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Ilustraciones, diagramas, tablas El bosque seco tropical (Bs-T), amenazado y poco conocido, ha tenido cambios drásticos en su estructura y diversidad debido a su degradación. Esto ha resultado principalmente de la deforestación y el establecimiento de cultivos intensivos y la actividad ganadera convencional. Los sistemas silvopastoriles (SSP) brindan beneficios al suelo, tales como el aporte de hojarasca y nutrientes entre otros. Sin embargo, poco se sabe del mejoramiento de los indicadores de la salud del suelo al establecer los SSP. El objetivo de esta investigación es evaluar el efecto del uso y manejo del suelo sobre la salud del suelo a través de indicadores químicos, físicos y biológicos de la salud del suelo bajo cinco diferentes arreglos: (i) cultivo intensivo de maíz (Zea mays) (M), (ii) pastura mixta (Megathyrsus maximum + Dichanthium aristatum) (P), (iii) SSP compuesto por (M. maximum + D. aristatum) + arbustos (Crescentia cujete + Leucaena leucocephala) (P+a), (iv) SSP multiestrato compuesto por pastura (M. maximum + D. aristatum) + arbustos (C cujete + L. leucocephala) + arboles (Guazuma ulmifolia, Cassia grandis y Albizia saman) (P+a+A) y (v) como referencia se incluyó un arreglo forestal correspondiente a un bosque secundario (Bs). Las evaluaciones se hicieron en condiciones de tiempo contrastantes (húmedo y seco) en suelos del Valle medio del rio Sinú que presentan un gradiente de drenaje. En general, el suelo cultivado con M presentó un deterioro integral en las condiciones físicas, químicas y biológicas (caracterizado por menor contenido de MO, N- total, Ca, K, CICE, S, B, Fe, Cu; mayor densidad real y aparente, menor porosidad total, menor tamaño y estabilidad de agregados; menor carbón activo oxidable, menor potencial bioquímico); este fue seguido en estos indicadores por el Bs. Se encontró que los suelos de los SSP, con respecto a los de la pastura, presentaron mayores valores en el contenido de materia orgánica del suelo, C-activo oxidable, Ca, Mg, P, B, CICE en época seca y N- NO3 en época lluviosa. Por lo anterior, se puede concluir que el establecimiento de SSP mejoró el valor de muchos de los indicadores de la salud del suelo en comparación a lo que ocurre en la pastura y al monocultivo de maíz. En general, el suelo del bosque de restauración presentó valores bajos a medios. (Texto tomado de la fuente) Threatened and little-known tropical dry forest Bs-T has undergone drastic changes in structure and diversity due to degradation. Deforestation is mainly a consequence, the establishment of intensive cropping and livestock activity. The silvopastoral systems, (SSP), which provide benefits to the soil such as the contribution of leaf and nutrients, among others. However, it is little knowing the improve of the health soil indicators when establishment SSP. The objective is to evaluate the effect of the soil use and management on health soil by chemical, physical, and biological indicators of soil health under five different arrangements, which have been established for at least 19 years: (i) intensive maize (Zea mays) cropping (M), (ii) mixed pasture (Megathyrsus maximum + Dichanthium aristatum) (P), (iii) SSP consisting of (M. maximum + D. aristatum) + shrubs (Crescentia cujete + Leucaena leucocephala) (P+a), (iv) multistrata SSP made up of pasture (M. maximum + D. aristatum) + shrubs (C. cujete + L. leucocephala) + trees (Guazuma ulmifolia, Cassia grandis and Albizia saman) (P+a+A) and (v) a forest arrangement corresponding to a restauration forest (Bs) was included. The evaluations were made under contrasting climatic conditions (wet and dry) in soils of the Middle Valley of the Sinú river, which present a drainage gradient. Chemical, physical, and biological indicators were used to quantitatively evaluate the impact of soil use and management on the different arrangements. It was found that SSP soils presented increase in soil organic matter, total Nitrogen, N-NO3, Ca, Mg, K, P, B, Effective Cation Exchange Capacity (ECEC), oxidizable C-active (COXP), detecting higher enzymatic activities (alkaline phosphatase and catalase), CO2, lower bulk density, higher total porosity, greater water stability of aggregates, and greater weighted average diameter (DMP) and greater equivalent diameter of aggregate size, were detected. Therefore, it can be stated that the establishment of SSP improved soil chemical, physical and biological indicators of soil health compared to what occurs in the pasture and corn monoculture. Usually, the restauration of forest soil showed intermediate to low values. Universidad Nacional de Colombia- Sede Medellín COLCIENCIAS: Otorgo Beca de sostenibilidad Universidad Nacional de Colombia: Elaboró análisis químicos del suelo a través del Laboratorio de suelos AGRAVIA: Permitio el ingreso y colaboración con personal para los muestreos del trabajo. Doctorado Doctor en Biotecnología Salud del suelo en un diseño de clasificación experimental por bloques Desarrollo de indicadores de calidad del suelo Área Curricular Biotecnología

[SPA] Los depósitos de estériles mineros (o balsas mineras) se encuentran formados por los residuos procedentes de las labores de concentración de minerales, y están considerados como uno de los principales problemas medioambientales asociados a las antiguas zonas de minería metálica. Los materiales que constituyen estas estructuras suelen presentar propiedades físico-químicas extremas como pHs ácidos o básicos, ausencia de estructura edáfica, salinidad, elevadas concentraciones de metal(oid)es, bajos contenidos en nutrientes y en materia orgánica, etc. Estas condiciones dificultan el establecimiento y crecimiento de plantas, manteniendo sus superficies desnudas, expuestas a los agentes erosivos. El empleo del fitomanejo, en términos de fitoestabilización, se considera la alternativa más eficiente para disminuir los riesgos medioambientales asociados a las balsas mineras. Esta técnica plantea la implantación de una cubierta vegetal estable sobre la superficie de las balsas mineras que evite la erosión y fije las partículas metálicas en la rizosfera. Con el fin de mejorar las deficientes condiciones de fertilidad de las balsas mineras y facilitar el establecimiento de la vegetación se recurre, de modo habitual, a la adición de enmiendas orgánicas. Si bien se ha constatado el efecto positivo que a corto plazo tiene la adición de estas enmiendas sobre la cubierta vegetal, no existe mucha información en relación al mantenimiento de la funcionalidad edáfica en estas balsas mineras en una escala temporal más amplia. Este hecho podría estar condicionado, en gran medida, por la presencia de una comunidad microbiana tolerante a las condiciones físico-químicas de los depósitos mineros, y que además, participe activamente en los procesos biogeoquímicos del suelo. La presente Tesis Doctoral pretende contribuir al avance del conocimiento de la relación entre los factores edáficos y microbiológicos implicados en el establecimiento de especies vegetales en antiguos depósitos mineros. Para ello, plantea como finalidad principal profundizar en el conocimiento de los procesos de evolución edáfica que dotan de sostenibilidad a los proyectos de fitomanejo de residuos mineros dentro del contexto de zonas áridas y semiáridas, evaluando la regeneración de la funcionalidad del suelo a través de la mejora de los ciclos biogeoquímicos y valorando los efectos concretos de la adición de enmiendas desde el punto de vista microbiológico. Para tal fin, la Tesis Doctoral fue dividida en dos partes: una fase de trabajo de campo en un depósito minero situado en el antiguo Distrito Minero de Cartagena-La Unión, y una fase experimental llevada a cabo en condiciones controladas en una cámara de cultivo situada en el Instituto de Biotecnología Vegetal de la UPCT. Los trabajos desarrollados en estas dos partes respondieron a cuatro objetivos específicos: El primer objetivo consistió en determinar qué factores, de entre los aspectos edáficos, vegetales y microbiológicos, resultaban determinantes para la funcionalidad del suelo en el fitomanejo de balsas mineras en zonas semiáridas. Para ello, se realizó un estudio de campo utilizando un diseño experimental basado en un transecto a lo largo de una antigua balsa minera del Distrito de Cartagena-La Unión. Dicho transecto incluyó tanto zonas no impactadas (control) como zonas dentro del cuerpo de la propia balsa en las que se tomaron muestras de suelo para su caracterización química y microbiológica. Los resultados mostraron que los cambios en las abundancias relativas de las bacterias a través del transecto se explicaron mejor por factores relacionados con la fertilidad del suelo y la presencia de plantas que por las concentraciones de metales. Esta presencia de vegetación espontánea en las balsas mineras permitió la transición desde órdenes de bacterias litotróficas, dominantes en áreas desprovista de vegetación, a grupos de carácter organotrófico, algunos de los cuales también estuvieron presentes en suelos no contaminados de la zona. Este último hecho permitió afirmar que los procesos de sucesión edáfica mediados por plantas podrían estimular ciclos biogeoquímicos similares a los que tienen lugar en sistemas no contaminados. A diferencia de las bacterias, las variaciones en la abundancia relativa de los hongos a través del transecto no se explicaron por los parámetros edáficos o la presencia de plantas, sino que parecían estar más relacionados con la distribución espacial o los tipos de sustratos orgánicos presentes. El segundo objetivo se centró en identificar los factores edáficos, incluidos los microbiológicos, que determinaban el establecimiento de plantas con diferentes estrategias de crecimiento en depósitos mineros de entornos semiáridos. Para este fin, se realizó una caracterización edáfica y microbiológica de la rizosfera de una especie ruderal pionera, Zygophyllum fabago, y dos especies arbóreas, Pinus halepensis y Tetraclinis articulata, que crecen espontáneamente en la balsa minera seleccionada para el primer objetivo y trabajo de la Tesis. Los resultados revelaron que Z. fabago colonizó selectivamente zonas de la balsa caracterizadas por una alta salinidad (3.5 dS m-1) y altos porcentajes de limo (42 %), mostrando una composición microbiana en su rizosfera que incluía grupos halotolerantes. Las dos especies arbóreas crecieron en áreas de salinidad moderada de la balsa (1.7 dS m-1) con altos porcentajes de arena (85 %), donde Actinomycetales fue el orden bacteriano más abundante. Las diferencias en el comportamiento micorrícico de ambas especies arbóreas (ecto-micorrícico para P. halepensis y endo-micorrícico para T. articulata) podría explicar las diferencias encontradas entre su composición fúngica. En relación al fitomanejo, estos resultados mostraron que la colonización selectiva en nichos edáficos específicos de especies vegetales con diferentes estrategias de crecimiento permitiría aumentar la biodiversidad y la resistencia del sistema frente a factores de estrés ambientales. El tercer objetivo se centró en evaluar los efectos de la aplicación de dos enmiendas orgánicas en la composición microbiana (bacteriana y fúngica) de balsas mineras. Para ello, se llevó a cabo un experimento en mesocosmos, donde un residuo minero procedente de la balsa caracterizada en el primer objetivo fue enmendado con compost de estiércol, biochar o su combinación. Estos tratamientos, junto a un tratamiento control sin enmendar, fueron mantenidos durante 6 meses en una cámara de cultivo con condiciones controladas. Se llevaron a cabo tres muestreos de suelo, para su caracterización edáfica y microbiológica, en los meses uno, tres y seis. Los resultados mostraron que el compost tuvo un efecto más marcado sobre las propiedades de suelo que el biochar, especialmente en la etapa inicial del experimento donde los tratamientos con compost presentaron un mayor aumento de los valores de carbono orgánico disuelto y metales extraíbles en agua. Sin embargo, las concentraciones de estos parámetros disminuyeron a lo largo del experimento. En cuanto a la composición bacteriana, se observó una fuerte correlación de las abundancias relativas de algunos órdenes de bacterias (Flavobacteriales y Sphingobacteriales) con las concentraciones decrecientes de carbono lábil y la aparición progresiva conforme avanzaba el experimento de otros grupos más especializados en la descomposición de fuentes de carbono más estable (Xanthomonadales y Myxococcales). El biochar favoreció la presencia de bacterias descomponedoras (Actinomycetales) especializadas en la degradación de compuestos con lignina u otras sustancias de carbono recalcitrantes. A diferencia de las bacterias, solo unos pocos órdenes de hongos (Sordariales y Microascales) aumentaron su abundancia relativa en los tratamientos que contenían compost, mientras que el resto mostró una disminución o ningún efecto. El tratamiento combinado de biochar-compost podría resultar una opción viable para optimizar la funcionalidad microbiológica de los depósitos mineros debido a su capacidad para favorecer tanto microorganismos especializados en la degradación de materia orgánica lábil como compleja. Por último, el cuarto objetivo tuvo la finalidad de evaluar los efectos de la presencia de plantas u hojarasca sobre la composición microbiana en sustratos mineros previamente enmendados con compost y/o biochar. Esto permitiría determinar la viabilidad de las comunidades microbianas presentes en residuos mineros enmendados para sustentar los ciclos biogeoquímicos desencadenados por la presencia de vegetación. Para ello, se seleccionó una especie vegetal pionera, Piptatherum miliaceum, procedente de depósitos mineros del Distrito Minero Cartagena-La Unión. Las semillas de P. miliaceum o su hojarasca se incorporaron a los mesocosmos empleados en el experimento recogido en el tercer objetivo. Los resultados mostraron que los efectos de la presencia de hojarasca o planta en la composición microbiana estuvieron muy condicionados por la presencia previa de enmiendas, especialmente de compost. En aquellos tratamientos que contenían compost el mayor crecimiento de las plantas favoreció una mayor diferenciación de la composición bacteriana y fúngica, mientras que en los tratamientos sin enmiendas o solo tratados con biochar (con menor crecimiento de plantas), la hojarasca jugó un papel más importante en la determinación de la composición microbiana, especialmente de bacterias. El mayor crecimiento de las plantas favoreció el incremento de grupos bacterianos cuyas abundancias relativas se habían visto disminuidas por la presencia de compost (e.g. Actinomycetales) y de otros grupos relacionados con el desarrollo rizosférico (e.g. Rhizobiales). Esto mostró la especial habilidad de las plantas para configurar su microbioma específico. El empleo de combinaciones biochar-compost podría resultar viable para facilitar la consecución de una cubierta vegetal estable en depósitos mineros, ya que favorece el crecimiento vegetal (mayor biomasa), aporta una fuente de carbono estable (biochar) y facilita el desarrollo del microbioma rizosférico. [ENG] Mine tailings are wastes composed by the left-overs of the ore-processing activities, and they are considered as the main responsible for environmental health impacts in former metallic mining areas. The bare areas of the tailings are usually impacted by wind and water erosion, which may spread the metal(loid) enriched particles to their surroundings. Phytomanagement by phytostabilization is considered a suitable alternative to decrease the environmental risks associated to mine tailings. This technique relies on the generation of a stable vegetation cover at the tailings surfaces to decrease the erosion by fixing the soil. However, soil conditions at tailings usually result unfavourable for plant growth (e.g. high metal(loid) concentrations, low fertility, high salinity) and soil conditioners are proposed to overcome this issue. Although there is a general acceptance of the benefits of using amendments for improving plant growth, there is little information on the sustainment of edaphic functionality at long-term scenarios. This issue could be related to the presence of a feasible microbiological community, which tolerates tailings conditions and actively supports biogeochemical processes. The general purpose of this PhD Thesis was to increase knowledge on the relationship between edaphic and microbiological factors involved in the spontaneous plant colonisation of mine tailings. This will improve the feasibility of phytomanagement in terms of phytostabilization applied to these environments in a semiarid climate context. In order to achieve this goal, the PhD thesis has been divided in two parts corresponding to a field survey data and mesocosm experiments carried out at the climate chamber facility at the IBV-UPCT. These research studies were designed to answer four specific goals: The first goal was to elucidate which factors, including edaphic, vegetation and microbiological aspects, determine soil functionality in the phytomagement of mine tailing piles in semiarid areas. For this purpose, a field study was conducted using an experimental transect design, which included a tailing pile and a non-mining impacted zone (as control) located at southeast Spain. The changes in bacterial relative abundances through the transect were better explained by soil fertility related factors (which in turn were related to the presence of plants) than by metals concentrations. The presence of vegetation at the tailings allowed the transition from lithotrophic bacterial orders, which dominated in bare tailings areas, to organotrophic oriented taxa, some of them shared with the non-polluted samples. These results seem to indicate that natural plant mediated successional processes might stimulate biogeochemical cycles similar to those occurring at non-polluted systems. This functionality of the impacted sites, which include unfavourable edaphic conditions, should be taken into account in the phytomanagement of mine tailings, since it may support its long-term sustainability. Unlike bacteria, variations in fungal relative abundances through the transect were not clearly explained by soil parameters or the presence of plants, since they seem to be more determinant by spatial distribution or the type of organic substrates. The second goal was focused on identifying the edaphic factors, including microbiological, which affect the establishment of plant species with contrasting growth patterns during the phytomanagement of a mine tailings pile. For this purpose, a comprehensive rhizosphere characterization was performed in an early ruderal colonizer, Zygophyllum fabago and two late successional tree species, Pinus halepensis and Tetraclinis articulata, growing at a mine tailings pile in southeast Spain. Results revealed that Z. fabago selectively colonized tailings patches characterized by high salinity (3.5 dS m-1 ) and high silt percentages (42 %), showing a specific halotolerant rhizospheric microbial composition. The two tree species grew at moderate salinity areas of the tailings pile (1.7 dS m-1 ) with high sand percentages (85 %) where Actinomycetales was the most abundant bacterial order (>10 % abundance). The contrasting mycorrhizal behaviour of both tree species (ecto-mycorrhizal for P. halepensis and endo-mycorrhizal for T. articulata) could explain the differences found between their fungal rhizospheric composition. In terms of phytomanagement, the selective plant species colonization following specific soil patches at mine tailings would increase their biodiversity and resilience against environmental stressors. The third goal was to assess the effect of the application of two organic amendments, manure compost and biochar, on soil bacterial and fungal composition at metal(loid) enriched mine tailings. The addition of compost caused stronger effects on most of soil parameters and microbial composition than the biochar, especially at the initial stage of the experiment. However, the higher dependence on labile organic carbon for some bacterial groups at the treatments containing compost determined their decay along time (Flavobacteriales and Sphingobacteriales) and the appearance of other taxa more dependent on recalcitrant organic matter (Xanthomonadales and Myxococcales). Biochar favoured bacterial decomposers (Actinomycetales) specialized in high lignin substrates and other recalcitrant carbon compounds. Unlike bacteria, only a few fungal orders increased their relative abundances in the treatments containing compost (Sordariales and Microascales), while the rest showed a decrease or remained unchanged. The mix biocharcompost may result the best option to support a more diverse microbial population in terms of soil functionality that is able to decompose both labile and recalcitrant carbon compounds. This may favour the resilience of the system against environmental stressors. Finally, the fourth goal was to evaluate the effects of the presence of plants or plant litter on the microbial composition in the previously amended tailings (with biochar and/or manure compost). This would allow to determine the feasibility of amendments for the long-term phytomanagement, as well as the ability or inability of the microbial community resulted from the amended tailings to support biogeochemical cycles without additional external inputs of amendments compatible with the rhizospheric microbiome or litter. For this purpose, a pioneer plant species (Piptatherum miliaceum) of the former Cartagena-La Unión Mining District tailings was selected. Piptatherum miliaceum seeds or its litter were incorporated to previously amended tailings substrates. Our experiment showed that the effect of plant and litter on microbial composition was dependent on the previous presence of amendments, especially compost. At those treatments containing compost, the higher growth of plants was able to shape microbial composition (both, bacterial and fungi), while at the non-amended and biochar-only containing treatments (where a scarce growth of plants occurred), litter showed a more important role, especially in shaping bacterial composition. The higher growth of plants favoured some bacterial groups, whose relative abundances were previously depleted in the compost containing treatments (e.g. Actinomycetales) and other groups related to plant rhizospheres (e.g. Rhizobiales). These results revealed the ability of plants for shaping their own rhizospheric microbiome when the amendments contribute to ameliorate the low fertility of mine tailing soils. The employment of the combinations biocharcompost could result optimal to achieve the establishment of a vegetation cover at tailings, providing at the same time an effective tool to stimulate plant growth (higher plant biomass), a recalcitrant source of organic matter (biochar) and a support for the development of a plant rhizospheric microbiome. Esta tesis doctoral ha podido llevarse a cabo gracias a la financiación recibida por FEDER / Ministerio de Ciencia e Innovación - Agencia Estatal de Investigación (España) –Proyecto: “Sustainability in the phytomanagement of mine tailings: ecophysiological and microbiological aspects” (CGL2017-82264-R). Escuela Internacional de Doctorado de la Universidad Politécnica de Cartagena Universidad Politécnica de Cartagena Programa de Doctorado en Técnicas Avanzadas en Investigación y Desarrollo Agrario y Alimentario (TAIDA)

[SPA] La minería metálica es una de las actividades más perjudiciales para el medio ambiente a nivel mundial, entre otros motivos debido a la alta cantidad de residuos potencialmente peligrosos con elevada concentración de metales y metaloides (elementos potencialmente tóxicos, PTEs) que produce. Además, las excavaciones y movimientos de tierra pueden llevar a la destrucción completa de las áreas afectadas y sus alrededores. Los depósitos de almacenamiento de residuos (grandes pilas al aire libre que almacenan residuos fangosos procedentes de lavaderos de mineral) son especialmente preocupantes, ya que presentan las mayores concentraciones de PTEs y muchas veces se abandonan in situ tras el cese de la actividad minera sin ninguna medida de restauración. Los suelos de los depósitos mineros se forman a partir de los residuos que éstos almacenan. Aparte de presentar niveles extremadamente altos de PTEs, se caracterizan generalmente por una alta salinidad, valores extremos de pH (de ácido a alcalino), baja disponibilidad de materia orgánica y nutrientes, y falta de estructura edáfica que conduce a una escasa capacidad de retención de agua y de aireación. Entre otras cosas, esto dificulta el crecimiento de la vegetación provocando que muchas veces la superficie de los depósitos permanezca desnuda, favoreciendo la propagación de PTEs a las áreas adyacentes. Las condiciones hostiles impuestas por los residuos mineros no sólo obstaculizan la colonización de las plantas sino también la biodiversidad del suelo, lo que a menudo da lugar a escasa actividad biológica en los suelos de los depósitos. Son suelos con baja capacidad para albergar organismos vivos y, por consiguiente, para desarrollar procesos biológicos. Esto provoca que la funcionalidad de los suelos de los depósitos mineros sea muy limitada, así como su capacidad para proporcionar servicios ecosistémicos. Las técnicas convencionales de remediación de depósitos mineros se basan en soluciones de ingeniería tales como operaciones de remoción y/o aislamiento in situ mediante sellado y plantación. Sin embargo, estas opciones son generalmente costosas y/o técnicamente difíciles de implementar y eso dificulta su implantación. Otras opciones, que pueden ser complementarias a las técnicas de ingeniería, son las técnicas de fitomanejo. El fitomanejo comprende un conjunto de alternativas más baratas y respetuosas con el medio ambiente que buscan manejar el sistema suelo-planta mediante el uso de enmiendas de suelo y/o la introducción de especies de plantas tolerantes a las condiciones extremas de estos ambientes, para controlar la dispersión de PTEs. Dentro del fitomanejo, la fitoestabilización tiene como objetivo reducir la movilidad de los PTEs y/o su (bio)disponibilidad a través de la absorción y/o fijación en las raíces, y/o la inmovilización en el suelo por fenómenos como la precipitación, adsorción, oxidación, reducción, para evitar su entrada en la cadena trófica, así como su migración a las aguas subterráneas. Un proceso que puede ayudar a implementar las técnicas de fitoestabilización es la denominada restauración pasiva, que se basa en la capacidad de las plantas nativas para colonizar y crecer espontáneamente en lugares perturbados. Este fenómeno conduce a la formación de parches de vegetación (llamados a veces islas de fertilidad) cuyos suelos suelen mostrar un mayor contenido de C y N orgánicos y una mayor actividad microbiana que las áreas desnudas adyacentes. Esto es particularmente interesante cuando los depósitos mineros están ubicados en mitad de áreas naturales (por ejemplo, zonas boscosas) rodeados de vegetación que puede esparcir propágulos y semillas que alcanzan con facilidad los depósitos abandonados. En este sentido, favorecer el establecimiento de especies nativas en los depósitos ayuda a crear puntos de nucleación en éstos y a desencadenar la expansión de la vegetación en su superficie. Entre otros, este proceso podría verse favorecido por la adición de enmiendas orgánicas al suelo, como biochar y residuos sólidos urbanos (RSU), que inmovilicen los metal(oid)es y mejoren las condiciones de los suelos. El objetivo general de la Tesis Doctoral fue profundizar en el conocimiento de los aspectos físicos, fisicoquímicos, funcionales y ecotoxicológicos en suelos de depósitos abandonados de minería metálica de ambientes semiáridos Mediterráneos y su relación con la colonización vegetal espontánea, y valorar si la adición de enmiendas orgánicas contribuye a mejorar estos ecosistemas al promover la recuperación de la funcionalidad del suelo y desencadenar la colonización espontánea de la vegetación. Para lograr este objetivo general, se plantearon tres objetivos específicos: 1. Evaluar en qué grado pueden modificarse las condiciones del suelo tras la colonización espontánea de la vegetación en depósitos abandonados de minería metálica, y aportar evidencias sobre el interés de esta colonización para el fitomanejo de estos depósitos. 2. Evaluar en qué medida la colonización vegetal espontánea de depósitos abandonados de minería metálica da lugar a una mejora funcional del suelo e identificar, si es posible, un nivel crítico que indique que esta funcionalidad se aproxima a la de los suelos naturales con vegetación de las áreas circundantes. 3. Evaluar la eficacia de una enmienda orgánica compuesta por biochar (procedente de podas de árboles) y compost de RSU para mejorar las condiciones de suelos ácidos sin cubierta vegetal en depósitos de residuos mineros y valorar si los efectos de dicha enmienda persisten estacionalmente durante un año y favorecen la colonización vegetal espontánea. El área de estudio seleccionada fue el antiguo distrito minero de Cartagena-La Unión (≈50 km2; Región de Murcia, SE España), cuya actividad finalizó en 1991. La zona presenta un clima semiárido Mediterráneo (precipitación media anual ≈200-300 mm, temperatura media anual ≈17 °C, y tasa media anual de evapotranspiración ≈850 mm). La vegetación natural está constituida principalmente por arbustos xerófilos mediterráneos y bosques de pino carrasco (Pinus halepensis). Los principales metales extraídos en la zona fueron Fe, Pb y Zn, obtenidos de minerales como carbonatos, sulfuros y sulfatos. En la actualidad, permanecen en la zona 89 depósitos mineros abandonados, la mayoría de ellos sin ningún tipo de intervención de restauración. El estudio se llevó a cabo en dos de estos depósitos, separados por una distancia de ≈2000 m y construidos a mediados de los años 60 para almacenar los residuos de las minas de galena (PbS), y en las áreas forestales circundantes. Ambos depósitos (ubicados a ≈170-200 m sobre el nivel del mar y situados en pequeños valles de orientación NW a SE) fueron abandonados hace ≈40 años y han sido parcialmente colonizados por la vegetación nativa formando parches irregulares que cubren entre ≈20% y ≈50% de las superficies. A finales de abril-inicios mayo de 2017 se seleccionaron seis ambientes diferentes para el estudio, estableciendo cuatro parcelas de muestreo de 2 m x 2 m en cada uno de ellos: A) Dentro de los depósitos mineros. 1. Suelos desnudos (B); 2. Parches con pequeños grupos de árboles de P. halepensis creciendo dispersos de ≈2,5-5 m de alto (P); 3. Parches formados por árboles aislados de P. halepensis creciendo dispersos de >≈4-5 m de alto arbustos y hierbas bajo su copa (P+S); 4. Parches densos que incluyen varios árboles de P. halepensis de >≈4-5 m de altura y arbustos y hierbas bajo su copa (DP+S). B) Fuera de los depósitos mineros. 5. Bosque situado junto a los depósitos mineros con árboles de P. halepensis de >≈5 m de altura y arbustos y hierbas bajo su copa (FN); 6. Bosque situado lejos de los depósitos mineros (≈1600-1800 m) con árboles de P. halepensis de >≈5 m de altura y arbustos y hierbas bajo su copa (FA). Además, en los suelos desnudos dentro de los depósitos se establecieron cuatro parcelas adicionales para un experimento de adición de enmiendas al suelo (AB). Los resultados de la Tesis Doctoral se presentan en tres capítulos: Capítulo 5. Incluye el trabajo planificado para responder al primer objetivo específico, basado en una campaña de trabajo de campo realizada en el verano de 2017. Se evaluaron un conjunto de indicadores del suelo (físicos, fisicoquímicos y biológicos) en condiciones de campo y laboratorio en los ambientes B, P, P+S, DP+S, FN y FA. Los resultados evidencian el interés de la colonización espontánea por parte de la vegetación nativa para el fitomanejo de depósitos de minería metálica, en términos de proporcionar funcionalidad al ecosistema. En los parches de vegetación dentro de los depósitos se encontraron especies de plantas pioneras y nodrizas (favorecedoras de la sucesión vegetal) y los índices ecológicos de vegetación en P+S y DP+S fueron similares a FN y FA. En los suelos de los parches se encontraron evidencias de pedogénesis, como el desarrollo de estructura edáfica y el aumento de la capacidad de intercambio catiónico y el C y N orgánicos, siguiendo un patrón de aumento/mejora B-P-P+S-DP+S. Sin embargo, los contenidos de metal(oid)es del suelo no siguieron el mismo patrón de variación. Por ejemplo (en mg kg-1): P mostró el valor máximo de Cu (≈277) y Zn (≈17860) totales, mientras que P+S de As (≈1250) y Pb (≈14570) totales. B tuvo el máximo de Pb (≈4) y Zn (≈207) solubles en agua, mientras que FA de As (≈0,192) y Cu (≈0,149). El C de la biomasa microbiana del suelo, la actividad enzimática, la respiración de suelo (emisión de CO2), la descomposición de la materia orgánica y la actividad alimentaria de los invertebrados edáficos indicaron una actividad biológica similar o incluso superior en P+S y DP+S que en FN y FA. De hecho, FA mostró alto riesgo de ecotoxicidad del suelo (reproducción reducida del invertebrado Enchytraeus crypticus), atribuible a las altas concentraciones de As soluble en agua. Por lo tanto, de estos resultados se deduce que la vegetación que coloniza espontáneamente los depósitos de residuos mineros puede modificar eficazmente sus suelos, que adquieren la capacidad de proporcionar ciertas funciones del ecosistema. Los resultados de este trabajo fueron publicados en el artículo científico: Álvarez-Rogel, J., Peñalver-Alcalá, A., Jiménez-Cárceles, F.J., Tercero, M.C., González-Alcaraz, M.N. 2021. Evidence supporting the value of spontaneous vegetation for phytomanagement of soil ecosystem functions in abandoned metal(loid) mine tailings. Catena 201, 105191; doi: https://doi.org/10.1016/j.catena.2021.105191. Capítulo 6. Este capítulo incluye el trabajo planificado para responder al segundo objetivo específico, basado en una campaña de trabajo de campo realizada en la primavera de 2018. Se estudiaron los índices ecológicos de la vegetación, las formas de vida de las plantas y los roles funcionales de éstas, junto con parámetros fisicoquímicos y funcionales de los suelos, en los ambientes B, P, P+S, DP+S, FN y FA. Los parches de vegetación solo mostraron pequeñas diferencias en los parámetros fisicoquímicos relacionados con las condiciones de estrés abiótico del suelo (pH, salinidad y metales), independientemente de la vegetación. Sin embargo, parches de vegetación con mayor diversidad y riqueza de especies y presencia de plantas con mayor contraste de formas de vida y rasgos funcionales más diversos que facilitan el crecimiento de especies menos tolerantes al estrés, mostraron un aumento de la funcionalidad microbiana del suelo (mayor C de la biomasa microbiana, actividad β-glucosidasa, actividad metabólica bacteriana y diversidad funcional). Además, estos parches de vegetación mostraron un estado funcional del suelo comparable al de los bosques fuera de los depósitos mineros. Los resultados de este trabajo fueron publicados en el artículo científico: Peñalver-Alcalá, A., Álvarez-Rogel, J., Peixoto, S., Silva, I., Silva, A.R.R., González-Alcaraz, M.N. 2021. The relationships between functional and physicochemical soil parameters in metal(loid) mine tailings from Mediterranean semiarid areas support the value of spontaneous vegetation colonization for phytomanagement. Ecological Engineering 168: 106293; doi: https://doi.org/10.1016/j.ecoleng.2021.106293. Capítulo 7. Este capítulo incluye el trabajo planificado para responder al tercer objetivo específico. En abril de 2017 se aplicó una enmienda orgánica consistente en una mezcla de 3:1 de biochar y RSU compostado (dosis de 3% peso seco) a suelos ácidos (pH ≈5,5) sin vegetación de uno de los depósitos mineros. Las concentraciones de metal(oid)es totales en los suelos enmendados fueron (en mg kg-1): As ≈220, Cd ≈40, Mn ≈1800, Pb ≈5300 y Zn ≈8600. Dos meses después de la adición de la enmienda ya se observaron mejoras en las propiedades químicas y fisicoquímicas de los suelos (reducción de la acidez, salinidad y metales solubles en agua y aumento del contenido de C orgánico y nutrientes), que resultó en una reducción de la ecotoxicidad para el invertebrado edáfico Enchytraeus crypticus. El C orgánico recalcitrante proporcionado por el biochar permaneció en el suelo, mientras que los compuestos orgánicos lábiles proporcionados por el RSU se consumieron con el tiempo. Estas mejoras fueron consistentes durante al menos un año y condujeron a una menor densidad aparente, mayor capacidad de retención de agua y mayores niveles para los parámetros microbianos y relacionados con funcionalidad (C de la biomasa microbiana, actividad microbiana catabólica y emisión de CO2) en el suelo enmendado del depósito. El crecimiento espontáneo de la vegetación nativa se favoreció con la adición de enmiendas, pero fue necesario un periodo de tres años para que las plantas colonizadoras persistieran y alcanzaran tamaño adulto. Los resultados de este trabajo fueron publicados en el artículo científico: Peñalver-Alcalá, A., Álvarez-Rogel, J., Conesa, H.M., González-Alcaraz, M.N. 2021. Biochar and urban solid refuse ameliorate the inhospitality of acidic mine tailings and foster effective spontaneous plant colonization under semiarid climate. Journal of Environmental Management 292: 112824; https://doi.org/10.1016/j.jenvman.2021.112824. Las conclusiones generales de la Tesis Doctoral son tres: 1) La colonización vegetal espontánea de depósitos abandonados de minera metálica de zonas semiáridas Mediterráneas induce mejora de las condiciones físicas, fisicoquímicas, funcionales y ecotoxicológicas del suelo, independientemente de los niveles de meta(oid)es totales. 2) La riqueza y diversidad de especies vegetales con formas de vida diferentes y rasgos funcionales distintos parecen ser factores clave para lograr una mejora funcional efectiva del suelo en los parches de vegetación de depósitos mineros espontáneamente colonizados. 3) La combinación de biochar de podas de árboles y RSU compostado es, en general, una enmienda adecuada para mejorar los suelos ácidos de depósitos de residuos mineros, promoviendo su recuperación funcional y desencadenando la colonización espontánea de la vegetación. [ENG] Metal mining is one of the most environmentally detrimental activities worldwide, among others, due to the high load of (hazardous) wastes disposed. Mining can cause extreme impacts on the affected ecosystem(s), which can lead to multi-elemental pollution problems and, in some cases, to the complete destruction of the affected areas and their surroundings. Of particular concern are the so-called mine tailings (open-air piles that store muddy residues), which are, on many occasions, abandoned in situ after the mining activity ceases without any restoration. Mine tailings soils are formed from the mine wastes they store. Apart from extremely high metal(loid) levels, they are generally characterized by high salinity, extreme pH values (from acid to alkaline), low availability of organic matter and nutrients, and lack of physical structure that leads to reduced water retention capacity and aeration. Among others, this tends to cause lack of vegetation and that tailing surfaces remain bare, favoring the spread of potentially toxic elements (PTEs) to adjacent areas. The hostile conditions imposed by tailing wastes not only hinder plant colonization but also soil biodiversity, often leading to low-biologically active tailing soils (soils with low capacity to shelter living organisms and, consequently, to support biological processes). Thereby, the functionality of mine tailings soils is often restricted, as well as their capacity to provide ecosystem services. Conventional mine tailings remediation techniques are based on engineering solutions such as removal operations and/or on-site isolation by sealing and afforestation. However, these options are generally expensive and/or technically difficult to implement. Other options, which can be complementary to engineering ones, are phytomanagement techniques. Phytomanagement comprises a set of cheaper and environmentally friendly alternatives that seek to manipulate the soil-plant system (by using soil amendments and/or tolerant plants) to control the fluxes of pollutants in the environment. Within phytomanagement, phytostabilization aims to reduce pollutants mobility and (bio)availability via root uptake, precipitation or reduction to prevent their entry into the food chain as well as their migration to groundwater. Phytostabilization can take advantage of the so-called passive restoration that relies on the capability of native plants to colonize and grow spontaneously in disturbed places. This phenomenon leads to the formation of vegetated patches (fertility islands) whose soils usually show higher contents of soil organic C and N and higher microbial activity than the adjacent surrounding barren areas. This is particularly interesting when mine tailings are embedded in vegetated areas that can spread propagules and seeds to tailings. In this sense, favoring the natural recruitment of native species might help to create nucleation spots and to trigger vegetation expansion within mine tailings. Among others, this process could be favored by the addition of soil organic amendments, as biochar and urban solid refuse (USR), which immobilize metal(loid)s and improve the conditions of tailing soils. The general objective of the PhD Thesis was to deepen the knowledge of physical, physicochemical, functional and ecotoxicological aspects in soils of abandoned metal(loid) mine tailings from Mediterranean semiarid environments and their relationship with spontaneous plant colonization, and whether the addition of organic amendments contributes to improving these ecosystems by promoting the recovery of soil functionality and triggering the spontaneous colonization of vegetation. To achieve this general objective, three specific objectives were raised: 1. To evaluate in which degree soil conditions can be modified following spontaneous vegetation colonization in abandoned metal(loid) mine tailings, and to provide evidence about the interest of this colonization for the phytomanagement of these structures. 2. To assess to what degree spontaneous plant colonization of abandoned metal(loid) mine tailings led to functional soil improvement and to identify, if possible, a critical level indicating that this functionality was moving towards that of the natural vegetated soils from the surrounding areas. 3. To assess the effectiveness of an organic amendment composed of biochar from pruning trees and compost from USR to ameliorate the conditions of barren metal(loid) acidic mine tailings soils and if these effects persist seasonally over a year, and whether the organic amendment favors spontaneous plant colonization. The selected study area was the former metal mining district of Cartagena‐La Unión (≈50 km2; Murcia Region, SE Spain), which ended its activity in 1991. The area presents a Mediterranean semiarid climate (mean annual precipitation ≈200-300 mm, mean annual temperature ≈17 °C, and mean annual evapotranspiration rate ≈850 mm) and the natural vegetation is mainly constituted by xerophytic shrubs and small formations of pine trees (Pinus halepensis). The principal metals extracted were Fe, Pb and Zn, obtained from minerals such as carbonates, sulfides, and sulfates. At present, 89 mine tailings remain in the area, most of them abandoned without any type of intervention. Specifically, the study was conducted in two mine tailings ≈2000 m apart built by mid-60’s to store wastes from mines exploiting galena ore, and in the surrounding forest areas. Both tailings (similar altitude, ≈170-200 m a.s.l., and embedded in small valleys NW to SE facing) were abandoned ≈40 years ago and have been partially colonized by native vegetation in a patchy structure with covers between ≈20% and ≈50%. One environment devoid of vegetation and five different types of vegetated environments inside and outside of the mine tailings were selected in April-May 2017. The environments studied were (four plots of 2 m x 2 m per environment): A) Four inside the mine tailings. 1. Bare soils (B); 2. Patches with small groups of P. halepensis trees ≈2.5-5 m high growing scattered (P); 3. Patches formed by isolated P. halepensis trees >≈4-5 m high growing scattered with shrubs and herbs under the canopy (P+S); 4. Dense patches including several P. halepensis trees >≈4-5 m high and shrubs and herbs under the canopy (DP+S). B) Two outside the mine tailings. 5. Forest located next to the mine tailings with P. halepensis trees >≈5 m high and shrubs and herbs under the canopy (FN); 6. Forest located away from the mine tailings (≈1600-1800 m) with P. halepensis trees >≈5 m high and shrubs and herbs under the canopy (FA). In addition, in bare soils, four additional plots were established for a soil amendment addition experiment (AB). The following three chapters include the results of the PhD Thesis: Chapter 5. This chapter includes the work planned to respond to the first specific objective, based on the field work campaign carried out in summer 2017. A set of soil indicators (physical, physicochemical and biological) were evaluated under field and laboratory conditions in B, P, P+S, DP+S, FN and FA environments. The results provide evidence about the interest of spontaneous colonization by native vegetation for the phytomanagement of abandoned metal(loid) mine tailings in terms of providing ecosystem functions. Pioneer and nurse plant species (which are facilitation plants that favor succession phenomena) were mainly found inside the tailings, although vegetation ecological indexes in P+S and DP+S were similar to FN and FA. Pedogenesis evidence such as structure development and increase in cation exchange capacity, organic C and N were found in tailing soils from B to DP+S. However, soil metal(loid)s did not follow the same variation pattern. For example (in mg kg-1): P showed the maximum total Cu (≈277) and Zn (≈17,860), while P+S of As (≈1250) and Pb (≈14,570). B had the maximum water soluble Pb (≈4) and Zn (≈207), while FA of As (≈0.192) and Cu (≈0.149). Soil microbial biomass C, enzyme activity, CO2 emission, organic matter decomposition and feeding activity of soil dwelling organisms indicated similar, or even higher, biological activity in P+S and DP+S than in FN and FA. In fact, FA showed the highest soil ecotoxicity risk (reduced reproduction of the soil invertebrate Enchytraeus crypticus). Therefore, mine tailing soils can be effectively modified following spontaneous vegetation colonization, achieving conditions with capacity to provide certain ecosystem functions. The results of this work were published in the following scientific paper: Álvarez-Rogel, J., Peñalver-Alcalá, A., Jiménez-Cárceles, F.J., Tercero, M.C., González-Alcaraz, M.N. 2021. Evidence supporting the value of spontaneous vegetation for phytomanagement of soil ecosystem functions in abandoned metal(loid) mine tailings. Catena 201, 105191; doi: https://doi.org/10.1016/j.catena.2021.105191. Chapter 6. This chapter includes the work planned to respond to the second specific objective, based on the field work campaign carried out in spring 2018. Vegetation ecological indexes, plant life forms and species functional roles, together with physicochemical and functional soils parameters, were studied in B, P, P+S, DP+S, FN and FA environments. Vegetated patches showed only small differences in physicochemical parameters related to soil abiotic stress conditions (pH, salinity and metals), regardless of the vegetation. However, vegetated patches with greater species diversity and richness and presence of plants with contrasted life forms and functional traits that facilitate the growth of less stress-tolerant species showed an increase of soil microbial functionality (higher microbial biomass C, β-glucosidase activity, bacterial metabolic activity, and functional diversity). Moreover, these vegetated patches showed a functional soil status comparable to that of the forests outside the mine tailings. The results of this work were published in the following scientific paper: Peñalver-Alcalá, A., Álvarez-Rogel, J., Peixoto, S., Silva, I., Silva, A.R.R., González-Alcaraz, M.N. 2021. The relationships between functional and physicochemical soil parameters in metal(loid) mine tailings from Mediterranean semiarid areas support the value of spontaneous vegetation colonization for phytomanagement. Ecological Engineering 168: 106293; doi: https://doi.org/10.1016/j.ecoleng.2021.106293. Chapter 7. This chapter includes the work planned to respond to the third specific objective. In April 2017, an organic amendment consisting of a 3:1 mixture of biochar and composted USR was applied (3% d.w. dose) to acidic barren areas of one of the mine tailings (pH ≈5.5). Total metal(loid) concentrations in the amended soils were (in mg kg-1): As ≈220, Cd ≈40, Mn ≈1800, Pb ≈5300, and Zn ≈8600. Two months after amendment addition were enough to observe improvements in chemical and physicochemical tailing soil properties (reduced acidity, salinity and water soluble metals and increased organic C and nutrients content), which resulted in lowered ecotoxicity for the soil invertebrate E. crypticus. Recalcitrant organic C provided by biochar remained in soil whereas labile organic compounds provided by USR were consumed over time. These improvements were consistent for at least one year and led to lower bulk density, higher water retention capacity and higher scores for microbial/functional-related parameters (microbial biomass C, microbial catabolic activity, and CO2 emission) in the amended tailing soil. Spontaneous growth of native vegetation was favored with amendment addition, but adult plants of remarkable size were only found after three years. The results of this work were published in the following scientific paper: Peñalver-Alcalá, A., Álvarez-Rogel, J., Conesa, H.M., González-Alcaraz, M.N. 2021. Biochar and urban solid refuse ameliorate the inhospitality of acidic mine tailings and foster effective spontaneous plant colonization under semiarid climate. Journal of Environmental Management 292: 112824; https://doi.org/10.1016/j.jenvman.2021.112824. The general conclusions of the PhD Thesis are three: 1) Spontaneous vegetation colonization of abandoned metal(loid) mine tailings from Mediterranean semiarid areas induces improvement of physical, physicochemical, functional and ecotoxicological soil conditions regardless of total metal(loid) levels. 2) Plant species richness and diversity with contrasting life forms and functional traits seem to be key factors for achieving effective functional soil improvement in spontaneously vegetated mine tailings patches. 3) The combination of biochar from pruning trees and composted URS is, in general, a suitable amendment to improve barren acidic mine tailing soils, by promoting their functional recovery and triggering spontaneous vegetation colonization. Esta Tesis se ha realizado bajo la financiación del siguiente proyecto: “Funcionalidad y resiliencia de suelos frente al cambio climático en ambientes mediterráneos contaminados por residuos mineros: aspectos ecotoxicológicos y uso de biochar para la remediación”, cofinanciado por el Ministerio de Economía y Competitividad (proyecto RESCLICONT - CGL2016-80981-R) – Fondos FEDER. Escuela Internacional de Doctorado de la Universidad Politécnica de Cartagena Universidad Politécnica de Cartagena Programa de Doctorado en Técnicas Avanzadas en Investigación y Desarrollo Agrario y Alimentario (TAIDA)

En conjunto, los resultados de esta Tesis Doctoral contribuyen a aumentar el conocimiento relacionado con la regulación de la desnitrificación en B. diazoefficiens, rizobio modelo para el estudio de dicho proceso. Concretamente, se ha avanzado en el mecanismo molecular implicado en el control de la desnitrificación mediado por las proteínas FixK2 y NnrR., Altogether, the results of this Doctoral Thesis contribute to expand the understanding of the regulation of denitrification in B. diazoefficiens, the model to study this process in rhizobial species. A special focus was made on the molecular mechanism unraveling the control of denitrification mediated by FixK2 and NnrR., Tesis Univ. Granada.

El efecto de la aplicación de PcPCL1606 sobre las comunidades procariotas en muestras de suelo y rizosfera no fue detectable, y se observaron cambios menores en comunidades eucariotas. En los suelos infestados con el patógeno, la presencia de R. necatrix impacta fuertemente a las comunidades microbianas del suelo y la rizosfera. Sin embargo, después de la aplicación de PcPCL1606 al suelo infestado con R. necatrix, estabilizó las comunidades eucariotas, reduciendo fuertemente la presencia de R. necatrix en suelo y rizosfera de aguacate, a su vez minimizando su efecto sobre el resto de comunidades microbianas. Se analizó este fenotipo de supresión de R. necatrix, y se comprobó que PcPCL1606 tiene un papel clave en la inducción de supresividad; además, este fenotipo dependía en gran medida de la producción de HPR (Tienda et al., 2020). Por lo que, el siguiente objetivo de nuestro trabajo, fue estudiar el papel de genes regulados por HPR, que participan durante los procesos de interacción de PcPCL1606 con la rizosfera de aguacate y durante la interacción multitrófica en el biocontrol entre la bacteria, la planta y el patógeno. Para ello, se realizó una aproximación de genómica funcional, con la técnica RNAseq, y se observó que el compuesto HPR en PcPCL1606, actúa como regulador, siendo mayoritariamente un inductor de genes en interacción con la rizosfera de aguacate y un represor de genes en la interacción multitrófica. En la interacción con la rizosfera, HPR induce la expresión de los genes PCL1606_14510 y PCL1606_46820 (con alta identidad a los genes kgtP y phaG de Pseudomonas aeruginosa, respectivamente). El gen kgtP de PcPCL1606 está implicado en el transporte y metabolismo del compuesto 2-oxoglutarato (2-OG) y en la quimiotaxis hacia dicho compuesto. El gen phaG de PcPCL1606 es responsable de la producción de gránulos de polihidroxialcanoatos (PHA), y estaría implicado en tolerancia a algunos estréses (temperatura y peróxido de hidrógeno). Además, estos dos genes también están implicados en la capacidad de control biológico de PcPCL1606 en el patosistema aguacate-R. necatrix. Por otro lado, en la interacción multitrófica que se da durante el biocontrol frente a R. necatrix, HPR actúa mayoritariamente como un represor de genes, aunque nos pareció interesante el estudio de un gen que estaba inducido por HPR debido al posible papel en la formación de biopelícula, el gen PCL1606_36720, con alta identidad al gen pgdA del grupo P. chlororaphis, en PcPCL1606 no tiene efecto sobre la producción de biopelícula, pero el mutante en este gen muestra una mayor adhesión, una menor movilidad tipo swimming, y muestra una pérdida de la actividad de biocontrol de PcPCL1606 frente a R. necatrix. Pseudomonas chlororaphis PCL1606 (PcPCL1606) es una bacteria modelo aislada de la rizosfera del aguacate, que muestra una fuerte actividad de antagonismo y control biológico contra diferentes patógenos fúngicos transmitidos por el suelo, incluido el agente Rosellinia necatrix, que causa la podredumbre blanca radicular del aguacate en el área mediterránea (Cazorla et al., 2006; González-Sánchez et al., 2013). Ensayos in vitro de producción de antibióticos revelaron que PcPCL1606 produce los compuestos antifúngicos pirrolnitrina (PRN), ácido cianhídrico (HCN) y 2-hexil, 5-propil resorcinol (HPR). Sin embargo, se ha demostrado que solo HPR está directamente involucrado en el antagonismo y la capacidad de biocontrol de esta cepa (Calderón et al., 2015). Además, se demostró que HPR intervenía en otros fenotipos como la producción de biopelícula (Calderón et al., 2019) y en fenotipos relacionados con las interacciones multitróficas que se dan en la rizosfera del aguacate, teniendo HPR un papel fundamental en la colonización de la superficie radicular del aguacate y ejerciendo un efecto deletéreo sobre las hifas fúngicas (Calderón et al., 2014). En este trabajo se evaluó si la aplicación semicomercial de PcPCL1606 al suelo puede afectar potencialmente a las comunidades microbianas del suelo y rizosfera del aguacate en condiciones naturales o en presencia de R. necatrix. Para ello, se preparó un producto formulado basado en PcPCL1606 y se aplicó al suelo mediante riego a plantas de aguacate que crecían en experimentos de mesocosmos. Se demostró que PcPCL1606 formulado controló la podredumbre blanca radicular en condiciones de campo y que sobrevivía hasta el final de los experimentos. Para probar los efectos de PcPCL1606 en las comunidades microbianas, se analizaron las poblaciones utilizando una aproximación metagenómica, secuenciando fragmentos de los genes 16S/ITS.

Objetivo General - Determinar los efectos ecológicos de la inoculación sobre la diversidad microbiana del sitio blanco. En forma particular se plantearon los siguientes objetivos: - Aislar y caracterizar bacterias degradadotas de PAH. - Estudiar las propiedades metabólicas y ecológicas de las bacterias seleccionadas. - Evaluar la efectividad de las estrategias de bioaumento de suelos contaminados con PAH puros y mezclas con las cepas seleccionadas en distintos sistemas: biorreactores y microcosmos., Tesis digitalizada en SEDICI gracias a la colaboración de la Biblioteca de la Facultad de Ciencias Exactas (UNLP)., Facultad de Ciencias Exactas

En esta investigación se identificó la carga fúngica presente en el área del proyecto minero loma larga, utilizando tantas técnicas tradicionales (aislamiento in vitro) y técnicas moleculares (análisis metagenómico), los géneros más representativos encontrados a través del aislamiento in vitro fueron Aspergillus, Penicillium y Trichoderma, mientras que con las técnicas moleculares se pudo identificar tanto género como especie. De acuerdo con los resultados se evidencia una diversidad elevada en la carga micróbica presente en el suelo del proyecto minero loma larga, lo que es un indicador de la calidad del medio ambiente y del ecosistema. In this research, the fungal burden present in the area of the Loma Larga project was identified, using so much traditional techniques (in vitro isolation) and molecular techniques (metagenomic analysis), the most representative gender found through isolation in vitro were Aspergillus, Penicillium and Trichoderma, while with molecular techniques it was possible to identify both genus and species. According to the results, there is evidence of a high diversity in the microbial load present in the soil of the Loma Larga mining project, which is an indicator of the quality of the environment and the ecosystem.

In conclusion, data presented in this thesis provide a great advance in the knowledge of Cu transport mechanisms in the AM symbiosis, especially in the identification and characterization of some Cu transporters of the AM fungus R. irregularis. However, further studies are necessary to completely understand how this complex network of protein transporters function in both the fungal and the plant partners., En conclusión, los datos presentados en esta tesis doctoral proporcionan un gran avance en el conocimiento de los mecanismos de transporte de Cu en la simbiosis MA, especialmente en la identificación y caracterización de algunos transportadores de Cu del hongo R. irregularis. Sin embargo, se necesitan más estudios para entender completamente cómo funciona esta compleja red de proteínas transportadoras en ambos simbiontes, tanto en el hongo como en la planta., Tesis Univ. Granada., Proyectos de Investigación del Plan Nacional AGL2012-35611 y AGL2015- 67098-R

Los servicios ecosistémicos asociados a los bosques son incuestionables, contribuyendo en gran medida tanto al bienestar social (proporcionando importantes productos de mercado), como a la regulación de numerosos procesos ecológicos (bienes intangibles) (Millennium Ecosystem Assessment, 2005). Pese a su importancia a escala global, los biomas forestales se encuentran fuertemente amenazados por el cambio climático y los cambios en la gestión y uso del suelo. Así, el Espacio Natural de Sierra Nevada, en el sureste de la Península Ibérica, es un enclave en el que las previsiones sobre el incremento de las temperaturas, el descenso de las precipitaciones anuales, y el aumento de la frecuencia e intensidad de los incendios forestales, resultan especialmente preocupantes (Pausas, 2004; Zamora et al., 2015). Una de las especies leñosas sobre la cual es notorio el impacto del cambio climático y del cambio de gestión de sus masas, es Quercus pyrenaica Willd. (roble melojo). Sus bosques se encuentran en la actualidad considerablemente degradados y fragmentados, siendo igualmente alarmante su escaso vigor vegetativo (Nieto Quintano et al., 2016). Así pues, urge el desarrollo de estrategias silvícolas que permitan mejorar el estado de debilitamiento de los melojares nevadenses. En este contexto, es conocido el importante papel que las bacterias desempeñan en los ecosistemas forestales, participando en los ciclos biogeoquímicos de los elementos y contribuyendo al mejor estado general de salud de las plantas mediante diversos mecanismos, como la mejora de la biodisponibilidad de ciertos nutrientes y la protección de sus hospedadores frente a organismos fitopatógenos (Glick, 2012; Lladó et al., 2017)., Tesis Univ. Granada., “Investigaciones sobre la flora forrajera natural en mejoras de pastos, restauración forestal, y silvicultura preventiva con ganado: una experiencia piloto en Sierra Nevada”. Proyecto del Organismo Autónomo Parques Nacionales; Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio Ambiente con referencia OAPN 748/2012; realizado desde diciembre 2012 hasta diciembre 2016. “Adaptación y mejora de la resiliencia del monte mediterráneo frente al cambio climático y los incendios forestales mediante el manejo de microorganismos rizosféricos”. Proyecto del programa RECUPERA 2020 con referencia 20134R069 financiado por el Ministerio de Economía y Competitividad y CSIC; realizado desde diciembre 2013 hasta diciembre 2015. “Estrategias basadas en aproximaciones ‘-ómicas’ para el manejo de la Verticilosis del olivo: Genómica comparada de patotipos y cambios inducidos en el microbioma de la raíz”. Proyecto del Ministerio de Economía y Competitividad con referencia AGL2016-75729-C2-1-R; realizado desde diciembre 2016 hasta diciembre 2019. Contrato asociado al proyecto: “Adaptación y mejora de la resiliencia del monte mediterráneo frente al cambio climático y los incendios forestales mediante el manejo de microorganismos rizosféricos con referencia 20134R069, Programa RECUPERA 2020 (2014-2015). Ayuda para contrato predoctoral para la Formación del Profesorado Universitario (FPU, ref. FPU014/03420), concedida por el Ministerio de Educación, Cultura y Deporte (2015-2019). Ayuda para la realización de estancias breves asociada al contrato FPU (ref. EST16/00202), en el Laboratorio de Microbiología Ambiental del Instituto de Microbiología de la Academia Checa de Ciencias (Praga, República Checa), y bajo la supervisión del Dr. D. Petr Baldrian (septiembre 2017-diciembre 2017).

“Las prácticas agrícolas pueden mejorarse con la siembra de cultivos mixtos y la aplicación de biofertilizantes. La siembra de leguminosas asociadas con gramíneas aumenta los rendimientos de las plantas con beneficios a los agricultores que cuentan con limitaciones tecnológicas y económicas. El objetivo de este trabajo fue evaluar la cantidad de fósforo disponible en el suelo asociado a las plantas de maíz y haba inoculadas con bacterias solubilizadoras de fosfato (BSF), evaluar su crecimiento y productividad. Se aislaron y seleccionaron BSF a partir de nódulos de haba con la mayor actividad solubilizadora de fosfatos para la elaboración de un biofertilizante. Se inocularon poblaciones de 52X107 unidades formadoras de colonias (UFC) por gramo de biofertilizante en semillas de maíz y haba en monocultivo y cultivo mixto en condiciones de invernadero y campo. Se evaluaron las características iniciales en el suelo de la zona de estudio: actividad de la enzima deshidrogenasa (0.41 unidades enzimáticas por día), bacterias mesofílicas aeróbicas (90x104 UFC g -1 de suelo), BSF (8x104 UFC g - 1 suelo) y fósforo disponible en el suelo rizosférico (8.96 mg kg -1 ). Se observó que las plantas de maíz y haba inoculadas con BSF más 60-30-00 unidades de fertilizante químico presentaron la mayor altura.”

[SPA] El objetivo general de esta Tesis es el de propiciar, mediante el conocimiento, el impulso de prácticas de cultivo alternativas para el desarrollo de una agricultura sostenible en la cuenca del Mediterráneo, que permitan proteger el suelo de la degradación e incrementar el rendimiento y la calidad de las cosechas; haciendo especial hincapié en el fomento de la fertilidad del suelo mediante la valorización de los residuos orgánicos estabilizados (cambio de residuo a recurso) y su uso como enmienda orgánica con carácter fertilizante; minimizando, al mismo tiempo, el empleo de fertilizantes químicos de síntesis. Para llevar a cabo este objetivo general, se han realizado cuatro experimentos, dos en invernadero y dos en campo, con diferentes cultivos típicamente mediterráneos: i) dos cultivos hortícolas intensivos: tomate y lechuga; ii) dos cultivos extensivos de cereal: trigo y cebada y iii) un cultivo ecológico frutal: ciruelo; los cuales perseguían la consecución de los objetivos específicos de esta tesis que son: 1) monitorizar diversos indicadores de la calidad del suelo (físico-químicos y microbiológicos) en los distintos cultivos después del aporte de diferentes enmiendas orgánicas (compost) solas o en combinación con fertilizantes inorgánicos para evaluar el proceso de transformación y estabilización de la materia orgánica en el suelo. 2) monitorizar distintos indicadores de productividad y calidad del fruto en los cultivos ensayados de acuerdo a las distintas enmiendas orgánicas aportadas al suelo, solas o combinadas con fertilización inorgánica para estudiar su viabilidad. 3) a raíz de la monitorización de parámetros de calidad del suelo y de la cosecha, establecer el tipo y las dosis adecuadas de enmienda orgánica que permitan una mejora en la calidad del suelo sin comprometer el rendimiento de los cultivos reduciendo al máximo el abonado inorgánico y valorizando los residuos como enmiendas orgánicas. 4) evaluar a medio plazo (durante seis años), en un cultivo ecológico de ciruelo, la influencia de distintos manejos orgánicos del suelo sobre la evolución de la calidad del mismo y su repercusión en la producción y calidad del fruto, para establecer actuaciones adecuadas de manejo del suelo dentro de las Normas europeas sobre agricultura ecológica u orgánica. Una vez terminados los trabajos descritos, y como conclusión final de esta Tesis podemos decir que los residuos orgánicos valorizados mediante su estabilización (compostaje) y utilizados como enmiendas orgánicas en los cultivos de la zona mediterránea son una alternativa a la fertilización inorgánica convencional, siempre que se utilicen a dosis adecuadas y teniendo en cuenta las necesidades nutricionales de los cultivos, para conseguir cosechas productivas y de calidad. Además, se consiguen ventajas adicionales como el incremento de la calidad del suelo por el aumento de su nivel de materia orgánica, la estimulación de la población microbiana edáfica y la mejora de las características físico-químicas del suelo con la consiguiente reducción del uso de fertilizantes químicos de síntesis, contribuyendo así al desarrollo de una agricultura sostenible. [ENG] In order to achieve sustainable agricultural systems in the more or less immediate future, it seems obvious that technological transformation strategies are required in order to design and operate these systems at a reasonable level of productivity, in a suitable timeframe and at competitive costs. It is not "produce more, regardless of other aspects" but rather "produce sustainably, efficiently, and profitably." The concept of sustainability is understood in this work from two perspectives. The first refers to the resilience of the system, the ability of an agricultural system to maintain productivity when subjected to environmental stress or artificial disturbances. This sustainability is strengthened to the extent that the biodiversity and organic matter increase, recycling improves, and energy use is optimized. The second perspective deals with the need to respond to the growing demand for food, in terms of both quantity and quality, without compromising the quantity and quality of the resources involved in its production. This means using renewable resources in a way that does not exceed their rate of regeneration and curbing the pollution level, so as not to exceed the absorption capacity of the system. Overcoming these challenges requires both a process of change in agricultural practices and biological readjustment of the agricultural systems so that they are sustainable. In short, the aim is to make use of agricultural land according to its productive potential, accepting the constraints imposed by the climate and availability of resources, particularly the soil, taking into account its physical structure and chemical and microbiological characteristics when planning its agricultural management. One of the keys to the sustainability of agricultural systems is the SOIL. The soil, considered the basis of agricultural systems and a non-renewable resource in the human time scale, is gaining increasing importance and recognition, highlighted by the fact that the FAO (Food and Agriculture Organization) has declared 2015 “The International Year of Soils”. Worldwide, the FAO has organized a series of activities that serve the primary objective of soil conservation, including activities aimed at reducing the rates of physical deterioration and contamination. The agricultural soils of Mediterranean regions suffer salinization due to seawater intrusion in wells or irrigation with water heavily loaded with nutrients in the form of salts. At the same time, due to the weather conditions and farming practices, the scarce organic matter within these soils is rapidly mineralized, leaving them without organic reserves (humus). All this leads to the reduction and loss of the soil microbial populations (bacteria and fungi) that allow the soil to perform the basic processes vital to its constant regeneration. Universidad Politécnica de Cartagena Programa de Doctorado en Técnicas Avanzadas en Investigación y Desarrollo Agrario y Alimentario por la Universidad Politécnica de Cartagena

"Existe la evidencia de enfermedades en Pinus patula (P. patula) presentes en la zona forestal del Municipio de Tetela de Ocampo, Puebla que causan pérdida foliar y se considera que los hongos podrían ser los responsables. El objetivo del presente trabajo fue identificar los hongos asociados y proponer su biocontrol con bacterias antagónicas para disminuir las afectaciones en la biomasa forestal provocada por las enfermedades fúngicas. Se realizó el muestreo de acículas enfermas de árboles de pino. Se aislaron 42 hongos provenientes de acículas recolectadas en la zona de estudio. Los más frecuentes fueron: Diplodia sapinea, Curvularia sp., Alternaria alternata, Myrmaecium rubricosum, Daldinia sp., Botryosphaeria dothidea, Annulohypoxylon styquium y Lophodermium sp. Se realizaron ensayos de antagonismo in vitro con bacterias de los géneros Burkholderia sp. (2 cepas), Serratia sp. (3 cepas) y Stenotrophomonas sp. (1 cepa) que han demostrado efecto inhibitorio contra hongos de origen agrícola y forestal. El género bacteriano más eficiente fue Burkholderia. Se evaluó el efecto antagonista de las seis cepas bacterianas contra dos hongos inoculados en acículas de P. patula en condiciones de cámara húmeda."

En la presente tesis doctoral hemos estudiado la mejora a la tolerancia a la sequía de plantas con interés agrícola mediante herramientas biotecnológicas. A lo largo del presente trabajo se comprobó el efecto de una colección de bacterias xerotolerantes sobre plantas como inoculantes, para estudiar si existe una correlación entre el nivel de tolerancia a la falta de agua del microorganismo, con el nivel de protección frente a la sequía que transfiere el microorganismo a la planta. Para este estudio se analizó la capacidad de promover el crecimiento de las plantas por parte de los microorganismos en ausencia de estrés hídrico (su actividad como Bacterias Promotoras del Crecimiento de Plantas o BPCP), así como de protección de las mismas frente a la sequía (Bacterias Potenciadoras de la Tolerancia a Sequía o BPTS). Para este estudio se emplearon las cepas microbianas Microbacterium sp. 3J1, Arthrobacter koreensis 5J12A, Rhodococcus sp. 4J2A2, Leucobacter sp. 4J7B1 y Arthrobacter siccitolerans 4J27, por presentar una elevada supervivencia a la desecación de más del 20%. Para evaluar los efectos de promoción del crecimiento de plantas y de protección de estas plantas contra la sequía sobre distintas especies vegetales se emplearon plantas de pimiento (Capsicum annuum var. annuum), tomate (Solamun lycopersicum), maíz (Zea mais) y soja (Glycine max). Así mismo, se identificaron las cepas taxonómicamente más cercanas a aquellas que mayor protección contra la sequía sobre las plantas generaban y se estudió de nuevo si existía una correlación entre aquellas cepas más tolerantes a la sequía con aquellas que más protegían a las plantas contra la falta de agua. Por último, se realizó un estudio bioquímico del perfil de moléculas implicadas en procesos de fitoprotección frente a la sequía por parte de microorganismos (trehalosa, actividades superóxido dismutasa y catalasa, ácido indolacético, ácido abscísico y otras fitohormonas) para identificar si existe una correlación entre la producción de las mismas y los efectos observados en las plantas. Posteriormente se estudiaron los mecanismos moleculares por los que las plantas inoculadas con Microbacterium sp. 3J1 alcanzaron un elevado grado de promoción en su crecimiento y resistencia frente a la sequía. Este estudio se realizó mediante análisis proteómico y metabolómico. De entre las cuatro especies vegetales estudiadas en el capítulo anterior, seleccionamos la planta de pimiento como modelo tanto por contar con amplia difusión en la literatura científica en proteómica y metabolómica, como por contar con su genoma completamente secuenciado y accesible., Tesis Univ. Granada. Departamento de Microbiología, Beca predoctoral de formación de profesor universitario (FPU)., Proyectos: Rizorremediación de hidrocarburos policíclicos aromáticos por especies tolerantes a sequía P07.RNM.02588. 2008-2012; Mejora en la tolerancia a la sequía de plantas con interés en producción de biocombustibles en zonas de secano. P11.RNM.7844. 2013-2016, financiados por la Junta de Andalucía (Consejería de Economía, Innovación y Ciencia), Proyecto: Desarrollo de herramientas biotecnológicas para la producción de barreras contra la desertificación, financiado por Programa “Compromiso con la Investigación y el Desarrollo” de Campus de Excelencia Internacional BioTic Granada, Proyecto: Mejora en la Productividad de plantas con interés en producción de biocombustibles en ambientes áridos y semiáridos. Estudio de BioSeguridad, financiado por el Programa de Ayudas a la Transferencia de Investigación de la Universidad de Granada, Ensayos de cuatro variables de bioseguridad de las cepas microbianas Pseudomonas fluorescens IABPF05, Rhizobium legominosarum IABRL05 y Azotobacter vinelandii IABAV02, financiado por la Empresa Investigaciones y Aplicaciones Biotecnológicas, S.L.

"Azospirillum brasilense es una rizobacteria promotora del crecimiento vegetal capaz de aumentar el crecimiento y el rendimiento de los cultivos a través de una asociación beneficiosa con las plantas favorecida por la formación de biopelícula. Esta biopelícula es regulada por un segundo mensajero, el di-­GMPc, la cual es una molécula ubicua que interviene en la regulación de diversos aspectos de la fisiología y el comportamiento bacteriano, tales como: movilidad y formación de biopelículas, ciclo celular y virulencia, entre otros. El di-­GMPc es producto de las enzimas diguanilato ciclasas (DGCs), y su nivel celular se reduce por las enzimas fosfodiesterasas (PDEs). En la mayoría de las bacterias donde están presentes las vías de señalización dependientes de di-­GMPc, están involucradas en la regulación de las transiciones bacterianas del estilo de vida planctónico al sésil mediante la inhibición de la movilidad y la formación de proteínas o apéndices superficiales adhesivos."

Monoterpenes may affect the nutrient cycling because they are capable of altering nitrification rates and edaphic microbialcommunities. The present work studied the impact of the direct application of different essential oils and someof their major monoterpenes on the nitrification, functionality and structure of soil microbial communities. Two monoterpenesselected were: 1,8-cineol (1,8-CIN) and α-pinene (α-PIN). The vegetal species selected for the extraction ofthe essential oils were: Aguaribay (Schinusareira L., Anacardiaceae) (OA) and Eucalyptus (Eucalyptus comaldulensisDehnh., Myrtaceae) (OE). Soil samples were taken at 0, 10, 30 and 60 days after the application of the treatments.Control treatment (CK) showed the highest nitrification values during the entire period tested. However, the reductionof the nitrification was significant (p≤0.05) for 1,8-CIN, OE and OA at days 1, 30 and 60 of incubation, respectively.An increase in hydrolyzing activity of fluorescein diacetate (FDA) was observed in the treatments with α-PIN, OE and1,8-CIN at 10, 30 and 60 days of incubation, respectively. A similar trend was observed in the dehydrogenase activity(DHA). The CK treatment showed significantly (p≤0.05) lower biomass values for Gram-negative bacteria. The populationsof Actinomicetes were significantly (p≤0.05) lower in CK treatment compared to the populations observed in thetreatments with OA and OE essential oils. Finally, the application of both essential oils (OA and OE) increased the totalmicrobial biomass estimated by phospholipid fatty acids (PLFA). Monoterpenes may affect the nutrient cycling because they are capable of altering nitrification rates and edaphic microbial communities. The present work studied the impact of the direct application of different essential oils and some of their major monoterpenes on the nitrification, functionality and structure of soil microbial communities. Two monoterpenes selected were: 1,8-cineol (1,8-CIN) and α-pinene (α-PIN). The vegetal species selected for the extraction of the essential oils were: Aguaribay (Schinusareira L., Anacardiaceae) (OA) and Eucalyptus (Eucalyptus comaldulensis Dehnh., Myrtaceae) (OE). Soil samples were taken at 0, 10, 30 and 60 days after the application of the treatments. Control treatment (CK) showed the highest nitrification values during the entire period tested. However, the reduction of the nitrification was significant (p≤0.05) for 1,8-CIN, OE and OA at days 1, 30 and 60 of incubation, respectively. An increase in hydrolyzing activity of fluorescein diacetate (FDA ) was observed in the treatments with α-PIN, OE and 1,8-CIN at 10, 30 and 60 days of incubation, respectively. A similar trend was observed in the dehydrogenase activity (DHA). The CK treatment showed significantly (p≤0.05) lower biomass values for Gram-negative bacteria. The populations of Actinomicetes were significantly (p≤0.05) lower in CK treatment compared to the populations observed in the treatments with OA and OE essential oils. Finally, the application of both essential oils (OA and OE) increased the total microbial biomass estimated by phospholipid fatty acids (PLFA). Fil: Lopes de Oliveira, Gisele. Universidade Federal Do Sul Da Bahia.; Brasil Fil: Verdenelli, Romina Aylen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina Fil: Dominchin, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina Fil: Zygadlo, Julio Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina Fil: Meriles, Jose Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina

Con el objetivo de desarrollar alternativas de tipo biotecnológico tendientes al mejoramiento de la eficiencia en la fertilización con fósforo (P) en el cultivo de café, se llevaron a cabo cinco experimentos en los cuales se evaluaron: a) la capacidad de fijación de P en suelos contrastantes en su génesis y fertilidad; b) la solubilización de P por parte de hongos (HSP) aislados a partir de diferentes suelos obtenidos de zonas cafeteras de Colombia y los mecanismos que explican dicho fenómeno; c) el crecimiento y la absorción de P en plánta de café inoculadas con un hongo formador de micorriza arbucular; d) el efecto en el desarrollo y la absorción de P por plantas jóvenes de café en respuesta al suministro de HSP y e) la posibilidad de sustituir la actual recomendación fosfórica en plantas jóvenes de café a partir del suministro de HSP. El potencial de fijación de P, expresado como la cantidad del elemento requerida para alcanzar 0.2 mg L-1 en la solución del suelo (P0.2), estuvo entre 36 y 691 mg L-1 siendo la materia orgánica, el porcentaje de arenas y el contenido de aluminio soluble (o intercambiable) las variables que mejor explicaron el fenómeno. La abundancia relativa de HSP fue mayor en los suelos con mayor fijación de P y más alto contenido de materia orgánica. Los mecanismos asociados la solubilización de P fue la disminución del pH y la producción de ácidos orgánicos. Por otro lado, las plantas jóvenes de café respondieron a la inoculación del hongo micorrizal Rizoglomus fasciculatum, el efecto dependió de la concentración de P en la solución del suelo, siendo éste mejor con 0.02 mg L-1. Del mismo modo, se encontró que al inocular el suelo con el HSP Phlebia subserialis- (cepa CH4), se mejoró significativamente el crecimiento y la absorción de P por plantas de café, particularmente con niveles de P en la solución del suelo de 0.04 a 0.07 mg L-1 (que corresponden con niveles de P por método Bray II de 7-10 mg kg-1); por encima de estas concentraciones no hubo promoción de crecimiento ni de absorción de P por las plantas. Finalmente, se demostró que en la etapa de almácigo la inoculación con el HSP Phlebia subserialis (cepa CH4) puede sustituir o complementar la fertilización con fertilizante fosfórico soluble o roca fosfórica Abstract: In order to develop biotechnological alternatives to improve phosphorus (P) fertilization efficiency in coffee growing, this study carried out five experiments to evaluate the following: a) The capability of P fixation of different soils according their genesis and fertility; b) The solubilization of P by isolated fungi (HSP) from Colombian coffee-growing soils and the mechanisms that explain this phenomenon; c) The growth and P uptake of coffee young plants inoculated with an arbuscular mycorrhizal fungus (AMF); d) The growth and P uptake of coffee young plants in response to a HSP application, and e) The possibility of substituting or complementing the current phosphoric recommendation in coffee nursery plants by using HSP. The results showed the P fixation potential, which was expressed as the P quantity required to obtain 0.2 mg L-1 in soil solution (P0.2), and varied from 36 to 691 mg L-1, as the level of organic matter, sand content, and aluminum exchange in the soils, explaining this phenomenon. A major relative abundance of HSP was found in soils where the organic matter and P fixation were high. On the other hand, the AMF Rizoglomus fasciculatum promoted growth and P uptake in coffee young plants, mainly when P concentration in the soil solution was 0.02 mg L-1. In the same way, soil inoculated by HSP Phlebia subserialis- (strain CH4), improved growth and P uptake of coffee plants when P concentrationin the soil solution was between 0.04 to 0.07 mg L-1 (this level corresponds to 7 to 10 mg kg-1 according to P-Bray II method). Finally, it was demonstrated that P fertilization with phosphoric rock or phosphoric soluble fertilizer can be substituted or complemented by application of Phlebia subserialis (strain CH4) fungus. Doctorado

La bioprospección en Colombia a partir de microorganismos ha tenido importancia en aplicaciones a nivel agrícola, ambiental, del suelo, industrial, básica y veterinaria, sin embargo, no se cuenta con un espectro detallado sobre la aplicaciones específicas que se han realizado dentro del marco normativo, por ello en este trabajo se identificaron las áreas de aplicación y los principales sectores sobre los cuales se ha investigado, siendo el sector biomédico principalmente para la producción de fármacos el que mayor porcentaje de investigaciones presenta, seguido del sector industrial principalmente para la producción de enzimas, el sector agrícola principalmente para la producción de bioinsumos, el sector de biorremediación principalmente para la degradación de colorantes generados de residuos industriales y en menor proporción en las áreas de alimentos y cosméticos. De esta manera se evidencian grandes oportunidades de desarrollo para el país en bioeconomía, haciendo uso sostenible de la biodiversidad, dado que la mayor parte de los proyectos autorizados por el ente estatal competente abordan sólo la fase de investigación sin llegar a escalar a la fase comercial. Bioprospecting in Colombia from microorganisms has been important in agricultural, environmental, soil, industrial, basic and veterinary applications, however, there is no detailed spectrum on the specific applications that have been made within the regulatory framework, so in this article identified the areas of application and the main sectors on which they have been investigated, being the biomedical sector mainly for the production of drugs the one that has a greater percentage of investigations presents, followed by the industrial sector mainly for the production of enzymes, the agricultural sector mainly for the production of bioinsumes, the bioremediation sector mainly for the degradation of generated dyes of industrial waste and to a lesser extent in the areas of food and cosmetics. In this way, there are great development opportunities for the country in bioeconomics, making sustainable use of biodiversity, since most of the projects authorized by the competent state agency only address the research phase without reaching the commercial stage.

[ESP] El objetivo general de esta Tesis es el de propiciar, mediante el conocimiento, el impulso de prácticas de cultivo alternativas para el desarrollo de una agricultura sostenible en la cuenca del Mediterráneo, que permitan proteger el suelo de la degradación e incrementar el rendimiento y la calidad de las cosechas; haciendo especial hincapié en el fomento de la fertilidad del suelo mediante la valorización de los residuos orgánicos estabilizados (cambio de residuo a recurso) y su uso como enmienda orgánica con carácter fertilizante; minimizando, al mismo tiempo, el empleo de fertilizantes químicos de síntesis. Para llevar a cabo este objetivo general, se han realizado cuatro experimentos, dos en invernadero y dos en campo, con diferentes cultivos típicamente mediterráneos: i) dos cultivos hortícolas intensivos: tomate y lechuga; ii) dos cultivos extensivos de cereal: trigo y cebada y iii) un cultivo ecológico frutal: ciruelo; los cuales perseguían la consecución de los objetivos específicos de esta tesis que son: 1) monitorizar diversos indicadores de la calidad del suelo (físico-químicos y microbiológicos) en los distintos cultivos después del aporte de diferentes enmiendas orgánicas (compost) solas o en combinación con fertilizantes inorgánicos para evaluar el proceso de transformación y estabilización de la materia orgánica en el suelo. 2) monitorizar distintos indicadores de productividad y calidad del fruto en los cultivos ensayados de acuerdo a las distintas enmiendas orgánicas aportadas al suelo, solas o combinadas con fertilización inorgánica para estudiar su viabilidad. 3) a raíz de la monitorización de parámetros de calidad del suelo y de la cosecha, establecer el tipo y las dosis adecuadas de enmienda orgánica que permitan una mejora en la calidad del suelo sin comprometer el rendimiento de los cultivos reduciendo al máximo el abonado inorgánico y valorizando los residuos como enmiendas orgánicas. 4) evaluar a medio plazo (durante seis años), en un cultivo ecológico de ciruelo, la influencia de distintos manejos orgánicos del suelo sobre la evolución de la calidad del mismo y su repercusión en la producción y calidad del fruto, para establecer actuaciones adecuadas de manejo del suelo dentro de las Normas europeas sobre agricultura ecológica u orgánica. Una vez terminados los trabajos descritos, y como conclusión final de esta Tesis podemos decir que los residuos orgánicos valorizados mediante su estabilización (compostaje) y utilizados como enmiendas orgánicas en los cultivos de la zona mediterránea son una alternativa a la fertilización inorgánica convencional, siempre que se utilicen a dosis adecuadas y teniendo en cuenta las necesidades nutricionales de los cultivos, para conseguir cosechas productivas y de calidad. Además, se consiguen ventajas adicionales como el incremento de la calidad del suelo por el aumento de su nivel de materia orgánica, la estimulación de la población microbiana edáfica y la mejora de las características físico-químicas del suelo con la consiguiente reducción del uso de fertilizantes químicos de síntesis, contribuyendo así al desarrollo de una agricultura sostenible. [ENG] In order to achieve sustainable agricultural systems in the more or less immediate future, it seems obvious that technological transformation strategies are required in order to design and operate these systems at a reasonable level of productivity, in a suitable timeframe and at competitive costs. It is not "produce more, regardless of other aspects" but rather "produce sustainably, efficiently, and profitably." The concept of sustainability is understood in this work from two perspectives. The first refers to the resilience of the system, the ability of an agricultural system to maintain productivity when subjected to environmental stress or artificial disturbances. This sustainability is strengthened to the extent that the biodiversity and organic matter increase, recycling improves, and energy use is optimized. The second perspective deals with the need to respond to the growing demand for food, in terms of both quantity and quality, without compromising the quantity and quality of the resources involved in its production. This means using renewable resources in a way that does not exceed their rate of regeneration and curbing the pollution level, so as not to exceed the absorption capacity of the system. Overcoming these challenges requires both a process of change in agricultural practices and biological readjustment of the agricultural systems so that they are sustainable. In short, the aim is to make use of agricultural land according to its productive potential, accepting the constraints imposed by the climate and availability of resources, particularly the soil, taking into account its physical structure and chemical and microbiological characteristics when planning its agricultural management. One of the keys to the sustainability of agricultural systems is the SOIL. The soil, considered the basis of agricultural systems and a non-renewable resource in the human time scale, is gaining increasing importance and recognition, highlighted by the fact that the FAO (Food and Agriculture Organization) has declared 2015 “The International Year of Soils”. Worldwide, the FAO has organized a series of activities that serve the primary objective of soil conservation, including activities aimed at reducing the rates of physical deterioration and contamination. The agricultural soils of Mediterranean regions suffer salinization due to seawater intrusion in wells or irrigation with water heavily loaded with nutrients in the form of salts. At the same time, due to the weather conditions and farming practices, the scarce organic matter within these soils is rapidly mineralized, leaving them without organic reserves (humus). All this leads to the reduction and loss of the soil microbial populations (bacteria and fungi) that allow the soil to perform the basic processes vital to its constant regeneration., Universidad Politécnica de Cartagena

En esta investigación se hace una valoración de la BIODIVERSIDAD FÚNGICA EN EL SUELO DEL BOSQUE PROTECTOR AGUARONGO, el muestreo de suelo se hizo en tres pisos altitudinales, se utilizaron tres métodos de aislamiento para hongos: 1.- Dilución en placa 2.- Siembra directa 3.- Cultivo líquido. Los géneros más representativos aislados son: Aspergillus sp, Penicillium sp, Trichoderma y Fusarium sp., estadísticamente no existe diferencia significativa de la carga fúngica entres los pisos estudiados. In this research, an assessment of the FUNGAL BIODIVERSITY IN THE SOIL OF BOSQUE PROTECTOR AGUARONGO, soil samples was done in three altitudinal levels, and three fungal isolation methods were used: 1.- Dilution plate technique 2.- Direct sowing plate 3.- Liquid culture. The most representative genus are Aspergillus sp, Penicillium sp, Trichoderma sp, and Fusarium sp, there is no statistically significant difference in fungal load floors enter studied.

“Este trabajo se llevó a cabo en las localidades de Xoloateno y San Pedro Xoloco pertenecientes al municipio de Teziutlán, Puebla, México. El objetivo fue evaluar el estado nutrimental de aguacate en un sistema de plantación de alta densidad. Se utilizó un diseño experimental completamente al azar con 2 variedades (´Hass` y ´Fuerte`), 2 fuentes de fertilización (composta e inorgánica) y el testigo con 3 repeticiones. La aplicación de fertilización orgánica e inorgánica se realizó cada tres meses; con 6 kg por planta de composta, urea (67.8 g), fosfato diamónico (44 g) y cloruro de potasio (188.3 g) respectivamente. Se evaluó el contenido nutrimental foliar, altura de planta, diámetro de tallo, número de hojas y longitud y diámetro de brotes. Los resultados muestran que ´Fuerte` se adapta mejor a la zona Nororiental de Puebla y la aplicación de fertilización orgánica aumentó el número de hojas y brotes en ´Hass` y ´Fuerte` disminuyendo el uso de fertilizantes inorgánicos.”

107 páginas incluye diagramas. Colombia es uno de los países con mayor biodiversidad en el mundo, reconocido por su amplia variedad de especies vegetales y animales, situación que permite intuir un perfil megadiverso en las poblaciones de microorganismos, el cual se ha evidenciado en un sin número de estudios funcionales dirigidos a la identificación de bacterias. Entre las distintas adaptaciones de los procariotas se encuentran, los microorganismos halófilos, que se destacan por vivir en altas concentraciones de NaCl en lugares inhóspitos como las salinas (terrestres y marinas), y que, a su vez, han demostrado poseer un gran potencial biotecnológico, encontrándose involucrados en la producción de enzimas, polímeros y solutos compatibles de gran uso en distintas industrias como la farmacéutica, la alimentaria, la cosmética y la petrolera, entre otras., , Por lo anterior, el objetivo de este estudio busca contribuir a los estudios de biodiversidad bacteriana en ambientes extremos, mediante el aislamiento e identificación de las bacterias halófilas provenientes de la mina de sal de Zipaquirá, Colombia. Para ello, los sitios de recolección se escogieron de acuerdo a la disponibilidad de agua presente en los socavones, las muestras fueron inoculadas en medios nutritivos a diferentes concentraciones de NaCl 1%-30% (w/v), incubadas a 25-37 °C (óptimo 30°C), con diferentes rangos de pH (óptimo pH 7) y bajo condiciones aerobias y anaerobias. A continuación se realizaron análisis comparativos basados en secuenciación del gen 16S ARNr, mediante la extracción de DNA y su posterior amplificación. Así mismo, se incluyeron estudios morfológicos, bioquímicos, perfil de resistencia a antibióticos y evaluación de distintas actividades biológicas. Nota: Para consultar la carta de autorización de publicación de este documento por favor copie y pegue el siguiente enlace en su navegador de internet: http://hdl.handle.net/10818/22882

En la presente tesis doctoral hemos estudiado la mejora a la tolerancia a la sequía de plantas con interés agrícola mediante herramientas biotecnológicas. A lo largo del presente trabajo se comprobó el efecto de una colección de bacterias xerotolerantes sobre plantas como inoculantes, para estudiar si existe una correlación entre el nivel de tolerancia a la falta de agua del microorganismo, con el nivel de protección frente a la sequía que transfiere el microorganismo a la planta. Para este estudio se analizó la capacidad de promover el crecimiento de las plantas por parte de los microorganismos en ausencia de estrés hídrico (su actividad como Bacterias Promotoras del Crecimiento de Plantas o BPCP), así como de protección de las mismas frente a la sequía (Bacterias Potenciadoras de la Tolerancia a Sequía o BPTS). Para este estudio se emplearon las cepas microbianas Microbacterium sp. 3J1, Arthrobacter koreensis 5J12A, Rhodococcus sp. 4J2A2, Leucobacter sp. 4J7B1 y Arthrobacter siccitolerans 4J27, por presentar una elevada supervivencia a la desecación de más del 20%. Para evaluar los efectos de promoción del crecimiento de plantas y de protección de estas plantas contra la sequía sobre distintas especies vegetales se emplearon plantas de pimiento (Capsicum annuum var. annuum), tomate (Solamun lycopersicum), maíz (Zea mais) y soja (Glycine max). Así mismo, se identificaron las cepas taxonómicamente más cercanas a aquellas que mayor protección contra la sequía sobre las plantas generaban y se estudió de nuevo si existía una correlación entre aquellas cepas más tolerantes a la sequía con aquellas que más protegían a las plantas contra la falta de agua. Por último, se realizó un estudio bioquímico del perfil de moléculas implicadas en procesos de fitoprotección frente a la sequía por parte de microorganismos (trehalosa, actividades superóxido dismutasa y catalasa, ácido indolacético, ácido abscísico y otras fitohormonas) para identificar si existe una correlación entre la producción de las mismas y los efectos observados en las plantas. Posteriormente se estudiaron los mecanismos moleculares por los que las plantas inoculadas con Microbacterium sp. 3J1 alcanzaron un elevado grado de promoción en su crecimiento y resistencia frente a la sequía. Este estudio se realizó mediante análisis proteómico y metabolómico. De entre las cuatro especies vegetales estudiadas en el capítulo anterior, seleccionamos la planta de pimiento como modelo tanto por contar con amplia difusión en la literatura científica en proteómica y metabolómica, como por contar con su genoma completamente secuenciado y accesible., Tesis Univ. Granada. Departamento de Microbiología, Beca predoctoral de formación de profesor universitario (FPU)., Proyectos: Rizorremediación de hidrocarburos policíclicos aromáticos por especies tolerantes a sequía P07.RNM.02588. 2008-2012; Mejora en la tolerancia a la sequía de plantas con interés en producción de biocombustibles en zonas de secano. P11.RNM.7844. 2013-2016, financiados por la Junta de Andalucía (Consejería de Economía, Innovación y Ciencia), Proyecto: Desarrollo de herramientas biotecnológicas para la producción de barreras contra la desertificación, financiado por Programa “Compromiso con la Investigación y el Desarrollo” de Campus de Excelencia Internacional BioTic Granada, Proyecto: Mejora en la Productividad de plantas con interés en producción de biocombustibles en ambientes áridos y semiáridos. Estudio de BioSeguridad, financiado por el Programa de Ayudas a la Transferencia de Investigación de la Universidad de Granada, Ensayos de cuatro variables de bioseguridad de las cepas microbianas Pseudomonas fluorescens IABPF05, Rhizobium legominosarum IABRL05 y Azotobacter vinelandii IABAV02, financiado por la Empresa Investigaciones y Aplicaciones Biotecnológicas, S.L.

"En el presente trabajo fue indispensable llevar a cabo una mutación por deleción del gen cdgE para evitar el efecto polar, siendo necesarias una serie de conjugaciones para generar el doble entrecruzamiento generador de la deleción; sin embargo, por el momento no están claras las causas de la baja frecuencia en la conjugación, así como de recombinación al utilizar el plásmido pK18mobsacB/PM-ΔcdgE-QH en A. brasilense Sp245, vector suicida con el origen de replicación oriE, mismo que tiene el plásmido pSUP202 empleado ampliamente para la obtención de mutantes por inserción en A. brasilense. El obtener mutantes por deleción es de gran ayuda para el estudio de varios genes, tal como el cdgE, por lo que es necesario seguir buscando los parámetros fisiológicos adecuados para aumentar la frecuencia de conjugación-recombinación en A. brasilense Sp245."

"La interacción bacteria-planta es una relación de convivencia que permite la promoción del crecimiento vegetal, entre los que se destaca la producción de biopelícula como parte esencial en la colonización de las plantas. Esta comunidad cooperativa permite a la planta beneficiarse de productos del metabolismo de los microorganismos, como lo es la producción de fitohormonas, fijación de nitrógeno, solubilización de fosfatos entre otros. Azospirillum brasilense es una rizobacteria promotora del crecimiento vegetal que forma biopelícula, esta matriz polimérica constituida principalmente de exopolisacáridos, DNA exógeno, proteínas, detritos productos de la lisis celular, agua y otros componentes. Se conoce que este proceso es dependiente de un segundo mensajero el di-GMPc, que a su vez depende de la actividad catalítica de dos enzimas, las diguanilato ciclasas que intervienen en la formación y por el contrario las fosfodiesterasas encargadas de la degradación de este".

Tesis (Magíster en Ciencias Ambientales) -- Universidad de Cartagena, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas. Convenio Sistema Universitario Estatal del Caribe Colombiano, 2014 En este trabajo de grado se enfoco en obtener bacterias capaces de degradar compuestos organofosforados (OF) de suelos de un barrio de Cartagena, Bolivar afectado con este tipo de contaminantes.

El suelo es uno de los ambientes más biodiversos y heterogéneos del planeta ylos ciclos biogeoquímicos que en él suceden son de suma importancia para la vida. Estos procesos son llevados a cabo por microorganismos, mayoritariamente del grupo Bacteria y Arquea. A su vez, el suelo es un recurso esencial para los seres humanosya que es su fuente principal de alimentos, pero como cualquier recurso natural, esfinito. Por lo tanto el estudio del impacto de las modificaciones agrícolas en lascaracterísticas físicas, químicas y biológicas del suelo y por ende en los procesos delecosistema, es imprescindible. El 50% de la superficie de Región Pampeana está dedicada a la agricultura. Elimpacto de las prácticas agrícolas sobre las características físicas y químicas delsuelo, ha sido ampliamente estudiado en la región. Sin embargo, y más allá del granesfuerzo realizado, todavía hay una deuda por comprender las consecuencias del usoagrícola sobre la biodiversidad y procesos biológicos. El trabajo aquí presentadopretende saldar parte de esta deuda estudiando el impacto que ejerce la agriculturasobre las comunidades bacterianas de suelos de la Región Pampeana. Se utilizarontécnicas de metagenómica y un enfoque ecológico. El primer capítulo se centró en estudiar el impacto de más de 100 años deagricultura sobre la estructura de las comunidades microbianas y sus perfilesmetabólicos (metagenómicos). Se encontraron diferencias significativas entrecomunidades de suelos con y sin historia de manejo agrícola. El segundo capítulo se dedicó a la comparación de dos sistemas de labranza. Se estudió la estructura de diversidad y el perfil metagenómico de comunidades desuelos bajo labranza convencional y bajo siembra directa. Vimos que las comunidadesdifirieron en su composición taxonómica y metabólica según el tipo de labranza a lacual fueran sometidas. El objetivo del tercer capítulo fue determinar el patrón regional de distribuciónbacteriano. Este análisis se realizó dentro del marco de la Teoría de Metacomunidadesy utilizando datos de suelos con y sin historia de manejo de una transecta Este-Oesteque abarcó el gradiente edáfico y climático completo de la Región Pampena. Los resultados mostraron que los efectos de la dispersión fueron más importantes que losefectos contemporáneos a nivel regional, enmascarando así los impactos localesgenerados por el uso agrícola. Soil is one of the most biodiverse and heterogeneous environments of Earth. Soil bio-chemical processes are essential for life and are carried out bymicroorganisms, mainly Bacteria and Archaea. Moreover soil is very important forhumans, since it is the main source of food; but as any other natural resource it is notlimitless. Though studying the impact of agriculture on soil physical, chemical andbiological characteristics, and hence on ecosystem processes is imperative. The 50% of Pampas surface is devoted to agriculture. The impact of agriculturalpractices on soil physical and chemical properties has been extensively studied in theregion. However, beyond the great effort made, there is a debt yet to understand theconsequences of agriculture on biodiversity and biological processes. The workpresented here aims to repay part of this debt by studying the impact of agriculture onsoil bacterial communities of the Pampas. We used an ecological approach and 50% ofthe surface of Pampas is devoted to agriculture. The impact of agricultural practices onsoil physical and chemical characteristics has been extensively studied in the region. However, beyond the great effort made, there is a debt yet to understand theconsequences of agricultural biodiversity and biological processes. The work presentedhere aims to repay this debt of studying the impact that agriculture on soil bacterialcommunities of the Pampas. We used an ecological approach and metagenomics. The first chapter was focused on the study of the impact of over 100 years offarming on the structure of microbial communities and their metabolic (metagenomic)profiles. Significant differences between communities of soils with and without a historyof agricultural management were found. The second chapter is devoted to the comparison of two tillage systems. Westudied the structure and metagenomic profiles of soil communities under conventionaltillage and no-tillage. We found that communities differ in their taxonomical compositionand metabolisms. The aim of the third chapter was to determine the regional pattern of bacterialdistribution. This analysis was performed within the framework of the theory ofmetacommunities. We sampled soils with and without soil management history, in an East-West transect that spanned the entire climatic and edaphic gradient of the Pampas. The results showed that dispersion was more important than environmentalcontemporaneous effects at the regional level, thus masking local impacts generatedby agricultural use. Fil: Carbonetto, María Belén. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

189 páginas.-- Memoria para optar al título de Doctor por la Universidad de Sevilla., En esta Tesis Doctoral se ha investigado el papel del patrón de movilidad bacteriana en la deposición y transporte a través de medios porosos saturados, con el objetivo de aumentar la biodegradación de naftaleno en condiciones de baja biodisponibilidad. Los efectos positivos de la movilización bacteriana en la bioerremediación dependen de la eficiencia del movimiento bacteriano a través de medios porosos, que a veces está limitado por unas tasas altas de deposición. Por otro lado, la adhesión a las superficies puede ser beneficiosa para promover la biodegradación de los contaminantes que se caracterizan por una cinética lenta de desorción. Por ello, la hipótesis de partida ha sido que un cambio en el patrón de movilidad, como parte de la respuesta táctica frente a determinados compuestos, puede tener un efecto en la movilización bacteriana en el suelo, con la finalidad de mejorar la biodisponibilidad y biodegradación de contaminantes orgánicos. Durante esta Tesis Doctoral se ha llevado a cabo un abordaje experimental progresivo para comprobar dicha hipótesis. En primer lugar, se estudió la respuesta táctica de la estirpe Pseudomonas putida G7 frente a distintos compuestos: salicilato, nanopartículas de plata (NPsAg) y glucosa como ejemplo de atrayente, repelente y fuente de carbono, respectivamente. También se emplearon distintas fuentes de materia orgánica disuelta, de relevancia ambiental: exudados de raíces de girasol (Helianthus annuus), ácidos húmicos de un suelo y el fertilizante oleofílico S-200. El análisis de la respuesta táctica se llevó a cabo mediante el ensayo capilar para el estudio de la quimiotaxis a nivel global y mediante el análisis de las trayectorias celulares individuales mediante un programa informático que caracteriza el movimiento celular individual. El salicilato y los exudados de girasol provocaron una respuesta de atracción en la estirpe Pseudomonas putida G7, observando que las trayectorias celulares en presencia de estos compuestos se caracterizaron por un movimiento rectilíneo mantenido sin cambios de dirección. Por el contrario, la exposición a las NPsAg hizo que las células cambiaran frecuentemente la dirección de su movimiento. En presencia de glucosa, los cambios fueron también más frecuentes, pero, además, la velocidad fue muy alta (marcada por la frecuencia de aceleraciones mayores de 60 µm s-1). Esta respuesta se ha descrito como una reacción de hipermovilidad causada por la glucosa en solución. Las diferencias en el patrón de movimiento provocaron diferentes tendencias de adhesión a superficies sólidas, relacionándose la frecuencia de cambios de dirección con una mayor deposición en columnas empaquetadas de arena, donde se estudió el transporte bacteriano. El aumento de transporte bacteriano en presencia de exudados, provocó un aumento de la biodegradación de naftaleno adsorbido a una anilla de silicona en el fondo de la columna. La exposición de P. putida G7 a NPsAg conllevó a un aumento de la adhesión bacteriana, tanto a la superficie de arena como a la de la anilla donde estaba adsorbido el naftaleno. El aumento en la adhesión bacteriana provocó un aumento de la biodegradación del naftaleno adsorbido. Los resultados obtenidos en esta Tesis Doctoral son relevantes para la mejora de las técnicas de biorremediación. Por ejemplo, podría llevarse a cabo la bioestimulación de comunidades degradadoras de un emplazamiento contaminado mediante el empleo de compuestos atrayentes que mejoren la movilización bacteriana hacia el foco de contaminación. Por su parte, sustancias que favorezcan la adhesión bacteriana, como las NPsAg y la glucosa, podrían mejorar las técnicas de recuperación de petróleo o de tratamiento de purificación y desinfección de aguas.

En este trabajo de Tesis Doctoral se ha estudiado el efecto de la adición de dos residuos de almazara sobre el comportamiento de herbicidas, la fisiología de plantas de Olea europaea y sobre las poblaciones microbianas del suelo. A través de estudios de adsorción-desorción, disipación, mineralización, lixiviación y bioensayos realizados en laboratorio con tres suelos procedentes de cultivos intensivos de la Vega del río Guadalquivir, se ha estudiado el efecto de la adición de dos residuos orgánicos de almazara sobre el comportamiento de los herbicidas MCPA y S-metolacloro. Como consecuencia del distinto grado de humificación y compostaje, los residuos mostraron componentes orgánicos solubles de distinta naturaleza. La adición de estos residuos a los suelos no reveló un efecto negativo sobre la población microbiana de los suelos, ya que se incrementó el contenido en carbono orgánico soluble y la respiración de los mismos. Por otro lado, la adición de los residuos al suelo se tradujo en comportamientos diferentes para MCPA y S-metolacloro: mientras que en el caso de este último se produjo un aumento en la retención, y con ello menor lixiviación y degradación, esto no se observó para MCPA. Se ha comparado el efecto de la materia orgánica transformada en suelos tratados con dos residuos de almazara (un alperujo y un orujo) durante 9 años en campo sobre el comportamiento de los herbicidas bentazona y S-metolacloro, comparándose los resultados con los obtenidos en suelos enmendados con estos mismos residuos frescos en laboratorio. El envejecimiento de la materia orgánica exógena añadida al suelo con los residuos reveló diferencias en el comportamiento de estos herbicidas en suelo principalmente debido a las diferencias en materia orgánica soluble y porosidad de los sistemas. La aplicación al suelo del herbicida terbutilazina, a diferencia de glifosato, constituye una fuente indirecta de fitotoxicidad para los olivos (Olea europaea), reduciendo la eficiencia fotosintética de éstos. Esta fitotoxicidad es contrarrestada por la adición de alperujo a los suelos, debido al aumento de la adsorción del herbicida en suelos enmendados. En lo que respecta al efecto de los residuos orgánicos de almazara sobre la población microbiana del suelo, los resultados obtenidos indican que estos residuos no afectan negativamente a la población microbiana presente en suelos. Estudios de tolerancia a altas dosis de herbicidas, mostraron cepas tolerantes a MCPA y S-metolacloro, sin embargo, estas cepas no lograron crecer en presencia de estos herbicidas como única fuente de carbono. In this Doctoral Thesis we present an evaluation of the effect of addition of organic wastes from olive oil extraction to soils on herbicide fate, Olea europaea physiology, and soil microbiota. The effect of addition of olive oil wastes on MCPA and S-metolachlor behavior in soils was studied through sorption-desorption, dissipation, mineralization, leaching and bioassays assays under laboratory conditions with three soils from intensive crops. Due to the different degree of humification and composting state, the residues used showed different composition of dissolved organic components. The addition of these residues to soils did not negatively affect soil microbial population since dissolved organic matter and soil respiration increased. Different effects were found in MCPA and S-metolachlor behavior upon amendment with the residues: while no effect was detected in the case of MCPA, increase in retention and lower leaching and dissipation was found for S-metolachlor. The effect aged residues from olive oil extraction after 9 years application in the field on bentazone and S-metolachlor fate was also studied and compared to the results obtained with soils amended with fresh organic residues under laboratory conditions. Different behaviour was observed and attributed to differences in dissolved organic matter and porosity of the soils systems. This work also shows indirect phytotoxicity of the herbicide terbuthylazine reducing the photosynthetic efficiency of Olea europaea plants under greenhouse conditions. This reduction was counterbalanced by the addition of organic residues due to the increase in sorption of the herbicide to soil particles, minimizing plant absorption. No negative effect was observed in the case of glyphosate. The study of herbicide addition and soil amendment with organic residues on soil microbial communities did not reveal a negative effect on microbiota when herbicides MCPA, S-metolachlor or organic residues were added. While resistant to herbicides using these as only carbon source were not detected, tolerant organisms to high herbicides doses were found.

Los herbicidas pueden alterar la estructura y el funcionamiento del suelo mediante efectos directos sobre varios componentes de su microbiota. Muchos autores han encontrado un efecto perjudicial del glifosato sobre la calidad del suelo y la diversidad microbiana. Sin embargo, la mayoría de los trabajos han sido realizados en sistemas de cultivos herbáceos y anuales y muy pocos en sistemas forestales o leñosos perennes. El objetivo del presente trabajo fue analizar el efecto a corto plazo de la aplicación de glifosato sobre parámetros microbiológicos generales y la estructura de las comunidades microbianas de suelos provenientes de lotes cultivados con olivo (Olea europaea L.). Realizamos un experimento de aplicación de distintas concentraciones de glifosato en dos tipos de suelo de olivar, con y sin historial de aplicación de pesticidas, y evaluamos distintas propiedades del suelo a lo largo de 55 días de incubación. En general, el impacto del glifosato sobre la microbiota fue mucho más importante en el suelo sin historial de aplicación de herbicida. En la mayoría de los parámetros analizados, el tratamiento con glifosato a la concentración recomendada a campo no se diferenció del tratamiento control. El cambio observado en la biomasa microbiana total no fue consistente. Sin embargo, en ambos suelos analizados, la aplicación de altas concentraciones de glifosato produjo un incremento significativo de las bacterias cultivables y de las bacterias Gram (-), estimada por medio de perfiles de ácidos grasos. Herbicides may alter soil ecosystems by a direct effect on selected component of soil microflora. Several authors reported a harmful effect of glyphosate on soil quality and microbial diversity. Most studies have been focused in the effect of annual extensive crops and a few have been done in perennial woody plantations. The aim of our study was to study the short-term effect of glyphosate application on microbiological parameters and microbial community structure under olive plantations. We applied different dosages of glyphosate to soils corresponding to two olive plantations, with and without history of pesticide application and evaluated a number of functional and structural parameters of soil biota throughout 55 days. In general, the soil without history of glyphosate application had a greater impact of glyphosate on with respect to the soil with history of glyphosate application. There was no consistent effect on total microbial biomass. However, the effect of glyphosate application at field rate was similar to control treatment. In both soils analyzed, glyphosate applied at elevated dosages increased cultivable bacteria and Gram (-) bacteria, as estimated by fatty acids profiles. Fil: Bórtoli, Paula V.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina Fil: Verdenelli, Romina Aylen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina Fil: Conforto, Cinthia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronomicas; Argentina Fil: Vargas Gil, Silvina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronomicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Meriles, Jose Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina

Los suelos son considerados uno de los ambientes más diversos y heterogéneos que se conocen. En ellos se producen innumerables procesos que permiten el reciclado y transformación de sustancias esenciales para la vida de plantas y animales. La mayoría de estos procesos son realizados por bacterias, y se ven afectados por distintos factores en el ambiente. Una de las principales causas que modifican estos ecosistemas es la producción agrícola. En los últimos tiempos el desarrollo de nuevas tecnologías, como la siembra directa podrían atenuar parcialmente el impacto de esta explotación. Sin embargo, el uso sustentable implica también la aplicación de prácticas de manejo, que incluyen rotaciones de cultivos, reposición de nutrientes y manejo integral de plagas. En este trabajo estudiamos la composición y dinámica de las comunidades de bacterias bajo prácticas contrastantes en siembra directa, con los objetivos de determinar de qué manera las prácticas agrícolas impactan sobre el suelo, y encontrar variaciones en las comunidades que puedan servir como indicadores de biológicos de calidad del suelo. Para el estudio se analizaron ambientes naturales y dos tratamientos de siembra directa que difieren principalmente en el régimen de rotación de cultivos, y otras características que los separan en Buenas y Malas prácticas agrícolas. Se tomaron datos de cuatro localidades diferentes de la región que abarca desde la provincia de Córdoba hasta Entre Ríos durante un periodo de dos años. Mediante la utilización de herramientas moleculares encontramos que las diferencias entre los distintos ambientes a nivel de las comunidades de bacterias y los taxones mayoritarios se ven influenciadas en primer lugar por las diferencias geográficas y en menor medida por los efectos del uso del suelo. A medida que aumentamos el nivel de resolución taxonómica encontramos que existen diferencias para determinados grupos que pueden separar las Buenas de las Malas prácticas. El número de bacterias pertenecientes al grupo de Acidobacteria Gp1 y al género Rubellimicrobium varían de forma dependiente de los tratamientos, por lo cual son potenciales candidatos como indicadores de calidad de suelos. Para esto proponemos la confección de un índice calculado como el cociente entre la proporción de bacterias de cada grupo encontradas en la muestra (Acidobacteria Gp1/Rubellimicrobium), respecto del número encontrado en un ambiente natural próximo. The soil is considered one of the most diverse and heterogeneous environments. They produce many processes that enable the recycling and transformation of substances essential for plant life and animals. Most of these processes are performed by bacteria, and are affected by different factors in the environment. One of the main causes that modify these ecosystems is agricultural production. The recent development of new technologies, such as no-till crop could reduce the impact of this exploitation. However, the sustainable use also involves the implementation of management practices, including crop rotations, nutrient replenishment and integrated pest management. In this work we have studied the composition and dynamics of bacterial communities under contrasting no-till crop systems in order to determine how impacts on soil, and to find variations in the communities that can serve as biological indicators of soil quality. For the study, two tillage treatments that differ mainly in the rotation regime and other features that separate into good and poor agricultural practices were analyzed. Data were collected from four different locations in the region from the province of Cordoba to Entre Rios for a period of two years. Using molecular tools we found that the differences between the different environments at the level of bacterial communities and major taxa, are influenced primarily by geographic differences and in lesser extent by the effects of land use. As we increased the level of taxonomic resolution, we found that there were differences for certain groups that can separate good from poor practices. The number of bacteria belonging to the Acidobacteria Gp1 group and the genus Rubellimicrobium varied depending on the treatments, suggesting that they could be potential candidates indicators of soil quality. To this end we propose the confection of an index calculated as the ratio (Acidobacteria Gp1/Rubellimicrobium) between the proportion of each group of bacteria found in the sample and the number found in a nearby grassland soil. Fil: Guerrero, Leandro Demián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

El olivo (Olea europaea L. subsp. europaea) ha sido culturalmente y económicamente el principal cultivo oleaginoso de la Cuenca Mediterránea. España es el mayor productor de aceite de oliva en el mundo, y Andalucía, la región sur del país, es el principal área de cultivo con 62% de la superficie de olivar en España, ocupando >1.5 millones ha, y un 17% de su superficie total en un monocultivo impresionante. En España, el olivo se puede encontrar en dos formas, silvestre (Olea europaea L. subsp. europaea var. sylvestris) y cultivada (Olea europaea L. subsp. europaea var. europaea). Las interacciones planta-microorganismo en la rizosfera y endosfera ha sido objeto de considerables estudios, ya que las comunidades bacterianas desempeñan un importante papel en el balance, desarrollo y funcionamiento del ecosistema suelo en diferentes sistemas agrícolas en muchas especies de plantas cultivadas. Esta Tesis Doctoral, se ha centrado en el estudio de la estructura y diversidad genética de las comunidades bacterianas de la rizosfera de olivos cultivados y silvestres en Andalucía, determinando el papel que los sistemas de manejo del suelo y los factores asociados a la planta pueden tener sobre éstas. En España, recientemente se han introducido métodos alternativos del manejo del suelo para reducir al mínimo la vulnerabilidad de los olivares a la erosión del suelo, uno de los principales problemas para la sostenibilidad del olivo en Andalucía, incluyendo el no-laboreo combinado con el control mecánico de malas hierbas, laboreo reducido con y sin control de malas hierbas y siembra de cubiertas vegetales en el otoño y eliminación de malas hierbas con herbicidas en la primavera y/o posterior desbroce o pastoreo. En este trabajo, se utilizó el análisis FT-RFLP (Análisis del Polimorfismos de Longitud del Fragmento de Restricción Terminal Fluorescente) de las secuencias amplificadas de la región 16S del ADNr para estudiar las diferencias en la estructura de las comunidades bacterianas en muestras de suelo de 46 plantaciones comerciales de olivo orgánico y 12 áreas naturales cercanas con diferentes tipos de suelo. Las fincas de olivar estudiadas han estado sometidas a los diferentes sistemas de manejo de suelo durante largo tiempo en dos de las zonas más representativas para el cultivo de olivar en Andalucía, y representan ejemplos de sistemas agroforestales y plantaciones tradicionales. Nuestros resultados demostraron que dentro de cada finca de olivar tanto el tipo de suelo como el manejo de éste contribuyeron en este orden a modificar la estructura y diversidad de las comunidades bacterianas de acuerdo a los valores de los índices de Riqueza y Shannon Weiner. Los suelos de olivar de Sierra Morena con laboreo ligero o pastoreo con ovejas durante todo el año, presentaron mayores valores de estos índices de diversidad comparados con todos los sistemas de manejo del suelo en Campiña (laboreo convencional y cobertura del suelo con desbroce). Mediante este análisis FT-RFLP algunos fragmentos de restricción terminal han sido identificados y asociados significativamente a sistemas de manejo de suelo específicos, los cuales podrían ser utilizados en el futuro como indicadores para evaluar el efecto de cambios en el manejo de suelo en la modificación de las propiedades biológicas del suelo incluyendo la calidad biológica del mismo. Entre los árboles cultivados y silvestres, el olivo es una de las especies de mayor longevidad y riqueza en variabilidad genética. En España, más de 200 variedades son actualmente cultivadas. En Andalucía ocho cultivares de olivo (Hojiblanca, Lechín de Sevilla, Manzanilla de Sevilla, Nevadillo Negro, Picual, Picudo, y Verdial de Huévar) representan >90% del área total cultivada, y nuevos cultivares (Arbequina y Frantoio) están siendo actualmente introducidos. En esta Tesis Doctoral, utilizando un enfoque tanto cultivo-dependiente e independiente (FT-RFLP de las secuencias amplificadas de la región 16S ADNr), evaluamos la influencia específica del genotipo de olivo, vivero de origen de los plantones, y el tiempo de incubación en la estructura de las comunidades bacterianas así como en las comunidades bacterianas cultivables totales (BCT) y Pseudomonas fluorescentes (Ps) en la rizosfera y endosfera de seis cultivares (Arbequina, Frantoio, Hojiblanca, Manzanilla de Sevilla, Picual, y Picudo). Nuestros resultados indicaron que en primer lugar el vivero de origen, y en segundo lugar el genotipo del olivo, tuvieron una influencia significativa en la estructura de las comunidades iniciales y densidad de población de bacterias cultivables en la rizosfera y endosfera. En general, los cultivares Arbequina y Frantoio mostraron los mayores niveles de densidad de población. Asimismo, la estructura de las comunidades bacterianas de la rizosfera de seis cultivares de olivo muestreados en distintos tiempos de crecimiento fueron diferenciados en primer lugar en función del tiempo de muestreo y en segundo lugar en función del genotipo del olivo, con densidad de poblaciones de BCT y Ps manteniéndose estables o incrementando sus niveles de densidad de población durante el tiempo de crecimiento. En esta Tesis Doctoral, nuestra hipótesis fue que ambas formas de olivo, cultivada y silvestre, pueden ser una importante fuente de variabilidad genética la cual puede contener comunidades bacterianas en la rizosfera con importantes aplicaciones en la medicina, veterinaria, agricultura o industria. Mediante un enfoque de análisis polifásico, examinamos la estructura y diversidad de las comunidades bacterianas en la rizosfera de olivos silvestres en Andalucía. Primero, utilizando la técnica de análisis FT-RFLP de la región 16S ADNr, encontramos una alta heterogeneidad en la composición de las comunidades bacterianas de la rizosfera, sugiriendo la existencia de comunidades específicas en función del genotipo de la planta y localización geográfica, siendo cada reducto de acebuche un reservorio único de diversidad. Posteriormente, investigamos el potencial antagonista de esas poblaciones bacterianas cultivables asociadas a la raíz. De un total de 675 aislados bacterianos de la rizosfera y endosfera de olivos silvestres, 94 (14%) mostraron una fuerte actividad antagonista in vitro contra V. dahliae patotipo defoliante, el cual es considerado uno de los más importantes patógenos que afectan al cultivo del olivo en el mundo. La proporción más alta de antagonistas se obtuvo de la rizosfera (59,6%) en comparación con la endosfera (40,4%). En total, la mayoría de los antagonistas (entre un 58,5 a 78,3%), mostraron actividad proteolítica, lipolítica, quitinolítica, produjeron ácido indol-acético y sideróforos. Mediante la secuenciación del gen 16S del ADNr, los antagonistas se identificaron indicando que la mayoría de las bacterias pertenecen al género Bacillus (56,4%), Pseudomonas (27,7%) y Paenibacillus (7,4%). Asimismo, varios de los aislados bacterianos que se identificaron no habían sido citados previamente en olivo incluyendo Acinetobacter sp. (3,2%), Chryseobacterium vyrstaatense (2,1%), Rhodococcus wratislaviensis (1,1%), y Rahnella sp. (1,1%). En general, varias de estas bacterias mostraron un alto y gran número de mecanismos de antagonismo, por lo que deben ser consideradas para futuros análisis como potenciales agentes de biocontrol contra V. dahliae en olivo. Finalmente, realizamos un intenso estudio centrado en nuevas bacterias pertenecientes a Duganella spp. con pigmentación morada productoras de violaceína con interés biotecnológico habitando la rizosfera de olivos silvestres y cultivados en el sur de España. Mediante una caracterización fisiológica y bioquímica, análisis filogenético de diferentes genes incluyendo 16S ADNr, gyrB y vioA (implicado en la síntesis de violaceína), aislamos e identificamos por primera vez Duganella spp. asociadas con la rizosfera de plantas leñosas en medio ambientes de clima Mediterráneos que son capaces de producir violaceína, un metabolito secundario de color azul-morado con importantes aplicaciones biológicas, médicas e industriales de alto interés biotecnológico. Las siete cepas de Duganella spp. estudiadas pudieron ser identificadas como dos potenciales especies nuevas y fueron diferenciadas de acuerdo a su huésped de origen (Duganella baetica en olivos silvestres versus Duganella olivae en olivos cultivados). Todas las cepas de Duganella spp. produjeron violaceína in vitro, con niveles de producción natural más altos (hasta X65) que los citados en la literatura para cepas de otras especies bacterianas productoras de violaceína. Este alto rendimiento, hacen de estas bacterias buenas candidatas para su explotación biotecnológica, ya que los bajos rendimientos en la producción de violaceína se consideran una de las principales limitaciones de las cepas silvestres para su producción masiva y explotación comercial. Aunque no se demostró actividad inhibidora in vitro frente a bacterias gram-negativas y hongos fitopatógenos, el filtrado crudo de violaceína si demostró actividad inhibidora contra bacterias gram positivas. También observamos que las cepas de Duganella spp. de olivos silvestres y cultivados mostraron actividad proteolítica y lipolítica y una débil producción de sideróforos lo cual merece una investigación más extensa como potenciales inoculantes de plantones de olivo para mejorar su crecimiento y el establecimiento y supresión de patógenos del suelo.

En Peñas Blanca, San Ramón de Alajuela, se evaluó la acción supresora de las cepas de Trichoderma viride 2C-PR, Bacillus subtilis 002R y Streptomyces griseus 001, en el combate de Fusarium solani, Rhizoctonia solani, Pseudomonas sp y Erwinia carotovora, en plantas de jengibre, en comparación con fungicidas y bactericidas usados por el agricultor. Las aplicaciones se realizaron cada 15 días durante un periodo de 9 meses y cada semana cuando se presentó algún foco de infección. La duración del trabajo fue de 11 meses (febrero-diciembre). Se evaluó la sobrevivencia de los patógenos y los biocontroladores, para lo cual se realizaron análisis microbiológicos a los 4 y 9 meses de edad de cultivo; se evaluó además producción. En términos generales, se observó una tendencia a la disminución del inóculo de los patógenos en el tratamiento biológico, en comparación con el tratamiento químico en ambos muestreos, a excepción de F. solani en el primer muestreo. Al final del ensayo se pudo determinar la presencia de la cepa de Trichoderma con poblaciones de 4,5x108 conidios g-1, Bacillus con 6,1x1010 UFC ml-1 y Streptomyces fue la cepa que menos persistió en el campo, con una poblacion 2x101 ml-1. El tratamiento con los biocontroladores presentó una producción significativamente mayor (82000 kg ha-1) que el tratamiento químico (48000 kg ha-1). Estos resultados demuestran que los biocontroladores son una alternativa de control contra los patógenos F. solani, R. solani, Pseudomonas sp, E. carotovora.