le lesioni sono state campionate, fissate in formalina tamponata al 10% e processate routinariamente per l’esame istologico. È stato effettuato un esame immunoistochimico utilizzando anticorpi anti-GFAP e anti-S100, anti-actina muscolare liscia, anti-desmina. È stato inoltre effettuato un approfondimento ultrastrutturale per confermare la diagnosi istologica. All’istologia si osservava una neoplasia dermica non capsulata, scarsamente demarcata, altamente cellulare e infiltrante, costituita da cellule fusate disposte in vortici attorno ai capillari e sostenute da un moderato stroma fibrovascolare. Le cellule erano caratterizzate da moderata quantità di citoplasma eosinofilo, limiti cellulari indistinti, rapporto nucleo/citoplasmatico intermedio e nucleo ovale centrale con cromatina finemente granulare e nucleoli prominenti, color magenta, spesso multipli. Anisocitosi e anisocariosi erano moderate ed erano presenti una media di 2 mitosi per campo a forte ingrandimento, spesso atipiche. Multifocalmente si osservava un lieve infiltrato infiammatorio intratumorale costituito prevalentemente da piccoli linfociti e macrofagi carichi di pigmento giallo-brunastro, associato ad una moderata fibrosi. L’epidermide sovrastante era moderatamente iperplastica con degenerazione vacuolare e multifocali ulcere. Le cellule neoplastiche mostravano una positività multifocale e citoplasmatica all’actina mentre risultavano negative per i restanti anticorpi testati. Le caratteristiche istologiche, immunoistochimiche e ultrastrutturali sono compatibili con la diagnosi di tumore perivascolare.

L'aggiunta nel mangime di melamina per aumentare il tenore proteico è una grave frode nota anche agli allevatori del settore ittico, al pari di quanto segnalato in altre realtà produttive. Nel rene di un pesce ornamentale (Carassius auratus), soppresso per una neoplasia cutanea (schwannoma), è stata istologicamente riscontrata la presenza di cristalli intratubulari. disposti radialmente a occupare il lume intratubulare lungo l'asse nefronale, birifrangenti in luce polarizzata, di colore giallo-verdognolo all'EE. È stato applicato un pannello istochimico (Alizarina S, von Kossa, Oil-Red-O-72) per caratterizzare la natura dei cristalli, e i risultati sono stati confrontati con quelli di una precedente sperimentazione in cui era stata somministrata melamina/acido cianurico in esemplari di trota iridea (Onchorynchus mykiss). Sono state eseguite inoltre indagini ultrastrutturali. I cristalli intratubulari erano disposti radialmente ad occupare il lume intratubulare lungo l'asse nefronale, erano birifrangenti in luce polarizzata, di colore giallo-verdognolo all'EE. Nei controlli positivi (trota) i cristalli di melamina cianurata erano di colore arancio intenso con ORO72, e non colorati con Alizarina S e von Kossa. Nel rene di carassio i cristalli hanno acquisito una colorazione debole solamente con il metodo Von Kossa (sali di calcio). L'ipotesi causale della sofisticazione di mangime per pesci ornamentali è stata pertanto esclusa, mentre possono essere prese in considerazione cause nutrizionali o metaboliche.

This study compared heat shock proteins Hsp60, Hsp72 and Hsp73, along with p63 and androgen receptor (AR) immunoexpression between 16 cases of benign prostatic hyperplasia (BPH) and 11 prostatic carcinomas (PCa) in dogs. The proportion of Hsp60-positive cells was higher in PCa compared with BPH (P =0.033), whereas the frequency and intensity of Hsp73 immunostaining did not differ significantly between the two groups. Hsp72-immunostained nuclei formed a discontinuous layer along the basement membrane in BPH, whereas cells in this layer in PCa were negative or weakly positive. Hsp72 nuclear score showed significant positive associations with both p63 (P =0.016) and AR (P =0.009) scores. Double immunofluorescence revealed Hsp72-p63 and Hsp72-AR co-expressions in basal cell nuclei. Aberrant cytoplasmic p63 immunolabelling was observed in 3 of 11 PCa cases. These results suggest a role of the combined expression of Hsp72, p63 and AR in basal epithelial cells in canine BPH and PCa.

Background - Epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) is a multistep process, important in tumour invasion and metastasis, characterized by loss of epithelial markers, redistribution of β-catenin and gain of mesenchymal markers. Hyposthesis/Objectives - Our aim was to investigate the immunohistochemical aberrant expression of cytokeratin, vimentin, survivin and heat shock protein72 (Hsp72) in canine cutaneous epithelial tumours, to understand the association of expression of these molecules with features of malignancy and their role in the EMT phenotype. Methods - Ten canine squamous cell carcinomas (SCCs; one with lymph node metastasis), 30 canine hair follicle tumours (six pilomatricomas, eight infundibular keratinizing acanthomas, six trichoepitheliomas and 10 trichoblastomas) and five normal skin samples were investigated by immunohistochemistry using specific anti-vimentin, -cytokeratin, -survivin and -Hsp72 antibodies. A semi-quantitative method was used to analyse the results, as follows: 0 to