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Cell culture conditions highly influence cell metabolism in vitro. This is relevant for preclinical assays, for which fibroblasts are an interesting cell model, with applications in regenerative medicine, diagnostics and therapeutic development for personalized medicine, and the validation of ingredients for cosmetics. Given these cells' short lifespan in culture, we aimed to identify the best cell culture conditions and promising markers to study mitochondrial health and stress in normal human dermal fibroblasts (NHDF). We tested the effect of reducing glucose concentration in the cell medium from high glucose (HGm) to a more physiological level [low glucose medium (LGm)], or its complete removal and replacement by galactose [medium that forces oxidative phosphorylation (OXPHOSm)], always in the presence of glutamine and pyruvate. We have demonstrated that only with OXPHOSm was it possible to observe the selective inhibition of mitochondrial adenosine triphosphate (ATP) production. This reliance on mitochondrial ATP was accompanied by changes in oxygen consumption rate and extracellular acidification rate, oxidation of citric acid cycle substrates, fatty acids, lactate, and other substrates, increased mitochondrial network extension and polarization, the increased protein content of voltage-dependent anion channel (VDAC) and peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha and changes in several key transcripts related to energy metabolism. LGm did not promote significant metabolic changes in NHDF, although mitochondrial network extension and VDAC protein content were increased compared to HGm-cultured cells. Our results indicate that short-term adaptation to OXPHOSm is ideal for studying mitochondrial health and stress in NHDF.

A liderança e a motivação são conceitos abrangentes e recorrentes na literatura organizacional, muito debatidos. A liderança tem como objetivo atingir os objetivos e metas da organização, através dos recursos que detém, particularmente os recursos humanos. Definiu-se como o principal objetivo deste trabalho, perceber a importância da liderança numa organização, e de que forma esta pode afetar a motivação dos recursos humanos da organização. Procura-se perceber de que forma os restantes fatores motivacionais, podem ter influência na relação entre a liderança e a motivação, uma vez que a liderança está ligada a muitos dos fatores motivacionais que podem influenciar a motivação dos colaboradores. A metodologia utilizada neste trabalho foi, uma pesquisa exploratória de âmbito quantitativo, com a utilização de um inquérito por questionário. A pesquisa também tem um carácter descritivo com a finalidade de interpretar e conhecer a realidade sem interferir ou modificar essa realidade. As principais conclusões retiradas deste trabalho, estão relacionadas com a importância da liderança nos recursos humanos. Após a análise às respostas ao questionário realizado na empresa Toyota Caetano Portugal, é possível verificar uma ligação positiva entre a liderança e a motivação, uma vez que existe uma grande influência da liderança em relação à motivação dos seus colaboradores e a todas as questões relacionadas com fatores motivacionais na organização. A principal dificuldade sentida neste trabalho consiste no facto de ter sido impossível realizar um questionário elaborado por mim e ter que utilizar um questionário realizado por um profissional de recursos humanos da organização.

Tese de mestrado, Teoria de Literatura, Universidade de Lisboa, Faculdade de Letras, 2001. Submitted by Eugénia Santos (eug.santos@fl.ul.pt) on 2011-07-19T12:37:07Z No. of bitstreams: 1 ulfl001681_tm.pdf: 319847 bytes, checksum: 23f85c6bd302318508f76bd1f2d984e9 (MD5) Made available in DSpace on 2011-07-19T12:37:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ulfl001681_tm.pdf: 319847 bytes, checksum: 23f85c6bd302318508f76bd1f2d984e9 (MD5) Previous issue date: 2001

Cetaceans are sentinels of the marine environment, currently threatened by many factors, mainly anthropogenic. The most easily identified compromising conditions are those affecting the skin and external mucosae - good indicators of the cetaceans health status. Cutaneous and mucocutaneous lesions have been extensively reported in wild and captive cetaceans, but little is known about the involved etiological factors, evolution of the dermatological lesions and their systemic consequences. Viruses are the most commonly involved agents in cutaneous and mucocutaneous lesions, especially herpesviruses (HV) and, associated with skin and mucosal lesions with varying morphologies, and cetacean poxviruses (CePV), mainly associated with characteristic tattoo or ring skin lesions. In addition, fungal agents are also recognized as causative agents of dermatological disease in cetaceans, especially in the process known as paracoccidioidomycosis ceti, observed as raised proliferative whitish lesions, caused by non cultivable yeast of Paracoccidioides brasiliensis (order Onygenales). Despite being reported worldwide, the occurrence of these etiological agents in southern Atlantic cetaceans is still poorly understood. The goal of this study was to identify and characterize selected cutaneous and mucocutaneous pathogens (HV, CePV and P. brasiliensis) of free-ranging cetaceans from Brazil, and to design more sensitive diagnostic methods for their detection. All the studied cetaceans stranded along the coast of Brazil, between 2005 and 2015, except three wild riverine dolphins that were physically contained and released after sample collection. In order to achieve our goals, we employed molecular, histopathological, and occasionally immunohistochemical and electron microscopy techniques. The presence of HV and CePV was evaluated in cutaneous, and oral and genital mucosal samples from 115 specimens and skin samples from 113 individuals, respectively; whereas the presence of members of the genus Onygenales sp. was evaluated in four specimens presenting macroscopic compatible lesions. Skin or oral mucosal samples from four animals were HV PCR-positive: a whitish ulcerated skin lesion from a Guiana dolphin (Sotalia guianensis), a lingual sample from an Atlantic spotted dolphin (Stenella frontalis), ulcerative lesions and healthy skin samples from a dwarf sperm whale (Kogia sima), and a proliferative skin lesion from a Bolivian river dolphin (Inia boliviensis). The tree first animals were infected with alphaherpesvirus. A sequence more similar to gammaherpesvirus was obtained from the Bolivian river dolphins proliferative skin lesion. The Bolivian river dolphin sequence could possibly be a member of a new gammaherpesvirus genus. Additionally, all other available tissue samples from HV-positive specimens, aside from skin and oral mucosa, were also tested by PCR and histologically evaluated. A different alphaherpesvirus sequence was found in the stomach and in a mesenteric lymph node of the dwarf sperm whale. Microscopic findings in two HV-positive animals (chronic proliferative dermatitis in Bolivian river dolphin and Guiana dolphin) were compatible with HV. CePV was identified in tattoo skin lesions of an Atlantic bottlenose dolphin and a Guiana dolphin by established molecular methods, and poxviral particles were observed by electron microscopy. CePV-positive animals presented epidermal ballooning degeneration and occasionally small, pale eosinophilic or amphophilic intracytoplasmic inclusions, compatible with CePV. Specific amino acid motifs for all CePV were also identified, reinforcing the suggestion of the new Cetaceanpoxvirus genus. We also designed novel SYBR® Green real-time and conventional CePV PCR methods significantly more sensitive than those currently available in the literature. An additional Guiana dolphin, previously negative based in established PCR methods was diagnosed positive for CePV through these new techniques. Refractile yeasts (49 µm in diameter) were observed under light microscopy in mild granulomatous and necrotic skin lesions of four Atlantic bottlenose dolphin, and for the first time, in a skeletal muscle abscess (the former possibly indicating the invasive potential of the agent). Onygenales sp. yeasts were identified in skin lesions by immunohistochemistry and a sequence of P. brasiliensis, more similar (100% nucleotide identity) to the one described in an Atlantic bottlenose dolphin from Cuba than to human or any other terrestrial mammals cases in Brazil, was obtained from the skin lesion of one of the specimens, confirming the etiological agent of these type of lesions. Herein we report the first molecular identification of HV in South American cetaceans and in riverine dolphins worldwide. This study also describes the first amplification of CePV and P. brasiliensis in odontocetes from South America. Four of the five novel herpesvirus sequences herein identified are possibly novel species, tentatively named Delphinid HV-10, Kogiid HV-2, Kogiid HV-3 and Iniid HV-1. Cetáceos são sentinelas do ambiente marinho, atualmente ameaçados por diversos fatores, principalmente antropogênicos. Os processos de pele e mucosas externas são os mais facilmente identificados, bons indicadores do estado de saúde em cetáceos. Lesões cutâneas e mucocutâneas já foram amplamente relatadas em cetáceos de vida livre e de cativeiro, mas pouco se sabe a respeito dos fatores etiológicos envolvidos, evolução das lesões dermatológicas e suas consequências sistêmicas. Vírus são os agentes mais comumente envolvidos em lesões cutâneas e mucocutâneas, especialmente os herpesvírus (HV), associados a lesões de morfologias variáveis em mucosas, e poxvírus dos cetáceos (Cetacean Poxvirus CePV), principalmente associados a lesões de pele tatuagem ou anel características. Agentes fúngicos também podem causar doenças dermatológicas em cetáceos, como por exemplo a paracoccidioidomicose ceti, caracterizada por lesões esbranquiçadas elevadas e proliferativas, causada por leveduras não-cultiváveis de Paracoccidioides brasiliensis (ordem Onygenales). Apesar de mundialmente reportados, a ocorrência desses agentes etiológicos em cetáceos do Atlântico Sul ainda é pouco compreendida. O objetivo desse estudo foi identificar e caracterizar patógenos cutâneos e mucocutâneos selecionados (HV, CePV e P. brasiliensis) de cetáceos brasileiros de vida livre e desenhar métodos diagnósticos mais sensíveis para sua detecção. Todos os animais estudados encalharam ao longo da costa brasileira, entre 2005 e 2015, exceto por três botos-cor-de-rosa que foram fisicamente imobilizados e liberados após a coleta de amostras. Para atingir tais objetivos, empregamos técnicas moleculares e histológicas, e ocasionalmente de imunohistoquímica e microscopia eletrônica. A presença de HV e CePV foi avaliada, respectivamente, em amostras cutâneas e de mucosa oral e genital de 115 espécimes, e amostras de pele de 113 indivíduos; enquanto a presença de membros da ordem Onygenales foi avaliada em quatro espécimes que apresentavam lesões macroscópicas compatíveis. Amostras de pele ou de mucosa oral de quatro animais foram positivas para a PCR de HV: uma lesão ulcerada de pele de coloração esbranquiçada de um boto-cinza (Sotalia guianensis), uma amostra de tecido lingual de um golfinho-pintado-do-Atlântico (Stenella frontalis), lesões ulcerativas e amostras de pele saudável de um cachalote-anão (Kogia sima), e uma lesão proliferativa de pele em boto-vermelho-boliviano (Inia boliviensis). Os primeiros três animais estavam infectados com alphaherpesvirus. Uma sequência mais similar com gammaherpesvírus foi obtida da lesão proliferativa de pele do boto-vermelho-boliviano. A sequência do boto-vermelho-boliviano possivelmente pertence a um novo gênero de gammaherpesvírus. Ademais, todas as outras amostras de tecidos disponíveis dos espécimes HV-positivos, à parte de pele e mucosa oral, também foram avaliadas por técnicas de PCR e histológicas. Uma sequência diferente de alphaherpesvírus foi encontrada no estômago e em um linfonodo mesentérico do cachalote-anão. Achados microscópicos em dois animais HV-positivos (dermatites proliferativas em boto-vermelho-boliviano e boto-cinza) eram compatíveis com HV. CePV foi identificado em lesões de pele do tipo tattoo de um golfinho-nariz-de-garrafa (Tursiops truncatus) e de um boto-cinza por meio de técnicas moleculares estabelecidas, e observação de partículas de poxvírus por microscopia eletrônica. Animais CePV-positivos apresentavam degeneração balonosa epidérmica e ocasionais inclusões intracitoplasmáticas anfofílicas ou eosinofílicas compatíveis com CePV. Motivos aminoácidos específicos para todos os CePVs também foram identificados, reforçando a sugestão de um novo gênero, chamado Cetaceanpoxvirus. Nesse estudo também foram desenvolvidas novas técnicas de PCR convencional e real-time com SYBR® Green, significativamente mais sensíveis do que os métodos atualmente disponíveis em literatura. Um boto-cinza, inicialmente negativo segundo os métodos de PCR previamente conhecidos foi diagnosticado positivo para CePV por meio das novas técnicas aqui descritas. Leveduras refratáveis (49 µm de diâmetro) foram observadas á microscopia sob a forma de lesões de pele granulomatosas moderadas e necróticas em quatro golfinhos-nariz-de-garrafa, e pela primeira vez, em um abscesso muscular (esse último um indício do potencial invasivo desse agente). Leveduras de Onygenales sp. foram identificadas em lesões de pele por meio de imunohistoquímica e uma sequência de P. brasiliensis mais semelhante (100% de identidade de nucleotídeos) áquela descrita em um gofinho-nariz-de-garrafa de Cuba do que a casos de humanos e mamíferos descritos no Brasil, foi encontrada em lesões de pele de um dos espécimes. Esse estudo relata a primeira identificação molecular de HV em cetáceos da América do Sul e em golfinhos de rio no mundo. Além disso, descrevemos a primeira amplificação de CePV e P. brasiliensis em odontocetes da América do Sul, confirmando a etiologia desse tipo de lesões. Quatro das cinco novas sequências de HV identificadas são possivelmente novas espécies, provisoriamente chamadas Delphinid HV-10, Kogiid HV-2, Kogiid HV-3 e Iniid HV-1.

Doenças infecciosas emergentes se caracterizam como enfermidades cujos patógenos evoluíram para uma nova cepa ou genótipo capaz de infectar tanto o mesmo hospedeiro quanto uma nova espécie. A ocorrência de doenças emergentes tem sido correlacionada à destruição de habitats e à perda de biodiversidade. As aves marinhas têm sido consideradas bons indicadores e sentinelas do ecossistema aquático, e uma ampla variedade de enfermidades virais têm sido investigadas e descritas em aves no mundo todo. A caracterização e o entendimento das enfermidades virais que acometem as aves marinhas que habitam a costa brasileira são de fundamental importância para a compreensão de possíveis surtos de mortalidade dentre outros fatores que interferem na conservação das aves em geral. O objetivo desta pesquisa foi investigar a ocorrência de herpesvírus, avipoxvírus e coronavírus nas espécies de aves marinhas que foram reabilitadas em três centros localizados ao longo da costa brasileira e nas colônias reprodutivas de Sula sp. e Phaeton sp. localizadas no arquipélago de Abrolhos, Bahia, Brasil, e em quatro colônias de Spheniscus magellanicus localizadas na Patagônia argentina. As análises virais foram realizadas pela técnica de PCR e RT-PCR e confirmadas pela reação de sequenciamento do amplicon identificado. Nos casos de óbito, as alterações histopatológicas foram identificadas por meio de análise microscópica. O estudo revelou a ocorrência dos três agentes virais identificados em centros de reabilitação no Brasil, além da ocorrência de herpesvírus nas populações de vida livre e ativas em seus sítios reprodutivos. Foram identificados quatro novos herpesvírus denominados: Magellanic penguin herpesvirus 1 (MagHV -1) causador de um surto de mortalidade associado a traqueíte necrótico-hemorrágica em pinguins de Magalhães em reabilitação; Magellanic penguin herpesvirus 2 (MagHV-2), identificado em pinguins de Magalhães aparentemente saudáveis nas colônias reprodutivas da Patagônia argentina; Sulid herpesvirus 1 (SuHV -1), identificado em atobás (Sula sp.) e grazinas (Phaeton sp.) nas colônias reprodutivas de Abrolhos e Thalassarchid herpesvirus 1 (ThHV -1), identificados em um albatroz de nariz amarelo (Thalassarche chlororhynchos) nas praias de Rio Grande, RS, Brasil. Também foram identificados: um novo avipox, denominado Brazilian penguinpox, causador de lesões cutâneas, esofágicas e respiratórias nos pinguins de Magalhães cutâneas, esofágicas e respiratórias nos pinguins de Magalhães em reabilitação em Santa Catarina e a identificação de dois Gammacoronavirus em três diferentes espécies assintomáticas que estavam em reabilitação em Santa Catarina e no Rio Grande do Sul. Os dados obtidos constituem uma base de informação útil para estudos futuros no campo da patologia, virologia, epidemiologia e dos impactos antrópicos na saúde das aves marinhas do cone sul. Emerging infectious diseases are characterized as disease whose pathogens progressed to a new strain ar genotype capable of infecting the same host or a new species. The occurrence of emerging diseases has been correlated to the destruction of habitats and loss of biodiversity. Seabirds have been considered as good indicators and sentinels of aquatic ecosystem, and a wide variety of viral diseases have been investigated and described in birds worldwide. The characterization and understanding of viral diseases that affect seabirds that inhabit the Brazilian coast are of fundamental importance for the understanding of possible mortality outbreaks among other factors that influence the conservation of birds in general. The objective of this research was to investigate the occurrence of herpesvirus, coronavirus and avipoxvirus in seabird species that were rehabilitated in three centres located along the Brazilian coast and in breeding colonies of Sula sp. and Phaeton sp. located at the Abrolhos’s archipelago, Bahia, Brazil and four Spheniscus magellanicus's colonies located at Argentina's Patagonia. Viral analyzes were performed by PCR and RT-PCR and confirmed by sequencing the identified amplicon. In cases of death, the histopathological alterations were identified through optical microscopic analysis. The study revealed the occurrence of the three investigated viral agents in the Brazilian rehabilitation centres, besides the occurrence of herpesvirus in the freeliving and reproductive active seabird’s populations. Four new herpesvirus were identified and called: Magellanic penguin herpesvirus 1 (MagHV -I), causing a mortality outbreak associated with necrotic-hemorrhagic tracheitis in Magellanic penguins in rehabilitation process; Magellanic penguin herpesvirus 2 (MagHV-2), identified in apparently healthy breeding Magellanic penguins at the Argentinean Patagonia’s colonies; Sulid herpesvirus 1 (SuHV-l), identified in boobies (Sula sp.) and tropicalseabirds (Phaeton sp.) breeding colonies at Abrolhos Archipelago, and Thalassarchid herpesvirus 1 (ThHV -1), identified in a yellow nose albatross (Thalassarche chlororhynchos) that appeared on the beaches of Rio Grande, RS, Brazil. Were. also identified: a new avipox named Brazilian penguinpox causing cutaneous, esophagus and respiratory lesions in rehabilitation penguins at Santa Catarina and the identification of two Santa Catarina and the identification of two Gammacoronavirus in three different asymptomatic seabirds species that were undergoing rehabilitation in Santa Catarina and Rio Grande do Sul. The data provi de a useful information basis for further studies related to pathology, virology, epidemiology and human impacts on southern hemispheres seabirds’ health.