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Introduction: The very aggressive soft tissue and bone pediatric tumor Ewing’s sarcoma (ES) is caused in most cases by the chromosomal translocation t(11;22)(q24;q12), which encodes an aberrant chimeric transcription factor (EWS-FLI1) that regulates target genes, including the critical oncogene NR0B1 (Xp21.2), via GGAA microsatellites. Objective: Our objective was to analyze the GGAA microsatellites of NR0B1 promoter region of ES patients and healthy subjects in our population. Methodology: Ten male ES patients and 71 adult healthy males from Rio Grande do Sul state, Brazil, were included in this study. Leukocyte DNA was extracted, amplified by PCR, sequenced by the Sanger method and analyzed by capillary electrophoresis. Total number of GGAA motifs, length of microsatellite in base pairs, number of segments separated by "A" insertions and greatest number of consecutive GGAA motifs were analyzed. Statistical analyses were performed in the SPSS® statistical software and p-value

BDNF/TrkB são descritos em diversas neoplasias onde iniciam sinais mitogênicos, facilitam o crescimento tumoral, previnem apoptose e regulam angiogênese e metástase. Outros fatores de crescimento também são importantes para tumorigênese, como GRP/GRPR e EGF/EGFR. O objetivo geral deste trabalho foi investigar o papel de BDNF/TrkB em câncer colorretal avaliando possíveis interações com GRPR e EGFR. Verificamos que BDNF e seu receptor, TrkB, estão presentes em amostras de pacientes com câncer colorretal esporádico, e os níveis de BDNF encontram-se mais elevados no tecido neoplásico que no tecido adjacente ao tumor. O tratamento com RC- 3095, um antagonista de GRPR, na linhagem celular de câncer colorretal humana, HT-29, causa diminuição nos níveis de NGF secretados pelas células e aumento de BDNF em relação ao controle não tratado. RC-3095 inibe a proliferação e viabilidade celular das linhagens HT-29 (EGFR positiva) e SW-620 (EGFR negativa), embora apenas em HT-29 ocorra um aumento significativo na expressão de mRNA de BDNF. Por isso, um anticorpo monoclonal anti-EGFR, cetuximabe, foi combinado a RC-3095, nas células HT-29, sendo capaz de prevenir tal aumento, sugerindo que este efeito seja mediado por EGFR. Os tratamentos com um inibidor de Trks, K252a (1000 nM) ou com cetuximabe (10 nM) também inibem a proliferação celular. Entretanto, a combinação de BDNF a cetuximabe previne este efeito, enquanto que a combinação de doses não efetivas de K252a (10 nM) à cetuximabe (1 nM) inibe a proliferação celular de HT- 29. Além disso, cetuximabe também causa aumento na expressão de mRNA de TrkB e BDNF, após 600 minutos de tratamento. Nossos resultados sugerem que a inibição da proliferação celular in vitro ou do crescimento tumoral in vivo devem acontecer através do bloqueio combinado entre GRPR e TrkB em células de câncer colorretal EGFR positivas, e que BDNF também esteja envolvido em mecanismos de resistência a fármacos. Por isso, o bloqueio de BDNF / TrkB pode emergir como potencial alvo antitumoral. BDNF / TrkB are described in various cancers where they participate in tumor growth, apoptosis, angiogenesis and metastasis. Furthermore, other growth factors are also important to tumorigenesis as GRP/GRPR and EGF/EGFR. Therefore, the aim of this study was to investigate the role of BDNF/TrkB in colorectal cancer evaluating the interactions with GRPR and EGFR. We found that BDNF and its receptor, TrkB, are present in samples from patients diagnosed with sporadic colorectal cancer, and BDNF levels were higher in tumor tissue compared to adjacent tumor tissue. Treatment with RC-3095, GRPR antagonist, in human colorectal cancer cell line, HT-29 caused a decrease in NGF levels secreted by cells, and generated increase of BDNF when compared to untreated control. RC-3095 inhibited the proliferation and cell viability in HT-29 (EGFR positive) and SW-620 (EGFR negative), but only HT-29 cells showed a significant increase in BDNF mRNA expression. Therefore, a monoclonal anti-EGFR antibody, cetuximab was combined with RC-3095 in HT-29 cells, and was able to prevent such an increase, suggesting that this effect is mediated by EGFR. The treatment with a Trk inhibitor, K252a (1000 nM) or cetuximab (10 nM), inhibited cell proliferation. However, the combination of BDNF with cetuximab prevented this effect, whereas the combination of ineffective doses of K252a (10 nM) with cetuximab (1 nM) still inhibited cell proliferation of HT-29. Furthermore, cetuximab also caused an increase in BDNF and TrkB mRNA expression, 600 minutes after treatment. In summary, our results suggest that inhibition of cell proliferation in vitro or tumor growth in vivo must occur between the combination of GRPR and TrkB in EGFR positive colorectal cancer cells, and that BDNF is also involved in drug resistance mechanisms. Therefore, blockage of BDNF / TrkB may emerge as potential antitumor target.

Muitas evidências demonstram que o peptídeo liberador de gastrina (GRP) é um fator de crescimento que afeta funções neuroendócrinas, incluindo proliferação e diferenciação celular, comportamento alimentar, formação de memória, respostas a estresses, desenvolvimento de neoplasias, desordens neurológicas e psiquiátricas. Porém, os eventos moleculares pelos quais isso ocorre ainda não são totalmente compreendidos. No presente estudo, nós avaliamos as interações entre o receptor do peptídeo liberador de gastrina (GRPR) e a via de sinalização celular da PKA, tanto na proliferação celular de glioblastoma humano (in vitro) quanto na consolidação da memória no hipocampo de ratos Wistar (in vivo). Mostramos que o GRP age em sinergismo com agentes que estimulam a via do cAMP/PKA, promovendo a proliferação de células de glioblastoma humano, pois o tratamento com GRP combinado com um ativador de adenilil ciclase (AC), forskolin, ou um análogo de cAMP, 8-Br-cAMP, ou um inibidor do tipo IV de fosfodiesterase, rolipram, aumentaram a proliferação das células de U- 138MG, quando avaliadas pelo método de MTT. Nenhum destes compostos teve efeito sozinho. O mRNA de GRPR e a expressão protéica em U-138MG foram detectados pelas técnicas de RT-PCR e imuno-histoquímica. No estudo in vivo a bombesina em baixas doses induziu um aumento na consolidação da memória. O resultado foi potencializado na combinação com um ativador do receptor de dopamina D1/D5 (D1R), além de ser prevenido quando combinado com um inibidor da via da PKA. Os resultados sugerem que GRP e GRPR interagem com a via de sinalização cAMP/PKA tanto na estimulação da proliferação celular em linhagem de câncer humano quanto na modulação da memória no hipocampo de ratos. Increasing evidence indicates that gastrin-releasing peptide (GRP) acts as an autocrine growth factor for brain tumors as well as been implicated in memory formation, however, underlying molecular events are poorly understood. In the present study, we examined interactions between the GRPR and cellular signaling pathways in influencing memory consolidation in the hippocampus and on proliferation of glioblastoma cell in vitro. We show here that GRP acts synergistically with agents that stimulate the cAMP/PKA pathway to promote proliferation of human gliobastoma cells. Treatment with GRP combined with the adenylyl cyclase (AC) activator forskolin, the cAMP analog 8-Br-cAMP, or the phosphodiesterase type IV (PDE4) inhibitor rolipram increased proliferation of U138-MG cells in vitro measured by MTT assay. None of the compounds had an effect when given alone. GRP receptor (GRPR) mRNA and protein expression in U138-MG cells was detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and immunohistochemistry. We investigated the interactions between the GRPR and the PKA pathway in male Wistar rats. BB-induced enhancement of consolidation was potentiated by co infusion of activators of the dopamine D1/D5 receptor (D1R) pathway and prevented by a PKA inhibitor. The results suggest that GRP and the GRPR interact with the cAMP/PKA signaling pathway in stimulating a cancer cell line proliferation and in memory modulation by hippocampal.

O sarcoma de Ewing (SE) é um tumor pediátrico altamente agressivo, que afeta ossos e com menor frequência tecidos moles. Acomete, principalmente, crianças, adolescentes e adultos jovens. A principal característica do SE é uma translocação cromossomal que produz o gene fusionado EWS-FLI1, o qual é encontrado em 85% dos tumores de Ewing. Uma maior compreensão da identidade e origem celular é necessária para a identificação de marcadores e alvos terapêuticos. Neurotrofinas (NTs), são proteínas secretadas pelas células as quais regulam aspectos do desenvolvimento e função neuronal e em tecidos não neurais. Inclusive esses mesmos mecanismos são utilizados por tumores. O papel da inibição de neurotrofinas em SE já foi demonstrado, porém seu mecanismo permanece pouco compreendido. A progressão tumoral e resistência à quimioterapia pode significar uma maior resistência de células-tronco tumorais. Neste trabalho nós investigamos características celulares e moleculares, participação de neurotrofinas e de células tronco em linhagens celulares de SE com pan-inibidor de neurotrofinas K252a. Assim, as células da linhagem celular SK-ES-1 foram tratadas com K252a. A expressão de EWS-FLI1 teve um aumento significativo após o tratamento. Esferas tumorais da linhagem SK-ES-1 foram cultivadas e expostas à K252a. Após 72 horas de tratamento, verificou-se uma diminuição significativa do número e tamanho das esferas. Foi observado uma diminuição significativa em Prom1 após o tratamento com K252a, entretanto OCT4 teve expressão aumentada, sendo ambos marcadores de células tronco-tumoral. Esses resultados demonstram pela primeira vez que o K252a atua em nível molecular em células com capacidade tronco-tumoral. Investigamos mecanismos moleculares de vias de sinalização associados com diminuição do crescimento celular de SE. O tratamento com K252a diminuiu níveis de pERK, mas não os níveis totais de ERK1. Esses resultados reforçam que o pan-inibidor de neurotrofinas tem um potencial como nova alternativa para terapia alvo para SE. Ewing's sarcoma (ES) is a highly aggressive pediatric tumor that affects bones and, less frequently, soft tissues. It mainly affects children, adolescents and young adults. The main feature of ES is a chromosomal translocation that produces the EWS-FLI1 fusion gene, which is found in 85% of Ewing tumors. A greater understanding of cellular identity and origin is necessary for the identification of therapeutic markers and targets. Neurotrophins (NTs) are proteins secreted by cells which regulate aspects of neuronal development and function and in non-neural tissues. Even these same mechanisms are used by tumors. The role of neurotrophin inhibition in ES has been demonstrated, but its mechanism remains poorly understood. Tumor progression and resistance to chemotherapy may increase resistance by tumor stem cells. In this work we investigated cellular and molecular characteristics, participation of neurotrophins and stem cells in ES cell lines with a pan-inhibitor of neurotrophins K252a. Thus, cells of the cell line SK-ES-1 were treated with K252a. EWS-FLI1 expression had a significant increase after treatment. Tumor spheres of the SK-ES-1 strain were cultured and exposed to K252a. After 72 hours of treatment, there was a significant decrease in the number and size of the spheres. A significant decrease in Prom1 was observed after treatment with K252a, however OCT4 had increased expression, which are both stemness markers. These results demonstrate for the first time that K252a acts at the molecular level in cells with stem-tumor capacity. We investigated molecular mechanisms of signaling pathways associated with decreased SE cell growth. K252a treatment decreased pERK levels but not total ERK1 levels. These results reinforce that the neurotrophin pan-inhibitor has a potential as a new alternative for targeted therapy for SE.

A leucemia é a neoplasia pediátrica mais comum, sendo uma doença heterogênea em que seus subtipos diferem de acordo com características celulares e moleculares, resposta à terapia e risco de recorrência, traçando assim diferentes desfechos. Estudos que investigam mecanismos biológicos envolvidos com esta neoplasia e possíveis alvos moleculares são de extrema importância para o melhor entendimento da doença, prognóstico e definição de novos tratamentos. Sabe-se que alterações nos níveis de neurotrofinas (NT), fatores de crescimento envolvidos na sobrevivência neuronal e processos de plasticidade, estão associados com o desenvolvimento de cânceres. Trabalhos recentes do nosso grupo de pesquisa demonstraram que baixos níveis do Fator Neurotrófico Derivado do Cérebro (BDNF) em Medula Óssea (MO) e Sangue Periférico (SP) estão relacionados com o pior prognóstico e doença ativa em pacientes pediátricos. Porém, os motivos que causam esse desfecho são desconhecidos. Este trabalho, portanto, objetiva caracterizar o papel das NTs em leucemia linfoide aguda (LLA) a partir de uma amostragem populacional, investigando a relação dessas proteínas com características clínicas da doença. Para isto, amostras (MO e SP) de pacientes pediátricos diagnosticados com LLA e atendidos nos serviços de Oncologia Pediátrica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA/RS) e do Hospital da Criança Conceição (GHC/RS) foram coletadas entre 2011 e 2021. Os níveis de Nerve Growth Factor (NGF), BDNF e pro-BDNF foram analisados por teste de ELISA. Além disso, a avaliação da expressão gênica de componentes da via de sinalização de NTs, como seus receptores e proteínas que clivam suas moléculas precursoras (pro-neurotrofinas - pro-NT), foi realizada com ferramentas de bioinformática. Em relação à expressão gênica, encontrou-se NGF e sortilin menos expressos em amostras tumorais quando comparados com amostras de indivíduos saudáveis. BDNF e o receptor de neurotrofina P75NTR foram encontrados superexpressos em amostras de LLA do tipo T, quando comparadas com LLA do tipo B. As enzimas de conversão de pro-NTs a NTs foram encontradas superexpressas em amostras de pacientes pediátricos com LLA. Quanto aos níveis proteicos, observou-se uma tendência de níveis menores de NTs em amostras coletadas no diagnóstico de LLA, quando comparadas com amostras de indivíduos saudáveis. Uma correlação positiva entre BDNF e pro-BDNF foi encontrada. Dessa forma, é possível afirmar que existe um desbalanço das NTs no microambiente tumoral de LLA. Poucos dados estão disponíveis na literatura para comparação e este trabalho contribui para o embasamento científico no contexto de leucemias pediátricas. Leukemia is the most common pediatric cancer. It is a heterogeneous disease in which its subtypes differ according to cellular and molecular characteristics, response to therapy and risk of recurrence, tracing different outcomes. Studies that investigate biological mechanisms and possible molecular targets in this context are extremely important for improving the understanding of the disease, the patient’s prognosis and the emergence of new treatments. Altered levels of neurotrophins (NT), a family of growth factors well known for its involvement in neuronal development, survival and plasticity, is associated with cancer’s development. A recent work by our research group has shown that low levels of Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) in Bone Marrow (BM) and Peripheral Blood (PB) are related to poor prognosis and active disease in pediatric patients. However, the reasons for this outcome are unknown. Then, the present work aims to characterize the role of NTs in acute lymphoid leukemia (ALL), investigating the relationship of these proteins with clinical features of the disease. For this purpose, samples (BM or PB) from pediatric patients diagnosed with ALL and treated at the Pediatric Oncology services of the Porto Alegre Clinical Hospital (HCPA/RS) and the Conceição Children's Hospital (GHC/RS) were collected between 2011 and 2021. The levels of Nerve Growth Factor (NGF), BDNF and pro-BDNF were analyzed by ELISA. The gene expression of NT’s signaling pathway components, such as their receptors and proteins that cleave their precursor molecules (pro-neurotrophins - pro-NTs), was performed using bioinformatics tools. NGF and sortilin were found less expressed in tumor samples when compared with health samples, while BDNF and P75NTR were found overexpressed in T-cell tumor and B-cell tumor samples, respectively. Enzyme convertases from pro-NTs to NTs were overexpressed in disease samples. Protein levels were lower in samples at diagnosis when compared to healthy individuals. A correlation between pro-BDNF and BDNF levels during disease was found. Therefore, it is possible to affirm that NTs are altered in tumor-microenvironment in childhood ALL. Further studies are required to understand their complete role in this context.

Orientador: Manoela Domingues Martins Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: Os carcinomas espinocelulares de cabeça e pescoço (CECP) constituem um dos seis tumores malignos mais comuns no mundo. A quimioterapia utilizada como terapia neoadjuvante e adjuvante à radioterapia ou cirurgia tem mostrado benefícios modestos na sobrevida relacionada ao tratamento de CECP em estágio avançado quando comparada à sua utilização no tratamento de outras formas de câncer. O Fator Neurotrófico Derivado do Cérebro (BDNF) é um fator de crescimento membro da família de neurotrofinas que foi primeiramente conhecido como responsável por sustentar o crescimento, a função e a plasticidade das células neurais. O BDNF exerce os seus efeitos ligando-se ao receptor de tirosina quinase B (TrkB). Foi relatado que o eixo BDNF / TrkB está superexpresso e associado a um mau prognóstico, crescimento tumoral, invasão e metástase; transição epitelial-mesenquimal (EMT) e resistência à quimioterapia em diferentes malignidades neurais e não neurais humanas. Os objetivos do presente estudo são revisar a literatura sobre o papel da via BDNF / TrkB em CECP e tumores glandulares e além disto, avaliar a expressão de BDNF, seu receptor (TrkB) e dois alvos dessa via, Akt e proteína ribossômica S6 (RPS6), em mucosa oral normal (MON), leucoplasia oral (LO) e carcinoma de células escamosas oral (CCEO), e correlacionar essa expressão com os desfechos dos pacientes com CCEO, senescência celular e perfil tronco. Dez casos de MON, 24 LO e 72 CCEO primários foram incluídos. Os casos de CCEO foram montados em microarranjos teciduais (TMAs). Análises imuno-histoquímicas para BDNF, TrkB, p-TrkB, p-Akt e p-RPS6 foram realizadas em todos os casos. A senescência celular e o perfil de células tronco do CCEO foram avaliados através da expressão imuno-histoquímica do p16 e BMI-1, respectivamente. As lâminas foram digitalizadas em imagens de alta resolução e a expressão imuno-histoquímica foi quantificada por meio de análise digital. Os valores de corte foram determinados para avaliar a associação de cada marcador com características clínico-patológicas. CCEO apresentou expressão aumentada da via BDNF / TrkB / Akt em relação ao MON e LO. O CCEO diagnosticado em estágios clínicos avançados apresentou uma regulação positiva do BDNF e de p-TrkB. Além disso, a superexpressão de BDNF e p-Akt foi identificada como preditora de sobrevida pobre, com razões de risco de 2,83 e 2,19, respectivamente. O aumento no perfil de células tronco foi correlacionado com uma diminuição na expressão de p-TrkB e p-Akt. Em conjunto, esses dados sugerem que a via BDNF / TrkB / Akt está envolvida na aquisição do fenótipo maligno durante a carcinogênese oral e influência o prognóstico do CCEO. Pacientes com aumento da expressão dessas proteínas foram mais propensos a experimentar menor tempo de sobrevida. Este estudo confirma que o BDNF / TrkB é um alvo terapêutico atraente para o carcinoma espinocelular oral Abstract: Head and Neck Squamous Cell Carcinomas (HNSCC) are one of the six most common malignancies in the world. Chemotherapy used as neoadjuvant therapy and adjuvant to radiotherapy or surgery has shown modest survival benefits related to the treatment of advanced HNSCC when compared to its use in the treatment of other forms of cancer. Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) is a growth factor member of the neurotrophin family that was first known to be responsible for sustaining the growth, function, and plasticity of neural cells. BDNF exerts its effects by binding to the receptor of tyrosine kinase B (TrkB). It has been reported that the BDNF / TrkB axis is overexpressed and associated with poor prognosis, tumor growth, invasion and metastasis; epithelial-mesenchymal transition (EMT) and resistance to chemotherapy in different human neural and non-neural malignancies. The aim of the present study was to review the literature on the role of the BDNF / TrkB signaling pathway in HNSCC and glandular tumors and in addition to evaluate the expression of BDNF, its receptor (TrkB) and two targets of this pathway, Akt and ribosomal protein S6 (RPS6 ), in normal oral mucosa (NOM), oral leukoplakia (OL) and oral squamous cell carcinoma (OSCC), and to correlate this expression with the clinical outcomes of the patients with OSCC, cell senescence and stem cell profile. Ten cases of NOM, 24 OL and 72 primary OSCC were included. The OSCC cases were assembled in tissue microarrays (TMAs). Immunohistochemical analyses for BDNF, TrkB, p-TrkB, p-Akt and p-RPS6 were performed in all cases. Cell senescence and OSCC stem cell profile were assessed by immunohistochemical expression of p16 and BMI-1, respectively. The slides were scanned in high resolution images and the immunohistochemical expression was quantified by means of digital analysis. Cut-off values were determined to evaluate the association of each marker with clinical-pathological characteristics. OSCC showed increased expression of the BDNF / TrkB / Akt pathway relative to NOM and OL. The OSCC diagnosed in advanced clinical stages presented a positive regulation of BDNF and p-TrkB. In addition, overexpression of BDNF and p-Akt was identified as a predictor of poor survival, with risk ratios of 2.83 and 2.19, respectively. The increase in the stem cell profile was correlated to a decrease in the expression of p-TrkB and p-Akt. Together, these data suggest that the BDNF / TrkB / Akt signaling pathway is involved in the acquisition of the malignant phenotype during oral carcinogenesis and influences the prognosis of OSCC. Patients with increased expression of these proteins were more likely to experience shorter survival times. This study confirms that BDNF / TrkB is an attractive therapeutic target for oral squamous cell carcinomas Doutorado Patologia Doutora em Estomatopatologia CAPES

O câncer infantil representa cerca de 1 a 4% das neoplasias da população em geral, com incidência maior no sexo masculino. Os tumores infantis crescem rapidamente e são mais invasivos do que as neoplasias adultas, entretanto, respondem melhor a tratamentos. A leucemia linfoide aguda (LLA) corresponde a 79% das leucemias pediátricas, que por sua vez é um terço das neoplasias infantis. Cerca de 30% das crianças não respondem ao tratamento e 50% destes vão a óbito, o que aponta a necessidade de tratamentos que elevem a taxa de cura e com menos efeitos colaterais. Os receptores do tipo Toll, do inglês, Toll-Like Receptors (TLRs), são componentes essenciais do sistema imune. Por meio do reconhecimento de estruturas moleculares conhecidas como PAMPs e DAMPs, são capazes de desencadear uma resposta dirigida a eliminar esses patógenos e desenvolver uma memória imunológica. Evidências sugerem que o funcionamento inadequado das sinalizações dos TLRs contribui significativamente para o desenvolvimento de câncer. Em leucemias, estudos vem demonstrando a relação da diferença de expressão gênica de TLRs entre pacientes e indivíduos saudáveis, com a evolução clínica e desfecho. Portanto, analisar a expressão e contribuição dos TLRs para o desenvolvimento das neoplasias hematológicas, bem como se as diferenças na sua expressão afetam o curso clínico da doença, pode revelar resultados importantes que poderão ser relacionados ao tratamento farmacológico ou até mesmo imunoterápico. O objetivo central deste trabalho foi avaliar o efeito de agonistas específicos de TLR2, TLR3 e TLR4 sobre a viabilidade e proliferação celular de linhagens celulares de LLA infantil Jurkat e Sup-B15 e avaliar a expressão de mRNA dos TLR2, TLR3 e TLR4 em células leucêmicas de pacientes pediátricos com LLA ao diagnóstico (D0) e no momento da indução (D35), correlacionando os resultados com os dados clínicos dos pacientes. Neste estudo, verificamos que o tratamento reduziu a viabilidade celular de Jurkat e Sup-B15 e alterou a distribuição do ciclo celular da linhagem Jurkat levando a uma redução de células poliploides, as quais são fortemente associadas a processos de malignidade tumoral e a um acúmulo na fase Sub-G1, o que pode ser um indicativo de morte celular por apoptose. Houve um aumento da expressão gênica destes receptores nas amostras dos pacientes entre os momentos D0 e D35. O aumento da expressão de TLR3 e TLR4 foi maior nos pacientes do grupo de alto risco e de TLR2 nos pacientes do grupo de baixo risco e intermediário. Pacientes com alta expressão de TLR2 e baixa expressão de TLR4 no momento D35 tiveram menor sobrevida global. É necessário compreender como os TLRs contribuem para o desenvolvimento das leucemias pediátricas, como sua expressão afeta o curso clínico da doença e aspectos relacionados ao tratamento farmacológico ou até mesmo imunoterápico. Childhood cancer accounts for about 1 to 4% of neoplasms in general population, with a higher incidence in males. Infantile tumors grow rapidly and are more invasive than adult neoplasms, however, they respond better to treatments. Acute lymphoblastic leukemia (ALL) accounts for 79% of pediatric leukemias, which in turn accounts for one-third of childhood malignancies. About 30% of children do not respond to treatment and 50% of them have death as outcome, which indicates the need for treatments that raise the cure rate and decrease side effects. Toll-Like Receptors (TLRs) are essential components of the immune system. Through the recognition of molecular structures present in pathogenic organisms, they are able to trigger a response aimed at eliminating these pathogens and developing an immunological memory. Evidence suggests that the inadequate functioning of TLR signaling contributes significantly to the development of cancer. In leukemias, studies have demonstrated the relationship of the difference in gene expression of TLRs between healthy patients and individuals, with clinical evolution and outcome. Therefore, analyzing the expression and contribution of TLRs to the development of hematological malignancies, as well as whether the differences in their expression affect the clinical course of the disease, may reveal important results that may be related to pharmacological or even immunotherapeutic treatment. The objective of this study was to evaluate the effect of specific TLR2, TLR3 and TLR4 agonists on the viability and cell proliferation of childhood ALL cell lines and to evaluate the mRNA expression of TLR2, TLR3 and TLR4 in leukemic cells of pediatric patients with ALL at the moment of diagnosis (D0) and of induction (D35) and correlating these results with the clinical data. Project approved in CEP-HCPA, CAAE nº: 46929015.7.0000.5327, GPPG HCPA nº 15-0318. In this study, we verified that the treatment reduced the cell viability of Jurkat and Sup-B15 and altered cell cycle distribution in Jurkat cell line leading to a reduction of polyploid cells, associated to tumor malignancy processes and an accumulation in Sub- G1 phase, which might be an indicative of cell death by apoptosis. There was an increase in the gene expression of these receptors in the patient samples between moments D0 and D35. The increase in TLR3 and TLR4 expression was higher in patients in the high-risk and TLR2 groups in the low-risk and intermediate-group patients. Patients with high TLR2 expression and low TLR4 expression at the time D35 had lower overall survival. It is necessary to understand how TLRs contribute to the development of pediatric leukemias, how their expression affects the clinical course of the disease and aspects related to pharmacological or even immunotherapeutic treatment.

O Sarcoma de Ewing (ES) é um raro tumor de ossos e tecidos moles com uma característica translocação cromossomal, a fusão EWS/FLI-1, que atua sobre diversos processos oncogênicos. O desenvolvimento da resistência à quimioterapia é comum no tumor e continua como uma das principais causas na falha do tratamento. O objetivo desse estudo foi avaliar a expressão de genes após a indução de resistência em linhagens celulares de ES. Foi selecionado um conjunto de genes (CCAR1, TUBA1A, POLDIP2, SMARCA4 e SMARCB1) a partir da mineração da literatura em resistência tumoral para duas drogas utilizadas na terapia de ES, doxorrubicina e vincristina. Descrevemos a expressão de cada gene selecionado antes e após as linhagens SK-ES-1 serem submetidas a um protocolo de indução de resistência para ambos os fármacos, que obteve êxito ao induzir as células à resistência. A expressão relativa dos níveis de mRNA foi avaliada e foi encontrada em maior expressão para os genes SMARCA4, SMARCB1 e POLDIP2, e em menor expressão para os genes TUBA1A e CCAR1, quando comparadas às linhagens de controle não-resistentes de cada quimioterápico. Os resultados sugerem o envolvimento de mecanismos de reparo de dano ao DNA, remodelamento de cromatina via SWI/SNF, atividade de microtúbulos e atividade spliceossomal nos processos de resistência quimioterápica em ES. Ewing Sarcoma (ES) is a rare bone and soft tissue tumor with a characteristic chromosomal translocation, the fusion protein EWS/FLI-1, that drives several oncogenic processes. The development of resistance to chemotherapy is common and remains as the main cause of treatment failure. The goal of this study was to evaluate the expression of selected genes in ES cell lines after induction of resistance. A set of genes (CCAR1, TUBA1A, POLDIP2, SMARCA4 and SMARCB1) was data mined from tumoral resistance literature for two drugs used in ES therapy, doxorubicin and vincristine. We describe the expression of each selected gene before and after SK-ES-1 cell lines were exposed to a drug resistance inducing protocol for doxorubicin and vincristine. Cell lines were successfully induced to be resistant to doxorubicin and vincristine. The relative mRNA expression levels were upregulated for genes SMARCA4, SMARCB1 and POLDIP2 and downregulated for genes TUBA1A and CCAR1, when comparing resistant and non-resistant ES cell lines for each drug. The results suggest involvement of repair pathways, SWI/SNF chromatin remodeling, microtubule and spliceosomal activity processes in drug resistance mechanisms in ES.