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Made available in DSpace on 2019-10-06T16:21:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2019-05-01 Background/Objective: The beneficial effects of sub-antimicrobial dose doxycycline (SDD) associated with nonsurgical periodontal therapy are well documented. Recently, the effects of SDD on metalloproteinases have been investigated in the treatment of hypertension. The aim of this study was to evaluate the effects of SDD on ligature-induced periodontitis in spontaneously hypertensive rats (SHR). Methods: Fifty-four adult male rats were divided into three groups: SHR-C, SHR-L and SHR-L-DOX (C - Control; L – Ligature). In group SHR-L-DOX, animals were treated with daily 5 mg/kg SDD administration. In L groups, a ligature remained around mandibular first molars for the first 10 days. Each group was divided for euthanasia at 10 or 21 days. Microtomographic and histometric analyses were performed. Osteoclastogenesis was evaluated by tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) assay and gene expression of 84 inflammatory mediators by polymerase chain reaction (PCR) array. Results: Group SHR-L-DOX presented reduced systolic blood pressure when compared with group SHR-L at both 10 and 21 days (p < 0.05). Group SHR-L-DOX showed decreased bone and attachment loss in comparison with group SHR-L at both 10 and 21 days (p < 0.05). SDD treatment reduced the amount of TRAP-positive cells at 10 days (p < 0.05). Group SHR-L-DOX showed a downregulated inflammatory genes profile in comparison with SHR-L at 10 and 21 days. Conclusion: SDD therapy exerted systemic modulatory effect on inflammation with reduced periodontal tissue destruction in hypertensive rats. Department of Oral Surgery and Periodontology School of Dentistry of Ribeirao Preto University of Sao Paulo Department of Morphology Stomatology and Physiology School of Dentistry of Ribeirao Preto University of Sao Paulo Dental School of Araçatuba Univ Estadual Paulista – UNESP Department of Basic Sciences Dental School of Araçatuba Univ Estadual Paulista – UNESP Department of Basic Sciences

Microcephaly is described as a reduction of the head circumference, due to the premature fusion of the bones of the skull, preventing the brain from growing normally and reaching its maximum development. This condition may result in neurological disorders, phonation and chewing dysfunction, dysphagia and risk of malnutrition. This alteration contributes to oral hygiene impairment, and continuous uses of the antipsychotic and anticonvulsant medication. Thus, the purpose of this study was to evaluate if microcephaly modified redox balance in saliva. Our hypothesis is that in the microcephalic patient's salivary oxidative stress is lower because of the increase in antioxidant defenses. The study included 13 patients with microcephaly (microcephalic group – MC) and 12 patients without neurological disorders (normocephalic group – NC), from zero to ten years old, no edentulous. Saliva was collected using a cotton wool swab, placing it on the child's mouth floor. After centrifugation, supernatants were fractionated and stored at -80 °C for analyses. Lipid oxidative was evaluated by TBARS methods, total antioxidant capacity by the ferric reducing ability (FRAP) assay, uric acid (UA) was quantified by modified Trinder reaction, and superoxide dismutase activity (SOD) by inhibition of the pyrogallol auto-oxidation. Total protein was measured using the method of Lowry. Compared to NC group, TBARS was significantly lower in MC group, while FRAP, UA and SOD were higher. Our hypothesis was confirmed. MC patients have lower salivary oxidative stress, due to increased oxidant defenses. La microcefalia es una reducción de la circunferencia de la cabeza, debido a la fusión prematura de los huesos del cráneo, impidiendo que el cerebro crezca con normalidad y alcance su máximo desarrollo. Puede resultar en trastornos neurológicos, disfunción de la fonación y masticación, disfagia y riesgo de desnutrición. Contribuye al deterioro de la higiene bucal y al uso continuo de la medicación antipsicótica y anticonvulsiva. Este estudio evaluado si la microcefalia modifica el equilibrio redox en la saliva. Nuestra hipótesis es que en el paciente microcefálico el estrés oxidativo salival es menor por el aumento de las defensas antioxidantes. El estudio incluyó a 13 pacientes con microcefalia (MC) y 12 pacientes sin alteraciones neurológicas (NC), de cero a diez años, no desdentados. La saliva se recogió con un hisopo de algodón en el suelo de la boca. Después de la centrifugación, los sobrenadantes se almacenaron a -80°C. El oxidativo lipídico se evaluó mediante métodos TBARS, la capacidad antioxidante total mediante el ensayo de capacidad reductora férrica (FRAP), el ácido úrico (UA) cuantificó mediante la reacción de Trinder modificada y la actividad superóxido dismutasa (SOD) mediante la inhibición de la autooxidación del pirogalol. La proteína total se midió utilizando el método de Lowry. En comparación con el grupo NC, TBARS fue significativamente menor en el grupo MC, mientras que FRAP, UA y SOD fueron mayores. Nuestra hipótesis fue confirmada. Los pacientes con MC tienen menor estrés oxidativo salival, debido al aumento de las defensas antioxidantes. A microcefalia é descrita como uma redução da circunferência cefálica, devido a fusão prematura dos ossos do crânio, impedindo que o cérebro cresça normalmente e atinja seu máximo desenvolvimento. Pode resultar em desordens neurológicas, disfunção fonatória e mastigatória, disfagia e aumento do risco de desnutrição. Pode comprometer a qualidade da higiene bucal e favorecer o uso contínuo de medicação antipsicótica e anticonvulsivante. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar se a microcefalia modifica o equilíbrio redox na saliva. Nossa hipótese é que na saliva do paciente microcefálico o estresse oxidativo é menor devido ao aumento das defesas antioxidantes. O estudo incluiu 13 pacientes com microcefalia (MC) e 12 pacientes sem alterações neurológicas (grupo NC), de zero a dez anos, sem edêntulos. A saliva foi coletada utilizando rolete de algodão, colocando-o no assoalho bucal da criança. Após a centrifugação, os sobrenadantes foram fracionados e armazenados a -80°C para análises. A oxidação lipídica foi avaliada pelo método TBARS, a capacidade antioxidante total pela capacidade de redução do ferro (FRAP), o ácido úrico (UA) foi quantificado pela reação de Trinder modificada e a atividade da enzima superóxido dismutase (SOD) pela inibição da auto-oxidação do pirogalol. A proteína total foi medida utilizando o método de Lowry. Em comparação com o grupo NC, TBARS foi significativamente menor no grupo MC, enquanto FRAP, UA e SOD foram maiores. Nossa hipótese foi confirmada. Os pacientes com MC apresentam menor estresse oxidativo salivar, devido ao aumento das defesas antioxidantes.

8º Congresso de Odontologia de Araçatuba, 38º Jornada Acadêmica: Prof. Dr. Mauro Airton Rulli, 14º Simpósio Pós-Graduação Profa. Dra. Kikue Takebayashi Sassaki, 10º Encontro do CAOE, Encontro de 40 anos de Egressos de Pós-Graduação em Odontologia (Área de C.T.B-M-F)

Made available in DSpace on 2018-12-11T17:00:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2016-09-01 Osteoporosis is a systemic disease characterized by bone degradation and decreased bone mass that promotes increased bone fragility and eventual fracture risk. Studies have investigated the use of sodium fluoride (NaF) for the treatment of osteoporosis. However, fluoride can alter glucose homeostasis. The aim of this study was to evaluate the effects of NaF intake (50 mg/L) from water on the following parameters of ovariectomized (OVX) rats: (1) tyrosine phosphorylation status of insulin receptor substrate (pp185 (IRS-1/IRS-2)) in white adipose tissue; (2) insulin sensitivity; (3) plasma concentrations of glucose, insulin, total cholesterol, triglyceride, TNF-α, IL-6, osteocalcin, calcium, and fluoride; (4) bone density and biomechanical properties in the tibia; and (5) tibia histomorphometric analysis. Fifty-two Wistar rats (2 months old) were ovariectomized and distributed into two groups: control group (OVX-C) and NaF group (OVX-F), which was subjected to treatment with NaF (50 mg/L) administered in drinking water for 42 days. The chronic treatment with NaF promoted (1) a decrease in pp185 (IRS-1/IRS-2) tyrosine phosphorylation status after insulin infusion in white adipose tissue and in insulin sensitivity; (2) an increase in the plasma concentration of insulin, fluoride, osteocalcin, calcium, triglyceride, VLDL-cholesterol, TNF-α, and IL-6; (3) a reduction in the trabecular width, bone area, stiffness, maximum strength, and tenacity; (4) no changes in body weight, food and water intake, plasma glucose, total cholesterol, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, bone mineral content, and bone mineral density. It was concluded that chronic treatment with NaF (50 mg/L) in OVX rats causes a decrease in insulin sensitivity, insulin signaling transduction, and biochemical, biomechanical, and histomorphometric bone parameters. Ciências Fisiológicas-SBFis Department of Basic Sciences Araçatuba Dental School UNESP-Univ Estadual Paulista, Rua José Bonifácio 1193 Department of Child and Social Dentistry Araçatuba Dental School UNESP-Univ Estadual Paulista, Rua José Bonifácio 1193. Department of Support Animal Production and Health Araçatuba School of Veterinary Medicine UNESP-Univ Estadual Paulista, Rua Clóvis Pestana, 793. Department of Biological Sciences Bauru Dental School University of São Paulo, Alameda Octávio Pinheiro Brisolla, 9-75 Ciências Fisiológicas-SBFis Department of Basic Sciences Araçatuba Dental School UNESP-Univ Estadual Paulista, Rua José Bonifácio 1193 Department of Child and Social Dentistry Araçatuba Dental School UNESP-Univ Estadual Paulista, Rua José Bonifácio 1193. Department of Support Animal Production and Health Araçatuba School of Veterinary Medicine UNESP-Univ Estadual Paulista, Rua Clóvis Pestana, 793.

The aim of this study was to evaluate the influence of systemic administration of antibiotics (amoxicillin and tetracycline) at the different phases of the repair process (7, 15, 30 days) in immediate rat tooth replantation. Ninety rats had their incisors extracted and stored in saline for 5 min. Next, the teeth were replanted, and the animals were assigned to three groups according to the antibiotic administered by oral gavage: control group, amoxycillin group, and tetracycline group. Euthanasia was performed at 7, 15, and 30 days after replantation. Regardless of the evaluation period, the connective tissue underlying the epithelial attachment and the periodontal ligament showed statistically significant difference relative to the acute inflammatory infiltrate, which was more intense in the control group followed by the tetracycline group. These results point to the fact that systemic antibiotic therapy (SAT) in immediate tooth replantation is beneficial to pulpal and periodontal ligament repair and that amoxycillin is an excellent option. There is a lack of randomized studies assessing how the use of systemic antibiotics could influence tooth healing after immediate replantation.

Made available in DSpace on 2018-12-11T17:01:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2016-03-01 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Aims The fetal programming hypothesis suggests that intrauterine stimuli can induce metabolic changes in offspring, increasing the disease risk in adulthood. Periodontal disease may enhance serum cytokine levels. Cytokines such as tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) have been associated with reduced glucose transporter type 4 (GLUT4) expression, decreased protein kinase B (Akt) phosphorylation, and insulin resistance. This study aimed to evaluate GLUT4 content, and Akt serine phosphorylation status in the gastrocnemius skeletal muscle (GSM), glycemia, insulinemia and change in body weight in offspring of rats with periodontal disease. Main methods Female Wistar rats were distributed into a control group (CN) and an experimental periodontal disease group (PD), in which a ligature was placed around the mandibular first molars. Seven days after ligature placement, both groups were mated with normal male rats. The ligatures remained throughout pregnancy until weaning, after which the male offspring were distributed into groups: CN-o, control rat offspring; and PD-o, periodontal disease rat offspring. The body weight from 0 to 75 days of age was measured. At 75 days, the glycemia, insulinemia, TNF-α levels, Akt serine phosphorylation, and GLUT4 content in the GSM were measured in the offspring. Key findings The PD-o group showed a low birth weight (LBW), unchanged glycemia, increased insulinemia, insulin resistance, increased TNF-α levels, decreased Akt serine phosphorylation status, and reduced GLUT4 content in the plasma membrane and translocation index after insulin stimulation. Significance Maternal periodontal disease causes LBW, insulin resistance, and alterations in the final stage of insulin signaling in the GSM of adult offspring. Programa de Pos-graduacao Multicentrico em Ciencias Fisiologicas-SBFis Department of Basic Sciences Dental School of Araçatuba Univ Estadual Paulista - UNESP Preventive and Social Dentistry Post-Graduation Program Dental School of Araçatuba Univ Estadual Paulista - UNESP Department of Pathology and Clinical Propedeutic Dental School of Araçatuba Univ Estadual Paulista - UNESP Department of Physiology and Biophysics São Paulo Institute of Biomedical Sciences USP Programa de Pos-graduacao Multicentrico em Ciencias Fisiologicas-SBFis Department of Basic Sciences Dental School of Araçatuba Univ Estadual Paulista - UNESP Preventive and Social Dentistry Post-Graduation Program Dental School of Araçatuba Univ Estadual Paulista - UNESP Department of Pathology and Clinical Propedeutic Dental School of Araçatuba Univ Estadual Paulista - UNESP FAPESP: 2013/08783-4

Systemic antibiotic therapy (SAT) has usually been recommended after tooth replantation, but its actual value has been questioned. As there are no reports in the literature about its influence on tooth replantation, the aim of this study was to evaluate the influence of systemic administration of antibiotics (amoxicillin and tetracycline) at the different phases of the repair process (7, 15, 30 days) in delayed rat tooth replantation. Ninety Wistar rats (Rattus norvegicus albinus) had their maxillary right incisors extracted and bench-dried for 60 min. The dental papilla, enamel organ, pulp tissue, and root surface-adhered periodontal ligament were removed, and the teeth were replanted. The animals received no antibiotics (n = 30) or were medicated systemically with amoxicillin (n = 30) and tetracycline (n = 30), and were euthanized after 7, 15, and 30 days. Regardless of the evaluation period, the acute inflammatory infiltrate was less intense and root resorption presented smaller extent and depth in the group treated with amoxicillin. The results suggest that SAT has a positive influence on the repair process in delayed tooth replantation and that amoxicillin is an excellent treatment option.

We describe an integrated approach that connects production performance with elastic and geometric seismic attributes to define the role of rock matrix and fractures/faults on gas production from Camarupim Field, offshore Brazil. Discovering, appraisal and development comprise three vertical and four horizontal wells, grossly 1000 meters long, showing very distinctly absolute open flows (AOFs) during tests. Multi-scaled data, seismic, logs and lab-based supported elastic inversion feasibility analysis to understand and correlate band limited Poisson-Ratio (PR) and P-Impedance (Ip) cubes with rock properties. Positive PR and negative Ip values are associated with shales, while sands relate to negative PR and a wide range of positive and negative Ip values, the later ones assigning best sand quality. Better facies detection was guided by combining PR and Ip cubes in a particular way, taking only negative values and zeroing the positive values of PR. Positive values in this product cube relates to better facies (Ip

O consumo intermitente de etanol, denominado binge drinking está relacionado a prejuízos para a saúde do indivíduo. Binge drinking descreve o padrão de consumir bebidas alcoólicas que resulta em concentração sanguínea de etanol igual ou superior a 0,08 g/dL (consumo de 70/56 gramas de etanol para homens/ mulheres) em um período de 2 horas. Os mecanismos que medeiam os danos orgânicos induzidos pelo consumo de etanol em padrão binge não são conhecidos. Portanto, o desenvolvimento de modelos experimentais que permitam o melhor entendimento desses mecanismos é de interesse. A hipótese desse estudo é a de que o consumo em binge ative os receptores AT1 que irá promover aumento do estresse oxidativo sistêmico. Portanto, o presente projeto foi delineado de forma a investigar a participação dos receptores AT1 no estresse oxidativo sistêmico induzido pelo consumo de etanol em padrão binge. Com esse propósito, ratos Wistar Hannover com idade entre 60 e 70 dias (270 a 300 g) foram distribuídos aleatoriamente em 4 grupos: 1) Controle: os animais tiveram livre acesso a água e receberam diariamente água por gavagem; 2) Etanol binge: os animais tiveram livre acesso a água e receberam etanol na dose de 2 g/kg (10 mL/kg de uma solução 26% v./v.) por gavagem por período de 5 semanas. A administração de etanol foi realizada 4 dias por semana; 3) Losartan: os animais tiveram livre acesso a água e receberam losartan (10 mg/kg) diariamente por gavagem; 4) Etanol binge + losartan: os animais tiveram livre acesso a água e receberam etanol na dose de 2 g/kg por gavagem por período de 5 semanas. Esses animais também receberam losartan (10 mg/kg) diariamente por gavagem. Ao término do tratamento os animais foram anestesiados com uretana 1,25 g/kg em solução 25% (5 mL/kg) e mortos por exsanguinação seguida do rompimento do diafragma. O sangue e o coração (ventrículo esquerdo) foram coletados para realização de análises bioquímicas. O tratamento com etanol não alterou o peso dos animais ao longo do tratamento. Não foram detectadas diferenças do consumo de ração e de água entre os grupos ao longo das 5 semanas de tratamento. Os resultados mostraram que o consumo de etanol em padrão binge não alterou a concentração plasmática de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e do peróxido de hidrogênio (H2O2) bem como a atividade plasmática das enzimas superóxido dismutase (SOD), da concentração plasmática de glutationa reduzida (GSH) e da atividade plasmática da catalase. Perfil semelhante foi observado no ventrículo esquerdo, além da não observação da expressão proteica da ERK 1/2. Com isso, o consumo de etanol em binge não alterou o estresse oxidativo sistêmico e tecidual ou alteração dos sistemas de defesa antioxidante. Intermittent consumption of ethanol, called binge drinking, is related to damage to the individual\'s health. Binge drinking describes the pattern of consuming alcoholic beverages that results in blood ethanol concentration equal to or greater than 0.08 g / dL (consumption of 70/56 grams of ethanol for men / women) in a period of 2 hours. The mechanisms that mediate organic damage induced by ethanol consumption in a binge pattern are not known. Therefore, the development of experimental models that allow a better understanding of these mechanisms is of interest. The hypothesis of this study is that consumption in binge activates AT1 receptors that will promote an increase in systemic oxidative stress. Therefore, the present project was designed to investigate the participation of AT1 receptors in systemic oxidative stress induced by the consumption of ethanol in a binge pattern. For this purpose, Wistar Hannover rats aged between 60 and 70 days (270 to 300 g) were randomly assigned to 4 groups: 1) Control: the animals had free access to water and received daily water by gavage; 2) Binge ethanol: the animals had free access to water and received ethanol at a dose of 2 g / kg (10 mL / kg of a 26% v./v. Solution) by gavage for a period of 5 weeks. Ethanol was administered 4 days a week; 3) Losartan: the animals had free access to water and received losartan (10 mg / kg) daily by gavage; 4) Ethanol binge + losartan: the animals had free access to water and received ethanol at a dose of 2 g / kg per gavage for a period of 5 weeks. These animals also received losartan (10 mg / kg) daily by gavage. At the end of the treatment, the animals were anesthetized with 1.25 g / kg urethane in 25% solution (5 mL / kg) and killed by exsanguination followed by rupture of the diaphragm. Blood and heart (left ventricle) were collected for biochemical analysis. Treatment with ethanol did not change the weight of the animals during the treatment. There were no differences in feed and water consumption between groups over the 5 weeks of treatment. The results showed that the consumption of ethanol in a binge pattern did not alter the plasma concentration of substances reactive to thiobarbituric acid (TBARS) and hydrogen peroxide (H2O2) as well as the plasma activity of the enzymes superoxide dismutase (SOD), the plasma concentration of reduced glutathione (GSH) and plasma catalase activity. A similar profile was observed in the left ventricle, in addition to not observing ERK 1/2 protein expression. As a result, ethanol consumption in binge did not alter systemic and tissue oxidative stress or alter antioxidant defense systems.

As integrinas constituem uma família de receptores de membrana que tem como função primária a adesão de células a proteínas da matriz extracelular e alguns de seus membros estão envolvidos nos processos de diferenciação osteoblástica e formação óssea, eventos diretamente relacionados à osseointegração de implantes de titânio (Ti). Sabe-se que superfícies de Ti com nano e microtopografia podem favorecer a diferenciação osteoblástica e a mineralização da matriz extracelular. No entanto, os mecanismos celulares envolvidos nesses processos não são completamente entendidos. Neste contexto, os objetivos deste estudo foram: (1) caracterizar as superfícies de Ti com nano (Ti-Nano) e microtopografia (Ti-Micro), (2) investigar a participação da integrina V na diferenciação osteoblástica induzida pelo Ti-Nano e (3) investigar a participação da integrina β3 na diferenciação osteoblástica induzida por Ti-Nano e Ti-Micro. Para isso, discos de Ti-Nano e Ti-Micro foram preparados por ataque ácido com H2SO4/H2O2 ou com HNO3/H2SO4 / HCl, respectivamente, e caracterizados quanto à topografia, rugosidade e composição química de superfície. Discos de Ti usinados foram usados com controle (Ti-Controle) em alguns experimentos. Células-tronco mesenquimais derivadas de medula óssea de ratos foram cultivadas sobre as três superfícies de Ti e foi avaliada a expressão gênica de componentes envolvidos na via de sinalização das integrinas por PCR array. Com base nos resultados do PCR array, as integrinas αV e β3 foram selecionadas e silenciadas por RNA de interferência (shRNA) ou CRISPR/Cas9, respectivamente, em células pré-osteoblásticas da linhagem MC3T3-E1 para investigarmos a participação dessas integrinas na diferenciação osteoblástica induzida por superfícies de Ti com diferentes topografias. Os resultados deste estudo mostraram que os tratamentos empregados foram eficientes para a produção de superfícies de Ti com topografias nas escalas nano e micrométrica. Além disso, foi demonstrado que o maior potencial osteogênico do Ti-Nano se deve, ao menos em parte, à integrina αV, uma vez que seu silenciamento reduziu a diferenciação osteoblástica induzida pela nanotopografia. Por fim, também demonstramos que a via de sinalização ativada pela integrina β3 exerce um papel fundamental no potencial osteogênico do Ti-Nano, mas não do Ti-Micro. O silenciamento da integrina β3 reduziu a diferenciação osteoblástica, concomitantemente com a regulação negativa da expressão de vários componentes das vias de sinalização de Wnt e de BMP, apenas nas células crescidas sobre a nanotopografia. Em conjunto, nossos resultados revelam um novo mecanismo para explicar a maior diferenciação osteoblástica induzida pelo Ti-Nano, que envolve uma complexa rede regulatória ativada pela maior expressão das integrinas αV e β3, esta última gerando ativação da transdução de sinal das vias de Wnt e de BMP Integrins are a family of membrane receptors that primarily mediate cell adhesion to extracellular matrix proteins and some members are involved in the process of osteoblast differentiation and bone formation, key events of titanium (Ti) implant osseointegration. It is well known that Ti surfaces with nano and microtopography may favor osteoblast differentiation and matrix mineralization. However, the cellular mechanisms involved in this process are not entirely understood. In this context, the aims of this study were: (1) to characterize the Ti surfaces with nano (Ti-Nano) and microtopography (Ti-Micro), (2) to investigate the participation of integrin V on osteoblast differentiation induced by Ti-Nano and (3) to investigate the participation of integrin β3 on osteoblast differentiation induced by Ti-Nano and Ti-Micro. Discs of Ti-Nano and Ti-Micro were prepared with acid etching with H2SO4/H2O2 or with HNO3/H2SO4 / HCl, respectively, and characterized in terms of surface topography, roughness and chemical composition. Machined Ti discs (untreated) were used as control (Ti-Control) in some experiments. Mesenchymal stem cells from rat bone marrow were cultured on Ti discs with the three different surfaces and the gene expression of members of the integrin signaling pathway was evaluated by PCR array. Based on PCR array results, the integrins αV and β3 were selected and silenced using RNA interference (shRNA) or CRISPR-Cas9, respectively, in pre-osteoblastic cell line MC3T3-E1 to investigate the participation of these integrins in osteoblast differentiation induced by Ti with different surface topographies. The results showed that the treatments used were efficient to generate Ti surfaces with topographies at the nano and micrometric scales. We showed that the higher osteogenic potential of Ti-Nano may be, at least in part, due to the integrin &alphaV, since its silencing reduced the osteoblast differentiation induced by nanotopography. We also demonstrated that the signaling pathway triggered by integrin β3 plays a key role in the osteogenic potential of Ti-Nano, but not of Ti-Micro. The silencing of integrin β3 reduced the osteoblast differentiation concomitantly with the negative regulation of the gene expression of several Wnt and BMP signaling components only in cells grown on Ti-Nano. Taken together, our results uncover a novel mechanism to explain the higher osteoblast differentiation induced by Ti-Nano that involves a complex regulatory network triggered by integrins αV and β3 upregulation, with the integrin β3 activating the Wnt and BMP signal transductions

A ativação do receptor para tromboxano-prostanóide (TP) está relacionada com o processo de desenvolvimento e manutenção da hipertensão arterial. O objetivo do presente trabalho foi investigar se a ativação do receptor TP promove a produção de fatores contráteis derivados do endotélio (EDCFs) e espécies reativas de oxigênio (ERO), contribuindo para a disfunção vascular observada na hipertensão renovascular. Aortas de ratos normotensos (2R) ou hipertensos (2R-1C) foram utilizadas para avaliar a expressão proteica da enzima cicloxigenase (COX-1, COX- 2), expressão gênica do receptor TP, expressão proteica da enzima NO-Sintase endotelial fosforilada (fosfo-eNOS) e produção de TXA2 ativada pelo U46619. Células endoteliais (CE) e do músculo liso vascular (CMLV) foram utilizadas para avaliar a produção de NO e ERO pelo estímulo com o U46619. Em aortas com (E+) ou sem endotélio (E-) de ratos 2R e 2R-1C foram realizadas curvas concentraçãoefeito cumulativas para o U46619 na ausência ou presença de Tiron, Catalase (Cat) e em aortas E+, na presença de L-NAME, Ibuprofeno (Ibu) ou L-NAME + Ibu. Em aortas E+ contraídas com U46619, foram realizadas curvas concentração-efeito para acetilcolina (ACh), na ausência ou presença de Tiron, Cat ou Ibu. Os resultados mostram que a expressão gênica para o receptor TP foi menor e a expressão proteica da COX-1 e COX-2 foi maior em aortas de ratos 2R-1C do que em 2R. Em aorta de ratos 2R e 2R-1C, o U46619 não promoveu a geração de TXA2 e não alterou a expressão proteica da fosfo-eNOS. O estímulo com U46619 promoveu o aumento de NO em CE e ERO em CE e CMLV. Em aortas E- a potência (pD2) do U46619 em induzir contração foi maior em 2R e 2R-1C em relação às preparações E+. Em aortas E- de ratos 2R, a contração ao U46619 foi menor com Cat ou Ibu do que no controle. Em preparações E+, Ibu ou Ibu+Tiron (mas não Ibu+L-NAME) reduziram a potência do U46619 em relação ao controle. Em aortas E+ de ratos 2R- 1C, a contração ao U46619 foi maior com Tiron e menor em presença de Tiron+Ibu em relação ao controle. Tiron+L-NAME ou Ibu não modificou a resposta contrátil ao U46619. Em aortas E-, Tiron ou Cat não modificaram a contração ao U46619. Quando contraídas com U46619 (10 nmol/L), o relaxamento à ACh foi menor em aorta de ratos 2R-1C em relação a 2R. Em aortas E+ de ratos 2R e 2R-1C, o relaxamento à ACh foi menor quando contraídas com U46619 (100 nmol/L) do que com U46619 (10 nmol/L). Tiron, Cat ou Ibu não modificaram o relaxamento à ACh em aorta de ratos 2R-1C comparadas a 2R. Em aorta de ratos 2R, o peróxido de hidrogênio regula a atividade das enzimas COX e eNOS. Por outro lado, em aorta de ratos 2R-1C, a regulação da atividade da COX pelas ERO depende do endotélio e modula negativamente a síntese de EDCFs. Palavras-chave: receptor TP, NO, ERO, COX, função vascular, hipertensão. TP receptor activation is involved on the development and maintenance of hypertension. This study aimed to investigate if TP receptor activation induces endothelium-derived contractile factors (EDCFs) and reactive oxygen species (ROS) production, and if it contributes to the vascular dysfunction in renal hypertensive rats. Normotensive (2K) and renal hypertensive (2K-1C) rat aortas were used to evaluate COX-1 and -2 expression, genic expression of TP receptor, p-eNOS expression and TXA2 production induced by TP agonist, U46619. Endothelial cells (EC) and vascular smooth muscle cells (VSMC) were stimulated with U46619 to evaluate NO and ROS production. U46619- stimulated concentration-effect curves were performed in intact (E+) and denuded-endothelium (E-) aortas of 2K and 2K-1C rats, in the absence (Control) or presence of Tiron or Catalase (Cat). In E+ aortas, we used L-NAME, Ibuprofen or the combination of both. Concentration-effect curves were performed for acetylcholine (ACh) in E+ aortas, contracted by U46619, in the absence or presence of Tiron, Catalase or Ibuprofen. In 2K-1C, the genic expression of TP receptor was lower and expression of COX-1 and -2 was higher than in 2K. The agonist did not have effect on TXA2 production or p-eNOS expression in both rat groups of aortas. U46619 induced production of NO in EC and ROS in EC and VSMC. The endothelium removal increased the potency of U46619 in 2K and 2K-1C aortas. In Eaortas of 2K, contraction induced by U46619 was impaired by Catalase. In E+ aortas, the potency was lower in the presence of Ibu ou Ibu+Tiron, but not Cat or Ibu+LNAME. In E+ aortas of 2K-1C, the contraction to U46619 was potentiated by Tiron but it was inhibited by Tiron+Ibu. Tiron and L-NAME or Ibuprofen had no effect on U46619-induced contraction. In E- aortas of 2K-1C, Tiron or Catalase had no effect on the contraction induced by U46619. ACh-induced relaxation was impaired in 2K and 2K-1C aortas contracted with 100 nmol/L U46619. Relaxation induced by ACh was lower in 2K-1C aortas contracted with 10 nmol/L U46619. Tiron, Catalase or Ibuprofen had no effect on the relaxation to ACh in 2K-1C rats aorta. Our results suggest that in 2K rat aortas, H2O2 regulates COX and eNOS activity. On the other hand, in 2K-1C rats aorta, ROS modulates COX activity and EDCFs production, which mechanisms are endothelium- dependent.

O nitrito pode ser reduzido a NO de forma dependente do pH ácido do estômago ou por enzimas com atividade nitrito-redutase. O tratamento com omeprazol, previne parte dos efeitos anti-hipertensivos do nitrito administrado por via oral por aumentar o pH gástrico. Contudo, nenhum estudo até o momento avaliou se, assim como o omeprazol, a ranitidina também é capaz de atenuar os efeitos anti-hipertensivos do nitrito de sódio por aumentar o pH gástrico. Nesse estudo, examinamos se a administração oral de ranitidina poderia prejudicar os efeitos anti-hipertensivos do nitrito de sódio administrados por via oral, por interferir na formação de NO e espécies nitrosiladas a partir do nitrito. A fim de verificar a influência da ranitidina no efeito hipotensor do nitrito de sódio, utilizamos animais tratados agudamente com LNAME pré-tratados com ranitidina, omeprazol e veículo e, posteriormente, com nitrito de sódio 15mg/kg. Como esperado, o tratamento com L-NAME resultou em aumento na pressão arterial média (PAM). O pH gástrico foi diferente entre os grupos, tendo um aumento no pH dos animais tratados com ranitidina e omeprazol, quando comparado ao veículo, e os tampões tinham o mesmo pH do veículo e das drogas. O nitrito de sódio exerceu efeitos anti-hipertensivos significativos nos grupos estudados. No entanto, foram observadas menores diminuições na PAM em ratos tratados com omeprazol e ranitidina em comparação aos ratos que receberam veículo. Esses achados foram associados a diminuições nas concentrações gástricas de NO e diminuições nos níveis plasmáticos de espécies nitrosiladas. Além disso, houve aumento nas concentrações de nitrito no estômago. Não foram observadas diferenças nas concentrações de nitrito no plasma. Além disso, não foram observadas diferenças nos níveis de NOx no plasma e estômago entre os grupos do estudo. Os animais tratados com tampão apresentaram resultados similares aos tratados com as drogas. Nossos resultados sugerem que a ranitidina, ao aumentar o pH gástrico, afeta as respostas anti-hipertensivas ao nitrito de sódio oral por diminuir a formação de NO e espécies nitrosiladas. Este fato é reforçado pelo aumento do nitrito no estômago, sugerindo uma diminuição na conversão de nitrito a NO e espécies nitrosiladas no ambiente gástrico. Nitrite can be reduced to NO depending on acidic pH of the stomach or by enzymes with nitrite reductase activity. Treatment with omeprazole attenuates the antihypertensive effects of oral nitrite by increasing of gastric pH. However, studies are still necessary to further evaluate wheter ranitidine is also able to attenuate the antihypertensive effects of sodium nitrite by increasing gastric pH. In this study, we examined whether oral administration of ranitidine could impair oral antihypertensive effects of sodium nitrite by interfering with the formation of NO and nitrosylated species from nitrite. In order to analyze the influence of ranitidine under hypotensive effect of sodium nitrite, rats were treated with L-NAME and pretreated with ranitidine, omeprazole, vehicle or buffer, subsequently all the groups were treated with sodium nitrite 15 mg/kg. The L-NAME treatment increase mean arterial pressure (MAP). The gastric pH was different among the groups, there was an increased in rats gastric pH treated with ranitidine and omeprazole compared to the vehicle. The buffer group had the same pH of vehicle and drugs treatment. Sodium nitrite exerted significant antihypertensive effects in the groups studied. However, lesser decreases in MAP were observed in rats treated with omeprazole and ranitidine compared to rats that received vehicle. These findings were associated with a lower NO gastric concentrations as well as nitrosylated species plasma levels. In addition, there was an increased in nitrite concentrations in the stomach. No differences were observed in plasma nitrite levels. Moreover, there was not any significant difference in plasma and stomach NOx levels among the studied groups. The rats treated with buffer showed similar results to those treated with the drugs. Together these data demonstrated that ranitidine, through increased gastric pH, affects antihypertensive responses to oral sodium nitrite by reducing the formation of NO and nitrosylated species. This fact is reinforced by higher levels in nitrite concentrations in the stomach, thereby it suggests a lower conversion of nitrite to NO and nitrosylated species in the gastric environment.

O choque séptico é uma síndrome inflamatória sistêmica secundária a um processo infeccioso, no qual as disfunções das células endoteliais e do músculo liso vascular contribuem para suprimento sanguíneo insuficiente a órgãos vitais, com consequente hipotensão sistêmica, insuficiência múltipla de órgãos e morte. Em geral, nos pacientes com choque séptico, existe um desequilíbrio dos fatores hemodinâmicos, levando ao baixo débito cardíaco e vasodilatação, além da redução da resposta contrátil aos diferentes agonistas, nos quais a participação do óxido nítrico (NO), de NO-sintases (NOS) e do estresse oxidativo são evidentes. A contribuição do sistema de peptídeos natriuréticos é evidenciada nos pacientes e em animais submetidos à sepse severa ou ao choque séptico. O peptídeo natriurético tipo C (CNP) é um agente vasodilatador que leva ao relaxamento vascular pela produção de GMPc intracelular, NO, hiperpolarização de membrana das células do músculo liso vascular e redução da concentração citosólica de cálcio. O tratamento com antagonista de receptores NPR-A/B tornou os animais menos susceptíveis à sepse, com menor resposta hipotensora, melhora da contração a agonistas e redução do processo inflamatório e NO plasmático. Portanto, a hipótese do presente trabalho é que no modelo de choque séptico induzido por ligação e perfuração cecal (CLP) em ratos, ocorreria menor resposta vasoconstritora ao agonista seletivo 1-adrenérgico Fenilefrina (PE) e este efeito seria atenuado pela inibição da sinalização desencadeada pelo CNP e modulado pelo estresse oxidativo. A sobrevivência dos ratos CLP foi menor do que a observada em ratos controle-operados (Sham). Os parâmetros cardiovasculares foram mais prejudicados nos ratos CLP do que em ratos Sham. A PE apresentou efeito pressórico menor em ratos CLP comparados aos ratos Sham. O CNP induziu efeito hipotensor em ambos os grupos, porém com maior aumento de frequência cardíaca nos ratos CLP. A contração induzida pela PE foi menor em aorta e artéria mesentérica de resistência, isoladas de ratos CLP, cujo efeito foi modulado pelo endotélio vascular. A vasodilatação induzida pelo CNP foi menor em aorta de ratos CLP. Além disso, o CNP apresentou efeito modulador negativo sobre a contração da PE em aortas com ou sem endotélio, mas não em artérias mesentéricas de resistência isoladas de ratos Sham e CLP. A menor resposta contrátil induzida pela PE em aortas de ratos CLP foi aumentada pelo antagonista de receptor NPR-B, pela inibição das enzimas NOS, xantina oxidase e metaloproteinases da matriz extracelular (MMPs) em aortas com endotélio. O efeito modulador negativo do CNP sobre a contração da PE foi revertido pelo antagonista de receptor NPR-B, inibição de NOS, redução da disponibilidade de O2- e pela degradação de H2O2, em ambos os grupos. Além disso, o estresse oxidativo e a concentração citosólica de H2O2 foram maiores no músculo liso vascular de ratos CLP. A expressão protéica de CNP endógeno foi menor no endotélio e maior no músculo liso da aorta de ratos CLP do que de Sham. Porém, a expressão protéica dos receptores 1-adrenérgicos e NPR-B não foram diferentes entre os grupos, mas a expressão protéica do receptor NPR-C foi menor na aorta de ratos CLP. A mobilização de cálcio intracelular foi menor no músculo liso da aorta de ratos CLP e a alta concentração de potássio extracelular não foi suficiente para despolarizar a membrana das células musculares da aorta de ratos CLP. A expressão protéica dos receptores NPR-B e NPR-C não foram diferentes no coração de ratos CLP. Entretanto, o potencial de membrana do ventrículo esquerdo (VE) dos ratos CLP foi menor que aquele de ratos Sham. Além disso, a concentração citosólica de cálcio no VE de ratos CLP foi menor que em ratos Sham, mas a redução de cálcio citoplasmático induzida pelo CNP foi maior no VE de ratos CLP comparada aquela em ratos Sham. Ocorreu disfunção cardíaca nos ratos CLP. No modelo de choque séptico induzido por cirurgia CLP em ratos, a participação do sistema de peptídeos natriuréticos, sobretudo do CNP, contribui para a menor resposta contrátil à fenilefrina e representa potencial via de intervenção na sepse severa e no choque séptico. Septic shock is a systemic inflammatory syndrome secondary to an infection which the vascular dysfunction leads to an insufficient blood flow to vital organs with systemic hypotension, multiple organ injury and death. Usually, in septic shock patients there is an imbalance on hemodynamic factors, leading to low cardiac output and vasodilation, with decrease on contractile responses to several agonists, which the contribution of nitric oxide (NO), NO-synthases (NOS) and oxidative stress are evident. The contribution of natriuretic peptide system is observed on patients and animals submitted to severe sepsis or septic shock. C-type natriuretic peptide (CNP) is a vasodilator that leads to vascular relaxation through cGMP, NO, vascular smooth muscle hyperpolarization and reduction in cytosolic calcium. Treatment of animals with NPR-A/B antagonist, as well as knockout mice to NPR-A receptor are less susceptible to sepsis, with less hypotension, enhanced contraction to different agonists and reduction in inflammation and plasma NO. Therefore, the hypothesis of the present work is in septic shock induced by cecal ligation and puncture (CLP) model in rats there is low vasoconstriction to the selective 1- adrenoceptor agonist Phenylephrine (PE) and this effect could be attenuated by the inhibition of CNP signaling, strongly modulated by the oxidative stress. CLP survival was lower than the control rats (Sham) and cardiovascular parameters were impaired in CLP compared to the Sham rats. PE had positive pressure effect lower in CLP than in Sham rats. CNP induced hypotension in both groups with greater increases of cardiac rate in CLP. PE-induced contraction was decreased in aorta and resistance mesenteric artery isolated from CLP rats and this effect was modulated by the vascular endothelium. CNP-induced vasodilation was lower in rat aorta of CLP. Moreover, CNP had a negative modulator effect over the PE contraction on aortas with or without endothelium, but not on resistance mesenteric artery isolated from Sham and CLP rats. The low contractile response induced by PE on CLP aortas was enhanced by NPR-B antagonist, and by NOS, xanthine oxidase or extracellular matrix metalloproteinases (MMPs) inhibition on aortas with endothelium. The negative modulation induced by CNP over the PE contraction was reversed by the presence of NPR-B antagonist, NOS inhibition, and by the decrease on O2- availability and H2O2 degradation in both groups. Furthermore, oxidative stress and H2O2 intracellular content were greater on vascular smooth muscle of CLP rats. Protein expression of endogenous CNP was lower on endothelium and greater on smooth muscle of aortas isolated from CLP compared to Sham rats. However, the protein expression of 1-adrenoceptor and NPR-B were not different between the groups, but the protein expression of NPR-C was lower on smooth muscle of CLP aortas. Intracellular calcium mobilization was decreased on vascular smooth muscle of CLP aortas and extracellular high potassium solution was not able to depolarize smooth muscle layer of CLP aortas. Protein expression of NPR-B and NPR-C were not different on CLP hearts. However, membrane potential of left ventricle (LV) of CLP was lower than in Sham rats. Besides, intracellular calcium content of LV of CLP was lower than Sham rats but the decrease on cytosolic calcium induced by CNP was greater on LV of CLP compared to the Sham rats. There was cardiac dysfunction on CLP rats. In rat CLP septic shock model, the role of natriuretic peptide, mainly CNP, is of great importance in the decreased 1-adrenoceptor contraction, representing a potential via of intervention on severe sepsis and septic shock.

A O-glicosilação com N-acetil-glucosamina (O-GlcNAc) é uma modificação pós-translacional altamente dinâmica que modula diversas vias de sinalização. O processo de O-GlcNAc é controlado por duas enzimas: a enzima OGT é responsável por catalisar a adição de N-acetil-glucosamina no grupo hidroxila dos resíduos de serina e treonina, enquanto a OGA catalisa a remoção de O-GlcNAc das proteínas modificadas. Proteínas com importante papel na função vascular são alvo de O-GlcNAc e o aumento da expressão de proteínas modificadas por O-GlcNAc promove aumento da reatividade vascular para estímulos contráteis. Um dos mecanismos de extrema importância no controle do tônus vascular está ligado à regulação da concentração de cálcio (Ca2+) intracelular, onde destacamos a participação do sistema STIM1/Orai1. As moléculas de interação estromal (STIM) atuam como sensores dos estoques intracelulares de Ca2+ e as proteínas Orai representam as subunidades que formam os canais de Ca2+ ativados pela liberação de Ca2+ (CRAC). Neste estudo investigamos a hipótese de que o aumento dos níveis vasculares de proteínas glicosiladas aumenta a resposta contrátil em aorta de ratos, por mecanismos relacionados ao controle da concentração intracelular de Ca2+.Em nossos experimentos, utilizamos aortas torácicas de ratos incubadas com PugNAc (inibidor seletivo da OGA, ), por 24h. Utilizando protocolo experimental que permite avaliar contrações induzidas pelo influxo de Ca2+ e liberação de Ca2+ intracelular, demonstramos que a incubação com PugNAc aumentou a resposta contrátil à PE bem como a contração durante o período de influxo de Ca2+, induzida pela reintrodução de solução fisiológica contendo Ca2+ (1,56 mM). O bloqueio dos canais CRAC com 2-APB (100 ) e gadolíneo (Gd3+, 100 ) diminuiu significativamente as contrações induzidas pelo influxo de Ca2+ em aortas incubadas com PugNAc. Além disso, estas aortas apresentaram aumento da expressão protéica de STIM1, o que resultaria em maior influxo de Ca2+. A contração induzida por cafeína (20 mM) e serotonina (10 ), a qual reflete a capacidade funcional do retículo sarcoplasmático (RS) em captar Ca2+, foi maior em aortas incubadas com PugNAc. O papel da Ca2+-ATPase (SERCA) foi avaliado com a utilização de tapsigargina, bloqueador da SERCA. O efeito da tapsigargina foi semelhante em artérias incubadas com PugNAc e veículo, apesar do aumento de expressão proteica da SERCA em aortas incubadas com PugNAc. Como a proteína cinase C (PKC) é ativada por aumentos de Ca2+ intracelular, determinamos se a atividade de proteínas alvo da PKC estavam aumentadas. A incubação com PugNAc aumentou a expressão das formas fosforiladas da CPI-17, MYPT-1 e MLC. Em conjunto, estes resultados sugerem que a ativação de STIM1/Orai1, aumento da liberação de Ca2+ intracelular e ativação da via de sinalização da PKC podem representar mecanismos que modulam as alterações vasculares em resposta ao aumento de proteínas glicosiladas por O-GlcNAc. Glycosylation with O-linked -N-acetyl-glucosamine (O-GlcNAc) is a highly dynamic post-translational modification. The process of O-GlcNAc is controlled by two enzymes: the OGT enzyme catalyses the addition of N-acetyl-glucosamine to the hydroxyl group of serine and threonine residues of a target protein, while OGA catalyzes the cleavage of O-GlcNAc from post-translationally-modified proteins. Proteins with an important role in vascular function are targets of O-GlcNAc and increased levels of proteins modified by O-GlcNAc increase vascular reactivity to contractile stimuli. The regulation of intracellular calcium (Ca2+) concentration, including the activation of STIM1/Orai1, is key in the control of vascular tone. The stromal interaction molecules (STIM) act as sensors of intracellular Ca2+ stores whereas the Orai proteins represent subunits of the Ca2+ release-activated Ca2+ channels (CRAC). We hypothesized that increased levels of vascular O-GlcNAc proteins augment vascular contractile responses by altering mechanisms that regulate the intracellular Ca2+. Rat thoracic aortas were incubated with PugNAc (OGA selective inhibitor, ) for 24h. Using an experimental protocol that evaluates contractions induced by Ca2+ influx and release, we demonstrated that incubation with PugNAc increases contractile responses to phenylephrine (PE) as well as the contraction induced by Ca2+ influx, after depletion of intracellular Ca2+ stores. The CRAC channel blockers, 2-APB (100 ) and gadolinium (Gd3+, 100 ), significantly reduced the contractions induced by Ca2+ influx in aortas incubated with PugNAc. Furthermore, these aortas showed increased STIM1 protein expression, which could result in increased influx of Ca2+ and, in turn, increase vascular contraction. The contraction induced by the release of intracellular Ca2+ stores, stimulated by caffeine (20 mM) and serotonin (10 ), was increased in aortas incubated with PugNAc. The Ca2+-ATPase (SERCA) inhibitor thapsigargin produced similar effects in arteries incubated with PugNAc or vehicle, despite the increased SERCA protein expression in aortas incubated with PugNAc. Since PKC is activated by increases in intracellular Ca2+ and arteries incubated with PugNAc show activation of PKC, we determined whether the activity of proteins that are targets of PKC was increased in PugNAc-treated aortas. Incubation with PugNAc increased the expression of phosphorylated forms of CPI-17, MYPT-1 and MLC. Together, these results suggest that activation of STIM1/Orai1, increased release of intracellular Ca2+ and PKC activation may represent mechanisms that modulate vascular responses upon increased O-GlcNAc proteins.

A hipertensão arterial é uma condição clínica grave acompanhada por alterações estruturais do aparelho cardiovascular. Os antagonistas dos receptores 1-adrenérgicos são drogas usadas na terapêutica anti-hipertensiva. O nebivolol é um antagonista seletivo dos receptores 1 de terceira geração, que estimula a liberação endotelial de NO e diminui a ativação da -nicotinamida adenosina dinucleotído fosfato (NAD(P)H) oxidase. O metoprolol é um antagonista seletivo dos receptores 1de segunda geração, que não apresenta efeitos vasodilatadores. As metaloproteinases da matriz (MMPs), principalmente a MMP-2, são enzimas que participam ativamente do processo de remodelamento vascular. Elas passam de seu estado latente para seu estado ativo pela ação de proteases e espécies reativas de oxigênio (EROs). Como na hipertensão há aumento de EROs, de MMPs e remodelamento vascular, é possível que o nebivolol impeça o aumento dos níveis de MMPs vasculares e o remodelamento vascular hipertrófico associados à hipertensão, além do seu efeito de antagonismo do receptor 1. Primeiro, realizamos uma avaliação das alterações aórticas da hipertensão 2-rins,1-clipe (2R-1C), pois há poucas informações sobre essas alterações durante o desenvolvimento da hipertensão. Para isso, ratos hipertensos e controles foram estudados com 2, 4, 6 e 10 semanas após a indução da hipertensão. A pressão arterial sistólica foi monitorada semanalmente. As alterações na parede aórtica foram estudadas em hematoxilina/eosina (H&E), picrosirius e orceína. Foram avaliados também a atividade da NAD(P)H oxidase, a produção de ânion superóxido, a atividade gelatinolítica por zimografia in situ; os níveis e localização de MMP-2, MMP-14 e TIMP-2 por imunofluorescência zimografia e imunohistoquímica. No segundo protocolo, após 6 semanas de hipertensão foi iniciado o tratamento com metoprolol (Meto -20/mg/kg/dia) ou nebivolol (Nebi -10mg/kg/dia), realizado durante 4 semanas. Foram avaliados a pressão arterial sistólica, as alterações na parede aórtica por H&E, a atividade da NAD(P)H oxidase, produção de ânion superóxido, a atividade gelatinolítica, os níveis e localização de MMP-2 por imunofluorescência e zimografia em gel, e os níveis de nitrotirosina por imunohistoquímica. Observamos no protocolo temporal que a pressão foi gradualmente aumentada nos animais hipertensos quando comparado aos controles. Houve hiperplasia e hipertrofia da aorta, com aumento da deposição de colágeno e elastina. Observamos aumento nos níveis de estresse oxidativo, MMPs e atividade gelatinolítica em todas as semanas de estudo. Ao final do tratamento com metoprolol e nebivolol, observamos que a pressão diminuiu nos animais hipertensos, e que essa redução da pressão ocorreu de modo semelhante com os diferentes tratamentos. Os animais hipertensos apresentaram hipertrofia da aorta, aumento nos níveis de EROs, de MMP-2 e da atividade gelatinolítica. Essas alterações foram revertidas apenas pelo tratamento com nebivolol, mas não pelo metoprolol. Assim, o remodelamento da hipertensão 2R-1C parece estar estabelecido com duas semanas de hipertensão arterial, com elevados níveis de espécies reativas de oxigênio e MMPs, e o tratamento com nebivolol, mas não o metoprolol, atenuou o estresse oxidativo e o remodelamento vascular associado à hipertensão. Hypertension is a serious clinical condition with structural changes in the cardiovascular system. Beta-adrenoreceptor antagonists are used in hypertension therapy. Nebivolol is a third-generation selective 1-adrenoreceptor antagonist that stimulates endothelial cell NO production and prevents vascular NAD(P)H oxidase activation. Metoprolol is a second-generation selective 1-adrenoreceptor antagonist, without vasodilatory effect. The matrix metalloproteinases (MMPs), especially MMP-2, participate actively in the vascular remodeling process, and are activated by reactive oxygen species (ROS). There are increases in ROS, of MMPs, and vascular remodeling in hypertension. Because of these, it´s possible that nebivolol prevent MMP increases and vascular remodeling associated with hypertension beyond its 1-receptorblocking properties. First, structural aortic changes in the development of two-kidney, one-clip hypertension (2K-1C) were evaluated. Sham or 2K1C hypertensive rats were studied after 2, 4, 6, and 10 weeks of hypertension. Systolic blood pressure (SBP) was monitored weekly. Morphometry of structural changes in the aortic wall was studied in hematoxylin/eosin, orcein and picrosirius red sections. Aortic NAD(P)H activity and superoxide production was evaluated. Aortic gelatinolytic activity was determined by in situ zymography, and MMP-2, MMP-14, and tissue inhibitor of MMPs (TIMP)-2 levels were determined by gelatin zymography, immunofluorescence and immunohistochemistry. Six weeks after surgery, hypertensive and sham rats were treated with metoprolol (20 mg/kg/ day) or nebivolol (10 mg/kg/day), for four weeks, in the second-protocol. Systolic blood pressure (SBP) was monitored weekly Aortic structural were studied in hematoxylin/eosin sections. NAD(P)H oxidase activity and ROS and nitrotyrosine production were evaluated. MMPs levels and activity were determined by zymography and in situ zymography. In the temporal study, 2K-1C hypertension was associated with increased aortic collagen and elastin content in the early phase of hypertension, which was associated with vascular hypertrophy, increased vascular MMPs levels, and increased gelatinolytic activity, possibly as a result of increased vascular NAD(P)H oxidase activity and oxidative stress. In the second-protocol, similar reductions in SBP were found with both metoprolol and nebivolol treatments. However, only Nebi reversed aortic hypertrophy, the increases in aortic NAD(P)H oxidase activity, in aortic ROS levels, in nitrotyrosine staining, in aortic MMP-2 levels and in aortic MMP activity. These results indicate that vascular remodeling of renovascular hypertension is an early process associated with increases in MMPs activities, enhanced matrix deposition and oxidative stress, and that treatment with Nebi attenuate the oxidative stress and the vascular remodeling associated with 2K-1C hypertension.

Tem sido sugerido que um adequado reparo ósseo pode ser obtido por biomateriais híbridos, produzidos pela combinação de células e materiais substitutos ósseos macroporosos. O objetivo geral do presente estudo foi avaliar a aplicação do biomaterial híbrido formado pelo arcabouço de PLGA/CaP e células-tronco mesenquimais e osteoblastos derivados de medula óssea na engenharia de tecido ósseo. Para verificar qual o tamanho de poro deste arcabouço é mais adequado para este fim, foram realizados experimentos in vitro, que avaliaram a proliferação celular, atividade de fosfatase alcalina (ALP) e expressão quantitativa de genes marcadores do fenótipo osteoblástico em células cultivadas sobre os arcabouços; e in vivo, que avaliaram a formação óssea após implantação do arcabouço em defeitos ósseos críticos de calvária de ratos. Também foi avaliado o efeito do tamanho dos poros sobre o carreamento celular através da força centrifuga. Para avaliar o efeito do soro fetal bovino, utilizado na suplementação do meio de cultura celular, na resposta tecidual in vivo, arcabouços expostos ao soro foram implantados em defeitos ósseos críticos de calvária de ratos. O efeito da retirada do soro fetal bovino do meio de cultura sobre osteoblastos foi analisado através da proliferação celular, atividade de ALP, conteúdo de proteína total e mineralização. Para avaliar o efeito do estágio de diferenciação celular sobre a formação óssea, células em diferentes estágios de diferenciação osteoblástica associadas ao arcabouço de PLGA/CaP foram implantadas de forma autóloga em defeitos ósseos críticos de calvária de ratos. Arcabouços com tamanhos de poros de aproximadamente 1000 µm promovem maior diferenciação osteoblástica e melhor carreamento celular, enquanto arcabouços com poros de aproximadamente 500 µm promovem maior formação óssea e vascular in vivo. O soro fetal bovino influenciou negativamente a resposta tecidual e a formação óssea. A retirada do soro fetal bovino do meio de cultura reduziu a proliferação celular e a atividade de ALP sem afetar o conteúdo de proteína total e a formação de matriz mineralizada. Células-tronco mesenquimais indiferenciadas e em fase inicial de diferenciação osteoblástica (7 dias) promoveram maior formação óssea, portanto permitiriam a obtenção de um biomaterial híbrido com maior potencial osteogênico. It has been suggested that an adequate bone repair can be obtained by hybrid biomaterials, produced by combining osteoprogenitor cells and macroporous bone substitutes. The aim of this study was to evaluate the application of hybrid biomaterial formed by PLGA/CaP scaffold and bone marrow-derived mesenchymal stem cells and osteoblasts in bone tissue engineering. The effect of scaffold pore size was evaluated in vitro assessing cell growth, alkaline phosphatase (ALP) activity, and quantitative gene expression of osteoblastic phenotype markers in osteoblasts cultured on scaffolds; and in vivo assesseing bone formation after implantation of scaffolds in critical size rat calvaria defects. It was also evaluated the effect of pore size on cell seeding by centrifugal force. To evaluate the effect of fetal calf serum used to supplement the cell culture medium on in vivo tissue response, scaffolds exposed to serum were implanted in critical size rat calvaria defects. The effect of withdrawal of fetal calf serum in the culture medium on osteoblasts was analyzed by cell growth, ALP activity, total protein content and mineralization. To evaluate the effect of cell differentiation stage on bone repair, cells either undifferentiated or in different stages of osteoblast differentiation associated with the PLGA/CaP were implanted autologously in critical size rat calvaria. Scaffolds with pore sizes of around 1000 µm would favor the osteoblast differentiation and display a better cell seeding, while the scaffolds with pore sizes of around 500 µm would favor increased bone and vascular formation. The fetal calf serum influenced negatively the in vivo tissue response and bone formation. The withdrawal of fetal calf serum in the culture medium reduced cell growth and ALP activity without affecting the total protein content and the formation of mineralized matrix Mesenchymal stem cells and osteoblats at the early stage of differentiation (7 days) promoted greater bone formation, therefore they would allow the obtention of a hybrid biomaterial with higher osteogenic potential.