Search

El VIH continúa siendo una de las enfermedades más importantes del mundo actual. La necesidad de eliminar los reservorios del virus ha provocado, en los últimos años un aumento en la investigación para hallar un tratamiento eficaz frente a ellos. Encontrar una molécula capaz de unirse al ARN para inhibir la replicación del virus no es fácil, pero en los últimos años se han ido haciendo progresos en este ámbito. En este trabajo, se estudia la capacidad inhibitoria de compuestos análogos de clomifeno sobre la interacción entre el subdominio IIB de la secuencia RRE del VIH-1 y la proteína Rev, con la finalidad de identificar nuevos inhibidores de dicha interacción con potencial actividad antiviral. Para ello se llevan a cabo una serie de ensayos complementarios empleando dos técnicas, la intensidad de fluorescencia y la anisotropía de fluorescencia, para determinar tanto la Kd de los compuestos como la IC50 de los mismos. También, se realizan ensayos de optimización para observar si los compuestos presentan autofluorescencia, comprobar la cinética de la reacción y un ensayo comparativo para averiguar si un aumento en la secuencia de la horquilla IIBh de RRE comporta un cambio en el ensayo de anisotropía aumentando su sensibilidad. Los resultados de los experimentos realizados muestran que un aumento en la longitud del dominio de IIBh no comporta un aumento en la anisotropía. Los compuestos presentan una leve autofluorescencia a altas concentraciones. La cinética de la reacción es muy rápida. En cuanto a los compuestos, existe un potencial de dichas moléculas en concreto de los compuestos 4´Cl-clomiphene, Cis-Clomiphene y sobre todo el 4´OH-Tamoxifen, de inhibir la interacción RRE-Rev, pero se necesitarán más ensayos y réplicas con distintas técnicas para poder afirmar que estos compuestos pueden utilizarse para el desarrollo de inhibidores RRE-Rev. HIV remains one of the most important diseases in the world today. The need to eliminate virus reservoirs has led to a significant increase in research focused on finding an effective treatment against them. Identifying a molecule capable of binding to RNA to inhibit virus replication is not easy, but progress has been made in this area in recent years. In this work, the inhibitory capacity of clomiphene analogs on the interaction between subdomain IIB of the HIV-1 RRE and the Rev protein is studied in order to identify new RRE-Rev inhibitors with potential antiviral activity. To accomplish this goal, a series of complementary fluorescence intensity and fluorescence anisotropy assays have been performed to determine the Kd and IC50 values of these compounds. Optimisation tests were also carried out to evaluate whether the compounds had autofluorescence, to check the reaction kinetics, and to find out whether an increase in the length of the IIB RNA hairpin improved the results of the anisotropy experiments. The results of the experiments indicated that an increase in the length of the IIBh domain did not lead to an increase in anisotropy. The compounds had mild autofluorescence at high concentrations. The reaction kinetics were very rapid. As for the compounds, three of them, in particular 4-Cl-clomiphene, Cis-Clomiphene and especially 4-OH-Tamoxifen, were capable of inhibiting the RRE-Rev, but further experiments with additional techniques will be needed to confirm that these compounds can be used for the development of RRE-Rev inhibitors. Biotecnología