Search

International audience; Background: Clinical observations demonstrated that COVID-19 related pneumonia is often accompanied by hematological and coagulation abnormalities including lymphopenia, thrombocytopenia, and prolonged prothrombin time. The evaluation of laboratory findings including coagulation and inflammation parameters may represent a promising approach for early determination of COVID-19 severity.Methods and materials s: In the present study, we aimed to identify laboratory parameters present upon admission in patients with COVID-19 related viral pneumonia and associated with an early in-hospital development of refractory respiratory failure or severe acute respiratory distress syndrome requiring treatment in an intensive care unit. We investigated differences in the C-reactive protein (CRP) and fibrinogen levels, prothrombin time (PT) and international normalized ratio (INR) between COVID-19 patients who had been transferred to an ICU within two weeks after admission (n= 82) and COVID-19 patients with stable course of the disease (n= 74).Results: Multiple comparisons showed statistically significantly prolonged PT on admission in ICU-transferred COVID-19 patients (14.15 sec, median, CI 95% 13.4 ÷ 14.9) compared to the stable COVID-19 patients (13.25 sec, median, CI 95% 12.9 ÷ 13.6) (p-value =0.0005). CRP levels upon admission were statistically significantly higher in ICU-transferred COVID-19 patients (132 mg/L, median, CI95% 113 ÷ 159) compared to the stable COVID-19 patients (51 mg/L, median, CI95% 33 ÷ 72) (p-value

Design of bioengineered organs is still complicated due to the lack of understanding of biological mechanisms that stimulate physiologically relevant conditions and induce relevant cellular media. Systematic review identified qualitative and quantitative requirements for tissue-engineered construct of the common bile duct. Tissue-specific approach was used to select materials, biologics, and cells for creation of physiologically relevant construct for injured biliary tract repair. Samples of fibrous scaffolds from PCL, PGLA, PLCL, and cellulose diacetate were created by electrospinning method and evaluated with MTT assay for cytotoxicity assessment. Mechanical properties of human bile duct sample and fibrous scaffolds were evaluated for Young's modulus and for percentage of elongation. Mechanical properties of fibrous materials were evaluated in vitro during degradation and erosion in various media. Fibrous PCL-scaffolds were formed by emulsion electrospinning with incorporation of following biomolecules: Neovasculgen gene-therapy drug (VEGF165 plasmid), EGF and GFP. The fluorescent microscopy of fibers confirmed volume modification by biomolecules. ELISA-test confirmed prolonged exit of EGF biomolecules from PCL-scaffold in vitro. Implantation of Neovasculgen-modified PCL-scaffold in rats showed vascular density increase in the implantation zone. Experimental swine model of iatrogenic bile duct injury was created and follow-up implantation of tubular fibrous PCL-scaffold in porcine bile duct showed a tissue-specific physiological biocompatibility of fibrous PCL. Fibrous three-layered scaffolds from PCL and PLCL/PLGA were obtained by electrospinning method and were tested for mechanical properties. The sample of three-layered scaffold from modified fibrous PCL and PLGA with incorporation of EGF and Neovasculgen was two-side seeded with bone marrow-derived mesenchymal stem cells and bile duct epithelial cells to obtain the tissue-engineered construct., La conception des organes transgéniques est encore compliquée en raison du manque de compréhension des mécanismes biologiques qui stimulent les conditions physiologiquement pertinentes et induisent des milieux cellulaires pertinents. La revue systématique a identifié les exigences qualitatives et quantitatives relatives à la construction du canal biliaire par ingénierie tissulaire. Une approche spécifique aux tissus a été utilisée pour sélectionner les matériaux, les produits biologiques et les cellules en vue de la création d'un construit physiologiquement pertinent pour la réparation du tractus biliaire lésé. Des échantillons d'échafaudages fibreux de PCL, PGLA, PLCL et de diacétate de cellulose ont été créés par un procédé d'électrofilage et évalués avec un test MTT pour l'évaluation de la cytotoxicité. Les propriétés mécaniques de l'échantillon de la voie biliaire humaine et des échafaudages fibreux ont été évaluées pour le module de Young et le pourcentage d'allongement. Les propriétés mécaniques des matériaux fibreux ont été évaluées in vitro au cours de la dégradation et de l'érosion dans divers milieux. Des échafaudages PCL fibreux ont été formés par électrofilage en émulsion avec incorporation des biomolécules suivantes: médicament de thérapie génique Neovasculgen (plasmide VEGF165), EGF et GFP. La microscopie par fluorescence des fibres a confirmé la modification du volume par des biomolécules. Le ELISA test a confirmé la sortie prolongée de biomolécules d'EGF du PCL-échafaudage in vitro. L'implantation d'échafaudages PCL modifiés par Neovasculgen chez le rat a montré une augmentation de la densité vasculaire dans la zone d'implantation. Un modèle porcin expérimental de lésion des voies biliaires iatrogènes a été créé et l'implantation consécutive d'un échafaudage PCL fibreux tubulaire dans les voies biliaires porcines a montré une biocompatibilité physiologique physiologique spécifique au tissu des PCL fibreuses. Des échafaudages fibreux à trois couches de PCL et PLCL / PLGA ont été obtenus par électrofilage et soumis à des tests de propriétés mécaniques. L'échantillon d'échafaudage à trois couches de PCL et PLGA fibreux modifiés avec incorporation d'EGF et de Neovasculgen était ensemencé sur deux faces avec des cellules souches mésenchymateuses dérivées de la moelle osseuse et des cellules épithéliales des canaux biliaires afin d'obtenir la construction modifiée par le tissu., Цель: Создать и оценить биологическую и физиологическую совместимость многослойной тканеинженерной конструкции желчного протока, основу которой составляет микроволокнистый каркас из биодеградируемого и биосовместимого полимера, с двухслойной адгезией на нем клеток, длительная дренажная функция которого обеспечивается его предварительной витализацией. Материал и методы: В работе использованы методы хирургического эксперимента, конфокальной и электронной микроскопии, иммуно-ферментного анализа, измерения клеточного индекса в реальном времени, гистологии, иммуногистохимии, а также комплекс методов клеточной биологии в условиях ЦКП «Регенеративная медицина». Образцы биосовместимых каркасов получены методом электроспиннинга из волокнистого поликапролактона, сополимеров молочной и гликолиевой кислот, диацетата целлюлозы и других полимеров. Методом эмульсионного электроформования были получены биосовместимые образцы микроволокнистого поликапролактона, содержащие биологически активные соединения GFP, EGF и генотерапевтический препарат «Неоваскулген» (плазмида VEGF165). Оценка высвобождения биологически активных соединений, их биологической активности in vitro и влияние на окружающие ткани проведены в лабораторных условиях, на клеточных культурах in vitro, а также при имплантации in vivo. Использовались 4 типа клеточных культур и 2 вида лабораторных животных. Проведены морфологические исследования эксплантированных образцов методами гистологии и иммуногистохимии. Для заселения биосовместимых микроволокнистых образцов использовались методы статичного, динамического и тканевого культивирования. Работа с лабораторными животными выполнялась в Центральном виварии Первого МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России. Результаты и их новизна: Впервые разработан и обоснован дизайн тканеинженерной конструкции желчного протока из модифицированных и комбинированных материалов, которая предназначена для предотвращения возникновения не только ранних, но и поздних послеоперационных осложнений при восстановительных операциях на желчных путях. Определено, что физиологическая совместимость многослойных каркасов с физико-механическими свойствами, соответствующими свойствам нативных тканей, может быть достигнута при использовании метода эмульсионного электроспиннинга. Установлено, что витализация каркаса тканеинженерной конструкции препаратом «Неоваскулген» и эпидермальным фактором роста обеспечивает пролонгированный и контролируемый выход веществ по мере резорбции каркаса для обеспечения ангиогенной функционализации трансплантата. Степень и эффективность внедрения: Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедре госпитальной хирургии лечебного факультета и в практическую деятельность Отдела передовых клеточных технологий Института регенеративной медицины Первого МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России. Применение: Разработанные способы получения биологически и физиологически совместимых тканеинженерных конструкций могут быть использованы в качестве элементов биоконструктора для получения моделей полых эпителиальных органов.

International audience; Aim. To study the viability of the tissue-engineered graft (TEG) based on the devitalized tracheal scaffold (DTS), seeded by mesenchymal stromal and epithelial cells in the experiment on rabbits with the assessment of the cytocompatibility and biocompatibility in vivo. Materials and methods. Syngeneic bone marrow-derived mesenchymal stromal cells (BM-MSCs) and lung epithelial cells of rabbit were obtained. Morphology and phenotype of the BMSCs culture were confirmed by immunofluorescent staining on CD90 and CD271 markers. Pulmonary epithelium cells obtained by enzymatic treatment of shredded lung tissue of rabbit were stained with CKPan, CK8/18 and CK14 markers of epithelial cells. The donor trachea was devitalized in three freeze-thawing cycles. Double-layer cell seeding of DTS was performed under static and dynamic culturing. Orthotopic implantation of TEG was performed at the site of the anterolateral wall defect in the rabbit trachea formed as a result of tracheal resection over four rings. The results were evaluated by computed tomography, histological and immunohisto- chemical analyses. Results. TEG implant based on DTS with two-layer cell cultures of rabbit BM-MSCs and epithelial cells was obtained. Three months after the implantation, TEG engraftment was observed, no tracheal wall stenosis was observed, but a slight narrowing of the lumen in the implantation area was observed. Viability of the tissue-engineered graft was confirmed by histological method 6 months after implantation. Epithelialization and vascularization of the tracheal wall, absence of signs of purulent inflammation and aseptic necrosis were shown. Small narrowing of the tracheal lumen was caused by chronic inflammation produced by irritation of the mucous suture material. Conclusion. The new model for evaluating the viability of a tissue engineering implant during critical airway defect closure was obtained. Two-layer vitalization of DTS with lung epithelial cells and BM-MSCs allows to create a tissue engineered structure for replacement of non-long tracheal defects in the experiment in vivo. The use of the tracheal tissue-engineered graft for orthotopic implantation showed a biocompatibility with minimal tissue reaction.; Objectif : étudier la viabilité d'une greffe tissulaire (TEG) basée sur un échafaudage trachéal dévitalisé (DTS) ensemencé de cellules stromales et épithéliales mésenchymateuses dans une expérience sur des lapins avec évaluation de la cytocompatibilité et de la biocompatibilité in vivo. Matériels et méthodes. Des cellules de moelle osseuse mésenchymateuses syngéniques (MSBMC) et des cellules épithéliales syngéniques de poumon de lapin ont été obtenues. La morphologie et le phénotype de la culture de MSBMC ont été confirmés par une coloration d'immunofluorescence pour les marqueurs CD90 et CD271. Les cellules épithéliales pulmonaires obtenues par traitement enzymatique de tissu pulmonaire de lapin haché ont été colorées avec les marqueurs CKPan, CK8/18 et CK14 caractéristiques des cellules épithéliales. La trachée du donneur a été dévitalisée en trois cycles successifs de congélation-décongélation. L'ensemencement des cellules en double couche de DTS a été effectué en culture statique et dynamique. L'implantation orthotopique de DTS a été réalisée au niveau de la malformation de la paroi antérolatérale chez le lapin, formée à la suite d'une résection trachéale sur quatre anneaux. Les résultats ont été évalués par tomographie assistée par ordinateur et par des analyses histologiques et immunohistochimiques. Résultats. Un implant TEG, basé sur le DTS, avec colonisation bicouche par des cultures de cellules MSBMC et de cellules épithéliales de lapin a été obtenu. Trois mois après l'implantation, une greffe de TEG a été constatée, aucune sténose de la paroi trachéale n'a été observée. Cependant, un léger rétrécissement de la lumière au niveau du site d'implantation a été noté. Six mois après l'implantation, la viabilité du TEG a été confirmée par une méthode histologique. L'épithélialisation et la vascularisation de la paroi trachéale, l'absence de signes d'inflammation purulente et de nécrose aseptique ont été mises en évidence. Le petit rétrécissement de la lumière de la trachée s'est avéré avoir été causé par une inflammation chronique due à l'irritation de la muqueuse avec le matériel de suture. Conclusion. Un nouveau modèle a été créé pour évaluer la viabilité d'un implant d'ingénierie tissulaire lors de la fermeture d'un défaut critique des voies respiratoires. Le TEG développé, basé sur le DTS ensemencé (bicouche) par les cellules épithéliales du poumon et le BMSC, a été utilisé avec succès pour remplacer des défauts trachéaux non étendus dans une expérience in vivo. L'utilisation d'une greffe trachéale issue du génie tissulaire pour une implantation orthotopique a montré une biocompatibilité avec une réponse tissulaire minimale.; Цель. Изучить жизнеспособность тканеинженерной конструкции (ТИК) на основе девитализированного трахеального матрикса (ДТМ), заселенного мезенхимальными стромальными и эпителиальными клетками, на модели оценки жизнеспособности тканеинженерного имплантата при закрытии критического дефекта дыхательных путей у кроликов. Оценить потенциал ТИК к поддержанию стабильного просвета трахеи в области имплантации. Материалы и методы. Получены сингенные мезенхимальные стромальные клетки костного мозга (МСК КМ) и сингенные эпителиоциты легкого кролика. Морфологию и фенотип культуры МСК КМ подтверждали иммунофлюоресцентным окрашиванием на маркеры CD90 и CD271. Клетки легочного эпителия, полученные методом энзиматической обработки измельченной ткани легкого кролика, были окрашены на характерные для эпителиальных клеток маркеры CKPan, CK8/18 и CK14. Девитализация донорской трахеи проведена тремя последовательными циклами замораживания–оттаивания. Двухслойное заселение ДТМ клетками выполнено в условиях статичного и динамического культивирования. Проведена ортотопическая имплантация ТИК на место дефекта переднебоковой стенки трахеи кролика, сформированного в результате резекции трахеи на протяжении четырех колец. Оценка результатов выполнена методами компьютерной томографии, гистологического и иммуногистохимического анализов. Результаты. Получен имплантат ТИК на основе ДТМ с двухслойным заселением клеточными культурами МСК КМ и эпителиоцитов кролика. Через 3 мес. после имплантации отмечалось приживление ТИК, стенозирования стенки трахеи не наблюдалось, однако отмечалось незначительное сужение просвета в области имплантации. На 6-й мес. после имплантации жизнеспособность тканеинженерной конструкции подтверждалась гистологическим методом. Показана эпителизация и васкуляризация стенки трахеи, отсутствие признаков гнойного воспаления и асептического некроза. Определена причина небольшого сужения просвета трахеи хроническое воспаление, вызванное раздражением слизистой шовным материалом. Заключение. Получена модель для оценки жизнеспособности тканеинженерного имплантата при закрытии критического дефекта дыхательных путей. Разработанная ТИК на основе ДТМ, двухслойно заселенного эпителиоцитами легкого и МСК КМ, была успешно применена для замещения непротяженных дефектов трахеи в эксперименте in vivo. Минимальная тканевая реакция на ТИК трахеи была обусловлена биосовместимостью имплантата.

International audience; The aim of the study was to evaluate the effect on angiogenesis of a biocompatible, biodegradable material-derived scaffold implanted into rats and functionalized using a plasmid with a vascular growth factor gene. Methods. Experiments were performed on 24 female Wistar rats aged 2 months weighing 180—200 g. We investigated 1 cm x 1 cm flat scaffolds obtained by electrospinning from polycaprolactone functionalized scaf folds with a VEGF-165 plasmid (gene ther apy drug, Neovasculgen) incorporated in side the fibers at two concentrations, low (0.005 mg/ml) and high (0.05 mg/ml). The sample and control were simultaneously implanted subcutaneously into two formed symmetrical pockets in the interblade zone. At 7, 16, 33, 46, and 64 days, the scaf folds were re moved, and histological examination was performed; the tissue reaction was stud ied in clud ing morphometric evaluation of density and diameter of blood vessels in the implantation area, and the area of the image occupied by the material was measured. Results. Tissue rejection was absent after implantation of either control or modified material. When the material was exposed in vivo, besides resorption of the material, blood vessel number and diameter changed. As the Neovasculgen concentration in samples in creased, a dose-dependent effect of angiogenesis stimulation became evident. Vascular density was increased by 46% (high concentration, 33 days) in functionalized matrices compared to the control. After cessation of the drug treatment, the vascular density approached the control values. Conclusion. The developed technique for functionalizing polymeric scaffolds by administra tion of a solution of the gene therapy drug, Neovasculgen, into microfibers provides a prolonged and dose-dependent effect on growth of blood vessels in the implantation zone.; L'objectif de l'étude est d'évaluer l'effet sur l'angiogenèse de structures faites de polycaprolactone fibreuse modifiée par un plasmide contenant le gène du facteur de croissance vasculaire, lorsqu'elles sont implantées chez le rat. Méthodologie. Les expériences ont été réalisées sur 24 rats Wistar femelles âgés de 2 mois, pesant de 180 à 200 g. Des cadres plats de 1 cm x 1 cm obtenus par électrofilage en émulsion à partir de polycaprolactone ont été étudiés. Le matériau des cadres a été vitalisé avec le plasmide VEGF-165 (médicament de thérapie génique du néovasculin), injecté dans deux types de matériaux fibreux à des concentrations différentes : faible - 0,005 mg/ml, et forte - 0,05 mg/ml. L'échantillon et le témoin (matériau sans vitalisation) ont été implantés par voie sous-cutanée dans deux poches symétriques formées dans la zone interlopathique. Le cadre tissulaire environnant a été extrait aux 7e, 16e, 33e, 46e et 64e jours, une étude histologique a été réalisée : nous avons étudié la réaction des tissus avec une estimation morphométrique de la densité et du diamètre des vaisseaux dans la zone d'implantation, et avons également évalué le degré de biodégradation de la matière fibreuse. Résultats. Aucun signe de réaction de rejet des tissus n'a été révélé lors de l'implantation du matériel témoin et du matériel modifié. Il a été démontré qu'à l'exposition in vivo des matériaux, parallèlement à la résorption des matériaux, il y a des changements dans la quantité et le diamètre des vaisseaux. L'effet dose-dépendant de la stimulation de l'angiogenèse a été révélé lorsque la concentration de Néovasculgène dans les échantillons a été augmentée. Pour les matériaux vitalisés, on a observé une augmentation de la densité vasculaire de 46% (haute concentration, 33 jours) par rapport au contrôle. Après l'arrêt de l'exposition à la préparation, la densité de distribution des récipients s'approchait des valeurs du contrôle. Conclusion. La technique développée de vitrification des cadres polymères avec l'introduction d'une solution de thérapie génique du Néovasculin dans les microfibres permet d'obtenir un effet prolongé et dose-dépendant sur la croissance des vaisseaux dans la zone d'implantation.Traduit avec www.DeepL.com/Translator (version gratuite); Цель исследования – оценка влияние на ангиогенез конструкций из волокнистого поликапролактона, модифицированного плазмидой с геном сосудистого фактора роста, при имплантации крысам. Методика. Эксперименты выполнены на 24 крысах-самках Вистар в возрасте 2 мес, массой 180-200 г. В работе исследовали плоские каркасы размером 1 см х 1 см, полученные методом эмульсионного электроспиннинга из поликапролактона. Материал каркасов витализировали плазмидой VEGF-165 (геннотерапевтический препарат Неоваскулген), введенной внутрь двух типов волокнистых материалов в разных концентрациях: низкой – 0,005 мг/мл, и высокой – 0,05 мг/мл. Образец и контроль (материал без витализации) одномоментно имплантировали подкожно в два сформированных симметричных кармана в межлопаточной зоне. Окружающие каркас ткани на 7-е, 16-е, 33-и, 46-е и 64-е сутки извлекали, проводили гистологическое исследование: изучали тканевую реакцию с морфометрической оценкой плотности распределения и диаметра сосудов в области имплантации, а также оценивали степень биодеградации волокнистого материала. Результаты. Признаков тканевой реакции отторжения при имплантации как контрольного, так и модифицированного материала не выявлено. Показано, что при экспозиции материала in vivo наряду с резорбцией материала происходят изменения количества и диаметра сосудов. Выявлен дозозависимый эффект стимуляции ангиогенеза при увеличении концентрации Неоваскулгена в образцах. Для витализированных материалов отмечено увеличение плотности распределения сосудов на 46% (высокая концентрация, 33-и сут) по сравнению с контролем. После прекращения воздействия препарата, плотность распределения сосудов приближалась к значениям в контроле. Заключение. Разработанная методика витализации полимерных каркасов с внесением раствора геннотерапевтического препарата Неоваскулген внутрь микроволокон обеспечивает пролонгированный и дозозависимый эффект на рост сосудов в зоне имплантации.

International audience; It is believed that gallstone formation in the biliary tree is a disease associated with alterations of the normal functioning of the organism, and often accompanied by metabolic dysfunction. Recent scientific data allow us to take a fresh look at the problem by proposing an original hypothesis about gallstone formation as a protective immunological reaction of the biliary three cells aimed to isolate exogenous microorganisms and to stop overexpression of toll-like receptors (TLR). In this paradigm, the cholelithiasis appears to be an autoimmune cholangiopathy, therapy of which is associated with the normalization of the immune status of cholangiocytes and down-regulation of its membrane receptors.; On pense que la formation de calculs biliaires dans l'arbre biliaire est une maladie associée à des altérations du fonctionnement normal de l'organisme, et souvent accompagnée d'un dysfonctionnement métabolique. Des données scientifiques récentes nous permettent de jeter un regard neuf sur le problème en proposant une hypothèse originale sur la formation de calculs biliaires en tant que réaction immunologique protectrice des trois cellules biliaires visant à isoler les micro-organismes exogènes et à arrêter la surexpression des récepteurs de type Toll (TLR). Dans ce paradigme, la cholélithiase semble être une cholangiopathie auto-immune, dont le traitement est associé à la normalisation de l'état immunitaire des cholangiocytes et à la régulation à la baisse de ses récepteurs membranaires.; Камнеобразование в желчных путях является комплексным заболеванием, причины возникновения которого остаются не до конца изученными и, в основном, ассоциированными с метаболическими расстройствами. Последние научные данные позволяют по-новому взглянуть на проблему, выдвинув гипотезу о камнеобразовании как о защитной иммунологической реакции организма, направленной на изоляцию экзогенных микроорганизмов и снижение экспрессии TLR-рецепторов. В данной парадигме желчекаменная болезнь представляется как холангиопатия иммунной этиологии, терапия которой связана с нормализацией иммунного статуса холангиоцитов.

International audience; It is believed that gallstone formation in the biliary tree is a disease associated with alterations of the normal functioning of the organism, and often accompanied by metabolic dysfunction. Recent scientific data allow us to take a fresh look at the problem by proposing an original hypothesis about gallstone formation as a protective immunological reaction of the biliary three cells aimed to isolate exogenous microorganisms and to stop overexpression of toll-like receptors (TLR). In this paradigm, the cholelithiasis appears to be an autoimmune cholangiopathy, therapy of which is associated with the normalization of the immune status of cholangiocytes and down-regulation of its membrane receptors.; On pense que la formation de calculs biliaires dans l'arbre biliaire est une maladie associée à des altérations du fonctionnement normal de l'organisme, et souvent accompagnée d'un dysfonctionnement métabolique. Des données scientifiques récentes nous permettent de jeter un regard neuf sur le problème en proposant une hypothèse originale sur la formation de calculs biliaires en tant que réaction immunologique protectrice des trois cellules biliaires visant à isoler les micro-organismes exogènes et à arrêter la surexpression des récepteurs de type Toll (TLR). Dans ce paradigme, la cholélithiase semble être une cholangiopathie auto-immune, dont le traitement est associé à la normalisation de l'état immunitaire des cholangiocytes et à la régulation à la baisse de ses récepteurs membranaires.; Камнеобразование в желчных путях является комплексным заболеванием, причины возникновения которого остаются не до конца изученными и, в основном, ассоциированными с метаболическими расстройствами. Последние научные данные позволяют по-новому взглянуть на проблему, выдвинув гипотезу о камнеобразовании как о защитной иммунологической реакции организма, направленной на изоляцию экзогенных микроорганизмов и снижение экспрессии TLR-рецепторов. В данной парадигме желчекаменная болезнь представляется как холангиопатия иммунной этиологии, терапия которой связана с нормализацией иммунного статуса холангиоцитов.