Search

Hovedformålet med specialet var at undersøge, om det var muligt med Real-Time Polymerase Chain Reaction (Real-Time PCR) at påvise Streptococcus equi subspecies zooepidemicus og Streptococcus equi subspecies equi direkte fra klinisk prøvemateriale fra hoppers endometrium uden en forudgående bakteriologisk dyrkning (BU). Forkortelse for begge subspecies er fremover Streptococcus equi. Øvrige formål var blandt andre undersøgelse af prøvetypens indvirken på Real-Time PCR resultatet, samt at sammenligne Real-Time PCR resultaterne med BU på de samme prøver. Prøvematerialet bestod af 53 endometriesvaberprøver, 53 lav-volumen uterusskylleprøver og 53 endometriebiopsier. Prøverne var udtaget parrede, dvs. én svaberprøve, én skylleprøve og én biopsi fra hver hoppe, hvilket muliggjorde sammenligning af prøvetyperne. Samtlige 159 prøver blev undersøgt for tilstedeværelse af Streptococcus equi, vha. SYBR® Green Real-Time PCR med brug af et artsspecifikt primersæt for det manganase-afhængige superoxid dismutase A gen, sodA.Resultaterne viste 34 % positive svaberprøver, 38 % positive skylleprøver og 15 % positive biopsier. Til sammenligning var resultaterne for BU 17 % positive svaberprøver, 28 % positive skylleprøver og 15 % positive biopsier. P-værdier for McNemar analyse: p (svaber) = 0,052 og p (skylle) = 0,36 og p (biopsi) = 0,77.Af de positive prøver havde 42 % = 2 prøvetyper der kom frem til det samme resultat. Korrelation mellem Real-Time PCR og BU positive resultater var lav, hvilket gav sensitiviteter på 0,25 - 0,56. Ved sammenligning af Real-Time PCR resultaterne med BU som ”best standard”, blev 44 % af de BU positive svaberprøver ikke påvist ved Real-Time PCR. For skylleprøverne blev 47 % BU positive ikke påvist ved Real-Time PCR. For biopsierne var tallet 75%.På baggrund af dette studie kan det konkluderes, at det var muligt med SYBR® Green Real-Time PCR med det valgte primersæt for sodA, at påvise Streptococcus equi ved direkte DNA ekstraktion fra alle tre prøvetyper, The aim of this study was to determine if it was possible, by using the Real-Time Polymerase Chain Reaction (Real-Time PCR), to detect Streptococcus equi subspecies zooepidemicus and Streptococcus equi subspecies equi directly from different clinical sample material from mare endometrium without the necessity of bacteriological culturing (BC). Further aims were to determine whether the type of the sample affects the Real-Time PCR result, and to compare Real-Time PCR results with BC on the same samples.The sample material consisted of 53 endometrial swabs, 53 low-volume uterine flushes and 53 endometrial biopsies. The samples were collected parred, which meant that one endometrial swab, one low-volume uterine flush and one endometrial biopsy where obtained form each mare which made comparison of the different types of samples possible. All 159 samples were examined for the presence of Streptococcus equi subspecies zooepidemicus and Streptococcus equi subspecies equi by means of SYBR® Green Real-Time PCR and the species specific primers for the manganese-dependent superoxide dismutase gen A, sodA.The results were 34 % positive swabs, 38 % positive uterine flushes and 15 % positive biopsies. In comparison the results from BC of swabs, uterine flushes and biopsies were 17 %, 28 % and 15 % respectively. P-values of the McNemar analysis were: p (swab) = 0.052; p (uterine flush) = 0.36; p (biopsy) = 0.77. Of the positive samples 42 % had = 2 types of samples which gave the same result. Correlation between Real-Time PCR positive results and BC positive results were low, giving the tests sensitivities between 0.25 – 0.56.By comparing Real-Time PCR results with BC as a “best standard” 44 % of the BC positive swabs were not detected by the Real-Time PCR method. For uterine flushes 47 % of the BC positive were not detected by Real-Time PCR. For endometrial biopsies 75 % were not detected.In conclusion it was possible by SYBR® Green Real-Time PCR and the choosen primers for sodA

Der er dokumenteret en stigning i serumkoncentration af akutfaseproteiner efter fødsel hos både mennesker og dyr. Hvilket eller hvilke akutfaseprotein, der stiger i koncentration, er afhængig af dyrearten. Hos heste er det dokumenteret, at serum amyloid A (SAA) er det mest responsive akutfaseprotein. Formålet med studiet var at klarlægge akutfaseproteinet, SAA-koncentrations profil hos hopper efter foling, ved inseminering i følbrunsten og ved drægtighedsscanning. Desuden ønskedes SAA-responset hos hopper med dystoki eller tilbageholdt efterbyrd undersøgt. En eventuel sammenhæng mellem SAA-koncentration i post partum perioden og drægtighedsprocenten vil blive undersøgt. En sammenhæng mellem en stigning i SAA-koncentration i post partum perioden og et fald i drægtighedsprocent vil eventuelt kunne udgøre et vigtigt klinisk værktøj i beslutningsprocessen, om en hoppe er egnet til blive insemineret i følbrunsten eller ikke. Fibrinogen-koncentrationen blev målt under studiet som en kontrolparameter for SAA ved en eventuelt inflammationstilstand hos disse hopper. 41 hopper fra fem forskellige hingstestationer/stutterier indgik i studiet. Der blev udtaget blodprøver i slutningen af drægtigheden, samt 0-24, 24-48 og 48-72 timer efter foling og ved efterfølgende tegn på følbrunst, ved inseminering i følbrunsten og ved drægtighedsscanning (drægtighedsdag 13-41). Blodprøver blev analyseret for SAA og fibrinogen. Ingen af hopperne blev præsenteret med dystoki, og to hopper i materialet havde tilbageholdt efterbyrd. Konklusion: Det var i studiet ikke muligt at klarlægge SAA-responset hos hopper efter foling, da SAA-koncentrationen var meget varierende hos de undersøgte hopper. Hovedparten af hopperne viste ingen eller minimal plasmastigning af SAA, mens et fåtal (12/34) havde en stigning på 3,0-202,3 mg/L. Studiet kunne ikke påvise en samenhæng mellem SAA-koncentration ved inseminering i følbrunsten og drægtighedsresultat ved den efterfølgende scanning. Der fandtes heller ikke n, A post partum rise in serum concentration of acute fase proteins is documented in both humans and other animals. Which acute phase proteins are raised depends on the animal species. In horses, serum amyloid A (SAA) is documented to be the most responsive acute phase protein. The purpose of the study was to survey the profile of SAA-concentration in mares after foaling, at insemination in foal heat and at pregnancy examination. Furthermore, the SAA-response in mares with dystocia or retained placenta was examined. The correlation between SAA-levels and the pregnancy result after insemination in foal heat was examined. A positive correlation could be useful for future clinical usage of SAA in the decision whether or not a mare is appropriate to be inseminated in the foal heat. Fibrinogen concentration was used as control parameter for SAA in case of inflammation in the mares. Forty-one mares from five different stud farms were included in the study. Blood samples where collected in the end of pregnancy, 0-24, 24-48 and 48-72 h after foaling, at sign of foal heat, at insemination in foal heat and at pregnancy examination (pregnancy day 13-41). The blood samples were analysed for SAA and fibrinogen. None of the mares had dystocia and only two mares had retained placenta. Conclusion: Because of a highly variated SAA-concentration in the study population, it was not possible to detect the SAA-response in mares post partum. Most mares showed none or a minimal rise in plasma concentration of SAA, while few mares had an increase (3,0-202,3 mg/L). The study could not detect a relation between SAA-concentration at the time for insemination in foal heat and the pregnancy results at pregnancy examination. Furthermore, the study could neither detect any significant difference between SAA-response of the mares and their age or parity. The study detected a statistical significant increase in plasma fibrinogen-concentration from pre partum (pregnancy-day 258 to the day before partur

En væsentlig årsag til nedsat reproduktion hos hopper er tab af conceptus i den tidlige drægtighed. Maternal erkendelse af drægtigheden gennem transmission af signaler fra conceptus til hoppen har en afgørende betydning for, at drægtigheden kan opretholdes. Hvis signaleringen ikke finder sted eller er utilstrækkelig, vil der ske luteolyse af corpus luteum, og drægtigheden vil gå til grunde, da progesteron er det hormon, der understøtter drægtigheden. Tidligt embryonalt tab kan i nogle tilfælde skyldes utilstrækkelig produktion af progesteron, og derfor behandles nogle hopper på empirisk grundlag med eksogen progesteron. Hvorvidt det medicinsk er muligt at forbedre reproduktionen og højne fertiliteten, er et emne, som optager mange. En enkelt behandling i diøstrus med en GnRH agonist, Buserelin / Receptal® har hos forskellige dyrearter, i flere studier haft en positiv effekt på drægtighedsprocenten. Undersøgelserne er talrige, men uoverensstemmende, og mekanismen af en eventuel effekt er forsat ukendt. Målet med dette speciale er at undersøge effekten af behandling med Receptal® dag 9-12 efter ovulation for chancen på udvikling af drægtighed hos hopper, og om en eventuel effekt også kan induceres ved administration af 0,00132 mg/kg progesteron / Altrenogest. Dette er derfor forsøgt eftervist ved at give en gruppe hopper en enkelt dosis eksogen progesteron, Regumate®. Undersøgelsen viste ingen statistisk signifikant forskel på drægtighedsprocenten mellem den Receptal® behandlede gruppe (8/12) og kontrolgruppen (18/21) (P = 0,38), og det kan derfor ikke på baggrund af dette studie konkluderes, at Receptal® har en positiv effekt på chancen for udvikling af drægtighed. Hvorvidt Receptal`s® effekt skyldes en kortvarig stigning af progesteronkoncentrationen vil blive diskuteret i specialet. Desuden vil jeg komme med forslag til eventuelle andre virkningsmekanismer af Receptal®. Undersøgelser beskrevet i litteraturen hos andre dyrearter indikerer, at en eventuel effekt af e, Early embryonic loss is a major cause of reduced fertility in mares. Maternal recognition of pregnancy is essential for maintenance of pregnancy. None or insufficient transmission of signals from the embryo will induce luteolysis of the corpus luteum and termination of the pregnancy as the primary corpus luteum is the only source of progesterone. Early embryonic loss is in some cases due to inadequate production of progesterone and empirically some mares have been treated with exogenous progesterone. Whether it is medically possible to improve reproduction and enhance fertility is a subject that concerns many people. A single treatment with the GnRH agonist Buserelin / Receptal® in diestrous has in different species in several studies increased the likelihood of pregnancy. Investigations are numerous but inconsistent and the mechanism of effect remains unknown. The aim of this study was to investigate the effect of Receptal® on pregnancy rate and if the effect also could be induced after administration of 0.00132 mg/kg progesterone / Altrenogest. Therefore Receptal® was administered to mares on day 9-12 after ovulation in one group and exogenous progesterone Regumate® was administered to mares on day 9-12 after ovulation in another group. No significant increase in pregnancy rate could be induced by Receptal® treatment treatment group (8/12) versus control group (18/21) (P = 0.38). The possible effects of Receptal® including a temporary increase in progesterone concentration will be discussed. Other investigations indicate that the possible effect of a GnRH agonist could be mediated through receptors in non-hypothalamus reproductive associated tissue.