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A O-Glicosilação com N-acetilglucosamina (O-GlcNAc) é uma modificação pós-traducional que modula diversas proteínas. O aumento da O-glicosilação é observado durante a hiperglicemia, favorecendo a disfunção endotelial bem como alterações placentárias. A hipótese desse traba- lho foi que o aumento da O-Glicosilação durante a gestação, gera a disfunção vascular e pla- centária, resultando em um suporte nutricional inadequado entre a interface materno-fetal. Para isso, o trabalho foi dividido em duas partes. PARTE I. Caracterizar como diferentes ní- veis glicêmicos afetam a O-GlcNAcilação de proteínas em diferentes regiões placentárias. Ra- tas Wistar fêmeas foram divididas nos seguintes grupos: hiperglicemia grave (> 300 mg/dL; n = 5); hiperglicemia leve (> 140 mg/dL, pelo menos dois momentos no teste oral de tolerância à glicose; n = 7) ou normoglicemia (< 120 mg/dL; n = 5). Observou-se que as células das zonas labiríntica e juncional são direcionadas pelo acúmulo de O-GlcNAc em resposta à hiper- glicemia severa, possivelmente devido à expressão reduzida de O-GlcNAcase (OGA). A O- GlcNAcilação não é observada durante hiperglicemia leve, possivelmente devido à expressão/ atividade compensatória da OGA. Além disso, alterações morfométricas, ocorrendo simultane- amente com o aumento de O-GlcNAcilação na placenta, pode contribuir para a disfunção pla- centária durante a hiperglicemia. PARTE II: Avaliar se o aumento de O-GlcNAc reduz a fun- ção endotelial da artéria uterina. Ratas prenhas (P) ou não-prenhas (NP) foram tratadas com glucosamina (300 mg/Kg) ou veículo, por 21 dias, i.p. O tratamento com glucosamina aumen- tou a expressão de O-GlcNAc na AU de ratas NP. Observou-se diminuição no relaxamento de- pendente de endotélio em AU de ratas NP tratadas, comparadas com o veículo, o qual foi abo- lido pela incubação do inibidor da óxido nítrico-sintase endotelial (eNOS). A atividade da eNOS bem como expressão total da Akt encontram-se diminuídas após o tratamento com glucosa- mina em ratas NP. Além disso, AUs de ratas NP tratadas com glucosamina apresentaram au- mento na ativação da enzima glicogênio sintase quinase 3 beta (GSK3β), bem como o aumen- to na expressão de OGT. Curiosamente, durante a prenhez, o tratamento com glucosamina diminui a expressão de O-GlcNAc em AU, acompanhado por uma melhora no relaxamento para acetilcolina, enquanto as atividades de eNOS e GSK3β e as expressões totais de Akt e OGT permaneceram inalteradas. O relaxamento endotélio-independente não foi alterado nos grupos estudados. Portanto, o mecanismo subjacente que ocorre entre a P e NP é, pelo menos em parte, dependente da modulação de Akt/GSK3β/OGT. Acreditamos que, durante a gravi- dez, as alterações hormonais desempenham um papel protetor vascular, prevenindo a disfun- ção endotelial induzida pela O-glicosilação. No futuro, será interessante avaliar se estratégias que normalizem os níveis de O-GlcNAcilação em proteínas placentárias resultarão no sucesso gestacional em condições patológicas, incluindo hiperglicemia. O-linked N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) is a post-translational modification that modulates several proteins. The increase in O-Glycosylation is observed during hyperglycemia, favoring endothelial dysfunction as well as placental modifications. The hypothesis of this work was that the increase in O-Glycosylation during pregnancy, generates vascular and placental dys- function, resulting in inadequate nutritional support between the maternal -fetal interface. For this, the work was divided in two parts. PART I: To characterize how different glycemic levels affect O-GlcNAcylation of cells in different placental regions. Female Wistar rats were divided into the following groups: severe hyperglycemia (>300 mg/dL; n= 5); mild hyperglycemia (> 140 mg/dL, at least two moments in the oral glucose tolerance test; n= 7) or normoglycemia (

A estrona (E1), componente majoritário do Premarin® e estrogênio predominante na circulação feminina na pós-menopausa, não possui seus efeitos vasculares e mecanismos de ação completamente elucidados. Diante disso, o objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos do tratamento com E1 em ratas Wistar ovariectomizadas (OVX) sobre a reatividade de anéis de aorta e pressão arterial. Para este estudo, ratas com 12 semanas de idade foram divididas em quatro grupos experimentais, Sham (ratas em estro fisiológico tratadas com veículo), OVX (ratas OVX tratadas com veículo), OVX + E1 (ratas OVX tratadas com 825μg/Kg de E1) e OVX + 17β-estradiol (E2) (ratas OVX tratadas com 15μg/Kg de E2). Os tratamentos foram iniciados após 8 semanas da cirurgia pela via subcutânea pelo período de 30 dias. Ao final do tratamento, foi realizada a medida de pressão arterial por pletismografia de cauda.Além disso, anéis de aorta foram isolados para avaliar resposta contrátil à fenilefrina (Phe), relaxamento à acetilcolina (ACh) ou ao nitroprussiato de sódio (NPS) por meio de curvas de concentração efeito cumulativas. Foi ainda avaliada a resposta à ACh em anéis incubados previamente com superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) ou apocinina (inibidor da NADPH-oxidase (NOX)). A expressão protéica da SOD, CAT, NOX 1, NOX 2 e NOX 4 foi quantificada por Western-blot. Foi realizado o acompanhamento do ganho de peso após o procedimento de ovariectomia nos grupos OVX ou Sham e, após a eutanásia, foi avaliado o peso da gordura retroperitoneal, útero e coração. O tratamento com E1 diminuiu o peso corporal e a gordura retroperitoneal, aumentou o peso uterino, normalizou os níveis de pressão arterial, o aumento da resposta contrátil à Phe e a resposta vasodilatadora dependente de endotélio à ACh. Os efeitos apresentados por este hormônio estão relacionados com mecanismos compensatórios na expressão e atividade de enzimas antioxidantes como SOD e CAT, além da redução na expressão da isoforma NOX 4. Além disso, a E1 reverteu o aumento do colesterol total e LDL observados nas ratas OVX. Os dados apresentados demonstram o papel benéfico da E1 frente ao estresse oxidativo na disfunção vascular, restabelecendo a função endotelial e os níveis fisiológicos da pressão arterial. Estrone (E1), the major component of Premarin® and predominant estrogen in postmenopausal women, does not have its vascular effects involving its vasodilatory mechanism of action completely elucidated. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effects of E1 treatment on the vascular reactivity of isolated aortic rings and blood pressure in ovariectomized Wistar rats (OVX). For this purpose, 12 week-old Wistar rats were divided into four experimental groups, Sham (physiological estrous rats treated with vehicle), OVX (OVX rats treated with vehicle), OVX + E1 (OVX rats treated with 825μg / kg of E1) and OVX + 17β-estradiol (E2) (OVX rats treated with 15μg / kg of E2). The treatments started after the 8 weeks of surgery trough subcutaneous pathway for 30 days. At the end of treatment, blood pressure measurement by tail plethysmograph was performed. In addition, aortic rings were isolated to evaluate contractile response to phenylephrine (Phe), relaxation to acetylcholine (ACh) or sodium nitroprusside (NPS) by means of concentration curves. The response to ACh in rings previously incubated with superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) or apocynin (NADPH oxidase inhibitor) was also evaluated. The protein expression of SOD, CAT, NOX 1, NOX 2 and NOX 4 were quantified by Western blotting. Follow-up of the weight gain after the OVX or Sham procedure was also performed. After euthanasia, the weight of retroperitoneal fat, uterus and heart were evaluated. E1 treatment decreased body weight and retroperitoneal fat, increased uterine weight, and corrected both the increased blood pressure, and the decreased hyperreactivity to Phe vasoconstrictor agent and also increased endothelium-dependent vasodilatory response to ACh. The effects presented by this hormone are related to compensatory mechanisms in the activity of antioxidant enzymes such as SOD and catalase besides the reduction in the expression of the NADPH oxidase NOX 4 isoform. In addition, E1 reverses the increase in total and LDL cholesterol in the OVX group. Our study confirms the role of oxidative stress in endothelial dysfunction of OVX rats and further demonstrates that E1 reverses elevation of blood pressure and restores endothelial function in OVX rats. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Introdução: A disfunção sexual feminina (DSF) é um fenômeno complexo que pode ser influenciado por diversos fatores entre eles psicológicos, hormonais, vasculares e emocionais interferindo tanto na saúde física e mental quanto na qualidade de vida das mulheres. A DSF está associada à obesidade, um estado inflamatório de baixo grau que promove alterações fisiológicas importantes, impedindo uma adequada função sexual. As duas condições são influenciadas pela prática de exercício físico e, não há até o momento, estudos sobre a influência dos exercícios baseados no método Pilates de solo na função sexual e qualidade de vida de mulheres com excesso de peso. Objetivos: Avaliar a influência de um protocolo de exercícios baseados no método Pilates de solo nos sintomas de disfunção sexual e na qualidade de vida de mulheres com excesso de peso bem como sua influência em fatores de risco para doenças cardiovasculares como medida de cintura e perfil lipídico. Métodos: Foram selecionadas 22 mulheres com sintomas de disfunção sexual e excesso de peso e divididas em dois grupos: grupo treinado - GT (n=12) que realizou 12 semanas de treinamento com exercícios baseados no método Pilates de solo e grupo controle – GC (n=10) que não realizou nenhum exercício físico no período de intervenção. Todas as participantes foram avaliadas antes e após as 12 semanas de intervenção pelos questionários FSFI e IWQOL- Lite, e além disso, foram realizadas as análises de perfil lipídico, glicemia de jejum e nível de testosterona. Resultados: O GT apresentou melhora nos domínios de excitação, orgasmo, dor e no escore geral total do FSFI em comparação ao GC. Quanto à qualidade de vida, o GT apresentou melhora nos domínios de função física, vida sexual e no escore total. O treinamento não alterou as variáveis de perfil lipídico e medida de cinturas, mas diminuiu o peso no GT. Houve correlação negativa entre o domínio da função física do questionário IWQOL – Lite e as variáveis de desejo e excitação do questionário FSFI. Conclusão: O treinamento com 12 semanas de exercícios baseados no método Pilates de solo é eficaz na melhora da função sexual e da qualidade de vida de mulheres com excesso de peso independente de alterações nos parâmetros sanguíneos como perfil lipídico, glicemia e nível de testosterona. Introduction: Female sexual dysfunction (FSD) is a complex condition that can be influenced by several factors including psychological, hormonal, vascular and emotional processes, which affects both physical and mental health and women quality of life. FSD is associated with obesity, a low grade inflammatory state that promotes important physiological changes and impairs sexual function. Obesity and FSD are influenced by the practice of physical exercise however, until the present moment, no study has tested the influence of Mat Pilates on the sexual function and quality of life of overweight women. Objectives: To evaluate the influence of a protocol of exercises based on the Mat Pilates method in the symptoms of sexual dysfunction and the quality of life of overweight women as well as their influence on risk factors for cardiovascular diseases. Methods: Twenty-two overweight women with symptoms of sexual dysfunction were divided into two groups: trained group - TG (n = 12), which underwent 12 weeks of training with exercises based on the Mat Pilates method and the control group - CG (n = 10), which did not perform any physical exercise in the intervention period. All participants were evaluated before and after the 12 weeks of intervention by the FSFI and IWQOL-Lite questionnaires. Lipid profile, fasting glycemia and testosterone level were also analyzed. Results: The TG showed improvement in the excitement, orgasm and pain domains, as well as in the FSFI overall score when compared to the CG. Parameters related to the quality of life, including the physical function, sexual life and overall score domains, showed improvement in the TG. The Pilates training did not change the variables of lipid profile and waist circumference, but decreased the body weight of the TG. There was a negative correlation between the physical function domain of the IWQOL - Lite questionnaire and the desire and excitation variables of the FSFI questionnaire. Conclusion: Training with exercises based on the Mat Pilates method during 12-weeks is effective in improving sexual function and quality of life of overweight women regardless of changes in blood parameters such as lipid profile, blood glucose and testosterone level. Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Outro

O CRISP-3 é uma glicoproteína e potencial biomarcador expressado em baixos níveis na próstata humana normal e fortemente regulado no câncer de próstata. O objetivo deste estudo foi investigar a presença do biomarcador CRISP-3 em espécimes de tecido prostático parafinizados e correlacionar com os atuais parâmetros prognósticos pré e pós tratamento de pacientes com câncer de próstata. Foram selecionados casos diagnosticados como adenocarcinoma prostático, dos arquivos do Centro de Prevenção de Jataí, no período de 2009 a 2013. Histologicamente analisou-se lâminas do material prostático de acordo com o score de Gleason e o estadiamento do adenocarcinoma prostático foi feito usando o sistema TNM. Fez-se avaliação dos parâmetros clínicos pela busca no prontuário médico dos pacientes obtendo-se os dados de PSA anterior à cirurgia e no segmento. Cortes histológicos corados por imunohistoquímica foram avaliados por médico patologista e classificados de acordo com a intensidade da coloração/marcação específica para CRISP-3. Foram analisados 25 cortes histológicos de material prostático quanto à imunoexpressão da proteína CRISP-3 sendo 14 (56%) de marcação forte, 4 (16%) moderada e 7 (28%) fraca. Não houve correlação entre a intensidade da reação imunohistoquímica e as dosagens bioquímicas de PSA pré e pós tratamento cirúrgico. A maioria dos espécimes, 24 (96%) foram classificados como adenocarcinoma acinar usual, 15 (60%) apresentaram extensão do tumor primário pT2 e 13 (52%) apresentaram score de Gleason igual a sete, em todas as análises não se observou diferença estatística significante entre os parâmetros analisados e a intensidade da marcação por CRISP-3. Neste estudo todas as análises foram positivas para a presença do CRISP-3 sugerindo a possibilidade de utilizar essa glicoproteína como importante biomarcador diagnóstico do câncer de próstata, principalmente na ocasião do diagnóstico com o exame de biópsia por agulha, processo importante na vigilância ativa dessa complicação. CRISP-3 is a glycoprotein and a biomarker expressed at low levels by normal human prostate and strongly regulated in prostate cancer. The aim of this study was to investigate the presence of CRISP-3 biomarker in paraffin embedded prostate tissue specimens and to correlate the prognostic parameters pre and post treatment of prostate cancer patients. Cases diagnosed as prostate adenocarcinoma were selected from Centro de Prevenção de Jataí archives, from 2009 to 2013. Prostate specimens were analyzed histologically according to the Gleason score and the staging of prostate cancer was performed using the TNM system. The evaluation of clinical parameters was performed by searching the medical records of patients obtaining PSA data prior to surgery and during the follow-up. Immunohistochemical slides were evaluated by a pathologist and classified according to the intensity of staining / marking specific for CRISP-3. It was analyzed 25 tissue sections of prostate material and the expression of CRISP-3 protein was classified as strong in 14 (56%) patients, moderate in 4 (16%) and weak in 7 (28%) specimens. There was no correlation between the intensity of the imunohistochemical reaction and the levels of PSA pre and post treatment. The majority of the specimens, 24 (96%) were classified as usual acinar adenocarcinoma, 15 (60%) showed extension of the primary tumor pT2 and 13 (52%) had Gleason score equal to seven. In all analyzes there was no significant statistical differences among these parameters and the intensity of CRISP-3 staining. In this study, all prostate cancer analysed were positive for the presence of CRISP-3 suggesting the possibility of using this glycoprotein as an important biomarker for diagnosis of prostate cancer, especially at the time of diagnosis with the examination of needle biopsy, an important process in the active surveillance of this complication.

Os estrogênios endógenos têm sido associados com uma maior proteção do sistema vascular em mulheres na pré-menopausa, uma vez que os riscos de doenças cardiovasculares em mulheres na pós-menopausa são maiores, alterações estas que se devem à diminuição nos níveis plasmáticos de estrogênios. Além disso, estudos recentes mostraram que o uso de estrogênios, como a estrona, apresenta notável efeito vasorelaxante quando avaliado seu efeito em artérias isoladas, no entanto, nenhuma investigação foi realizada para elucidar o mecanismo de acção deste composto. Assim, o presente estudo procurou investigar o efeito da estrona em aorta de ratos, verificando seu efeito em induzir o relaxamento vascular e modular a via de sinalização dependente do óxido nítrico (NO), e ainda o papel dos receptores de estrogênios, comparando com os efeitos promovidos pelo 17β- estradiol. Os animais utilizados neste estudo foram ratos Wistar com 12 semanas de idade, os quais foram utilizados para realização da reatividade vascular em banho de órgãos isolados. Para os protocolos experimentais, curvas de concentraçãoresposta (0,1-100μM) foram feitas para a estrona ou para o 17β-estradiol e as tensões isométricas gravadas. Os mecanismos envolvidos no efeito induzido pela estrona foram determinados através da incubação de inibidores farmacológicos e comparado ao efeito do 17β-estradiol, que tem seu efeito vascular bem caracterizado. Observou-se que a estrona promove efeito vasorelaxante em aorta torácica de ratos, e que o relaxamento vascular promovido por ela é dependente do endotélio e do receptor de estrogênios. Após ativação do receptor de estrogênios, este ativa as vias de sinalização PI3K e Ca2+-CaM que posteriormente ativam a via NO/GMPc. Estes resultados contribuem para o melhor entendimento do papel da estrona em preparações de estrogênios conjugados equinos (CEE), que pode estar associado aos efeitos de benefícios dos estrogênios na terapia CEE. Endogenous estrogens have been associated with greater vascular protection in premenopausal women, and the increased risk of cardiovascular diseases in postmenopausal women can be associated to the decrease in plasma estrogen levels. Furthermore recently studies showed that the use of estrogens, like estrone, exhibits remarkable vascular effect when used on isolated arteries, however any investigation was made to elucidate the mechanism of action of this compound. So, the present study was designed to investigate the ability of estrone to induce vascular relaxation and modulate NO-dependent signaling pathway and analyzed the role of estrogens receptor on estrone-mediated vascular relaxation, compared with the effects promoted by 17β-estradiol. 12 week-old male Wistar rats were used to the vascular reactivity, which was performed in an organ bath study for an isometric tension recording. To the experimental protocols, concentration-response curves (0.1 - 100μM) to estrone or 17β - estradiol were performed. The mechanism contributing to estrone-induced effects were determined comparing with the vascular effects induced by 17β - estradiol that have its effect vascular well characterized. It was observed that the vascular relaxation promoted by estrone is dependent on the endothelium and the estrogen receptor. The vasorelaxant effect promoted by estrone was significantly altered in the presence of the inhibitor of PI3K signaling pathway (wortmannin) and the Ca2+-CaM complex inhibitor (calmidazolium), showing the involvement of PI3K/Ca2+-CaM signaling pathways. This study demonstrate that estrone promoted vasorelaxant effect on rat thoracic aortic on endotheliumdependent manner and its effect depends on the estrogen receptors that activate the PI3K pathway and the Ca2+-calmodulin complex which subsequently activates the NO/cGMP pathway. These results contribute to the better understanding of the role of estrone in the conjugated equine estrogen (CEE) which could be associated to the benefits effects of estrogens in the CEE therapy.