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Sida tuberculata (Malvaceae) is a medicinal plant traditionally used in Brazil as an antimicrobial and anti-inflammatory agent. Here, we aimed to investigate the different extractive techniques on phytochemical parameters, as well as to evaluate the toxicity and antioxidant capacity of S. tuberculata extracts using in silico and in vitro models. Therefore, in order to determine the dry residue content and the main compound 20-hydroxyecdysone (20E) concentration, extracts from leaves and roots were prepared testing ethanol and water in different proportions. Extracts were then assessed by Artemia salina lethality test, and toxicity prediction of 20E was estimated. Antioxidant activity was performed by DPPH and ABTS radical scavenger assays, ferric reducing power assay, nitrogen derivative scavenger, deoxyribose degradation, and TBARS assays. HPLC evaluation detected 20E as main compound in leaves and roots. Percolation method showed the highest concentrations of 20E (0.134 and 0.096 mg/mL of extract for leaves and roots, respectively). All crude extracts presented low toxic potential on A. salina (LD50 41000 mg/mL). The computational evaluation of 20E showed a low toxicity prediction. For in vitro antioxidant tests, hydroethanolic extracts of leaves were most effective compared to roots. In addition, hydroethanolic extracts presented a higher IC50 antioxidant than aqueous extracts. TBARS formation was prevented by leaves hydroethanolic extract from 0.015 and 0.03 mg/mL and for roots from 0.03 and 0.3 mg/mL on egg yolk and rat tissue, respectively (Po0.05). These findings suggest that S. tuberculata extracts are a considerable source of ecdysteroids and possesses a significant antioxidant property with low toxic potential.

O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método espectrofotométrico simples, rápido e reprodutível para a análise de posaconazol na matéria-prima. As condições estabelecidas foram: metanol como solvente extrator, comprimento de onda de 260 nm e espectrofotômetro de duplo feixe Shimadzu, modelo 1800, com cubetas de quartzo de 1 cm. A linearidade foi demonstrada na faixa de concentração de 5,0 a 25,0 μg/mL (r = 0,9999). A reprodutibilidade e a precisão intermediária foram confirmadas pelos baixos valores de desvio padrão relativo (0,49 a 0,82%). A exatidão, avaliada pelo teste de recuperação, foi adequada, com recuperação média de 98,20%. A especificidade e a robustez também foram demonstradas. O teor médio encontrado nas amostras foi de 100,82%. O método proposto foi considerado adequado, principalmente para a análise de rotina em laboratórios de controle de qualidade. Quando comparado com o método por HPLC, não houve diferença estatística, o que torna o método por espectrofotometria UV uma alternativa segura. The aim of this work was to develop a simple, fast and reproducible spectrophotometric method for the analysis of posaconazole in raw material. The established conditions were: methanol as extracting solvent, detection wavelength of 260 nm, Shimadzu double beam spectrophotometer 1800 model with 1 cm quartz cells. Linearity was demonstrated in the concentration range of 5.0 a 25.0 μg/mL (r = 0.9999). Reproducibility and intermediate precision were confirmed by low RSD values (0.49 to 0.82%). Accuracy, evaluated through recovery test, was adequate, with 98.20% of mean recovery. Specificity and robustness were also demonstrated. The mean amount found for samples was 100.82%. The proposed method was considered suitable for the intended purpose, mainly in routine analysis of quality control laboratories. When compared to the previously developed HPLC, no statistical difference was observed, what made the UV spectrophotometric method a reliable alternative.

Erythrina species are used in popular medicine as sedative, anxiolytic, anti-inflammatory, and antihypertensive. In this work, we investigated the chemical composition of extracts obtained from leaves of E. falcata and E. crista-galli. The hypotensive potential of E. falcata and the mechanism of action were also studied. The extracts were obtained by maceration and infusion. The total content of phenolic compounds and flavonoids was estimated by spectrophotometric methods. The chemical constituents were studied performing a chromatographic analysis by UPLC-ESI-MS. For in vivo protocols, blood pressure and heart rate were measured by the invasive hemodynamic monitoring method. Different concentrations of extracts and drugs such as L-NAME, losartan, hexamethonium, and propranolol were administrated i.v.The results of total phenolic contents for E. falcata and E. cristagalli were 1.3193–1.4989mgGAE/mL for maceration and 0.8771–0.9506mgGAE/mL for infusion. In total flavonoids, the content was 7.7829–8.1976mg RE/g for maceration and 9.3471–10.4765 REmg/g for infusion. The chemical composition was based on alkaloids, suggesting the presence of erythristemine, 11-methoxyglucoerysodine, erysothiopine, 11-hydroxyerysodine-glucose, and 11-hydroxyerysotinone-rhamnoside. A potent dose-dependent hypotensive effect was observed for E. falcata, which may be related to the route of -adrenergic receptors.

A estabilidade de medicamentos constitui um tema atual e de grande importância no meio científico. Tem sido constantemente abordada em estudos direcionados à avaliação da qualidade das preparações farmacêuticas. O meropenem, um antibiótico carbapenêmico de amplo espectro de ação, é utilizado como um importante recurso terapêutico para o tratamento de infecções graves. Por ser um agente antimicrobiano ativo e eficaz, de uso clínico em muitos países, tornase necessária a pesquisa mais aprofundada de sua estabilidade, propiciando um maior entendimento dos aspectos que podem influenciar na sua manipulação e armazenamento. O presente trabalho objetiva a avaliação da estabilidade do meropenem em condições de degradação forçada, contemplando a determinação da cinética de degradação, o isolamento e identificação de produtos de decomposição e a determinação da citotoxicidade das amostras degradadas e dos produtos isolados. Amostras de meropenem pó para solução injetável (500 mg) e solução reconstituída em água (50 mg/mL) foram submetidas à degradação térmica em diferentes temperaturas. Para a decomposição ácido-base, soluções aquosas de meropenem a 1,0 mg/mL foram preparadas em HCl 0,1 M e NaOH 0,1 M, e estocadas a 25 °C. As amostras foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência, em sistema de fase reversa. Para o ensaio de determinação cinética, as amostras submetidas à maior temperatura de degradação foram também analisadas por ensaio microbiológico – método de difusão em ágar-cilindros em placas. O isolamento do produto de degradação térmica foi efetuado através da combinação das técnicas de cromatografia em coluna e cromatografia em camada delgada preparativa. Para o produto oriundo de catálise básica, a identificação foi efetuada diretamente na amostra degradada, não havendo a necessidade de prévio isolamento. A elucidação estrutural dos produtos de degradação foi realizada por ressonância magnética nuclear e espectrometria de massas. As amostras degradadas e o produto de catálise básica foram avaliados in vitro quanto ao potencial citotóxico frente a células mononucleares. Para determinação da viabilidade celular, os conteúdos celulares foram avaliados por citometria de fluxo. Os resultados dos ensaios de cinética química indicaram que o meropenem sofre decomposição térmica seguindo reação de primeira ordem. As amostras degradadas apresentaram uma acentuada redução de teor, com formação de produtos de degradação. As técnicas cromatográficas de purificação utilizadas permitiram o isolamento de um produto oriundo da degradação térmica da solução reconstituída. A identificação demonstrou que o mesmo teve uma modificação estrutural extensa, gerada a partir de reações de decomposição passíveis de ocorrer para o derivado carbapenêmico avaliado. Para o produto de degradação básica, verificou-se o rompimento do anel β-lactâmico, em reação característica destes compostos. A avaliação preliminar da citotoxicidade indicou que as amostras ensaiadas apresentam toxicidade celular in vitro após 48 horas de incubação, fornecendo indícios de necessidade de atenção para este aspecto. A totalidade dos resultados obtidos neste trabalho permite a conclusão de que a estabilidade do meropenem é um tema de grande relevância e deve ser considerada na hora da manipulação do produto, de modo a evitar problemas de qualidade oriundos de amostras degradadas e seus produtos de degradação. The stability of pharmaceuticals is a current and important subject in the scientific field. It has been frequently cited in studies related with the quality evaluation of pharmaceutical preparations. Meropenem, a carbapenemic antibiotic with broad spectrum, is used as an important therapeutic agent for the treatment of several infections. Since it is an active and effective antimicrobial, used in many countries, it is necessary the complete research about its stability, providing more knowledge about the aspects that could influence in its handle and storage. The aim of this work is the evaluation of meropenem stability in forced degradation conditions, including the determination of degradation kinetics, the isolation and identification of decomposition products and the citotoxicity evaluation of degraded samples and isolated products. Meropenem powder for injection (500 mg) and reconstituted solution in water (50 mg ml-1) were submitted to thermal degradation. For acid-basic decomposition, meropenem aqueous solution at 1.0 mg ml-1 were prepared in HCl 0.1 M and NaOH 0.1 M, and stored at 25 °C. The samples were analysed by high performance liquid chromatography, in reverse phase system. In the kinetics determination, the samples stored at 45 °C and 90 °C were also evaluated by microbiological assay, applying the cylinder-plate method. The isolation of thermal degradation product was carried out by column chromatography and preparative thin layer chromatography. For the product obtained through basic catalysis, the identification was done directly in the degraded sample, without previous isolation. The structural elucidation of degradation products was performed by nuclear magnetic ressonance and mass spectrometry. The degraded samples and basic catalysis product were evaluated with respect to citotoxic potential in vitro against mononuclear cells. The cellular viability was determined by flow citometry. The results of chemical kinetics indicated that thermal decomposition of meropenem is described by first order reaction. The degraded samples showed a significant reduction in the potency, with formation of degradation products. The chromatographic purification techniques allowed the isolation of one thermal degradation product. For the basic degradation product, it was verified the hidrolysis of β-lactam ring, in a caracterisitc reaction for these compounds. The preliminary citotoxicity evaluation indicated that samples were toxic after 48 hours. The results obtained in this work allowed to conclude that the stability of meropenem is a subject of great importance and should be considered in the handle of the product, in order to avoid quality problems from degraded samples and degradation products.

O gênero Cuphea (Lythraceae) compreende aproximadamente 108 espécies identificadas no Brasil. Vários estudos mostraram que Cuphea spp. têm potencial para atuar principalmente como antimicrobiano, anti-inflamatório, diurético, antihipertensivo e antitumoral. Investigações fitoquímicas indicaram a presença majoritária de compostos polifenólicos. O presente trabalho teve como objetivo investigar a composição química de quatro espécies de Cuphea encontradas no Rio Grande do Sul, avaliar a inibição da enzima conversora de angiotensina (ECA), in vitro, otimizar o método extrativo e validar o método para quantificação da miquelianina em C. glutinosa. Por fim, avaliar a atividade anti-inflamatória, in vitro, com a atividade antiquimiotáxica das espécies de Cuphea, e investigar o potencial antiinflamatório da miquelianina, in vivo, em modelo zebrafish. As análises químicas dos compostos foram realizadas por UHPLC-MS usando ESI-Q-TOF. Os ensaios de inibição da ECA foram determinados com base no método descrito por Tabatabei com algumas modificações, na concentração de 100 ng/mL e os valores foram determinados por experimentos em triplicata. As condições ótimas para a extração de miquelianina das folhas de C. glutinosa foram determinadas utilizando um planejamento fatorial fracionário (PFF) e um planejamento composto central (PCC). O método por UPLC-PDA foi validado, seguindo as diretrizes atuais. A atividade antiinflamatória, in vitro, foi avaliada pela capacidade de C. calophylla, C. carthagenensis, C. glutinosa, C. racemosa, e dos compostos isolados: miquelianina, miricitrina, além do controle positivo indometacina (em concentrações de 0,1 a 10 μg/mL) em inibir a migração de leucócitos pelo método de Boyden. Para atividade anti-inflamatória, in vivo, o indutor inflamatório (LPS) foi injetado no zebrafish por via intraperitoneal e após seis horas, nos grupos controle (PBS-negativo e dexametasona-positiva) e miquelianina foram injetadas as concentrações de 2,5, 7,5 e 15 mg/kg. Os grupos foram mantidos em aquários separados e após 24 horas, os animais foram sacrificados, dissecados e o cérebro congelado (-80ºC). Utilizando o homogenato cerebral, a modulação neuro-inflamatória foi avaliada (kits ELISA IL-1β e TNF-α). Os resultados mostraram 26 compostos polifenólicos, principalmente derivados de quercetina, miricetina e canferol. Desses compostos, dez são descritos no gênero pela primeira vez. A inibição da atividade da ECA apresentou como principais resultados: miquelianina 32,41%, C. glutinosa (31,66%), C. carthagenensis (26,12%) e C. calophylla (23,81%). Os resultados indicaram C. glutinosa como a espécie mais promissora. Assim sendo, a espécie teve a obtenção do seu extrato otimizado com os seguintes parâmetros: planta:solvente 1:60 (m/v), porcentagem de solvente etanol 38%, tempo de 60 minutos, cinco extrações e tamanho de partícula ≤ 180 μm. O método apresentou excelente seletividade, linearidade, precisão (repetibilidade e precisão intermediária abaixo de 2,18 e 1,40%, respectivamente) e acurácia (recuperação média de 90,6%). O conteúdo médio de miquelianina em C. glutinosa foi de 1,03%. A capacidade dos extratos hidroalcóolicos das espécies de Cuphea, miquelianina e miricitrina, de inibir a migração de leucócitos, foi estatisticamente significante em relação ao controle negativo (p

Os derivados carbapenemicos são os antibióticos β-lactâmicos dotados de maior espectro de ação, atividade e resistência a enzimas β-lactamases, sendo importantes à terapêutica atual no tratamento de diversos tipos de infeções hospitalares. A reconhecida instabilidade química desta classe, em especial quando em solução, leva à necessidade de estudos analíticos aplicados à avaliação da sua estabilidade, com foco em impurezas e produtos de degradação. O presente trabalho objetiva a avaliação da estabilidade pós-reconstituição dos antibióticos imipenem, meropenem e doripenem, em condições de uso clínico, contemplando o monitoramento e a identificação dos produtos de degradação formados. Para a avaliação da estabilidade pós-reconstituição, amostras comerciais destes fármacos foram preparadas em solução fisiológica (NaCl 0,9%) e em solução de glicose 5%, ambos fluidos para infusão, na concentração indicada para uso (5 mg/mL), e armazenadas à temperatura ambiente e sob refrigeração por até 24 e 72 horas, respectivamente. Para o imipenem, as análises quantitativas foram realizadas por CLAE-DAD através de método previamente validado, e os produtos de degradação formados durante o período de armazenamento foram monitorados e identificados por ESI-Q-TOF. Quando armazenado à temperatura ambiente, o imipenem apresentou maior tendência de degradação nas amostras preparadas em solução de glicose 5 %, sendo observado decaimento de aproximadamente 7 % de seu teor inicial, em 4 horas. Para as amostras preparadas em soro fisiológico e armazenadas sob refrigeração, o fármaco manteve o teor acima de 90 % durante 12 horas. Foram detectados e identificados três produtos de degradação: m/z 318, m/z 599 e m/z 658. Os mesmos provém da suscetibilidade química do anel β-lactâmico, de reação de dimerização, e da interação entre o fármaco e a cilastatina. Para o estudo com o meropenem, foi proposto um método de quantificação por ESI-Q-TOF, através da infusão direta das amostras. Os resultados de estabilidade demonstraram que o uso prolongado de infusões não é recomendado. O fármaco apresentou degradação de aproximadamente 10 % de seu teor inicial após 4 horas à temperatura ambiente, quando diluído em glicose 5%. Em soro fisiológico após 4 horas, o decaimento foi de 4 % de seu teor inicial. As análises por ESI-Q-TOF demonstram a formação de dois produtos de degradação: um de m/z 402, referente à hidrólise do anel β-lactâmico, formado em ambas as condições, e outro de m/z 564, formado apenas em solução glicosada, e possivelmente fruto da interação do fármaco com a glicose. Para o estudo com o doripenem, um método por LC-ESI-QTOF foi validado. O doripenem apresentou um perfil de degradação semelhante em ambas às condições testadas, sendo que, após 4 horas à temperatura ambiente, os teores residuais de doripenem foram de 96,74 % e 96,48 %, para as amostras reconstituídas em solução fisiológica e glicose 5 %, respectivamente. O método por LC-ESI-QTOF foi capaz de separar e detectar três produtos de degradação, um formado pela clivagem do anelβ-lactâmico, e dois pela dimerização do fármaco. A citotoxicidade das amostras degradadas de imipenem e meropenem foi avaliada através de ensaios de viabilidade celular, que demonstraram uma leve toxicidade das amostras, que já podem ser observadas após 4 horas de armazenamento a temperatura ambiente. No geral, os resultados obtidos neste trabalho ressaltam os cuidados a serem tomados durante o manuseio e a administração destes fármacos no ambiente hospitalar. Carbapenems are β-lactam antibiotics with broad-spectrum, activity and resistance to hydrolysis by β-lactamase enzymes, being essential for the treatment of several types of hospital infections. The recognized chemical instability of this class, especially when in solution, increases the need for analytical studies applied to the assessment of their stability, such as determination of the impurities profile and degradation products. The present study aims to evaluate the stability of imipenem, meropenem and doripenem after reconstitution, under conditions of clinical use, including the monitoring and identification of the degradation products formed. For evaluation of stability after reconstitution, commercial samples of these drugs were prepared in physiological saline solution (NaCl 0.9%) and in 5% glucose solution, both infusion fluids, in the recommended concentration for use (5 mg/mL), and stored at room temperature and under refrigeration. For imipenem, quantitative analyzes were performed by HPLC-DAD using a previously validated method, and the degradation products formed during the storage period were monitored and identified by ESI-Q-TOF. When stored at room temperature, the imipenem showed a higher degradation tendency in the samples prepared in 5% glucose solution, with decay of approximately 7% of its initial content in 4 hours. For samples prepared in saline and stored under refrigeration, the drug maintained the content above 90% for 12 hours. Based on m/z values of [M+H]+ ions and MS/MS data, three degradation products were identified: m/z 318 (DP-1), m/z 599 (DP-2) and m/z 658 (DP-3). They are formed from hydrolysis of the β-lactam ring, dimerization reaction and interaction between the drug and cilastatin. For the study with meropenem, a quantification method was proposed by ESI-Q-TOF, through the direct infusion of the samples. The results have demonstrated that the prolonged use of infusions is not recommended. The drug degraded approximately 10% of its initial content after 4 hours at room temperature, when diluted in 5% glucose. In saline solution, after 4 hours the decay was 4% of its initial content. Analyzes by ESI-Q-TOF demonstrated the formation of two degradation products, one of m/z 402, related to the hydrolysis of the β-lactam ring, formed under both conditions, and another of m/z 564, formed only in glycoside solution, and possibly resulting from interaction of the drug with glucose. For the study with doripenem, an LC-ESI-QTOF method was validated. Doripenem showed a similar degradation profile in both conditions tested, in a way that, after 4 hours at room temperature the residual content of doripenem were 96.74% and 96.48%, for reconstituted samples in saline and 5% glucose, respectively. The LC-ESI-QTOF method was able to separate and detect three degradation products, one formed by the cleavage of the β-lactam ring, and two by the dimerization of the drug. The cytotoxicity of the degraded samples of imipenem and meropenem was evaluated through cell viability tests, which demonstrated a slight toxicity of the samples, which can already be observed after 4 hours of storage. In general, the results obtained in this work emphasize the precautions to be taken during the handling and administration of these drugs in the hospital environment.

Os canabinoides são substâncias químicas encontradas exclusivamente na Cannabis sativa L. (canábis). Possuem grande relevância farmacológica e toxicológica, sendo a canábis e seus produtos derivados as drogas de abuso mais consumidas mundialmente. O procedimento adotado por órgãos periciais brasileiros para caracterização de amostras de canábis consiste na detecção de Δ9- tetraidrocanabinol (THC), o canabinoide ao qual são atribuídos os efeitos psicotomiméticos. Entretanto, a identificação de outros canabinoides fortalece a caracterização de amostras, além de possibilitar estudos sobre o perfil de drogas de apreensão, que podem ser aplicados com fins criminalísticos na investigação da origem e distribuição desses produtos. Nesse trabalho, foi realizada uma avaliação do perfil qualitativo de canabinoides presentes em material vegetal de amostras compartilhadas pela Polícia Federal Brasileira. As amostras eram provenientes de material compactado comercializado ilegalmente, operações de erradicação de plantações clandestinas e do cultivo indoor de sementes apreendidas. Para identificação simultânea de oito canabinoides majoritariamente presentes em amostras de canábis, foram desenvolvidos métodos de cromatografia líquida acoplada a espectroscopia no ultravioleta (HPLC-UV) e espectrometria de massas sequencial por injeção de fluxo (FIA-MS/MS). A composição das amostras avaliadas nas análises de HPLC-UV vai ao encontro das tendências descritas para drogas de abuso consumidas atualmente, sendo o THC o canabinoide mais presente. O perfil de fragmentação do THC e de outros canabinoides foi avaliado por FIA-MS/MS com ionização por eletrospray nos modos positivo e negativo (ESI(±)). Foi possível distinguir espécies isômeras de canabinoides aplicando ESI(-), devido a diferenças nos perfis de fragmentação. Adicionalmente, com auxílio de ferramentas quimiométricas, foram elaborados modelos de classificação de amostras a partir dos dados obtidos por FIA-ESI(-) MS/MS, que se mostraram aplicáveis para distinção dos diferentes tipos de amostras avaliadas. Cannabinoids are chemical substances found exclusively in Cannabis sativa L. They are of great pharmacological and toxicological relevance since cannabis and its derived products are the most widely consumed drugs of abuse in the world today. The detection of Δ9-tetrahydrocannabinol (THC), the cannabinoid to which psychotomimetic effects are attributed, is the procedure adopted by Brazilian forensics for the characterization of cannabis samples. However, the identification of other cannabinoids could lead to a more robust sample characterization and enable studies on seized drugs profile as well, which could be both applied for forensic purposes in the investigation of the origin and distribution of illegal cannabis. This work presents an evaluation of the qualitative profile of cannabinoids present in plant material from samples shared by the Brazilian Federal Police. The samples came from compacted material traded illegally, operations to eradicate clandestine plantations and indoor cultivation of seized seeds. Liquid chromatography coupled with ultraviolet spectroscopy (HPLC-UV) and flow injection analysis tandem mass spectrometry (FIA-MS/MS) methods were developed to simultaneously identification of eight major cannabinoids in cannabis samples. The cannabinoid profile evaluated in the HPLC-UV analyzes meets the trends described for this kind of drug, with THC being the most present cannabinoid. The mass fragmentation profile of THC and other cannabinoids were evaluated by FIA-MS/MS with electrospray ionization operating in positive and negative modes (ESI(±)). It was possible to distinguish isomeric cannabinoids by applying ESI(-) due to differences in fragmentation profiles. Additionally, using chemometric tools, sample classification models were elaborated from the data obtained by FIA-ESI(-) MS/MS, which proved to be suitable to distinguish the different types of samples evaluated.

A natamicina é um composto antifúngico bastante utilizado na indústria alimentar, pois é seguro para o consumo e não afeta a qualidade dos alimentos. Recentemente surgiu uma preocupação em relação ao seu uso aditivo em bebidas e iogurtes, uma vez que a natamicina poderia exercer pressão seletiva e desencadear o desenvolvimento de resistência aos polienos in vivo na microbiota comensal do hospedeiro. Diante dessa incerteza, abordamos o possível desenvolvimento da resistência contra a natamicina. Uma seleção de 17 isolados de Candida spp. foi submetida a concentrações crescentes de natamicina durante um tempo prolongado. A exposição à natamicina provocou um aumento de MIC em 14 dos 17 isolados testados e o desenvolvimento de resistência à natamicina foi evidenciado em 5 destes 14 isolados. Dezesseis isolados apresentaram aumento de MIC para anfotericina B e 4 destes isolados mostraram resistência à anfotericina B. A capacidade de formação de biofilmes desses isolados também foi realizada e 3 isolados apresentaram aumento da capacidade de formação de biofilmes após indução de resistência à natamicina. Foi possível evidenciar que a resistência adquirida à natamicina foi maior em isolados que apresentavam baixa suscetibilidade antes da exposição à natamicina. Em vista dos resultados acima mencionados, ressalta-se a importância do monitoramento da natamicina aditivada nos alimentos, pois seus níveis residuais em concentrações elevadas podem exercer uma pressão seletiva sobre as espécies de Candida constituintes da microbiota comensal humana gastrointestinal, no que tange a sua virulência e resistência. Natamycin is a antifungal compound used in the food industry because it is safe for consumption and has no effect on quality of foods. Recently a concern has arisen over its additive use in beverages and yogurts since natamycin could exert selective pressure and trigger the development of polyene resistance in vivo in the commensal microbiota of host. In view of this uncertainty, we address the possible development of resistance against the natamycin. A selection of 17 isolates of Candida spp. was subjected to increasing concentrations of natamycin for prolonged time. The natamycin-exposure caused an increase of M.I.C. in 14 out of 17 tested isolates and the development of natamycin resistance was evidenced in 5 of these 14 isolates. Sixteen isolates showed increased of M.I.C to amphotericin B and 4 of these isolates showed resistance to amphotericin B. The biofilm forming capacity of the isolates also was performed and 3 isolates presented increasing the capacity to form biofilms after induction of natamycin resistance. It was possible to show that acquired natamycin resistance was increased in isolates that showed low susceptibility before natamycin exposure. In view of the aforementioned results, the importance of the monitoring of natamycin in food is highlighted, since its residual levels in high concentrations may exert a selective pressure on Candida species constituting the gastrointestinal human commensal microbiota, in relation to its virulence and resistance.

O ácido lactobiônico e seus sais (lactobionatos), compostos que apresentam aplicações na área farmacêutica, foram obtidos via ação do complexo enzimático glicose-frutose oxidorredutase (GFOR)/gliconolactonase (GL) - presente no periplasma de células da bactéria Zymomonas mobilis - imobilizado em alginato de cálcio. Nas reações catalisadas por este sistema enzimático, o pH do meio deve ser controlado em valores ligeiramente ácidos. Para este fim, foram empregados NaOH, KOH ou Ca(OH)2 e, como consequência, os respectivos sais foram formados. O estudo da cinética de formação dos lactobionatos de sódio, potássio e cálcio e do próprio ácido lactobiônico foi seguido das etapas de purificação, caracterização e avaliação da estabilidade físico-química, visando à potencial utilização destes compostos na área farmacêutica. Em ensaios de bioprodução dos lactobionatos de sódio, potássio e cálcio, foram obtidos rendimentos de 74, 77 e 84%, respectivamente. Em bateladas sucessivas de bioconversão, totalizando 96 h de uso do biocatalisador, rendimentos de 80 e 56 % em lactobionatos de cálcio e de potássio foram atingidos. Na etapa de purificação dos sais, foram alcançados teores de pureza de aproximadamente 95%, sendo então procedida a caracterização dos compostos por cromatografia líquida de alta eficiência, espectrometria de massas e RMN de 13C. Nos estudos de estabilidade acelerada, de longa duração e degradação forçada, os lactobionatos de sódio, potássio e cálcio obtidos nos ensaios de bioconversão conduzidos em maior volume reacional, foram inicialmente purificados e, então, comparados frente ao ácido lactobiônico, obtido por troca iônica a partir do lactobionato de sódio, e com o ácido lactobiônico comercial (Sigma-Aldrich). Nos testes de estabilidade acelerada e de longa duração, foi constatada a estabilidade de todos os compostos por até seis meses quando expostos a 30 e 40oC e 75% de umidade relativa. Por outro lado, a presença da lactobionolactona foi identificada nas amostras dos compostos na forma ácida. Com relação aos testes de degradação forçada, os lactobionatos de sódio, potássio, e cálcio e o ácido lactobiônico se mostraram estáveis frente à exposição a soluções ácidas e alcalinas e às temperaturas avaliadas. Contudo, observou-se degradação no tratamento com solução oxidativa, com cinética de degradação de ordem zero para os sais e de segunda ordem para o ácido lactobiônico. Elevadas concentrações de produtos - lactobionatos de sódio, potássio e cálcio - foram atingidas com a utilização do sistema GFOR/GL imobilizado em alginato de cálcio. Considerando o conjunto de informações obtido, quanto à caracterização físico-química dos compostos produzidos, foi demonstrada a estabilidade frente aos diferentes parâmetros avaliados atendendo aos requisitos mínimos legais para sua aplicação na área farmacêutica. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. Lactobionic acid and its salts (lactobionate) are substances that have several applications in pharmaceutical area. These products were obtained by enzymatic complex glucose-fructose-oxidoreductase (GFOR)/gluconolactonase (GL) present in the periplasm of Zymomonas mobilis cells that were immobilized in calcium alginate. In the reactions catalyzed by this enzyme system, the medium pH must be controlled at slightly acid values. For this purpose, NaOH, KOH, or Ca(OH)2 were used and as a result the respective salts were formed. The kinetic study on the formation of sodium, potassium and calcium lactobionate and lactobionic acid itself was followed by the steps of purification, characterization and evaluation of the physicochemical stability, aiming the potential use of these compounds in the pharmaceutical area. In the assays for the bioproduction of sodium, potassium or calcium lactobionates, yields of 74, 77 and 84% were obtained, respectively. In repeated bioconversion batches, totalizing 96 hours of use of the biocatalyst, yields of 80 and 56% were attained for calcium and potassium lactobionate. In the salts purification step, purity levels of approximately 95% were achieved, and subsequently these compounds were characterized by high performance liquid chromatography, mass spectrometry, and C13 NMR. In the studies of accelerated, long term and forced degradation stability, the production of sodium, potassium and calcium lactobionate was carried out at higher reaction volume. The products were purified and then evaluated together with lactobionic acid that was obtained by ion-exchange from sodium lactobionate, and with a commercial lactobionic acid (Sigma-Aldrich). In the accelerated and long term stability tests, it was demonstrated the stability of all compounds when exposed to 30 and 40oC and of 75%of relative humidity for up to six months. On the other hand, the presence of lactobionolactone was identified in samples of compounds in the acid form. With respect to the forced degradation tests, sodium, potassium and calcium lactobionates and lactobionic acid have shown to be stable after exposing to both acidic and alkaline solutions and the temperatures evaluated. However, degradation was observed in the treatment with oxidative solution, with a zero-order degradation kinetics for the salts forms and second-order for lactobionic acid. High concentrations of products - sodium, potassium and calcium lactobionate - were achieved by using the Ca-alginate immobilized GFOR/GL complex. Considering the set of information obtained in regarding to physicochemical characterization, it was demonstrated the high stability of these compounds in front of different parameters evaluated, endorsing the legal minimum requirements for their application in the pharmaceutical area.

A paliperidona, principal metabólito ativo da risperidona, é um antipsicótico atípico da classe química dos derivados benzisoxazóis. Está disponível no mercado na forma de comprimidos de liberação osmótica oral controlada, do tipo OROS® Push-PullTM. Esses sistemas apresentam uma membrana semipermeável com dois orifícios feitos a laser numa das extremidades, e um polímero que se expande à medida que o líquido estomacal atravessa a membrana, ajudando na liberação do fármaco, que está presente em dois compartimentos, sendo um menos concentrado para que haja uma liberação inicial mais rápida. Há poucos estudos de estabilidade da paliperidona, principalmente em sistema OROS®. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar a substância química de referência utilizada, avaliar por CLAE a estabilidade da paliperidona testando diferentes condições forçadas (ácida, alcalina, oxidativa, térmica e fotolítica), estabelecer a decomposição cinética das condições oxidativa, fotolítica e térmica, com foco na ordem de reação, constante de reação (k), tempo de meia-vida (t½) e t90%, e identificar os produtos de degradação majoritários por CLUE-EM. A paliperidona apresentou-se instável em condição oxidativa (concentração residual em 72h = 83,49%), fotolítica (concentração residual em 24h = 24,64%) e térmica (concentração residual em 96h = 30,12%), com cinética de primeira ordem. O fármaco mostrou-se estável em meio ácido, corroborando com a estratégia de uso do HCl 0,0100 mol/L como solvente para obtenção do fármaco a partir desta matriz. O método de extração direta sem rompimento da bomba osmótica apresentou-se mais eficiente do que a ação de rompimento prévio do comprimido, podendo haver perda do fármaco na realização deste processo. As análises por CLUE-EM permitiram a identificação de três produtos de degradação: m/z 365, denominado ácido (Z)-2-((((Z)-aminometileno)amino)metileno)-4-(4-(2-(aminoxi)-4-fluorobenzil) piperidin-1-il) butanoico, detectado em condições fotolítica e térmica; e por outra rota reacional, m/z 233 denominado 3-(1-etilpiperidin-4-il)-2,3-diidrobenzo[d]isoxazol e m/z 217, denominado (E)-6-((1-etilpiperidin-4-il)metileno)ciclohexa-2,4-dien-1-ona, detectados em todas condições do ensaio, demonstrando a importância da rota de decomposição do fármaco. Paliperidone, the main active metabolite of risperidone, is an atypical antipsychotic of the chemical class of benzisoxazoles derivatives. It is commercially available as osmotic tablets, OROS® (osmotic release oral system) Push-PullTM type. This system has a semipermeable membrane containing two holes on one extremity, and an expansible polymer that helps the drug release according to concentration. Few studies about stability of paliperidona are reported, in special for OROS® system. The present study aimed to characterize the reference standard, to determine the drug on stability assay by HPLC, testing different forced conditions (acid, alkaline, oxidative, thermal and photolytic), to establish the kinetic decomposition of oxidative, photolytic and thermal conditions, with focus on reaction order, reaction constant (k), half-life time (t½) and t90%, and to identify the major degradation products by UPLC-MS. The sample preparation was evaluated comparing the disruption of tablet previously to contact with solvent on ultrasonic bath, and the treatment with solvent directly, avoiding the disruption. Paliperidone was instable when submitted to oxidative (residual concentration in 72h = 83,49%), photolytic (residual concentration in 24h = 24,64%) and thermal conditions (residual concentration in 96h = 30,12%), showing kinetics data in first order. The drug presented stability in acid medium, HCl 0,0100 mol/L, being in accordance with the procedure established for sample treatment with this solvent. For sample treatment, previous to analysis, the results indicated more reproducibility on quantitative data for samples treated directly. The analyses by UPLC-MS allowed to identify three degradation products: m/z 365, being named as (Z)-2-((((Z)-aminomethylene)amino)methylene)-4-(4-(2-(aminooxy)-4-fluorobenzyl)piperidin-1-yl)butanoic acid, detected in photolytic and thermal conditions; and another reaction route, m/z 233, being named as 3-(1-ethylpiperidin-4-yl)-2,3-dihydrobenzo[d]isoxazole, and m/z 217, named as (E)-6-((1-ethylpiperidin-4-yl)methylene)cyclohexa-2,4-dien-1-one, detected in all conditions assayed, demonstrating the importance of this decomposition route for this drug.

O doripenem é um antibiótico β-lactâmico de amplo espectro de ação. Pertencente ao grupo das carbapenemas, caracteriza-se por apresentar elevada potência e atividade frente à cepas Gram-negativas, produtoras de β-lactamases de espectro estendido (ESBL) e β-lactamases ampC. Apesar de sua grande importância clínica, os antibióticos carbapenêmicos não apresentam boa estabilidade quando em solução, o que é demonstrado em diversos trabalhos descritos na literatura científica. Para o doripenem, há vários trabalhos descritos na literatura que ressaltam sua importância clínica e sua atividade antibiótica. Porém, nota-se a escassez de trabalhos que enfoquem sua estabilidade físico-química, seus produtos e suas rotas de decomposição. O presente trabalho tem como objetivo a validação de um método analítico indicativo de estabilidade por ultra fast liquid chromatography (UFLC), e a avaliação da estabilidade do doripenem em solução, quando submetido a estresse térmico, oxidativo, fotólise e hidrólise em meio ácido e meio alcalino, e determinação da cinética química de decompsição. Para proposição da estrutura química dos produtos de degradação, foram realizadas análises por cromatografia líquida com detecção por espectrometria de massas (LC-MS). O método cromatográfico descrito neste trabalho demonstrou-se adequado para determinação do doripenem na forma de pó para solução injetável, possuindo performance indicativa de estabilidade. A faixa linear do método foi de 5,0 a 40,0 μg/mL, sem desvios de linearidade, sendo estatisticamente comprovada por meio de ANOVA. Com o auxilio do desenho experimental de Plackett–Burman, o método demonstrou-se robusto frente a uma série de fatores. O estudo de degradação forçada demostrou a susceptibilidade do doripenem a diversos fatores de degradação, com acentuada instabilidade frente à hidrólise ácida e alcalina, observando-se degradação aproximada de 60% do seu teor em apenas 2 minutos sob condições alcalinas. A decomposição oxidativa do fármaco seguiu uma cinética de segunda ordem, com constante de velocidade de reação de 0,000086 e 0,00010%-1.min-1, quando submetido à degradação em H2O2 a 3 e 10%, respectivamente. A decomposição térmica apresentou uma energia de ativação de aproximadamente 15 Kcal/mol, valor característico de reações de hidrólise. E na análise cromatográfica com detecção por espectrometria de massas, observou-se que os principais produtos de degradação formados sob condições de termólise e oxidação, apresentam massas moleculares semelhantes, sendo possível a proposição da estrutura química dos mesmos. Doripenem is a β-lactam antibiotic with a broad spectrum of antimicrobial activity, including gram-negative strains, and producers of extended spectrum β-lactamases (ESBL) and ampC β-lactamases ampC. Despite its great clinical importance, carbapenems do not show good stability when incorporated as solution, as reported in several studies. In reference to doripenem, several works have describing its clinical use, efficacy data and cases of resistance. However, few works mention the drug stability, in terms of degradation products and routes of decomposition. The present work aimed to develop and validate a stability-indicating method by ultra-fast liquid chomatograph (UFLC) for doripenem in powder for injection, purposing an evaluation of stability of reconstituted solution using stress conditions of heat, oxidation, acid hydrolysis, alkaline hydrolysis and photolysis. The chemical kinetic of decomposition was also assayed for thermal and oxidative degradation. For identification of degradation products, the degraded samples where submitted to analysis by LC-MS. The chromatographic method described here proved to be stability-indicating and suitable for the determination of doripenem in drug formulation. The method linearity was performed in the range of 5 to 40 g mL-1, whose correlation coefficient (r) was 0.9999. The robustness testing, assayed against a variety of factors, allowed verifying that the method accept small variations in routine analysis. The forced degradation demonstrated the susceptibility of doripenem to several decomposition factors, being intense the instability to acidic and alkaline hydrolysis. In basic media, the drug residual content was approximately 40% in 2 minutes. At oxidative decomposition, the drug follows second-order kinetics, with a rate reaction of 0.000086 and 0.00010 %-1 min-1, respectively for H2O2 at 3.0 and 10.0 %. The thermal decomposition showed an activation energy of 15 kcal mol-1, a characteristic value for hydrolysis reactions. The analysis by LC-MS revealed that the major degradation products formed under oxidizing conditions and thermolysis present molecular weight (411, 427, 437, 634, 650 and 664). The stability of doripenem must be carefully observed, mainly after reconstitution and storage in adverse conditions of temperature.

O gênero Erythrina está presente mundialmente nas regiões tropicais e subtropicais. Estudos fitoquímicos utilizando vários órgãos dessas plantas, demostraram a presença de alcaloides, flavonoides, pterocarpanos e triterpenóides. Várias espécies são encontradas no Brasil, dentre elas Erythrina falcata e Erythrina crista-galli, conhecidas popularmente como “corticeira” e utilizadas medicinalmente devido à ação sedativa, ansiolítica, anti-inflamatória e antihipertensiva. Este trabalho objetivou estudar a composição química de extratos vegetais obtidos de folhas de E. falcata e E. crista-galli e ainda, avaliar o potencial hipotensor in vivo de extratos de E. falcata. Inicialmente, após coleta do material, as folhas foram selecionadas, submetidas à secagem e trituradas. Então, foram submetidas à extração por maceração exaustiva utilizando etanol 40% (v/v) e por infusão utilizando água a 100 °C. Para a caracterização em termos de fenólicos totais e conteúdo de flavonoides, os extratos foram quantificados por espectrofotometria. Para o ensaio cromatográfico, os extratos foram analisados por CLAE em sistema de fase reversa, com fase móvel consistindo de acetonitrila:água em eluição por gradiente e fluxo de 1,0 mL/min. Para a análise por CLUEESI- MS, a fase móvel foi composta de mistura de acetonitrila:metanol (4:1) e ácido fórmico pH 3,0, com eluição por gradiente e fluxo de 0,2 mL/min. A detecção por espectrometria de massas foi conduzida a partir das seguintes condições: N2 como nebulizante; energia de colição 4.0 eV; temperatura da fonte do eletrospray e do gás de solvatação 100°C e 120°C, respectivamente; voltagem do capilar 3000V; voltagem do cone 40V. Os espectros de massas foram obtidos na faixa de m/z 200-800. A avaliação dos efeitos hemodinâmicos foi realizadaem ratos wistar normotensos, anestesiados com uretana (1,4 mg/Kg), via canulação da artéria carótida (para a verificação da PAS, PAD e FC) e veia jugular (para administração do extratose drogas). A avaliação do potencial hipotensor da E. falcata foi investigada através da realização de uma curva crescente de administração dos extratos e os possíveis mecanismos de ação envolvidos foram analisados através da administração de diferentes drogas sendo elas: L-NAME (30 mg/kg); losartana (10 mg/Kg); hexametônio (20mg/Kg) e propranolol (5mg/kg). Os teores de fenólicos totais para E. falcata e E. crista-galli estiveram na faixa de 1,3193 – 1,4989 mgEAG/mL para os extratos obtidos por maceração e de 0,8771 – 0,9506 mgEAG/mL para as infusões. Em flavonoides totais, os conteúdos estiveram na faixa de 7,7829 – 8,1976 ER mg/g para os extratos obtidos por maceração e 9,3471 – 10,4765 ER mg/g para as infusões. Na determinação por CLUE-MS, os dados de íon molecular e fragmentos de massa indicaram a composição predominante em alcaloides, sugerindo-se os componentes erythristemine, 11β-methoxyglucoerysodine, erysothiopine, 11β- hydroxyerysodine–glicose e 11-hydroxyerysotinone-ramnosídeo. O extrato aquoso da E. falcata mostrou-se um potente hipotensor dose-dependente, causando uma queda na PAS de 23 a 35% e na PAD de 32 a 49% para ambos os extratos estudados, sem influenciar a FC, podendo este efeito estar relacionado com a via dos receptores β-adrenérgicos. The genus Erythrina is present worldwide in tropical and subtropical regions. Phytochemical studies using various organs of these plants demonstrated the presence of alkaloids, flavonoids, pterocarpans and triterpenoids. Several species are found in Brazil, among them Erythrina falcata and Erythrina crista-galli, which are popularly known as “corticeira” and. used medicinally due to it action as sedative, anxiolytic, anti-inflammatory and antihypertensive. The present study aimed to investigate the chemical composition of extracts obtained from leaves of E. falcata and E. crista-galli, and still, to evaluate the hypotensive potential in vivo of E. falcata extracts. Initially, after collection of material plant, the leaves were selected, submitted to dryness and powdered. Then, submitted to extration by exhaustive maceration using ethanol 40% (v/v) and by infusion using water at 100 °C. For characterization in terms of phenolics and flavonoid content, the extracts were quantified by spectrophotometry. For chromatographic assay, the extracts were analysed by HPLC in reversed phase system, with a mobile phase consisting of acetonitrile:water in gradient elution and flow rate of 1.0 mL/min. For analysis by UPLC-ESI-MS, the mobile phase consisted in a mixture of acetonitrile:methanol (4:1) and 0.1% formic acid pH 3.0, with a elution by gradient and flow rate of 0.2 mL/min. The MS detection was performed following the conditions: N2 as nebulizing; collision energy 4.0 eV; temperature of electrospray source and desolvation gas 100°C and 120°C, respectively; capillary voltage 3000V; sample cone 40V. Mass spectra were recorded in the range of m/z 200-800. The evaluation of the hemodynamic effects was performed in normotensive Wistar rats, anesthetized with urethane (1.4 mg/kg) by cannulation of the carotid artery (for verification of SBP, DBP and HR) and jugular vein (for administration of the extracts and drugs). The hypotensive potential of E. falcata was investigated by conducting a growing curve administration of the extracts and the possible mechanisms involved were analyzed by administering different drugs such as: L-NAME (30 mg/kg); losartan (10 mg/kg); hexamethonium (20 mg/kg) and propranolol (5 mg/kg). The total phenolics content for E. falcata and E. crista-galli was from 1.3193 to 1.4989 mgGAE/mL for maceration and 0.8771 to 0.9506 mgGAE/mL for infusions. In total flavonoid, the content was from 7.7829 to 8.1976 mg RE/g for maceration and 9.3471 to 10.4765 RE mg/g for infusions. The molecular ions and mass fragments obtained by UPLCMS indicated the predominant composition in alkaloids, suggesting the components erythristemine, 11β-methoxyglucoerysodine, erysothiopine, 11β-hydroxyerysodine-glucose and 11-hydroxyerysotinone-rhamnoside. The aqueous extract of E. falcata showed to be a potent dose-dependent hypotensive, decreasing the SBP in 23 to 35% and DBP in 32 to 49% for both extracts, without influence in HR, and this effect may be due to the route of β- adrenergic receptors.

Organismos adaptados a ambientes extremos como a Antártica tendem a apresentar uma constituição única em termos de metabólitos secundários. Desta forma, estudos que visem à elucidação de efeitos biológicos de organismos vegetais oriundos destas regiões são relevantes do ponto de vista biotecnológico. Este trabalho investigou o mecanismo envolvido na atividade inseticida do extrato bruto da Prasiola crispa uma alga oriunda de áreas de degelo da Antártica, em modelos neurofisiológicos de baratas da espécie Nauphoeta cinerea. Também foi investigado o mecanismo de ação dos compostos bioativos oriundos do material vegetal, relacionado a essa atividade. A alga foi coletada, próxima à região da estação Polonesa Arctowski, na Baia do Almirantado. O mecanismo de toxicidade do extrato hexânico da alga Prasiola crispa foi demonstrado inicialmente através de avaliações toxicológicas em ensaios de letalidade para a determinação da DL50. Foram realizados ensaios bioquímicos para determinação da atividade da enzima AChE sobre o homogeinizado de cérebro de baratas. Também foram usados modelos biológicos in situ e in vivo com o intuito de se verificar a atividade do extrato sobre diferentes sistemas fisiológicos desses animais como o sistema cardiovascular, sistema nervoso periférico e o sistema nervoso central. Nesse sentido, usando à técnica do coração semi-isolado de baratas in situ, a de músculo coxal abdutor-metatoráxico in vivo e a técnica para a medida da atividade de grooming in vivo. O extrato hexânico de Prasiola crispa (HPC) foi preparado de acordo com a técnica fitoquímica convencional. A análise fitoquímica preliminar foi feita usando-se a cromatografia de camada delgada (CCD). Assim, os ensaios para a determinação da dose letal mínima (DL50) nas concentrações 100, 200, 400 e 800µg/g de animal, demonstraram que a dose de 400μg/g ocasionou a morte de 50% dos animais, sendo esta considerada a DL50 para Nauphoeta cinerea, 24h após a administração do composto (n=10 em triplicata *p≤0,05). Os ensaios para a medida da atividade da AChE, demonstraram que o HPC 100, 200, 400 e 800µg/g de animal, não inibe significativamente essa enzima (p≥0.05, n=5 em triplicata). A avaliação dos efeitos do extrato 100, 200, 400 e 800µg/g de animal, sobre a frequência cardíaca da barata, demonstrou uma atividade cardiotóxica que foi tempo-dependente. Quando a dose do HPC 100µg/g foi ensaiada houve um efeito cronotrópico positivo não significativo. Os ensaios com as doses sucessivas induziram um efeito cronotrópico negativo, que foi máximo para a dose de (800μg/g) o efeito foi de 35±3bat./min (n=6, *p≤0,05). A obtenção dos registros da força de contração muscular em animais tratados com o HPC 100, 200, 400 e 800µg/g de animal, resultou em um bloqueio neuromuscular progressivo dose e tempo-dependente. Em todos os registros ficou evidente o aparecimento de contrações espontâneas após 15-30min do tratamento com HPC. Nessa série de ensaios a dose de 800µg/g do HPC induziu o maior nível de inibição da força de contração muscular, que foi de 100% em 120min de registros (n=6, *p≤0,05). O pré-tratamento dos animais com cloral hidratado 10µg/g de animal, um bloqueador do receptor de N-metil-d-aspartato (NMDA), aumentou o tempo para o bloqueio das contrações musculares em 50%, e inibiu o aparecimento de contrações espontâneas. O pré-tratamento com a bicuculina 2,5µg/g de animal, um bloqueador dos receptores GABA, inibiu parcialmente o efeito bloqueador neuromuscular induzido pelo HPC 800µg/g (n=6, *p≤0,05). A análise do comportamento de grooming, que é caracterizado pela limpeza das pernas e antenas pelo animal, demonstrou também um efeito tempo-dependente. Nesses ensaios os valores para o grooming com solução salina foram de 153±8s/30min para pernas 75±5s/30min para antenas. Quando o DMSO 10% foi ensaiado não houve alteração das respostas, em relação ao controle salina, para o grooming de antenas e uma leve diminuição não significativa do grooming de pernas. A administração do HPC nas concentrações de 100, 200, 400 e 800μg/g de animal, induziu um aumento significativo na taxa de grooming de antenas e pernas para a menor dose que foi de 390±5s/30min para as antenas e 395±5s/30min 8 para as pernas, respectivamente (*p≤0.05). Quando as maiores doses foram ensaiadas houve uma diminuição nas respostas de grooming que foi máxima para o de antenas e pernas, culminando com a extinção da atividade com a dose de 800μg/g (n=30, *p≤0.05). Na determinação dos compostos químicos do HPC feita por ensaios de Ressonância Magnética Nuclear foram identificados três cristais com alto grau de pureza caracterizado como fitoesteróis: β-sitosterol (24α-etil-colest-5-enol) (m/z 414,71), Campesterol (24α-metil-colest5-enol) (m/z 400.68) e Stigmasterol (24α-etil-colest- 5,22-dienol) (m/z 412,69). Dos três compostos identificados, o β-sitosterol foi o mais ativo em induzir neurotoxicidade sobre o sistema nervoso periférico. Em conjunto os resultados apresentados nesse trabalho, demonstram que o extrato hexânico de Prasiola crispa induz atividade entomotóxica em modelo de Nauphoeta cinerea. Esse efeito tóxico seria prevalente sobre o sistema nervoso periférico. A indução de alterações sobre a taxa de grooming demonstra que os compostos bioativos presentes no extrato atingem o sistema nervoso central do inseto produzindo alterações complexas nessa área. O efeito cardiotóxico contribui para o desenvolvimento do efeito letal induzido pelo extrato em baratas. A determinação de compostos fitosteróis reforçam que esses compostos devam estar associados aos efeitos tóxicos observados no extrato. Ensaios fitoquímicos futuros para a determinação de novos compostos presentes no extrato poderão contrubuir para a elucidação da atividade entomotóxica. Organisms adapted to extreme environments such as Antarctica, tend to present a unique constitution in terms of secondary metabolites. Thus, studies aiming the elucidation of biological activity of vegetal organisms from these regions are relevant in terms of biotechnology. The aim of this work was to investigate the mechanism underlying the entomotoxic activity of Prasiola crispa seaweed from Antarctica mealting iced areas whole extract in neurophysiological models of Nauphoeta cinerea cockroaches. The mechanisms of the vegetal extract isolated bioactive compounds that was related to the entomotoxic activity were also studied. The seaweed was collected next to the Polish station Arctowski, at Almirantado bay. The toxic mechanism of the hexanic extract of Prasiola crispa, was initially demonstrated through toxicological assessments of lethality assays of LD50. Biochemical assays were also performed to determine the acetylcholinesterase (AChE) enzime activity on the cockroaches’ brain homogenate. It was also used in vivo and in situ biological models of cockroaches, in order to assess the extract’s activity on the different insect physiological systems, such as the cardiovascular system, the peripheral nervous system and the central nervous system. To accomplish this, we have used the cockroach in situ semi-isolated heart technique, the the coxal methatoraxic-abdutor nerve-muscle preparation in vivo and the measurement of grooming activity in vivo. The hexanic extract of Prasiola crispa (HPC) was prepared according to the conventional phytochemical technique. The phytochemical preliminar analysis was performed through thin layer chromatography (TLC). Thus, the assays to determine the minimum lethal dose (LD50) at 100, 200, 400 and 800 µg/g of animal weight, demonstrated that the dose of 400 µg/g induced 50% lethality, that was considered the LD50 for Nauphoeta cinerea, 24h after the adminstration of the compound (n= 10 in triplicate *p≤0,05). The assays for AChE activity showed that the HPC 100, 200, 400 and 800µg/g of animal weight, does not inhibit significantly this enzyme (p≥0.05, n=5 in triplicate). The biological activity of HPC 100, 200, 400 e 800 µg/g of animal weight on cockroach heart rate, showed a time-dependent cardiotoxic activity. When the HPC 100 µg/g was assayed, a nonsignificative positive chronotropic effect was observed. With the higher doses there were a progressive negative chronotropic effect that was maximum at 800 µg/g 35±3 beat./min; (n=6,*p≤0,05). The recordings of cockroach neuromuscular twich-tension with HPC 100, 200, 400 e 800 µg/g animal, showed a progressive dose and time-dependent neuromuscular blockade. Spontaneous twiches were detected 15-30min after HPC treatment in all experiments. In this assayes, HPC 800 µg/g induced the highest level of neuromuscular blockade 100% within 120min recordings (n=6, *p≤ 0,05). On these preparations the previous treatment with chloral hydrate 10µg/g animal, an N-methyl-d-aspartate blocker, increased the time for 50% neuromuscular blockade, and also inhibited the appearance of spontaneus twiches. The pretreatment with bicuculine 2.5 µg/g of animal weight a GABA receptor blocker, partially inhibited the neuromuscular blockade activity induced by HPC 800µg/g (n=6, p≤0,05). The animal grooming behavior analysis which is the leg and antennae cleaning behavior, also showed a time-dependent effect. In these assays the values for grooming in saline-treated animals was 153±8s/30min for the legs 75±5s/30min for the antennas, respectively. When DMSO 10% was assayed, no changes in the responses was observed in 10 the antenna grooming, and a slight but not significant decrease in the leg grooming was detected. HPC 100, 200, 400 and 800 µg/g of animal weight treatment induced a significant increase in the legs and antennas grooming, of 390 ±5s/30min for antenas and 395 ±5s/30min for legs, on the smallest tested dose (*p≤0,05). When higher HPC doses were assayed, there was a progressive decrease on grooming responses, that was maximum for antennas and legs and resulted in the extinction of grooming activity at 800μg/g dose (n=30, *p≤0.05). The determination of HPC chemical compounds by Nuclear Magnetic Rensonance (RMN), showed three crystals with high purity that were characterized as phytosterols: β-sitosterol (24α-etil-colest-5-enol) (m/z 414,71), campesterol (24α-metil-colest-5-enol) (m/z 400.68) e stigmasterol (24α-etil-colest- 5,22-dienol) (m/z 412,69). β-sitosterol was the most active compound in inducing neurotoxicity at the peripheral nervous system. Together, the results presented at this work demonstrated that Prasiola crispa hexanic extract induces entomotoxic activity at Nauphoeta cinerea model. This toxic effect would be prevalente on the peripheral nervous system. The changes induced on insect grooming activity demonstrate that the extract bioactive compounds are able to reach the insect central nervous system, inducing complex behavioral changes. The cardiotoxic activity was significant, and may contribute to the development of entomotoxic activity. The presence of phytosterols compounds in the extract composition may be related to the algae toxic activity. Future phytochemical assays for the determination of novel compounds in the extract may help in the elucidation of the extract entomotoxic activity.

O gênero Cuphea, popularmente conhecido no Brasil por “sete-sangrias”, tem seu uso medicinal reconhecido devido aos efeitos diurético, hipotensor e cardioprotetor. No sul do Brasil, em região característica do bioma Pampa, foi encontrada a espécie Cuphea glutinosa Cham. & Schltdl. Embora o uso popular, esta espécie é pouco descrita na literatura. O presente trabalho tem como objetivos o estudo da composição química dos extratos de C. glutinosa e a avaliação das atividades antifúngica e anti-hipertensiva. O material vegetal foi coletado na cidade de Uruguaiana (RS, Brasil), identificado e depositado em herbário. Após secagem e trituração do material vegetal, foram obtidos os extratos hidroetanólicos através de maceração exaustiva com etanol 40% (v/v) para folhas e etanol 70% (v/v) para raízes. Para a infusão, utilizou-se água a 80oC. As análises cromatográficas foram realizadas em equipamento cromatógrafo a líquido Prominence Shimadzu, em técnica por CLAE e CLUE. Utilizou-se sistema de fase reversa, eluição por gradiente com fase móvel composta por acetonitrila:metanol (4:1) e ácido fórmico 0,1% pH 3,0, coluna C18 analítica e fast, e detecção por UV-DAD e ESI-MS. Os teores de polifenóis totais e de flavonóides foram determinados por método colorimétrico, seguindo metodologia padronizada. A atividade antifúngica in vitro foi realizada utilizando o método de microdiluição em caldo, determinando-se a CIM, in-vitro, contra diferentes isolados clínicos. Para avaliação do potencial anti-hipertensivo in vivo, foram realizadas medições da pressão sanguínea pelo método de monitoramento hemodinâmico invasivo, através da inserção de cateter na artéria carótida. Os resultados de teor de fenólicos totais indicaram predominância destes componentes em extratos obtidos de folhas e por maceração, conforme os valores obtidos: 1,8501 mg EAG/mL (folhas) e 0,8467 mg EAG/mL (raízes) para infusão, e 3,7284 mgEAG/mL (folhas) e 2,6266 mg EAG/mL (raízes) para maceração. Quanto ao teor de flavonóides, os resultados quantitativos foram: 7,0959 mg/g (folhas) e 0,5664 mg/g (raízes) para a infusão, e 7,9511 mg/g (folhas) e 0,5994 mg/g (raízes) para maceração. Na análise cromatográfica, os extratos obtidos das folhas de C. glutinosa apresentaram picos cromatográficos bem separados, em perfil reprodutível. Na determinação por CLUE-MS, os dados de íon molecular e fragmentos de massa indicaram a composição predominante em flavonóides, sugerindo-se os componentes quercetina-3-O-glicosídeo, quercetina-3- arabinosídeo, quercetina-3-glicuronídeo, isoramnetina e quercetina-5-O-β-glicopiranosídeo. Para o potencial antifúngico, os extratos das folhas e raízes apresentaram atividade in vitro contra Candida parapsilosis, Candida tropicalis e Trichosporon asahii, com CIM variando na faixa de 1,9-62,5 μg/mL. Nos testes hemodinâmicos realizados, os extratos das folhas não apresentaram efeito significativo sobre a pressão arterial. A identificação dos componentes em C. glutinosa, derivados de quercetina, torna promissora novas investigações a fim de aprofundar o conhecimento a respeito desta espécie, em especial na busca de respostas para a relatada ação anti-hipertensiva. The Cuphea genus, popularly known in Brazil as "sete-sangrias", is used traditionally due the diuretic, hypotensive and cardioprotective effects. In southern Brazil, in characteristic region of Pampa biome, it was found the species Cuphea glutinosa Cham. & Schltdl. Although used popularly, this species is few reported in the literature. The present work aimed to study the chemical composition of extracts from C. glutinosa and to evaluate the antifungal and anti -hypertensive activities. The plant material was collected in the city of Uruguaiana (RS, Brazil), identified and deposited in a herbarium. After dryness and milling, the hydroethanolic extracts were obtained through exhaustive maceration using ethanol 40% (v/v) for leaves and ethanol 70% (v/v) for roots. The infusions were prepared using water at 80 °C. The chromatographic analyses were performed in liquid chromatography Prominence Shimadzu, for HPLC and UPLC assays. The method was conducted using reverse phase system, gradient elution with mobile phase composed by acetonitrile:methanol (4:1) and formic acid 0.1% pH 3.0, C18 analytical and fast column, and detection by UV-DAD and MS. The polyphenols and flavonoids contents were determined by colorimetric method. The in vitro antifungal activity was conducted by using the broth microdilution method, determining the MIC against different clinical isolates. For evaluation of in vivo anti-hypertensive potential, the blood pressure was measured by the method of invasive hemodynamic monitoring, through of insertion the catheter into the carotid artery. The results of phenolic content indicated the high concentration of these compounds in leaves extracts obtained by maceration: 1.8501 mgEAG/mL (leaves) and 0.8467 mgEAG/mL (roots) for infusion, and 3.7284 mgEAG/mL (leaves) and 2.6266 mgEAG/mL (roots) for maceration. For flavonoids, the contents were: 7.0959 mg/g (leaves) and 0.5664 mg/g (roots) for infusion, and 7.9511 mg/g (leaves) and 0.5994mg/g (roots) for maceration. In the chromatographic analyses, the leaf extracts from C. glutinosa presented chromatographic peaks well separated and reproducible. In the determination by UPLC-MS, the molecular ion and mass fragments indicated the predominant composition in flavonoids, suggesting the compounds quercetin-3- O-glucoside, quercetin-3-arabinoside, quercetin-3-glucuronide, isorhamnetin and quercetin-5- O-β-glucopiranoside. For the antifungal potential, the leaf and roots extracts presented activity against Candida parapsilosis, Candida tropicalis e Trichosporon asahii, with MIC values ranging 1,9-62,5 μg/mL. In the hemodynamic tests performed, the leaves extracts did not present significant effect in the arterial pressure, although a tendency in pressure reduction could be observed. The identification of quercetin derivatives in C. glutinosa becomes promisor further investigations about this species, mainly in respect to the anti-hypertensive action.

Sida tuberculata (Malvaceae), conhecida popularmente como “guanxuma”, é uma espécie vegetal de porte herbáceo, bem representada na região sul do Brasil. Na cultura popular é utilizada para tratamento de diversas enfermidades, em especial àquelas relacionadas ao diabetes e ao colesterol elevado. Para algumas espécies, existem relatos de eventual potencial antimicrobiano. Considerando a ausência de estudos sobre esta planta, o presente trabalho investigou a composição química dos extratos brutos de S. tuberculata e avaliou seu potencial antifúngico in vitro. Após a coleta e identificação, o material vegetal foi submetido aos processos de secagem e trituração. Submeteu-se a extração a frio por percolação, utilizando-se como solvente solução hidroetanólica a 40% para folhas e 70% para raízes. Para fins de comparação foram feitas extrações aquosas por infusão. Na sequência, foram determinados os teores de fenólicos totais e flavonóides totais. Posteriormente, as amostras foram analisadas através de método por CLAE-UV, com seleção das condições cromatográficas de melhor eficiência de separação. Sendo estas estabelecidas, efetuou-se análise por LC-MS em modo ESI positivo. Para os ensaios da atividade antifúngica foram utilizados os protocolos de microdiluição em ágar para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima (CFM). Também foi aplicada a metodologia para avaliação do potencial de remoção de biofilme em Cateter Venoso Central (CVC). Os resultados obtidos demonstraram um maior teor de fenólicos e flavonóides totais nos extratos das folhas. As análises por LC-UV-MS permitiram a identificação e proposição de cinco compostos, entre ecdisteróides, flavonóides e alcalóides. Nos ensaios de atividade antifúngica os extratos aquosos apresentaram atividade contra linhagens de Candida krusei, com valores de CIM variando entre 3.9 - 62.5 μg/ml para folhas e 1.95 - 31.25 μg/ml para raízes. No teste de remoção de biofilme, os extratos aquosos das folhas demonstraram um maior potencial de remoção. Os dados de composição química obtidos, nas variantes de diferentes partes da planta, bem como a atividade antimicrobiana detectada, geram expectativas quanto a novos estudos de exploração do potencial biológico de S. tuberculata. Sida tuberculata (Malvaceae), popularly known as "guanxuma", is an herbaceous plant species present in southern Brazil. In popular culture, it is used for the treatment of several diseases, such as those related to diabetes and high cholesterol level. For some species of Sida, there are also reports about the antimicrobial potential. Considering the lack of studies at this species, this study proposed an investigation about the chemical composition of Sida tuberculata extracts and their in vitro antifungal activity. After collection and identification, the plant material was submitted to dryness and powdered. Then, it was submitted to extraction by percolation using hydroethanolic solution at 40% and 70% as solvent, to leaves and roots respectively. For comparison, aqueous extracts were obtained by infusion. The total phenolic and flavonoid contents of extracts were determined. The samples were also evaluated by HPLC-UV, testing the chromatographic conditions that promote the better separation efficiency. After, for the identification procedure, the analysis by LC-ESI-MS in positive mode was conducted using previously established conditions. For the antifungal activity assay, the agar microdilution protocols were used for determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC). In addition, the extracts were tested for potential biofilm removal in Central Venous Catheter (CVC). The results demonstrated a higher concentration of total phenolic and flavonoids compounds in the leaves extracts. LC-MS analysis allowed the identification of five components, between ecdysteroids, flavonoids and alkaloids. In the assay of antifungal activity, the aqueous extract had activity against Candida krusei strains, with the MIC values varying between 3.9 - 62.5 μg/ml for leaves and 1.95 - 31.25 μg/ml for roots. In the CVC biofilm removal testing, the aqueous leaves extracts presented a greater potential. The chemical composition data obtained in this work, considering the different parts of plant, as well as the antimicrobial activity detected, bring perspectives of exploring this species concerning its biological potential.