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Introducción. La replicación del virus del dengue se ha considerado principalmente citoplásmica; sin embargo, en diversos estudios se ha informado que algunos flavivirus pueden utilizar factores intranucleares como parte de la maquinaria que utilizan para aumentar la capacidad de infección en la célula huésped. En este trabajo se describen las alteraciones a nivel nuclear en células infectadas con dengue, probablemente involucradas en procesos de replicación viral. Objetivo. Presentar las observaciones ultraestructurales de células C6/36 de Aedes albopictus infectadas con el virus del dengue de tipo 2. Materiales y métodos. Se infectaron células C6/36 con suero de un paciente con diagnóstico de dengue 2; posteriormente, se mantuvieron en medio de cultivo durante 10 días y se evaluó el efecto citopático. Las células se procesaron para los ensayos de inmunofluorescencia y microscopía electrónica de transmisión, con el fin de hacer el estudio ultraestructural. Resultados. Los ensayos de inmunofluorescencia confirmaron la presencia de la proteína E viral asociada con sincitios celulares en el cultivo. En el estudio ultraestructural, las células infectadas tenían estructuras vesiculares y tubulares, y cisternas dilatadas del retículo endoplásmico en el citoplasma. Las partículas virales se encontraron exclusivamente en vacuolas localizadas en el citoplasma. Los núcleos de los sincitios celulares contenían estructuras de membrana dispuestas en forma circular y, en algunos casos, dichos sincitios presentaban lisis. En ningún caso se observaron partículas virales en el núcleo. Conclusiones. No se habían reportado alteraciones ultraestructurales en los núcleos de células infectadas con el virus del dengue detectadas mediante técnicas de microscopia electrónica. Es probable que tales modificaciones estén asociadas con procesos intranucleares de replicación como un mecanismo alternativo. Introduction: Dengue virus replication has been considered mainly cytoplasmic, however, studies indicate that some flaviviruses may use the intranuclear pathway as part of the machinery that the virus uses to increase infection capacity in the host cell. This paper describes alterations at nuclear level in the cell infected with dengue, which are likely involved in the virus replication processes. Objective: This paper addresses the ultrastructural observations of C6/36 cells of the Aedes albopictus mosquito infected with dengue virus type 2. Materials and methods: C6/36 cells were infected in culture medium with the serum of a patient positively diagnosed for dengue 2. Subsequently, the cells were incubated for 10 days and the cytopathic effect was assessed. The cells were processed for immunofluorescence assays and transmission electron microscopy. Results: The immunofluorescence assays confirmed the presence of viral protein E associated with cellular syncytia in the culture. In the ultrastructural study, the infected cells showed vesicular-tubular structures and dilated cisterns of the endoplasmic reticulum at the cytoplasmic level. Viral particles were found exclusively in cytoplasm localized within the vacuoles. Nuclei of cellular syncytia showed membrane structures arranged in a circular shape and, in some cases, these syncytia displayed lysis; in no case viral particles were observed at the nuclear level. Conclusions: The ultrastructural alterations of nuclei in cells infected with the dengue virus using electron microscopy techniques had not been reported before, as far as we know. It is likely that such modifications are associated with replicative processes at an intranuclear level as an alternate replication mechanism.

El panorama epidemiológico del dengue ha empeorado durante la última década. Las dificultades para prevenir su transmisión, así como la ausencia de una vacuna o tratamiento específico, lo convierten en un riesgo que desafía las medidas de salud pública y desborda la capacidad de los centros de salud y los sistemas de investigación a muchos niveles. Actualmente, la mayoría de los estudios sobre la patogenia de la infección centran su atención en la respuesta inmunitaria de las células T casi exclusivamente en infecciones secundarias y están dirigidos a identificar los mecanismos implicados en el desarrollo de la permeabilidad vascular y de los eventos hemorrágicos que lo acompañan. En este reporte se describe el caso de una menor de 45 días de edad con signos clínicos de dengue grave, cuyo diagnóstico se confirmó por reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa en muestras de tejido post mórtem y por herramientas de apoyo diagnóstico de inmunohistoquímica, las cuales detectaron antígenos virales en todos los órganos obtenidos en la necropsia. Este caso subraya la importancia del estudio de las infecciones primarias asociadas a dengue grave, particularmente en niños, en quienes es más probable el desarrollo de la forma grave de la enfermedad sin una infección previa, y, además, pone de relieve la importancia de un diagnóstico que no se limite a las muestras de tejido hepático en el estudio de la patogenia de la infección viral.

ResumenAntecedentesEl virus del dengue afecta distintos órganos, pero se ha determinado que el hígado es el principal blanco de acción y en donde ocurre la mayor severidad del daño. Existen pocos estudios sobre los cambios histológicos durante la infección por dengue.ObjetivosAnalizar las alteraciones histopatológicas post-mortem en hígados de pacientes que presentaron la forma grave del dengue.MétodosSe revisaron los cortes de hígado de 20 pacientes con dengue severo y se realizaron coloraciones y pruebas para glucógeno.ResultadosEncontramos pérdida de glucógeno citoplasmático en todos los casos analizados y la presencia de glucógeno intranuclear en dos de ellos.ConclusionesEn este estudio se reporta por primera vez la presencia de masas de glucógeno intranuclear en hepatocitos de dos niños fallecidos con dengue grave.AbstractBackgroundDengue virus affects various organs, but the liver is the main target of damage and where the most severe damage can occur. There are few studies on the histological changes in the liver during dengue infection.AimsTo analyze the histopathological post-mortem alterations in livers from patients with severe dengue.MethodsWe revised serial liver sections, which were stained and tested for glycogen, from 20 patients with severe dengue.ResultsWe found loss of cytoplasmic glycogen in all cases analyzed and the presence of intranuclear glycogen in two of them.ConclusionsThis is the first report of the presence of intranuclear glycogen masses during severe dengue.

La cucha real (Panaque nigrolineatus) es endémica de las cuencas del Orinoco y Amazonas. La información relacionada con el sistema visual de esta especie es muy escasa, a pesar de ser un sentido fundamental en la interacción del individuo con su ambiente. Los especímenes se clasificaron en dos grupos en base a su tamano corporal: pequenos (longitud estándar (media ± DE) de 5.92 ± 1.43 cm y peso promedio de 8.50 ± 6.8 g) y grandes (longitud estándar (media ± DE) de 15.9 ± 0.69 cm y peso promedio de 142.48 ± 18.71 g). En los ejemplares pequenos, el ojo presentó una morfología redondeada, y en los de mayor tamano presentó una morfología ligeramente alargada. Se obtuvieron cortes histológicos de 7 μηι que fueron coloreados con las técnicas H&E y Orceína. El tamano relativo del ojo fue mayor en los ejemplares pequenos (6.46 %) que en los de mayor tamano (4.55 %). El espesor de la córnea de los grupos evaluados, presentó variaciones morfométricas significativas, entre su espesor central y periférico. La esclera presentó tejido conectivo denso. Los individuos de mayor tamano corporal tienen una esclera significativamente más gruesa tanto en la región lateral como en la región posterior. Algo similar ocurre con el espesor del iris. La pupila presentó morfología omega. En el cristalino fueron evidenciadas interdigitaciones celulares ubicadas en las regiones laterales. La retina de P. nigrolineatus está compuesta por siete capas. No existen diferencias significativas entre el espesor de la retina de los dos grupos evaluados de P! nigrolineatus. Se observaron de 10 a 12 papilas del nervio óptico en la retina de P. nigrolineatus cuyo diámetro oscila entre 24.57 y 131.90 μηι. Teniendo en cuenta el análisis histológico y morfométrico del ojo de P. nigrolineatus, esta especie presenta adaptaciones orientadas a suplir los requerimientos visuales de organismos bentónicos que habitan ecosistemas con cuerpos de agua turbios, de baja luminosidad, corrientes rápidas y estructuralmente complejos.

Paracheirodon axelrodi es el pez ornamental que mas se exporta en Colombia. Sin embargo, se desconocen varios aspectos de su biologia basica. Se estudio la histologia del tracto digestivo. Se sacrificaron 15 ejemplares (MS 222, 0,5 g/L), fijados en formaldehido al 4 % y decalcificados con acido nitrico 7 %. Se siguio el procedimiento para H&E. El tracto digestivo de P. axelrodi presento cuatro capas constitutivas: mucosa, submucosa, muscular y serosa. La mucosa de la boca presento un epitelio escamoso estratificado no queratinizado con celulas caliciformes y sin botones gustativos, una submucosa de tejido conectivo laxo y una capa de musculo estriado esqueletico. Los dientes son conicos y abundantes. La capa serosa a lo largo del tracto digestivo es delgada compuesta de tejido conectivo laxo. La capa mucosa, submucosa y muscular del esofago posee la misma conformacion tisular de la boca, sin embargo, la capa muscular presenta dos orientaciones. La mucosa del estomago esta compuesta por epitelio cilindrico simple con glandulas gastricas, submucosa de tejido conectivo laxo y una capa de musculo liso en dos orientaciones. Las capas del intestino exhi-bieron una composicion tisular similar a la del estomago, sin glandulas gastricas. La mucosa presento celulas caliciformes especialmente hacia la region posterior y un aumento en la longitud de los pliegues intestinales. La conformacion tisular y morfologica del tracto digestivo de P. axelrodi lo ubica como un pez de habitos alimenticios carnivoros pero de pequenas presas.

Tuberculosis (TB) is an important disease that causes thousands of deaths around the world. Resistance against antitubercular available drugs has been reported; so, research on new effective antimycobacterial molecules is needed. Antimycobacterial activity of three lignans and two synthetic hydrazones was assessed againstMycobacterium tuberculosisH37Rv by antimycobacterial microdilution assay (TEMA). An oxadiazoline (AC451) and a lignan (ethoxycubebin) were the most active compounds (MIC 6.09 and 62.4 μM, resp.). Several changes in mycolic acid profile of treated bacteria were detected with both compounds by mass spectrometry analysis. Additionally, the level of reduction of mycolic acids in ethoxycubebin treatment was correlated to disruption in bacterial morphology.

Contribucion de los autores: Jorge Rivera: seleccion y analisis del caso, procesamiento de las muestras para el estudio inmunohistoquimico y escritura del manuscrito Marcela Neira: procesamiento de las muestras para el estudio inmunohistoquimico Ladys Sarmiento: analisis del caso, revision y edicion del manuscrito Edgar Parra: diagnostico histopatologico mediante microscopia de luz convencional Maria Leonor Caldas: revision y edicion del manuscrito Virus de la influenza

La reconstrucción in vitro del ciclo de vida de Giardia lamblia es un excelente instrumento para el estudio de la biología molecular del parásito. El presente trabajo pretende contribuir al desarrollo de algunas técnicas por las cuales se puede definir mejor un modelo de diferenciación celular del parásito. El estudio presenta un protocolo de enquistación in vitro y establece un método para el aislamiento y la purificación de los quistes producidos, cuyas características morfológicas, por microscopía de luz, coinciden con las de los quistes obtenidos in vivo. Se estudió el mapa de las proteínas de G. lamblia por medio de electroforesis bidimensional de alta resolución y de electroforesis en una dimensión. Estos estudios mostraron que la mayoría de las proteínas del parásito son de carácter ácido. Se amplió, con base en ese resultado, la resolución de la región ácida por medio de un isoelectroenfoque de pH 4-7 en la primera dimensión. Se encontraron diferencias en la expresión de las proteínas durante el proceso de enquistación. Se obtuvieron, además, imágenes por microscopía de luz y electrónica de transmisión que permitieron observar morfológica y ultraestructuralmente las células producidas durante el proceso de la enquistación.

Using a cytochemical technique, we evaluated the levels of Ca2+-ATPase activity in the plasmatic and in the parasitophorous vacuole membrane through the different developmental stages of the Plasmodium falciparum parasitised erythrocyte. We found that the activity is detectable and remains unaltered in the plasma membrane throughout the 48 h cell cycle. However, in the parasitophorous membrane, although the activity was very similar to that measured in the plasma membrane of the young stages (younger than 20-h-old parasites), it diminished gradually with maturation and in schizonts it was almost undetectable. These data suggest that the plasma membrane Ca2+-ATPase is important in the maintenance of a low erythrocyte cytoplasmic Ca2+ concentration, and that in addition it could be a way to supply the vital cation to the parasite at the beginning of the infection, when other transport mechanisms have not yet developed.

The epidemiological situation of dengue has worsened over the last decade. The difficulties in preventing its transmission and the absence of a vaccine or specific treatment have made dengue a serious risk to public health, health centers and research systems at different levels. Currently, most studies on the pathogenesis of dengue infection focus on the T-cell immune response almost exclusively in secondary infections and are aimed at identifying the mechanisms involved in the development of vascular permeability and bleeding events that accompany the infection. This report describes the case of a baby girl less than 45 days of age with clinical signs of severe dengue, whose diagnosis was confirmed by reverse transcription polymerase chain reaction in post-mortem tissue samples and by the ancillary diagnostic use of immunohistochemistry, which detected viral antigens in all organs obtained at autopsy. This case highlights the importance of studying primary infections associated with severe dengue, particularly in children, who are more likely to develop the severe form of the disease without previous infection, and it further stresses the importance of a diagnosis that should not be based solely on the examination of liver tissue samples when studying the pathogenesis of the viral infection.

Se realizó un análisis morfométrico de células dendríticas de piel, que incluyó la determinación de la cantidad y el área ocupada, empleando un anticuerpo anti-S100 en biopsias de pacientes con diferentes tipos de lepra. El análisis reveló las diferencias entre los pacientes que presentaban una mejor respuesta inmune al bacilo, reflejada en una mayor cantidad de células dendríticas en los casos de lepra dimorfa tuberculoide y lepra tuberculoide con respecto a aquellos pacientes con lepra dimorfa lepromatosa y lepra lepromatosa.

Influenza is an acute respiratory infection that may be seasonal or pandemic. In 2009 The World Health Organization (WHO) declared an influenza pandemia; 3,876 cases and 239 deaths were reported in Colombia.The morphological changes in lung tissues associated with virus infection H1N1/v09 were described from autopsied victims. Materials and methods. Seventy-five cases were diagnosed by RT-PCR for influenza A H1N1/v09, of which the lungs of 20 were selected for morphological study by light microscopy, optical microscopy, high-resolution transmission electron microscopy and immunohistochemistry.Of the 75 cases, 83% had viral pneumonitis and 17% alveolitis. Complications included intra-alveolar hemorrhage (66%), edema (89%), diffuse alveolar damage (2%), and bacterial co-infection (32%). Morphological changes were as follows: destruction of the alveolar epithelium and interstitium, edema, macrophages with vacuolated cytoplasm,and infiltration of polymorphonuclear leukocytes in the alveolar lumen and interstitium, vacuolization cytoplasmic type I pneumocytes and electronedense bodies in cellular debris in the alveolar lumen, and immunoreactivity of viral antigens in bronchiolar epithelial cells and alveolar infiltrate.The low percentage of bacterial co-infection observed in these cases was a prominent feature, and suggested that the fatal result was probably not associated with secondary bacterial disease (Indicated by previous reports). The tissue lesions were attributed to tissue damage due to viral lesion, as well as the cellular and humoral inflammatory response associated with infiltration by polymorphonucleocytes and macrophages in the interstitium and alveolar lumen.

La confirmación diagnóstica de casos fatales de fiebre amarilla (FA) es esencial en los programas de vigilancia epidemiológica de la entidad, en regiones endémicas. Se evaluó un método inmunohistoquímico para la detección de antígeno viral de FA en cortes de tejido fijados en formo1 e incluidos en parafina. Aplicamos el procedimiento a 59 casos, con criterios clínico-patológicos y epidemiológicos de FA, dos de ellos con aislamiento viral, ocurridos en Colombia entre 1934 y 1992, incluyendo casos típicos y tardíos. La sensibilidad del método fue del 98,30% : 58 casos fueron positivos mientras que un caso con importantes cambios de autólisis fue negativo. Por Otra parte, se seleccionaron 10 hígados con patologías diferentes, incluyendo 4 con hepatitis fulminante por coinfección de virus de la hepatitis B y delta, ninguno de los cuales mostró inmunorreactividad (especificidad: 100%). Estos resultados indican que este método es un recurso útil para la confirmación del diagnóstico histopatológico de la FA.

El pez dulceacuícola P. axelrodi es de gran importancia comercial en la Orinoquía Colombiana y a nivel mundial, pero carece de estudios acerca de su visión. Se utilizaron diez individuos, con longitud total promedio de 2.7 cm (SD= 0.2, n= 20). Se realizaron cortes a 8 μm y se tiρeron con H-E. El tamaρo relativo del ojo es 9.8% (SD= 1.1, n= 20); el cristalino tiene un tamaρo relativo de 64.3% (SD= 4.9, n=20). Una esclerótica con tejido cartilaginoso. La retina está constituida por ocho capas y dos membranas, hay areae centrales en la zona posterior, por lo tanto tiene mayor espesor que la zona lateral. El espesor promedio de las estructuras es: retina lateral: 144.5 μm (SD= 5.4, n= 20), retina temporal: 210.4 μm (SD= 14.8, n= 20); cristalino (esfιrico): dorso-ventral 759.6 μm (SD= 31.7, n= 20) y antero- posterior 763.4 μm (SD= 30.7, n= 20) y cσrnea: 27.6 μm (SD= 4.3, n= 20). El tamaρo relativo del ojo, relacionado con la presencia de areae centrales y una córnea delgada, muestra las necesidades visuales del neón cardenal (cazador) para adaptarse al hábitat, lo que hace necesario tener un sistema visual desarrollado que le permita tener mejor sensibilidad y resolución visual.Histology and morphometry of the eye in the freshwater Paracheirodon axelrodi (Characiformes: Characidae). The visual system of Teleost fishes has a wide range of adaptations. The eye has suffered modifications, mainly towards better sensitivity and visual resolution according to specific environmental conditions. In that way, this organ is so important for survival. In spite of being the most commercialized Orinoquía species, and one of the most important ornamental fish worldwide, there are almost no studies on the communication systems of P. axelrodi (including vision). We studied the eye in ten individuals of P. axelrodi, with a mean total length of 2.7 cm (SD= 0.2, n= 20). We measured eye relative size (TRO) after sacrifice. Heads were processed for hematoxylin-eosin, and 8 μm thick sections were obtained. Images were digitalized for histological identification and morphometrics. The relation between TRO and body length was 9.8% (SD= 1.1, n= 20); lens was spherical with a relative size of 64.3% (SD= 4.9, n= 20). Rete mirabilis choroid was composed mainly by capillaries, while sclera was composed of cartilaginous tissue. Retina with eight layers and two membranes. An areae centrales was observed in the posterior retina. Iris covered by a simple cubic epithelium. Cornea of endothelial tissue with two membranes. Pupil almost circular, with a naso-caudal elongation. Measures of retina thickness were as follows: lateral retina 144.5 μm (SD= 5.4, n= 20), temporal retina 210.4 μm (SD= 14.8, n= 20). Lens measurements were: dorso- ventral 759.6 μm (SD= 31.7, n= 20), antero-posterior 763.4 μm (SD= 30.7, n= 20). Cornea thickness was 27.6 μm (SD= 4.3, n= 20); iris thickness was 18.9 μm (SD= 1.9, n= 20); rete mirabilis choroid 22.2 μm (SD= 3.2, n= 20) and sclera: 15.9 μm (SD= 1.2, n= 20). This species has a typical Teleost eye conformation. The retina was thicker in the posterior area, probably related to the presence of neuron groups. This modification allows for a better sharpness and visual resolution. The TRO, areae centrales in the retina, and thin cornea, suggests the need of a well developed visual system resulting from a predatory diet. Rev. Biol. Trop. 57 (4): 1107-1118. Epub 2009 December 01.

Morphology and cytochemistry of Aedes aegypti's cell cultures (Diptera: Culicidae) and susceptibility to Leishmania panamensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae). The first cellular line of Aedes aegypti was developed by Grace in 1966; afterwards, other cellular lines of this species have been generated. These have been used for the study of pathogenic organisms like viruses, bacteria and parasites, which demonstrates their importance in biomedical applications. This research describes, for the first time, some cytochemical characteristics of A. aegypti cell cultures, that were infected with (MHOM/CO/87CL412) strain of Leishmania panamensis. A morphological study of the cell culture was also carried out. Maintenance of the cell culture, parasites and infection in vitro were carried out in the Laboratory of Entomology, Cell Biology and Genetics of the Universidad de La Salle. The cell cultures infected with the parasite were maintained in a mixture of mediums Grace/L15, supplemented with 10 % fetal bovine serum (FBS) at pH 6.8 and a temperature of 26 degrees C, during 3, 6 and 9 post-infection days. After this, these cell cultures were processed through High Resolution Light Microscopy (HRLM) and Transmission Electron Microscopy (TEM) based on standard protocols defined by the Group of Microscopy and Image Analyses of the Instituto Nacional de Salud. Semi-fine slices of 1 microm colored with toluidine blue were used for the morphological analysis of the culture, and ultra fine cuts of 60 to 90 nm stained with uranyl acetate and lead citrate where used for the ultrastructural study. In addition, PAS and peroxidase staining was carried out in cells fixed with methanol. The morphometric study was analyzed with software ImageJ (NIH). In the semi-fine slices, small cells were observed showing fibroblastic appearance 10.84 +/- 2.54 microm in length and 5.31 +/- 1.26 microm wide; other cells had epithelial appearance with a great peripheral nucleus, voluminous and vacuolated cytoplasm, 23.04 +/- 4.00 microm in length and 13.96 3.70 microm wide. These last ones predominated over the ones with fibroblastic appearance. Regarding the PAS coloration, 7.08% of the cells presented abundant PAS positive cytoplasmatic granules which indicated polysaccharides presence. The peroxidase test gave a negative result. The greatest percentage of infection (18.90%) of one total of 101 cells, turned up by day 6. Some cells analyzed by TEM presented a vacuolated aspect cytoplasm; some contained parasites, other fibrillar material and others were empty. The results indicate that A. aegypti cell culture can support the internalization and transformation of the parasite, which demonstrates the capacity that these cell cultures have to be infected with L. panamensis and to maintain the infection for approximately one week.

We describe the localization of the KMP-11 protein in the Trypanosoma rangeli parasite determined by immunoelectron microscopy using a monoclonal antibody generated against the Trypanosoma cruzi KMP-11 protein. The data reported herein show that the T. rangeli KMP-11 protein is mainly accumulated in the parasite cytoplasm, the coat, the flagellum, and the flagellar pocket. The high degree of sequence homology between the KMP-11 proteins from both parasites suggests that the KMP-11 protein from T. rangeli, like that of T. cruzi, could also be associated with the parasite cytoskeleton.

La primera línea celular de Aedes aegypti fue establecida por Grace en 1966 y desde entonces se han utilizado para el estudio de virus, bacterias y parásitos. En el presente trabajo se describen, por primera vez, algunas características citoquímicas de los cultivos celulares de A. aegypti, infectados con la cepa (MHOM/CO/87CL412) de Leishmania panamensis. También se realizó un estudio morfológico de las células del cultivo. Se observaron 30 células pequeñas con apariencia fibrolastoide de 10.84±2.54 µm de largo y 5.31±1.26 µm de ancho; otras 30 presentaron apariencia epitelioide con 23.04±4.00 µm de largo y 13.96±3.70 µm de ancho; éstas últimas predominaron sobre las de apariencia fibroblastoide. De 113 células, un 7.08%, presentaron abundantes gránulos citoplasmáticos positivos con la coloración de PAS, indicando presencia de polisacáridos. La prueba de peroxidasa dio un resultado negativo. El mayor porcentaje de infección (18.90%), de un total de 101 células, se presentó el día 6. Ultraestructuralmente, las células presentaron un citoplasma con aspecto vacuolado; algunas contenían parásitos, otras material fibrilar y otras estaban vacías. Los resultados indican que los cultivos celulares de A. aegypti pueden ser infectados por L. panamensis y mantener dicho proceso por aproximadamente una semana.Morphology and cytochemistry of Aedes aegypti’s cell cultures (Diptera: Culicidae) and susceptibility to Leishmania panamensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae). The first cellular line of Aedes aegypti was developed by Grace in 1966; afterwards, other cellular lines of this species have been generated. These have been used for the study of pathogenic organisms like viruses, bacteria and parasites, which demonstrates their importance in biomedical applications. This research describes, for the first time, some cytochemical characteristics of A. aegypti cell cultures, that were infected with (MHOM/CO/87CL412) strain of Leishmania panamensis. A morphological study of the cell culture was also carried out. Maintenance of the cell culture, parasites and infection in vitro were carried out in the Laboratory of Entomology, Cell Biology and Genetics of the Universidad de La Salle. The cell cultures infected with the parasite were maintained in a mixture of mediums Grace/L15, supplemented with 10 % fetal bovine serum (FBS) at pH 6.8 and a temperature of 26 ºC, during 3, 6 and 9 post-infection days. After this, these cell cultures were processed through High Resolution Light Microscopy (HRLM) and Transmission Electron Microscopy (TEM) based on standard protocols defined by the Group of Microscopy and Image Analyses of the Instituto Nacional de Salud. Semi-fine slices of 1 µm colored with toluidine blue were used for the morphological analysis of the culture, and ultra fine cuts of 60 to 90 nm stained with uranyl acetate and lead citrate where used for the ultrastructural study. In addition, PAS and peroxidase staining was carried out in cells fixed with methanol. The morphometric study was analyzed with software ImageJ (NIH). In the semi-fine slices, small cells were observed showing fibroblastic appearance 10.84±2.54 µm in length and 5.31±1.26 µm wide; other cells had epithelial appearance with a great peripheral nucleus, voluminous and vacuolated cytoplasm, 23.04±4,00 µm in length and 13.96±3.70 µm wide. These last ones predominated over the ones with fibroblastic appearance. Regarding the PAS coloration, 7.08 % of the cells presented abundant PAS positive cytoplasmatic granules which indicated polysaccharides presence. The peroxidase test gave a negative result. The greatest percentage of infection (18.90 %) of one total of 101 cells, turned up by day 6. Some cells analyzed by TEM presented a vacuolated aspect cytoplasm; some contained parasites, other fibrillar material and others were empty. The results indicate that A. aegypti cell culture can support the internalization and transformation of the parasite, which demonstrates the capacity that these cell cultures have to be infected with L. panamensis and to maintain the infection for approximately one week. Rev. Biol. Trop. 56 (2): 447-458. Epub 2008 June 30.

A morphometric analysis of skin dendritic cells was done on biopsies of patients with different forms of leprosy. An anti S100 antibody was used to determine dendritic cell quantity and extension. Patients with a better immune response to the bacillus showed a greater number of dendritic cells in the cases of dimorphic tuberculoid leprosy and tuberculoid leprosy. This result contrasted with that from patients with dimorphic lepromatous leprosy and lepromatous leprosy.

The reconstruction of Giardia lamblia life cycle in vitro is an excellent tool for the study of the parasite's molecular biology. The present work describes techniques developed that better define parasite differentiation. An encystation protocol is presented along with a method for isolation and purification of the produced cysts. The cyst morphology at the light microscopy level is identical to that of in vivo cysts. A two-dimension protein map obtained by high-resolution electrophoresis indicated that most of the parasite's proteins are acid. Based on this result, the two dimension gel electrophoresis used a pH 4-7 gradient in the first, isoelectric focusing dimension. Differences in protein expression during the stages of encystation were clearly discerned, as well as images of the parasite obtained by light and by transmission electron microscopy that describe the morphological and the ultrastructural changes that occur as the cysts are produced in vitro.

Introducción. La influenza es una infección respiratoria aguda que se presenta de forma estacional y pandémica. En el 2009, la Organización Mundial de Salud (OMS) declaró una pandemia por influenza de tipo A en la que se reportaron en Colombia 3.876 casos de infección, de los cuales 239 fallecieron. Objetivo. Describir los cambios morfológicos asociados a la infección por el virus A H1N1/v09 en tejido pulmonar de autopsias de la pandemia de 2009 en Colombia. Materiales y métodos. Se estudiaron 75 casos con diagnóstico por RT-PCR para el virus A H1N1/v09, de los cuales, 20 fueron seleccionados para el estudio morfológico mediante microscopía convencional de luz, microscopía óptica de alta resolución y electrónica de transmisión e inmunohistoquímica. Resultados. De los 75 casos estudiados, 83 % presentaron pneumonitis viral y 17 % alveolitis. Se observaron complicaciones por hemorragia intraalveolar (66 %) y edema (89 %), daño alveolar difuso (2 %) e infección bacteriana concomitante (32 %). Algunos de los cambios morfológicos observados fueron: destrucción del epitelio alveolary el instersticio, edema, macrófagos con citoplasma vacuolado e infiltración de leucocitos polimorfonucleares en la luz alveolar y el intersticio; vacuolización citoplásmica en neumocitos de tipo I y cuerpos electrodensos en restos celulares en la luz alveolar; inmunorreacción de antígenos virales en el epitelio bronquiolar y en células del infiltrado alveolar. Conclusión. El porcentaje bajo de infección bacteriana concomitante observado en los casos de influenza A H1N1/ v09 en este estudio, es una característica sobresaliente que sugiere que el resultado fatal de la infección, probablemente no esté asociado a una enfermedad bacteriana secundaria, como se ha sugerido en reportes previos. Es probable que las lesiones observadas se puedan atribuir al daño tisular en la respuesta inflamatoria celular y humoral asociada a la infiltración por células poliformonucleares y macrófagos en el intersticio y la luz alveolares, como también por la lesión viral.

El análisis cualitativo de las redes neuronales por histoquímica enzimática se usa comúnmente en los estudios morfológicos tradicionales. Una limitante de este tipo de estudios consiste en la dificultad de obtener resultados cuantitativos. Este artículo presenta dos técnicas originales de procesamiento de imágenes para realizar estudios cuantitativos y un análisis comparativo entre ellas. Los resultados preliminares presentados permiten verificar la utilidad de la metodología aplicada.

La bomba de calcio es una proteína integral de la membrana que regula el calcio libre citoplasmático en concentraciones menores de 0,1mM. En la mayoría de las células eucarióticas está ubicada en la membrana, en el plasmalema o en organelos como el retículo sarcoendoplásmico y los calciosomas. Su actividad está dada por la hidrólisis del ATP, la concentración del ion en el citoplasma y por otros factores que la regulan como la calmodulina, los fosfolípidos y las proteinas-cinasas. Por diferentes métodos, se ha detectado la ATPasa de calcio y su actividad tanto en tejido nervioso central y periférico, como en otros tejidos.

Mediante métodos de citoquímica ultraestructural, se localizó la actividad de ATPasa de Caz+ en membranas de eritrocitos humanos tanto normales como invadidos por Plasmodium falciparum. Para detectar la actividad de esta ATPasa se utilizó un método directo de precipitación con metales pesados, en donde el plomo o el cerio forman un precipitado electrodenso con el fosfato libre, producto de hidrólisis de la enzima, sobre la supeficie de dichas membranas. Este método utiliza un medio de incubación que contiene todos los elementos necesarios para que se desarrolle la reacción enzimática e incluye herramientas bioquímicas, tales como, inhibidores tanto de la ATPasa como de calmodulina que permiten confirmar la especificidad de laactividad deATPasa de Caz+ en un estudio bioquímico con citoquímica ultraestructural.

Merozoite release from infected erythrocytes is a complex process, which is still not fully understood. Such process was characterised at ultra-structural level in this work by labelling erythrocyte membrane with a fluorescent lipid probe and subsequent photo-conversion into an electron-dense precipitate. A lipophilic DiIC16 probe was inserted into the infected erythrocyte surface and the transport of this phospholipid analogue through the erythrocyte membrane was followed up during 48 h of the asexual erythrocyte cycle. The lipid probe was transferred from infected erythrocyte membranes to Maurer’s clefts during merozoite release, thereby indicating that these membranes remained inside host cells after parasite release. Fluorescent structures were never observed inside infected erythrocytes preceding merozoite exit and merozoites released from infected erythrocyte were not fluorescent. However, specific precipitated material was localised bordering the parasitophorous vacuole membrane and tubovesicular membranes when labelled non-infected erythrocytes were invaded by merozoites. It was revealed that lipids were interchangeable from one membrane to another, passing from infected erythrocyte membrane to Maurer’s clefts inside the erythrocyte ghost, even after merozoite release. Maurer’s clefts became photo-converted following merozoite release, suggesting that these structures were in close contact with infected erythrocyte membrane during merozoite exit and possibly played some role in malarial parasite exit from the host cell.