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The heating rate used during semen thawing plays an important role in reducing structural and functional damage to spermatozoa. In this study, we evaluated the influence of thawing temperature on semen quality, reactive oxygen species (ROS) production, and mitochondrial activity of cryopreserved bovine semen. A total of 195 straws of 0.5 mL from five Holstein Friesian bulls were used (39 straws per bull). Samples underwent 8 to 22 years of storage; they were processed under a standard protocol with tris-egg yolk and stored in liquid nitrogen. Samples were thawed for 30 seconds in a water bath at T1: 36 °C, T2: 38 °C or T3: 40 °C. Sperm motility and kinematics, morphology, structural membrane integrity (SMI), functional membrane integrity (FMI), acrosome integrity (AI), ROS, and mitochondrial membrane potential (ΔΨM) of post-thawing bovine sperm were evaluated. Generalized linear models were fitted to the data. Each model included the effects of bull, storage time, and treatment. The Shapiro-Wilk test was used to assess data normality, and means were compared using the Tukey test. T2 and T3 showed better results for sperm motility and kinematic parameters, SMI (%) (T1 41.9 ± 2.3; T2 45.7 ± 1.9; T3 47.4 ± 2.8), ROS (RFU/min) (T1 0.026 ± 0.007; T2 0.032 ± 0.001; T3 0.031 ± 0.001) and high-ΔΨM (RFU x 103) (67.1± 0,4; 71.3 ± 0.4; 74.2 ± 0.4) (P < 0.05). However, T1 had higher FMI (39.3 ± 2.3) than T2 (34.0 ± 1.9) (P < 0.05), though not significantly (P > 0.05) different from T3 (38.4 ± 2.2). Thawing temperatures of 38 °C and 40 °C increases motility, kinetics, membrane integrity, mitochondrial activity and ROS of cryopreserved bovine semen, compared with more conventional thawing at 36 °C.

High consanguinity among equines has negative effects on semen quality, thus resulting in low motility and high levels of abnormality in the spermatozoa. However, such a relationship has not been studied in Colombian Creole horses, which have been subjected to particular selection practices focusing mainly on their gait. This research assessed the relationship of semen quality to inbreeding and gait of Colombian Creole horses. Semen was collected from 50 horses using the artificial vagina method. Sperm motility and kinematics were assessed with a computerized analysis system (SCA®). Sperm vitality (SV) and abnormal morphology (AM) were assessed via the eosin-nigrosin staining test. Functional membrane integrity (FMI) was assessed via the hypo-osmotic swelling test (HOST). Genealogies and consanguinity analysis was conducted using the Breeders Assistant for Horses program. An average of 3.6 ± 0.4 % was reported for the inbreeding coefficient (Ft). A decrease in sperm motility and kinematics was reported, which was associated with an increase in consanguinity (P < 0.05). Furthermore, differences in consanguinity were found based on gait. Similarly, a relationship between horse gait and semen quality (P < 0.05) was found. Authors concluded that semen quality of Colombian Creole horses has been affected by inbreeding and its relationship with genetic selection based on gait.

Background: In artificial insemination, chicken egg yolk is added to bovine semen to protect it during the cryopreservation process, although it contains substances that can affect the microbiological quality and metabolism of sperm. Objective: To evaluate post-thaw quality of bovine cryopreserved semen added with centrifuged and non-centrifuged egg yolk, low-density lipoproteins (LDL), and trehalose (T). Methods: Ten ejaculates from five bulls were cryopreserved under the treatments T1: pure egg yolk (PEY) at 20% v/v, T2: centrifuged egg yolk (CEY) at 20% v/v, T3: LDL at 8% v/v, T4: T at 100 mM, and T5: T at 100 mM plus LDL at 8% v/v (TLDL). Spermatic motility and kinetics, functional membrane integrity (FMI), structural membrane integrity (SMI), sperm vitality (SV) and abnormal morphology (AM) were assessed using the Sperm Class Analyzer (SCA®) system, hypoosmotic test (HOST), SYBR/PI probes, and eosin–nigrosin staining, respectively. A completely randomized design was used. Normal distribution of the variables was validated through the Kolmogórov– Smirnov test. A generalized linear model was used to determine sources of variation. Means were compared using the Tukey test. Results: Inclusion of CEY or LDL had a similar effect on sperm protection, and were superior for motility, kinetics and membrane integrity compared to the other treatments (p0.05). Conclusions: Egg yolk can be replaced by centrifuged egg yolk or low-density lipoproteins in the freezing extender used for bovine semen used in artificial insemination.

Microbial growth in semen may cause a decline of sperm quality and fertility; however, the addition of antifungals to semen extender has been shown to impair the overall fertility of the sperm. The aim of this study was to evaluate the antifungal activity of conventional and natural compounds, and their effect on the motility and kinetics of cooled stallion semen. A total of 15 ejaculates from five stallions were collected using the artificial vagina. Each ejaculate was supplemented with: fluconazole at 12.5 (F1), 25 (F2) and 50 (F3) mg/ml; amphotericin-B at 6.5 (A1), 12.5 (A2) and 25 (A3) mg/ml (A3); clotrimazole at 12.5 (C1), 25 (C2) and 50 (C3) mg/ml; isoespintanol at 50 (I1), 100 (I2) and 150 (I3) µM; thymol at 50 (T1), 100 (T2) and 150 (T3) µM; and a control without supplementation. Motility and kinetics of semen at 0, 24 and 48 hr of cooling at 15°C were assessed using computer-assisted sperm analysis (CASA). At hour 48 of cooling, the antifungal effect of the treatments was evaluated. At hour 0 of cooling, amphotericin-B and I3 showed a reduction in most of the motility and kinetic parameters evaluated (p .05). These treatments, and also C2 and C3, showed similar results at 24 and 48 hr of cooling. Thymol maintained motility and kinetics of the spermatozoa at all evaluated refrigeration times. Besides, I2 showed a decrease (p .05) in the colony-forming unit compared to that in the control. It is concluded that thymol and isospintanol could be added as natural antifungals in extenders for stallion semen refrigeration.

Cryopreservation results in the destabilization of the sperm plasma membrane, leading to negative side effects such as premature cryocapacitation, apoptosis and the low mitochondrial activity of bovine spermatozoa. Low-density lipoproteins (LDL) and trehalose have been used in seminal freezing to protect the integrity and stability of sperm membranes. Likewise, trehalose can increase the mitochondrial activity of sperm. The objective of this study was to evaluate the membrane stability and mitochondrial activity of bovine sperm after being frozen and treated with LDL sources and trehalose. Ten ejaculates from five bulls were cryopreserved under the treatments, CEY: chicken egg yolk (20% v/v); CCEY: centrifuged CEY (20% v/v); LDL: LDL (8% v/v); T: trehalose (100 mM); and TLDL: T (100 mM) plus LDL (8% v/v). After thawing, membrane stability and mitochondrial membrane potential (ΔΨM) were assessed by flow cytometry through the M-540/Yopro-1 and DiOC6/PI probes. The structural membrane integrity (SMI) was evaluated by fluorescence microscopy using SYBR14/PI dyes. A generalized linear model was adjusted, and the means were compared using the Tukey test. Centrifuged chicken egg yolk and LDL had a higher proportion of non-cryocapacitated non-apoptotic sperm (M-Y-), while CEY and T had the largest populations of cryocapacitated non-apoptotic sperm (M+Y-) and cryocapacitated apoptotic sperm (M+Y+). Centrifuged chicken egg yolk also showed a higher proportion of sperm with high-ΔΨM. Treatments that included egg yolk or purified LDL had a positive effect on SMI. Centrifuged chicken egg yolk has a superior cryoprotective effect on membrane stability and mitochondrial activity of bovine semen over the conventional use of CEY or the individual or simultaneous use of LDL and trehalose.

El objetivo de esta investigación fue evaluar la relación entre la composición, la capacidad antioxidante y el contenido de polifenoles de concentrados para perros de diferentes segmentos comerciales. Se seleccionaron aleatoriamente 19 alimentos para perros de cuatro segmentos comerciales: popular, económico, premium y super premium. Mediante un análisis bromatológico se evaluó la composición de cada alimento. Se midió la capacidad antioxidante total (CAT) y el contenido fenólico total (FT) a través de los métodos ABTS y Folin-Ciocalteu, respectivamente. Se realizaron análisis de varianza y de correlación. Los concentrados de los segmentos premium y super premium presentaron proporciones mayores de proteína cruda y grasa, y menores de fibra cruda, cenizas, calcio y fósforo en comparación con los concentrados de los segmentos popular y económico (p0.05). Se encontró una correlación positiva entre el contenido de fibra cruda y el FT (r = 0.47, p

Although vitrification is the current routine method for human embryo cryopreservation, it may cause detrimental effects. The aim of this study was to evaluate the effect of supplementing in vitro culture (IVC) media and/or vitrification solutions (VS) with Resveratrol on the presence of apoptotic markers, reactive oxygen species (ROS) level, glutathione (GSH) content and relative gene abundance. Abattoir-derived oocytes were matured and fertilized in vitro according to a standard procedure. Zygotes were cultured in IVC medium supplemented with or without 0.5 μM Resveratrol (CR, C− respectively). On day 7, blastocysts were vitrified using the minimum volume vitrification method supplementing VS with (C−VR, CRVR) or without (C–V-, CRV−) 0.5 μM Resveratrol. After warming, embryonic quality parameters were evaluated. Survival rates were significantly lower in CRVR group compared with CRV− group, but no differences in hatching rate were observed between groups. Vitrification/warming process did not alter total cell number or the presence of apoptotic or dead cells, but CRV− and CRVR groups presented a significant increase in dead cells (P

El objetivo de este estudio fue evaluar la capacidad antioxidante enzimática del semen bovino criopreservado con diferentes fuentes de lipoproteínas de baja densidad (LDL) y trehalosa (T). Diez eyaculados seleccionados a partir de cinco toros fueron criopreservados bajo los tratamientos: LDL (8% m/v), T (100 mM), TLDL (T 100 mM y LDL 8% m/v), yema de huevo centrifugada (YHC, 20% v/v) y yema de huevo (YH, 20% v/v) como tratamiento control. Se evaluó la capacidad enzimática antioxidante de la catalasa (CAT), la superóxido dismutasa (SOD) y la glutatión peroxidasa (GPx) del semen bovino luego de la descongelación por espectrofotometría y su relación con los parámetros cinéticos espermáticos. Se utilizó un modelo completamente al azar. La normalidad de las variables se validó mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Las fuentes de variación se evaluaron a través de un modelo mixto. La comparación de las medias entre los tratamientos se llevó a cabo utilizando la prueba de Tukey. Los tratamientos YH, YHC y LDL aumentaron la actividad antioxidante de CAT y GPx y se correlacionaron positivamente con los parámetros cinéticos y la integridad de la membrana espermática (p

El plasma seminal (PS) posee antioxidantes enzimáticos y no enzimáticos con la función de proteger los espermatozoides de los efectos nocivos del estrés oxidativo. El objetivo de este estudio fue evaluar el aporte antioxidante del PS durante la congelación del semen equino y su efecto sobre la calidad espermática posdescongelación. Se colectó el semen de cinco caballos, se separó el PS y se suplementó en proporciones del 0% (Control), 10% (PS10) y 20% (PS20) a la fracción espermática en el diluyente de congelación. Se evaluó la capacidad antioxidante total (CAT) por los métodos de la capacidad atrapadora de radical oxígeno (ORAC) y de la capacidad reductora férrica (FRAP), y la actividad de las enzimas SOD, GPx y catalasa mediante espectrofotometría. Quince eyaculados fueron sometidos a congelación y se evaluó la movilidad (MOV), vitalidad (VE), morfología (MA), integridad funcional de membrana (IM) y el potencial de membrana mitocondrial (PMM) de los espermatozoides. Se ajustaron modelos mixtos, se compararon las medias por la prueba de Tukey y se realizó un análisis de correlación. PS10 y PS20 generaron un incremento de la CAT medida por FRAP y de la actividad de catalasa del semen diluido (p

The present study was conducted to assess the effect of the egg yolk powder in place of fresh egg yolk (EY) in the semen diluent on semen morphological attributes (SMAs) and mobility & velocity profiles measured by computer assisted sperm analyser (CASA) in cryopreserved mithun semen. A total of 25 ejaculates were collected through rectal massage method from five healthy mithun bulls (five ejaculates in each bull) and diluted with the standard tris citrate glycerol (TCG) extender and were splited into four equal aliquots: Gr I: control (20% EY); Gr II, III and IV contained 5, 8 and 10% EY powder, respectively. SMAs, CASA parameters were evaluated following freezingthawing of semen. Result revealed significant (p

El isoespintanol proveniente de las hojas de Oxandra cf xylopioides y el timol presente en los aceites esenciales del tomillo (Thymus vulgaris L) y el orégano (Origanum vulgare L) son conocidos por su actividad antioxidante en diferentes medios. En este estudio se evaluó la actividad antioxidante del isoespintanol y el timol en el semen equino criopreservado. Se colectó el semen de cinco caballos criollos colombianos y se sometió a un protocolo de congelación, en un diluyente suplementado con isoespintanol o timol. Se evaluó la producción de especies reactivas de oxígeno y la peroxidación lipídica del semen descongelado. Como resultado, se observó una reducción pos-descongelación de la producción de especies reactivas de oxígeno del semen por efecto de ambos antioxidantes, mientras no se encontró diferencia entre los niveles de peroxidación lipídica del semen pos-descongelado. El isoespintanol y timol actúan como antioxidantes en el semen equino sometido a la criopreservación., Isoespintanol from the leaves of Oxandra cf xylopioides and thymol present in the essential oils of thyme (Thymus vulgaris L) and oregano (Origanum vulgare L) is known for their activity as antioxidants in different media. In this study, the antioxidant activity of isoespintanol and thymol in cryopreserved stallion semen was evaluated. The semen of five Colombian Creole horses was collected and subjected to a freezing protocol, in an extender supplemented with isoespintanol or thymol. The production of reactive oxygen species and the lipid peroxidation of the thawed semen were evaluated. As a result, a post-thawing reduction of the production of reactive oxygen species of semen was observed due to the effect of both antioxidants, whereas no difference was found in the lipid peroxidation levels of post-thawed semen. Isoespintanol and thymol act as antioxidants in stallion semen subjected to cryopreservation.

El objetivo de esta investigación fue evaluar el uso de yema de huevo centrifugada (YHC) en la congelación de espermatozoides epididimales caninos. Se obtuvieron los complejos testículo-epidídimo (CTE) después de la orquiectomía de 20 perros domésticos (Canis familiaris) de varias razas y en un rango de edad entre 1 y 6 años. Se diseccionó la cola del epidídimo y se obtuvieron los espermatozoides mediante la técnica de flujo retrógrado. Los espermatozoides obtenidos se dividieron en dos alícuotas y se diluyeron en Triladyl® suplementado con YHC al 10% (YHC10) o YHC al 20% (YHC20). Se realizó la congelación del semen mediante un protocolo convencional con vapores de nitrógeno líquido en pajillas para 0.5 ml. Se utilizó un sistema computarizado para evaluar la movilidad, la cinética y la concentración de los espermatozoides. Adicionalmente, se evaluaron posdescongelación la vitalidad espermática (VE), la morfología anormal (MA) y la integridad de la membrana plasmática (HOS). El análisis estadístico se realizó mediante el ajuste de modelos lineales generalizados (GLM) y la comparación de medias por la prueba de Tukey. Para YHC10 se encontraron valores superiores para las velocidades lineal (VSL), curvilínea (VCL) y media (VAP) en comparación con YHC20 (p, The aim of this research was to evaluate the use of centrifuged egg yolk (CEY) in the freezing process of canine epididymal spermatozoa. Testicular-epididymis complexes (TECs) were obtained after the orchiectomy of 20 domestic dogs (Canis familiaris) of different breeds and with an age range between 1 and 6 years. The tail of the epididymis was dissected and spermatozoa were obtained by the retrograde flow technique. The spermatozoa were divided into two aliquots and extended in Triladyl® supplemented with 10% CEY (CEY10) or 20% CEY (CEY20). Semen freezing was performed using a standard protocol with liquid nitrogen vapors and semen was packed in straws of 0.5 ml. A computerized system was used to evaluate the motility, kinetics and concentration of spermatozoa. In addition, post-thawing sperm vitality (VE), abnormal morphology (MA) and plasma membrane integrity (HOS) were evaluated. Statistical analysis was performed by adjusting generalized linear models (GLM) and comparing means by the Tukey test. For CEY10 higher values for linear (VSL), curvilinear (VCL) and mean (VAP) velocities were found compared to CEY20 (p

The reproductive activity of various species of mammals is influenced by the sperm subpopulations of their ejaculates. These subpopulations differ in the motility and kinetic characteristics of the sperm and have been related and classified according to their capacity for the fertilization process. The objective of this research was to evaluate the effect of the composition of the semen diluent on the sperm subpopulations of the chilled rabbit semen. The semen of 10 rabbits of the Californian breed (three ejaculated per animal) was obtained. Each ejaculate was divided into four aliquots, which were diluted in one of four diluents, whose basic composition consisted of T1: skim milk and sugars; T2: dextrose, sodium citrate and potassium acetate; T3: sodium caseinates, phosphates and sugars; and T4: tris-citric acid and egg yolk. Each aliquot was kept refrigerated at 16°C for 72 h. Immediately after dilution and every 24 h, the distribution of four sperm subpopulations was evaluated using a computerized system: Type A (rapid progressive spermatozoa), Type B (rapid spermatozoa and medium progressive spermatozoa), Type C (medium spermatozoa and slow spermatozoa) and Type D (static spermatozoa). The data were analyzed using the PROC GLM and Tukey's HSD test of the SAS v. 9.2. It was found that T1 and T3 produced superior results for curvilinear velocity (VCL), straight line velocity (VSL), average path velocity (VAP) and amplitude of lateral head displacement (ALH) of sperm refrigerated for 24 and 48 hours (p, La actividad reproductiva de diversas especies de mamíferos se encuentra influenciada por las subpoblaciones espermáticas de sus eyaculados. Dichas subpoblaciones se diferencian en las características de movilidad y cinética de los espermatozoides y han sido relacionadas y catalogadas según su capacidad para el proceso de fertilización. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la composición del diluyente de semen sobre las subpoblaciones espermáticas del semen refrigerado de conejo. Se obtuvo el semen de 10 conejos de la raza Californiano (tres eyaculados por animal). Cada eyaculado se dividió en cuatro alícuotas, las cuales se diluyeron en uno de cuatro diluyentes, cuya composición básica consistió en T1: leche descremada y azucares; T2: dextrosa, citrato sódico y acetato potásico; T3: caseinatos de sodio, fosfatos y azúcares; y T4: tris-ácido cítrico y yema de huevo. Cada alícuota se mantuvo en refrigeración a 16 °C durante 72 horas. Inmediatamente después de la dilución y cada 24 horas se evaluó la distribución de cuatro subpoblaciones de espermatozoides mediante un sistema computarizado: Tipo A (espermatozoides rápidos progresivos), Tipo B (espermatozoides rápidos y espermatozoides medios progresivos), Tipo C (espermatozoides medios y espermatozoides lentos), y Tipo D (espermatozoides estáticos). Los datos se analizaron mediante el PROC GLM y la prueba HSD de Tukey del software SAS v. 9.2. Se encontró que T1 y T3 produjeron resultados superiores para la velocidad curvilínea (VCL), la velocidad rectilínea (VSL), la velocidad promedio (VAP) y la amplitud de desplazamiento lateral de la cabeza (ALH) de los espermatozoides refrigerados durante 24 y 48 horas (p

Simple Summary Cryopreserving dog semen allows the long-term availability of male gametes for future artificial insemination and other assisted reproductive techniques. However, freezing causes irreversible damage to sperm that can affect its ability to fertilize and generate a viable pregnancy. Sperm alterations are partly attributed to oxidation produced by reactive oxygen species (ROS); therefore, antioxidants have been included as extenders for seminal cryopreservation. The unconventional natural antioxidants might reduce deleterious changes in cryopreserved dog sperm; therefore, we evaluated the effects of cryopreservation with the antioxidants ergothioneine and isoespintanol on thawed canine sperm. Various concentrations of both antioxidants improved the movement capacity and structure of thawed spermatozoa, possibly by reducing ROS production. The unconventional antioxidants isoespintanol and ergothioneine improved the quality of cryopreserved canine semen and hence improved assisted canine reproduction. Abstract Sperm undergo oxidative stress due to excessive production of reactive oxygen species (ROS) during cryopreservation. Some unconventional natural antioxidants can reduce ROS-induced changes in cryopreserved canine sperm. This study aimed to identify the cryoprotective effects of ergothioneine and isoespintanol on the quality of thawed canine semen. Twelve ejaculates from six dogs were cryopreserved in a tris-yolk extender without (control) or with 50 (E50), 100 (E100), or 150 (E150) µM ergothioneine or 20 (I20), 40 (I40), or 60 (I60) µM isoespintanol. We evaluated the motility and kinetics of thawed sperm using computerized analysis; determined morphology by eosin-nigrosin staining; functional membrane integrity using hypoosmotic tests, and structural membrane and acrosome integrity; mitochondrial membrane potential by fluorescence microscopy; and ROS production by spectrophotometry. Data were statistically analyzed using mixed models and Tukey tests. E100 increased total (60.6% vs. 49.6%) and progressive (26.4% vs. 20.1%) motility, straight line velocity (41.3 vs. 35.9 µm/s), and rapid sperm (17.6% vs. 12.3%) compared with controls. However, E150 reduced the numbers of hyperactive sperm. E100, I40, and I60 reduced the abnormal morphology and ROS production, and all concentrations of both antioxidants increased acrosomal integrity. We concluded that ergothioneine and isoespintanol reduce deleterious sperm alterations and oxidative stress in thawed canine semen.

The importance of seminal plasma (SP) components for stallion semen quality and freezability is little known. This study aimed to evaluate the relationship between SP components and fresh/cryopreserved stallion semen quality. Semen of 30 stallions was collected, and then, SP was recovered and lyophilized. Total protein (TP), vitamin C (CVIT), vitamin E (EVIT), vitamin A (AVIT), iron (Fe), copper (Cu), magnesium, and zinc (Zn) in SP were assessed. Sperm was frozen in an extender supplemented with lyophilized SP. In fresh semen motility, abnormal morphology (AM), sperm vitality (SV), and plasma membrane integrity (PMI) were evaluated. In post-thaw semen, additionally, total motility (TM), progressive motility (PM), straight line velocity (VSL), curvilinear velocity (VCL), average path velocity (VAP), amplitude of lateral head displacement (ALH), and beat cross-frequency (BCF) were assessed. Levels of component of SP were established by a distribution analysis. Generalized linear models were fitted. Comparisons of means were done with Tukey's test. Correlation and regression analyses were performed. Vitamins and ions were found to be related to fresh semen quality. For post-thaw sperm, medium TP showed higher semen quality. Negative regression and correlation coefficients between CVIT and all post-thaw semen parameters were found. Low EVIT yielded the lowest PM, VSL, and VAP values, while a high level of AVIT yielded the best results for sperm quality. A high level of Cu yielded higher results for TM, PM, VCL, and ALH. Moreover, a negative correlation was found between Zn, SV, and PMI. In conclusion, SP composition influences fresh and post-thaw stallion semen quality.

Una amplia variedad de antioxidantes evaluados en la congelación de semen equino no ha arrojado resultados satisfactorios en el mantenimiento de su calidad y fertilidad. El isoespintanol y el timol son moléculas de origen natural con una alta actividad antioxidante, lo que las hace potencialmente útiles para reducir el estrés oxidativo del semen durante la criopreservación. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del isoespintanol y el timol en la actividad antioxidante total y enzimática de semen equino diluido con fines de congelación. El semen de cinco caballos criollos colombianos se diluyó en un medio de congelación, se dividió en tres alícuotas que se asignaron aleatoriamente a los tratamientos isoespintanol (40 μM), timol (50 μM) o control (sin antioxidante). Se evaluó la capacidad antioxidante total (TAC) por los ensayos ORAC y FRAP. La actividad de catalasa (CAT), superóxido dismutasa (SOD) y glutatión peroxidasa (GPx) se evaluaron mediante pruebas enzimáticas. La evaluación estadística se realizó mediante modelos mixtos, análisis de correlación y comparación de medias por la prueba de Tukey. Las actividades de SOD y GPx fueron menores para el isoespintanol (6,7 ± 2,2 U/ ml y 0,16 ± 0,02 U/ml), comparadas con el timol (6,9 ± 2,2 U/ml y 0,20 ± 0,02 U/ml) y el control (7,2 ± 2,2 U/ml y 0,22 ± 0,02 U/ml) (p < 0,05). No hubo diferencias para la TAC o la CAT del semen (p > 0,05). El isoespintanol reduce la actividad de SOD y GPx en el semen equino diluido con fines de congelación.

El objetivo fue evaluar la suplementación con plasma seminal y la relación existente entre algunos de sus componentes, con la calidad del semen congelado-descongelado de asnos (Equus asinus). El semen de cinco asnos criollos colombianos se colectó por el método de la vagina artificial. A partir de una fracción de cada eyaculado se separó el plasma seminal por centrifugación y se evaluó su contenido de vitamina C (VC), vitamina E (VE), proteínas totales (PT) y perfil lipídico (PL). La criopreservación del semen se realizó por congelación convencional en un diluyente suplementado con 20 % de plasma seminal. Se evaluó la movilidad, la integridad estructural de membrana (IEM), la morfología anormal (MA) y la integridad funcional de membrana (HOS) de los espermatozoides, mediante el sistema computarizado SCA®, el ensayo fluorescente SYBR14/IP, la tinción con eosina-nigrosina y la prueba hipoosmótica, respectivamente. Se ajustaron modelos mixtos y se realizó un análisis de correlación de Pearson entre los componentes del plasma seminal y la calidad espermática. Se encontró que un nivel alto de VC, VE, PT y ácido esteárico (C18:0) tuvo un efecto deletéreo sobre la calidad del semen criopreservado (P≤0.05). Mientras que un nivel bajo de PT y C18:0, y un nivel medio de VE y VC presentaron resultados post-descongelación superiores para la movilidad y la integridad de membrana (P≤0.05). Se hallaron coeficientes de correlación negativos de VC, VE, PT y C18:0 con diferentes parámetros de calidad seminal post-descongelación. Se concluye que la composición del plasma seminal suplementado para la congelación de semen de asno, influye en la calidad espermática post-descongelación.

Introduccion. La aspiracion folicular guiada por ultrasonido (AFGU) acoplada a la produccion in vitro de embriones (PIVE), es una alternativa importante para el aprovechamiento de los recursos geneticos de hembras bovinas de alto potencial productivo. Sin embargo, la calidad reducida de los oocitos recuperados por esta tecnica, es uno de los aspectos que mas afecta la eficiencia de obtencion de embriones. Materiales y Metodos. Esta investigacion comparo el desarrollo folicular, y la calidad de los oocitos recuperados por AFGU, en hembras bovinas superestimuladas convencionalmente con FSH, o con FSH y hCG. Resultados. Se evidencio una mayor calidad en los oocitos recuperados de animales estimulados con FSH y hCG, respecto a aquellos estimulados solo con FSH. Conclusiones. La inclusion de hCG en un esquema para la superestimulacion ovarica con FSH de hembras bovinas posteriormente sometidas a aspiracion folicular, ejerce un efecto favorable sobre la calidad de oocitos recuperados.

El hipopótamo común (Hippopotamus amphibius) es un mamífero del orden Artiodactyla, que habita en África, con una población decreciente a nivel global. Con fines de conservación genética, se han realizado procesos de biotecnología reproductiva, entre los que se reporta, la recuperación de espermatozoides por métodos como la electroeyaculación y la extracción desde epidídimos. Este mamífero es considerado una especie invasora exótica y fue introducido en Colombia en 1985; actualmente se reproduce de forma descontrolada en la región del Magdalena Medio. Como medida de control poblacional, se ha realizado la esterilización quirúrgica de algunos ejemplares. El objetivo de este estudio fue evaluar diferentes parámetros espermáticos e histológicos, relacionados con la calidad seminal epididimal de hipopótamos comunes ubicados en el Magdalena Medio, Colombia. Dos hipopótamos fueron orquiectomizados quirúrgicamente y los espermatozoides fueron recuperados por los métodos combinados de lavado retrógrado e inyección de medio. Se realizó la evaluación de la movilidad (sistema SCA®), la vitalidad espermática y la morfología espermática (prueba supravital), el potencial de membrana mitocondrial (JC-1), la integridad acrosómica (FITC-PNA), y la integridad estructural (SYBR14/IP) y funcional (prueba HOS) de la membrana plasmática. Asimismo, se realizó un análisis histológico de testículos y epidídimos. A excepción de la movilidad progresiva, la integridad funcional de membrana y la morfología espermática, se hallaron resultados muy similares para los parámetros de calidad seminal de ambos individuos. Las anormalidades espermáticas predominantes fueron gota citoplasmática y cola enrollada. El análisis histológico evidenció un proceso activo de espermatogénesis. Se concluye que la extracción epididimal de espermatozoides, posterior a la orquiectomía de hipopótamos comunes ubicados en un hábitat no nativo, permite obtener muestras espermáticas de buena calidad.

Las tasas de desarrollo y la calidad de los embriones bovinos producidos in vitro son menores que los producidos in vivo, debido al estrés oxidativo al que son sometidos durante su manipulación y las condiciones de cultivo. El objetivo de este estudio fue evaluar la producción, la celularidad y la vitalidad de los blastocistos bovinos producidos in vitro con diferentes concentraciones de quercetina. Un total de 2108 oocitos fueron madurados in vitro en medio 199 con 10% de SFB, 5.0 µg/ml de LH y 0.5 µg/ml de FSH. La fertilización se realizó en medio TALP con 2x10(6) espermatozoides/ml. Los posibles cigotos fueron cultivados a 38.7 °C con 5% de CO2en medio de cultivo SOF suple-mentado con seis concentraciones de quercetina (1, 5, 10, 15, 20, 50 µM) y como controles se utilizaron el medio SOF sin quercetina y suplementado con DMSO. Se determinaron las tasas de clivaje (día 2) y blastocistos (día 7), así como la celularidad y la viabilidad celular de los blastocistos. Se realizó un análisis de varianza y las medias de los tratamientos se compararon con la prueba de Tukey. Los tratamientos con 1 y 5 µM de quercetina fueron superiores para la tasa de blastocistos (p

El objetivo de este estudio fue evaluar la asociación entre parámetros convencionales y computarizados de calidad seminal con la evaluación por citometría de flujo de semen bovino congelado. El semen de 10 eyaculados de cinco toros fue congelado. Se evaluó la movilidad total (MT), la movilidad progresiva (MP), la velocidad lineal (VSL), la velocidad curvilínea (VCL) y la velocidad media (VAP) del semen descongelado utilizando el sistema SCA®. La morfología normal (MN), la vitalidad del esperma (VE) y la integridad funcional de la membrana se evaluaron mediante la tinción con eosina-nigrosina y la prueba hipoosmótica (HOST). El potencial de membrana mitocondrial (∆ΨM) y la estabilidad de la membrana se evaluaron por citometría de flujo a través de las sondas DiOC6(3)/PI y M-540/Yopro-1, respectivamente. Se calcularon coeficientes de correlación de Pearson y se ajustaron modelos de regresión lineal múltiple (p

El objetivo de esta investigación fue evaluar el uso de diferentes diluyentes para la refrigeración de semen de conejo y su efecto sobre la calidad espermática. Se utilizaron 30 muestras de semen de 10 conejos (Oryctolagus cuniculus) sexualmente maduros. Cada muestra se diluyó separadamente en proporción 1:10 en cuatro diluyentes, compuestos por leche descremada y azucares (T1); dextrosa, citrato sódico y acetato potásico (T2); caseinatos de sodio, fosfatos y azúcares (T3); y tris-ácido cítrico y yema de huevo (T4). El semen se mantuvo a 16 °C durante 72 horas. Al momento de la dilución y cada 24 horas se evaluó la movilidad total (MT), la movilidad progresiva (MP) y la cinética espermática con el sistema Sperm Class Analizer®, y la viabilidad y la morfología mediante la tinción con eosina-nigrosina. El análisis estadístico se realizó mediante modelos mixtos y la comparación de medias por la prueba de Duncan. Al momento de la dilución (0 h), se observó una MT inferior para T2 y T4 en comparación con T1 y T3 (p

La sabaleta (Brycon henni) es una especie de interés comercial en Colombia. Una de las principales barreras para los procesos de conservación de esta especie es la asincronía temporal entre los ciclos reproductivos de las hembras y los machos, que podría ser solucionado mediante el uso de procesos biotecnológicos. El objetivo de esta investigación fue evaluar la maduración in vitro de ovas de sabaleta (Brycon henni) mediante el uso de dos preparaciones hormonales. Un total de 1200 ovas fueron sometidas a maduración in vitro en presencia de extracto de hipófisis de carpa (EPC), hormona liberadora de gonadotropinas de salmón (sGnRHa) y un control sin estimulación hormonal. Las ovas se incubaron durante 2 horas a 25 °C en agitación orbital constante y 80% de O2. Se evaluó la maduración in vitro de las ovas mediante la clasificación de la posición del núcleo en cuatro categorías: migratorio, central, atrésico y periférico. Se encontraron resultados superiores de avance de la maduración por la presencia de núcleo migratorio (p, The ‘sabaleta’ (Brycon henni) is a species of commercial interest in Colombia. One of the main barriers to the conservation processes of this species is the temporal asynchrony between the reproductive cycles of females and males, which could be solved using biotechnological processes. The aim of this investigation was to evaluate the in vitro maturation of ‘sabaleta’eggs (Brycon henni) using two hormonal preparations. A total of 1200 eggs were subjected to in vitro maturation in the presence of carp pituitary extract (EPC), salmon gonadotropin-releasing hormone (sGnRHa) and a control without hormonal stimulation. The eggs were incubated for 2 hours at 25 °C in constant orbital shaking and 80% O2. The in vitro maturation of the eggs was evaluated by classifying the position of the nucleus in four categories: migratory, central, atretic and peripheral. Higher maturation advancement were obtained due to the presence of migratory nucleus (p

Cysteine-rich secretory protein-3 (CRISP-3) and some of its nonsynonymous polymorphism have been related to the fertility and freezability of stallion semen; however, the role of the CRISP-3 gene and its seminal plasma protein in the raw semen quality is still unknown. The aim of this study was to evaluate the relationship of CRISP-3 with semen quality in stallions. DNA was obtained from blood samples of 100 stallions, from which 30 stallions were randomly selected to obtain 60 ejaculates. Through PCR amplification and sequencing, the variation of four nonsynonymous SNPs from CRISP-3 was identified and haplotypes were derived. Semen quality was assessed through the total motility (MOT), sperm vitality (SV), normal morphology (NM), functional integrity of membrane (MI) and a seminal quality index (SQi). CRISP-3 protein content of seminal plasma (SP) was determined by ELISA. The effect of the genotype, the haplotype and the concentration of the CRISP-3 protein on the seminal quality were evaluated through generalized linear models and linear regression analyses. Homozygous genotypes for SNP1, SNP2 and SNP3 and the heterozygous genotype for SNP4 showed a positive effect on seminal quality. Different haplotypes with positive effect on MOT, SV, NM, MI and SQi were identified. The allelic substitution analysis resulted in positive regression coefficients for MOT (SNP2) and MI (SNP2 and SNP3). A high level of CRISP-3 resulted in a higher MOT and SQi. It is concluded that the quality of stallion semen is influenced by the genotype of CRISP-3 and the concentration of CRISP-3 protein in SP.