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Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 16-06-2017, Esta tesis tiene embargado el acceso al texto completo hasta el 16-12-2018, B cells have two main roles in the adaptive immune response: the generation of antibodies that help neutralizing pathogens and the antigen presentation to T cells. It is believed that B cells mainly acquire antigens by BCR-driven endocytosis, and that phagocytosis of antigens is a process exclusive of professional phagocytic cells, such as macrophages, neutrophils and DCs. However, in this work we show that splenic Follicular naïve B cells are in fact able to phagocytose latex 1-3m size beads coated with anti-IgM by a BCR-driven mechanism mediated by two GTPases of the Ras superfamily: RRas2 and RhoG. We show that phagocytosed antigens are processed and presented to naïve CD4 T cells, inducing their activation. Rras2-/- and Rhog-/- B cells have less capacity to phagocytose antigen, and this effect is more prominent for bigger particles. In consequence, RRas2- and RhoG-deficient B cells induce less CD4 T-cell activation in vitro. We further show that a simple 2-cell culture can mimic an in vivo germinal center reaction. Naïve CD4 T cells stimulated by B cells presenting peptides derived from phagocytic antigens can differentiate into TFH cells. Those in vitro-derived TFH cells express CXCR5 and PD1 and secrete TFH cytokines (IL-4 and low levels of IL-21). In turn, cultured FO B cells with phagocytic abilities differentiate into germinal center B cells. The in vitro derived GC B cells produce class-switched antigen-specific antibodies of high affinity and can differentiate into plasma cells. Importantly, we show that the terminal differentiation depends on how B cells acquire antigen, since it is negligible when it is given in solution or in RhoG-deficient B cells. We further explore the in vivo role of B cell phagocytosis. The success of vaccines commonly rely on the generation of high-affinity class-switched antibodies able to neutralize pathogens. We show that in vivo B cell phagocytosis is important for germinal center generation and antibody production, not only upon immunization with latex beads, but also using a common vaccination adjuvants that generates large immuno-complexes. We propose that antigen phagocytosis by B cells is a mechanism for BCR affinity-discrimination in the GC. Only those B cells carrying high-affinity BCRs are able to phagocytose antigens and receive the TFH costimulus to survive., Las células B tienen dos funciones principales durante la respuesta inmune adaptativa: la producción de anticuerpos capaces de neutralizar patógenos y la activación de linfocitos T mediante la presentación de antígeno. Se cree que la adquisición de antígenos se produce mayoritariamente a través de procesos endocíticos mediados por el BCR, considerándose otros mecanismos alternativos como la fagocitosis exclusiva de células fagocíticas profesionales tales como macrófagos, neutrófilos y células dendríticas. A lo largo de este trabajo mostramos que las células B foliculares también son capaces de fagocitar antígenos a través del BCR en un proceso dependiente de dos GTPasas de las superfamilia Ras: RRas2 y RhoG. Los linfocitos B de ratones Rras2-/- y Rhog-/- son deficientes en dicho proceso fagocítico, siendo su efecto mayor cuanto más grande es la partícula a fagocitar. También mostramos que con un simple cultivo celular de linfocitos T y B naif podemos mimetizar una reacción de centro germinal. Células CD4 naif en cultivo se diferencian a TFH cuando son estimuladas por células B que presentan péptidos derivados de antígenos fagocitados. Estas TFH generadas in-vitro expresan CXCR5 y PD1 además de secretar citoquinas características de las TFH (IL-4 y IL-21). A su vez, estas células B foliculares cultivadas se diferencian a células B de centro germinal. Dichas células B de CG producen anticuerpos antígeno-específicos de alta afinidad con cambio de clase y se diferencian a células de plasma. Curiosamente, la diferenciación completa a centro germinal depende de cómo la célula B adquiere el antígeno, viéndose así inhibida tanto cuando se estimulan con antígeno soluble como cuando las células B son deficientes en RhoG. Asimismo, hemos estudiado la importancia in vivo de la fagocitosis por linfocitos B. Ésta no solamente es importante durante la inmunización con micro-esferas recubiertas de antígeno, sino también cuando se utiliza un adyuvante comúnmente utilizado en vacunas que produce la agregación del antígeno en grandes inmuno-complejos. Consecuentemente, proponemos que el proceso de adquisición de antígeno por fagocitosis puede ser utilizado durante la discriminación entre células B de diferente afinidad dentro del CG dado que solamente aquellas con suficiente afinidad por el antígeno serán capaces de fagocitarlo y así recibir el coestimulo de los linfocitos TFH.