Search

Orientador: Dirce Yorika Kabuki Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: "Enterococcus" spp. ascenderam como causa de moléstias nosocomiais e sua ocorrência em alimentos tornou-se controversa. Estes enterococos, mormente "E. faecalis" e "E. faecium", detêm fatores de virulência e resistência a antimicrobianos eventualmente transmissíveis entre si ou a outras bactérias através de Elementos Genéticos Móveis (EGM). Portanto, objetivou-se descrever a ocorrência de fatores de virulência em E. faecalis, E. faecium e em "Enterococcus" spp. de amostras de ambiente e alimentos oriundas de uma indústria de laticínios. Ademais, buscou-se correlacionar isolados selecionados de "E. faecalis" encontrados em alimentos com isolados de amostras clínicas de urina, utilizando como critérios, além dos fatores de virulência, a resistência a antimicrobianos e análises multivariadas (SVM, PLS-DA, "Heatmap" e HCA) com dados obtidos em MALDI-TOF/MS. Genes de virulência e resistência à vancomicina foram detectados através de PCR e, a fim de determinar a sensibilidade antimicrobiana, utilizou-se o método de Disco-Difusão. Entre os 155 isolados de enterococos oriundos de indústria (ambiente e alimentos), somente em 22 (14,19%) verificou-se a ausência dos 10 fatores de virulência avaliados. Genes de virulência foram abundantemente detectados entre os isolados, mormente em "E. faecalis". Concernente ao estudo correlativo, constatou-se a mesma incidência a nível estatístico (? = 0,05) dos fatores de virulência em ambas as fontes de isolamento de "E. faecalis" (laticínios e urina), com ressalvas a efaA e cylB, mais associados aos últimos. Portanto, como os isolados de alimentos mostraram ocorrência de fatores de virulência similar, evidencia-se a iminência de se tornarem infectantes em cenário favorável. E. faecalis oriundos de laticínios revelaram maior sensibilidade aos antimicrobianos avaliados; contudo, 70% foram resistentes à tetraciclina e 40%, à eritromicina. Ademais, observou-se multirresistência somente entre os isolados de urina. Concernente às análises multivariadas realizadas com dados obtidos em MALDI-TOF/MS, o modelo PLS-DA mostrou uma leve divisão entre isolados de E. faecalis de acordo com a sua fonte de isolamento, mas não mostrou subdivisões, isto é, os isolados de leite cru não foram individualizados dos obtidos de queijos Minas frescal. O mesmo foi observado em HCA, onde entre os 8 clusters formados, 2 constituíram-se exclusivamente de isolados de alimentos. Relativamente ao "Heatmap", não se constatou a ocorrência de íons associados exclusivamente a uma das classes "E" (laticínios) ou "H" (urina). O modelo SVM classificou corretamente 100% dos isolados de "E. faecalis" de laticínios, mas somente 56,1% das uroculturas foram identificadas como tal Abstract: "Enterococcus" spp. have arisen as a cause of nosocomial infections and their occurrence in food has become controversial. These enterococci, especially "E. faecalis" and "E. faecium", may exhibit virulence factors and antimicrobial resistance that may be exchanged between them or to other bacteria through Mobile Genetic Elements (EGM). Therefore, the aim of this study was to describe the occurrence of virulence genes in E. faecalis, "E. faecium" and "Enterococcus" spp. isolated from environmental and food samples of a dairy plant. In addition, we correlated selected "E. faecalis" isolates from food and urine using as criteria the occurrence of virulence, antimicrobial resistance and chemometric analysis using MALDI-TOF/MS data (SVM, PLS-DA, "Heatmap" e HCA). The virulence genes and resistance to vancomycin were detected by PCR and the Disk-Diffusion assay was carried out to determine the antimicrobial susceptibility. Among the 155 enterococci isolated from industry (environment and food), only 22 (14.19%) isolates were free from all of the 10 virulence genes searched. There was a high occurence of virulence genes among the isolates, mainly in E. faecalis. As for the comparative study, there was no statistical difference (? = 0.05) between the occurence of virulence genes and the source of isolation of "E. faecalis" (dairy or urine), with exceptions to efaA and cylB, more associated to the latter. Therefore, the food isolates showed a similar occurrence of virulence genes, evidencing their pathogenic potential. E. faecalis isolated from dairy were more susceptible to the antimicrobials evaluated than the clinical ones; however, 70% showed resistance to tetracycline and 40% to erythromycin. In addition, antibiotic multiresistance was only observed among the urine isolates. Concerning the multivariate analysis performed with data obtained in MALDI-TOF/MS, the PLS-DA model showed a slight discrimination between "E. faecalis" isolates according to their source of isolation, but it did not show any subdivisions, i.e. raw milk isolates were not individualized from those found in Minas fresh cheese. The same was observed in HCA, where among the 8 clusters generated, 2 were formed exclusively by food isolates. Regarding the "Heatmap", the occurrence of ions associated exclusively to one of the "E" (dairy) or "H" (urine) classes was not observed. The SVM model correctly classified 100% of dairy E. faecalis, but only 56.10% of the urocultures were identified as such Mestrado Ciência de Alimentos Mestre em Ciência de Alimentos CNPQ 134607/2016-3 CAPES

The aim of this study was to evaluate the effect of the direct acidification by lactic acid and indirect, by adding of the mesophilic starter culture type O (Lactococcus lactis subsp. lactis e Lactococcus lactis subsp. cremoris), the physicochemical properties, microbiological and sensory product. Two formulations of Minas Frescal cheese were prepared by acidification with lactic acid and acidification with mesophilic type O culture and evaluated for microbiological quality: the psychrotrophic count, aerobic mesophilic and thermotolerant Coliforms and Salmonella sp. The physicochemical analyzes were performed determination of fat, ash, moisture, acidity in lactic acid and pH. The physical and chemical changes were evaluated in the Minas fresh cheese during the 14-day storage period, and analyzed its acceptability and purchase intent through sensory analysis. The results revealed that the Minas fresh cheese formulations presented in good sanitary conditions and of consumption. The physico-chemical parameters of fat, ash and moisture of the Minas fresh cheeses do not differ significantly (p 0.05). The cheese obtained by direct acidification by lactic acid showed the lowest values of count total lactic bacteria and acidity in acid lactic, higher pH and greater sensory acceptance and purchase intent differing cheese obtained by lactic fermentation. The results show that the form of acidification affects the product characteristics and consumer acceptability. The use of goat milk for the production of fresh cheese mines shows potential for the dairy industry and adds value to the product and becomes an alternative product to consumers allergic to cow’s milk. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da acidificação direta por ácido lático e por adição de cultura starter mesofílica tipo O (Lactococcus lactis subsp. lactis e Lactococcus lactis subsp. cremoris) nas propriedades físico-químicas, microbiológicas e sensoriais de queijo Minas frescal de leite de cabra. Duas formulações de queijo Minas frescal foram elaboradas por acidificação com ácido lático e com cultura mesofílica tipo O e avaliadas quanto a qualidade microbiológica, quantificando S. aureus, psicrotróficos, bactérias láticas, coliformes termotolerantes e quanto a presença de Salmonella sp. Quanto as análises físico-químicas, foram realizadas determinação de gordura, cinzas, umidade, acidez titulável em ácido lático e pH. As modificações físico-químicas no queijo Minas frescal foram avaliadas durante o período de estocagem de 14 dias e analisada a sua aceitabilidade e intenção de compra por meio da avaliação sensorial. Os resultados revelaram que ambas as formulações do queijo Minas frescal apresentavam-se em boas condições higiênico-sanitárias e de consumo. Quanto aos parâmetros físico-químicos, os teores de gordura, cinzas e umidade dos queijos não diferiram significativamente entre si (p 0,05). O queijo obtido por acidificação direta por ácido lático foi o que apresentou menor contagem de bactérias láticas totais e acidez, maior valor de pH e maior aceitabilidade sensorial e intenção de compra diferindo do queijo obtido por fermentação lática. Os resultados mostram que a forma de acidificação afeta as características do produto e sua aceitação pelos consumidores. A utilização do leite de cabra para produção do queijo Minas frescal apresenta potencial de aplicação na indústria de lácteos, agrega valor, tornando-o um produto alternativo aos consumidores alérgicos ao leite bovino.

Avaliaram-se a evolução da contaminação microbiana de queijo-de-minas frescal durante sua vida de prateleira e a padronização e qualidade de sete marcas (A a G) de queijo (3 a 4 lotes de cada), adquiridas em supermercados de São Paulo. Os parâmetros determinados incluíram contagens de Staphylococcus spp., coliformes, Escherichia coli e bactérias láticas, pH, umidade e dureza instrumental, após 7, 14 e 21 dias de fabricação dos queijos. Avaliou-se, também, o comportamento da população de coliformes e E. coli durante o processamento de queijo-de-minas frescal com leite pasteurizado e cru. As contagens mais elevadas de Staphylococcus spp., coliformes e E. coli detectadas foram, respectivamente, 7,83 (B), 8,02 (B) e 7,83 log UFC/g (C). Todas as marcas, exceto a F, apresentaram índices de contaminação acima do recomendável. Seis das sete marcas apresentaram-se impróprias para o consumo já aos sete dias de fabricação. As populações de coliformes e de E. coli dos queijos preparados no laboratório aumentaram 2,5 ciclos log durante o processamento com leite pasteurizado e 4,5 ciclos log (coliformes) e 5 ciclos log (E. coli) em queijo fabricado com leite cru. Uma reavaliação das condições de fabricação, distribuição, comercialização e prazo de validade de queijo-de-minas frescal é necessária. Microbial contamination of minas fresh cheese during its shelf-life and general aspects of quality and standardization of seven different trademarks (A to G), purchased in grocery stores in São Paulo, were investigated. For this purpose, counts of Staphylococcus spp., coliforms, Escherichia coli, and lactic acid bacteria, besides pH, moisture, and instrumental measurement of hardness were determined 7, 14 and 21 days after cheese production. The variation of coliforms and E. coli counts during the production of cheeses from pasteurized and raw milk was also evaluated. The highest counts of Staphylococcus spp., coliforms and E. coli were, respectively, 7.83 (B), 8.02 (B), and 7.83 log CFU/g (C). Except for trademark F, all others presented contamination levels above those recommended by the Brazilian legislation. Cheeses from six out of seven trademarks were already unsuitable for consumption 7 days after production. The counts of total coliforms and E. coli in cheeses prepared in the laboratory increased 2.5 log cycles during their manufacture using pasteurized milk, and 4.5 log cycles (coliforms) and 5 log cycles (E. coli) when prepared with raw milk. Conditions of production, distribution, and expiration date of commercial minas fresh cheese need improvement.