Search

A proteção contra a reinfecção por espécies de Leishmania spp. indica a possibilidade do desenvolvimento de uma vacina profilática contra as leishmanioses. O avanço das ferramentas biotecnológicas vem se mostrando como uma boa perspectiva para o desenvolvimento de novos produtos. Neste trabalho, três proteínas: proteína contendo repetições de tetratricopeptídeo ricos em glutamina (SGT), uma proteína hipotética (LiHyS) e prohibitina (PHB), que foram identificadas em um estudo anterior pela técnica de imunoproteômica, na sua forma recombinante, foram utilizadas como marcador sorológico para as leishmanioses. A imunogenicidade das proteínas foi também avaliada nas suas formas recombinantes isoladas ou em associação, além de uma quimera proteica composta pelos principais epitopos de células T das moléculas. Todos associados com saponina como adjuvante e administradas em camundongos BALB/c. A eficácia vacinal foi avaliada contra a infecção desafio com L. infantum. Os resultados mostraram que os animais vacinados com as proteínas apresentaram uma produção elevada de IFN-, IL-12 e GM-CSF, aliados a uma baixa produção de IL-4 e IL-10, quando os comparados aos grupos controle. Os animais também apresentaram redução significativa na carga parasitária nos órgãos analisados. A proteção foi relacionada com uma elevada produção de IFN-, que ocorreu principalmente por meio de linfócitos T CD4+. De forma interessante, a quimera mostrou maior eficácia de proteção e imunogenicidade quando comparada ao uso das proteínas de forma isolada ou em associação. Quanto aos testes sorológicos, as proteínas recombinantes apresentaram também elevados valores de sensibilidade e especificidade para o diagnóstico da leishmaniose visceral, quando comparado ao uso do antígeno rA2 e de uma preparação antigênica de Leishmania usados como controles. Dessa forma, o presente trabalho apresenta novas proteínas e uma quimera recombinante que podem ser utilizadas como candidatos à vacina contra a leishmaniose visceral, bem como marcadores sorológicos para a detecção da doença nos hospedeiros mamíferos infectados. Protection against reinfection by Leishmania spp. species indicates the possibility of developing a prophylactic vaccine against leishmaniasis. The advancement of biotechnology tools has been showing to be a good prospect for the development of new products. In the present work, three proteins: a protein containing glutamine-rich tetratricopeptide repetitions (SGT), a hypothetical protein (LiHyS) and prohibitin (PHB), which were identified in a previous study using an immunoproteomic technique, in their recombinant form, were used as serological markers for leishmaniasis. The immunogenicity of the proteins was also evaluated in their recombinant forms isolated or in association, as well as a protein chimera composed of the major T-cell epitopes of the molecules. All associated with saponin as adjuvant and administered in BALB/c mice. Vaccine efficacy was evaluated against challenge infection with L. infantum. The results showed that the animals vaccinated with the proteins presented a high production of IFN-, IL-12 and GM-CSF, allied to a low production of IL-4 and IL-10, when compared to the control groups. Also, the animals showed a significant reduction in the parasite load in all organs analyzed. The protection was related to a high production of IFN-, which occurred mainly through CD4+ T cells. Interestingly, the chimera presented a greater protection effectiveness and immunogenicity when compared to the use of proteins alone or in combination. As for the serological tests, the recombinant proteins also presented higher sensitivity and specificity values for the diagnosis of visceral leishmaniasis when compared to controls using the rA2 antigen and an antigen preparation of Leishmania. Thus, the present work presents novel proteins and a recombinant chimera that can be used as vaccine candidates against visceral leishmaniasis, as well as serological markers for detection of the disease in infected mammalian hosts.

FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais O diagnóstico da leishmaniose visceral (LV) apresenta problemas devido à toxicidade e / ou alto custo dos medicamentos. Além disso, não existe vacina para proteger contra doenças humanas. Neste estudo, a antigenicidade e a imunogenicidade da proteína amastina foram avaliadas em cães e humanos infectados por L. infantum. Para o diagnóstico, além da proteína recombinante, 1 epítopo linear de célula B foi sintetizado e avaliado em ensaios sorológicos. Os resultados mostraram alta sensibilidade e especificidade para detectar a doença quando ambos os antígenos foram empregados contra um painel sorológico canino e humano. Em contraste, quando se utiliza rA2 e uma preparação antigênica de Leishmania solúvel, os valores de sensibilidade e especificidade mostraram-se mais baixos. Um estudo preliminar de imunogenicidade mostrou que a proteína amastina induziu alta produção de IFN-γ e baixa IL-10 em PBMC estimuladas derivadas de pacientes com VL tratados e indivíduos saudáveis, sugerindo um uso potencial dessa proteína como um imunógeno para proteger contra doenças humanas. The diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) presents problems due to the toxicity and/or high cost of drugs. In addition, no vaccine exists to protect against human disease. In this study, the antigenicity and immunogenicity of amastin protein were evaluated in L. infantum–infected dogs and humans. For the diagnosis, besides the recombinant protein, 1 linear B-cell epitope was synthetized and evaluated in serological assays. Results showed high sensitivity and specificity values to detect the disease when both antigens were employed against a canine and human serological panel. By contrast, when using rA2 and a soluble Leishmania antigenic preparation, sensitivity and specificity values proved to be lower. A preliminary immunogenicity study showed that the amastin protein induced high IFN-γ and low IL-10 production in stimulated PBMC derived from treated VL patients and healthy subjects, thus suggesting a potential use of this protein as an immunogen to protect against human disease.