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Fil: Brengi, Silvina P. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Servicio Enterobacterias; Argentina. Fil: Pichel, Mariana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Servicio Enterobacterias; Argentina. Shigella flexneri (S. flexneri) es el principal serogrupo del género causal de diarreas en el mundo y Argentina, se reconocen 13 serotipos según el esquema de serotipificación cuya última revisión realizó Brenner en 1984. Desde entonces, se reportaron en el mundo nuevos serotipos, llegando a 20, según algunos autores . Si bien la serología es la técnica tradicional de serotipificación, se han desarrollado técnicas para la serotipificación molecular, como por ejemplo las basadas en PCR múltiple. En Argentina, se encuentra constituida la Red de Diarreas y Enteropatógenos de Transmisión Alimentaria, cuyo Laboratorio de Referencia Nacional (LNR) para Shigella spp. (Servicio Enterobacterias, INEI-ANLIS “Carlos G. Malbrán”) recibe aislamientos de casos esporádicos y asociados a brote de S. flexneri en el marco de la vigilancia. Además, desde el 2004, el LNR coordina la Red PulseNet (PN) América Latina y Caribe de epidemiología molecular para la vigilancia de infecciones bacterianas transmitidas por alimentos, que utiliza protocolos estandarizados de Electroforesis en Campo Pulsado (PFGE) para la subtipificación de bacterias, contando desde 2009 con un protocolo especifico para S. flexneri. Por otra parte, ese mismo año, se comenzó el estudio de un grupo de aislamientos no tipificables emergentes en el país, denominados “Atípicos”, que ya en 2011 tenían una prevalencia similar a la del serotipo 2, mayoritario hasta el momento. En la Parte 1 de este trabajo, se estudió la diversidad genética y distribución témporo-espacial de 840 aislamientos incorporados en la Base de Datos Nacional de perfiles genéticos S. flexneri, incluyendo 7 serotipos y “Atípicos”, recuperados en casos esporádicos y de brote entre 2004-2014. La diversidad fue de 404 subtipos genéticos, en ocasiones persistentes en tiempo y lugar. Dentro de cada serotipo, se encontró mayor relación genética entre si que con otros, y a su vez la diversidad encontrada permitió discriminar subtipos para su aplicación en epidemiología molecular. Además, se pudieron estudiar y confirmar la ocurrencia de 16 brotes. En la Parte 2, se profundizó la caracterización de aislamientos de S. flexneri “Atípicos” mediante PFGE, Mapeo de Genoma Completo y serotipificación molecular por PCR. Se estableció que los 2 aislamientos “Atípicos” estudiados pertenecían a los serotipos Xv (por X variante) y 4av (por 4a variante). Además, aplicando una PCR para serotipificación molecular, se determinó en otros 77 aislamientos “Atípicos”, la existencia no solo de los serotipos Xv y 4av, sino también del serotipo Yv (por Y variante). En conclusión, en este trabajo, se obtuvo conocimiento de la diversidad genética de cepas circulantes causales de casos esporádicos y asociados a brotes de diarrea en el país. Constituyéndose una Base de Datos Nacional de subtipos genéticos de S. flexneri que servirá de base para la vigilancia y estudios de brotes por epidemiología molecular. Además, se caracterizó a un grupo de aislamientos “Atípicos” detectados desde 2009, identificándose 3 serotipos nunca antes descriptos en el país, proponiéndose la nomenclatura Xv, Yv y 4av, utilizada en la bibliografía actual, hasta tanto se llegue a un consenso mundial. Por último, se implementó como alternativa a la serología, una herramienta complementaria, versátil, rápida y accesible, para la identificación de todos los serotipos y subserotipos conocidos hasta el momento de S. flexneri.

Shigella flexneri is one of the agents most frequently linked to diarrheal illness in developing countries and often causes outbreaks in settings with poor hygiene or sanitary conditions. Travel is one of the means by which S. flexneri can be imported into developed countries, where this pathogen is not commonly seen. A robust and discriminatory subtyping method is needed for the surveillance of S. flexneri locally and regionally, and to aid in the detection and investigation of outbreaks. The PulseNet International network utilizes standardized pulsedfield gel electrophoresis (PFGE) protocols to carry out laboratory-based surveillance of foodborne pathogens in combination with epidemiologic data. A multicenter validation was carried out in nine PulseNet laboratories located in North and South America, Europe, and Asia, and it demonstrated that a new protocol is highly robust and reproducible for subtyping of S. flexneri. This protocol, already approved for PulseNet laboratories, applies NotI and XbaI as primary and secondary restriction enzymes, respectively, under electrophoresis conditions of initial switch time of 5 s to final switch time of 35 s, at 6 volts/cm. Fil: Pichel, Mariana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina. Fil: Brengi, Silvina P. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina. Fil: Cooper, Kara L. F. Centers for Disease Control and Prevention; Estados Unidos. Fil: Ribot, Efrain M. Centers for Disease Control and Prevention; Georgia. Fil: Al-Busaidy, Suleiman. Central Public Health Laboratory; Omán. Fil: Araya, Pamela. Instituto de Salud Pública de Chile; Chile. Fil: Fernández, Jorge. Instituto de Salud Pública de Chile; Chile. Fil: Vaz, Tania Ibelli. Instituto Adolfo Lutz; Brazil. Fil: Kam, Kai Man. Public Health Laboratory Centre; Japón. Fil: Morcos, Myriam. Regional Center at the U.S. Naval Medical Research Unit #3 (NAMRU-3). Global Disease Detection (GDD); Egipto. Fil: Nielsen, Eva M. Statens Serum Institut; Dinamarca. Fil: Nadon, Celine. National Microbiology Laboratory; Canadá. Fil: Pimentel, Guillermo. Regional Center at the U.S. Naval Medical Research Unit #3 (NAMRU-3). Global Disease Detection (GDD); Egipto. Fil: Pérez-Gutiérrez, Enrique. PAHO/WHO. Health Surveillance; Panamá. Fil: Gerner-Smidt, Peter. Centers for Disease Control and Prevention; Georgia. Fil: Binsztein, Norma. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.