9 results on '"Leitão, Álvaro Augusto da Costa"'
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2. Redox homeostasis of breast cancer lineages contributes to differential cell death response to exogenous hydrogen peroxide
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Hecht, Fabio, Cazarin, Juliana M., Lima, Carlos Eduardo, Faria, Caroline C., Leitão, Alvaro Augusto da Costa, Ferreira, Andrea C.F., Carvalho, Denise P., and Fortunato, Rodrigo S.
- Published
- 2016
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3. Novel ultraviolet absorbers derived from cashew nut shell liquid: spectrophotometric, in silico and in vitro assays
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De Araújo, Emeli Moura, primary, Romeiro, Luiz Antônio Soares, additional, Rodrigues, Ana Paula, additional, Alves, Priscilla Souza, additional, Silva, Viviane Cândida da, additional, Logrado, Lúcio Paulo Lima, additional, Santos, Maria Lucília dos, additional, Murta, Maria Márcia, additional, Leitão, Álvaro Augusto da Costa, additional, Garcia, Sheila, additional, and Dellamora-Ortiz, Gisela Maria, additional
- Published
- 2020
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4. Impact of violacein from Chromobacterium violaceum on the mammalian gut microbiome
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Pauer, Heidi, primary, Hardoim, Cristiane Cassiolato Pires, additional, Teixeira, Felipe Lopes, additional, Miranda, Karla Rodrigues, additional, Barbirato, Davi da Silva, additional, Carvalho, Denise Pires de, additional, Antunes, Luis Caetano Martha, additional, Leitão, Álvaro Augusto da Costa, additional, Lobo, Leandro Araujo, additional, and Domingues, Regina Maria Cavalcanti Pilotto, additional
- Published
- 2018
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5. Trypanocidal, cytotoxic and genotoxic activity of new nitro-heterocyclic derivatives and their effects on the cytochrome p450 genes expression
- Author
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Melo, Francisco do Vale Chaves e, Felzenszwalb, Israel, Paes, Márcia Cristina, Leitão, álvaro Augusto da Costa, and Carvalho, Alcione Silva de
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Chagas disease ,Citotoxina ,Agentes antineoplásicos ,Genotoxicidade ,tividade tripanocida ,Agentes tripanocidas ,Derivados nitro-heterocíclicos ,Estudo toxicológico ,Chagas, Doença de ,Cytochrome P450 genes ,Doença de Chagas ,Toxicological study ,Nitro-heterocyclic derivatives ,Genes do citocromo P450 ,CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::MUTAGENESE [CNPQ] ,Trypanocidal activity - Abstract
Submitted by Boris INFORMAT (boris@uerj.br) on 2021-04-26T01:12:00Z No. of bitstreams: 1 Francisco do Vale Chaves e Mello Tese completa.pdf: 4039718 bytes, checksum: 916228d220c6db3640e099055a1b5620 (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-26T01:12:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francisco do Vale Chaves e Mello Tese completa.pdf: 4039718 bytes, checksum: 916228d220c6db3640e099055a1b5620 (MD5) Previous issue date: 2017-07-27 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Chagas disease is a tropical, infectious and neglected disease that affects mostly poor regions of developing countries, infecting thousands of people every year. The lack of a safe and effective pharmacological treatment also contributes to the maintenance of the Chagas disease. The Institute of Pharmaceutical Technology, Oswaldo Cruz Foundation, synthesized new bioactive substances in order to develop a safe and effective alternative to the available treatment. They are: PNING 43-14 (ethyl-1-(1-methyl-4-nitro-1H-imidazol-5-yl)-1H-1,2,3-triazole-4-carboxylate), PNING 47-13 (4-cyclopropyl-1-(1-methyl-4-nitro-1H-imidazol-5-yl)-1H-1,2,3-triazole) and PNING 39-14 (1-(1-methyl-4-nitro-1H-imidazol-5-yl)-4-(4-pentylphenyl)-1H-1,2,3-triazole). The aim of this study was to assess the trypanocidal, cytotoxic and genotoxic activities of new nitro-heterocyclic derivatives, and the cytochrome P450 genes expressed, through the treatment of in vitro cell cultures models. The nitro-heterocyclic derivatives showed trypanocidal activity in the treatment (from 5.0 g/mL) of axenic amastigote evolutive form of Trypanosoma cruzi Y strain cell culture, and in the treatment of peritoneal macrophages primary mice cells infected with Trypanosoma cruzi, Y strain cells. In the assessment of cell viability through the colorimetric tests WST-1 and LDH, the nitro-heterocyclic derivatives PNING 43-14 and PNING 47-14 induced damages on high concentrations (500 and 1000 g/mL) and exposure time (48 h), in the treatment of the human hepatocarcinoma cells HepG2, only. The derivative PNING 39-14 induced damage in HepG2 and macrophage RAW 264.7 cells, using low concentrations (5.0 to 100 g/mL) and exposure times (from 3 h), being the most cytotoxic derivative. In the cell death assessment, observed by the annexin V and propidium iodide binding, in the treatment (50 to 1000 g/mL) of RAW 264.7 cells, the derivative PNING 43-14 induced necrosis, while the derivative PNING 39-14 induced apoptosis. In the Salmonella/microsome test, the derivatives induced pair bases substitutions mutations in the treatment of Salmonella enterica TA100 and TA102 strains, and deletions mutations in the TA97 strain, with and without exogenous metabolic activation. In the treatment of strains that overexpress nitroredutases (YG1021) and acetyltransferases (YG1024) enzymes, the derivatives induced cell death, with or without exogenous metabolic activation, mostly by the treatment with the derivative PNING 43-14 (100 to 1000 g/mL). In addition, the derivatives induced (50 to 1000 g/mL; 3 and 24 h) the micronuclei formation in HepG2 and RAW 264.7 cells, in the micronucleus test. In the assessment of cytochrome P450 gene expression in HepG2 cells, the derivatives PNING 43-14 and PNING 47-13 induced the 3A4 gene expression and inhibit the 1A2, 2B6 and 2E1 gene expression, while the derivative PNING 39-14 induced the 1A2, 2B6 and 2E1 gene expression and inhibit the 3A4 gene expression. The gene expression induced by the treatment using the derivative PNING 39-14 is related to cytotoxic and genotoxic positive responses. Despite the toxic positive results, there are lower concentrations of the derivatives that are safe and still hold an important trypanocidal activity. A doença de Chagas é uma doença tropical, infecciosa e negligenciada que atinge principalmente regiões pobres de países em desenvolvimento, infectando milhares de pessoas todo ano. A ausência de um tratamento farmacológico eficaz e seguro contribui para a manutenção da doença. O Instituto de Tecnologia em Fármacos (Farmanguinhos), Fundação Oswaldo Cruz, sintetizou novas substâncias bioativas a fim de desenvolver uma alternativa segura e eficaz ao tratamento disponível. São eles: PNING 43-14 (etil-1-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-1H-1,2,3-triazol-4-carboxilato), PNING 47-13 (4-ciclopropil-1-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-1H-1,2,3-triazol) e PNING 39-14 (1-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-4-(4-pentilfenil)-1H-1,2,3-triazol). O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade tripanocida, citotóxica e genotóxica de novos derivados nitro-heterocíclicos, e os genes do citocromo P450 expressos, através do tratamento de modelos in vitro de cultura de células. Os derivados apresentaram atividade tripanocida no tratamento (a partir de 5,0 g/mL) de cultura axênica de Trypanosoma cruzi, cepa Y, forma amastigota, e de cultura primária de macrófagos peritoneais de camundongo Swiss Webster infectadas com Trypanosoma cruzi, cepa Y. Na análise da viabilidade celular pelos testes colorimétricos WST-1 e LDH, os derivados PNING 43-14 e PNING 47-13 induziram danos nas maiores concentrações (50 e 100 g/mL) e tempo de exposição (48 h), no tratamento de cultura de hepatocarcinoma humano HepG2, somente. O derivado PNING 39-14 induziu danos em células de HepG2 e de macrófagos RAW 264,7, a partir de concentrações (5,0 a 100 g/mL) e tempos de exposição (a partir de 3 h) menores, demonstrando ser mais citotóxico. Na análise da indução de morte celular, observada pela marcação por anexina V e iodeto de propídio, no tratamento (50 a 1000 g/mL) de células RAW 264,7, o derivado PNING 43-14 induziu necrose, enquanto o derivado PNING 39-14 induziu apoptose. No teste Salmonella/microssoma, os derivados induziram mutações de substituição de pares de bases nas linhagens de Salmonella enterica (TA100 e TA102), e deleção de pares de bases (TA97), independente de metabolização exógena, nas maiores concentrações (500 e 1000 g/mL). No tratamento de linhagens que superexpressam enzimas nitroredutases (YG1021) e acetiltransferases (YG1024), induziram morte celular, independente de metabolização exógena, principalmente no tratamento com PNING 43-14 (100 a 1000 g/mL). Os derivados também induziram a formação de células micronucleadas no tratamento (50 a 1000 g/mL; 3 a 24 h) de células HepG2 e RAW 264,7, no teste do micronúcleo. Na análise da expressão de genes do citocromo P450 em células HepG2, os derivados PNING 43-14 e PNING 47-13 induziram a expressão do gene 3A4 e a inibição dos genes 1A2, 2B6 e 2E1, enquanto o derivado PNING 39-14 induziu a expressão dos genes 1A2, 2B6 e 2E1, e a inibição do gene 3A4. A expressão dos genes induzidos pelo tratamento com o derivado PNING 39-14 está mais relacionada a geração de respostas citotóxicas e genotóxicas. Apesar dos resultados tóxicos positivos, existem concentrações menores e seguras que apresentam atividade tripanocida relevante.
- Published
- 2017
6. Investigation of genotoxicity and ecotoxicity of carbon nanospheres
- Author
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Honório, Jaqueline Gonçalves, Felzenszwalb, Israel, Fonseca, Adenilson de Souza da, Granjeiro, Jose Mauro, and Leitão, álvaro Augusto da Costa
- Subjects
Toxicologia ambiental ,Carbon nanospheres ,CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL [CNPQ] ,Carbono Testes de toxicidade ,Nanopartículas ,Carbon nanomaterials ,Nanotoxicology ,Nanomateriais de carbono ,Nanoesferas de carbono ,Nanotoxicologia - Abstract
Submitted by Boris INFORMAT (boris@uerj.br) on 2021-04-26T01:10:05Z No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBLICADA_Jaqueline_Goncalves_Honorio.pdf: 3970195 bytes, checksum: f9fdf1112c9b28c85192516c7a104c7a (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-26T01:10:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBLICADA_Jaqueline_Goncalves_Honorio.pdf: 3970195 bytes, checksum: f9fdf1112c9b28c85192516c7a104c7a (MD5) Previous issue date: 2017-03-23 Last decades several techniques for carbon materials synthesis have been developed aiming to produce new nanostructures. Among these, there are carbon nanospheres (CNS) defined as 50 to 1000 nm diameter spheres. Despite of their excellent performance in various fields as drug delivery, heterogeneous catalysis, encapsulation of support and electrode materials, few data are available about their toxicity. The present work investigated ecotoxicity and genotoxicity of CNS, including evaluation of their synthesis residues, aiming to contribute to product safety data sheets. Physicochemical characterization of CNS produced by chemical vapor deposition method (US 8722007 B2 patent) in a partnership among Petrobras and Brazilian Army Technology Center was performed. A multitrophic level test battery consisted of the following assays was performed: Vibrio fischeri 30min luminescense, Daphnia similis 48h imobility, Ceriodaphnia dubia 48h imobility, Ceriodaphnia dubia 8d reproduction, Danio rerio embryo 96h survival and Grandidierella bonnieroides 10d survival. Biocompatibility of CNS was evaluated throught citotoxicty assays which detect different endpoints as mitochondrial activity by WST-1 kit (Roche Applied Science) and cell membrane damage by LDH kit (Roche Applied Science) and cytokinesis-block micronucleus test using different cell lines (A549, HepG2 and RAW2647). Organic extracts of CNS was analised using citotoxicity assays and Salmonella/microsome assay to verify mutagenic potencial. The CNS particles presented 165 nm mean diameter, size range: 50 to 600nm, surface area of 26 m2/g and the presence of polycyclic aromatic hydrocarbons on their surface. The results obtained for acute exposures of aquatic animals were EC50 38 mg.L-1 to Vibrio fischeri, 25 mg.L-1 to D.similis, 8 mg.L-1, C. dubia and >10g/Kg dry weight sediment to G.bonnieroides. Subchronic exposure of zebrafish embryos showed LC50 >50 mg.L-1 and nonsignificant development alterations. Lastly, the reproduction decreasing of C.dubia presented NOEC 5mg.L-1. Cells incubated with CNS did not present loss of viability measured through mitochondrial activity but showed cell membrane damage without concentration-response relationship. After exposure, the material did not induce the formation of micronuclei in cells, for all strains tested. CNS extracts induced mutagenicity in TA98 and TA100 strains in presence of exogenous metabolization with mutagenic potency of 87 and 38 revertants per milligram of material. No mutagenic response was detected in TA98, TA100, YG1021 and YG1024 strains without exogenous metabolization. Cytotoxic effect was not observed for CNS extracts in A549 cells. Nas últimas décadas, diversas técnicas de síntese de materiais de carbono foram desenvolvidas com o objetivo de produzir novas nanoestruturas. Dentre estas, estão as nanoesferas de carbono (NEsC). As NEsC são definidas como esferas de 50 a 1000 nm de diâmetro e possuem inúmeras aplicações, como por exemplo, suportes para catalisadores e biossensores. No entanto, as interações das NEsC com as diferentes matrizes biológicas ainda são pouco estudadas. Neste trabalho, investigou-se a ecotoxicidade e a genotoxicidade de nanoesferas de carbono, incluindo seus residuos de síntese, com intuito de contribuir na elaboração de ficha preliminar de segurança do produto. Para isso foram verificadas características físico-químicas das NEsC produzidas pela parceria entre a Petrobras e o Centro de Tecnologia do Exército (CTEx), segundo a patente US 8722007 B2. Foi avaliada também a ecotoxicidade aguda e crônica do material a organismos aquáticos presentes na coluna d água e sedimento como o anfípodo estuarino Grandidierella bonnieroides. A biocompatibilidade a células eucarióticas foi analisada por ensaios de citotoxicidade (efeitos em estabilidade de membrana e atividade mitocondrial) e genotoxicidade (micronúcleo) em linhagens de células de pulmão (A549), fígado (HepG2) e macrófagos (RAW264.7). A investigação da toxicidade dos resíduos de síntese foi realizada através de ensaios de mutagenicidade por Salmonella/microssoma e citotoxicidade para células epiteliais alveolares humanas (A549) dos extratos orgânicos de NEsC. As partículas apresentaram distribuição de diâmetros lognormal com variação aproximada de 50 nm a 600 nm, diâmetro médio de partícula de 165 nm, área de superfície 26 m2/g e foram observados hidrocarbonetos policiclicos aromáticos aderidos em suas superfícies, evidenciado pela análise em cromatografia gasosa com acoplamento de espectometro de massas do extrato orgânico. Os resultados de toxicidade aguda mostraram concentrações efetivas para 50% da população, CE50, de 38 mg/L a Vibrio fischeri, 25 mg/L a Daphnia similis, 8 mg/L a Ceriodaphnia dúbia e > 50 mg/L a embriões de Danio rerio e > 10 g/Kg de sedimento (peso seco) para Grandidierella bonnieroides. Também não houveram alterações significativas no desenvolvimento de embriões de D. rerio durante as exposições. O material não induziu perda de viabilidade celular mensurada por WST (atividade mitocondrial), entretanto gerou danos de membrana em ausência de relação concentração-resposta. As NEsC não induziram a formação de micronúcleos em células de todas as linhagens testadas. O extrato orgânico das NEsC apresentou efeito mutagênico na presença de metabolização exógena, para as linhagens TA98 e TA100, apresentando potência mutagênica de 86,6 e 37,5 colônias revertentes por miligrama do material, respectivamente, enquanto que em ausência de ativação metabólica não foi observado este efeito para TA98, TA100, YG1021 e YG1024. Os extratos não apresentaram citotoxicidade a células A549 para ambos os efeitos observados.
- Published
- 2017
7. Study of the repair of lesions induced in Escherichia Coli DNA by ultravioletc radiation (UVC)
- Author
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Silva Júnior, Antonio Carlos Tavares da, Felzenszwalb, Israel, Asad, Nasser Ribeiro, Leitão, álvaro Augusto da Costa, Pinto, Alicia Viviana, Dantas, Flávio José da Silva, and Guaraldi, Ana Luiza de Mattos
- Subjects
raios ultravioleta ,dímeros de pirimidina ,CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOFISICA::RADIOLOGIA E FOTOBIOLOGIA [CNPQ] ,ros singlet oxygen ,8-oxoG ,escherichia coli ,reparo do DNA ,uvc ,efeitos de radiação ,ero ,radiação ultravioleta ,oxigênio singleto - Abstract
Submitted by Boris INFORMAT (boris@uerj.br) on 2021-04-26T01:10:52Z No. of bitstreams: 1 Antonio Carlos T da S Junior.pdf: 5453661 bytes, checksum: 25de8547051d66474fc9316dc0a3b6fd (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-26T01:10:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio Carlos T da S Junior.pdf: 5453661 bytes, checksum: 25de8547051d66474fc9316dc0a3b6fd (MD5) Previous issue date: 2011-12-07 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Didactically, we can divide the ultraviolet radiation (UV) spectrum into three bands: UVA (400 to 320 nm), UVB (320-290 nm) and UVC (290-100 nm). Despite the UVC or far-UV be efficiently filtered by Earth´s ozone layer and its atmosphere, this is one of bands of UV spectrum used to explore the consequences of DNA damages, since the UVC-induced lethality is related to direct damage in genome cells, such as pyrimidine dimers, which are lethal if not repaired. However, it was shown that UVC radiation can generate reactive oxygen species (ROS) such as singlet oxygen (1O2). Although hydroxyl radical ( OH) cause oxidative modifications in DNA bases, some works suggests that 1O2 is also involved in oxidative DNA damage. This ROS is produced by several biological systems and photosensitivity reactions when chromophores are exposed to visible light or excited by UV light, allowing that energy can be transferred to the oxygen being converted to 1O2, which is known to modify guanine residues, generating 8-oxoG, if not repaired can lead to a GC-TA transversion. The objective of this work was to elucidate the ROS involvement in the genotoxic and mutagenic effects generated by UVC radiation, as well as the enzymes involved in the repair process of these lesions in Escherichia coli cells. In the assays, cultures were irradiated with UVC (254 nm, 15 W General Electric germicidal lamp G15T8, USA). Our results show that the use of iron chelators did not affect the UVC-induced lethality. The sodium azide, a 1O2 quencher, protected strains against the genotoxic damage produced by UVC and also decreased the frequency of mutations induced in rifampicin assay. Reversal specific GC-TA was induced more than 2.5 fold in the mutagenesis assay. The deficient strain in the repair protein Fpg, an enzyme that corrects 8-oxoG lesions, had less DNA breakage than the wild strain in electrophoresis alkaline assay. The UVC-induced lethality was increased in mutants transformed with the pFPG plasmid, while representing a decrease in mutagenic induction. There was a reduction in the transformation efficiency with plasmid pUC 9.1 on Fpg-strain compared to wild-type strain. Also there was a lethality increase in the association between fpg and uvrA mutants. These results shows that 1O2 participates in UVC-induced damages through the generation of 8-oxoG lesion, a mutagenic lesion that is repaired by the Fpg protein. Didaticamente, podemos dividir o espectro da radiação ultravioleta (UV) em três faixas: UVA (400 a 320 nm), UVB (320 a 290 nm) e UVC (290 a 100 nm). Apesar do UVC ou UV-curto ser eficientemente filtrado pela camada de ozônio da Terra e sua atmosfera, este é uma das faixas do espectro de UV mais usadas para explorar as consequências de danos causados ao DNA, já que a letalidade induzida por este agente está relacionada aos danos diretos no genoma celular, como as lesões dímero de pirimidina, que são letais se não reparadas. Contudo, demonstrou-se que a radiação UVC pode gerar espécies reativas de oxigênio (ERO), como o oxigênio singleto (1O2). Embora, o radical hidroxil ( OH) cause modificações oxidativas nas bases de DNA, alguns trabalhos indicam que o 1O2 também está envolvido nos danos oxidativos no DNA. Esta ERO é produzida por vários sistemas biológicos e reações fotossensibilização, quando cromóforos são expostos à luz visível ou são excitados pela luz UV, permitindo que essa energia possa ser transferida para o oxigênio sendo convertido em 1O2, que é conhecido por modificar resíduos de guanina, gerando 8-oxoG, que caso não seja reparada pode gerar uma transversão GC-TA. O objetivo deste trabalho foi o de elucidar a participação de ERO nos efeitos genotóxicos e mutagênicos gerados pela radiação UVC, assim como as enzimas envolvidas no processo de reparação destas lesões em células de Escherichia coli. Nos ensaios as culturas foram irradiadas com o UVC (254 nm; 15W General Electric G15T8 germicidal lamp, USA). Nossos resultados mostram que o uso de quelantes de ferro não alterou a letalidade induzida pelo UVC. A azida sódica, um captador de 1O2, protegeu as cepas contra os danos genotóxicos gerados pelo UVC e também diminuiu a frequência de mutações induzidas no teste com rifampicina. A reversão específica GC-TA foi induzida mais de 2,5 vezes no ensaio de mutagênese. A cepa deficiente na proteína de reparo Fpg, enzima que corrige a lesão 8-oxoG, apresentou menos quebras no DNA do que a cepa selvagem no ensaio de eletroforese alcalina. A letalidade induzida pelo UVC foi aumentada nos mutantes transformados com o plasmídeo pFPG, ao mesmo tempo que representou uma redução na indução mutagênica. Houve dimuição na eficiência de transformação com plasmídeo pUC 9.1 na cepa fpg quando comparado a cepa selvagem. Assim como, um aumento da sensibilidade ao UVC na associação entre mutantes fpg e uvrA. Estes resultados mostram que o 1O2 participa dos danos induzidos pelo UVC, através da geração da lesão 8-oxoG, uma lesão mutagênica, que é reparada pela proteína Fpg
- Published
- 2011
8. Involvement of base excision repair enzymes in restoring ultraviolet A and stannous chloride induced lesions in Escherichia coli
- Author
-
Motta, Ellen Serri da, Mattos, José Carlos Pelielo de, Zamith, Helena Pereira da Silva, Leitão, álvaro Augusto da Costa, Asad, Nasser Ribeiro, and Dantas, Flávio José da Silva
- Subjects
Base excision repair ,Stannous chloride ,Radiação ultravioleta A ,CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOFISICA::RADIOLOGIA E FOTOBIOLOGIA [CNPQ] ,Escherichia coli ,Cloreto estanoso ,Ultraviolet radiaton A ,Estanho ,Reparo por excisão de bases - Abstract
Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-06T20:52:35Z No. of bitstreams: 1 Ellen Serri da Motta.pdf: 3123994 bytes, checksum: 875973e718a730fafc4b492a32e4054f (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-06T20:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ellen Serri da Motta.pdf: 3123994 bytes, checksum: 875973e718a730fafc4b492a32e4054f (MD5) Previous issue date: 2010-03-30 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Stannous chloride (SnCl2) and ultraviolet radiation A (UVA) are able to induce lesions in different cellular structures, including DNA, manly through ROS generation. The aim of this work was to study the mutagenesis and repair of lesions induced by the association of UVA (pre treatment) with SnCl2. It was evaluated the action of base excision repair (BER) enzymes in Escherichia coli (E. coli) by alkaline gel electrophoresis and bacterial survival. It was also evaluated the SoxRS system induction by chromotest and mutagenesis through the Ames test. According to the results: i) UVA induced DNA strand breaks in all strains and fpg-nfo and fpg mutants showed greater delay in the repair of lesions; ii) SnCl2 induced more breaks than UVA and nfo and fpg mutants showed more difficult to repair the damage; iii) UVA + SnCl2 caused more breaks than the SnCl2 and nfo and fpg mutants also showed a slowest repair of injuries; iv) UVA did not inactivate any bacterial strains tested; v) nfo and fpg strains were more sensitive to SnCl2; vi) UVA + SnCl2 caused higher mortality in all strains tested, when compared to SnCl2, and, again, nfo and fpg mutants were the most sensitives to the treatment with both agents; vii) the transformation of nfo mutant with the plasmid pBW21 (nfo+) and fpg mutants with plasmid pFPG (fpg+) increased the survival of the strains to SnCl2 and UVA + SnCl2 treatments; viii) SnCl2 was able to induce SoxRS system; ix) SnCl2, UVA + SnCl2 and UVA did not induce mutagenesis; x) damage repair seems to be preferentially performed by Fpg and Nfo proteins. O cloreto estanoso (SnCl2) e a radiação ultravioleta A (UVA) são agentes que lesam diversas estruturas celulares, inclusive o DNA, principalmente pela geração de espécies reativas de oxigênio. O objetivo deste trabalho foi estudar a mutagênese e o reparo das lesões produzidas pela combinação do UVA, na condição de préiluminação, com o SnCl2. Avaliou-se a ação de enzimas do reparo por excisão de bases (BER), em Escherichia coli (E. coli), por eletroforese em gel alcalino de agarose e sobrevivência bacteriana. Também se estudou a indução do sistema SoxRS pelo cromoteste, e a mutagênese pelo teste de Ames. De acordo com os resultados: i) o UVA induziu quebras no DNA das cepas testadas e os mutantes fpgnfo e fpg apresentaram maior retardo no reparo das lesões; ii) o SnCl2 induziu mais quebras que o UVA e os mutantes nfo e fpg mostraram maior dificuldade em reparar as lesões; iii) o UVA+SnCl2 provocou mais quebras que o SnCl2 e os mutantes nfo e fpg também apresentaram maior lentidão no reparo das lesões; iv) o UVA não inativou as cepas testadas; v) as cepas nfo e fpg foram as mais sensíveis ao SnCl2; vi) o UVA+SnCl2 provocou maior letalidade em todas as cepas testadas, em relação ao SnCl2, e os mutantes nfo e fpg também foram os mais sensíveis ao tratamento com ambos os agentes; vii) a transformação dos mutantes nfo com o plasmídio pBW21 (nfo+) e dos mutantes fpg com o plasmídio pFPG (fpg+) aumentou a sobrevivência das cepas aos tratamentos com SnCl2 e UVA+SnCl2; viii) o SnCl2 induziu o sistema SoxRS; ix) o SnCl2, UVA e UVA+SnCl2 não induziram mutagênese; x) o reparo das lesões parece ser preferencialmente realizado pelas proteínas Fpg e Nfo.
- Published
- 2010
9. Iron-limited condition modulates biofilm and adhesive porpoerties in enteroaggregative Escherichia coli
- Author
-
Alves, Juliana Rodrigues, Ignacio, Ana Claudia de Paula Rosa, Asad, Lídia Maria Buarque de Oliveira, Hirata Júnior, Raphael, Leitão, álvaro Augusto da Costa, and Pacheco, Ana Beatriz Furlanetto
- Subjects
Aderências ,Adherence ,Iron ,Biofilm ,Escherichia coli ,Biofilme ,CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA::MICROBIOLOGIA APLICADA [CNPQ] ,Ferro - Abstract
Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:17:00Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Mestrado em Microbiologia.pdf: 4655512 bytes, checksum: b3dbda3167b7024ad79fa12990038d7b (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:17:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Mestrado em Microbiologia.pdf: 4655512 bytes, checksum: b3dbda3167b7024ad79fa12990038d7b (MD5) Previous issue date: 2009-04-28 Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro Escherichia coli enteroaggregative (EAEC) can cause persistent or acute diarrhea. It is characterized by the aggregative adherence pattern on HEp-2 cells, with the presence of bacteria aggregates like stacked bricks. Many strains have the capacity to produce siderophores, low-molecular-mass compounds that capture iron under conditions of low concentration of this element. The iron is an essential microelement to bacteria, because is used as cofactor of enzymes involved at importants cellular processes. Mareover, the iron can participate of reactive oxygen species production (ERO) by Fenton reaction. At this study, we analyzed the effects of low iron availability mediated by the chelator 2,2-dypiridyl at adhesives properties and biofilm formation of prototype EAEC 042 strain and EAEC clinical isolates. All strains showed a decreased adherence to HEp-2 and T84 cells under iron restriction, suggesting that iron homeostasis is important to adherence, the first step of EAEC pathogenesis. Besides, filament growth was observed at this condition. The study of biofilm formation revealed differences among the prototype EAEC 042 strain and the clinical isolates. While the prototype strain showed a decreased biofilm formation when under iron restriction, the clinical isolates showed an increase of this process. The capacity of thiourea, a hydroxyl radical scavenger, to revert the effects of iron restriction, suggests the occurrence of oxidative stress at the chelator presence. Our data show that iron homeostasis is important not only to bacterial growth, but also for protection against oxidative stress, a condition that also can occur in vivo, during the establishment of infections, through the action of neutrophiles and activated macrophages. Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) pode causar diarréia aguda ou persistente. É caracterizada por seu padrão de aderência agregativa em células HEp-2, em que há presença de agregados bacterianos com aspecto de tijolos empilhados. Muitas cepas têm a capacidade de produzir sideróforos, moléculas de baixo peso molecular especializadas na captação de ferro, em condições de baixa concentração deste elemento. O ferro é um microelemento essencial para bactérias, pois é utilizado como cofator de enzimas envolvidas em processos celulares fundamentais. Além disto, pode participar da geração de espécies reativas de oxigênio (ERO) através da reação de Fenton. No presente estudo, analisamos os efeitos da baixa disponibilidade de ferro, mediada pelo quelante 2,2-dipiridil, nas propriedades adesivas e formação de biofilme da cepa protótipo 042 e de cepas clínicas de EAEC. Todas as cepas apresentaram diminuição da aderência às células HEp-2 e T84 quando cultivadas em níveis restritos de ferro, mostrando que a homeostasia do ferro é importante para a aderência, primeira etapa da patogênese de EAEC. Além disso, houve formação de filamentos bacterianos nessa condição. O estudo da formação de biofilme apresentou resultados diferentes da cepa protótipo em relação às cepas clínicas, sugerindo uma relevante diferença entre elas. Enquanto a cepa protótipo teve sua capacidade de formar biofilme diminuída em níveis restritos de ferro, as cepas clínicas apresentaram maior formação dessa estrutura. A capacidade da tiouréia, um captador de radical hidroxil, de reverter os efeitos observados com a restrição de ferro, sugerem a ocorrência de estresse oxidativo na presença do quelante. Nossos dados mostram que a homeostasia do ferro não é importante somente para o crescimento bacteriano, mas também para a proteção contra o estresse oxidativo, condição esta que também pode ocorrer in vivo, durante o estabelecimento de infecções, devido à ação de neutrófilos e macrófagos ativados.
- Published
- 2009
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