Search

Antler velvet polypeptide (VAP) is a prominent bioactive component of antler velvet. Whereas uncharacterized crude extracts have typically been used in pharmacological studies, in this study, the velvet polypeptide was isolated and purified by acid water extraction, ethanol precipitation, ammonium sulfate fractionation and precipitation, and chromatography, progressively. Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were induced with [H.sub.2][O.sub.2] followed purified polypeptide treatment. Cell viability was evaluated by MTT assay. The apoptosis of cells was detected by fluorescence microscopy and flow cytometry. A cell analyzer was used to measure the mitochondrial membrane potential. The intracellular reactive oxygen species (ROS) levels were determined by flow cytometry. Oxidative stress related biochemical parameters were detected, and the expression of apoptosis-related proteins was examined by Western blot analysis. The results indicated that a 7.0 kDa polypeptide (VAP II) was isolated from antler velvet. VAP II enhanced cell viability, decreased cell apoptosis, reversed depolarization of mitochondrial membrane potential, decreased ROS levels, inhibited oxidative stress, and regulated the downstream signaling apoptotic cascade expression caused by [H.sub.2][O.sub.2]. The protective effects of VAP II on HUVECs suggests a potential strategy for the treatment of cardiovascular disease. Key words: antler velvet polypeptides, oxidative stress, antioxidant, apoptosis. Le polypeptide de bois de velours (VAP pour << antler velvet polypeptide >>) est un important compose bioactif des bois de velours. Alors que des extraits bruts non caracterises ont habituellement ete utilises dans le cadre d'etudes pharmacologiques, dans cette etude, nous avons isole et purifie le polypeptide de velours par une extraction acide-eau, la precipitation dans l'ethanol ainsi que le fractionnement et la precipitation a l'aide de sulfate d'ammonium, avec le passage progressif dans une colonne de chromatographie. Nous avons obtenu des cellules HUVEC (pour << human umbilical vein endothelial cells >>) par une induction l'aide de [H.sub.2][O.sub.2] suivie d'un traitement de purification des polypeptides. Nous avons evalue la viabilite des cellules l'aide du test MTT. Nous avons decele les cellules apoptotiques a l'aide de la microscopie par fluorescence et de la cytometrie en flux. Nous avons utilise un analyseur de cellules pour mesurer le potentiel des membranes mitochondriales. Nous avons mesure les derives reactifs de l'oxygene (ou ROS pour << reactive oxygen species >>) intracellulaires par cytometrie en flux. Nous avons detecte les parametres biochimiques lies au stress oxydatif et etudie l'expression des proteines liees a l'apoptose a l'aide de la technique d'immunobuvardage de Western. Les resultats ont revele l'isolation d'un polypeptide de 7,0 kDa (VAP II) partir de bois de velours. Le VAP II pourrait entrainer une augmentation de la viabilite des cellules, une attenuation de l'apoptose cellulaire, la depolarisation inverse du potentiel des membranes mitochondriales, diminuer les taux de ROS, inhiber le stress oxydatif et assurer la regulation de l'expression de la cascade de la signalisation apoptotique causee par le [H.sub.2][O.sub.2] en aval. Les effets protecteurs du VAP II contre les lesions des cellules HUVEC ont permis d'obtenir une strategie eventuelle dans le traitement de la maladie cardiovasculaire. [Traduit par la Redaction] Mots-cles : polypeptide de bois de velours, stress oxydatif, antioxydant, apoptose., Introduction There has recently been a surge of interest in the benefits from the natural products used in traditional and herbal medicines. To date, the majority of studies conducted worldwide [...]