Search

Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Medicina, Departamento de Bioquímica. Fecha de Lectura: 09-09-2022, El Síndrome Hemolítico Urémico atípico (SHUa) y la Nefropatía por IgA (NIgA) son enfermedades renales con una importante morbilidad que frecuentemente conducen a insuficiencia renal terminal. Estas patologías están asociadas con la desregulación de la vía alternativa del Complemento, que puede ser consecuencia de la existencia de factores genéticos como de la generación de autoanticuerpos. Uno de los principales componentes implicados en estas patologías es el Factor H (FH), principal regulador de la vía alternativa. Existen varias proteínas homólogas de FH, denominadas “Factor H-Related Proteins” (FHRs) cuyos genes se encuentran adyacentes al gen del FH en una región denominada CFH-CFHRs. Se considera que las proteínas FHRs tienen una función antagónica a la del FH en la vía alternativa del Complemento, que podría verse afectada por sus concentraciones plasmáticas. Esta Tesis tiene como objetivo principal determinar los niveles plasmáticos de FH y FHRs en pacientes de SHUa y de NIgA, y analizar su posible asociación con polimorfismos en la región CFH-CFHRs. En la primera parte se determinan los niveles de FH y proteínas FHRs en controles y pacientes mediante Western-blot y ensayos ELISA. Se observa que los pacientes tienen niveles más elevados que los controles, pero hay una gran variabilidad interindividual en los niveles de cada una de las proteínas, es decir, existen perfiles de expresión FH/FHRs muy diferentes. El análisis de estos perfiles muestra distinta distribución en controles y pacientes, e identifica algunos perfiles asociados con SHUa y NIgA. Además, estudiamos la influencia de los alelos de riesgo al SHUa CFHR3*B, CFHR1*B y CFHR4*B en los niveles de las proteínas FHR-3, FHR-1 y FHR-4A, y observamos que sólo el alelo CFHR3*B influye en los niveles, aumentando la expresión de FHR-3. La segunda parte de esta tesis se centra en la caracterización genética e inmunológica de una cohorte de pacientes con Síndrome Hemolítico Urémico secundario a infecciones por Streptoccocus pneumoniae (SP-SHU). Comprobamos que los pacientes de SP-SHU pueden tener variantes raras en genes del Complemento, como ocurre en el SHUa primario, por lo que debería considerarse su inclusión en el cribado genético del Complemento. En los estudios inmunológicos de los pacientes SP-SHU observamos una desialilación transitoria de FH y proteínas FHRs por la neuraminidasa bacteriana. Tras analizar la relevancia funcional de la desialilación de FH mediante ensayos con proteínas purificadas, observamos que la eliminación de los ácidos siálicos de FH reduce aparentemente su capacidad para regular el Complemento sobre las superficies celulares, pudiendo ser éste un nuevo mecanismo patogénico en el desarrollo del SP-SHU, Esta Tesis ha sido realizada gracias a la financiación del Programa Complemento II-CM (S2017/BMD-3673) de la Comunidad de Madrid, coordinado por el Prof. Dr. Santiago Rodríguez de Córdoba, y por una Ayuda a la Investigación Básica 2018 de la Fundación SENEFRO (Sociedad Española de Nefrología; http://www.senefro.org), coordinada por la Dr. Pilar Sánchez-Corral

15 p.-8 fig.-3 tab., Haemolytic Uraemic Syndrome associated with Streptococcus pneumoniae infections (SP-HUS) is a clinically well-known entity that generally affects infants, and could have a worse prognosis than HUS associated to E. coli infections. It has been assumed that complement genetic variants associated with primary atypical HUS cases (aHUS) do not contribute to SP-HUS, which is solely attributed to the action of the pneumococcal neuraminidase on the host cellular surfaces. We previously identified complement pathogenic variants and risk polymorphisms in a few Hungarian SP-HUS patients, and have now extended these studies to a cohort of 13 Spanish SP-HUS patients. Five patients presented rare complement variants of unknown significance, but the frequency of the risk haplotypes in the CFH-CFHR3-CFHR1 region was similar to the observed in aHUS. Moreover, we observed desialylation of Factor H (FH) and the FH-Related proteins in plasma samples from 2 Spanish and 4 Hungarian SP-HUS patients. To analyze the functional relevance of this finding, we compared the ability of native and “in vitro” desialylated FH in: (a) binding to C3b-coated microtiter plates; (b) proteolysis of fluid-phase and surface-bound C3b by Factor I; (c) dissociation of surface bound-C3bBb convertase; (d) haemolytic assays on sheep erythrocytes. We found that desialylated FH had reduced capacity to control complement activation on sheep erythrocytes, suggesting a role for FH sialic acids on binding to cellular surfaces. We conclude that aHUS-risk variants in the CFH-CFHR3-CFHR1 region could also contribute to disease-predisposition to SP-HUS, and that transient desialylation of complement FH by the pneumococcal neuraminidase may have a role in disease pathogenesis., This study was funded by the Spanish Instituto de Salud Carlos III (ISCIII) and the European Regional Development Fund from the European Union (grants PI16/00723 and PI19/00970 to PS-C). IG and EA are supported by the Spanish Autonomous Region of Madrid (Complement II-CM network; S2017/BMD-3673). IG was also supported by the Spanish Fundación Senefro (http://www.senefro.org/). The study was also supported by the Higher Education Institutional Excellence Programme of the Ministry of Human Capacities in Hungary, within the framework of the molecular biology thematic programme of the Semmelweis University, by the National Office for Innovation and Research (KH130355 to ZP), and by the MSCA-ITN (Horizon 2020) CORVOS (Grant 860044 to ZP). DC was supported by the Premium Postdoctoral Fellowship Program of the Hungarian Academy of Sciences (PPD2018-016/2018).