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O poliovírus (PV), agente etiológico da poliomielite, é um vírus não envelopado com genoma de RNA fita-simples, positiva. Atualmente, a doença está controlada na maior parte dos países, mas, ainda é endêmica na África e Ásia. Os herpesvírus são vírus envelopados, com DNA de fita-dupla e possuem uma ampla gama de hospedeiros, além de causarem infecções persistentes com possíveis reativações. O herpesvírus bovino-1 (BoHV-1) produz diversas infecções, como, rinotraqueíte, vulvovaginite, balanopostite e infecções sistêmicas fatais. O vírus herpes simplex-1 (HSV-1) ocasiona infecções em humanos, normalmente, benignas, porém, em indivíduos imunocomprometidos pode levar a infecção generalizada, encefalite e ceratoconjuntivite. Além da importância médica e animal, esses agentes são modelos de vírus de RNA e DNA, para diversos estudos in vitro. A Azadirachta indica (nim) tem sido amplamente utilizada etnofarmacologicamente para o tratamento de diversas doenças, entre elas as infecções virais, sendo algumas com base científica. Neste trabalho avaliamos a atividade antiviral dos polissacarídeos (P1 e P2) e seus derivados químicos sulfatados (P1S e P2S), obtidos de A. indica, na infecção por PV, BoHV-1 e HSV-1, em células HEp-2. A citotoxicidade foi avaliada pelo MTT, a atividade antiviral pelo ensaio de redução de plaques (PRA) e a inibição da síntese proteica viral pela reação de imunofluorescência (IF). A reação em cadeia de polimerase (PCR) foi aplicada para estudar a inibição da síntese do DNA na replicação do HSV-1. Demonstramos que P1 e P1S inibiram a replicação do BoHV-1, com concentração inibitória 50% (CI50)/índice de seletividade (IS) de 105,2µg/ml/3,6 e 32,1µg/ml/>51,4, respectivamente, sendo P1S mais efetivo que P1. P1 e P1S demonstraram inibição dose-dependente na síntese proteica. A maior inibição foi encontrada quando os compostos foram adicionados simultaneamente a infecção (tempo 0h). Os compostos testados exibiram efeito antiviral contra o PV, com CI50 de 80µg/ml (P1), 37,5µg/ml (P1S), 77,5µg/ml (P2) e 12,1µg/ml (P2S) e IS variando de 18-131,9, demonstrando também, melhor efeito inibitório no tempo 0h. Quando testados contra HSV-1, P1S e P2S também exibiram melhor atividade antiviral no tempo 0h, com CI50/IS de 31,1µg/ml/> 51,4 e 80,5µg/ml/>19,8, respectivamente. Os compostos apresentaram pequeno efeito profilático, cerca de 20%. O P1S demonstrou melhor efeito inibitório de 91,8% em comparação com P1 (50%), P2 (71,1%) e P2S (70%) em 200µg/ml. A inibição da síntese proteica foi dose-dependente, em concordância com os resultados de PRA. Os polissacarídeos inibiram a síntese de DNA do HSV-1 em todas as concentrações testadas no PRA, para P1 e P1S, e até 50µg/ml, para P2 e P2S. Neste caso, os grupos sulfatos de P1S e P2S não alteraram o efeito inibitório dos polissacarídeos originais. Portanto, os nossos resultados demonstraram a atividade antiviral dos polissacarídeos de A. indica contra PV, BoHV-1 e HSV-1 com ação nas fases iniciais da replicação, além da inibição da síntese proteica viral e ação virucida. A inibição em etapas diferentes da infecção viral representa uma vantagem em relação aos antivirais convencionais que, normalmente, atuam em uma única etapa, com menor probabilidade de selecionar mutantes resistentes, além da inocuidade e de outros benefícios relatados. Poliovirus (PV), etiological agent of poliomyelitis, is a non-enveloped and positive single-stranded RNA virus. The disease is under control in most part of the world, but, remains endemic in some countries in Africa and Asia. The herpesvirus is an enveloped and double-stranded DNA virus, and has a broad host range and establishes persistent infections in neurons ganglia. Bovine herpesvirus-1 (BoHV-1) is the causal agent of various infections, such as, rhinotracheitis, vulvovaginitis, balanoposthitis, and fatal systemic infections. The herpes simplex virus (HSV) usually causes benign infections in humans, but, can be serious in immunocompromised leading to generalized infections, encephalitis and keroconjunctivitis. Besides the animal and medical importance, these agents are used as models of RNA and DNA virus for many in vitro studies. The Azadirachta indica (nim) has been widely used in Indian ayurvedic and homeopathic medicine for treatment of several diseases, including viral infections. We evaluated the antiviral activity of A. indica polysaccharides (P1 and P2) and their chemical sulfated derivatives (P1S and P2S), in PV, BoHV-1 and HSV-1 infection, in HEp-2 cells. The cytotoxicity of the compounds was evaluated by MTT and the antiviral activity was determined by the plaques reduction assay (PRA). The inhibition of viral protein synthesis was conducted by immunofluorescence (IF). The polymerase chain reaction (PCR) used to evaluate the inhibition of DNA synthesis in HSV-1 replication. P1 and P1S inhibited the replication of BoHV-1, with following inhibitory concentration 50% (IC50)/selectivity index (SI), 105.2 μgml-1/3.6 and 32.1μgml-1/>51.4, respectively, and P1S was more effective than P1. P1 and P1S presented a dose-dependent inhibition in protein synthesis. The greatest inhibition was found when the compounds were added simultaneously with infection (time 0h). The compounds also exhibited effect against PV, with IC50 of 80μg/ml (P1), 37.5μg/ml (P1S), 77.5μg/ml (P2) and 12.1μg/ml (P2S) and SI ranged of 18 to 131.9, showing also better inhibitory effect at the time 0h. For HSV-1, P1S and P2S showed effect, with better results also at the time 0h and IC50/SI of 31.1μgml-1/>51.4 and 80.5μgml-1/>19.8, respectively. The compounds demonstrated low prophylactic effect, about 20%. P1S presented better inhibitory effect, 91.8% compared to P1 (50%), P2 (71.1%) and P2S (70%), at 200μg/ml. Inhibition of protein synthesis was dose-dependent, corroborating with the results of PRA. The polysaccharides inhibited the HSV-1 DNA synthesis at all tested concentrations in PRA, for P1 and P1S, and up to 50μg/ml for P2 and P2S. In this case, sulfated derivatives (P1S and P2S) did not differ their inhibitory effect in comparison to original polysaccharides. Therefore, our results demonstrated A. indica polysaccharides were active for PV, BoHV-1 and HSV-1 replication, suggesting effect at early stages of replication, however, virucidal effect and inhibition of viral protein were also shown. The action at several stages of viral infection represents an advantage over the one-step effect of conventional drugs by the less possibility to select resistant mutants. Moreover, the use of natural products can represent lower toxicity, beyond other benefic features.

O gênero Proteus é causador de diferentes infecções hospitalares, como: infecções no trato respiratório, feridas, olhos, nariz, garganta, pele e gastroenterite. Dentre as espécies deste gênero, Proteus mirabilis é a mais prevalente em infecções em humanos, principalmente as do trato urinário. Este trabalho objetivou investigar a ocorrência e a diversidade de P. mirabilis isolados de diversas infecções em humanos, já que há pouco conhecimento sobre a epidemiologia e o genoma deste patógeno em isolados que não são de fonte urinária. Deste modo, foram realizados 3 estudos, sendo o primeiro com análise genômica de um isolado de secreção traqueal ? Este é o primeiro estudo de isolado de secreção traqueal que foi sequenciado. A cepa Proteus mirabilis LBUELH-11 tem 3.973.423 bp e 99.13% de similaridade com Proteus mirabilis PM52260 e 99.06% com Proteus mirabilis AR0155, sugerindo pela análise filogenética que LBUELH-11 é P. mirabilis. O segundo estudo, com base em dados epidemiológicos da resistência de Proteus mirabilis e no terceiro estudo, foram analisadas 68 cepas de P. mirabilis atendidos no Hospital Universitário de Londrina. Quanto ao perfil genotípico e fenotípico, constatou-se a presença do gene hpmA em 97.05% dos isolados de origem urinária e em 100% dos isolados de outras fontes de infecção, pmfA em 97.05% dos isolados de origem urinária e 100% dos isolados de outras fontes de infecção, ucaA em 82.35% dos isolados de origem urinária e em 85.29% dos isolados de outras fontes de infecção, zapA está presente em 94.11% dos isolados de origem urinária e em 88.23% dos isolados de outras fontes de infecção, mrpA está presente em 100% dos isolados de origem urinária e em 97.05% dos isolados de outras fontes de infecção. Os genes hlyA e fimH não foram encontrados em nenhum dos isolados e os genes atfA e ureA estão presentes em 100% deles. Todos os microrganismos analisados apresentaram forte capacidade em formar biofilme. No teste de adesão, 100% dos isolados de fonte urinária foram capazes de formar adesão agregativa (AA); já nos isolados de outras fontes de infecção, 17.65% não foram aderentes (NA) e 82.35% foram capazes de formar adesão agregativa (AA). O patógeno apresentou resistência à maioria dos fármacos testados, principalmente à ceftriaxona. Portanto, pode-se inferir que houve diferenças genotípicas e fenotípicas entre os isolados de Proteus mirabilis, sejam ele de fonte urinária ou não urinária. The Proteus genus causes many different hospital infections, such as: respiratory tract infections, wounds, eyes, nose, throat, skin and gastroenteritis. Among the species of this genus, Proteus mirabilis is the most prevalent in human infections, mainly those of the urinary tract. This work aimed at investigating the occurrence and diversity of P. mirabilis isolates of many infections in humans, as little is known about the epidemiology and genome of this pathogen in isolates which are not from a urinary source. Thus, three studies were carried out, the first with the genomic analysis of an isolate of tracheal secretion ? This study is the first Brazilian isolate sequenced. Proteus mirabilis strain LBUELH-11 has 3.973.423 bp and 99.13% of similarity with Proteus mirabilis PM52260 and 99.06% with Proteus mirabilis AR0155, suggesting by phylogenomic analysis that the LBUELH-11 is a P. mirabilis. The second study was based on epidemiologic data on the resistance of Proteus mirabilis and, in the third study, 68 strains of P. mirabilis observed at Hospital Universitário de Londrina regarding the phenotypic and genotypic profiles. The presence of the gene hpmA was noted in 97.05% of the isolates of urinary origin and in 100% of the isolates from other sources of infection, pmfA in 97.05% of the isolates of urinary origin and 100% of isolates from other sources of infection, ucaA in 82.35% of the isolates of urinary origin and 85.29%% of isolates from other sources of infection, zapA being present in 94.11% of the isolates of urinary origin and in 88.23%%% of isolates from other sources of infection, mrpA being present in 100% of the isolates of urinary origin and 97.05% of isolates from other sources of infection. The genes hlyA and fimH were not found in any of the isolates and the genes atfA and ureA are present in 100% of them. All microorganisms analyzed showed a strong ability to form biofilm. In the adherence test, 100% of the isolates of urinary origin were able to form aggregative adherence (AA); among the isolates from other sources of infection, however, 17.65% were non-adherent (NA) and 82.35% were able to form aggregative adherence (AA). The pathogen showed resistance to most of the drugs tested, mainly ceftriaxone. Therefore, it may be inferred that there were genotypic and phenotypic differences among the isolates of Proteus mirabilis, both from urinary and non-urinary sources.

Introdução: A Hepatite C (HCV) é responsável pela maior parte dos óbitos por hepatites virais no Brasil. Objetivos: descrever as características demográficas dos casos do HCV e associar os tipos de exposição com sexo, faixa etária e escolaridade; analisar a associação da resposta virológica ao final do tratamento aos tipos de esquemas terapêuticos (ET), aos genótipos (GT), ao estadiamento da doença hepática (EDH) e à carga viral (CV). Método: Trata-se de um estudo transversal analítico, a partir de dados secundários das fichas de Hepatites Virais do Sistema Nacional de Informação de Agravos de Notificação, realizadas pelos municípios da 17ª Regional de Saúde do Paraná, e de prontuários dos casos que realizaram tratamento no Ambulatório de Especialidades do Hospital Universitário da Universidade Estadual de Londrina e no ambulatório do Consórcio Intermunicipal de Saúde do Médio Paranapanema no período de 2015 a 2019. Os dados foram analisados no IBM Software Statistical Package for the Social Science. Tanto na análise bivariada quanto na multivariável, as razões de prevalência (RP) e seus respectivos intervalos de confiança de 95% (IC) foram calculados por meio da regressão de Poisson com ajuste robusto de variância, adotando um nível de significância de 0,05. No estudo referente ao tratamento, foram realizados os testes qui-quadrado de Pearson e Exato de Fisher, empregando-se um valor de p ≤ 0,05. CAAE: 21738719.9.0000.523. Resultados: Foram notificados 528 casos de HCV, com predomínio do sexo masculino (55,5%), de faixa etária de 18 a 59 anos (64,2%), de baixa escolaridade (54,6%) e da raça branca (67,6%). Obtiveram associação estatisticamente significativa entre a variável sexo masculino e os seguintes tipos de exposição: drogas injetáveis (RP 2,38; IC 95% 1,41 - 4,01), drogas inaláveis ou crack (RP 1,80; IC 95% 1,18 - 2,76), medicamentos injetáveis (RP 1,29; IC 95% 1,02 - 1,64) e três ou mais parceiros sexuais (RP 2,18; IC 95%1,50 - 3,17). Em contrapartida, a associação entre a faixa etária de 18 a 59 anos e os tipos de exposição foi estatisticamente significante para: drogas inaláveis ou crack (RP 2,06; IC 95% 1,21 - 3,51), tatuagem e piercing (RP 3,52; IC 95% 1,87 - 6,60), tratamento dentário (RP 1,26; IC 95% 1,01 - 1,56) e três ou mais parceiros (RP 1,79; IC 95% 1,18 - 2,71). No tocante ao tratamento, dos 247 casos, a maioria finalizou com êxito (92,8%). Verificou-se associação entre a Resposta Virológica Sustentada (RVS) e o ET Sofosbuvir + Daclatasvir (p = 0,007), sendo que a RVS foi maior no grupo que não utilizou essas medicações. Entretando, foi realizada uma análise complementar e identificada a cirrose como variável de confundimento. Quanto à RVS, com tipos de GT, de EDH e de CV, constatou-se que a RVS foi maior nos portadores do GT1 (p=0,05) e menor naqueles com GT3 (p-0,02). Considerações finais: Espera-se que esse estudo direcione os gestores e as equipes de saúde na reestruturação das estratégias de vigilância da doença em prol da prevenção, do controle e do acompanhamento desse agravo, e que as instituições de ensino em saúde colaborem nesse processo, com a participação de seus alunos e de seus professores. Introduction: Hepatitis C (HCV) is responsible for most deaths from viral hepatitis in Brazil. Objectives: To describe the demographic characteristics of HCV cases and to associate the exposure types with gender, age group and schooling; to analyze the association of virologic response at the end of the treatment with the therapeutic schemes (TS) types, genotypes (GT), liver disease staging (LDS) and viral load (VL). Method: This is an analytical cross-sectional study, based on secondary data from the Viral Hepatitis records of the Sistema Nacional de Informação de Agravos de Notificação [Health Information Systems], which were carried out by the municipalities of the 17th Health Regional of Paraná, and on the medical records of the cases that underwent treatment at the Specialties Clinic of the University Hospital of Londrina State University and at the clinic of the Consórcio Intermunicipal de Saúde do Médio Paranapanema [Intercity Health Consortium of the Medium Paranapanema] in the period from 2015 to 2019. The data were analyzed in the IBM Software Statistical Package for the Social Science. Both in the bivariate and in the multivariate analysis,the prevalence ratio (PR) and their respective 95% confidence intervals (CI) were calculated by using Poisson regression with robust adjustment of variance, adopting a significance level of p

Câncer de mama é uma doença heterogênea e complexa cuja evolução depende da interação entre tumor e hospedeiro. Este tipo de câncer ocorre quando células mamárias benignas começam a se proliferar descontroladamente, e assim podem invadir tecidos adjacentes ou promover metástases. O vírus do tumor mamário de camundongo (MMTV) tem sido sugerido como agente etiológico do câncer de mama murino. A identificação de uma sequência similar ao MMTV, chamada de MMTV-like ou vírus do tumor mamário humano (HMTV), tem suportado a teoria do envolvimento viral na patogênese do câncer de mama humano. No entanto, várias questões-chave ainda não estão claras, como o significado clínico de sua infecção e seu papel na patogênese do câncer de mama. Assim, este estudo teve como objetivo detectar a presença de DNA do HMTV em 216 amostras de tecidos de tumores mamários humanos e em 32 amostras de sangue periférico e correlacionar com os parâmetros clínico patológicos, tais como idade, tamanho tumoral, grau histológico, acometimento de linfonodos, entre outros. A sequência de 251pb referente ao gene env do HMTV foi obtida por nested-PCR e os produtos foram submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida a 10%. O sequenciamento foi realizado para confirmar a amplificação do gene estudado. As análises estatísticas foram realizadas utilizando o coeficiente de correlação de Tau-b de Kendall. A sequência viral foi verificada em 19,0% (n = 41) do tecido mamário tumoral e em 53,1% (n = 17) das amostras de sangue periférico. Em nosso estudo, não houve correlação significativa entre a presença do DNA viral e parâmetros clínico patológicos no câncer de mama geral e nem nos subtipos Luminal A e triplo negativo com os parâmetros clínico patológicos. Para o subtipo Luminal B, a presença do DNA do HMTV foi correlacionada a menor estadiamento TNM do câncer de mama (τ = -0,382, p = 0,042). Mesma correlação foi observada no subtipo HER2-superexpresso (τ = -0,551, p = 0,001), além de estar associada a ausência de acometimento de linfonodos neste subtipo molecular de câncer de mama (τ = -0,559, p = 0,015). Em relação às amostras de sangue periférico, foi observada uma tendência de correlação entre a presença do DNA viral com menor idade ao diagnóstico (τ = -0,355, p = 0,053) e com a ausência de comprometimento de linfonodos (τ = -0,400, p = 0,051). Embora mais estudos sejam necessários para esclarecer os mecanismos pelos quais o vírus pode afetar o prognóstico das pacientes e participar da patogênese do câncer de mama, os resultados obtidos no presente estudo mostram pela primeira vez a presença de DNA do HMTV em amostra de tecido mamário tumoral e sangue periférico de pacientes brasileiras. Além disso, é a primeira vez que uma análise de correlação entre os parâmetros clínico patológicos e o DNA viral em subtipos moleculares de câncer de mama é realizada. Breast cancer (BC) is a heterogeneous and complex disease whose evolution depends on the interaction between tumor and host. This type of cancer occurs when benign mammary cells begin to proliferate wildly, and so can invade adjacent tissues or promote metastasis. The mouse mammary tumor virus (MMTV) has been suggested as an etiologic agent for the pathogenesis of murine BC. The identification of the sequence similar to MMTV, called MMTV-like or human mammary tumor virus (HMTV), has supported the theory of viral involvement in the pathogenesis of BC. However, several key issues remain unclear, such as the clinical significance of its infection and its role in the pathogenesis of BC. Thus, this study aimed to detect the presence of HMTV DNA in 216 tissue samples from human mammary tumor and in 32 peripheral blood samples and correlate with clinicopathological parameters such as age, tumor size, histological grade, lymph node involvement, among others. The 251bp sequence related to the HMTV env gene was obtained by nested-PCR and the products were submitted to electrophoresis on 10% polyacrylamide gel. Sequencing was performed to confirm the amplification of the studied gene. Statistical analyses were performed using Kendall Tau-b correlation coefficient. Viral sequence was verified in 19.0% (n=41) of BC tissue and in 53.1% (n=17) of peripheral blood samples. In our study, there was no significant correlation between the presence of viral DNA in general BC nor in Luminal A and triple negative subtypes with clinicopathological parameters. For the Luminal B subtype, the presence of HMTV DNA was associated with lower TNM staging of BC (τ = -0.382, p = 0.042). Same correlation was observed in HER2 overexpression subtype (τ = -0.551, p = 0.001), besides being associated with the absence of lymph nodes commitment in this molecular subtype of BC (τ = -0.559, p = 0.015). In relation to the peripheral blood samples, a trend was observed in the correlation between the presence of viral DNA with lower age at diagnosis (τ = -0.355, p = 0.053) and absence of lymph nodes commitment (τ = -0.400, p = 0.051). Although more studies are needed to clarify the mechanisms by which the virus can affect the prognosis of patients and participate in the pathogenesis of BC, the results obtained in the present study show for the first time the presence of HMTV DNA in tumoral breast tissue sample and peripheral blood of Brazilian patients. In addition, it is the first time that a correlation analysis between clinicopathological parameters and viral DNA in molecular subtypes of BC is performed.

As infecções virais estão entre as causas mais frequentes de doenças infecciosas, resultando em constante ameaça para a saúde pública, incentivando a procura de antivirais mais eficientes. O vírus herpes simplex tipo 1 (HSV-1), família Herpesviridae, compostos por DNA linear de fita dupla, com capsídeo icosaédrico, coberto por envelope lipoproteico, provoca infecções, principalmente na região oral, em todas as faixas etárias, estando presente em 80% dos adultos. A droga de escolha para o tratamento do HSV-1 é o aciclovir, porém tem se observado o surgimento de cepas resistentes. O poliovírus (PV) pertence à família Picornaviridae é o agente causador da poliomielite, uma doença que atinge gravemente o sistema nervoso, causando paralisia flácida. A prevenção da doença é feita através da vacinação e até o momento não há antiviral disponível para tratamento dos pacientes. Vários estudos relatam a utilização de produtos naturais com atividade antiviral, incluindo os polissacarídeos. O presente trabalho avaliou o efeito antiviral do polissacarídeo de Inga spp (PDT-S) sobre HSV-1 e PV, em células HEp-2 e do polissacarídeo de Myrciaria dubia na forma in natura (AO) e sulfatada (AOS) contra as cepas KOS (sensível ao aciclovir) e AR (resistente ao aciclovir) de HSV-1, em células Vero. A citotoxicidade dos polissacarídeos foi analisada pelo método do MTT e a atividade antiviral pelo ensaio de redução de plaque (PRA), utilizando diferentes protocolos de tratamento. O valor de CC50 foi de 870 μg/mL para PDT-S, > 500 μg/mL para o AO e 386 μg/mL para o AOS. O melhor efeito antiviral, determinado por ensaio de plaque para todos os polissacarídeos e vírus, foi encontrado no tempo 0 horas. Para o PDT-S o IC50 foi de 179 μg/mL e 58 μg/mL e índice de seletividade de 5,86 e 15 para o HSV-1 e PV, respectivamente, sugerindo que o PDT-S atua nos estágios iniciais da replicação viral. Para o AO o IC50 foi de 32,6 μg/mL e 87 μg/mL e índice de seletividade de 15,34 e 5,74 para as cepas KOS e AR, respectivamente. Para o AOS o IC50 foi de 2,06 μg/mL e 0,46 μg/mL e índice de seletividade de 187,38 e 839,13 para as cepas KOS e AR. Os resultados encontrados para AO e AOS mostraram que a sulfatação melhora a atividade antiviral do polissacarídeo e que não houve diferença significativa entre as cepas utilizadas, e assim como o PDT-S, o AOS atua nas fases iniciais da replicação viral. Em conclusão esse trabalho sugere que o PDT-S e AOS são substâncias com atividade antiviral promissora, podendo ser utilizados para o desenvolvimento de novos antivirais. Viral infections are among the most frequent causes of infectious diseases, resulting in constant threat to public health, encouraging the search for increasingly efficient antivirals. Herpes simplex virus type 1 (HSV-1), family Herpesviridae, composed of linear double-stranded DNA, with icosahedral capsid, covered by lipoprotein envelope, cause infections, mainly in the oral region, in all age groups, being present in 80% of adults. The drug of choice for treatment of HSV-1 is acyclovir, but the emergence of resistant strains. Poliovirus (PV) belongs to the family Picornaviridae and is the causative agent of poliomyelitis, a disease that severely affects the nervous system, causing flaccid paralysis. The prevention of this disease is done through vaccination and to date there is no antiviral available for treatment of patients. Several studies report the use of natural products with antiviral activity, including polysaccharides. This study evaluated the antiviral effect of a polysaccharide from Inga spp (PDT-S) for HSV-1 and PV, into Hep-2 and a polysaccharide from Myrciaria dubia in natura (AO) and sulfated (AOS) against the strains of HSV-1: KOS (acyclovir responsive) and AR (acyclovir resistant) in vero cells. The cytotoxicity of polysaccharides was analyzed by MTT method and antiviral activity by plaque reduction assay (PRA), using different treatment protocols. The value of CC50 was 870 μg/mL for PDT-S, > 500 μg/mL for AO and 836 μg/ml for AOS. The best antiviral effect determined by plaque assay for all polysaccharide and virus were found at time 0 hours. For PDT-S the IC50 was 179 μg/mL and 58 μg/mL and selectivity index of 5.86 and 15 for clinical sample of HSV-1 and PV, respectively, suggesting that PDT-S acts in the stages initial of viral replication. For the AO IC50 was 32.6 μg/mL and 87 μg/mL and selectivity index of 15.34 and 5.74 for KOS and AR strains, respectively. For AOS the IC50 was 2.06 μg/mL and 0.46 μg/mL and selectivity index of 187.38 and 839.13 for KOS and AR strains, respectively. The results found for AO and AOS showed that sulfation improves the antiviral activity of the polysaccharide and that there were no significant differences between the strains used, and like PDT-S, AOS act in the early stage of viral replication. In conclusion, this work suggests that PDT-S and AOS are substances with promising antiviral activity and can be used for the development of new antivirals.

Para estabelecer uma infecção bem-sucedida, os microrganismos desenvolveram estratégias para invadir as células do hospedeiro. Esse mecanismo de patogenicidade garante um nicho patogênico privilegiado para a multiplicação do patógeno, protegendo-o de antimicrobianos e das respostas defensivas do hospedeiro. Um dos mais importantes patógenos humano e o maior causador de infecções do trato urinário, Escherichia coli, ainda não possui seus mecanismos de invasão integralmente compreendidos. O estudo dessas estratégias é fundamental para o desenvolvimento de alternativas de prevenção e tratamento desse tipo de infecções, e para isso o primeiro passo na pesquisa é detectar se a bactéria é capaz de invadir a células hospedeira. As técnicas para a detecção de invasão bacteriana utilizadas hoje possuem desvantagens que atrasam o andamento das pesquisas, sendo laboriosas, demandando longa espera para obtenção de resultados e/ou de alto custo financeiro. Assim, esse trabalho teve como propósito apresentar uma nova forma de detecção de invasão bacteriana em células de linhagem, baseada em um método enzimático fluorogênico. O foco dessa técnica foi a detecção de invasão de E. coli a células HeLa, explorando a β-glucuronidase, enzima constitutiva específica dessa bactéria. Essa enzima faz a hidrólise do substrato chave desse trabalho, 4-metilumbeliferil-β-D-glucuronídeo (MUG), produzindo um composto fluorogênico, o 4-metilumbeliferona (4-MU). A curva de fluorescência criada através do método, analisada pelos teste estatísticos, demonstrou que a detecção de invasão pode ser feita após 5 horas de incubação com o MUG. Quando amostras de E. coli Uropatogênica e E. coli provinda de microbiota de pessoas saudáveis foram testadas, o método proposto nesse trabalho apresentou resultados mais coerentes do que os resultados obtidos por detecção de invasão por contagem de colônias, utilizado na pesquisa atualmente. A detecção pelo método enzimático fluorogênico, em comparação com outras técnicas de detecção de invasão bacteriana existentes, demonstrou ser uma alternativa mais acessível por ser menos laboriosa, com obtenção mais rápida de resultados, mais sensível. To establish a well-succeeded infection, microorganisms have developed strategies to invade host cells. This pathogenicity mechanism ensures a privileged pathogenic niche for multiplication of the microorganism, protecting it against the action of antimicrobials and host immune response. One of the most important human pathogens and the greatest cause of urinary tract infections, Escherichia coli, still do not have its invasion mechanisms fully understood. Thus, the study of these strategies is essential for developing prevention and treatment alternatives aiming this type of infection, and for that, the first step in research is to detect whether or not the bacterium is capable to invade the host cell. The techniques used today to detect bacterial invasion to cells have disadvantages, being laborious, demanding long waiting for results and/or high financial cost, which delay research progress. This work aims to present a new approach for detecting bacterial invasion to lineage cells, based on an enzymatic-fluorogenic method. The focus of this technique is the detection of E. coli invasion to HeLa cells, exploring β-glucuronidase, the specific constitutive enzyme of this bacterium. This enzyme hydrolyses the key substrate of this work, 4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide (MUG), producing a fluorogenic compound, 4-methylumbelliferone (4-MU). The fluorescence curve created by this method, analyzed by Tukey statistical test, demonstrated that this detection can be efficiently realized after 5 hours incubation with MUG. When testing uropathogenic E. coli and E. coli isolated form human gastrointestinal microbiota, the proposed method presented results that were more logical than the results exhibited from detection by plate counting. Detection by this enzymatic-fluorogenic method compared to other existing bacterial invasion detection techniques is less burdensome, faster, highly sensitive and an affordable alternative, due to not require high financial investment.

Infecções causadas pelo vírus herpes simplex (HSV) são tratadas com antiviral análogo de nucleosídeo, sendo o de escolha o aciclovir (ACV). Entretanto, em algumas circunstâncias, por exemplo, após tratamento prolongado, pode ocorrer a seleção de cepas resistentes. Esta resistência ao ACV é geralmente adquirida através de mutações no gene da timidina quinase (tk) (ul23), não sendo incomum a resistência cruzada com outros análogos de nucleosídeos dependentes da tk viral, como o penciclovir (PCV) e a brivudina (BVDU). Como tratamento opcional, são empregados os fármacos que não dependem da tk viral para sua ação, porém inibem o gene da DNA polimerase (ul30), como o foscarnet (FOS) e o cidofovir (CDV), compostos estes correlacionados à frequentes efeitos secundários tóxicos. Este trabalho teve o intuito de estudar 25 amostras clínicas virais que foram adaptadas em cultura celular e avaliar as cepas de HSV-1 frente aos antivirais de ação dependente dos genes ul23 e ul30, por meio dos testes de MTT e ensaio de redução de plaque, utilizando a concentração inibitória de 50% (CI50), comparativamente às cepas padrões. Foram identificadas quatro cepas resistentes a pelo menos um dos antivirais, sendo que três apresentaram resistência cruzada ao ACV, PCV e BVDU (análogos de nucleosídeos de ação dependente do gene ul23). Nenhum isolado apresentou resistência aos antivirais FOS e CDV, de ação dependente do gene ul30. Infections caused by the herpes simplex virus (HSV) are treated with nucleoside analogue antiviral, the choice being acyclovir (ACV). However, in some circumstances, for example, after prolonged treatment, selection of resistant strains may occur. This resistance to ACV is generally acquired through mutations in the thymidine kinase (tk) gene (ul 23), and cross-resistance with other viral tk-dependent nucleoside analogues such as penciclovir (PCV) and brivudine (BVDU) . As an optional treatment, drugs that do not depend on viral tk for their action are used, but inhibit the DNA polymerase (ul30) gene, such as foscarnet (FOS) and cidofovir (CDV), which are correlated to frequent toxic side effects . The aim of this study was to study 25 viral clinical samples that were adapted in cell culture and to evaluate HSV-1 strains against the ulnar and ul30 gene-dependent strains by means of MTT tests and plaque reduction assay, using the 50% inhibitory concentration (IC50), compared to the standard strains. Four strains resistant to at least one of the antivirals were identified, and three presented cross-resistance to ACV, PCV and BVDU (ul23 gene-dependent nucleoside analogues). None of the isolates presented resistance to the FOS and CDV antivirals, whose action is dependent on the ul30 gene.

Os herpesvírus e poliovírus são responsáveis por doenças importantes em humanos e animais. Infecções por herpes simplex vírus tipo 1 (HSV-1) e herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) são endêmicas e cosmopolitas, cujas infecções são caracterizadas pelo estabelecimento de latência. A quimioterapia antiviral desempenha um papel importante no controle e disseminação das doenças herpéticas, entretanto, não é capaz de curar a doença. O poliovírus (PV) é agente etiológico da poliomielite, uma doença incapacitante e potencialmente fatal. Mesmo com o programa imunoprofilático mundial de erradicação do vírus, a infecção continua endêmica no Afeganistão, Nigéria e Paquistão. Nenhum antiviral é licenciado para o tratamento dessa infecção. Nas últimas décadas, tem havido um grande interesse nos produtos naturais com potencial atividade antiviral. Neste contexto, os extratos vegetais têm proporcionado estas abordagens. Devido à atividade antioxidante, antimicrobiana e antiprotozoária, dentre outras, a Trichilia catigua, planta nativa brasileira, foi selecionada para o estudo da ação antiviral. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antiviral do extrato bruto (EB) e das frações aquosa (FAq) e acetato de etila (FAc) de T. catigua, na replicação do HSV-1, BoHV-1 e PV-1, em cultura de células HEp-2. As concentrações citotóxicas 50% (CC50) dos extratos foram determinadas pelo teste do MTT (brometo de dimetil-tiazolil-difenil-tetrazolio). A atividade antiviral foi determinada com adição do extrato e das frações, nas concentrações de 1.5 a 100.0 μg/ml, antes (-2h), durante (0h) e após (1h e 2h) a infecção viral, monitorada por ensaio de redução de plaque. A atividade virucida, a inibição da adsorção viral e o índice de combinação (IC) com acyclovir (ACV), para HSV-1, foram avaliados. O EB, FAq e FAc demonstraram baixa toxicidade (CC50 >400 ug/ml), associada a um alto índice de seletividade (IS) (IS=CC50/IC50). Em conclusão, este estudo demonstrou que o extrato e as frações de T. catigua apresentaram ação antiviral para os vírus, nos estágios iniciais da replicação. Todos os extratos apresentaram alto efeito sobre a partícula viral (efeito virucida) e inibição da adsorção viral aos receptores celulares. Portanto, conclui-se que os extratos de T. catigua são promissores para futuras pesquisas e desenvolvimento de antivirais para o controle destas infecções. Herpes and poliovirus are responsible for important diseases in humans and animals. Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) are endemic and cosmopolitan, whose infections are characterized by the establishment of latency. Antiviral drugs play an important role in controlling the spread of herpes diseases, however, they not cure the disease. The poliovirus (PV) is the agent of poliomyelitis, a crippling and potentially fatal disease. Even the vaccine eradication programs worldwide the disease remains endemic in Afghanistan, Nigeria and Pakistan. None antiviral is licensed for its. In recent decades, there has been increased interest in natural products with potential antiviral activity, with less adverse effect and less able to the selection of resistant strains. In this context, the plant extracts have provided these approaches. Due to the antioxidant, antimicrobial and antiprotozoal activity, among others, the Trichilia catigua, native Brazilian plant, was selected for the study of antiviral action. This study aimed to evaluate the antiviral activity of the crude extract (CE) and aqueous and ethyl acetate fractions (AF and EAF) from T. catigua, in the replication of HSV-1, BoHV-1 and PV-1 in HEp2 cell culture. Antiviral activity was determined by adding the extract and fractions at the concentrations of 1.5 to 100.0 µg/ml, before (2H), during (0h) and after (1h and 2h) viral infection monitored by plaque reduction assay. The 50% cytotoxic concentration (CC50) was determined by MTT test (thiazolyl-dimethyl-diphenyltetrazolium) were assayed. The virucidal activity, inhibition of viral adsorption and the combination index (CI) with ACV, for HSV-1, were also evaluated. The CE, AF and EAF showed low toxicity (CC50 >400 µg/ml), associated with a high selectivity index (SI) (SI = CC50/IC50). In conclusion, this study demonstrated that T. catigua extracts and fractions presented antiviral effect for both virus at early stages of their replication. All the compounds showed virucide effect and inhibition of the adsorption. Therefore, it concluded that the T. catigua extracts are promising for future research and development of antivirals for the control of these infections.

O vírus herpes simplex tipo, família Herpesviridae, é um vírus cosmopolita que atinge várias faixas etárias, em ambos os sexos, causando lesões na região oro-facial. A droga de escolha para o tratamento do HSV-1 é o aciclovir, porém o uso contínuo desse fármaco pode selecionar cepas resistentes. O poliovírus (PV) pertence à família Picornaviridae, conhecido como agente causador da poliomielite, uma doença que atinge gravemente o sistema nervoso, causando paralisia flácida. Hoje em dia ainda não existe um quimioterápico eficiente para o controle ou tratamento desta doença, limitando-se a vacinação como a única ferramenta. Vários estudos relatam a utilização de produtos naturais com atividade antiviral, incluindo os polissacarídeos. O presente trabalho avaliou o efeito antiviral do polissacarídeo de Adenanthera pavonina (PLSAp) e a sua forma sulfatada (SPLSAp), em células HEp-2, contra HSV-1 e PV. A citotoxicidade dos polissacarídeos foi analisada pelo método do MTT e a atividade antiviral pelo ensaio de redução de plaque (PRA), utilizando diferentes protocolos de tratamentos. O valor de CC50 para PLSAp foi > 6000μg/ml e 500 μg/ml para SPLSAp. O melhor efeito antiviral, determinado por PRA, foi encontrado para SPLSAp, que apresentou um IC50 de 15μg/ml e índice de seletividade (SI) de 33,3, para o HSV-1 e um IC50 de 1,18 μg/ml e índice de seletividade de 423,73, para o PV. A inibição do HSV-1 pelo SPLSAp foi demostrado pelos testes tempo de adição e tempo de remoção, onde a maior porcentagem de inibição viral (%IV) obtida foi de 100% e 99,3%, respectivamente, na concentração de 200 μg/ml. No ensaio de imunofluorescência o SPLSAp inibiu 100% do HSV-1, na maior concentração testada (200μg/ml). A ação deste polissacarídeo na síntese de DNA do HSV-1, avaliada por PCR, mostrou uma inibição total da banda na concentração de 25μg/ml. No ensaio da combinação do SPLSAp com aciclovir , para HSV-1, este teve um efeito antagonista. A melhor porcentagem de inibição viral (%IV) para o PV foi encontrado no tempo 0 hora de infecção, para esse vírus o SPLSAp também apresentou um efeito virucida com %IV de 74,1% na maior concentração testada (100 μg/ml). No ensaio de imunofluorescência do PV o SPLSAp inibiu 100% a síntese de proteínas na maior concentração testada (100 μg/ml), de forma dose-dependente. Os resultados demonstraram que o melhor efeito do SPLSAp na replicação do HSV-1 está nas etapas após penetração viral, e para o PV a inibição está principalmente nas fases iniciais da replicação, incentivando a pesquisa detalhada do mecanismo de ação do SPLSAp para a utilização deste composto como um novo antiviral. The virus herpes simplex type 1(HSV-1), herpesviridae family, is a cosmopolitan virus that affects various age group, both sexes, causing lesions in the oro-facial region. The drug of choice for treatment of HSV-1 is acyclovir, but their continued use can select resistant strains. O poliovirus (PV), Picornaviridae family, know as causative agent of poliomyelitis, a disease that affects seriously the nervous system, causing flaccid paralysis. Nowdays there is still no effective chemotherapy for control or treatment this disease, limited vaccination as only tool. Several studies report use of natural products with antiviral activity, including polysaccharides. This work evaluated the antiviral effect of polysaccharides of Adenanthera pavonina (PLSAp) and its sulfated form (SPLSAp), in HEp-2 cells, against HSV-1 and PV. The cytotoxiticy of polysaccharides was analyzed by MTT method and antiviral activity by plaque reduction assay (PRA), using different protocols of treatment. The CC50 to PLSAp was > 6000μg/ml and 500μg/ml to SPLSAp. The best antiviral effect, determined by PRA, was found to SPLSAp, with IC50 of 15μg/ml and selectivity index (SI) of 33,3, for HSV-1 and IC50 of 1,18 μg/ml and SI of 423,73 for PV. Inhibition of HSV-1 by SPLSAp was demonstrated by tests time-of-addition and time-of-removal, where the highest percentage of viral inhibition (%IV) obtained were 100% and 99,3%, respectively, at concentration of 200 μg/ml. In immunofluorescence assay the SPLSAp inhibited 100% of HSV-1, in highest concentration (200μg/ml). The action this polysaccharide in DNA synthesis of HSV-1, evaluated by PCR, showed total inhibition of band in concentration of 25μg/ml. In assay of combination of SPLSAp with acyclovir against HSV-1, this has antagonistic effect. The best percentage of viral inhibition for PV was found at time 0 hour infection, this polysaccharide also showed virucidal effect with 74.1% of %IV at the highest concentration tested (100 μg/ml). In immunofluorescence assay the SPLSAp inhibited 100% of protein synthesis PV in highest concentration tested (100 μg/ml), dose-dependent form. This results showed that the best effect of SPLSAp in replication of HSV-1 at this stages after viral penetration and for PV inhibition is mainly in initial stages, thus is necessary to a detailed research of mechanism of action of SPLSAp for using this as a new antiviral.