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Survival and growth of the native oyster Crassostrea gasar along the juvenile and adult phases were evaluated in three different stocking densities [low (D), medium (2D) and high (3D)] and in two grow-out systems (fixed and floating system). The fixed system consisted of a rack made with PVC, fixed from the bottom with wood sticks. The floating system consisted of floating bags suspended by a rack made with PVC and maintained submerged from the seawater surface by eight floats. Survival and shell height of oysters cultured after 30, 60 and 90 days were registered in each phase and in each grow-out system. Results showed that the grow-out system did not affect survival and growth of C. gasar in the juvenile and adult phases. The tested densities affected the survival of oysters cultured over time in both phases but did not affect oyster growth. At times analyzed, it was observed positive growth in juvenile oysters grow after 90 days of culture. However, in the adult phase, no growth was observed after 90 days of culture. Oyster yield was higher in the density 3D, in both juvenile and adult phases. These findings contributed to the development of the oyster C. gasar culture.

Made available in DSpace on 2020-12-04T09:02:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 are.14954.pdf: 1887044 bytes, checksum: c9604cb06d877b66ca9fd585b7dbaa68 (MD5) Previous issue date: 2020

El objetivo de la presente investigación reportar los primeros casos de estudios etnopaleontológicos de la cultura popular peruana y los usos tradicionales de fósiles en siglo pasado o en la actualidad. Se utilizaron ocho ítems de infl uencia sociocultural: concepto artístico o estético, comercial o económico, normativo o legal, utilidades sanitarias, psíquicas y espirituales, signifi cado lúdico, y simbólico o identitario. Los resultados preliminares mencionan el uso de los fósiles como objetos mágicos, una manifestación física de los espíritus de la selva como "Tunche", objetos rituales en las mesas chamanas (ammonites, erizos de mar, ostras, gasterópodos, etc.,) y troncos fósiles "kis-huar" interpretados como "árbol sagrado del Inca". En el contexto arqueológico se refiere a la cultura Inca, Paracas y Nasca. Esta información preliminar nos muestra la necesidad de diseñar nuevos proyectos de investigación específicos con equipos multidisciplinarios y gente de la localidad. The work aimed was to report ethnopaleontological studies of popular culture and to report some cases of the traditional uses of fossils in the Peruvian people in the last century and today. Eight items of sociocultural influence were used: artistic or aesthetic, commercial or economic, legal concept, health, psychic and spiritual utilities, playful meaning, and symbolic or identity. Preliminary results mention the use of the fossils as magical objects, a physical manifestation of the spirits of the jungle such as “Tunche” or ritual objects on the shaman tables (ammonites, sea urchins, oysters, gastropods, etc.) and log fossils “kis-huar” interpreted as “sacred tree of the Inca.” In the archaeological context it refers to the Inca, Paracas, and Nasca cultures. This preliminary information shows us the need to design new specific research projects with multidisciplinary teams and local people.

El objetivo de la presente investigación reportar los primeros casos de estudios etnopaleontológicos de la cultura popular peruana y los usos tradicionales de fósiles en siglo pasado o en la actualidad. Se utilizaron ocho ítems de infl uencia sociocultural: concepto artístico o estético, comercial o económico, normativo o legal, utilidades sanitarias, psíquicas y espirituales, signifi cado lúdico, y simbólico o identitario. Los resultados preliminares mencionan el uso de los fósiles como objetos mágicos, una manifestación física de los espíritus de la selva como "Tunche", objetos rituales en las mesas chamanas (ammonites, erizos de mar, ostras, gasterópodos, etc.,) y troncos fósiles "kis-huar" interpretados como "árbol sagrado del Inca". En el contexto arqueológico se refiere a la cultura Inca, Paracas y Nasca. Esta información preliminar nos muestra la necesidad de diseñar nuevos proyectos de investigación específicos con equipos multidisciplinarios y gente de la localidad. The work aimed was to report ethnopaleontological studies of popular culture and to report some cases of the traditional uses of fossils in the Peruvian people in the last century and today. Eight items of sociocultural influence were used: artistic or aesthetic, commercial or economic, legal concept, health, psychic and spiritual utilities, playful meaning, and symbolic or identity. Preliminary results mention the use of the fossils as magical objects, a physical manifestation of the spirits of the jungle such as “Tunche” or ritual objects on the shaman tables (ammonites, sea urchins, oysters, gastropods, etc.) and log fossils “kis-huar” interpreted as “sacred tree of the Inca.” In the archaeological context it refers to the Inca, Paracas, and Nasca cultures. This preliminary information shows us the need to design new specific research projects with multidisciplinary teams and local people.

We studied the influence of environmental variables associated with three water depths (2, 6 and 10 m) on shell growth, soft tissues dry mass (STDM) and survival of the Caribbean winged oyster Pteria colymbus (Roding, 1798). chlorophyll-a (Chl-a), dissolved oxygen, particulate organic matter (POM) and temperature were studied at each depth. Oysters were placed in 135 plastic baskets with five individuals in each basket. Three baskets at each depth were chosen at monthly intervals for measurements of biometric parameters, biofouling, and survival. At the end of the study, dry mass of the individuals grown at 10 m was significantly lower (Kruskal-Wallis non-parametric test KW, P < 0.05) with the highest values of STDM corresponding to oysters cultivated at 2 m depth. The principal component analysis showed an inverse (temperature) and direct relationship (Chl-a and POM) with respect to the variance observed in the STDM. Taking into account the results obtained in the yields (growth/survival) of P. colymbus we recommend carrying out their culture at water depths between 2 and 6 m. RESUMEN Se estudió la influencia de las variables ambientales asociadas con tres profundidades de agua (2, 6 y 10 m) en el crecimiento de la concha, la masa seca de los tejidos blandos (MSTB) y la supervivencia de la ostra alada del Caribe Pteria colymbus (Roding, 1798). La clorofila a (Chl-a), el oxígeno disuelto, la materia orgánica particulada (POM) y la temperatura se estudiaron a cada profundidad. Las ostras se colocaron en 135 cestas de plástico con cinco individuos en cada cesta. Se eligieron tres cestas en cada profundidad a intervalos mensuales para las mediciones de parámetros biométricos, bioincrustaciones y supervivencia. Al final del estudio, la masa seca de los individuos cultivados a 10 m fue significativamente menor (prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis KW, P < 0,05), mientras que los valores más altos de MSTB correspondientes a las ostras cultivadas a 2 m de profundidad. El análisis del componente principal mostró una relación inversa (temperatura) y directa (Chl-a y POM) con la varianza observada en el MSTB. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en los rendimientos (crecimiento/supervivencia) de P. colymbus, recomendamos llevar a cabo su cultivo a profundidades de agua entre 2 y 6 m.

This work describes the detailed ultrastructural morphology of the phagocyte imprisoning an oyster of Nematopsis (Apicomplexa) found in Crassostrea rhizophorae, in the city of Maceió (AL), Brazil. The highly infected hosts had half-open leaflets with weak, slow retraction of the adductor muscles. Variable number of ellipsoid oocytes, either isolated and or clustered, was found between myofibrils of the adductor muscle. Each oocyst was incarcerated in a parasitophorous vacuole of host uninucleated phagocyte. The oocysts were composed of a dense wall containing a uninucleate vermiform sporozoite. The wall of the fine oocysts was composed of homogeneous electron-lucent material formed by three layers of equal thickness, having a circular orifice-micropyle obstructed by the operculum. The oocysts presented ellipsoid morphology with their wall was surrounded by a complex network of numerous microfibrils. Important details of the taxonomic value were visualized such as the ultrastructural organization of the oocyst wall and the organization of the micropyle and operculum, beyond the microfibrils that protrude from the oocyst wall only observed by transmission electron microscopy (TEM) and that may aid in the identification of the species. However, in order to clarify the systematic position of the species reported of the genus Nematopsis, it is important to proceed with genetic analyses. Resumo Este trabalho descreve a morfologia ultraestrutural detalhada do fagócito encarcerando um oocisto de Nematopsis (Apicomplexa) encontrado em Crassostrea rhizophorae, na cidade de Maceió (AL), Brasil. Os hospedeiros muito infectados apresentavam valvas entreabertas com retração fraca e lenta dos músculos abdutores. Número variável de oócitos de forma elipsoide, isolados e ou agrupados foi encontrado entre as miofibrilas do músculo abdutor. Cada oocisto estava encarcerado num vacúolo parasitóforo do fagócito uninucleado do hospedeiro. Os oocistos eram compostos por uma parede densa contendo um esporozoíto vermiforme uninucleado. A parede dos oocistos finos era composta de material electron-lucente homogêneo formado por três camadas de espessura igual, possuindo um orifício circular - micrópila, obstruída pelo opérculo. Os oocistos apresentavam morfologia elipsoide, sua parede era circundada por uma complexa rede de numerosas microfibrilas. Detalhes de valor taxonômico importantes foram visualizados tais como: a organização ultraestrutural da parede do oocisto e a organização da micrópila e do opérculo, além das microfibrilas que se projetam da parede do oocisto, estrutura apenas observada em microscopia eletrônica de transmissão (MET) e que pode auxiliar na identificação da espécie. Contudo, para esclarecer a posição sistemática da maioria das espécies relatadas do gênero Nematopsis é importante prosseguir com as análises genéticas.

The Vaza-Barris river stands out due to the mangrove ecosystem that occupies a large part of its estuarine area. In this mangrove ecosystem, we find oysters of the genus Crassostrea, which play an essential biological, economic and social role. The species Crassostrea brasiliana (Lamarck, 1819), native to the Sergipe coast, has been widely used as an environmental indicator since its many characteristics make it possible to reveal the contamination of an ecosystem. This study evaluates the environmental conditions of the Vaza-Barris estuary, Sergipe, using the species C. brasiliana, and analyses the environmental and socioeconomic impacts of oyster farming and shrimp farming for coastal communities. Furthermore, we identify the socioeconomic aspects of the oyster fishermen communities in Mem de Sá (Itaporanga D'Ajuda) and Tinharé (São Cristóvão) and address the influence of salinity, pH and temperature on C. brasiliana. Through documentary research and bibliographic review, it was verified that oyster farming and shrimp farming are socioeconomically important, playing a significant role in the economy of the Northeast region. However, in order to make these activities less impacting and more profitable, it is imperative to respect the good practices, conduct training courses for producers and develop new technologies. The study of the main environmental impacts caused by marine shrimp farming on the Vaza-Barris river’s mangrove in São Cristóvão/SE was conducted using bibliographic survey; we analyze the licensing process for this activity in the area and propose environmental sustainability indicators. The main impacts caused by shrimp farming were the removal of native vegetation, inadequate management, improper effluents disposal, the introduction of exotic species and the dissemination of diseases. To address the identification of the socioeconomic aspects of the oyster fishermen communities in Mem de Sá (Itaporanga D'Ajuda) and Tinharé (São Cristóvão), we constructed semi-structured questionnaires containing topics related to individual characteristics, oyster fishing activity and the occurrence of environmental tensors in the area. The presence of small and rustic houses, low level of schooling, a high number of family members in a household, low family income and irregular garbage collection were observed both in Mem de Sá and Tinharé. Oyster fishing is mostly performed by women. The results indicate poor environmental conditions in these communities and low quality of life of their residents. Thus, the development of policies that make Oyster fishing a more sustainable and valued activity is highly needed. To evaluate the concentrations of copper, iron, zinc, manganese and lead in the tissues of Crassostrea brasiliana, oyster samples were obtained in the dry and rainy seasons at five different points located at Vaza-Barris river. It was observed that, in the dry season, a higher concentration of Zn occurred, followed by Fe, Cu, and Mn; Pb was not found. In the rainy season, Zn exhibited higher concentration, accompanied by Fe, Pb, Cu, and Mn. Copper exhibited higher levels in the dry season and was the only metal within the limits established by Brazilian legislation. The other metals exhibited higher concentrations in the rainy season, representing a risk to the environment and to the human being. The results indicate that more effective measures for physical, chemical and microbiological monitoring of the oysters' environment are needed. Lastly, we analyze the influence of salinity, pH, and temperature on Crassostrea brasiliana in Vaza-Barris river. Temperature and pH were in a favorable range for the development of C. brasiliana, although the salinity level was only within the tolerance range. All specimens were found in the adult stage and capable of sexual activity. The results indicate that C. brasiliana reproduces throughout the year in the Vaza-Barris estuary, with higher reproductive activity in months with higher temperatures and pH (October) and lower salinity levels. This thesis concludes that it is possible to evaluate the environmental health of the Vaza-Barris estuary using Crassostrea brasiliana, and we suggest measures that can reduce the environmental impacts in the area, in order to preserve this important ecosystem. O rio Vaza-Barris destaca-se por apresentar grande parte de sua região estuarina ocupada pelo ecossistema manguezal. Nesse manguezal ocorrem ostras do gênero Crassostrea, que desempenham relevante papel biológico, econômico e social. A espécie Crassostrea brasiliana (Lamarck, 1819) nativa do litoral sergipano tem sido bastante utilizada como indicador ambiental por apresentar muitas características que possibilitam revelar a contaminação de um ecossistema. De forma geral, este estudo trata da avaliação das condições ambientais do estuário do rio Vaza-Barris, em Sergipe, com o uso da espécie C. brasiliana, e dos impactos ambientais e socioeconômicos da ostreicultura e carcinicultura para as comunidades costeiras. Além disso, busca-se identificar o perfil socioeconômico dos catadores de moluscos das comunidades Mem de Sá (Itaporanga D´Ajuda) e Tinharé (São Cristóvão) e avaliar a influência da salinidade, pH e temperatura sobre C. brasiliana. Para investigar os impactos ambientais e socioeconômicos da ostreicultura e carcinicultura marinha na região Nordeste do Brasil, foi realizado pesquisa documental e bibliográfica. Verificou-se que a ostreicultura e a carcinicultura são importantes socioeconomicamente, pois geram empregos e desempenham significante papel na economia da região Nordeste e do país. Contudo, é imprescindível a realização de cursos de capacitação para os produtores e o desenvolvimento de tecnologia para o aprimoramento dessas atividades, com a finalidade de torná-las menos impactantes e mais rentáveis. Em relação à identificação dos principais impactos ambientais provocados pela carcinicultura marinha sobre o manguezal do rio Vaza-Barris, em São Cristóvão/SE, foi realizado levantamento bibliográfico, análise das licenças expedidas para essa atividade em Sergipe e a elaboração de indicadores PEIR. Os principais impactos provocados pela carcinicultura foram a retirada da vegetação nativa, o manejo inadequado, descarte impróprio dos efluentes, introdução de espécies exóticas e disseminação de doenças. Observou-se a necessidade de regularização dos empreendimentos e sensibilização dos carcinicultores para que essa atividade ocorra de forma sustentável e em consonância com os instrumentos legais. Na identificação do perfil socioeconômico dos catadores de moluscos das comunidades Mem de Sá (Itaporanga D´Ajuda) e Tinharé (São Cristóvão), em Sergipe, foram aplicados questionários buscando obter dados sobre os entrevistados, informações sobre a atividade de mariscagem e a presença de tensores ambientais nas proximidades do estuário. Em Mem de Sá e Tinharé observou-se a presença de casas rústicas e pequenas, baixo grau de escolaridade, baixa renda familiar, e que a mariscagem é realizada mais por mulheres. Os dados socioeconômicos apontam uma situação de baixa qualidade de vida dos moradores e das condições ambientais nessas comunidades, sendo necessário o desenvolvimento de ações que tornem a mariscagem uma atividade mais sustentável e valorizada. Para a avaliação das concentrações de cobre, ferro, zinco, manganês e chumbo nos tecidos de C. brasiliana do manguezal do rio Vaza-Barris, foram realizadas coletas de ostras nos períodos de estiagem e chuvoso, em cinco pontos localizados no Vaza-Barris. Notou-se que, para o período de estiagem, ocorreu maior teor de Zn, seguido de Fe, Cu e Mn, e Pb não foi encontrado. No período chuvoso o Zn apresentou maior concentração, acompanhado de Fe, Pb, Cu e Mn. O cobre apresentou teores mais elevados na estação de estiagem e foi o único metal que se encontrou dentro dos limites estabelecidos pela legislação brasileira. Os demais metais registraram concentrações maiores no período chuvoso, representando risco ao ambiente e ao ser humano. Os resultados apontaram a necessidade de medidas mais eficientes para o acompanhamento físico, químico e microbiológico do ambiente de origem dessas ostras. Com a finalidade de avaliar a influência da salinidade, pH e temperatura sobre C. brasiliana nativa do manguezal do rio Vaza-Barris, foram realizadas coletas de ostras e medidas de temperatura, pH e salinidade. A temperatura e o pH mostraram-se favoráveis para o desenvolvimento de C. brasiliana, ao contrário da salinidade que esteve apenas dentro da faixa de tolerância. Todos os exemplares encontraram-se em estágio adulto e em atividade sexual. C. brasiliana se reproduz durante todo o ano no estuário do Vaza-Barris, com maior atividade reprodutiva nos meses com temperaturas e pH mais elevados (outubro) e salinidades mais baixas. Este trabalho de tese aponta que é possível, por meio do uso de C. brasiliana, avaliar a sanidade ambiental do estuário do rio Vaza-Barris, e sugere medidas que possam reduzir os impactos ambientais na área, a fim de conservar esse ecossistema. São Cristóvão, SE

Orientador: Prof. Dr. Franciso José Lagreze-Squella Coorientador: Dr. Rodolfo Luis Petersen Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Terra, Programa de Pós-Graduação em Sistemas Costeiros e Oceânicos. Defesa : Pontal do Paraná, 28/03/2019 Inclui referências Resumo: A aquicultura compreende o cultivo de organismos aquáticos, considerada uma grande promessa para suprir a demanda de proteína saudável necessária à nutrição regular do ser humano. A sustentabilidade e a resiliência das comunidades ostreicultoras dependem de mecanismos que permitam gerenciar os estoques naturais combinando produção e conservação. Desta forma é fundamental conhecer o ciclo reprodutivo para o sucesso da ostreicultura. Este trabalho avaliou o ciclo reprodutivo de ostras Crassostrea gasar oriundas da Baía das Laranjeiras (25 ° 30?s; 48 °30?w) tendo sido três pontos amostrais: Ilha Rasa, Medeiros e Ponta Oeste da Ilha do Mel. De novembro de 2017 a outubro de 2018, ostras adultas (n=30) foram coletadas mensalmente, totalizando 360 ostras. Temperatura e salinidade foram registrados in loco com CTD na ocasião das coletas. Em laboratório, foi realizada a biometria dos animais e através de análise molecular, as ostras foram identificadas a nível de espécie. A análise histológica do tecido gonadal foi realizada com lâminas coradas em hematoxilina de Harris e eosina. A variação da salinidade foi significativa (p

Submitted by Manuel Jesus (albertojesus@ua.pt) on 2019-05-06T15:47:24Z No. of bitstreams: 1 Anthony Peter Moreira.pdf: 3219930 bytes, checksum: 7cbf9c1b52f4ab8e8dd82636a329bc89 (MD5) Made available in DSpace on 2019-05-06T15:47:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anthony Peter Moreira.pdf: 3219930 bytes, checksum: 7cbf9c1b52f4ab8e8dd82636a329bc89 (MD5) Previous issue date: 2018 Programa Doutoral em Biologia

Universidad Nacional Agraria La Molina. Escuela de Posgrado. Maestría en Acuicultura Se evaluó el efecto de cuatro temperaturas Control: 24°C, (T1) 26°C, (T2) 28°C, (T3) 30°C en el acondicionamiento gonádico (índice morfo-fisiológico) y desove a temperatura descendente (15, 17 y 21°C) de un plantel de reproductores de ostra perlífera Pteria sterna seleccionado del ambiente natural en condiciones de laboratorio. Se recolectaron 137 organismos adultos de Pteria sterna de la zona costera de Chanduy (Ecuador) en el mes de septiembre del 2015, de los cuales 125 fueron utilizados para la presente investigación con una talla promedio de 7,9 ± 0,8 cm de altura de la concha. La alimentación consistió en una dieta mixta de microalgas de Isochrysis galbana, Chaetoceros gracilis, y Tetraselmis sp, en proporción 1:1:1 a una concentración de 150 a 180 mil cel/ml. De los 125 organismos 53 se usaron para evaluar la calidad gonádica mediante el índice morfo-fisiológico, el estado de madurez gonadal, diámetro de los ovocitos y sexo mediante análisis histológico. Asimismo 72 organismos fueron destinados a inducción al desove. Los resultados indican que el índice gonadosomático (IGS) presentó una relación inversa con el índice de rendimiento muscular (IRM) e índice de manto (IMA) en los diferentes tratamientos de acondicionamiento control 24°C, T1 (26°C), T2 (28°C), T3 (30°C). Los valores más altos de IGS coincidieron con valores bajos de IRM e IMA en la segunda semana. En cuanto al estadio de madurez se pudo observar el 25 % de organismos maduros (MAD) en hembras en el T2 y T3 el 50 % de machos en el T3; el diámetro más grande de ovocitos se observó en el tratamiento de 28°C (38,72 ± 3,3μm); en cuanto al desove el tratamiento de 28°C (T3) fue el único que respondió al estímulo de shock térmico, a temperatura descendente de 17°C a los 20 minutos de exposición, obteniéndose la liberación de gametos. The effect of four temperatures was evaluated Control: 24 °C, (T1) 26 °C, (T2) 28 °C, (T3) 30 °C in the gonadic conditioning (morpho-physiological index) and spawning at descending temperature (15, 17 and 21 °C) of a Pteria sterna oyster reproductive stock selected from the natural environment under laboratory conditions. 137 adult organisms of Pteria sterna were collected from the coastal area of Chanduy (Ecuador) in September 2015, of which 125 were used for the present investigation with an average shell height of 7.9 ± 0.8 cm. The feeding for the oyster consisted of a mixed diet of microalgae of Isochrysis galbana, Chaetoceros gracilis, and Tetraselmis sp, in a ratio of 1: 1: 1 at a concentration of 150 to 180 thousand cel/ml. Of the 125 organisms 53 were used to evaluate the gonad quality by means of the morpho-physiological index, the state of gonadal maturity, diameter of the oocytes and sex by histological analysis. In addition, 72 organisms were destined to induce spawning. The results indicate that the gonadosomatic index (IGS) presented an inverse relationship with the muscular performance index (IRM) and the mantle index (IMA) in the different conditioning treatments control (24 °C), T1 (26 °C), T2 (28 °C), T3 (30 °C). The highest values of IGS coincided with low values of IRM and IMA in the second week. Regarding the stage of maturity, 25% of mature organisms (MAD) could be observed in females in the (T2 and T3) and 50% males (T3); the largest diameter of oocytes was observed in the treatment of 28 °C (38.72 ± 3.3μm); Regarding spawning, the treatment of 28 °C was the only one that responded to the stimulus of thermal shock, at a descending temperature of 17 °C at 20 minutes of exposure, obtaining the release of gametes Tesis

Oysters are a diverse group of marine bivalves that present major ecological and socio-economic importance in coastal ecosystems worldwide. However, oyster species are becoming increasingly threatened by climate change related stressors (e.g. seawater acidification, salinity shifts and temperature rise) as well as anthropogenic pollution (e.g. arsenic). Therefore, it is important to increase the baseline knowledge on the stress response capacity of different oyster species towards environmental stress, in order to help predict and manage the fate of these important biological resources in the context of global change. Hence, the aim of the present thesis was to investigate the comparative performance of different oyster species under several climate change related scenarios, and to project on the future of these species performance in light of global change. To achieve this goal, a series of laboratory based experiments were performed to simulate scenarios of seawater acidification, salinity shifts and temperature rise, as well as the combined exposure to arsenic (As), on different oyster species and life stages (embryo-larvae, juveniles and adults), followed by the assessment of embryo-larvae development, biochemical performance, and proteomic analysis. Because different regions of the globe will face different climate change insult, this study focused on the comparison of the performance of oysters species from populations currently present in temperate (C. angulata, Portugal) and sub-tropical (C. brasiliana, Brazil) ecoregions, with that of a worldwide distributed species (C. gigas), to understand how climate driven stressors may define species competitive advantages in a changing environment. Comparative performance of C. angulata and C. gigas, revealed that each stressor (seawater acidification, salinity and As exposures) induced similar stress response mechanisms in each species, although with differentiated capacities. Differences between species were more evident at the embryo-larvae stage, for which C. angulata was clearly more sensitive to changes in ambient salinity, temperature and As than C. gigas. At the juvenile life stage, differences in each species stress response signatures were revealed considering both oxidative stress response capacity and alterations at the proteome level. At this life stage, proteomic data suggested higher phenotypic plasticity of C. angulata in response to the investigated scenarios, thus likely attributing higher response capacity to seawater acidification in this species. In contrast to juveniles, adult C. angulata and C. gigas were less responsive to seawater acidification and As exposure, despite that data indicated that biomineralization capacity was impaired. As a corollary, data on juvenile and adults suggested that both C. gigas and C. angulata presented capacity to tolerate seawater acidification scenarios, despite that the stress response mechanisms involved present associated energetic and biomineralization costs that may have repercutions at the population levels. On the other hand, salinity showed to markedly influence oysters oxidative, metabolic and energetic status, with C. angulata likely presenting higher capacity to sustain osmotic stress. Hence, early development stages might represent the bottleneck that may define species competitive advantages towards one another. Comparative performance of C. brasiliana and C. gigas (Brazil), revealed that each stressor (seawater acidification and temperature) induced different stress response strategies in each species. Differences between species were more evident at the juvenile stage, for which C. gigas presented higher capacity to sustain acidification than C. brasiliana. On the contrary, C. brasiliana presented better physiological fitness and oxidative status under thermal stress than C. gigas. Adult oysters were less susceptible to tested scenarios in both species, despite presenting overall similar response patterns than juveniles. The present data suggest that C. brasiliana is more tolerant to thermal stress than C. gigas, but in turn may be more sensitive to seawater acidification. Generally, both species presented stress response mechanisms that enabled for survival towards the tested stressors, however data obtained suggests that the time of duration and the intensity of climate change related phenomena such as seawater acidification and thermal stress, will have a crucial influence on both species performance. Ostras do Género Crassostrea são representadas por um grupo diverso de espécies com elevada importância ecológica e socioeconómica em ecossistemas costeiros e estuarinos da biosfera. Contudo, o aumento da frequência de fenómenos resultantes de alterações climáticas e de poluição no meio marinho (acidificação, alterações de salinidade e aumento da temperatura, contaminação por arsénio), propicia o aumento do nível de stresse ambiental que poderá colocar em perigo a diversidade de espécies de ostra à escala global. Deste modo, o estudo dos mecanismos de tolerância a diversos stressores e capacidade de resposta de diferentes espécies de ostra, bem como o conhecimento das características ecofisiológicas de cada espécie, poderão revelar-se importantes para a gestão destes importantes recursos biológicos marinhos. Neste contexto, o objetivo desta tese visou comparar a performance de diferentes espécies de ostra quando expostas a diferentes cenários de alterações climáticas, no sentido de investigar se diferentes espécies apresentam diferentes capacidades de resposta a diferentes stressores, incluindo a presença de poluentes, e inferir no impacto que as alterações globais poderão vir a ter nessas espécies. Assim, um conjunto de ensaios laboratoriais foi efetuado para testar os efeitos da acidificação, alterações de salinidade e o aumento da temperatura, assim como o efeito combinado da exposição a arsénio, em diferentes espécies e estádios de vida de ostra (embriões, juvenis e adultos), através da análise da performance fisiológica, bioquímica e proteómica em resposta a estes stressores. O estudo focou-se na análise comparativa de espécies de ostra atualmente presentes em ecossistemas de zonas temperadas, C. angulata e C. gigas (Portugal); e subtropicais, C. brasiliana e C. gigas (Brasil). Através da análise comparativa das espécies C. angulata e C. gigas verificou-se que o desenvolvimento embrio-larvar da espécie C. angulata foi mais sensível a alterações de salinidade, temperatura e de arsénio (As) quando comparado com a espécie C. gigas. No estádio juvenil, foram também identificadas diferenças na performance de cada espécie aos efeitos da acidificação da água, tanto ao nível da resposta ao stresse oxidativo como ao nível de alterações no proteoma. Neste estádio de vida, os dados obtidos sugerem que a espécie C. angulata apresenta mecanismos que conferem maior plasticidade fenotípica em resposta a alterações do meio, que poderão conferir maior capacidade de resposta à acidificação do meio marinho. Contrariamente aos juvenis, os espécimes adultos de ambas as espécies apresentaram menor grau de resposta ao stresse oxidativo quando expostos aos mesmos stressores. Não obstante verificou-se que a capacidade de biomineralização foi potencialmente afetada nestes indivíduos quando expostos à acidificação. De um modo geral, os dados obtidos referentes aos juvenis e adultos sugerem que ambas as espécies apresentam capacidade para sobreviver à acidificação do meio aquático, embora através de mecanismos que acarretam custos energéticos assim como de capacidade de calcificação que poderão vir a ter impactos ao nível das populações. O estudo da resposta a alterações de salinidade revelou alterações relevantes ao nível metabólico, do stresse oxidativo e das reservas energéticas de espécimes adultos de C. angulata e C. gigas, sem diferenças a assinalar entre espécies. No compto geral, os dados obtidos para as espécies C. angulata e C. gigas sugerem que a fase de vida embrio-larval representa o estádio durante o qual as vantagens competitivas entre espécies são mais evidentes, sendo que durante este estádio de vida, populações da espécie C. angulata poderão vir a sofrer maiores impactos induzidos por alterações de salinidade, temperatura e contaminação por As, resultando na limitação do recrutamento de C. angulata a intervalos mais estreitos de condições abióticas. Através da análise comparativa das espécies C. brasiliana e C. gigas no Brasil, verificou-se que cada stressor (acidificação e aumento de temperatura) induziu diferentes estratégias de resposta por parte de cada espécie. As diferenças observadas foram mais evidentes nos juvenis, para os quais a espécie C. gigas apresentou melhor condição fisiológica em resposta à acidificação, enquanto a espécie C. brasiliana demonstrou melhor performance bioquímica em resposta ao aumento de temperatura. Espécimes adultos de ambos os taxa apresentaram menor susceptibilidade aos stressores testados, apesar de demonstrarem estratégias de resposta semelhantes à dos juvenis. No compto geral, verificou-se que ambas as espécies possuem mecanismos de resposta aos stressores investigados, embora os dados obtidos sugerem que a duração e intensidade dos fenómenos extremos de stresse abiótico terão uma influência fulcral na performance das espécies estudadas. Programa Doutoral em Biologia

La ostra de agua dulce Acostaea rivoli es una especie endémica de Colombia, que desempeña un papel ecológico relevante en el ecosistema acuático. El presente estudio se realizó en la cuenca del río Opia departamento del Tolima en los meses de septiembre y octubre de 2009, donde se establecieron 18 estaciones de muestreo, en cada una de las estaciones fueron empleados cuadrantes de 1m2 distribuidos en diez transectos longitudinales. Adicionalmente, fue evaluada la distribución vertical entre 1 y 3 m de profundidad. Paralelamente se evaluaron variables fisicoquímicas in situ y se tomaron muestras de agua para la determinación de 12 variables fisicoquímicas. Para evaluar la relación entre la especie y las variables fisicoquímicas se realizó un análisis de componentes principales y una correlación de Spearman. Fueron observados 303 organismos, donde la mayor densidad se presentó en la estación Lorencito con 6,67 ind/m2 y la menor densidad en las estaciones puente Doima, molino federal y quebrada Opia en donde no se registró ningún individuo. Con relación al perfil vertical la mayor densidad se presentó en el primer metro con 29,62 ind/m2 y la menor en el tercer metro con 4,50 ind/m2. Las variables fisicoquímicas que influyeron de forma significativa en la distribución y densidad de la población fueron la alcalinidad (r=0,698; p=0,001), dureza (r=0,650; p=0,004), pH (r=0,714; p=0,001), cloruros (r= -0,530; p=0,024), fosfatos (r= -0,603; p=0,008), nitratos (r= -0,490; p=0,039) y coliformes totales (r= -0,540; p=0,021). Estas variables podrían estar relacionados con los procesos de mineralización de la cuenca, que junto con un alto porcentaje de calcio, una buena oxigenación del agua y un sustrato adecuado estarían relacionados con la presencia de esta especie en la zona de estudio. The freshwater oyster (Acostaea rivoli) is an endemic Colombian species that plays an important ecological role in the aquatic ecosystem. The present study was performed in the Opia river basin, in the Tolima department. 18 sampling stations were evaluated during September and October of 2009. In each location quadrants of 1 m2 were distributed in ten longitudinal transects. Additionally, the vertical distribution was evaluated between 1 and 3 m deep. Parallelly, water samples were taken to analyzed 12 physicochemical variables, some of them were evaluated in situ and the others in the laboratory. In order to identify the relationships between the population and the physicochemical variables a principal component analysis and a Spearman correlation were performed. A total of 303 individuals were observed, the greatest density was recorded in the sampling site Lorencito with 6.67 ind/m2 and the lowest (0 ind/m2 ) was recorded in the sites Puente Doima, Molino el Federal and Quebrada Opia. As regards to the vertical profile, the highest density was registered in the first meter with 29.62 ind/m2 and the lowest in the third meter with just 4.50 ind/m2. In relation to the water parameters,variables such as: alkalinity (r=0.698; p=0.001), hardness (r=0.650; p=0.004), pH (r=0.714; p=0.001), chlorides (r= -0.530; p=0.024), phosphates (r= -0.603; p=0.008), nitrates (r= -0.490; p=0.039) and total coliforms (r= -0.540; p=0.021) were significantly correlated with population’s abundance and distribution. These variables could be related to mineralization processes in the basin, that combined with high values of calcium, high levels of water oxygen and proper habitats would allow this specie to inhabit the study area.

Resumen La ostra de agua dulce Acostaea rivoli es una especie endémica de Colombia, que desempeña un papel ecológico relevante en el ecosistema acuático. El presente estudio se realizó en la cuenca del río Opia departamento del Tolima en los meses de septiembre y octubre de 2009, donde se establecieron 18 estaciones de muestreo, en cada una de las estaciones fueron empleados cuadrantes de 1m2 distribuidos en diez transectos longitudinales. Adicionalmente, fue evaluada la distribución vertical entre 1 y 3 m de profundidad. Paralelamente se evaluaron variables fisicoquímicas in situ y se tomaron muestras de agua para la determinación de 12 variables fisicoquímicas. Para evaluar la relación entre la especie y las variables fisicoquímicas se realizó un análisis de componentes principales y una correlación de Spearman. Fueron observados 303 organismos, donde la mayor densidad se presentó en la estación Lorencito con 6,67 ind/m2 y la menor densidad en las estaciones puente Doima, molino federal y quebrada Opia en donde no se registró ningún individuo. Con relación al perfil vertical la mayor densidad se presentó en el primer metro con 29,62 ind/m2 y la menor en el tercer metro con 4,50 ind/m2. Las variables fisicoquímicas que influyeron de forma significativa en la distribución y densidad de la población fueron la alcalinidad (r=0,698; p=0,001), dureza (r=0,650; p=0,004), pH (r=0,714; p=0,001), cloruros (r= -0,530; p=0,024), fosfatos (r= -0,603; p=0,008), nitratos (r= -0,490; p=0,039) y coliformes totales (r= -0,540; p=0,021). Estas variables podrían estar relacionados con los procesos de mineralización de la cuenca, que junto con un alto porcentaje de calcio, una buena oxigenación del agua y un sustrato adecuado estarían relacionados con la presencia de esta especie en la zona de estudio. © 2017. Acad. Colomb. Cienc. Ex. Fis. Nat. Abstract The freshwater oyster (Acostaea rivoli) is an endemic Colombian species that plays an important ecological role in the aquatic ecosystem. The present study was performed in the Opia river basin, in the Tolima department. 18 sampling stations were evaluated during September and October of 2009. In each location quadrants of 1 m2 were distributed in ten longitudinal transects. Additionally, the vertical distribution was evaluated between 1 and 3 m deep. Parallelly, water samples were taken to analyzed 12 physicochemical variables, some of them were evaluated in situ and the others in the laboratory. In order to identify the relationships between the population and the physicochemical variables a principal component analysis and a Spearman correlation were performed. A total of 303 individuals were observed, the greatest density was recorded in the sampling site Lorencito with 6.67 ind/m2 and the lowest (0 ind/m2) was recorded in the sites Puente Doima, Molino el Federal and Quebrada Opia. As regards to the vertical profile, the highest density was registered in the first meter with 29.62 ind/m2 and the lowest in the third meter with just 4.50 ind/m2. In relation to the water parameters,variables such as: alkalinity (r=0.698; p=0.001), hardness (r=0.650; p=0.004), pH (r=0.714; p=0.001), chlorides (r= -0.530; p=0.024), phosphates (r= -0.603; p=0.008), nitrates (r= -0.490; p=0.039) and total coliforms (r= -0.540; p=0.021) were significantly correlated with population’s abundance and distribution. These variables could be related to mineralization processes in the basin, that combined with high values of calcium, high levels of water oxygen and proper habitats would allow this specie to inhabit the study area. © 2017. Acad. Colomb. Cienc. Ex. Fis. Nat.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2017. Contaminantes ambientais podem ser metabolizados por enzimas que compõem o sistema de biotransformação. Esse sistema é constituído de enzimas de fase I, como as enzimas da superfamília citocromo P450 (CYP), e de fase II, composta por enzimas de conjugação, como glutationas S-transferases (GSTs) e sulfotransferases (SULTs). Em vertebrados, CYPs da família 1 (CYP1) possuem como substratos os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs). Esses compostos podem induzir um aumento na atividade de CYP1 e a atividade dessas enzimas é usualmente quantificada através do ensaio de 7-etóxi-resorufina O-deetilase (EROD). Apesar da ausência da família gênica CYP1 em animais protostômios, genes semelhantes à CYP1 (CYP1-like) e a atividade EROD foram detectados nesses organismos. Nos bivalves Crassostrea brasiliana (= Crassostrea gasar) e Crassostrea gigas, há evidências da presença de genes CYP1-like, apesar da atividade EROD não ter sido detectada até o momento. No presente estudo, a atividade EROD em C. brasiliana e C. gigas foi investigada. Além disso, os níveis de transcritos de genes e atividades de enzimas de biotransformação em C. gigas expostas aos HPAs pireno e fluoreno foram estudados. Em C. brasiliana, a atividade EROD foi detectada na fração microssomal de brânquias e glândula digestiva. A temperatura e o pH do ensaio foram estabelecidos em 30 oC e 7,4, respetivamente. O Km aparente (Kmapp) da enzima foi 4,32 µM para as brânquias e 5,56 µM para a glândula digestiva. A velocidade máxima (Vmax) foi 337,3 fmol.min-1.mg de proteína-1 nas brânquias e 297,7 fmol.min-1.mg de proteína-1 na glândula digestiva. A atividade EROD foi inibida em ambos os tecidos pelo inibidor de CYP1 elipticina, sugerindo que uma enzima CYP1-like esteja catalisando a atividade EROD. Em C. gigas, a atividade EROD foi detectada apenas nas brânquias e a caracterização cinética demonstrou um Kmapp de 1,15 µM e Vmax de 229,2 fmol.min-1 mg.proteína-1. O inibidor clotrimazol e o surfactante Triton X-100 inibiram a atividade EROD em C. gigas. Os níveis de transcritos dos genes CYP1-like 1 e 2, analisados em conjunto, se correlacionaram positivamente com a atividade EROD das brânquias. Os modelos de homologia desses genes apresentaram o enovelamento característico de CYP e a ancoragem molecular demonstrou que essas estruturas possuem potencial para metabolizar o substrato 7-etóxi-resorufina. Os níveis de transcritos dos genes CYP1-like, CYP2-like, CYP2AU2, CYP356A1, CYP17a-like, GSTO-like, GSTmic-like e SULT-like e as atividades de enzimas de biotransformação EROD, GST total e GST microssomal (GSTmic) foram analisados nas brânquias de C. gigas expostas a 50 e 100 µg/L de pireno ou 100 e 200 µg/L de fluoreno por 24 e 96 h. A atividade GSTmic foi maior nas brânquias de ostras expostas a 100 µg/L de pireno em relação aos demais grupos de exposição ao pireno após 96 h. Os níveis de transcritos dos genes CYP2AU2, GSTO-like e SULT-like foram maiores nos animais expostos a 200 µg/L de fluoreno em relação aos demais grupos de exposição ao fluoreno após 24 h. Em conclusão, a atividade EROD é possivelmente catalisada por enzimas CYP1-like em ostras C. brasiliana e C. gigas e a exposição ao fluoreno alterou os níveis de transcritos de genes de biotransformação, entretanto, o mecanismo pelo qual o fluoreno alterou esses níveis permanece para ser elucidado. Abstract : Environmental contaminants can be metabolized by biotransformation enzymes. This system consists of phase I enzymes, as cytochrome P450 (CYP) superfamily, and phase II conjugating enzymes, as glutathione S-transferases (GSTs) and sulfotransferases (SULTs). In vertebrates, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are substrates of cytochrome P450 family 1 (CYP1) and can induce CYP1 enzyme activity, which is usually quantified as 7-ethoxyresorufin O-deethylase activity (EROD). CYP1 gene family is not present in protostomes organisms, although CYP1-like genes and EROD activity have been detected in these organisms. There are evidences of CYP1-like genes in the bivalves Crassostrea brasiliana (= Crassostrea gasar) and Crassostrea gigas, but no EROD activity has been detected in these organisms. The aim of this study was to investigate the presence of EROD activity in the bivalve mollusks C. brasiliana and C. gigas. In addition, transcript levels and activities of biotransformation enzymes were analyzed in oyster C. gigas exposed to the PAHs pyrene and fluorene. In C. brasiliana, EROD activity was detected in gills and digestive gland microsomal fraction. Temperature and pH for EROD assay were established as 30 oC and 7.4, respectively. EROD apparent Km (Kmapp) was 4.32 µM for gills and 5.56 µM for digestive gland. EROD Vmax was 337.3 fmol.min-1.mg of protein-1 in gills and 297.7 fmol.min-1.mg of protein-1 in digestive gland. CYP1 inhibitor ellipticine (ELP) inhibited EROD in both tissues, suggesting that a CYP1-like enzyme is catalyzing EROD activity. In C. gigas, EROD activity was detected only in gills. EROD kinetic characterization demonstrated a Kmapp of 1.15 µM and Vmax of 229.2 fmol.min-1 mg.protein-1. Clotrimazole and the surfactant Triton X-100 inhibited EROD activity in C. gigas. Transcript levels of CYP1-like 1 and 2, analyzed together, positively correlated with EROD activity observed in gills. Homology models of these genes exhibited a typical CYP fold and molecular docking showed that these structures have potential to metabolize the substrate 7-ethoxyresorufin. CYP1-like, CYP2-like, CYP2AU2, CYP356A1, CYP17a-like, GSTO-like, GSTmic-like and SULT-like genes transcript levels and EROD, total GST and microsomal GST (GSTmic) biotransformation enzymes activity were analyzed in gills of C. gigas exposed to 50 and 100 µg/L of pyrene and 100 and 200 µg/L of fluorene for 24 and 96 h. GSTmic activity were higher in gills of oyster exposed to 100 µg/L of pyrene compared to the remaining experimental groups after 96 h of exposure. CYP2AU2, GSTO-like and SULT-like transcript levels were higher in oysters exposed to 200 µg/L of fluorene compared to others groups exposed to fluorene after 24 h. In conclusion, EROD activity is possibly catalyzed by CYP1-like enzymes in oyster C. brasiliana and C. gigas and fluorene exposure have an effect upon biotransformation genes transcript levels, although the mechanism which fluorene affect transcript levels in C. gigas remains to be elucidated.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2017. Nrf2 (do inglês Nuclear factor erythroid 2-related factor 2) é um fator de transcrição essencial para a indução coordenada dos genes que codi-ficam enzimas de resposta ao estresse oxidativo, incluindo várias defe-sas antioxidantes e enzimas de biotransformação. Sua ação é dependente da ligação ao elemento de resposta antioxidante (ARE) na região promotora dos genes-alvo. A indução da via Nrf2/ARE oferece enorme potencial para a proteção antioxidante, no entanto, não há pesquisa sobre a ativação desta via em bivalves. Desta forma, o presente trabalho investigou a resposta antioxidante nas brânquias e glândula digestiva de ostras do Pacífico, Crassostrea gigas, tratadas com indutores da via Nrf2/ARE (curcumina ou tert-butilhidroquinona, tBHQ). Com a anotação do genoma da ostra Crassostrea gigas analisamos as regiões conservadas do gene do Nrf2 que revelou um domínio típico, a região cap 'n' colar. Os dados indicam que vários domínios, pertencentes ao modulador negativo do Nrf2 (Keap1, do inglês Kelch-like ECH-associated protein 1), também estão conservados em moluscos. Nossos estudos indicam que Nrf2 e Keap1 são conservados em ostras, pois o Keap1 apresentou um alto grau de homologia nas espécies selecionadas de moluscos e vertebrados, incluindo a presença de cisteínas redox-sensíveis que são cruciais para sua função. A análise filogenética agrupou tanto o Nrf2 quanto o Keap1 de C. gigas juntamente com outras sequências de moluscos, mas separadas de vertebrados e artrópodes. As ostras C. gigas foram expostas a 10 ou 30 µM de curcumina ou tBHQ, ativadores clássicos da via Nrf2/ARE, porém o número de cópias de mRNA de Nrf2 e Keap1 não foram modulados na brânquia. Estes dados indicam que estes compostos não modularam transcricionalmente Nrf2 ou Keap1. Apesar deste resultado negativo, a principal forma de ativação do Nrf2 envolve a oxidação das cisteínas sensíveis de seu modulador negativo (Keap1), permitindo seu acúmulo e translocação para o núcleo. Desta forma, ao analisarmos a resposta antioxidante, pode ser observada uma clara indução de defesas antioxidantes nas brânquias, as quais são sabidamente controladas pelo Nrf2. Noventa e seis horas após o início do tratamento, os animais expostos à curcumina (10 e 30 µM), tiveram um aumento nos níveis de ?-glutamil-L-cisteinilglicina (GSH), e na atividade glutationa redutase (GR), glutationa peroxidase (GPx), e glutationa S-transferase (GST). Por outro lado, a glândula digestiva não apresentou amplificação antio-xidante. Os níveis relativos de mRNA que codificam para a enzima glutamato-cisteína ligase, GR, MDR3 e GSTpi foram claramente indu-zidos pelo tratamento com curcumina (30 µM, 24 h). O pré-tratamento com curcumina durante 96 h aumentou a sobrevivência das ostras ao hidroperóxido de cumeno. Da mesma forma, ostras expostas à tBHQ por 96 h apresentaram um claro aumento nas defesas antioxidantes na brânquia e em menor intensidade na glândula digestiva. Esta resposta incluí aumento nos níveis de GSH, e na atividade GST, GPx e GR. Aumento na expressão do mRNA e proteína GR, também foram observadas após tratamento com tBHQ. Interessantemente, a diminuição na atividade GST, GPx e GR no início do tratamento (24 h) pode ser explicada pelo efeito inibitório da tBHQ ou de seus metabólitos. Esta conclusão é baseada na forte inibição in vitro da atividade GR, e em menor intensidade das atividades de GST e GPx. Apesar da ausência de aumento no mRNA do Nrf2, verificamos que: a) tanto o Nrf2 quanto o Keap1 são conservados filogeneticamente em bivalves; b) houve um aumento de defesas antioxidantes dependentes do Nrf2 após o tratamento com dois indutores clássicos do Nrf2 (curcumina ou tBHQ); c) houve uma clara modulação nos níveis de mRNA de vários genes alvos do Nrf2, e d) o tratamento com curcumina aumenta a resistência de ostras desafiadas com um oxidante. Em conjunto, estes dados indicam pela primeira vez a funcionalidade de Nrf2 em bivalves. Este trabalho apresenta novas informação sobre a via Nrf2/ARE em bivalves, as quais permitirão estudos mecanísticos relacionados as defesas antioxidantes e processos de biotransformação. Abstract : Nrf2 (Nuclear factor erythroid 2-related factor 2) is an essential transcription factor for the coordinated induction of genes encoding oxidative stress response enzymes, including several antioxidant defenses and biotransformation enzymes. Its action is dependent on the binding to the antioxidant response element (ARE) in the promoter region of the target genes. Induction of the Nrf2/ARE pathway offers enormous potential for antioxidant protection, however, there is no research on the activation of this pathway in bivalves. Thus, the present work investigated the antioxidant response in the gills and digestive gland of Pacific oysters, Crassostrea gigas, treated with inducers of the Nrf2/ARE pathway (curcumin or tert-butylhydroquinone, tBHQ). With the annotation of the genome of the Crassostrea gigas oyster we analyzed the conserved regions of the Nrf2 gene that revealed a typical domain, the cap 'n' colar region. The data indicate that several domains, belonging to the negative modulator of Nrf2 (Keap1), are also conserved in mollusks. Our studies indicate that Nrf2 and Keap1 are conserved in oysters because Keap1 presented a high degree of homology to selected species of molluscs and vertebrates, including the presence of redox-sensitive cysteines that are crucial for their function. Phylogenetic analysis grouped both the Nrf2 and Keap1 of C. gigas along with other mollusc sequences but separated from vertebrates and arthropods. C. gigas oysters were exposed to 10 or 30 µM curcumin or tBHQ, classical activators of the Nrf2 / ARE pathway, but the number of mRNA copies of Nrf2 and Keap1 were not modulated in the gill. These data indicate that these compounds do not transcriptally modulate Nrf2 or Keap1. Despite this negative result, the main form of activation of Nrf2 involves the oxidation of the sensitive cysteines of its negative modulator (Keap1), allowing its accumulation and translocation to the nucleus. Thus, when analyzing the antioxidant response, a clear induction of antioxidant defenses can be observed in the gills, which are known to be controlled by Nrf2. Ninety-six hours after initiation of treatment, animals exposed to curcumin (10 and 30 µM) had an increase in ?-glutamyl-L-cysteinyl glycine levels (GSH), and glutathione reductase (GR) activity, glutathione peroxidase (GPx), and glutathione S-transferase (GST). On the other hand, the digestive gland did not present antioxidant amplification. The relative levels of mRNA encoding glutamate-cysteine ligase, GR, MDR3 and GSTpi were clearly induced by curcumin treatment (30 µM, 24 h). Curcumin pre-treatment for 96 h increased oyster survival to cumene hydroperoxide. Likewise, oysters exposed to tBHQ for 96 h showed a clear increase in antioxidant defenses in the gill and lower intensity in the digestive gland. This response included increase in GSH levels, and in GST, GPx and GR activity. Increased mRNA and GR protein expression were also observed after treatment with tBHQ. Interestingly, the decrease in GST, GPx and GR activity at the start of treatment (24 h) may be explained by the inhibitory effect of tBHQ or its metabolites. This conclusion is based on the strong in vitro inhibition of GR activity, and on lower intensity of GST and GPx activity. Despite the lack of increase in the Nrf2 mRNA, we verified that: a) both Nrf2 and Keap1 are conserved phylogenetically in bivalves; B) there was a clear increase of Nrf2-dependent antioxidant defenses following treatment with two classic Nrf2 inducers (curcumin or tBHQ); C) there was a clear amplification at the mRNA level of various target genes of Nrf2, and d) curcumin treatment increased the resistance of oysters challenged with an oxidant. Together, these data indicate for the first time the functionality of Nrf2 in bivalves. This work presents new information about the Nrf2/ARE pathway in bivalves, which will allow mechanistic studies related to the antioxidant defenses and biotransformation processes.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2017. Animais estuarinos, como a ostra nativa Crassostrea brasiliana, possuem mecanismos fisiológicos e bioquímicos de adaptação e tolerância às variações de salinidade constantes destes ambientes. Além destas variações, os estuários estão sob constante pressão das atividades antrópicas e recebem diariamente resíduos constituídos por misturas complexas de compostos químicos, tais como os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos fenantreno, pireno e fluoreno. A ostra nativa C. brasiliana possui viabilidade zootécnica e econômica para cultivo, além de mostrar-se potencial espécie biomonitora em programas de monitoramento ambiental em estuários. Com o objetivo de avaliar respostas moleculares e bioquímicas de C. brasiliana expostas a diferentes HPAs e salinidades, e contribuir com a busca de novos biomarcadores de contaminação por HPAs, neste trabalho foi avaliada, em um primeiro experimento, a influência de três salinidades (35, 25 e 10 ?) nos níveis transcricionais de genes relacionados ao metabolismo de biotransformação, ao metabolismo de aminoácidos e ácidos graxos e de genes que codificam para enzimas antioxidantes, em brânquias de C. brasiliana expostas ao fenantreno (100 ?g.L-1). Genes de biotransformação de fase I (CYP2AU1 e CYP2-like1) e fase II (GSTm-like e GSTO-like) foram afetados principalmente pela exposição ao fenantreno e salinidade, respectivamente. Os resultados de interação entre os fatores salinidade e fenantreno nos genes CYP2-like2 e SULT-like sugerem que, em baixas salinidades, as ostras são mais susceptíveis aos efeitos do fenantreno em nível transcricional. O efeito da salinidade sobre os genes relacionados ao sistema de defesa antioxidante (CAT-like e SOD-like) e metabolismo de aminoácidos (GAD-like, GLYT-like, ARG-like e TAUT-like) sugere um importante papel desses genes na codificação de proteínas que envolvem proteção contra danos oxidativos e adaptações celulares à salinidade. Em um segundo experimento, foram avaliadas as respostas moleculares e de enzimas de biotransformação em brânquias de C. brasiliana expostas a duas concentrações de pireno (50 e 100 ?g.L-1) e fluoreno (100 e 200 ?g.L-1). A exposição ao pireno induziu significativamente a transcrição dos genes e atividade de enzimas de biotransformação de fase I e II: CYP1-like; CYP2-like, CYP356A1-like; CYP2AU1; GSTO-like; GSTm-like; SULT-like; atividade GSTm e EROD, ressaltando a importância desse processo em C. brasiliana. Em resposta à exposição ao fluoreno, houve o aumento da transcrição apenas do gene CYP2AU1. A maior quantidade de respostas encontradas no pireno comparadas ao fluoreno, pode estar relacionada à maior lipofilicidade do pireno, tendendo à maior interação hidrofóbica com as camadas lipídicas da membrana celular e do retículo endoplasmático, facilitando sua entrada. Em suma, este estudo mostra o envolvimento de genes e enzimas relacionados com o sistema de biotransformação de fase I e II de HPAs em ostras C. brasiliana e evidencia os efeitos da salinidade sobre a transcrição de genes do sistema antioxidante e do metabolismo de aminoácidos. Além disso, contribui na busca de novos biomarcadores de contaminação aquática por HPAs e sugere o uso do gene CYP2AU1 como potencial biomarcador molecular em ostras C. brasiliana expostas a estes compostos. Abstract : Estuarine animals, such as the oyster Crassostrea brasiliana, possess physiological and biochemical mechanisms of adaptation to tolerate constant salinity changes. These ecosystems are under constant pressure due to anthropogenic activities and receive high input of xenobiotics, including polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), such as phenanthrene, pyrene and fluorene. Oysters C. brasiliana show zootechnical and economical viability for aquaculture and are a potential biomonitoring species in environmental programs. The aim of this study was to evaluate biochemical and molecular responses in C. brasiliana exposed to different PAHs and salinities in order to search for new potential biomarkers of PAH contamination. In the first study, the transcriptional changes in gills of oysters exposed to phenanthrene (100 ?g.L-1) kept at three salinities (35, 25 e 10 ?) were evaluated. Phase I (CYP2AU1 e CYP2-like1) and phase II (GSTm-like e GSTO-like) biotransformation genes in gill of oysters were affected mainly by phenanthrene exposure and salinity, respectively. The interaction effects of salinity and phenanthrene upon CYP2-like2 and SULT-like genes suggest that at low salinity oysters were more responsive to the phenanthrene effects at the transcriptional level. Antioxidant defense metabolism (CAT-like e SOD-like) and amino acid metabolism (GAD-like, GLYT-like, ARG-like e TAUT-like) -related genes were responsive to salinity, suggesting an important role of these genes in codifying proteins involved in oxidative damage protection and salinity cellular adaptation. In a second study, molecular and enzymatic biotransformation responses were evaluated in gills of oysters exposed to pyrene (50 e 100 ?g.L-1) and fluorene (100 e 200 ?g.L-1). Pyrene exposure strongly induced CYP1-like; CYP2-like, CYP356A1-like; CYP2AU1; GSTO-like; GSTm-like; SULT-like gene transcription and GSTm and EROD activity, highlighting the importance of phase I and II biotransformation processes in C. brasiliana. Oysters exposed to fluorene showed an increase only in CYP2AU1 transcript levels. The highest amount of responses found in pyrene compared to fluorene exposure may be associated to the pyrene higher lipophilicity. The greater hydrophobic interaction between pyrene and lipid layers of the cell membrane and endoplasmic reticulum, facilitates its entry. Thereby, these studies show the involvement of genes and enzymes related to PAH phase I and II biotransformation system in C. brasiliana. In addition, they highlight the effects of salinity in the transcript levels of antioxidant and amino acid metabolism -related genes. They also contribute to the identification of new biomarkers of aquatic PAH contamination and suggests the use of CYP2AU1 gene as potential molecular biomarker in oysters, C. brasiliana, exposed to these compounds.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2017. O consumo e transporte de petróleo está diretamente ligado à contaminação ambiental por hidrocarbonetos em diversas regiões do mundo. Uma vez no ambiente aquático, o petróleo e seus derivados podem produzir alterações variadas nos organismos expostos, tais como alterações biológicas de caráter molecular, celular, fisiológico ou ecológico, resultando em efeitos danosos às comunidades naturais, incluindo os organismos destinados ao consumo humano. Desta forma, a investigação dessas alterações é urgente como forma preventiva e de avaliação de ambientes aquáticos contaminados. Nesse sentido, o presente trabalho teve como principais objetivos avaliar os efeitos no perfil de proteínas em ostras após exposição à fração de óleo diesel acomodada em água, buscar genes normalizadores em ostras expostas às diferentes condições experimentais e avaliar os efeitos da contaminação do derivado foto-oxidado de petróleo 6-hidroxicriseno em peixes Danio rerio. Para atingir esses objetivos, primeiramente, ostras do mangue Crassostrea brasiliana foram expostas à fração de óleo diesel acomodada em água durante 24h e 72h com intuito de identificar biomarcadores moleculares. Entre as 11 proteínas expressas diferencialmente, podemos destacar sete: citocromo P450 6A (CYP6A), NADPH citocromo P450 redutase (envolvidas no metabolismo lipídico / xenobiótico), alfa e beta tubulina (envolvidas na formação de fagossomo mediados por retículo endoplasmático - RE), tiorredoxina e proteína ubiquitina ligase E3 (envolvidas no processamento e degradação de proteínas no RE). A avaliação de respostas em compartimentos subcelulares mostrou-se bastante sensível e viável para estudos ecotoxicológicos, além de auxiliar na compreensão dos mecanismos que envolvem o RE frente à exposição. Esses dados indicam um papel promissor da avaliação do RE em programas de biomonitoramento ambiental. Entretanto, como muito pouco é conhecido sobre a biologia molecular de C. brasiliana, surgiu a necessidade de utilizar genes normalizadores ideais para diferentes condições experimentais para adequada análise da transcrição gênica. Neste trabalho foram identificados diferentes conjuntos de genes adequados para a normalização de dados de PCR quantitativa em tempo real (qRT-PCR) em cada desenho experimental testado. O gene anquirina teve maior estabilidade de transcrição e foi considerado candidato promissor como gene normalizador em estudos posteriores. Por fim, com o intuito de aumentar as informações sobre os efeitos de compostos foto-oxidados do petróleo, avaliou-se a exposição de embriões de D. rerio ao 6-hidroxicriseno. Foram observadas respostas dos genes relacionados com transportadores iônicos (nck1 e kchna), associadas à bioacumulação e deformidades cardiácas nos animais nas fases de desenvolvimento embrionário de 74 hpf de exposição. Abstract : The consumption and transportation of petroleum are directly linked to the contamination by hydrocarbons in many regions around the world. Once in the aquatic environment, petroleum and its derivatives can produce many alterations to exposed organisms such as biological, cellular, physiological or ecological biological alterations, resulting in harmful effects to natural communities including organisms destined for human consumption. Then, it is urgent the investigation of these impacts in an attempt to prevent and evaluate contaminated aquatic environments. In this context, the main goal of this work was to evaluate the effects of diesel oil water accommodated fraction on the proteomic profile in oysters, search for normalizing genes in oysters submitted to different experimental conditions, and evaluate the effects of photo-oxidized petroleum derivative 6-hydroxycrysene in D. rerio. In order to achieve these goals, firstly, the mangrove oyster C. brasiliana were exposed to diesel oil water accommodated fraction for 24h and 72h. Among the 11 differentially expressed proteins, we pointed out seven: cytochrome P450 6A (CYP6A), NADPH cytochrome P450 reductase (involved in lipid / xenobiotic metabolism), alpha and beta tubulin (involved in the formation of RE-mediated phagosome), tioredoxin containg-protein and ubiquitin ligase E3 protein (involved in the processing and degradation of proteins in RE). Subcellular compartments responses had shown to be sensitive and feasible for ecotoxicological studies, besides helping to understand the mechanisms that involve ER in relation to exposure. These data indicate a promising role for ER evaluation in environmental biomonitoring programs. However, few studies had focused on molecular biology of C. brasiliana, there is a necessity to use select normalizing genes ideal for different experimental conditions for adequate analysis of gene expression. In this work, different sets of genes suitable for the normalization of qRT-PCR data were identified in each experimental design tested. The ankyrin gene had greater transcriptional stability and was considered a promising candidate as a normalizing gene in later studies. Finally, in order to increase the information about the effects of photo-oxidized petroleum derivative compounds, the exposure by 6-hydroxychrisene in the embryonic development of D. rerio was evaluated. In summary, the responses of the genes related to the ionic transporters (nck1 and kchna), together with chemical aspects of bioaccumulation, have been shown to play an important role in the cardiac deformities generated during morphogenesis in the embryonic development stages in 74 hpf of exhibition.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2017. O estado de Santa Catarina é o maior produtor nacional de ostras e mexilhões cultivados, atividade econômica importante e que confere destaque ao estado. Os moluscos bivalves, através da filtração da água, tendem a acumular em seus tecidos, vírus e bactérias que estejam presentes na água de cultivo. Dentre as bactérias, a incidência de Escherichia coli em moluscos bivalves foi reportada em diversos estudos e cepas patogênicas foram relacionadas a casos de gastroenterites. O controle microbiológico adotado em diferentes países é a contagem de E. coli na água e/ou nos moluscos bivalves. Métodos convencionais para contagem de E. coli em alimentos são demorados e trabalhosos, tornando- se, desta forma, necessário o desenvolvimento de metodologias mais rápidas, que forneçam resultados sensíveis e robustos. No presente trabalho, uma metodologia para quantificação de E. coli em ostras utilizando qPCR foi desenvolvida. Sondas e iniciadores foram desenhados e amplificaram seletivamente DNA de E. coli. Os iniciadores e sondas demonstraram-se sensíveis e seletivos para a detecção de E. coli mesmo na presença de DNA proveniente da amostra. A eficiência, seletividade e o coeficiente de correlação das curvas padrão estão de acordo com as recomendações da literatura. O método desenvolvido foi comparado com um método dependente de cultivo na quantificação de E. coli em ostras naturalmente e artificialmente contaminadas e uma boa correlação foi encontrada entre os dois métodos. Além de estudos sobre a incidência de E. coli nos moluscos, informações acerca das características fenotípicas e genotípicas das cepas são consideradas de grande relevância. Cepas de E. coli isoladas de amostras de moluscos bivalves coletados em Santa Catarina, Brasil e na Baía de Cheesapeake, nos Estados Unidos, foram caracterizadas. Determinou-se o perfil de resistência a antimicrobianos, sorologia e tipagem molecular. Os resultados mostraram que dentre as 141 cepas estudadas, 19,9 % foram classificadas como multirresistentes e os antimicrobianos cefalotina (78 %), nitrofurantoina (21,3 %) e ampicilina (19,2 %) foram aqueles com maior porcentagem de resistência. Os sorogrupos predominantes foram: O8 (17 %), O6 (7 %), O21 (4 %) e seis sorogrupos (O6, O9, O25, O54, O88 e O113) foram encontrados em cepas provenientes de ambos os países. Os resultados da eletroforese em campo pulsado revelaram uma grande variação genética entre as cepas, entretanto, considerando 80 % de similaridade, seis clusters continham cepas do Brasil e dos Estados Unidas juntos, mostrando uma relação genética entre as cepas. Abstract : The state of Santa Catarina is the major national producer of oysters and mussels, this in an important economic activity that gives a special position for the state. Bivalve mollusks, through their filter-feedind, tend to accumulate in their tissues, viruses and bacteria that are present in the surround water. Among the bacteria, the incidence of E. coli in bivalve mollusks was reported in several studies and pathogenic strains were related to cases of gastroenteritis. The microbiological control in different countries is the E. coli counts in water and/or bivalve mollusks. Conventional methods for E. coli counts in food are time-consuming and labour, which emphasizes the necessary of develop faster methodologies that provide sensitive and robust results. In the present work, a methodology for quantification of E. coli in oysters using qPCR was developed. Probe and primers were grown and selectively amplified E. coli DNA. The designed primers and probe set enable selective and sensitive detection of E. coli even in the presence of DNA from oyster samples. The efficiency, good correlation and selectivity results found are in agreement with the recommendations by the literature. The developed method was compared with a culture-dependent method for quantification of E. coli in naturally and artificially contaminated oysters. A good correlation was found between the two methods. In addition of studies on the incidence of E. coli in mollusks, information about the phenotypic and genotypic characteristics of the strains is considered of great relevance. E. coli strains isolated from samples of bivalve mollusks collected in Santa Catarina, Brazil and in Cheesapeake Bay, United States, were characterized. The antimicrobial resistance profile, serology and molecular typing was determined. The results showed that among the 141 isolates, 19.9 % were classified as multi-drug resistant (MDR) and resistance was most frequently observed in cephalothin (78 %), nitrofurantoin (21.3 %) and ampicillin (19.2 %). The predominant serogroups were: O8 (17 %), O6 (7 %), O21 (4 %) and six serogroups (O6, O9, O25, O54, O88 and O113) were shared by isolates from Brazil and USA. The results of pulsed field electrophoresis revealed a great genetic variation among the strains. However, considering 80% of similarity, six clusters contained Brazil and the United isolates, reflecting a genetic relatedness among them.

El presente capítulo resume el estado de arte sobre epibiosis y bioerosión en el Mar Argentino, a partir de las contribuciones producidas por los integrantes del Laboratorio de Bentos del Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP). En particular, se abordan los aspectos teóricos y los antecedentes sobre el asentamiento y desarrollo de comunidades epibiontes, el rol de los principales invertebrados bentónicos del Mar Argentino en dicho asentamiento, y se mencionan los aspectos fundamentales que explican de qué manera la composición y la diversidad de dichas comunidades constituyen una fuente de información útil para conocer cambios en su estructura a través del tiempo. Se plantea que además del estudio de los epibiontes, el reconocimiento de trazas bioerosivas realizadas por organismos perforantes e incrustantes es una herramienta útil para la caracterización de una comunidad de fondos duros. El objetivo de este capítulo es resaltar el papel de la fauna bentónica como generadora de sustratos disponibles para el asentamiento de invertebrados, considerando principalmente especies de interés comercial del Mar Argentino y su posible contribución al aumento de la riqueza específica local. En los fondos marinos, una variedad de algas, bacterias, hongos e invertebrados bentónicos incrustan, se adhieren o perforan esqueletos de organismos vivos o muertos y superficies inorgánicas. Algunos ejemplos de sustratos colonizados por dichos organismos son plantas vasculares, valvas de moluscos, caparazones de crustáceos, esponjas, corales, ascidias, equinoideos, ofiuroideos, clastos, bolsas plásticas, madera, cascos de barcos, arrecifes artificiales utilizados en pesquerías comerciales o defensa costera. Esta variedad de la naturaleza del sustrato y de los organismos colonizadores estimuló a biólogos de diferentes disciplinas - mencionados como neontólogos- y posteriormente a paleontólogos, a definir diversos conceptos cuyo uso suele ser confuso y en muchos casos erróneo. Los sustratos colonizables pueden agruparse en tres tipos: a) sustratos inorgánicos, b) sustratos orgánicos muertos y c) sustratos orgánicos vivos al momento de la colonización. La colonización de cada uno de estos tipos de sustratos permite realizar interpretaciones diferentes sobre las interacciones biológicas existentes, o la ausencia de ellas, entre el organismo colonizador y el sustrato duro colonizado y sus interacciones con el ambiente biótico. Published

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Gradução em Aquicultura, Florianópolis, 2017. O cultivo de moluscos marinhos em Santa Catarina se destaca no Brasil como uma atividade aquícola altamente produtiva, proporcionando geração de emprego e renda para a população do Estado. No entanto, pouco se conhece sobre os riscos presentes no ambiente de trabalho e seu impacto na atividade. Desta forma, este estudo avaliou o ambiente de trabalho no cultivo da ostra Crassostrea gigas, com o intuito de estabelecer diretrizes para o setor produtivo do ponto de vista do gerenciamento de riscos, com ênfase nos aspectos ocupacionais. Foram identificados e avaliados os principais riscos presentes em diversas etapas da atividade e selecionados os pontos críticos que podem contribuir para a ocorrência de acidentes e doenças ocupacionais. Foram realizadas observação sistemática ?in loco?, questionários e entrevistas, termografia, e ferramentas de análise postural pelos métodos ?Rapid Entire Body Assessment? (REBA), ?Strain Index? e sensor de movimentos. As atividades executadas pelos trabalhadores dos cultivos envolvem esforço físico prolongado, posturas inadequadas, excesso de carga estática e dinâmica e atividades repetitivas. Muitos trabalhadores apresentam dores musculares nos ombros, lombar, mãos, punhos e dedos. Riscos de choque elétrico, radiação solar e afogamentos foram identificados e devem ser considerados como prioridade de prevenção e controle. A maioria dos trabalhadores são homens e com baixo grau de escolaridade, sendo que os acidentes mais comuns são cortes, choques e quedas, além de relatos de dores musculares e alergias. Os maricultores mostraram desconhecer os riscos ocupacionais presentes nas fazendas de cultivo, assim como subestimar os acidentes sofridos durante a execução das tarefas. Este trabalho visou contribuir para o desenvolvimento da gestão de processos e tomada de decisões no cultivo de ostras, com uma melhoria e eficiência dos processos produtivos e no ambiente de trabalho de ostreiculturas catarinenses. Abstract : The marine mollusks culture is a very important activity for Santa Catarina, Brazil, generating employment and income for local people. However, little is known about the accident risks to which workers are exposed in this environment. Thus, this study evaluated the workplace in the oyster culture Crassostrea gigas, aiming to establish guidelines for the productive sector from the point of view of risk management, with emphasis on occupational aspects.This study identified and suggested improvements to the main risks in the activities performed on mollusks farms.The critical points that could contribute to the occurrence of occupational accidents and diseases were selected. We performed observations in loco, questionnaires and interviews, analysis by infrared thermography and postural assessments by Rapid Entire Body Assessment, Strain Index and Motion capture sensor methods. The performed activities involved prolonged physical effort, awkward postures, excessive static and dynamic loads, activities and repetitive movements. Many workers have muscle pains in their shoulders, lower back, hands, wrists and fingers. Electrical shock, solar radiation and drowning were identified, and should be considered as a priority for prevention and control. Results also showed that most of the participants are men with low educational level and that the most common accidents are cuts, shocks and falls, and also has reports of muscle pain and allergies. The workers showed ignore the occupational risks present in cultivation farms, as well as underestimate the accidents suffered during the execution of tasks. This work aimed to contribute to the development of process management and decision making in oyster culture, with an improvement in the work environment of Santa Catarina oyster culture.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos, Florianópolis, 2017. Ostras (Crassostrea gigas) são ricas em compostos orgânicos voláteis, que compõem o aroma característico do produto, e quando processadas parte desses compostos aromáticos são transferidos para água de cozimento. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o processo de pervaporação para recuperar os compostos orgânicos voláteis da água de cozimento de ostras. Bateladas de 7 kg de ostras frescas foram limpas em água corrente, em seguida cozidas a 100 °C por 10 minutos, para a abertura das conchas. A água do cozimento foi resfriada à temperatura ambiente, e congelada a 18 °C até a determinação dos compostos orgânicos voláteis por microextração em fase sólida do headspace (HS-SPME) e dos ensaios de pervaporação. Para o HS-SPME foi avaliado o melhor recobrimento da fibra e foram otimizadas, a partir de um planejamento experimental fatorial rotacional completo 2³ e quadruplicata no ponto central, a temperatura de extração, o tempo de extração e o tempo de dessorção. A fibra recoberta com polidimetilsiloxano e carboxeno (PDMS/CAR) apresentou o melhor desempenho com relação a área total dos compostos extraídos. A temperatura de extração e tempo de dessorção apresentaram efeito significativo negativo (p

Semi-intensive fish culture developed in earthen ponds is the main type of production system used nowadays in Portugal. One way to decrease its environmental footprint, by reducing waste effluents, is to integrate the production of organic and inorganic extractive species such as bivalves and seaweeds directly in the ponds, under the principles of IMTA. Furthermore, the total biomass of product at one site is increased and diversification of products is accomplished, promoting higher profitability. There are needs for integrated knowledge concerning the efficiency of nutrient use, such as fatty acids. The present study refers to a pond where the only input was the feed, for the culture of three fish species (Argyrosomus regius, Diplodus sargus, Mugil cephalus) along with oysters (Crassostrea gigas) and sea lettuce (Ulva flexuosa). Additionally, natural occurring organisms in the ponds were sampled, such as phytoplankton, suspended particulate organic matter, zooplankton, polychaetas and other two macroalgal species, Ulva intestinalis and Rhizoclonium riparium. The main objective of the work was to identify food sources used by heterotrophic species present in the ponds using fatty acids as trophic markers. Three configurations (treatments) were tested, one comprised only the culture of fish and oysters, another comprised only fish and algae, while the last comprised all species cultured together. Profiles from each heterotrophic species across treatments were compared, and their differences evaluated to identify possible variations in feeding sources across treatments. Polychaetes showed dietary tracers of the commercial feed, macroalgae, sediment and additionally is suggested the ability to biosynthesize C20:2ω6 from Linoleic Acid. In zooplankton, the dietary tracers found reflect a consumption of phytoplankton, suspended matter and bacteria, while the higher levels of DHA and EPA could be linked with a higher accumulation of PUFA with decreasing temperatures. Oysters reflected trophic markers of phytoplankton, suspended matter, zooplankton and bacteria, while higher levels of ARA, DHA and EPA than those found in their food sources confirm that these fatty acids accumulate in oyster tissues. In addition, ARA and EPA could be a product of biosynthesis form shorter PUFA ω6 and PUFA ω3, respectively. All three fish species reflected the feed dietary tracers to a great extent. While meagre and white seabream consumed the commercial feed predominantly, the higher dispersion of mullet samples might suggest the consumption of additional dietary items (such as phytoplankton, suspended matter, zooplankton, sediment and polychaetas. Additionally, all species reflected higher percentages of ARA and EPA, but especially DHA, than those found in the feed, indicating their ability to accumulate these fatty acids in their tissue. In mullet, might also exist an ability to synthesize PUFA from shorter fatty acids. Overall, this study permitted a characterization of trophic interconnections of nutrients, such as fatty acids, from the feed and lower trophic level organisms to all potential consumers present in the culture ponds. A produção semi-intensiva de peixe em tanques de terra é o principal tipo de cultivo praticado em Portugal. Uma das maneiras de reduzir a pegada ecológica do sistema, através da redução dos seus efluentes, passa pela introdução de espécies extrativas orgânicas e inorgânicas, tais como bivalves e algas, diretamente nos tanques de terra, seguindo as práticas da aquacultura multi-trófica integrada. Adicionalmente, o total de biomassa produzido no mesmo local é aumentado e consegue-se uma diversificação de produtos, promovendo maiores retornos económicos. Existe, no entanto, a necessidade de detalhar o conhecimento referente a eficiência do uso de nutrientes, tais como os ácidos gordos. Este estudo refere-se por isso a uma produção em tanques de terra, no qual o único input foi uma ração comercial, para o cultivo de três espécies de peixe (Argyrosomus regius, Diplodus sargus, Mugil cephalus) em conjunto com ostras (Crassostrea gigas) e alface-do-mar (Ulva flexuosa). Foram também amostrados organismos presentes naturalmente nos tanques de terra, tais como fitoplâncton, material particulado em suspensão, zooplâncton, poliquetas e outras duas espécies de algas, Ulva intestinalis e Rhizoclonium riparium. O objectivo principal do trabalho foi identificar as fontes de alimento das espécies heterotróficas presentes nos tanques de terra utilizando ácidos gordos para rastreabilidade das suas dietas. Três configurações (tratamentos) foram testadas, no primeiro apenas se procedeu ao cultivo de peixe e ostras, no segundo apenas peixe e algas, enquanto no terceiro todas as espécies foram cultivadas em conjunto. Os perfis de cada espécie heterotrófica nos diferentes tratamentos foram comparados, e as suas diferenças avaliadas de modo a identificar possíveis variações nas fontes de alimento entre tratamentos. Os poliquetas apresentaram ácidos gordos característicos da ração comercial, das algas e do sedimento. Os resultados sugerem também uma possível habilidade dos poliquetas para biossíntese de C20:2ω6 através do ácido Linoleico. O zooplâncton refletiu ácidos gordos característicos do fitoplâncton, do material particulado em suspensão e de bactérias, enquanto os níveis elevados de DHA e EPA sugerem uma maior acumulação de ácidos gordos polinsaturados com a descida das temperaturas. As ostras refletiram ácidos gordos característicos do fitoplâncton, do material particulado em suspensão, do zooplâncton e de bactérias, enquanto os níveis mais elevados de ARA, DHA e EPA comparativamente com essas possíveis fontes de alimento confirma a sua favorável acumulação nos tecidos das ostras. Além disso, ARA e EPA podem ser um produto da biossíntese de ácidos gordos polinsaturados ω6 e ω3. As três espécies de peixe refletiram os ácidos gordos característicos da ração em grande medida. Enquanto a corvina e o sargo consumiram apenas a ração, a maior dispersão das amostras na tainha sugere o consumo adicional de outras fontes de alimento, tais como o fitoplâncton, o material particulado em suspensão, o zooplâncton, o sedimento e os poliquetas. As três espécies de peixe refletiram maiores percentagens de ARA, EPA e especialmente DHA, em comparação com a ração, indicando a habilidade para acumular estes ácidos gordos nos seus músculos. Na tainha, pode também existir a habilidade para biossíntese de ácidos gordos polinsaturados através de ácidos gordos de menor cadeia. Em termos gerais, este estudo permitiu a caracterização das interconexões de nutrientes, tais como os ácidos gordos, desde a ração e dos organismos de baixo nível trófico até a todos os potenciais consumidores presentes no sistema de cultivo em tanques de terra.

El presente trabajo describe la metodología empleada para el cultivo de la ostra del Pacífico Crassostrea gigas en un vivero artesanal, en el Centro Acuícola La Arena, Casma. Se utilizó reproductores en fase intermedia de madurez gonádica procedentes de líneas de cultivo del Centro Acuícola. El acondicionamiento se realizó en tanques de fibra de vidrio de 1000 L, con agua de mar sin filtrar a una temperatura de 27 ± 0,9 oC; adicionalmente se les alimentó con fécula de maíz y microalgas obtenidas en el lugar y cultivadas al aire libre. El desove se indujo para un grupo sólo por estimulación térmica (30 a 31 oC) y para el otro se añadió además peróxido de hidrógeno, a lo cual se presentaron respuestas diferentes. A los 20 minutos después de la fertilización se observó, en el 100% de huevos fecundados, el cuerpo polar definido y a las 24 horas las larvas veliger. Las larvas alcanzaron el estado de pediveliger luego de 20 días de cultivo, con tallas promedios de 237 ± 10 µm. Para la fijación de las larvas se utilizó conchuela molida (300 µm), plástico negro lijado y valvas de ostras. A los 33 días se obtuvieron semillas con tallas medias de 1262 ± 204 µm las que fueron colocadas en pearl net para su desarrollo en el mar. A los 30 días de la siembra en el mar, la talla promedio de las postlarvas alcanzó los 13,4 ± 3,4 mm. El trabajo muestra las ventajas de la metodología descrita en la producción masiva de semillas en un vivero artesanal.

A ostra (Crassostrea spp.) é o terceiro molusco mais produzido em território nacional e assume uma importância não só económica e gastronómica, mas também nutricional. O estuário do Sado é conhecido como local de excelência para o desenvolvimento da ostra, porém, apesar de ser legalmente protegido sofre de uma elevada ação antropogénica. Dada a sua natureza filtradora, as ostras têm maior tendência a acumular compostos, como metais pesados, nos seus tecidos moles o que, aliado à industrialização do estuário, pode constituir um problema de segurança alimentar. Com a colaboração de produtores locais de ostra portuguesa e do Pacífico, realizou-se uma avaliação preliminar da qualidade, segurança e perfil nutricional da fração edível destas espécies. Dos índices de qualidade calculados, o AFNOR indicou estatuto “especial”, ou seja, elevado valor comercial em todas as amostras. O STI determinou contaminação intermédia em apenas duas amostras (BN e HP) e pouca ou nenhuma nas restantes. De um ponto de vista nutricional, todas as amostras analisadas são ricas em ferro e zinco, e são fonte de cálcio e de potássio, enquanto que apenas a amostra proveniente do banco natural é rica em cálcio. Dado o elevado espessamento da concha desta amostra, deduz-se que a acumulação de cálcio na concha provocada por compostos contaminantes também tenha reflexão na fração edível da ostra. Apesar do seu bom conteúdo mineral, as amostras com maiores teores também foram as que registaram um maior teor de cádmio (HP, BN, HPSM), tendo uma delas ultrapassado ligeiramente o limite legal imposto pela UE para a comercialização de bivalves (1,1 mg/kg). Contudo, estes teores são apenas nocivos se forem ingeridas quantidades consideráveis por semana (≈ 136 g/14 ostras da amostra mais contaminada, por uma pessoa de 60 kg). A composição química e mineral das ostras selvagens distingue-se das ostras cultivadas em aquacultura. Conclui-se que a ostra do Sado tem, de um modo geral, relativamente boa qualidade para os produtores e consumidores, mostrando rica composição química e mineral com elevados teores de proteína e baixos teores de gordura e glicogénio, provando ser uma boa aposta, não só do ponto de vista nutricional como gastronómico.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-06-20T13:41:33Z No. of bitstreams: 1 Fernanda de Freitas Virginio Nunes.pdf: 3220883 bytes, checksum: fb9dac6e319ac0ff1c8261e5d0d03583 (MD5) Made available in DSpace on 2018-06-20T13:41:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda de Freitas Virginio Nunes.pdf: 3220883 bytes, checksum: fb9dac6e319ac0ff1c8261e5d0d03583 (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES The monitoring and quality control of the aquatic environment and the evaluation of the health of oysters produced are fundamental to a safe and sustainable production of these bivalves. This study aimed to describe the microbiological profile, parasitological and toxicological and histopathological changes of Crassostrea rhizophora e produced in the Marine Extractive Reserve Bay Iguape-BA. We collected 600 species of oyster and 120 samples of water from November 2013 to November 2015. The results showed that the oysters were satisfactory sanitary quality according to Brazilian and international laws. In the determination of toxic metals in the specimens there was contamination of 6.67% for lead and 13.33% for cadmium being associated with this rainfall peaks. Were identified bacteria, protozoa and metazoan, but no notifiable and that showed no significant damage to bivalves. It is concluded that the oysters grown in RESEX Iguape Bay have good general health and microbiological quality and satisfactory parasite. In addition, histopathological changes observed no significant dimensions for the characterization of the lesion confirming the good health of oysters. It emphasizes the need management strategies, monitoring and quality control continuous, to reduce microbiological, parasitological and chemical contamination, supervision to prevent new pollution sources, and the inclusion of maximum limits for toxic metals and parasites to establish mandatory reporting on health programs mollusc order to maintain the safety of oysters for consumption, strengthening the safe and sustainable production of native oysters and ensure food and nutrition security of consumer. O monitoramento e controle da qualidade do ambiente aquático e a avaliação da saúde das ostras produzidas são fundamentais para uma produção segura e sustentável desses bivalves. O presente trabalho objetivou estabelecer o perfil microbiológico, parasitológico e toxicológico e as alterações histopatológicas de ostras Crassostrea rhizophorae produzidas na Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape-Bahia. Foram coletadas 600 espécimes de ostra e 120 amostras de água dos viveiros entre novembro de 2013 a novembro de 2015. Os resultados demonstraram que as ostras apresentaram qualidade microbiológica satisfatória conforme as legislações brasileira e internacional. Na determinação de metais tóxicos nos espécimes observou-se contaminação em 6,67% das amostras para chumbo e 13,33% para cádmio sendo este dado associado aos picos pluviométricos. Foram identificados bactérias, protozoários e metazoários, porém nenhum de notificação obrigatória e que não apresentaram danos significativos ao organismo dos bivalves. Conclui-se que as ostras cultivadas na RESEX Marinha Baía do Iguape apresentam bom estado geral de saúde e qualidade microbiológica e parasitária satisfatórias. Além disso, as alterações histopatológicas observadas não apresentam dimensões significativas para caracterização de lesões confirmando a boa saúde das ostras. Ressalta-se a necessidade da adoção de estratégias de manejo, monitoramento e controle de qualidade contínuos, com o fim de reduzir contaminações microbiológicas, parasitológicas e químicas, de fiscalização para evitar que novas fontes de contaminação surjam, bem como a inclusão de limites máximos para metais tóxicos e da determinação de parasitos de notificação obrigatória nos programas de sanidade de moluscos bivalves de forma a manter a inocuidade das ostras destinadas ao consumo, fortalecendo a produção segura e sustentável de ostras nativas e garantir a segurança do consumidor.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-11-01T12:22:04Z No. of bitstreams: 1 Izabel Cristina da Silva Almeida Funo.pdf: 3957187 bytes, checksum: 43e9590f401b0f3753de80740bfee8f0 (MD5) Made available in DSpace on 2017-11-01T12:22:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Izabel Cristina da Silva Almeida Funo.pdf: 3957187 bytes, checksum: 43e9590f401b0f3753de80740bfee8f0 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 This thesis evaluated productive and biological parameters of the native oyster on Maranhão Island to contribute to the improvement of cultivation methods suitable to the region’s environmental characteristics. To attain this objective, three experiments were conducted which evaluated the efficiency of capturing oyster spats in artificial collectors (experiment II); the growth and the survival of the oyster Crassostrea gasar, exposed to different salinity levels (experiment I) and submitted to different cultivation systems (experiment III). The most important results in this study demonstrate that the C. gasar species is resistant to a wide range of salinity, and can be cultivated in marine regions with salinity from 30-35, and in estuaries in which the salinity is not equal to or lower than 5. It was found that the spat capture of the oysters was significantly influenced by the type of collector, location and period of collection (P0.05 Student t test). The months with greater rainfall, concentration of particulate inorganic matter, food availability (particulate organic material and chlorophyl a) and with lower salinity and temperature had better oyster growth. On the other hand, there was a greater agglomeration of organisms undesirable to cultivation at this time, which were associated to the lower survival rate registered in this period. A presente tese visou avaliar parâmetros produtivos e biológicos da ostra nativa na ilha do Maranhão, a fim de contribuir com o aprimoramento de metodologias de cultivo adequadas às características ambientais da região. Para atingir esse objetivo, foram desenvolvidos três experimentos, os quais avaliaram a eficácia da captação de semente de ostras em coletores artificiais (experimento II); o crescimento e a sobrevivência da ostra Crassostrea gasar, exposta a diferentes níveis de salinidades (experimento I) e submetida a diferentes sistemas de cultivo (experimento III). Os resultados mais relevantes neste estudo demonstram que a espécie C. gasar é resistente a uma ampla faixa de salinidade, podendo ser cultivada em áreas marinhas com salinidades entre 30 e 35, como também em áreas estuarinas nas quais a salinidade da água não apresente valores iguais ou inferiores a 5. Verificou-se que a captação de sementes de ostras foi influenciada significativamente pelo tipo de coletor, local e período de coleta (P0,05, teste t de Student). Os meses com maior intensidade pluviométrica, concentração de material particulado inorgânico, disponibilidade de alimento (material particulado orgânico e clorofila a) e com menor salinidade e temperatura favoreceram o crescimento das ostras. Por outro lado, resultaram em maior aglomeração de organismos indesejáveis ao cultivo, os quais foram associados à menor sobrevivência registrada nesse período.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2016. A ostra perlífera Pteria hirundo possui um grande potencial para a aquicultura nacional, pois além de apresentar potencialidade para o consumo, essa espécie possui a capacidade de produzir pérolas. Apesar do seu potencial para cultivo, pouco ainda se conhece a respeito da sua fisiologia e sistema imune. O presente estudo teve por objetivo identificar e caracterizar morfológica e ultraestruturalmente os hemócitos de P. hirundo, bem como identificar as populações hemocitárias e avaliar algumas respostas celulares e humorais de defesa frente a uma infecção bacteriana. Três populações de hemócitos foram encontradas: hemócitos hialinos (HH), hemócitos granulares (HG) e células blásticas (CB). A população mais abundante na circulação foi a de HH (88,2%), que se caracterizaram pela presença de poucos a nenhum grânulo em seu citoplasma, seguida pelos HG (9,4%) com muitos grânulos grandes e elétron-lúcidos no citosol, e as CB (2,4%) que foram os menores hemócitos e se caracterizaram por possuir forma esférica e uma alta razão núcleo-citoplasma. Três diferentes subpopulações de HH foram identificadas (HH-1, HH-2 e HH-3), apresentando diferenças quanto ao tamanho celular e à complexidade interna. Os hemócitos apresentaram uma elevada capacidade fagocítica ex vivo de partículas inertes (38,5% dos hemócitos avaliados). Além disso, essas células mostraram-se aptas a produzir moléculas microbicidas como as espécies reativas de oxigênio (ERO), porém esta produção não foi induzida por lipopolissacarídeos (LPS) bacterianos. Os principais produtores deste composto microbicida foram os HH-1, HG e HH-3. A presença de moléculas aglutinantes na hemolinfa de ostras previamente desafiadas com a Vibrio alginolyticus foi demonstrada por meio da aglutinação in vitro de bactérias marinhas Vibrio harveyi e V. alginolyticus (título aglutinante 256× e 1024×, respectivamente). Contudo, as bactérias marinhas Gram-positivas, Mycobacterium maritypicum e Corynebacterium stationis não foram aglutinadas. O número total de hemócitos circulantes (THC) nas ostras sadias foi de 8,53 ± 4,27×106 células/mL, no entanto 24 h após infecção com V. alginolyticus (ou injeção com salina), o hemograma caiu pela metade. A caracterização ultraestrutural e funcional dos hemócitos de P. hirundo abre perspectivas para estudos visando à prevenção e ao controle de enfermidades em pterídeos com interesse aquícola. Abstract : The pearl oyster Pteria hirundo (Pteridae family) has a great potential in national aquaculture due to its gastronomic appeal and to its capacity to produce pearls. Despite of its economic importance, little is known about its physiology and immune system. Thus, the aim of the present study was to identify and characterize at morphological and ultrastructural levels the hemocytes of P. hirundo, as well to identify its hemocyte populations and evaluate some cellular and humoral defenses in response to a bacterial infection. Three main hemocyte populations were recognized, represented by hyaline hemocytes (HH), granular hemocytes (GH) and blast cells (BC). The most abundant population comprised the hyaline hemocytes (88.2%) which were characterized by the presence few or no granules in the cytoplasm, followed by the granular hemocytes (9.4%) which have a great number of large electron lucid granules, and blast cells (2.4%) which were the smallest hemocytes, showing a spherical format and a high nucleus/cytoplasm ratio. Three different subpopulations of HH were identified (HH-1, HH-2 and HH-3), showing differences in terms of cellular volume and internal complexity. The hemocytes showed an elevated phagocytic capacity ex-vivo for inert particles (38.5% of the evaluated hemocytes). Besides, these cells are able to produce microbicidal molecules, such as reactive oxygen species (ROS), but the production of these molecules were not induced by bacterial lipopolysaccharides (LPS). The main ROS-producing cells were the HH-1, GH and HH-3. The presence of agglutinating molecules in the hemolymph of pearl oysters pre-challenged with the Gram-negative Vibrio alginolyticus was demonstrated by the in vitro agglutination of marine Vibrio species, V. harveyi and V. alginolyticus (agglutinating title of 256× and 1024×, respectively). However, the marine Gram-positive bacteria Mycobacterium maritypicum and Corynebacterium stationis were not agglutinated by the oyster hemolymph. The total count of circulating hemocytes in apparently healthy animals was 8.53 ± 4.27×106 cells/mL, but after an experimental injection of a bacterial solution (V. alginolyticus) or saline, the number of hemocytes significantly dropped (2×). In conclusion, the hemolymph of P. hirundo contains the typical hemocyte types found in bivalves and the ultrastructural and functional characterization of these cells represents a pioneering study that opens new perspectives for a better understanding of the immune reactions of this pearl oyster, aiming the prevention and control of infectious diseases in pteridean species of aquaculture importance.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2016. Vibrio vulnificus é um habitante natural de ambientes marinhos que pode infectar seres humanos através de ferimentos na pele ou pelo consumo de frutos do mar, especialmente ostras consumidas cruas ou mal cozidas. A bactéria pode atravessar a barreira intestinal e alcançar a corrente sanguínea causando septicemia, que pode levar à morte. A hipótese científica deste estudo foi a de que existem cepas potencialmente patogênicas de V. vulnificus, identificadas pelo gene vcgC, nas ostras produzidas no litoral de Santa Catarina. Os objetivos desta tese foram verificar a ocorrência cepas de V. vulnificus com potencial patogenicidade em ostras (Crassostrea gigas) produzidas em Santa Catarina; realizar estudo retrospectivo inédito sobre presença de V. vulnificus e de V. parahaemolyticus na América do Sul; e comparar a performance dos meios de cultivo microbiológico mais comuns para detecção de V. vulnificus quanto a sua capacidade de isolamento e enumeração. A hipótese foi confirmada na análise das amostras coletadas, com confirmação por PCR, indicando a presença de cepas potencialmente patogênicas de V. vulnificus. O estudo de revisão indicou que as infecções causadas por V. parahaemolyticus tem sido mais fortemente relacionadas à ingestão de alimentos de origem marinha e mais frequentes na costa do Oceano Pacífico. Por outro lado, V. vulnificus é mais frequentemente adquirido por contato de lesões de pele e sua presença é mais comum na costa do Oceano Atlântico. Além disso, o estudo indicou que o fenômeno El Niño exerce influência no aumento de casos de V. parahaemolyticus na costa do Pacífico. Entretanto, são necessários mais estudos para confirmar a importância de fatores ambientais na presença e virulência da bactéria nesta região. No Brasil, os casos de infecções causadas por V. vulnificus são restritos basicamente às regiões sul e sudeste, exceto por um caso recente em 2016, na região nordeste do Brasil. Na análise das amostras coletadas, o estudo revelou uma baixa incidência (4%) de V. vulnificus entre as amostras de ostras (C. gigas) durante os meses de outubro/2014 a janeiro/2015, confirmadas por PCR através dos genes vcg. Esta baixa incidência pode ser explicada pela alta salinidade na região, que ultrapassa os valores de 34?. Na análise da performance dos meios usando cepas puras de V. vulnificus de genótipos conhecidos vcgC e vcgE, todos os meios analisados apresentaram performance satisfatória. Com relação à avaliação da performance dos meios para isolamento eenumeração de V. vulnificus em amostras ambientais, o meio CPC+ apresentou a melhor performance. Assim, mesmo tendo em conta a ausência de relatos de casos de infecção humana em Santa Catarina e os fatores ambientais citados, é fundamental a criação de um programa de monitoramento contínuo para avaliar a presença da bactéria, assim como a adoção de um procedimento de comunicação para pessoas portadoras de condições predisponentes e para profissionais de saúde, para que possam orientar seus pacientes e que possam realizar o diagnóstico e consequente tratamento de pessoas acometidas, com a adoção de metodologias mais precisas, rápidas e específicas para detecção de cepas patogênicas, como a detecção do gene vcg por PCR, especialmente no diagnóstico de casos suspeitos, garantindo maior precisão e eficácia de tratamento. Abstract : Vibrio vulnificus is a natural inhabitant of marine environments that can infect humans through skin wounds or seafood ingestion, especially raw or undercooked shellfish. The bacteria can cross the intestinal barrier and reach the blood stream causing sepsis that can lead to death. The scientific hypothesis of this study was that there are potentially pathogenic strains of V. vulnificus, identified by vcgC gene, on the oysters produced in the coast of Santa Catarina. The objectives of this thesis were to assess the occurrence of potentially pathogenic V. vulnificus strains in oysters (Crassostrea gigas) produced in Santa Catarina; to achieve unprecedented retrospective study on the presence of V. vulnificus and V. parahaemolyticus in South America; and compare the performance of the most common media for microbiological culture used to detect V. vulnificus as its isolation and enumeration capacity. The hypothesis was confirmed through the analysis of samples, confirmed by PCR. The review indicated that the infections caused by V. parahaemolyticus have been more closely related to the ingestion of seafood and more frequent in the Pacific Ocean. On the other hand, V. vulnificus is most often acquired by contact of skin lesions and their presence is more common in the Atlantic Ocean. In addition, the study indicated that the El Niño Southern Oscillation influences the increase in cases of V. parahaemolyticus on the Pacific coast. However, more studies are needed to confirm the importance of environmental factors in the presence and virulence of the bacteria in this region. In Brazil, cases of infection caused by V. vulnificus are basically restricted to the southern and southeastern areas, except for a recent case in 2016, in northeastern Brazil. The study revealed a low incidence (4%) of V. vulnificus between oyster samples (C. gigas) produced in Santa Catarina during the months of October/2014 to January/2015, confirmed by PCR using vcg genes. This low rate can be explained by high salinity in the region, which exceeds 34?. In the media performance research using V. vulnificus pure strains with known vcgC and vcgE genotypes, when considering the performance for total V. vulnificus, all analyzed media showed satisfactory performance. Regarding the assessment of the performance of the media for V. vulnificus isolation and enumeration in environmental samples, CPC+ had the best performance. Thus, considering the absence of reported cases of human infection in Santa Catarina and the environmental factors mentioned, the creation of a continuous monitoring program is critical to assess the presence ofbacteria, as well as the adoption of a communication procedure for people with predisposing conditions and health professionals so that they can guide their patients and can make the diagnosis and subsequent treatment of affected people, and to adopt more precise methodologies, for rapid and specific detection of pathogenic strains such as the detection of the vcg gene by PCR, especially in the case of diagnosis of suspected cases, ensuring greater accuracy and efficacy of treatment.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2016. Biomarcadores são respostas rápidas podendo ser avaliados nos menores níveis de organização biológica, os quais podem detectar sinais precoces de danos a biomoléculas, tecidos, ou órgão, avaliando um determinado processo biológico. O impacto de contaminantes sobre os indivíduos podem ser avaliados, oferecendo, assim, oportunidade para a aplicação de medidas corretivas. Extensas áreas de manguezais em todo o mundo já foram perdidas, particularmente aquelas localizadas em áreas urbanas, as quais estão sob pressão devido a contaminação por efluentes domésticos. Estão presentes no esgoto sanitário metais, cosméticos, hormônios, detergentes, matéria orgânica, entre outros. Em uma primeira etapa desta tese foi estudado o efeito da exposição de ostras nativas Crassostrea brasiliana junto ao Mangue do Itacorubi, Florianópolis, SC, o qual é conhecido por estar moderadamente contaminado com esgoto sanitário. Dessa forma foi avaliada a presença de contaminantes, tais como HPAs, PCBs e LABs. As ostras da espécie C. brasiliana foram transplantadas para o Mangue do Itacorubi, apresentando várias alterações bioquímicas nas brânquias, quando comparadas a ostras transplantadas por 24 ou 96 h para um sítio de referência (Mangue de Ratones). As defesas antioxidantes (catalase, glutationa peroxidase e glutationa) foram diminuídas, apresentando um efeito mais expressivo em 96 h (primavera e outono). Os dados estão de acordo com a ideia de que as brânquias de ostras são especialmente responsivas após uma exposição aguda, neste caso a um mangue contaminado com esgoto sanitário. A contaminação de águas superficiais por cobre ocorre em todo o mundo, usualmente originado de mineração, atividades agriculturais, industriais, comerciais e residenciais. A contaminação de águas superficiais por cobre ocorre em todo o mundo, usualmente originado de mineração, atividades agriculturais, industriais, comerciais e residenciais. Os limites permitidos de cobre são variáveis entre os países, mas geralmente estão na faixa de µg/L. Estes níveis já são capazes de perturbar várias funções de peixes em seus estágios iniciais de desenvolvimento. Em uma segunda etapa da tese foram estudados os efeitos da exposição ao cobre sobre o comportamento de larvas e de indivíduos adultos do peixe paulistinha Danio rerio, além de respostas antioxidantes no peixe adulto. Indivíduos adultos e larvas do peixe paulistinha foram expostos por 96 h ao cobre (concentração nominal: 0, 5, 9, 20 e 60 µg/L; medida: 0.4, 5.7, 7.2 16.6 e 42.3 µg/L). Na concentração de cobre de 60 µg/L, as larvas tiveram uma redução de 5% no comprimento do corpo, e nos adultos prejuízo na memória espacial, decréscimo na atividade glutationa S-transferase. Exposição ao cobre não afetou o comportamento social (agressividade e interação conespecífica), nem a atividade da enzima glutationa redutase. Interessantemente, na concentração nominal de cobre de 9 µg/L a distância e a velocidade de natação das larvas foram aumentadas, e nos adultos a memória de longa duração foi abolida e a atividade da enzima glutationa S-transferase das brânquias foi diminuída. A exposição a concentrações de cobre próximas aos limites permitidos no Brasil foi capaz de alterar o desempenho natatório e perturbar o comportamento dos peixes adultos. Estes dados indicam que, os limites nacionais para o cobre em água doce podem afetar significativamente o desenvolvimento e o comportamento de peixes. Nosso trabalho indica que novos trabalhos precisam ser realizados a fim de confirmar que os níveis de cobre permitidos pela legislação brasileira não são totalmente seguros para peixes de água doce. Abstract : Biomarkers are quick responses that can be evaluated at lower levels of biological organization, which can detect early signs of damage to biomolecules, tissue, or organ, evaluating a particular biological process. The impact of contaminants on individuals can be evaluated, thus, offering the opportunity for the application of corrective measures. Extensive mangrove areas have been lost around the world, particularly those located in urban areas, which are under pressure due to contamination with domestic effluents. The sewage contains metals, cosmetics, hormones, detergents, organic matter, among others. Sanitary sewage tipically contains metals, cosmetic products, hormones, detergentes, organic mather, among others first part of this study investigated the effect of the exposure of native oyster Crassostrea brasiliana on the Itacorubi mangrove, Florianópolis, SC, which is known to be moderately contaminated with sewage. The presence of contaminants sucha as HPAs, PCBs e LABs was investigated. The Crassostrea brasiliana oysters transplanted to the Itacorubi mangrove presented several biochemical changes in the gills when compared to oysters transplanted for 24 or 96 h to a reference site (Ratones mangrove). Antioxidant defenses (catalase, glutathione peroxidase and glutathione) were decreased, showing a more significant effect in 96 h (spring and fall). The data are consistent with the idea that the oyster gills are especially responsive after acute exposure in a mangrove contaminated with sewage. Contamination of surface waters by copper occurs throughout the world, usually originated from mining, agricultural and industrial activities, as well as commercial and residential activities. Copper limits vary between countries, but generally are in µg/L range. These levels are already able to disrupt several fish functions in its early stages of development. In a second part of this work the effects of copper exposure on the behavior of larvae and adult individuals of zebrafish Danio rerio were investigated, in addition to the antioxidant responses in adult fish. Adult fish and larvae were exposed for 96 h to copper (nominal concentration: 0, 5, 9, 20 and 60 µg/L; measured: 0.4, 5.7, 16.6 7.2 and 42.3 µg/L). At the copper concentration of 60 µg/L, the larvae had a 5% reduction in the body length, and the adult fish had impaired spatial memory and activity of the enzyme glutathione S-transferase decreased. Social behavior (aggression and conespecífic interaction) and the activity of the enzyme glutathione reductase were not affected. Interestingly, at the nominal concentration of 9 µg/L of copper, the distance traveled and the swim speed were increased in the larvae, and in the adults the long-term memory was abolished, and the enzymic activity of glutathione S-transferase was decreased in the gills. Exposure to concentrations of copper close to the allowed limits was able to change the swimming performance and disrupt the behavior of adult fish. These data indicate that the national limits allowed for copper on water can significantly affect the development and the behavior of fish. This study indicates that further work are necessary in order to confirm that allowed copper levels in Brazil totally safy to fishes living in inland waters.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Florianópolis, 2016. Na lista das doenças de declaração obrigatória da Organização Internacional de Epizootias, da Organização Mundial de Saúde Animal, duas enfermidades são causadas pelo protozoário do gênero Perkinsus: Perkinsus olseni e Perkinsus marinus, que causam grande mortalidade em ostras. Os primeiros registros de Perkinsus na costa brasileira foram em ostras nativas no litoral da Bahia, Ceará e Paraíba, estados do Nordeste do Brasil. O presente trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de Perkinsus em ostras Crassostrea gigas e Crassostrea gasar do litoral de Santa Catarina. Foram escolhidos ao longo do litoral catarinense seis pontos de coleta e realizadas sete amostras de 30 animais para cada espécie, no período de janeiro 2013 a dezembro de 2014. A metodologia de diagnóstico incluiu exames macro e microscópicos, com tecidos fixados em solução de Davidson, inclusão em parafina, cortes de 5 µm e coloração HHE. Foi realizada cultura de amostras de brânquias e reto em meio fluido tioglicolato (RFTM) e confirmação de resultados por amplificação de 16s RNA. Os resultados de RFTM mostraram Perkinsus spp. infectando Crassostrea gasar em Balneário Barra do Sul, com prevalência variando de 26,7 a 70,0% e 96,6% em São Francisco do Sul. Também houve diagnóstico positivo em Crassostrea gigas, com prevalência de 43,3%, em ostras coletadas em São Francisco do Sul. Os resultados moleculares confirmaram Perkinsus marinus infectando Crassostrea gigas e Crassostrea gasar dessa última localidade e Perkinsus beihaiensis em Crassostrea gasar de Balneário Barra do Sul. Este resultado é o primeiro relato do protozoário Perkinsus marinus infectando Crassostrea gigas na América do Sul. Abstract : Among the mandatory reporting diseases from the list of International Organisation of Epizootics, by World Organisation for Animal Health (OIE) for mollusks, two are caused by the protozoan of the genus Perkinsus: Perkinsus olseni and Perkinsus marinus, protozoan that causes massive oyster mortality. The first reports of Perkinsus in the Brazilian coast were related to native oysters from Brazilian Northeast coast, Bahia, Ceará and Paraíba states. This study aimed to verify the occurrence of Perkinsus in oyster species Crassostrea gigas and Crassostrea gasar, present in Santa Catarina's coast. Those species were chosen in six collection points along the coast of Santa Catarina. Seven samples of 30 animals for each species were collected from January 2013 to December 2014. The diagnostic methodology includes macro and microscopic examinations, using tissues fixed in Davidson solution, embedded in paraffin, with 5 µm cuts, and HHE coloring. The culture of gills and rectum samples was performed inside thioglycolate fluid (RFTM), and results were confirmed by amplification of 16S RNA. The RTFM results demonstrated prevalence of Perkinsus spp. infecting Crassostrea gasar ranging from 26,7% to 70,0% for Balneário Barra do Sul and 96,6% from São Francisco do Sul. Positive diagnoses were detected on the Crassostrea gigas, with the prevalence of 43,3%, for animals collected from São Francisco do Sul. The molecular results also detected Perkinsus marinus infecting Crassostrea gigas and Crassostrea gasar from São Francisco do Sul samples and Perkinsus beihaiensis infecting Grassostrea gasar from Balneário Barra do Sul samples. Those results are the first report of protozoa Perkinsus marinus infecting Crassostrea gigas at South America.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2016. Foram produzidas no Laboratório de Moluscos Marinhos da Universidade Federal de Santa Catarina durante os meses de dezembro de 2014, janeiro e abril de 2015, 50 famílias de meios-irmãos e irmãos completos da ostra Crassostrea gigas. Durante as etapas de larvicultura e assentamento, os animais foram cultivados em laboratório em sistema de recirculação de água com duas repetições por família. Com aproximadamente 50 dias de idade, as famílias foram distribuídas em andares de lanternas e transferidas para espinheis localizados na praia de Sambaqui (Baía Norte da Ilha de Santa Catarina) para desempenho em campo. Aos 180, 165 e 158 dias de cultivo, foram estimados componentes de variância e parâmetros genéticos para crescimento (peso fresco individual, altura, rendimento e peso fresco individual médio) e sobrevivência. A herdabilidade para peso fresco individual, altura, rendimento, peso fresco individual médio e sobrevivência na despesca foram, respectivamente, 0,26 ± 0,05, 0,34 ± 0,05, 0,54 ± 0,09, 0,58 ± 0,08, 0,16 ± 0,07. As correlações genéticas entre peso fresco individual e altura foram de 0,88 ± 0,03, entre rendimento e peso fresco individual médio 0,98 ± 0,03, entre rendimento e sobrevivência 0,58 ± 0,39, entre peso fresco individual médio e sobrevivência 0,47 ± 0,36. Os valores de herdabilidade e correlações sugerem que ganhos genéticos podem ser obtidos para os caracteres estudados através de seleção; sendo preferível a utilização das características rendimento e/ou peso fresco individual médio como critério de seleção. Abstract : Families (50) of the oyster Crassostrea gigas were produced in the Laboratory of Marine Mollusks, Federal University of Santa Catarina, during the months of December 2014, January and April 2015. The larvae were reared under recirculation system conditions with two repetitions of each family. With about of 50-day-old seeds were put placed into on lanterns nets and transferred to loglines on experimental farm located at the beach of Sambaqui Beach (North Bay, Santa Catarina Island). Variance components and genetic parameters were estimated for growth (individual weight, height, yield and mean individual weight) and survival at 180, 165 and 158 days of culture cultivation. The heritability for individual weight, height, yield, mean individual weight and survival at harvest were, respectively, 0.26 ± 0.05, 0.34 ± 0.05, 0.54 ± 0.09, 0.58 ± 0.08, 0.16 ± 0.07. Genetic correlations between individual weight and height was 0.88 ± 0.03, between yield and mean individual weight was 0.98 ± 0.03, between yield and survival was 0.58 ± 0.39, between mean individual weight and survival was 0.47 ± 0.36. The heritability and correlations values suggest that genetic gains can be obtained for the studied traits by selection; also it is preferable to the use of yield and/or mean individual weight to selection.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2016 Ostras são organismos de ampla relevância econômica e ecológica. Contudo, mortalidades massivas de ostras têm aumentado em frequência e distribuição geográfica ao redor do mundo. Desta forma, estudos básicos a respeito da biologia desses animais, incluindo seus sistemas de defesa, são de fundamental importância. O presente trabalho investigou a presença de patógenos de bivalves em ostras cultivadas em Santa Catarina, os quais têm sido associados a mortalidades de ostras em outros países (Estudo 1). Além disso, buscou-se compreender melhor a respeito da relação entre os sistemas antioxidante e imune de ostras (Estudos 2 e 3). No Estudo 1, ostras do Pacífico Crassostrea gigas e nativas C. gasar (= C. brasiliana)foram coletadas ao longo da costa de Santa Catarina e avaliadas quanto à presença do vírus Ostreid herpesvirus 1 (OsHV-1) e das bactérias Vibrio aestuarianus e V. splendidus. Análises moleculares revelaram amostras positivas para V. splendidus (15 %) e OsHV-1 (28 %), sendo confirmadas por análises de sequenciamento. Este foi o primeiro trabalho demonstrando a presença de bactérias e vírus potencialmente patogênicos em ostras na costa brasileira, servindo de alerta para que medidas preventivas sejam adotadas para evitar o surgimento de mortalidades massivas de ostras no país. No Estudo 2, hemócitos de ostras C. gigas foram expostos ao agente eletrofílico 1-cloro-2,4-dinitrobenzeno (CDNB). O CDNB não afetou a viabilidade mitocondrial, entretanto, diminuiu a estabilidade da membrana lisossomal dos hemócitos (= 12,5 µM). O CDNB causou um forte distúrbio no sistema antioxidante, promovendo depleção da glutationa (= 0,1 µM) e inibição das enzimas glutationa redutase (2,5 e 50 µM) e tioredoxina redutase (50 µM). Importantes funções desempenhadas pelos hemócitos (adesão, fagocitose e produção de espécies reativas de oxigênio após imunoestimulação) foram comprometidas somente por 50 µM de CDNB. Os resultados indicam que a depleção total de glutationa não afeta a imunocompetência dos hemócitos, porém ocorre mediante uma inibição adicional de tiol redutases. No Estudo 3, a importância da glutationa para o sistema imune das ostras foi avaliada utilizando-se butionina sulfoximina (BSO), inibidor da síntese de glutationa. Ostras C. gigas foram expostas via intramuscular ao BSO (15 µmol/animal) por 1, 2 3 ou 6 dias, sendo observados menores níveis de glutationa (21-46 %) nas brânquias, glândula digestiva e hemócitos. O tratamento de 3 dias não afetou o hemograma das ostras, nem a viabilidade e capacidade de adesão e fagocitose dos hemócitos. Contudo, aumentou significativamente a susceptibilidade das ostras ao patógeno V. anguillarum (33 %), e de forma marginalmente significativa às espécies V. alginolyticus e V. harveyi. A depleção parcial da glutationa também aumentou a susceptibilidade das ostras ao peróxido de hidrogênio e hidroperóxidode cumeno. Os Estudos 2 e 3 sugerem que a glutationa não é indispensável para a função dos hemócitos, porém, quando outros componentes do sistema antioxidante são afetados, ou quando um segundo fator de estresse é aplicado, a homeostase destas células ou do organismo é comprometida. De forma geral, estes estudos básicos abrem caminho para vários outros nas áreas de aquicultura e ecotoxicologia, e contribuem para uma melhor compreensão dos mecanismos envolvendo respostas imunes e antioxidantes de bivalves. Abstract: Oysters are organisms that play important role economically andfor the natural ecosystems. However, oyster massive mortalities have increased in intensity and geographic distribution worldwide. Therefore, studies aiming basic knowledge regarding the biology of oysters are pivotal, especially regarding their defense mechanisms.Thus, the aim of this study was to investigate the presence of oyster pathogens in Santa Catarina, Brazil, which have been associated to oyster massive mortalities in other countries (study 1). Moreover, another aim was tocontribute to basic knowledge regarding the interrelationship of the immune and antioxidant system in oysters (studies 2 and 3). For the 1st study, Pacific oysters Crassostrea gigas and native oysters C. gasar (=C. brasiliana) were collected throughout the coast of Santa Catarina, and the presence of the virus Ostreid herpesvirus (OsHV-1), and the bacteria Vibrio aestuarianus and V. splendidus were evaluated. PCR analyses revealed positive samples for V. splendidus (15 %) and OsHV-1 (28 %), which was confirmed by sequencing analyses. This was the first study to investigate viral and bacterial pathogens to oysters in Brazil, and enlightens the need of preventive measures to be undertaken in order to avoid oyster massive mortalities in Santa Catarina. For the 2nd study, C. gigas hemocytes were in vitro exposed to the electrophilic agent 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB). CDNB did not affect hemocyte mitochondrial viability, however decreased lysosomal membrane stability (=12.5 µM).CDNB strongly affected hemocyte antioxidant system by depleting glutathione (=0.1 µM) and by decreasing the activity of the enzymes glutathione reductase (2.5 and 50 µM) and thioredoxin reductase (50 µM). Hemocyte function (adhesion, phagocytosis, and reactive oxygen species production upon immunostimulation) were jeopardized only with CDNB 50 µM. These results revealed that total glutathione depletion does not affect hemocyte immunocompetence, however this may occur upon inhibition of thiol reductases. For the 3rd study, the importance of glutathione to the immune system of oysters was investigated by using butionine sulfoximine (BSO), an inhibitor of the glutathione synthesis.Oysters C. gigas were exposed to BSO through intramuscular injections (15 µmol/animal/day) for 1, 2, 3 or 6 days, which promoted reduced glutathione levels (21-46 %) in the gills, digestive gland and hemocytes. The injection protocol of 3 days did not affect oyster hemogram, hemocyte viability, adhesion and phagocytosis. Nevertheless, it significantly increased oyster susceptibility to the pathogenV. anguillarum (33 %), while only a trend was observed for thespeciesV. alginolyticusandV. harveyi. Glutathione partial depletions also increased oyster susceptibility to cumene and hydrogen peroxides. Studies 2 and 3 suggest that glutathione is not imperative for hemocyte function, however when other components associated to the antioxidant system are affected, or when a second stress challenge is applied, these cells or the whole organism homeostasis is impaired.Overall, these basic studies can make way for many others in the field of aquaculture and ecotoxicology, and contribute to a better understanding of the mechanisms guiding the immune and antioxidant responses of bivalves.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2016. Para manter o crescimento da atividade de produção de ostras e atender a demanda do mercado, o desenvolvimento de novas tecnologias para produção de pré-sementes de Crassostrea gigas em laboratório faz-se necessário. Desde o surgimento da indústria na década de 1960 não houve um incremento tecnológico relevantes na produção de sementes recém-assentadas. No sistema de leito fluidizado que em síntese, consiste na produção de sementes em alta densidade com fluxo de água e alimentação controladas, mantendo as sementes recém-assentadas em suspensão, todo material excretado pelos animais são direcionados para fora do cultivo, priorizando a qualidade da água. Com a utilização dessa tecnologia é possível maximizar a produção, utilizando áreas de cultivo em laboratório menores e, consequentemente, reduzindo o tempo de manejo, além de reduzir o volume de água utilizado. Neste estudo comparou-se o crescimento, a sobrevivência e consumo de alimento de diferentes tamanhos das sementes de Crassostrea gigas em sistema de leito fluidizado e upwelling. Para o sistema de leito fluidizado também foram comparadas densidades visando avaliar o comportamento das sementes sob diferentes condições de densidade de cultivo. Os parâmetros físico-químicos se mostraram, em ambos os experimentos, dentro do padrão estabelecido para a espécie. No experimento de densidade foi possível obter um crescimento volumétrico 1.316%, durante os oito dias do período experimental, no tratamento com 4.877,21 pré-sementes por cm². No experimento de comparação entre os sistemas, para sobrevivência, não houve diferença entre os tratamento e sistemas obtendo uma sobrevivência média de 95,48±2,76%. Da mesma forma, para o consumo de microalgas não foi observado diferença significativa entre os sistemas, contudo houve diferenças entre os tratamentos, T1000, T710 e T500. Neste caso, observou-se a redução do consumo de microalgas com a redução do tamanho médio das pré-sementes. Em relação ao crescimento altimétrico e volumétrico, o sistema de upwelling foi superior quando comparado ao sistema de leito fluidizado. Entre os tratamentos do sistema de upwelling não foi observado diferença estatística para as variáveis de crescimento, entretanto para os tratamentos do sistema de leito fluidizado, o tratamento TL1000 levou a melhores resultados. Esses estudos propiciaram entender um pouco mais sobre a produção de pré-sementes de C. gigas em sistema de leito fluidizado, todavia novos estudos devem ser executados para otimizar a produção de pré-sementes de C. gigas. Abstract : To keep the growth of oyster production and reach the market demand, the development of new technologies for Crassostrea gigas spats production is necessary. Since the beginning of the industry, in the 1960s, there have been significant technological advances in the production of newly settled spats. The fluidized bed system is the high-density production of spats in water flow and feeding control that keeps the spats in suspension and directs the excreted material out of the system, prioritizing the quality of the water. To use this technology, it is possible to maximize the production, using smaller growth areas, and consequently, reducing the working time and the amount of water used. This study compared the growth, survival and food intake for different sizes spats of Crassostrea gigas in upwelling and fluidized bed systems. Densities were also compared in fluidized bed system. The physical and chemical parameters in both experiments were within the pattern established for the species. In the density experiment we found a volumetric growth of 1,316% in the trait of 4,877.21 spats per cm². There were no differences between survivals and intake of microalgae when we compared the systems; the general average was of 95.48±2.76%. However, we found differences in intake within systems; there were a reduction of the microalgae intake by reduction of the average size of spat. Altimetry and volumetric growth was superior in the upwelling when compared to the fluidized bed system. In upwelling system, there was not statistical difference in the growth variables; however, for the fluidized bed treatment system, TL1000 trait showed better results. These studies allowed understanding of the production of C. gigas spats in a fluidized bed system; however, further studies will be needed to optimize the production of C. gigas spats.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2016. O objetivo deste trabalho foi isolar cepas de bactérias da gônada e da parte final do intestino de Crassostrea gigas e avaliar sua utilização como probiótico na Crassostrea gasar desafiada com Vibrio parahaemolyticus a fim de melhorar a resposta imune de ostras adultas e a sobrevivência das larvas após desafio experimental. Apenas duas cepas de bactérias foram isoladas, uma a partir da gônada (Enterococcus faecium) e outra do intestino (Enterococcus durans), que seguiram para testes in vitro de antagonismo, taxa de crescimento, tempo de duplicação e contagem de células viáveis. Quanto a eventuais melhorias nos parâmetros imunológicos, microbiológicos e histológicos, as cepas de E. faecium e de E. durans foram aplicadas na água na concentração de 105 UFC ? mL-1 durante 15 dias para ostras adultas da espécie C. gasar, alimentadas com Chaetoceros muelleri. Enterococcus durans foi a única cepa utilizada para a sobrevivência das larvas "D". As larvas foram divididas em quatro grupos, Controle, tratado com E. durans, Controle desafiado com Vibrio parahemolyticus e E. durans desafiado com V. parahemolyticus. E. durans apresentou melhores resultados in vitro. Análises imunológicas das ostras demonstraram que a aplicação das cepas de E. durans mostrou maior título aglutinante e atividade de fenoloxidase após 15 dias de tratamento do que o grupo controle e o grupo tratado com E. faecium. A aplicação de E. faecium e Enterococcus durans promoveu o aumento do número de bactérias heterotróficas totais e ácido-láctica totais. A sobrevivência das larvas tratadas com o E. durans mostrou-se maior do que dos demais grupos. Tendo isso em vista, a cepa probiótica com o maior potencial para a cultura de C. gasar é a E. durans. Abtsract : The aim of this work was to isolate strains of bacteria from the gonad and final part of the intestine of Crassostrea gigas and evaluate its use as probiotic on Crassostrea gasar challenged with Vibrio parahaemolyticus, in order to improve the immune response of adult oysters and larval survival after experimental challenge. Only two bacterial strains were isolated, one from the gonad (Enterococcus faecium) and the other from the intestine (Enterococcus durans), which were followed by in vitro tests of antagonism, growth rate, doubling time and viable cell count. Towards possible improvements in the immune, microbiological and histological parameters, E. faecium (TG) and E. durans (TI) strains were enforced in water at a concentration of 105 CFU ? mL-1 during 15 days for adult oysters of the specie C. gasar which were fed with Chaetoceros muelleri. E. durans was the only strain used for larval survival "D". The larvae were divided into four groups, Control, treated with E. durans, Control challenged with Vibrio parahemolyticus and E. durans challenged with V. parahemolyticus. The strain that showed best in vitro results was E. durans bacteria. Immunological analyzes of oysters demonstrated that the application of E. durans strain showed higher binding capacity and phenoloxidase activity after 15 days of treatment than control groups and the one treated with E. faecium. The application of E. faecium and E. durans increased the numbers of total heterotrophic bacteria and the total lactic acid. The survival of the larvae treated with E. durans showed higher than that of other groups. In view of this, the probiotic strain with the highest potential for the cultivation of C. gasar is E. durans.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Gradução em Aquicultura, Florianópolis, 2016. O estudo teve como objetivos a produção de ostras do Pacífico (Crassostrea gigas) tetraploides, utilizando choques de indução com 6-dimetilamino-purina (6-DMAP) e térmico (25-36º C), em substituição à citocalasina-B (CB), em embriões diploides, no momento da saída do primeiro corpúsculo polar. Além disso, o estudo buscou um melhor entendimento sobre o desempenho zootécnico obtido com o cultivo de ostras triploides em diferentes locais nas Baías Norte e Sul da ilha de Santa Catarina, avaliando parâmetros como peso fresco total, altura e sobrevivência (experimentos I, II e III) e ainda aspectos reprodutivos, como índice de condição e histologia desses organismos quando expostos às condições de cultivo no sul do Brasil. Os resultados obtidos com a indução a tetraploidia em ostras do Pacífico foram promissores, obtendo-se larvas tetraploides em todos os tratamentos testados, sendo indicada a substituição da CB pelos outros tratamentos (6-DMAP e temperatura). Na análise de desempenho zootécnico de ostras triploides, em ambos os experimentos as ostras triploides mostraram melhores resultados que às ostras diploides em peso fresco total e altura no período de verão. Quanto a sobrevivência, as ostras triploides foram superiores às ostras diploides apenas no experimento I, não havendo diferença estatística ao final dos experimentos II e III. Já as análises dos índices de condição de ostras triploides apresentaram um padrão semelhante ao encontrado para ostras diploides, apresentando os maiores valores durante o mês de agosto de 2015 e os menores em fevereiro de 2016 para ostras 2N e 3N em ambos locais de cultivo. Já na histologia, as ostras 3N apresentaram um padrão semelhante às ostras 2N quanto ao ciclo reprodutivo, indicando que as potenciais melhorias encontradas para ostras 3N no Brasil não estão ligadas apenas à diminuição da atividade reprodutiva desses organismos e sim a outros fatores que precisam ser avaliados em posteriores estudos. Abstract : The study aimed to the production of Pacific oysters (Crassostrea gigas) tetraploid, using induction shocks with 6-dimethylamino-purine (6-DMAP) and heat (25-36º C), replacing cytochalasin-B (CB) in diploid embryos, the output of the first polar body. In addition, the study sought a better understanding of the growth performance achieved by growing triploid oysters at different locations in the bays north and south of the island of Santa Catarina, evaluating parameters such as the total fresh weight, height and survival (experiment I, II and III), and even reproductive aspects, as a condition index and histology of these organisms when exposed to growing conditions in southern Brazil. The results obtained with the induction tetraploidy in Pacific oysters were promising, yielding tetraploid larvae in all treatments, with the substitution indicated by CB other treatments (6-DMAP and temperature). In the production performance analysis of triploid oysters, in both experiments triploid oysters were higher than diploid oysters in the total fresh weight and height in the summer period. As for survival, the triploid oysters were higher than diploid oysters only in experiment I, with no statistical difference at the end of the experiments II and III. As for the analysis of the index condition of triploid oysters showed a pattern similar to that for diploid oysters, with higher rates during the month of August 2015 and the lowest in February 2016 for 2N and 3N oysters in both cultivation sites. As for histology, the 3N oysters showed a pattern similar to 2N oysters on the reproductive cycle, indicating that potential improvements found for 3N oysters in Brazil are not linked just to decreased reproduction of these organisms but the other factors that need to be evaluated in later studies.