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Orientador: Juliana Alves Macedo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A hipertensão arterial atinge mais de um bilhão de pessoas no mundo e é considerada um alto fator de risco para doenças cardiovasculares. Dentre os mecanismos de regulação da pressão sanguínea, destaca-se o Sistema Renina- Angiotensina-Aldosterona (SRAA), por sua atuação na elevação da pressão arterial (PA) por meio de vaso constrição e reabsorção de sódio, o que o torna o principal alvo para tratamento medicamentoso, principalmente por inibição da atividade da Enzima Conversora de Angiotensina I (ECA). Tendo sido o captopril o primeiro medicamento desenvolvido com esse mecanismo de ação, os inibidores de ECA impedem a conversão da angiotensina I em angiotensina II, interrompendo a cascata de reações do SRAA que culminariam na elevação da PA. Além do tratamento convencional, é possível encontrar, na medicina popular recomendações para o consumo de diversas plantas, in natura ou chás, para o controle da PA, sendo que diversos estudos correlacionam esta atividade anti-hipertensiva ao teor de fenólicos totais, ou mais especificamente, ao teor de flavonoides, presentes nessas plantas. O presente projeto buscou desenvolver processos para produção de extratos fenólicos de resíduos industriais de uvas tintas e de pele de amendoim; assim como avaliar o potencial dos extratos para inibição da atividade da ECA, como mecanismo de redução potencial da pressão arterial. Foram preparados seis extratos para cada amostra de resíduo, sendo três formas de extração (aquoso, etanólico com tempo de reação de 1 hora e etanólico em 5 horas), com um extrato controle e um submetido à biotransformação enzimática para cada método. Para caracterização foram utilizados os métodos de Folin-Ciocalteu, Dowd e pH diferencial, para teores de fenólicos totais, flavonoides totais e antocianinas monoméricas, respectivamente. Para a capacidade antioxidante foram utilizados os métodos DPPH, ORAC e FRAP. Para o potencial anti-hipertensivo foi utilizado o método para determinar a capacidade de inibição da ECA. Os valores de fenólicos totais nos extratos do bagaço de uva tinta variaram entre 17,6 e 54,1 mg GAE/g, enquanto que nos extratos da pele de amendoim os valores ficaram entre 81,1 e 234,6 mg GAE/g. Os melhores resultados foram encontrados para a extração alcoólica. Os extratos etanólicos em 5 horas (UTe5, UEe5, PAe5 e PEe5) foram escolhidos paras os demais testes. Os valores para a capacidade antioxidante pelo método ORAC variaram entre 607±21,2 e 1844±78,4 mg TE/g, com maiores valores para os extratos de amendoim. A inibição da ECA foi de 16,45% e 37,86% para os extratos de uva (100 ?g/mL) e de 47,52% e 39,95% para os extratos de amendoim (50 ?g/mL). A extração enzimática apresentou redução no teor de fenólicos totais e potencial antioxidante nos extratos da pele de amendoim e não apresentou alteração nesses valores nos extratos de uva tinta. Enquanto que, para o potencial de inibição da ECA, o extrato biotransformado de uva tinta apresentou valor duas vezes superior que o respectivo controle. Os resultados indicam a viabilidade de utilização desses resíduos para obtenção de compostos bioativos com capacidade antioxidante e potencial anti-hipertensivo Abstract: High Blood Pressure (HBP) reaches more than one billion people around the world, and it’s taken as a high risk factor for cardiovascular diseases. Between the mechanisms for blood pressure (BP) regulation Renin-Angiotensin-Aldosterone System (RAAS) stands up due to its action for BP elevating through blood vessel constriction and sodium reabsorption, which makes it as the main target for drug treatment, mainly by Angiotensin I Converting Enzyme (ACE) activity inhibition. Having captopril as the first developed drug for this action mechanism, ACE inhibitors prevent the conversion of angiotensin I to angiotensin II, and stop reactions cascade which would lead to a blood pressure elevation. Beyond traditional treatments, it’s possible to find, in the popular medicine, recommendation for different plants consumption in order to control BP. Many studies make correlation between this antihypertensive activity to total phenolic content, mainly flavonoids, found in those plants. This project searched to develop processes for phenolic extracts production from industrial byproducts of red grapes and peanut skin, as well as to evaluate their potential for ACE activity inhibition, as a mechanism to potential reduction of BP. It was prepared six extracts for each sample, being three extraction methods (water, ethanoic in 1h incubation time, and ethanoic in 5h incubation time), with one control extract and one enzymatic processed extract for each method. For characterization were used Folin-Ciocalteu, Dowd, and differential pH methods, for total phenolic, total flavonoid, and monomeric anthocyanins contents, respectively. For antioxidant capacity were used DPPH, ORAC, and FRAP methods. For anti-hypertensive potential was used capacity ACE inhibition determination method. Total phenolic content fluctuated between 17.6 and 54.1 mg GAE/g for the red grape extracts, and between 81.1 and 234.6 mg GAE/g for the peanut skin extracts. Better results were found for alcoholic extraction. Ethanoic extracts in 5h incubation time were chosen to continue the tests. Values found for antioxidant capacity by ORAC method were between 607±21.2 and 1844±78.4 mg TE/g, with bigger values for peanut skins extracts. Values for ACE inhibition were 16.45% and 37.86% for red grape extracts (100 ?g/mL), and 47.52% and 39.95% for peanut skin extracts (50 ?g/mL). Enzymatic treatment presented a reduction of total phenolic content and antioxidant capacity on peanut skin extracts, and didn’t show alteration for these parameters on red grape extracts. In other hand, bioprocessed red grape extract showed double capacity for ACE inhibition, compared to its control. Found results indicate it’s viable to use these byproducts for obtaining bioactive compounds with antioxidant capacity and anti-hypertensive potential Mestrado Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos Mestre em Alimentos e Nutrição CAPES 001

Orientador: Flavia Maria Netto Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O amaranto vem se destacando como uma excelente fonte alternativa ou complementar de proteínas alimentares devido à sua composição balanceada em aminoácidos essenciais. A cultura do amaranto (Amaranthus cruentus BR Alegria) vem sendo introduzida no Brasil por sua ótima qualidade nutricional, alto teor de proteínas e melhor valor biológico que a de cereais, e funcional, além de características agronômicas de adaptabilidade. Apesar de o amaranto ter sido bem caracterizado quimicamente e apresentar componentes relacionados a diferentes atividades bioquímicas com potencial fisiológico, pouco se conhece sobre seu potencial funcional. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade inibidora da enzima conversora da angiotensina (ECA) e a capacidade ligante de ácidos biliares (AB) da farinha desengordurada de amaranto e seus produtos. Farinha integral foi obtida pela moagem do grão de Amaranthus cruentus (variedade BR Alegria) e tratada com hexano para obtenção da farinha desengordura (FDA), utilizada para a produção do concentrado protéico de amaranto (CPA). Para obtenção de hidrolisados protéicos, CPA, sem e com tratamento térmico prévio (90°C/ 30 minutos), foi hidrolisado com a enzima Alcalase, até atingir 12% de grau de hidrólise (GH). As farinhas e seus produtos derivados foram caracterizados quanto à composição e perfis eletroforético e cromatográfico de suas proteínas. A digestão in vitro das proteínas também foi avaliada e o material digerido utilizado para avaliação da atividade inibidora da ECA. A farinha integral de amaranto e seus derivados apresentaram composição semelhante à encontrada na literatura. O tratamento térmico prévio do CPA não alterou o padrão de atividade das enzimas utilizadas, pois o perfil eletroforético e cromatográfico (fase reversa e exclusão molecular) mostraram-se semelhantes. Todos os hidrolisados protéicos e digeridos apresentaram capacidade de inibir a ECA in vitro. No entanto, os digeridos do CPA sem e com tratamento térmico prévio (DCPAst e DCPAtt respectivamente) apresentaram menor atividade inibidora da ECA (IC50 de 0,439 mg proteína/mL e 0,475 mg proteína/mL respectivamente) que os hidrolisados com Alcalase tanto antes (HPAst e HPAtt) como após a digestão in vitro (DHPAst e DHPAtt) que apresentaram IC50 0,118 a 0,176 mg de proteína/mL. Estes resultados sugerem que, in vivo, a ingestão da proteína de amaranto intacta pode apresentar menor atividade inibidora da ECA quando comparada à ingestão da proteína previamente hidrolisada com Alcalase. A digestão in vitro não alterou a atividade inibitória da ECA dos hidrolisados, sugerindo que os peptídeos inibidores da ECA liberados pela ação da Alcalase foram resistentes à hidrólise gastrintestinal. A capacidade ligante de ácidos biliares dos produtos de amaranto (FDA, CPA, HPAst e resíduo alcalino ¿ RA - obtido da extração do CPA) e da colestiramina (utilizada como controle positivo), foi diferente em função do ácido biliar estudado (ácidos cólico, taurocólico, glicocólico e deoxicólico). A colestiramina apresentou a maior atividade ligante para todos os AB testados, diferindo-se de todas as amostras (p

Orientadores: Tatiana de Sousa da Cunha, Fernanda Klein Marcondes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: O estresse crônico é um fator de risco para o desenvolvimento de hipertensão, aterosclerose e diabetes. O protocolo de estresse crônico moderado e imprevisível (ECMI) é um modelo animal de estresse crônico. Em estudo prévio, foi observado que o ECMI induziu resistência à insulina, dislipidemia e disfunção endotelial, em ratos. Considerando que o aumento na atividade do sistema renina-angiotensina (SRA) tem sido associado à disfunção endotelial e à resistência à insulina, o objetivo deste estudo foi investigar a participação do SRA sobre os efeitos cardiovasculares e metabólicos induzidos pelo ECMI, em ratos. Foram utilizados 62 ratos machos Sprague-Dawley, com dois meses de idade. A duração do período experimental foi de 7 semanas. No Experimento 1, os animais foram divididos em 2 grupos: controle e estresse. O ECMI foi aplicado nas semanas 3, 4 e 5 e os animais foram eutanasiados 1 e 15 dias após a aplicação do protocolo de ECMI. O ECMI aumentou a atividade sistêmica da renina e da enzima conversora de angiotensina (ECA), da ECA na aorta torácica e as concentrações plasmáticas de angiotensina II e angiotensina (1-7). Com base nestes resultados, que mostraram aumento da atividade do SRA induzido pelo ECMI, o Experimento 2 foi delineado com o objetivo de avaliar a participação da angiotensina II e do seu receptor AT1 nos efeitos desencadeados pelo ECMI sobre a captação de glicose e sobre o sistema cardiovascular. Outros animais foram divididos em 4 grupos experimentais: controle, estresse, controle losartan (antagonista do receptor AT1 - 50 mg/Kg/dia, v.o.) e estresse losartan. O ECMI induziu aumento da área sob a curva, no teste de tolerância à glicose (TTG), diminuição da resposta vasodilatadora à acetilcolina na aorta torácica in vitro e aumento da pressão arterial in vivo, em comparação com o grupo controle, sem haver diferença entre os grupos controle, controle losartan e estresse losartan. Estes resultados mostram que os efeitos do ECMI levaram ao processo de disfunção endotelial em ratos, os quais foram associados positivamente à hiperatividade do SRA, bem como foram cancelados pelo tratamento com losartan. Assim, este estudo esclarece parte dos mecanismos fisiológicos envolvidos nas alterações metabólicas e cardiovasculares decorrentes do estresse crônico, demonstrando que estas alterações são mediadas pelo receptor AT1, provavelmente pela ligação da angiotensina II ao mesmo Abstract: Chronic stress is a risk factor for the development of hypertension, atherosclerosis and diabetes. The protocol of chronic mild and unpredictable stress (CMUS) is an animal model of chronic stress. Previously, it has been shown that CMUS induced insulin resistance, dyslipidemia and endothelial dysfunction in rats. Considering that endothelial dysfunction and insulin resistance have been associated with high activity of renin-angiotensin system (RAS), the aim of this study was to investigate the involvement of RAS components on cardiovascular effects induced by CMUS in rats. Sixty two male Sprague-Dawley rats, (2 months old) were used. The experiment period was 7 weeks. In experiment 1, animals were divided into 2 groups: control and stress. The CMUS was applied on weeks 3, 4 and 5 and animals were euthanized 1 and 15 days after the CMUS. The CMUS increased systemic renin and angiotensin converting enzyme (ACE) activity, ACE activity in the thoracic aorta and plasma angiotensin II and angiotensin (1-7) concentrations. Based on these results, showing increased activity of the RAS induced by ECMI, the second experiment was designed to evaluate the involvement of angiotensin II and its AT1 receptor in the effects triggered by CMUS on glucose uptake and on cardiovascular system. Other animals were divided into 4 experimental groups: control, stress, losartan control (AT1 receptor antagonist, losartan - 50 mg /kg/day, orally) and losartan stress. The CMUS induced an increase in area under the curve in the glucose tolerance test (GTT), decreased the in vitro vasodilator response to acetylcholine in the thoracic aorta and increased blood pressure, compared to control group, without difference among control, losartan control and losartan stress group. These results show that the effects of CMUS led to endothelial dysfunction in rats, which was positively associated with hyperactivity of the RAS and was canceled by the treatment with losartan. Thus, this study explains part of the physiological mechanisms involved in cardiovascular and metabolic changes resulting from chronic stress, demonstrating that these changes are mediated by the AT1 receptor, probably by angiotensin II binding to it Mestrado Fisiologia Oral Mestre em Odontologia

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2019. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). Peptídeos bioativos são compostos que apresentam grande importância no reino animal. Uma classe de peptídeos bioativos é a dos peptídeos potencializadores de bradicinina (BPPs). Esses peptídeos serviram de base para medicamentos sintéticos, os quais possuem a propriedade de inibir a enzima conversora de angiotensina (ECA), capaz de converter angiotensina I em angiotensina II e de degradar a bradicinina (BK). A inibição de ECA aumenta o tempo de vida da BK, sendo assim usada no tratamento da hipertensão. Com o objetivo de caracterizar novos BPPs da peçonha de Bothrops sp., uma serpente capturada em expedição ao Delta do Parnaíba e de difícil classificação taxonômica por herpetólogos, foi feito um pré-fracionamento da peçonha objetivando o enriquecimento com moléculas de baixa massa molecular (

INTRODUÇÃO: A hipotensão pós-exercício (HPE) é considerada uma estratégia não farmacológica adotada para redução da pressão arterial (PA). Ademais, sabe-se que a presença de alguns polimorfismos genéticos influencia a resposta pressórica, como o I/D do gene da enzima conversora da angiotensina (ECA). Objetivo: Analisar a influência do polimorfismo I/D da ECA sobre a HPE após três diferentes intensidades de exercício em jovens normotensos e fisicamente ativos.MÉTODOS: Vinte e seis jovens saudáveis (DD = 11; ID/II = 15) realizaram uma sessão máxima de 1.600 metros, na pista de atletismo e outras três sessões experimentais (Sessão Moderada: 6% abaixo do limiar anaeróbio, Sessão Intensa: 6% acima do limiar anaeróbio e Sessão de Controle), com aferições prévias da PA, por 20 minutos e posteriores ao exercício por 60 minutos.RESULTADOS: Observou-se que o exercício moderado ocasionou HPE independentemente do grupo genotípico, sendo mais evidente para a pressão arterial sistólica nos momentos 45 minutos e 60 minutos (p ≤ 0,05). Verificou-se também que a característica gênica exerceu influência sobre a área abaixo da curva pressórica (p ≤ 0,005) sobre a pressão arterial diastólica, formada 1 hora após o exercício.CONCLUSÃO: Conclui-se que o exercício moderado ocasiona HPE em jovens normotensos e fisicamente ativos, independentemente do polimorfismo I/D no gene da ECA, sendo que esse polimorfismo exerce influência sobre a hipotensão diastólica, e os indivíduos portadores do alelo I apresentam maior decaimento da PA diastólica (PAD).

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. O bloqueio do sistema renina-angiotensina (SRA) vem sendo amplamente utilizado para tratamento da insuficiência cardíaca (Insf.C.), melhorando significativamente a morbi-mortalidade desses pacientes. Essa inibição pode ser feita com inibidores da enzima conversora de angiotensina I (iECA), bloqueadores do receptor de angiotensina II (BRA) ou inibidor direto da renina (IDR). A associação dos inibidores do SRA com intuito de bloquear o SRA mais efetivamente no tratamento da Insf.C. ainda é matéria controversa, já que efeitos adversos, como a piora da função renal são frequentes. Por essa razão, investigou-se, através da metodologia da revisão sistemática de ensaios clínicos randomizados (ECR), os efeitos do uso do bloqueio duplo do SRA, BRA combinado a iECA ou alisquireno combinado à BRA ou iECA, em pacientes com Insf.C. portadores de disfunção renal. Foi realizada busca nos seguintes bancos de dados bibliográficos: Biblioteca Cochrane CENTRAL, EMBASE, LILACS (Literatura Latino Americana em Ciências da Saúde), PubMed e Web of Science. Registos de ensaios clínicos: ICTRP (WHO International Clinical Trials Registry Platform) e NCT (Clinicaltrials.gov). Literatura cinzenta: Google Scholar, OpenGrey. Outros: Pesquisa manual de bibliografias de estudos incluídos. Foram coletadas 4.608 referências não duplicadas, destas, apenas três ECR foram selecionados para metanálise, totalizando 13.680 pacientes. Os desfechos analisados foram morte, morte cardiovascular (CV) e hospitalização por Insf.C., piora aguda da função renal, taxa de filtração glomerular estimada (TFGe), eventos adversos (piora da função renal, hipotensão e hipercalemia). A metanálise para a morte mostrou que o grupo submetido ao bloqueio duplo apresentou um hazard ratio (HR) 0,92 (0,84-1,01), porém sem significância estatística (p 0,07). Por outro lado, a metanálise demonstrou que o bloqueio duplo do SRA diminuiu significativamente a morte CV e hospitalização por Insf.C. em 11% (HR 0,89 – 0,83-0,99; p 0,0006), sem diferença entre os pacientes com e sem disfunção renal, com estudos homogêneos (I²-33%). Além disso, quando comparados com a monoterapia, os pacientes que utilizaram o bloqueio duplo apresentaram um aumento de 29% no risco para piora da função renal, 35% para hipercalemia e 28% para hipotensão. A análise da descontinuação do tratamento por efeito adverso demonstrou que a combinação terapêutica levou 3,59% dos pacientes (vs. 2,34% em monoterapia) a descontinuar por piora da função renal, 3,37% (vs.1,72% em monoterapia) por hipercalemia e, 2,56% (vs. 1,58% em monoterapia) por hipotensão. Há poucos ECR sobre o assunto, não sendo possível analisar os dados referentes à proteinúria e TFGe ≥60 mL/min/1,73m² devido a ausência de dados. A metanálise demonstrou que o bloqueio duplo do SRA diminui o risco de morte CV e hospitalização por Insf.C.. Como os eventos adversos são monitoráveis por exames de rotina e, a grande maioria dos pacientes não descontinuou o tratamento, a recomendação para uso do bloqueio duplo não deve ser formalmente contraindicada, devendo-se levar em consideração a relação de custo-benefício individual de cada paciente para sua utilização. Renin-angiotensin system (RAS) blockade has been widely used in heart failure (HF) treatment since it significantly improves the morbidity and mortality of these patients. Inhibition of RAS may be obtained by the use of angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEi), angiotensin II receptor blocker (ARB) or direct renin inhibitors (DRI). To effectively block RAS more efficiently in the treatment of patients with HF, it has been proposing the combination of two of these three classes of inhibitors. However, the use of double blockers RAS inhibitors in patients with HF is still controversial, since adverse effects such as worsening renal function are frequent. Therefore, it is critical to investigate the consequences of the use of double blocker RAS inhibitors, BRA combined with an ACEi or aliskiren in combination with BRA or an ACEi, in patients with HF that also display renal dysfunction, using the systematic review methodology. The search was performed in bibliography database: the Cochrane Library CENTRAL, EMBASE, LILACS (Literatura Latino-Americana em Ciências da Saúde), PubMed and Web of Science. Clinical trial registries: clinical trials: ICTRP (WHO International Clinical Trials Registry Platform) and NCT (Clinicaltrials.gov), Grey literature: Google Scholar, OpenGrey. Others: Handsearching of bibliographies from included studies. Of 4,608 nonduplicate records screened, three randomized trials were included for meta-analysis, totaling 13,680 patients. The outcomes analyzed were death, cardiovascular (CV) death or hospitalization, early worse renal function, estimated glomerular filtration rate (eGFR), adverse events (renal impairment, hypotension, and hyperkalemia). The meta-analysis for death showed that the patients submitted to double blocker RAS inhibitors displayed an HR of 0.92 (0.84-1.01), although this difference was not statistically significant (p 0.07). On the other hand, meta-analysis demonstrated that patients in use of double blockers RAS inhibitors showed a significantly reduced 11% of CV death or HF hospitalization (HR 0.89-0.83-0.99, p 0.0006) without difference between the groups of patients with and without renal dysfunction and homogeneous studies (I²-33%). Besides, when compared to patients treated with monotherapy, patients who used double-blockers exhibited a 29% increase in risk for renal impairment, 35% increase for hyperkalemia, and 28% increase for hypotension. The rate of discontinuation of treatment by adverse side-effect was higher in the combination therapy. Discontinuing due to renal impairment occurred in 3.59% (vs. 2.34% in monotherapy) discontinuing due to hyperkalemia was 3.37% (vs. 1.72% in monotherapy) and, was 2.56% (vs. 1.58% monotherapy) for hypotension. There are few ECRs on the subject. It was not possible to analyze data regarding proteinuria and eGFR ≥60 mL/min/1.73m² due to lack of data. This meta-analysis demonstrated that dual blockade of RAS reduces the risk of CV death and HF hospitalization. Since adverse events are monitored by daily basis exams, and a large majority of patients did not discontinue treatment, the recommendation for the use of dual blockade inhibition of RAS should not be categorically contraindicated. It is recommended to evaluate the relationship of the cost-benefit ratio of each patient.

Estudos clínicos e experimentais mostram que o sistema renina angiotensina desempenha um papel fundamental na manutenção da homeostase corporal e que a ativação da enzima conversora de angiotensina 2 (ECA2) endógena resulta em vários efeitos benéficos no sistema cardiovascular. Recentemente, um novo ativador da ECA2, chamado Aceturato de Diminazeno (DIZE), foi descrito. Neste trabalho foi avaliado as ações desse composto em parâmetros cardiovasculares e renais de ratos submetidos ao treinamento físico ou a hipertensão renovascular, bem como os mecanismo de ações na vasodilatação de anéis aórticos. Para isso, ratos Wistar foram submetidos aotreinamento físico de natação ou foram submetidos à cirurgia de 2 rins 1 clipe para induzir hipertensão renovascular. Os animais foram tratados por 4 semanas com salina, DIZE ou captopril via gavagem. Os resultados mostraram que o DIZE não interferiu na hipertrofia cardíaca fisiológica induzida pelo treinamento físico. Analisando os animais com hipertensão renovascular, foi observado que o DIZE causou uma diminuição na pressão arterial semelhante ao efeito hipotensor causado pelo captopril. Além disso, este composto também impediu o desenvolvimento de hipertrofia cardíaca, fibrose cardíaca e disfunção renal induzida pela hipertensão. A técnica de vasos isolados revelou que os efeitos vasodilatadores do DIZE são dependentes de ativação do receptor Mas e da liberação de óxido nítrico. Assim, esses dados sugerem que o DIZE desempenha um papel importante na homeostasia dos sistemas cardiovascular e renal, possivelmente por um mecanismo envolvendo Mas e óxido nítrico. Clinical and experimental studies have shown that the renin-angiotensin system plays a key role in maintaining the homeostasis and that activation of endogenous angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) results in various beneficial effects in the cardiovascular system. Recently, a new ACE2 activator, named Diminazene Aceturate (DIZE), was discovered. This present studyevaluated the actions of this compound in cardiovascular and renal parameters of rats submitted to physical training or renovascular hypertension, as well as the mechanisms of action underling the vasodilation of isolated aortic rings. For this, Wistar rats were submitted to swimming training or to 2-kidney 1-clip surgery to induce renovascular hypertension. Animals were treated for 4 weeks with saline, captopril or DIZE by gavage. The results showed that DIZE did not interfere in the cardiac physiological hypertrophy induced by physical training.DIZE caused a significant decrease in blood pressure similar to the hypotensive effect induced by captopril in hypertensive rats. In addition, this compound also prevented the development of cardiac hypertrophy, cardiac fibrosis and renal dysfunction provoked by hypertension. The isolated vessels technique revealed that the vasodilatory effects of DIZE are dependent on Mas receptor and nitric oxide release. Thus, these data suggest that DIZE plays an important role in the homeostasis of the cardiovascular and renal systems, likely by a mechanism involving Mas and nitric oxide.

INTRODUÇÃO: A hipotensão pós-exercício (HPE) é considerada uma estratégia não farmacológica adotada para redução da pressão arterial (PA). Ademais, sabe-se que a presença de alguns polimorfismos genéticos influencia a resposta pressórica, como o I/D do gene da enzima conversora da angiotensina (ECA). Objetivo: Analisar a influência do polimorfismo I/D da ECA sobre a HPE após três diferentes intensidades de exercício em jovens normotensos e fisicamente ativos.MÉTODOS: Vinte e seis jovens saudáveis (DD = 11; ID/II = 15) realizaram uma sessão máxima de 1.600 metros, na pista de atletismo e outras três sessões experimentais (Sessão Moderada: 6% abaixo do limiar anaeróbio, Sessão Intensa: 6% acima do limiar anaeróbio e Sessão de Controle), com aferições prévias da PA, por 20 minutos e posteriores ao exercício por 60 minutos.RESULTADOS: Observou-se que o exercício moderado ocasionou HPE independentemente do grupo genotípico, sendo mais evidente para a pressão arterial sistólica nos momentos 45 minutos e 60 minutos (p ≤ 0,05). Verificou-se também que a característica gênica exerceu influência sobre a área abaixo da curva pressórica (p ≤ 0,005) sobre a pressão arterial diastólica, formada 1 hora após o exercício.CONCLUSÃO: Conclui-se que o exercício moderado ocasiona HPE em jovens normotensos e fisicamente ativos, independentemente do polimorfismo I/D no gene da ECA, sendo que esse polimorfismo exerce influência sobre a hipotensão diastólica, e os indivíduos portadores do alelo I apresentam maior decaimento da PA diastólica (PAD). INTRODUCTION: The post-exercise hypotension (PEH) is considered a non-pharmacological strategy adopted for lowering blood pressure (BP). Moreover, it is known that the presence of some genetic polymorphisms, such as the I/D of the angiotensin converting enzyme (ACE) gene, can influence the blood pressure response. Objective: Analyze the influence of the ACE I/D polymorphism on PEH after three different exercise intensities in normotensive and physically active young people.METHODS: Twenty-six healthy young men (DD=11; ID/II=15) performed a maximal 1600 meters running session in a athletics track and another three experimental sessions (Moderate Session: 6% below the anaerobic threshold, Intense Session: 6% above the anaerobic threshold, and a Control Session) with previous measurements of BP for 20 minutes and after the exercise for 60 minutes.RESULTS: It was observed that moderate exercise has brought on PEH, regardless of genotype group, being more evident for systolic blood pressure at 45 minutes and 60 minutes (p≤0.05). It was also found that the genic characteristics has influence on the area under the pressure curve (p≤0.005) for the diastolic blood pressure, formed 1 hour after exercise.CONCLUSION: It is concluded that moderate exercise causes PEH in normotensive and physically active young men, regardless of I/D polymorphism in the ACE gene, that this polymorphism influences the diastolic blood pressure, and that subjects with the I allele have a greater drop in diastolic BP (DBP). INTRODUCCIÓN: La hipotensión post-ejercicio (HPE) es considerada una estrategia no farmacológica aprobada para bajar la presión arterial (PA). Además, se sabe que la presencia de determinados polimorfismos genéticos, tales como el polimorfismo I/D del gen de la enzima convertidora de angiotensina (ECA), influyen en la respuesta de la presión. Objetivo: Analizar la influencia del polimorfismo I/D del gen de la ECA en la HPE después de tres intensidades diferentes de ejercicio en los jóvenes normotensos y físicamente activos.MÉTODOS: Veintiséis jóvenes sanos (DD = 11; ID / II = 15) realizaron una sesión máxima de 1.600 metros en pista de atletismo y tres sesiones experimentales (Sesión Moderada: 6% por debajo del umbral anaeróbico, Sesión Intensa: 6% por encima del umbral anaeróbico y una Sesión de Control), con mediciones anteriores de PA durante 20 minutos y después del ejercicio, durante 60 minutos.RESULTADOS: Se observó que el ejercicio moderado ha producido HPE independientemente del grupo de genotipo, siendo más evidente para la presión arterial sistólica en 45 minutos y 60 minutos (p ≤ 0,05). También se encontró que la característica génica ejerce influencia en el área bajo la curva de presión (p ≤ 0,005) para la presión arterial diastólica, formada 1 hora después del ejercicio.CONCLUSIÓN: Se concluye que el ejercicio moderado provoca HPE en jóvenes normotensos y físicamente activos, independientemente del polimorfismo I/D del gen de la ECA, y que este polimorfismo tiene influencia en la presión arterial diastólica y los portadores del alelo I presentan mayor deterioro PA diastólica (PAD).

The post-exercise hypotension (HPE) is considered a non-pharmacological strategy adopted for the reduction of blood pressure (BP). However, some factors may influence the HPE, among them stand out the genetic mutations that are responsible for 30% of the predisposition to cardiovascular disease. In this regard, recent studies have directed attention to better understand how the presence of genetic polymorphisms, such as I / D angiotensin-converting enzyme (ACE) gene may influence the pressure response after performing the exercise. The objective of this study was to analyze the influence of the ACE ID polymorphism on PEH in different intensities as well as the possible attenuation of the reactivity of BP after a cardiovascular stress test in normotensive, young and physically active men. Voluntarily participated in the study 26 young normotensive adults, male and were grouped into two genotype groups (DD = 11, ID / II = 15). All underwent a maximal exercise session of 1.600 meters, on the athletics track, in order to estimate the anaerobic threshold and the indirect VO2max. Subsequently, randomly assigned to three experimental sessions of 20 minutes was carried out: # 1. Moderate Test at 6% below the anaerobic threshold; # 2. Intense Test at 6% above the anaerobic threshold; # 3. Control session without exercise. All sessions were composed of five times, being: 1. Previous PA measurement (rest) for 20 min; 2. Realization of the sessions; 3. Record of post-exercise BP during 60 minutes; 4. Realization of cardiovascular stressor test (CPT); 5. Measurement of PA for over 30min. The main result was that moderate exercise resulted HPE, independent of genotypic group, especially for systolic BP at 45 and 60 min (p . 0.05). This reduction persisted after CPT only for allele carrier group |I| (p . 0.05). Thus, it was concluded that moderate intensity was more effective to cause HPE and the carrier group allele |I| showed effective attenuation of pressor reactivity. A hipotensao pos-exercicio (HPE) e considerada uma estrategia nao farmacologica adotada para a reducao da pressao arterial (PA). Contudo, alguns fatores podem influenciar a HPE, entre eles destacam-se as mutacoes genicas, que sao responsaveis por 30% da predisposicao as doencas cardiovasculares. Neste sentido, estudos recentes direcionaram as atencoes para melhor compreender o quanto a presenca de polimorfismos geneticos, como o I/D do gene da enzima conversora da angiotensina (ECA), podem influenciar na resposta pressorica apos a realizacao do exercicio fisico. Assim, o objetivo do presente estudo foi analisar a influencia do polimorfismo ID da ECA sobre a HPE em diferentes intensidades, bem como a possivel atenuacao da reatividade da PA apos a realizacao de um teste de estresse cardiovascular em jovens normotensos e fisicamente ativos. Participaram voluntariamente do estudo 26 adultos jovens, normotensos, do sexo masculino, sendo agrupados em dois grupos genotipicos (DD=11, ID / II=15). Todos foram submetidos a um sessao de exercicio maxima de 1.600 metros, na pista de atletismo, com o intuito de estimar o limiar anaerobio e o VO2max indireto. Posteriormente, de forma randomizada, foram realizadas tres sessoes experimentais de 20 minutos, sendo: #1. Teste moderado a 6% abaixo do limiar anaerobio; #2. Teste intenso a 6% acima do limiar anaerobio; #3. Sessao controle sem exercicio fisico. Todas as sessoes foram compostas por cinco momentos, sendo: 1. Afericao previa da PA (repouso) durante 20min; 2. Realizacao das sessoes; 3. Afericao pos-exercicio da PA durante 60min; 4. Realizacao do teste estressor cardiovascular (CPT); 5. Afericao da PA por mais 30min. O principal resultado foi que o exercicio moderado ocasionou HPE independente do grupo genotipico, principalmente para a PA sistolica aos 45 e 60min (p.0,05). Tal reducao perdurou apos o CPT apenas no grupo carreador do alelo gI h (p.0,05). Desse modo, conclui-se que a intensidade moderada foi mais efetiva para ocasionar HPE e que o grupo carreador do alelo gI h apresentou efetiva atenuacao da reatividade pressorica.

Este estudo objetivou avaliar o papel das enzimas-conversoras de angiotensina (ECAs) na osteoartrite (OA) de joelho. Para tal, primeiramente, foi realizada a padronização do modelo de OA - induzida com monoiodoaceto de sódio (MIA) em ratos, quanto aos parâmetros inflamatórios e histopatológicos. Para induzir a OA foi feita uma única injeção intra-articular no joelho esquerdo de 2mg de MIA dissolvido em salina estéril (~50L). Os animais controles (CTL) receberam apenas uma injeção de salina. As medidas de hiperalgesia e edema de joelho foram realizadas antes e após os tempos de 6, 12, 24, 48 e 72 horas, 7, 14, 21 e 28 dias. Foram utilizados 8 animais em cada tempo de avaliação, sendo 4 animais CTL e 4 animais MIA. Nesses tempos os animais foram eutanasiados e foi realizado o lavado articular, utilizado para a verificação da cinética de migração celular e análise de citocinas. O joelho foi retirado para processamento histopatológico. O papel das ECAs foi avaliado após 28 dias de indução da OA, utilizando os seguintes tratamentos por 8 semanas (n=7 por grupo): Salina, Captopril [inibidor da ECA (iECA), 30mg/kg/dia], Losartan [bloqueador do receptor AT1, 30mg/kg/dia], Aceturato de diminazeno (DIZE) (ativador da ECA2), 1mg/kg/dia] ou [Captopril, 30mg/kg/dia + L-NAME (inibidor da óxido nítrico sintase), 15mg/kg/dia]. Os mesmos parâmetros avaliados na padronização do modelo foram utilizados nos grupos de tratamento, acrescentando a mensuração da pressão arterial média (PAM) e imunohistoquímica para IL-10 e TNF-. Os resultados da padronização mostraram que a hiperalgesia foi significativamente maior nos animais MIA em todos os tempos de medição (6h - 28 dias). A cinética de migração celular evidenciou que o pico de leucócitos ocorre no tempo de 72h, sendo o macrófago a principal célula responsável por esse pico. A diferença significativa dos macrófagos manteve-se em todos os tempos avaliados, exceto na medida de 21 dias. Já os neutrófilos tiveram o pico no tempo de 24h, sendo que nesse tempo também houve um aumento significativo no nível de IL-10. Observamos diferença estatisticamente significativa em relação ao CTL nos tempos de 12h e 24h no que se refere ao edema de joelho. Também no tempo de 12h ocorreu o pico de IL-6. A perda de proteoglicanos iniciou a partir do 7º dia, mas foi a partir do 14º dia que ela se tornou significativa ficando ainda maior nas avaliações dos dias 21 e 28 pós-indução. A avaliação do tecido de granulação presente entre o osso subcondral e a cartilagem mostrou que a alteração na celularidade inicia-se com 72 horas, mas apenas no tempo de 21 dias que se torna significativa. Não houve correlação entre o infiltrado inflamatório no osso e na cartilagem e a perda de proteoglicanos. Além disso, na avaliação das alterações morfológicas da cartilagem observou-se desorientação dos condrons, formação de clusters e atrofia de condrócitos a partir do dia 14 e de fissuras verticais e hipocelularidade a partir do dia 21. No dia 28 todas estas alterações encontram-se mais pronunciadas. Com relação à avaliação das ECAs na OA, os resultados mostraram que o Captopril e o Losartan foram capazes de reduzir de forma significativa o número de leucócitos totais e macrófagos na cavidade articular do joelho dos animais MIA. Além disso, o efeito do Captopril foi parcialmente bloqueado pelo L-NAME. Também houve aumento da área marcada para IL-10 na cartilagem dos animais controle tratados com Captopril. Por último, o iECA promoveu um pequeno efeito condroprotetor na cartilagem. Já o perfil inflamatório dos animais MIA tratados com DIZE não alterou significativamente, sendo o resultado similar ao dos animais tratados com salina. O tratamento com DIZE reduziu a intensidade de marcação de IL-10 e TNF- na cartilagem, sinóvia e osso subcondral dos animais MIA. Entretanto, o uso do ativador da ECA2 não impediu a perda de cartilagem nos animais MIA. Na avaliação histopatológica após 12 semanas de indução da OA foi visto que as alterações osteoartríticas foram muito pronunciadas, uma vez que havia grande perda de cartilagem e de proteoglicanos, com deformação do osso subcondral e presença de tecido fibrocartilaginoso na articulação. Houve uma tendência de redução da PAM nos animais MIA, mesmo quando tratados com salina. Concluindo, a inibição da ECA possui efeito anti-inflamatório na OA de joelho e um pequeno efeito condroprotetor. Esses resultados foram, possivelmente, limitados pela dose de MIA usada para induzir a OA e pelo longo tempo pós-indução da OA para o início dos tratamentos. The aim of this study was to evaluate the role of angiotensin-converting enzymes (ACEs) in osteoarthritis (OA) of the knee. Firstly, the standardization of the OA model by sodium monoiodoaceto (MIA) in rats, in relation to inflammatory and pathological parameters, was performed. Male Wistar rats (n=4 per group) were submitted to intra articular injection of 2mg (~50L) of MIA in the knee joint in order to induce OA. Control animals were injected with saline alone (~50L). Paw hyperalgesia and swelling of the knee before and after the intervals of 6, 12, 24, 48 and 72 hours and 7, 14, 21 and 28 days were evaluated. After these periods, the animals were euthanized and the knee joint lavage was performed and used to analyze the kinetics of cell migration and cytokines. Also, the knee was collected for histological analysis. The role of the ACEs was evaluated 28 days after induction of OA using the following orally treatment for 8 weeks (n=7): saline; Captopril [ACE inhibitor, 30mg/kg/day]; Losartan [AT1 receptors antagonist, 30mg/kg/day]; [Diminazene aceturate (DIZE) (ACE2 activator, 1mg/kg/day) or [Captopril, 30mg/kg/day + L-NAME (nitric oxide synthase inhibitor), 15mg/kg/day]. The parameters evaluated in the treatment groups were similar to those performed in the standardization protocol added to the measurement of mean arterial pressure (MAP) and immunohistochemistry for IL-10 and TNF-. The results of the standardization of the experimental model showed that the hyperalgesia was significantly higher in MIA animals at all times points (6 hours to 28 days). The kinetics of cell migration revealed that the leukocyte peak occurred at the time of 72 hours and the macrophage was the main cell responsible for this peak. This difference remained at all times evaluated, except to 21 days. Neutrophils peak happened at 24h and, in this time point, there was also a significant increase in the level of IL-10. It was observed that the swelling of the knee occurred at the time of 12h and 24h and the peak of IL-6 happened at the time of 12h. The loss of proteoglycans started in the 7th day, becoming more significant in the days 14, 21 and 28 post-induction. The evaluation of the granulation tissue present between the subchondral bone and cartilage showed that the change in the cellularity began at 72 hours, but only at the time of 21 days it is statistically different. No significant correlation was viewed between the inflammatory infiltrate in the bone and cartilage and the loss of proteoglycans. Furthermore, the evaluation of the morphological changes in the cartilage revealed disorientation of condrons, clustering and atrophy of chondrocytes starting at the day 14 and vertical fissures and hypocellularity starting at the day 21. On the day 28, all these changes were more pronounced. Regarding to the role of the ACEs in OA, the results showed that Captopril and Losartan were able to significantly reduce the number of total leukocytes and macrophages in the knee joint cavity of the MIA animals. Also, the effect of Captopril was partially blocked by L-NAME. There was a marked increase in the area of IL-10 labeling in the cartilage of control animals treated with Captopril. In addition, ACE inhibition led to a small chondroprotective effect in cartilage. However, the inflammatory profile of the DIZE treated MIA animals did not change significantly. Treatment with DIZE reduced the intensity staining of IL-10 and TNF- in the cartilage, subchondral bone and synovium of MIA rats. Nevertheless, the ACE2 activator did not preserve the cartilage of MIA animals. After 12 weeks of the induction of OA, the histopathological analysis showed that the osteoarthritic changes were more pronounced with great loss of cartilage and proteoglycans, deformation of the subchondral bone and presence of fibrocartilaginous tissue in the joint. There was a trend of reduction in MAP in MIA animals, even when treated with saline. In conclusion, inhibition of ACE has anti-inflammatory effects in the knee of OA rats, as well as a small chondroprotective effect. Likely, these results were limited by the dose of MIA used to induce OA and by the duration of the post-induction period before the evaluation of the parameters.

Sodium and water intake are important regulatory components of the hidromineral balance. In this context, human body regulates hidromineral imbalance through the neuro-immune-endocrine and behavioral response. Gonadal hormones are important players for the modulation of ingestive behaviors. The present study aimed to investigate the influence of male and female gonadal hormones in cerebral ECA2/ANG-(1-7)/Mas axis over the control of water sodium intake in rats. In this experiment, ovariectomized female rats were treated with estradiol benzoate (20μg/animal/day, sc; OVXE) or vehicle (sunflower oil; OVXV). Male rats underwent bilateral orchiectomy (ORQX) or sham surgery (SHAM). Guide cannulae were implanted into the right lateral ventricle for intracerebroventricular administration (icv) of drugs. We used angiotensin-converting enzyme type 2 (ACE2) activator, DIZE (diminazene of aceturate, 40 nmol / 2μl , icv ) or the antagonist of Ang-(1-7) Mas recetor, D-Ala7-ANG-(1-7) (A779, 10 nmol / 2μl, icv). The vehicle for both drugs was artificial cerebrospinal fluid (aCFS) administered in the same volume. For induction of thirst and sodium appetite, animals were subjected to hydrossaline depletion by administration of furosemide (20 mg / kg, sc) and access to distilled water and low sodium diet (corn ) for 24 hours. After microinjection of drugs, water and 0.3 M NaCl were reoffered and the ingested volume were recorded at the following 15, 30 , 60, 90 , 120, 180, 240 min and 24 h. Two-way analysis of variance was performed, followed by Bonferroni posthoc test when appropriate. The level of significance was p < 0.05. In females treated with vehicle or DIZE, sodium and water intake, as well as sodium preference index (SPI) did not differ between groups. However, OVXV ingested less water than OVXE when both were treated with A779 (p < 0.05). Twenty-four hours after reintroduction of fluids intake sodium ingestions was higher in OVXV than in OVXE when both received A779 (p

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-05T19:41:48Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_FINAL_PUBLICADA_Felipe_Neves_de_Albuquerque.pdf: 3683559 bytes, checksum: 5ffcbf50f8bf3086b5bc6ce697a1f211 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-05T19:41:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_FINAL_PUBLICADA_Felipe_Neves_de_Albuquerque.pdf: 3683559 bytes, checksum: 5ffcbf50f8bf3086b5bc6ce697a1f211 (MD5) Previous issue date: 2013-06-04 The role of angiotensin-converting enzyme polymorphisms (ACEGP) has not yet been established as predictors of clinical outcomes in Heart Failure (HF). The local genotype profile must be identified in order to discover whether the clinical impact of these genotypes is the same in the Brazilian and foreign populations. The objective was to define the frequency of ACEGP variants and its relationship with the clinical progress of HF patients with non-ischemic etiology for a population in Rio de Janeiro, using clinical outcomes, echocardiogram parameters and the Seattle Heart Failure Model (SHFM). The medical records of 111 patients monitored prospectively and retrospectively were studied through a secondary data analysis, in addition to a genetic analysis with identification of the ACEGP variant and its classification. Aged 59.5±1.3 (26-89) years old, the patients were followed for an average of 64.9±3.9 months, mainly men (60.4%) and white (51.4%), but with a high prevalence of black (36 %). The observed ACEGP distribution was: 51.4% DD, 44.1% DI and only 4.5% II. High blood Arterial Hypertension was the co- morbidity most frequently observed (70.3%). Pharmacological treatment was highly optimized: 98.2% were taking beta blockers and 89.2% were taking ACE inhibitors or losartan. There was no significant difference in clinical characteristics or medical treatment among the groups. Almost half the cohort (49.5%) presented a left ventricular ejection fraction (LVEF) of ≤35%. The final left ventricular systolic diameter (LVSD) was the only isolated echo-cardiographic variable that differed significantly among the ACEGP: 59.2±1.8 DD x 52.3±1.9 DI x 59.2±5.2 (p=0.029). When final and initial echocardiograms were compared, the variation of these variables (LVEF, LVSD and LVDD) differed significantly among the genotypes: p=0.024 for ∆EF, p=0.002 for ∆LVSD and p=0.021 for ∆LVDD. The DI genotype was associated with the best echocardiographic pattern (increased LVEF and smaller LV diameters), while DD and II presented an inverse pattern. The values derived from the SHFM (life expectancy, one-year mortality and five-years mortality) did not vary significantly among the genotypes, although a pattern was noted for DD associated with poorer estimates, intermediate DI estimates and II with the most benign values. There were no significant differences among clinical outcomes separately (deaths: p=0.552; hospitalization for HF: p=0.602 and emergency room visits for HF: p=0.119) or combined (deaths + hospitalization for HF: p=0.559). In the multivariate analysis, each copy of the D allele, was a predictor for LVSD change (p=0.023). In terms of independent predictors of death and hospitalization for HF, the following were identified: final functional class NYHA (p=0.018), final heart rate (p=0.026) and use of furosemide (p=0.041). Hence, the allele and ACEGP frequency differed from most of the international studies. The D allele was associated independently with the worst evolutive echocardiogram pattern. There were no statistically significant differences in terms of SHFM-based parameters, although genotype II seems to be associated with the best clinical profile. Finally, there were no differences in terms of the clinical outcomes among the ACEGP. O papel dos polimorfismos genéticos da ECA (PGECA) na insuficiência cardíaca (IC) como preditor de desfechos clínicos e ecocardiográficos ainda não está estabelecido. É necessário identificar o perfil genotípico local para se observar se o impacto clínico desses genótipos é igual entre populações estrangeiras e a brasileira. O objetivo deste trabalho foi determinar a frequência das variantes do PGECA e sua relação com a evolução clínica de pacientes com IC de etiologia não isquêmica de uma população do Rio de Janeiro, utilizando desfechos clínicos, ecocardiográficos e do Seattle Heart Failure Model (SHFM).Para isso, realizou-se análise secundária de prontuários de 111 pacientes, acompanhados de forma prospectiva e retrospectiva, além da análise genética com identificação da variante do PGECA e sua classificação. Os pacientes foram acompanhados em média por 64,9±3,9 meses, tinham 59,5±1,3 (26-89) anos, predomínio do sexo masculino (60,4%) e da cor da pele branca (51,4 %), mas com alta prevalência de pretos (36 %). A distribuição do PGECA observada foi: 51,4 % DD, 44,1 % DI e apenas 4,5 % II. Hipertensão arterial foi a comorbidade mais frequentemente observada (70,3 %). O tratamento farmacológico estava bastante otimizado: 98,2 % em uso de betabloqueadores e 89,2 % em uso de inibidores da ECA ou losartana. Nenhuma das características clínicas ou do tratamento medicamentoso variou entre os grupos. Cerca de metade da coorte (49,5 %) apresentou fração de ejeção de VE (FEVE) ≤35 %. O diâmetro sistólico do VE (DSVE) final foi a única variável ecocardiográfica isolada significativamente diferente entre os PGECA: 59,2±1,8 DD x 52,3±1,9 DI x 59,2±5,2 (p=0,029). Quando analisadas de maneira evolutiva, todas as variáveis (FEVE, DSVE e DDVE) diferiram de maneira significativa entre os genótipos: p=0,024 para ∆FE, p=0,002 para ∆DSVE e p=0,021 para ∆DDVE. O genótipo DI se associou ao melhor parâmetro ecocardiográfico (aumento de FEVE e diminuição de diâmetros de VE), enquanto que o DD e II apresentaram padrão inverso. Os valores derivados do SHFM (expectativa de vida, mortalidade em um ano e mortalidade em cinco anos) não variaram de forma significativa entre os genótipos, mas notou-se um padrão com o DD associado a piores estimativas, DI a estimativas intermediárias e II a valores mais benignos. Não houve diferença significativa entre desfechos clínicos isolados (óbitos: p=0,552; internação por IC: p=0,602 e PS por IC: p=0,119) ou combinados (óbitos + internação por IC: p=0,559). Na análise multivariada, o peso alelo D foi preditor independente da variação do DSVE (p=0,023). Em relação aos preditores independentes de óbito + internação por IC, foram identificados classe funcional NYHA final (p=0,018), frequência cardíaca final (p=0,026) e uso de furosemida (p=0,041). Em suma, a frequência alélia e das variantes do PGECA foram diferentes da maioria do estudos internacionais. O alelo D foi associado de forma independente à pior evolução ecocardiográfica. Não houve diferenças significativas em relação aos parâmetros derivados do SHFM, embora o genótipo II pareça estar associado com o melhor perfil clínico. Por último, não houve diferenças em relação aos desfechos clínicos entre os PGECA.

La insuficiencia cardiaca es la segunda patología en perros longevos. Se ha sugerido que la insuficiencia cardiaca puede ser vista como un modelo neurohormonal o neuroendocrino, ya que la progresión de la enfermedad se da como resultado de la sobreexpresión de moléculas activadas biológicamente que son capaces de ejercer un efecto deletéreo sobre el corazón y la circulación. Dentro de estas moléculas está el Sistema Renina Angiotensina Aldosterona y su principal péptido efector, la angiotensina II. En los últimos años, las consecuencias fisiopatológicas del sistema han sido el foco principal de atención, siendo más relevantes las vías alternativas de síntesis de la angiotensina II y la participación de otras enzimas similares a la enzima convertidora de angiotensina. Por lo tanto, esta revisión pretende describir el valor fisiopatológico del sistema renina angiotensina aldosterona sobre la Insuficiencia Cardíaca Congestiva. Heart failure is the second pathology of importance in long-lived dogs. It has been suggested that heart failure can be considered as a neurohormonal or neuroendocrine model, in which heart failure progresses as a result of over-expression of biologically active molecules that are able to exert a deleterious effect on the heart and circulation. Among these molecules is the rennin angiotensin aldosterone and its main effector peptide: the angiotensin II. In recent years, the pathophysiological consequences of the system have been the main focus of attention, being more relevant the alternative routes of angiotensin II synthesis and the participation of other enzymes such as the angiotensin converting enzyme. Therefore, this review aimed to describe the pathophysiological importance of the renin angiotensin aldosterone on Congestive Heart Failure. A insuficiência cardíaca é a segunda doença em cães longevos. Tem sido sugerido que a insuficiência cardíaca pode ser vista como um modelo neurohormonal ou neuroendócrino, já que a progressão da doença apresenta-se como um resultado da sobre-expressão de moléculas activadas biologicamente que são capazes de exercer um efeito deletério sobre o coração e a circulação. Dentre estas moléculas está o sistema renina-angiotensina-aldosterona e o seu peptídeo efetor principal, a angiotensina II. Nos últimos anos, as consequências fisiopatológicas deste sistema têm sido o foco principal de interesse, tendo maior relevância a síntese da angiotensina II e o envolvimento de outras enzimas como a enzima conversora da angiotensina. Portanto, esta revisão tem como objetivo descrever o valor fisiopatológico que tem o sistema renina-angiotensina-aldosterona sobre a insuficiência cardíaca congestiva.

Made available in DSpace on 2013-08-12T18:00:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T18:49:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T13:58:42Z No. of bitstreams: 0 Made available in DSpace on 2014-05-20T13:58:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-01 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) UCB FUNDAMENTO: O gene da enzima conversora de angiotensina (gene ECA) tem sido amplamente estudado em relação a fenótipos de aptidão cardiorrespiratória, contudo a associação do genótipo da ECA com corridas de meia-distância tem sido pouco investigada. OBJETIVO: O presente estudo investigou a possível influência da enzima conversora de angiotensina (ECA) (I/D) sobre a aptidão cardiovascular e o desempenho em corridas de meia-distância por parte de brasileiros jovens do sexo masculino. A validade da previsão de VO2max em relação ao genótipo da ECA também foi analisada. MÉTODOS: Um grupo homogêneo de homens jovens moderadamente ativos foi avaliado em um teste de corrida (V1600 m; m.min-1) e em um teste adicional em esteira ergométrica para a determinação de VO2max. Posteriormente, o [(0,177*V1600m) + 8.101] VO2max real e previsto foi comparado com os genótipos da ECA. RESULTADOS: O VO2max e V1600m registrados para os genótipos DD, ID e II foram 45,6 (1,8); 51,9 (0,8) e 54,4 (1,0) mL.kg-1.min-1 e 211,2 (8,3); 249,1 (4,3) e 258,6 (5,4 ) m.min-1, respectivamente e foram significativamente mais baixos para os genótipos DD (p < 0,05). O VO2max real e previsto não diferiram entre si, apesar do genótipo da ECA, mas o nível de concordância entre os métodos de VO2max real e estimado foi menor para o genótipo DD. CONCLUSÃO: Concluiu-se que existe uma possível associação entre o genótipo da ECA, a aptidão cardiovascular e o desempenho em corridas de média distância de jovens do sexo masculino moderadamente ativos e que a precisão da previsão do VO2max também pode ser dependente do genótipo da ECA dos participantes. Background: The angiotensin I-converting enzyme gene (ACE gene) has been broadly studied as for cardiorespiratory fitness phenotypes, but the association of the ACE genotype to middle-distance running has been poorly investigated.Objective: This study investigated the possible influence of Angiotensin-Converting Enzyme (ACE) genotype (I/D) on cardiovascular fitness and middle-distance running performance of Brazilian young males. The validity of VO2max prediction with regard to the ACE genotype was also analyzed.Methods: A homogeneous group of moderately active young males were evaluated in a 1,600 m running track test (V1600m; m.min(-1)) and in an incremental treadmill test for VO2max determination. Subsequently, the actual and the predicted [(0.177*V1600m) + 8.101] VO2max were compared to ACE genotypes.Results: The VO2max and V1600m recorded for DD, ID and II genotypes were 45.6 (1.8); 51.9 (0.8) and 54.4 (1.0) mL.kg(-1). min(-1) and 211.2 (8.3); 249.1 (4.3) and 258.6 (5.4) m.min(-1) respectively, and were significantly lower for DD carriers (p< 0.05). The actual and predicted VO2max did not differ from each other despite ACE genotype, but the agreement between actual and estimated VO2max methods was lower for the DD genotype.Conclusion: It was concluded that there is a possible association between ACE genotype, cardiovascular fitness and middle-distance running performance of moderately active young males and that the accuracy of VO2max prediction may also depend on the ACE genotype of the participants. UCB, PPGEF, BR-72030170 Aguas Claras, DF, Brazil Universidade de Brasilia (UnB), Brasilia, DF, Brazil Univ Fed Sergipe, Aracaju, SE, Brazil Univ Estadual Paulista, UNESP, São Paulo, Brazil Univ Estadual Paulista, UNESP, São Paulo, Brazil

En varios estudios la actividad de enzima convertidora de angiotensina (ECA) en suero y el polimorfismo inserción/deleción (I/D) se han relacionado con enfermedad cardiovascular. Objetivo. Relacionar la actividad de la ECA y el polimorfismo I/D del gen de la enzima en pacientes con obstrucción coronaria documentada por angiografía. Materiales y métodos. La muestra la constituyeron pacientes que asistieron a un centro de hemodinámia del Quindío, por necesidad de una angiografía coronaria. La actividad de la enzima fue medida por espectrofotometría y el genotipo I/D por medio de la reacción en cadena de la polimerasa. Resultados. 542 pacientes fueron divididos en dos grupos: individuos con obstrucción coronaria ≥50%, (OC≥50) e individuos con obstrucción coronaria menor al 50%, (OC

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Tradicionalmente, o Sistema Renina-Angiotensina (SRA) é considerado um sistema endócrino formado por reações enzimáticas que exerce um papel importante no controle da função cardiovascular. Novos componentes como, por exemplo, a Angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)], vêm sendo descobertos e adicionados a este sistema. A enzima conversora de Angiotensina (ECA) 2 é a principal enzima formadora de Ang-(1-7) e é importante na manutenção do equilíbrio do SRA. Estudos prévios demonstraram que a ativação da ECA2 endógena, usando o composto XNT, resulta em vários efeitos benéficos no sistema cardiovascular. Recentemente, foi descrito um segundo ativador da ECA2, o aceturato de diminazeno (DIZE), que possui propriedades físico-químicas mais favoráveis. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do DIZE na pressão arterial (PA) e freqüência cardíaca (FC) de ratos, além de analisar os mecanismos de ação deste composto nas alterações destes parâmetros. Também foram analisados os efeitos do DIZE nas arteríolas no leito vascular mesentérico através da técnica de Microscopia Intravital. Ratos Wistar machos (200-300g) foram submetidos a cirurgias de implantação de cânulas na artéria femoral para o registro da PA e FC e na veia femoral para injeção de doses crescentes do DIZE (0,5; 5, 10, 20 mg/kg) e de inibidores e bloqueadores do SRA. Este experimento foi realizado em ratos acordados e 24h após as cirurgias. Os resultados mostraram que o DIZE causa uma redução na PA com conseqüente aumento na FC de maneira dose-dependente. Para avaliar seus mecanismos de ação, grupos adicionais de ratos foram pré-tratados com o bloqueador do receptor Mas A-779 (10nmol/kg i.v.), com o inibidor da síntese de óxido nítrico (NO) L-NAME (10mg/kg i.v.), com o inibidor da síntese de prostaglandinas Indometacina (10mg/kg i.v.), com o inibidor da ECA Captopril (10mg/kg i.v.) ou com o bloqueador do receptor AT1 Losartan (1mg/kg i.v.) 15 minutos antes da administração do DIZE (5mg/kg). Os resultados obtidos mostraram que a utilização do A-779, L-NAME, Indometacina, Captopril e Losartan antes da injeção do DIZE não bloqueou a queda na PA e o aumento na FC. Finalmente, os resultados da Microscopia Intravital revelaram que o DIZE causa uma queda no fluxo nas arteríolas no leito vascular mesentérico sem alteração significativa no diâmetro arteriolar Assim, os resultados desse estudo indicam que o DIZE é um potente hipotensor e que este efeito é independente dos receptores Mas e AT1, da ECA, da liberação de NO e da síntese de prostaglandinas Traditionally, the Renin-Angiotensin System (RAS) is considered an endocrine system formed by enzymatic pathways and it plays an important role in the cardiovascular function. Nowadays, new components such as the heptapeptide angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] have been added to this system. Angiotensinconverting enzyme (ACE) 2 is the main Ang-(1-7)-forming enzyme and it is important to maintain the balance of the RAS. Previous studies have shown that the activation of endogenous ACE2 using the compound XNT results in several beneficial effects in the cardiovascular system. Recently, a second ACE2 activator was described, the diminazene aceturate (DIZE), which has better physical and chemical properties. Thus, the objective of this study was to evaluate the effects of DIZE on blood pressure (BP) and heart rate (HR) of rats and to analyze the mechanisms of action by which this compound changes these parameters. Also, we analyzed the effects of DIZE on arterioles from the mesenteric vascular bed using the Intravital Microscopy technique. Male Wistar rats (200-300g) underwent surgeries for implantation of cannulas into the femoral artery for recording BP and HR and into the femoral vein for the injection of increasing doses of DIZE (0.5, 5, 10, 20mg/kg) and RAS inhibitors and blockers. This experiments were performed in awake rats 24 h after the surgery. The results showed that DIZE causes a dose-dependent reduction in BP accompanied by increase in HR. In order its mechanisms of action, additional groups of rats were pre-treated with the Mas receptor antagonist A779 (10nmol/kg, i.v.), the nitric oxide (NO) synthase inhibitor L-NAME (10mg/kg, i.v.), the prostaglandins inhibitor Indomethacin (10mg/kg, i.v.), the ACE inhibitor Captopril (10mg/kg, i.v.) or the AT1 receptor antagonist Losartan (1mg/kg, i.v.) 15 min before the administration of DIZE (5mg/kg). The results showed that A779, L-NAME, Indomethacin, Captopril and Losartan do not block the effects of DIZE on BP and HR. Finally, the Intravital Microscopy results revealed that DIZE causes a decrease in blood flow of arterioles of the mesenteric vascular bed without significant changes in the arteriolar diameters. Therefore, our results indicated that DIZE is a potent hypotensive compound and this effect is independent of Mas and AT1 receptors, ACE, NO release and prostaglandin synthesis.

Introdução: Existem vários estudos que comparam doentes coronários e controlos, no sentido de determinar quais os polimorfismos que apresentam risco acrescido de doença das artérias coronárias (DC). Os seus resultados têm sido muitas vezes contraditórios, mas apresentam uma limitação suplementar: avaliam os polimorfismos um a um, quando na natureza os polimorfismos não existem isolados. Põe-se a questão se serão mais importantes associações de polimorfismos mutados no mesmo gene ou em genes diferentes. Objectivo: Com o presente trabalho pretendemos avaliar o risco da associação de polimorfismos em termos de aparecimento de DC no mesmo gene ou em genes diferentes. Metodologia: Estudámos em 298 doentes coronários e 298 controlos sãos o risco associado aos polimorfismos (genótipos considerados de risco), DD da Enzima de Converaão da Angiotensina (ECA) I/D; GG da ECA 8, MM do Angiotensinogénio (AGT) 174; TT do AGT 235; TT da Metiltetrahidrofolato Reductase (MTHFR) 677; AA da MTHFR 1298;RR da Paraoxonase1 (PON1) 192 e MM da PON1 55. Posteriormente avaliámos o risco ligado às associações no mesmo gene (DD da ECA + GG da ECA 8; MM do AGT174 + TT do AGT 235; TT da MTHFR 677 + AA da MTHFR 1298). Finalmente, nos polimorfismos que isoladamente apresentavam significância, avaliámos o risco das associações de polimorfismos a níveis funcionais diferentes (ECA + AGT; ECA + MTHFR; ECA + PON1. Finalmente através de um modelo de regressão logística fomos determinar quais as variáveis que se relacionavam de forma significativa e independente com a DC. Resultados: Os polimorfismos isolados como: ECA DD [P

Submitted by Biblioteca SESARAM (repositorio@sesaram.pt) on 2019-02-26T13:41:13Z No. of bitstreams: 1 Interação gene-gene_2009.pdf: 583050 bytes, checksum: d273cf268e7ff83a3caad865d6e83205 (MD5) Made available in DSpace on 2019-02-26T13:41:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Interação gene-gene_2009.pdf: 583050 bytes, checksum: d273cf268e7ff83a3caad865d6e83205 (MD5) Previous issue date: 2009-04 info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Inhibition of Angiotensin Converting Enzyme (ACE) is a modern therapeutic target in the treatment of hypertension. Within the enzyme cascade of the renin-angiotensin system, ACE removes histidyl-leucine from angiotensin I to form the physiologically active octapeptide angiotensin II, one of the most potent known vasoconstrictors. Therefore, a rationale for treating hypertension would be to administer drugs or natural compounds which selectively inhibit ACE. The present work constitutes a review of the literature of plants and chemically defined molecules from natural sources with in vitro anti-hypertensive potential based on the inhibition of ACE. The review refers to 321 plants, the parts utilized, type of extract and whether they are active or not. It includes also the names of 158 compounds isolated from higher plants, marine sponges and algae, fungi and snake venom. Some aspects of recent research with natural products directed to produce anti-hypertensive drugs are discussed. In this review, 148 references were cited. A inibição da Enzima Conversora da Angiotensina (ECA) é um alvo terapêutico moderno e eficaz no tratamento da hipertensão arterial. Na cascata enzimática que envolve o sistema renina-angiotensina, a ECA promove a remoção dos aminoácidos histidil-leucina da angiotensina I para formar o octapeptídio angiotensina II, a qual é fisiologicamente ativa em diversos sistemas, e considerado como um dos mais potentes vasoconstrictores endógenos conhecido. Portanto, uma racionalidade no tratamento da hipertensão seria administrar drogas ou compostos de origem natural que inibam seletivamente a ECA. O presente estudo constitui uma revisão da literatura sobre plantas e moléculas de origem natural com potencial anti-hipertensivo, baseado na inibição in vitro da ECA. A revisão referencia 321 plantas, partes usadas, tipo de extrato e se é ativo ou não. Inclui ainda o nome de 158 compostos isolados de plantas superiores, esponjas e algas marinhas, fungos e venenos de cobra. Alguns aspectos de pesquisa recente com produtos naturais direcionados à produção de drogas anti-hipertensivas também são discutidos. Nesta revisão 148 referências foram consultadas.

A alta incidência de doenças cardiovasculares e o sucesso no tratamento de pacientes infartados, através do uso de inibidores da enzima conversora da angiotensina (ECA), intensificaram os estudos que objetivaram determinar uma associação entre o gene da ECA e o infarto agudo do miocárdio (IAM). A prévia identificação de uma provável associação do polimorfismo I/D do gene da ECA ao IAM é a principal justificativa desta investigação, e visa determinar as freqüências genotípicas e alélicas deste polimorfismo na população brasileira .Tais freqüências foram obtidas de amostras aleatórias provenientes de um banco de sangue de um hemocentro estadual, apenas com a identificação da origem amostral por região. O DNA foi isolado a partir da camada de leucócitos e o polimorfismo I/D (presença e/ou ausência de uma inserção Alu no intron 16) do gene da ECA foi determinado pela reação em cadeia da polimerase. A freqüência alélica na população brasileira, em geral, foi de 0,39 e 0,61 para os alelos I e D, respectivamente, semelhante a outras populações. Contudo, houve pequena variabilidade genotípica entre as regiões brasileiras, com variações principalmente entre os homozigotos II e DD, tendo como freqüências genotípicas médias II=0.20, ID=0,43 e DD=0,37, exceto para a região Sul, que foi uma variação genotípica significativamente diferente das demais, com tendência ao aumento do genótipo DD (0,54) e diminuição do heterozigoto (0,24), provavelmente devido à diferente composição étnica. UNITERMOS: Enzima conversora da angiotensina, População Brasileira, Freqüência Alélica, Freqüência Genotípica.

Orientador: Gilberto de Nucci Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Compostos farmacológicos que liberam óxido nítrico (NO) têm sido utilizados para avaliar o amplo papel do NO na fisiopatologia e terapêutica de diversas doenças. Estudos demonstram que a deficiência de NO está envolvida com a gênese e evolução de diversos estágios de doenças como, por exemplo, a hipertensão. Deste modo, a adição de uma molécula de NO em drogas previamente estudadas vem sendo praticada por diversos pesquisadores na última década. Estes pesquisadores buscam associar as propriedades farmacológicas de cada droga com as atividades proporcionadas pelo NO exógeno. No presente trabalho, comparamos a farmacocinética e a farmacodinâmica do enalapril com as de um nitro-derivado do enalapril (NCX899), em Beagles machos não anestesiados. Os efeitos do enalapril e NCX899 na hipertensão arterial, bradicardia e vasoconstrição periférica induzida pela inibição aguda da síntese de NO em cães anestesiados também foram investigados. Na avaliação farmacocinética, os cães receberam NCX899 (4 µmol/Kg) ou Enalapril (4 µmol/Kg) pela via intravenosa. Em seguida, as concentrações plasmáticas dos analitos e metabólitos foram quantificadas pelo método de cromatografia líquida de alta eficiência, acoplada à espectrometria de massa (LCMS- MS). No grupo NCX899, a área sob a curva (ASC0-24h) foi 29,18 ± 4,72, 229,37 ± 51,32 e 5159,23 ± 514,88 µgh/l para os analitos nitro-enalapril, enalapril e enalaprilato, respectivamente. No grupo Enalapril, a ASC0-24h foi de 704,53 ± 158,86 e 4149,27 ± 847,30 µgh/l para os analitos enalapril e enalaprilato, respectivamente. As análises estatísticas entre os grupos demonstraram uma diferença significativa para o analito enalapril, mas não para o analito enalaprilato, o metabólito ativo. Entretanto, o NCX899 e o Enalapril foram efetivos de maneira semelhante na inibição da atividade da enzima conversora de angiotensina sérica. Em cães anestesiados, a administração intravenosa do inibidor da síntese de NO, o N?-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME; 0,1-10 mg/kg), elevou significativamente a pressão arterial e causou bradicardia. O composto NCX899 atenuou significativamente a hipertensão arterial, bradicardia e vasoconstrição periférica, enquanto o Enalapril não apresentou efeito significativo. Além disso, nossos estudos também demonstraram que o NCX899 pode atuar não só como anti-hipertensivo, mas também auxiliar na inibição da agregação plaquetária. Assim, concluímos que o nitro-derivado do enalapril (NCX899) apresenta uma relação farmacocinética/farmacodinâmica similar ao composto enalapril. No entanto, ao contrário do Enalapril, o NCX899 apresenta um efeito protetor nas alterações cardiovasculares induzidas pela inibição aguda de NO Abstract: Pharmacological compounds that release nitric oxide (NO) have been useful tools for evaluating the broad role of NO in physiopathology and therapeutics of several diseases. Studies show that lack of NO can cause several diseases such as hypertension. Thus, the addition of a NO molecule in drugs previously studied has been reported by some researchers in the last decade. They look for the combination of the pharmacologic properties of each drug, plus exogenous NO properties. This work has compared the pharmacokinetics and pharmacodynamics of enalapril and a NO-releasing enalapril molecule (NCX899) in conscious male Beagles. The effects of both enalapril and NCX899 in the arterial hypertension, bradycardia and peripheral vasoconstriction induced by acute NO inhibition in anesthetized dogs have also been investigated. In the pharmacokinetic evaluation, dogs received either NCX899 (4 µmol/Kg) or Enalapril (4 µmol/Kg) intravenously. Later, the plasma concentrations of the analytes and metabolites were quantified by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS-MS). In the NCX899 group, the area under time-course curve (AUC0-24h) was 29.18 ± 4.72, 229.37 ± 51.32 and 5159.23 ± 514.88 µgh/l for the nitro-enalapril, enalapril and enalaprilat analytes, respectively. In the Enalapril group, the AUC0-24h was 704.53 ± 158.86 and 4149.27 ± 847.30 µgh/l for the enalapril and enalaprilat analytes, respectively. The statistical analysis between both groups showed a significant difference for the enalapril analyte, but not for enalaprilat, the active metabolite. Moreover, NCX899 and Enalapril were equally effective on inhibiting the activity of serum angiotensin-converting enzyme. In anesthetized dogs, intravenous administration of the NO synthase (NOS) inhibitor N?-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME; 0.1-10 mg/kg) significantly elevated arterial blood pressure with concomitant bradycardia. The compound NCX899 significantly attenuated arterial hypertension, bradycardia and peripheral vasoconstriction, whereas Enalapril had no significant effect. In addition, our work showed that NCX899 also has properties of inhibiting the activity of platelets aggregation. In conclusion, our results showed that the NO-releasing derivative of enalapril NCX899 presents a pharmacokinetic / pharmacodynamic relationship similar to the enalapril compound. Moreover, different from Enalapril, NCX899 presented protective effect in the cardiovascular alterations induced by acute NOS inhibition Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Flavia Maria Netto Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Peptídeos inibidores da enzima conversora de angiotensina (ECA) presentes em alimentos têm despertado o interesse de muitos pesquisadores, pois há evidências que sua ingestão, possa auxiliar na prevenção e no tratamento não medicamentoso da hipertensão. O potencial da atividade anti-hipertensiva de peptídeos tem sido avaliado principalmente com relação à capacidade de inibir a ECA, que tem papel fundamental na regulação da pressão arterial. Desta forma, inúmeros estudos têm focado a produção e o isolamento de peptídeos com atividade inibidora da ECA a partir de proteínas de diferentes fontes alimentícias, embora ainda pouco se conhece sobre a biodisponibilidade destes peptídeos. O presente estudo teve como objetivos: avaliação da influência das enzimas do trato gastrintestinal na atividade inibitória da ECA de hidrolisados protéicos e sua correlação com a atividade anti-hipertensiva avaliada in vivo e avaliar o efeito antihipertensivo e na função renal de hidrolisados de diferentes fontes. Utilizou-se hidrolisados comerciais de diferentes fontes protéicas: caseína (Hyprol 8052), soro de leite (Hyprol 3301) e glutén de trigo (Hyprol 4137) fornecidos pela Kerry Bio-Science; caseina (CE90ACE), soro de leite (WE80BG) e soja (SE50BT), doados pela DMV International e colágenos hidrolisados de origem bovina e suína (Gelita South América). Os colágenos hidrolisados foram fracionados em sistema de ultrafiltração com membranas de cut off de 30 a 50 kDa, 5 a 8 kDa e 1 a 2 kDa, obtendo-se os permeados P1 (PM< 30-50kDa), P2 (PM< 5-8kDa) e P3 (PM< 1-2 kDa), respectivamente. Os hidrolisados foram caracterizados físico-quimicamente e em seguida analisados quanto à capacidade de inibição da ECA antes e após a digestão gastrintestinal in vitro, e atividade anti-hipertensiva em ratos espontaneamente hipertensos (SHR) por via oral. Os produtos que apresentaram as melhores atividades in vivo foram avaliados quanto à sua influência na função renal dos animais e efeito hipotensor prolongado na pressão arterial de SHR, em experimento crônico. A hidrólise gastrintestinal in vitro promoveu efeito variável sobre a atividade inibitória da ECA. Os hidrolisados de maior peso molecular, colágenos hidrolisados bovino e suíno, apresentaram aumento significativo da potência inibitória da ECA. Por outro lado, observou-se redução na capacidade de inibir a ECA dos hidrolisados com menor peso molecular, como os hidrolisados da caseína (Hyprol 8052 e CE90ACE), soro de leite (Hyprol 3301) e soja (SE50BT). Os colágenos hidrolisados bovino e suíno e suas frações, tanto antes como após a digestão gastrintestinal in vitro apresentaram menor potência inibitória da ECA que os demais hidrolisados. Todos os hidrolisados anali sados foram capazes de induzir redução significativa da pressão arterial de SHR, exceto os colágenos hidrolisados bovino (CHB) e suíno (CHS) não fracionados. Os hidrolisados do soro de leite (WE80BG), caseína (CE90ACE), fração P1 do colágeno bovino e suíno (CHBP1 e CHSP1) e a fração P3 do colágeno hidrolisado suíno (CHSP3) foram os mais eficientes em reduzir a pressão arterial de SHR. A administração oral crônica dos hidrolisados WE80BG e CHBP1 induziu uma redução progressiva e significativa da pressão arterial de SHR, sendo a diferença de 20,60 mmHg e 10 mmHg, respectivamente, em relação à pressão basal. O hidrolisado CE90ACE, que apresentou uma das melhores atividades anti-hipertensivas in vivo, induziu redução na filtração glomerular dos animais e promoveu maior excreção de sódio na porção pós-proximal do ducto renal, provavelmente devido a um efeito vasodilatador, decorrente da inibição da ECA. Ao comparar os resultados obtidos in vivo com os valores de IC50 antes e após a hidrólise gastrintestinal, não se observou relação entre a eficiência em inibir a ECA in vitro e a redução da pressão arterial in vivo dos hidrolisados protéicos comerciais. Em conclusão, as enzimas gastrintestinais exercem grande influência sobre atividade antihipertensiva dos hidrolisados protéicos comerciais, podendo aumentar ou diminuir o efeito hipotensor in vivo. Porém, a digestão gastrintestinal in vitro dos hidrolisados antes da avaliação do potencial inibidor da ECA unicamente não se mostrou vantajosa para a predição da atividade biológica dos hidrolisados, pois além da digestão gastrintestinal há outros fatores e/ou mecanismos que podem estar envolvidos com o decréscimo da pressão arterial produzido pela ação dos peptídeos Abstract: Angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory peptides present in foods have motivated the interest of many researchers, since there is evidence that the ingestion of these peptides, could aid in the prevention and in the non-medication treatment of hypertension. The anti-hypertensive activity of the peptides has been mainly assessed in relation to their capacity to inhibit the ACE, which has a fundamental role in regulating the blood pressure. In this way, innumerous studies have focused on the production and isolation of peptides with ACE-inhibitory activity from proteins from different food sources, though still little is known about the bioavailability of this peptides. The objectives of the present study were: assess the influence of the gastrointestinal enzymes on the ACEinhibitory activity of protein hydrolysates and the correlation with the anti-hypertensive activity assessed in vivo, and to assess the anti-hypertensive effect and kidney function of hydrolysates from different sources. Commercial hydrolysates from the following protein sources were used: casein (Hyprol 8052), milk whey (Hyprol 3301) and wheat gluten (Hyprol 4137), all provided by Kerry Bio-Science; casein (CE90ACE), milk whey (WE80BG) and soy (SE50BT), donated by DMV International, and hydrolysed collagens of bovine and porcine origins (Gelita South America). The hydrolysed collagens were fractionated in an ultrafiltration system using membranes with cut-offs of 30 to 50 kDa, 5 to 8 kDa and 1 to 2 kDa, obtaining the permeates P1 (PM

Orientador: Flavia Maria Netto Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Além das propriedades funcionais tecnológicas e nutricionais, algumas proteínas apresentam atividade biológica, como por exemplo: a influência no metabolismo ósseo apresentada pelas proteínas do soro do leite; atividade antimicrobiana, apresentada pela lactoferrina e a lisozima; atividade imunoestimulante desempenhada pelas imunoglobulinas, entre outras. Essas funções também podem estar associadas aos chamados peptídeos bioativos, presentes em determinadas seqüências da proteína, liberados após a hidrólise enzimática. A industrialização deste tipo de produto está dando seus primeiros passos no sentido do desenvolvimento da produção econômica e de técnicas adequadas que preservem ou concentrem a atividade. O impacto do tratamento térmico para a produção de peptídeos imunomoduladores e caseinofosfopeptídeos tem sido bem estabelecido. No caso dos peptídeos com atividade anti-hipertensiva, ainda há controvérsias sobre a necessidade da manutenção da estrutura nativa antes do tratamento enzimático. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência do tratamento térmico e enzimático na obtenção de hidrolisados derivados do isolado protéico de soro de leite com atividade anti-hipertensiva. Como matéria-prima, utilizou-se o isolado protéico de soro de leite (IPSL) Davisco¿, que foi submetido ao tratamento térmico a 65°C e 95°C, de modo a obter proteínas com dois diferentes graus de desnaturação. Os isolados protéicos nativo e desnaturados foram hidrolisados até 10% de grau de hidrólise (GH), com as enzimas Alcalase, a-quimotripsina e Proteomix. Os hidrolisados obtidos foram caracterizados e analisados quanto à capacidade de inibir a enzima conversora da angiotensina II. Estes hidrolisados foram posteriormente administrados a ratos espontaneamente hipertensos (SHR) para pesquisar a atividade anti-hipertensiva in vivo. A desnaturação parcial das proteínas do soro prévia à hidrólise enzimática, provocada pelo tratamento a 65°C, resultou em hidrolisados com melhor atividade inibitória da ACE, em comparação aos hidrolisados obtidos com a mesma enzima a partir do isolado nativo ou desnaturado a 95°C. Dentre as enzimas empregadas, a que produziu hidrolisados com melhor atividade inibitória da ACE foi a a-quimotripsina, com valores IC50 de 0,40mg/mL para os hidrolisados derivados do IPSL nativo e desnaturado a 95°C e 0,05mg/mL para o hidrolisado desnaturado a 65°C. Por outro lado, o hidrolisado obtido com Alcalase a partir do IPSL desnaturado a 65°C (65A) foi o único a induzir redução significativa da pressão arterial nos ratos SHR até 4hs após a administração por via oral, onde a diferença em relação à pressão arterial basal do grupo foi de -14,94mmHg. Os hidrolisados com melhor atividade inibitória da ACE foram administrados aos ratos SHR por via intraperitoneal. O hidrolisado 65A mostrou efeito mais intenso, observado até 6hs após a administração, onde a diferença com a pressão basal foi de -28,1mmHg. O hidrolisado de melhor atividade inibitória da ACE, 65Q, também foi eficiente na redução da pressão arterial dos ratos SHR após administração por via intraperitoneal. A redução da pressão arterial foi significativa até 4hs depois da administração, sendo a diferença de -22,9mmHg em relação à pressão basal. O hidrolisado 65A, que apresentou ação antihipertensiva mais potentes que os demais, reduziu a taxa de filtração glomerular nos ratos SHR de modo dose-dependente e provocou um aumento na reabsorção de sódio, interpretado como um mecanismo auto-regulador para conservação de fluidos e sais. Para verificar a faixa de peso molecular de maior atividade biológica do hidrolisado 65A, este hidrolisado foi ultrafiltrado em membranas de 30kDa e 3kDa, os permeatos foram analisados quanto à capacidade em inibir a ACE, observando-se que a fração de baixo peso molecular (3kDa) apresentou atividade inibitória a ACE menor do que o hidrolisado integral e do que o permeato obtido a partir da membrana de 30kDa (2,37mg/mL, 0,68mg/mL e 0,75mg/mL, respectivamente). Em conclusão, a desnaturação a 65°C do isolado protéico de soro de leite, prévia à hidrólise, promoveu o aumento da atividade inibitória da ACE. Entretanto, a maior parte destes hidrolisados, apesar de manifestar inibição satisfatória sobre a ACE, não foi eficiente em reduzir a pressão arterial dos animais, pois apenas o produto desnaturado a 65°C e hidrolisado pela Alcalase apresentou ação anti-hipertensiva significativa após a administração por via oral, sugerindo que os demais não foram resistentes Abstract: In addition to the functional and nutritional properties, some proteins present biological activity. For instance, whey proteins influence bone metabolism, lactoferrin and lysozyme present antimicrobial activity, and immunoglobulins have immunomodulating activity. these biological functions may be associated with bioactive peptides released by enzymatic hydrolysis. the industrial manufacture of these products is beginning to develop adequate technologies to preserve or improve the biological activity in an economic manner. the impact of heat treatment on the production of immunomodulators and caseinophosphopeptides has been well established. however, for antihypertensive peptides, little knowledge is available about the necessity of using proteins in their native form before the enzymatic treatment. this thesis was aimed at studying the heat and enzymatic treatments in the production of antihypertensive hydrolysates derived from milk whey protein isolate. the raw material used was the whey protein isolate (wpi) supplied by davisco¿. the wpi was heated at 65°c and 95°c to give two different denaturation degrees. the native and denatured wpi were hydrolysed by alcalase, chymotrypsin and proteomix, up to a hydrolysis degree of 10%. the hydrolysates obtained were characterized and analyzed regarding their capacity to inhibit the angiotensin-ii converting enzyme (ace). these hydrolysates were administered to spontaneously hypertensive rats (shr) to study the in vivo antihypertensive activity. The heat treatment at 65°c, before hydrolysis, improved the ace-inhibitory activity of the hydrolysates when compared to the ones obtained by the native isolate or denatured at 95°c wpi. among the enzymes tested, chymotrypsin was the most efficient in the release of ace-inhibitory hydrolysates, with ic50 of 0.40mg/ml to products derived from native and denatured wpi at 95°c, and 0.05mg/ml to the hydrolysate derived from denatured wpi at 65°c. on the other hand, the hydrolysate by alcalase derived from denatured wpi at 65°c (65a) was the only one efficient in decreasing the arterial blood pressure on shr rats up to 4 hours after oral administration; the difference to the basal blood pressure was ¿14.94mmhg. the best hydrolysate obtained by each enzyme was administrated to the rats by intraperitoneal injection. the activity of the hydrolysate 65a was confirmed by an effective decrease in the animals¿ arterial blood pressure, observed up to 6 hours after the intraperitoneal administration; the difference to the basal blood pressure was -28.1mmhg. the hydrolysate that presented the best ace-inhibitory activity also decreased significantly the animals¿ arterial blood pressure via intraperitoneal administration up to 4 hours after the administration. the difference to the basal blood pressure was -22.9mmhg. the hydrolysate 65a with higher antihypertensive activity also induced a decrease in the glomerular filtration in a dose-dependent manner. in addition, it promoted an increase in the sodium reabsorption that can be interpreted as a mechanism for the conservation of sodium and water in response to the decrease in the blood pressure. to evaluate the molecular weight zone of the hydrolysate 65a, it was ultrafiltrated through membranes having cut-off values of 30kda and 3kda. the permeates were analyzed regarding their ace-inhibitory activity. the 3kda permeate contained the lowest percentage of ace-inhibitory activity, when compared to the activity in the unfractionated hydrolysate and the 30kda permeate (2.37mg/ml, 0.68mg/ml and 0.75mg/ml, respectively). in conclusion, the heat denaturation at 65°c in wpi, before enzymatic hydrolysis by alcalase, chymotrypsin and proteomix, improved the ace-inhibitory activity. although most of these hydrolysates present satisfactory ace-inhibitory activity, these were not efficient in reducing the arterial blood pressure of the rats, because only the 65a hydrolysate was efficient when administered orally, suggesting that the others hydrolysates didn¿t resist at gastric and pancreatic attack Doutorado Nutrição Aplicada a Tecnologia de Alimentos Doutor em Alimentos e Nutrição

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Investigação dos efeitos da quercetina (30 mg/Kg v.o.) no extravasamento plasmático induzido pela substância P (10 nmol/Kg i.v.) em diversos tecidos do sistema nervoso central (cerebelo, bulbo olfatório e córtex) e dura-máter de ratos além dos efeitos da inibição da endopeptidase neutra pelo fosforamidon (2,5 µg/Kg i.v.) e da enzima conversora da angiotensina pelo captopril (10 nmol/Kg i.v.) nos mesmos tecidos. A substância P aumentou o extravasamento plasmático de modo dose relacionada na dura-máter, não alterando os outros tecidos. A inibição farmacológica seletiva da endopeptidase neutra e da enzima conversora da angiotensina com fosforamidon e captopril respectivamente aumentaram o extravasamento plasmático induzido pela substância P na dura-máter de ratos. O pré-tratamento isolado com quercetina (30mg/Kg, v.o) aumentou o extravasamento plasmático em relação ao controle em todos os tecidos quando administrada isoladamente e potencializou o extravasamento plasmático induzido pela substância P na dura-máter, tecido onde há inervação peptidérgica o que coincide com a modulação da endopeptidase neutra e da enzima conversora da angiotensina.

Em publicações anteriores tivemos oportunidade de demonstrar que indivíduos submetidos à inalação profissional de fibras de asbesto podem desenvolver uma alveolite subclínica dependente da concentração parenquimatosa deste material, expressa através do número de corpos asbestósicos/ml de expectoração e/ou de líquido de lavagem broncoalveolar (LLBA). Agora, numa amostra mais alargarda (15 indivíduos não fumadores, com uma média de idades de 57,87±7,62 anos e um tempo médio de exposição de 25,87±7,11 anos), tentamos estudar esta alveolite através da utilizaçao de alguns marcadores (doseamentos da enzima conversora da angiotensina e da neopterina, tanto no sangue como no LLBA; doseamento da hidroxiprolina na urina de 24 horas; fixação pulmonar do 67Ga). Os resultados obtidos, os quais foram analisados em função do número de corpos asbestósicos/ml de expectoração e/ou de LLBA (>1 Grupo I; 0.001), acompanhava os valores detectados no LLBA 7,66±2,53/1,86±2,18). A neopterina, genericamente elevada (8,58±5.0nmol/l), tanto no sangue como no LLBA, apresentava valores séricos particularmente altos no Grupo II (6,29±3.09nmol/l), enquanto que no LLBA eles eram praticamente sobreponíveis (2,47±0,23/2,23±1,56nmol/l). Quanto à hidroxiprolina, os respectivos níveis na urina de 24 horas nunca ultrapassaram os limites máximos da normalidade, não existindo entre os dois grupos diferenças estatisticamente significativas (13,9±6,69/11,61±4,32mg/24h/m2). A fixação pulmonar do 67Ga era normal em 63% dos casos e só em quatro indivíduos (dois de cada grupo) se mostrou alterada: um caso compatível com o grau II e três com o grau III. Face a estes resultados, e após a sua discussão, os autores concluem que os indivíduos com uma concentração parenquimatosa em fibras de asbesto que se expressa por um número de corpos asbestósicos >1/ml de expectoração e/ou de LLBA, podem desenvolver uma alveolite linfocitária com elevação das células CD4 e da relação CD4/CD8 em contraste com o sangue periférico onde o número e a relação destas células permanecem normais. As variações detectadas nos níveis séricos e alveolares da enzima conversora da angiotensina sérica e da neopterina, acompanhadas de valores normais da eliminação urinária da hidroxiprolina e do escasso número de indivíduos que fixaram o 67Ga apontam para a ausência de fibrose parenquimatosa nestas situações ou para a sua existência em quantidades muito diminutas, sem tradução clínica ou radiológica, permitindo enquadrar as perturbações celulares observadas a nível do pulmão profundo destes operários no âmbito das alveolites subclínicas.