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Mestrado em Biologia Aplicada O osteossarcoma é o tipo mais comum de tumor ósseo maligno de alto grau que ocorre em crianças e adolescentes, sendo caracterizado por baixa resposta aos tratamentos atuais. A diminuição da eficácia dos quimioterápicos, devida à resistência adquirida pelas células tumorais, torna necessário encontrar novos fármacos que melhorem o resultado dos tratamentos. A fisetina é um flavonóide com reconhecidas propriedades antioxidantes e antiinflamatórias e referenciada pelas suas capacidades anticancerígenas e antiinvasivas. O objetivo deste estudo consiste em avaliar o efeito citotóxico da fisetina em células MG-63, isolado e combinado com etoposido, a par da sua influência na progressão do ciclo celular. Para tal, a linha de osteossarcoma humano MG-63 foi tratada com diferentes concentrações de fisetina, etoposido e combinações ao longo de 48h. Os efeitos citotóxicos foram analisados através de três ensaios distintos: o ensaio 3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazólio (MTT), o ensaio violeta de cristal (CV) e o ensaio clonogénico. O ciclo celular foi analisado por citometria de fluxo e os níveis de expressão dos genes que regulam este ciclo foram determinados por qPCR. Os compostos isolados e combinados apresentaram um efeito negativo na proliferação celular, induziram alterações na dinâmica do ciclo celular das células MG-63 e aumentaram a percentagem de células em fase G2. Os níveis de expressão de CDK1 (p

Mestrado em Biologia Molecular e Celular O osteossarcoma é o tumor maligno mais comum do osso, afetando particularmente adolescentes e jovens adultos, sendo o sexo masculino o mais afetado. O tratamento da doença nem sempre é eficaz, mas com a ajuda da quimioterapia aliada à remoção da parte afetada, a qualidade de vida dos doentes tem vindo a melhorar, verificando-se um aumento de sobrevivência. Este projeto surge com o intuito de desenvolver uma terapia combinada que venha a diminuir a resistência a quimioterápicos, utilizando compostos frequentemente usados na quimioterapia (etoposido e doxorrubicina) e um fitocomposto (hesperetina). Foi possível investigar os efeitos citotóxicos de fitocomposto isolado e em combinação na linha celular U2OS relativamente a diversos parâmetros celulares, nomeadamente a formação de colónias, proliferação celular, bem como a genotóxicidade e citótoxicidade. A formação de colónias foi seguida através do ensaio clonogénico, a proliferação celular foi determinada através dos ensaios de violeta de cristal (CV) e brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT). O potencial genotóxico e citostático foi avaliado por ensaio de micronúcleos com bloqueio de citocinese (CBMN) e por análise citométrica do ciclo celular. Não ocorreram efeitos genotóxicos significativos, contudo a hesperetina isolada e em combinação induziu efeitos citostáticos, tal como observado por diminuição de índice de divisão nuclear (NDI) e alteração do perfil de fases do ciclo celular. Por comparação com agentes antineoplásicos, observou-se que também as combinações com hesperetina testadas não permitiram o desenvolvimento de colónias de U2OS. Estudos futuros de dano no ADN poderiam ilucidar na melhor compreensão das alterações que estes compostos provocam nesta linha celular e a comparação com outras linhas celulares também ajudaria na compreensão. Osteosarcoma is the most common malignant tumor of the bone, occurring with more frequency in adolescents and young adults, with a greater percentage being male. The treatment is not always effective, but with chemotherapy as well as the removal of the affected section the quality of life of the patients has been increasing, together with the survival rate. This project has the aim of developing a combined therapy that can decrease the resistance to chemotherapeutics, utilizing compounds frequently used in chemotherapy (etoposide and doxorubicin) and a phytocompound (hesperetin). It was possible to investigate the cytotoxic effects of phytocompound alone and in combination on the cell line U2OS on several parameters such as colony formation, cellular proliferation, cytotoxicity and genotoxicity. Colony formation was followed by clonogenic assay, cell proliferation was determined by crystal violet (CV) and 3- [4,5-dimethyl-thiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium (MTT) assays. The cytostatic and genotoxic potential was assessed by micronucleus assay with blocked cytokinesis (CBMN) and flow cytometric cell cycle analysis. There were no significant genotoxic effects, however, the hesperetin both isolated and in combination induced cytostatic effects as observed by a decrease in nuclear division index (NDI) and modification of profile phases of the cell cycle. Compared to antineoplastic agents, it was observed that also combinations containing hesperetin did not allow the development of U2OS colonies. Future studies of DNA damage could elucidate the alterations that these compounds cause in this cell line and a comparison with other cell lines would also increase the knowledge on the cytotoxicity and genotoxicity mechanisms.