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Les canaux K[indice supérieur +] font partie d'une famille de protéines impliquées dans le passage sélectif des ions K[indice supérieur +] chez tous eucaryotes. Dans le cas du lymphocyte, l'activité de ces canaux est intimement associée au processus d'activation en réponse aux agents mitogéniques. Chez le lymphocyte T humain périphérique, seul le type n a été mis en évidence et il en est de même de la lignée lymphocytaire T Jurkat. Ce type de canal montre une sensibilité aux bloqueurs, tétraéthylammonium (TEA), 4-aminopyridine (4-AP) et la charybdotoxine. La structure du canal est composée de sous-unités [alpha] et [bêta] (4:4). Un profil d'hydropathie montre que la sous-unité [alpha] Kv1.3 possède 6 régions transmembranaires (S1 a S6) et les régions N- et C-terminales sont localisées du côté intracellulaire. Le pore H5 est situé entre les segments S5 et S6. Le segment S4 est responsable de la sensibilité au voltage, tandis que les segments S5 et S6 contribuent à la formation du pore. Le canal Kv1.3 est régulé par phosphorylation impliquant la PKA, la PKC et les PTK.Les sites probables de phosphorylation sont dans la région C-terminale (un site PKA), dans les régions cytosoliques (3 sites PKC) et en N-terminal (un site PTK). Des mutants du canal Kv1.3 (complet, [delta]459-523, [delta]S1S2, [delta]S1S4 et [delta]S2) ont été générés par la technique d'amplification PCR et les produits obtenus ont été clonés dans un vector d'expression eucaryote et transfectés chez la lignée de cellules HEK 293 afin d'étudier la relation structure-activité.Les études électrophysiologiques ont montré que seul le canal Kv1.3 complet et [delta]459-523 reconstituent des canaux K[indice supérieur +] et conservent sensiblement les mêmes propriétés que le canal natif du lymphocyte Jurkat. Des études d'immunolocalisation indirecte ont montré la présence de ces deux canaux à la surface membranaire des cellules HEK 293. Par contre, les mutants [delta]S1S2, [delta]S1S4 et [delta]S2 ne montrent pa

Plusieurs substances connues pour leur propriété d'induire l'arrêt du cycle cellulaire ont été utilisées afin de synchroniser les lymphocytes Jurkat E.6.1 dans le but d'étudier l'implication et l'importance des différentes phases du cycle dans le processus d'activation. Ces substances peuvent être regroupées selon leur site d'action: celles qui arrêtent les cellules en phase G1/S (hydroxyurée, lovastatine, thymidine), celles qui arrêtent les cellules en phase S précoce (aphidicoline, cyclosporine A, rapamycine) et celles qui arrêtent les cellules en phase G2/M (colchicine, cytochalasine B, nocodazole, taxol, vinblastine). Les analyses de cytofluorimétrie ont montré que les cellules Jurkat se distribuent à 45± 7% en phase G1, 43± 8% en phase S et 13± 3% en phase G2/M. Les résultats montrent qu'une synchronisation partielle est obtenue suite à l'utilisation des drogues. La distribution cellulaire est d'environ 25-40% en phase G1, 35-50% en phase S et 5-18% en phase G2/M lorsque l'hydroxyurée (100mM) et la lovastatine (100/µM) sont utilisées. La thymidine n'a pas d'effet. Lorsque des drogues bloquant en phase S sont utilisées, seule l'aphidicoline (15µM) permet un enrichissement à 65% dans cette phase, diminuant à 30% la phase G1 sans changer la distribution de la phase G2/M. Par contre, l'utilisation de cyclosporine A (100nM) et de rapamycine (20nM) augmentent le pourcentage de cellule en phase G1 (60-70%) plutôt que la phase S (20-30%), ce qui a eu comme conséquence la diminution des cellules en phase G2/M (10% et moins). De leur côté, les agents destabilisateurs du cytosquelette ont enrichi la distribution cellulaire en phase G2/M (30-50%). Les études de calcium sur des populations partiellement synchronisées montrent l'implication importante du calcium dans les premières phases du cycle cellulaire. L'effet de la colchicine (10µM) sur la morphologie cellulaire à été étudié par microscopie électronique à balayage. Seulement après 1 heure de traitement, les lymphocyte