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Orientador: Maricilda Palandi de Mello Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado

Orientadores : Laura Maria Mariscal Ottoboni, Maricilda Palandi de Mello Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Doutorado

Orientadores: Laura Maria Mariscal Ottoboni, Tatiana Teixeira Torres Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A contaminação fecal dos corpos hídricos é uma das principais causas de doenças entéricas veiculadas pela água no mundo, sendo importante efetuar a vigilância da água, a qual é feita utilizando-se micro-organismos indicadores de contaminação fecal. No entanto, os métodos tradicionais de detecção não são capazes de identificar a fonte de contaminação fecal. Este trabalho teve como objetivo a prospecção de marcadores moleculares nos hospedeiros e sua detecção em amostras de água de modo a permitir sua utilização na identificação de fontes de contaminação fecal em águas superficiais no Estado de São Paulo. Duas abordagens dependentes de biblioteca e cultivo, a classificação por meio de grupos filogenéticos e a técnica de MALDI-TOF/MS, foram utilizadas com linhagens de E. coli isoladas de diferentes hospedeiros e rios e reservatórios. O sequenciamento da região V3 do gene 16S ribossomal foi selecionado como o método independente de biblioteca e cultivo em DNA extraído de amostras de fezes humanas e bovinas e amostras de água. Os grupos filogenéticos foram utilizados na classificação dos hospedeiros utilizando análise de correspondência, onde foram observados agrupamentos por hábitos alimentares. A classificação das linhagens de E. coli isoladas de rios e reservatórios, sugere que a prevalência do subgrupo A1, seguido do subgrupo B23 está associada com contaminação de origem humana, enquanto o grupo B1 com contaminação de origem animal e os subgrupos D1 e D2 mais relacionados com ambientes prístinos. Na utilização de uma métrica de análise de rede social, w-clique, na distribuição dos grupos filogenéticos foi observado o agrupamento dos locais de amostragem associados ao grau de poluição, sugerindo seu uso como uma ferramenta complementar na avaliação da qualidade da água. Foram analisados os perfis proteicos de linhagens de E. coli de hospedeiros e amostras ambientais pela técnica de MALDI-TOF/MS. Foram identificados biomarcadores hospedeiro-específicos e sugerem sua utilização como potencial ferramenta na identificação da origem do hospedeiro. Os resultados da validação desses marcadores com perfis proteicos de linhagens de E. coli isoladas de rios e reservatórios mostraram que as amostras de água apresentaram marcadores de diferentes hospedeiros, sugerindo que esses rios possuam fontes de contaminação fecal mistas. No sequenciamento da região V3 do gene 16S ribossomal de amostras de fezes (humanas e bovinas) e águas foram identificadas 4.296 unidades taxonômicas operacionais (OTUs) . A maior diversidade foi observada nas amostras de fezes bovinas e a menor na amostra de água de ambiente prístino. Firmicutes foi o grupo predominante nas amostras de fezes humanas, enquanto que nas fezes bovinas foram os Firmicutes e Bacteroidetes. Nas amostras de água, o filo mais abundante foi Proteobacteria. A rede de interação entre as OTUs encontradas nas amostras também mostrou que as amostras de fezes apresentaram maior diversidade e entre as amostras de água, aquela com poluição de origem humana foi a que apresentou maior diversidade. Houve identificação de biomarcadores pelo método LEfSe para humanos (Actinobacteria, Betaproteobacteria e Firmicutes) e bovinos: (Bacteroidetes, Tenericutes e Spirochaetes). Marcadores hospedeiro-específicos foram identificados, mas esses não foram encontrados nas amostras de água sugerindo que as ferramentas utilizadas não apresentam a resolução para identificar os marcadores nas amostras ambientais ou que a contaminação nos corpos hídricos é mista. Adicionalmente, como os marcadores hospedeiro-específicos são oriundos de micro-organismos não autóctones, estes poderiam sofrer os efeitos adversos do ambiente, como fatores físico-químicos e competição com os organismos nativos Abstract: The fecal contamination of water resources is the main cause of enteric waterborne diseases all over the world. Traditional indicator methods used in the water microbiological quality assessment are not able to identify fecal contamination source. This work intended to prospect molecular markers in hosts and track them in water samples to identify pollution sources in surface waters in the São Paulo State, Brazil. Two library-dependent methods with E. coli strains isolated from different hosts and water samples were used, a genotypic typing method (E. coli phylogenetic groups) and a phenotypic typing method (MALDI-TOF/MS). A library-independent method using 454 pyrosequencing of hypervariable16S rRNA gene V3 region was used in DNA from feces and water samples. Phylogenetic groups were used as a tool in host classification and correspondence analysis showed feeding habits clusters. The classification of environmental samples revealed higher frequencies of subgroups A1 and B23 in rivers impacted by human pollution sources, while subgroups D1 and D2 were associated with pristine sites, and subgroup B1 with domestic animal sources, indicating their use as a first screening for pollution source identification. A simple classification is proposed based on phylogenetic subgroup distribution using the w-clique metric, enabling differentiation of polluted and unpolluted sites. Protein profiles of E. coli strains isolated from host and water samples were analyzed by MALDI-TOF/MS. Specific host biomarkers were identified and their use was indicated as a potential tool for the source tracking. Validation with E. coli strains isolated from rivers and reservoirs showed that water samples presented markers from different hosts, suggesting these rivers have mixed sources of fecal contamination. Sequencing of the 16S rRNA V3 region in stool samples (human and bovine) and water showed 4296 operational taxonomic units (OTUs). The greatest diversity was observed in samples of cattle feces and the smallest one in the pristine water sample. Firmicutes was the predominant group in samples of human feces, while in the most common bovine feces are the Firmicutes and Bacteroidetes. The interaction network showed that the stool samples had the greatest diversity and, among them, the water sample with human pollution source showed the highest diversity. The LEfSe method was used to identify host biomarkers. As human biomarkers, Actinobacteria, Betaproteobacteria and Firmicutes were identified and for cattle the potential markers are Bacteroidetes, Tenericutes and Spirochaetes. Host-specific markers were identified, but they were not found in water samples suggesting that the used tools either do not have the resolution to identify markers in environmental samples or contamination in water bodies is mixed. Additionally, as the host-specific markers were isolated from non-autochthonous micro-organisms, they could be affected by the environmental adverse effects such as physical-chemical factors and competition with native organisms Doutorado Microbiologia Doutora em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Laura Maria Mariscal Ottoboni Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Coliformes e enterococos fecais de origem humana ou animal na água podem indicar a presença de patógenos de veiculação hídrica como, por exemplo, Salmonella e Giardia. A identificação da fonte de contaminação fecal (lançamento de esgoto doméstico, escoamento de fezes animais de criação no solo, de animais silvestres, aves e outros) é importante para a implantação de medidas efetivas de gerenciamento e remediação de águas superficiais. Dessa forma, o desenvolvimento de métodos para identificação da fonte de contaminação fecal é de fundamental importância para as ações de controle, para preservar a integridade dos corpos d'água e para proteger a saúde da população. Até o momento, não existe um método único e universal para este tipo de análise e, no Brasil, as pesquisas nessa área são praticamente nulas. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo a obtenção de marcadores moleculares hospedeiro-específicos em Escherichia coli, que permitam a identificação da fonte animal de contaminação fecal em águas superficiais. Neste trabalho foram utilizadas 174 linhagens de origem humana, 50 de origem bovina, 39 de origem suína, 16 de origem aviária, 29 de origem ovina, 16 de origem caprina, 44 de esgoto, 36 de reservatórios com contaminação esperada de origem humana e 30 de rios e reservatórios com contaminação esperada de origem animal. A determinação do grupo filogenético de todas as linhagens foi realizada pela detecção dos genes chuA e yjaA e do fragmento Tspe4.C2 por PCR. Os resultados mostraram que a distribuição dos grupos filogenéticos principais A, B1, B2 e D foi diferente entre os hospedeiros analisados, o que permitiu a predição da fonte de contaminação fecal da maioria dos pontos de amostragem. Cem linhagens de humanos e todas as linhagens de origem animal foram analisadas por BOX- e (GTG)5-PCR. O BOX-PCR apresentou uma taxa global de classificação correta de 63,70%, o (GTG)5-PCR de 49,10% e quando os dois métodos foram utilizados a taxa foi de 57,61%. Outras 32 linhagens de humanos e 28 de esgoto também foram analisadas por BOX-PCR, sendo que, 59,4% das linhagens de humanos foram corretamente classificadas e 85,2% das linhagens de esgoto foram classificadas como de humanos. Vinte linhagens de humanos, 15 de bois e 16 de galinhas foram analisadas por espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR). Utilizando-se um modelo PLS-DA com a segunda derivada do espectro na região 2816 e 3026 cm-1 foi possível separar completamente as linhagens segundo sua origem animal. Assim sendo, a espectroscopia FT-IR foi considerada a técnica mais promissora para futuros estudos de rastreamento de fonte de contaminação fecal. Abstract: The detection of fecal coliforms and enterecocci in water indicates the presence of waterborne pathogens such as Salmonella and Giardia. The identification of the source of fecal contamination is important for the effective management of superficial water pollution. The development of methods for the identification of the source of fecal contamination is essential to preserve the quality of the water systems and to protect the public health. Until now, there is no universal method for this analysis and, in Brazil, there is no research in this area. In this way, the aim of this work was to obtain host-specific molecular markers in Escherichia coli for the identification of the source of fecal contamination in superficial water. For this work it was used, 174 strains from humans, 50 from cows, 39 from pigs, 29 from sheep, 16 from goat, 16 from chickens, 44 from sewage, 36 from water reservoirs whose the expected contamination source is human and 30 from water reservoirs and rivers whose the expected contamination source is animal. The determination of the phylogenetic groups of all strains was performed by the detection of the genes chuA and yjaA and the fragment Tspe4.C2 by PCR. The results showed that the distribution of the phylogenetic groups A, B1, B2 and D differs among the hosts analyzed, which allowed the prediction of the contamination source of most of the environmental samples. One hundred strains from humans, 50 from cows, 39 from pigs, 29 from sheep, 16 from goat and 16 from chickens were analyzed by BOX- and (GTG)5-PCR. The BOX-PCR presented an overall rate of correct assignment of 63.70%, the (GTG)5-PCR of 49.10% and, when the two methods were used, the rate was 57.61%. Thirty two other strains from humans and 28 strains from sewage were analyzed by BOX-PCR and compared with the profiles previously obtained. 59.4% of the human strains were correctly assigned as human and 85.2% of the sewage strains were assigned as human. Twenty strains from humans, 15 from cows and 16 from chickens were analyzed by Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR). The use of a PLS-DA model with the second derivative of spectra at the region 2816 and 3026 cm-1 made it possible to completely discriminate the strains according to the animal source. Therefore, the FT-IR spectroscopy was considered the most promising method for the identification of fecal contamination. Mestrado Genética de Microorganismos Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Maricilda Palandi de Mello, Celso Eduardo Benedetti, Fernanda Caroline Soardi Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A expressão do gene SRY (Sex Determining Region in chromosome Y) é responsável por desencadear a determinação testicular durante o desenvolvimento embrionário, a partir das gônadas ainda indiferenciadas. Mutações nesse gene são encontradas em muitos casos de anomalias do desenvolvimento gonadal. O projeto teve por objetivo principal a análise funcional do efeito de uma mutação na região promotora do gene SRY, sendo que essa mutação consiste em uma deleção de 3 pares de base em um dos sítios consenso de ligação do fator de transcrição Sp1 ao promotor do gene. O portador dessa mutação é um indivíduo com disgenesia gonadal pura 46,XY, sendo que outros membros da família apresentavam ambiguidade genital e o pai, também portador da mutação, possuía grave hipospadia ao nascimento. Para tentar esclarecer os efeitos desta mutação nos mecanismos moleculares de regulação da expressão do gene SRY, este trabalho primeiramente analisou a interação da proteína Sp1 com os sítios localizados na região promotora de SRY e o efeito da mutação nesta interação, através de ensaios de EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay). Concluiu-se que os sítios Sp1A e Sp1B se ligam a duas moléculas de Sp1 e que a mutação no Sp1A praticamente abole esta ligação. Possivelmente a ausência dessa ligação impediu a formação de um complexo de transcrição, causando uma diminuição na expressão do gene SRY e levando à ausência de formação dos testículos e reversão sexual completa na paciente. Complementando, foi analisado o efeito dessa mutação na expressão através de ensaio de expressão com gene repórter, no qual o promotor normal se mostrou em média duas vezes mais eficiente na ativação da expressão da luciferase que o promotor mutante. Entretanto, mais experimentos de transfecção, inclusive com outras linhagens celulares, devem ser realizados para confirmação desse resultado. Além disso, foi analisado o efeito de uma nova mutação (localizada na região codificante do gene SRY) na ligação da proteína SRY com o DNA, através de ensaios de EMSA. Concluiu-se que a mutação E89K, associada com disgenesia gonadal pura 46,XY, reduziu em alto nível a atividade de ligação in vitro da proteína SRY mutante ao DNA, o que representa um forte indício de que atividade reduzida da proteína mutante não foi suficiente para desencadear o processo de determinação testicular. Paralelamente, foi feito o rastreamento de mutações no gene SRY e sua região promotora em novos casos de disgenesia gonadal, não tendo sido encontradas, porém, alterações nos pacientes analisados Abstract: The SRY (Sex Determining Region in chromosome Y) gene expression is responsible for testicular determination during embrionary development. Mutations in SRY are found in many cases of anomalies of gonadal development. This project analyzed the functional effect of a mutation in SRY promoter region; the mutation is a 3-bp deletion in a consensus binding site for Sp1 transcription factor. The patient presented 46,XY pure gonadal dysgenesis, and a family history of relatives with different levels of genital ambiguity. Her father shares the same mutation in the SRY promoter region. In order to investigate the effects of the mutation upon the molecular mechanisms that regulate SRY gene expression, the interaction of the Sp1 transcription factor with normal and mutant binding sites was analyzed by EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay). Each of Sp1A and Sp1B normal sites binds to a single Sp1 molecule, whereas the 3-bp deletion in Sp1A abolishs the binding to this site. Probably, the lack of Sp1 binding to the Sp1A site prevented the formation of a stable transcription complex, reducing the level of SRY expression and leading to the absence of testicles and complete sex reversal in the patient. Parallely, the effect of the mutation was analyzed by a reporter gene assay, indicating that the normal promoter is almost two times more efficient than the mutant promoter in the activation of luciferase gene expression using HeLa cells. However, further transfection experiments with other cell lineages must be performed to confirm this result. In addition, the effect of a new mutation (E89K, located in the SRY gene coding region) was analyzed by testing the ability of the SRY mutant protein to bind its DNA consensus sequence. EMSA assays revealed that the E89K mutation, which is associated with 46,XY pure gonadal dysgenesis, strongtly reduced the SRY protein binding activity in vitro. This result is a strong evidence that the reduced activity of SRY mutant protein was not sufficient to trigger the testicular determination in the patient, leading to the pure gonadal dysgenesis phenotype. Screening of mutations in the SRY gene coding and promoter regions was also performed in six diferent patients with 46,XY gonadal dysgenesis. However, other mutations have not been identified Mestrado Genética Animal e Evolução Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientadora: Profa. Dra. Luciana Campos Paulino Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2018. A pele humana é colonizada por uma variedade de micro-organismos, que podem ter influências positivas na saúde. Desequilíbrios nesta comunidade, porém, podem estar relacionados a doenças de pele, dentre elas a dermatite seborreica (SD). A SD é uma doença crônica, de alta prevalência mundial, caracterizada por descamação, eritema e prurido. O desenvolvimento dos sintomas tem sido comumente associado a fungos. Entretanto, o papel que exercem não está claro e, portanto, a etiologia da doença não está elucidada. Diversas infecções humanas estão relacionadas a interações entre bactérias e fungos, porém a participação de bactérias no desenvolvimento da SD ainda não foi totalmente compreendida. Micro-organismos podem ser compartilhados através do contato entre pessoas, com objetos e superfícies domésticas, o que em determinadas situações pode favorecer a instalação ou agravamento de doenças. Este estudo tem como objetivo caracterizar a microbiota bacteriana da pele e outras áreas do corpo de pacientes com SD e seus familiares, em comparação com famílias de pessoas sem alterações de pele; e analisar o possível compartilhamento da microbiota entre os membros da família e ambientes em que residem. Para tanto, foram selecionadas 12 famílias (6 incluíam portadores de SD), e coletadas amostras de pele, mucosa oral e fezes. Foram obtidas também amostras das residências e dos animais de estimação. Registros fotográficos e medições foram utilizados como base para a análise arquitetônica de cada residência. Sequências nucleotídicas de fragmento do gene rRNA 16S foram obtidas utilizando o sistema MiSeq (Illumina), processadas através de análises de bioinformática, e comparadas com o banco de dados GreenGenes através do Qiime para identificação taxonômica. Análises estatísticas de similaridade, agrupamento e diversidade foram realizadas. Os dados mostram que a microbiota bacteriana varia de acordo com a área do corpo; e é compartilhada entre os membros de cada família e ambientes de suas residências. As comunidades dos sofás e camas são similares às das mãos, o que pode ter implicações na transmissão de doenças. Portadores de SD apresentaram alterações na composição bacteriana em área com sintomas da doença, sugerindo associação de bactérias com a SD. Os dados em conjunto mostram novas perspectivas para a compreensão da SD, que podem auxiliar futuramente no desenvolvimento de um tratamento adequado. Os resultados do estudo comparativo da microbiota em pessoas e ambientes residenciais podem ajudar a esclarecer a influência das bactérias na saúde e em doenças humanas. Human skin is colonized by a variety of microorganisms, which may have beneficial influences on health. However, under certain circumstances some of them might be associated with skin diseases, such as seborrheic dermatitis (SD). SD is a chronic, highly prevalent condition characterized by scaling, erythema and pruritus. The development of the symptoms has been more commonly related to Fungi; however, the role they play has not been elucidated, and the etiology of the disease remains unclear. Diverse human infections are related to interactions between Bacteria and Fungi, but the role played by Bacteria in the development of SD has not yet been fully understood. Microorganisms can be shared through direct contact between people, objects and household surfaces, which might favor the onset or worsening of diseases. This study aims to characterize the skin bacterial microbiota from SD patients and their family members in comparison with healthy families; and to analyze the potential sharing of the microbiota between family members and household environments. We included 12 families (6 families with SD), and collected samples from skin, oral mucosa and feces. We also obtained samples from residences and pets. Photographic records and measurements were obtained from all residences and used as basis for the architectural analysis of each residence. High-throughput 16S rRNA gene sequencing was performed using MiSeq platform (Illumina), and sequences were compared with GreenGenes database through Qiime pipeline for taxonomic identification. Similarity, grouping and diversity analyzes were performed. Data showed that bacterial microbiota varies across body sites; and family members and environments of their residences share it. Communities from sofas and beds are similar to those of the hands, which may have implications in disease transmission. SD subjects showed microbial shifts in lesional sites, suggesting that bacteria might be associated with SD. Results bring new perspectives for understanding the pathogenic process of SD, and could provide useful information for future development of more effective SD treatments. Moreover, comparative analyses of skin and environmental microbiota could potentially help to clarify the influence of Bacteria in health and disease.

Orientadora: Profa. Dra. Luciana Campos Paulino Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, Santo André, 2018. A pele humana é habitada por uma complexa comunidade de microorganismos, que influenciam positivamente a saúde e também podem estar associados a doenças de pele. A dermatite seborreica (SD) é uma doença de alta prevalência mundial que causa prurido e descamação, principalmente no couro cabeludo. Tem sido sugerido que SD esteja relacionada a fungos do gênero Malassezia, porém o papel que desempenham não foi elucidado e a etiologia da doença ainda não é totalmente compreendida. A resposta imune possivelmente também exerce papel importante no processo patogênico, influenciando a microbiota e também sendo influenciada por ela. Pouco ainda é conhecido sobre como a microbiota é adquirida e compartilhada. A interação entre as pessoas e as superfícies das habitações e objetos, aliada à capacidade dos micro-organismos de colonizar diferentes ambientes, pode facilitar o compartilhamento da microbiota. Este trabalho tem como objetivo caracterizar a microbiota da pele e a resposta imunológica em indivíduos com SD e seus familiares. O trabalho foi dividido em três etapas: (1) análise das microbiotas fúngica e bacteriana; (2) análise da microbiota fúngica de famílias e dos ambientes residenciais; (3) análise da resposta imunológica. Foram obtidas amostras de indivíduos saudáveis e com SD, amostras de seus familiares, de residências e de animais de estimação. As comunidades microbianas foram analisadas utilizando-se next generation sequencing. A resposta imunológica foi avaliada através da quantificação dos níveis séricos de citocinas. Os resultados da etapa 1 revelaram que SD está associada à disbiose nas comunidades fúngicas e bacterianas, inclusive em áreas da pele que não apresentam sintomas da doença, sugerindo a ocorrência de um processo sistêmico, possivelmente imunológico. Na etapa 2, a disbiose associada a fungos da pele foi confirmada. Os resultados revelaram um compartilhamento de fungos entre pessoas e o ambiente, principalmente através das mãos. Na etapa 3, foram observadas alterações nos níveis de citocinas em pessoas com SD, sugerindo que a doença está relacionada com alterações imunológicas. Os resultados coletivamente revelam que a SD está relacionada à interação entre a microbiota e a resposta imune do hospedeiro. Assim, este trabalho pode ter implicações importantes na compreensão e no tratamento de doenças de pele. The human skin is inhabited by a complex community of microorganisms that can positively influence health but also can cause diseases. Seborrheic dermatitis (SD) is widespread disease causing itching and desquamation, mainly on the scalp. SD has been associated with Malassezia yeasts, although their role is not clear, and the etiology of the disease is still not completely elucidated. The immune response also plays an important role in the pathogenic process, influencing and being influenced by the microbiota. Little is known about how the microbiota is acquired and shared. The interaction between people and surfaces and objects, together with the ability of microorganisms to colonize different environments, may facilitate microbial sharing. This work aims to characterize the microbiota of the skin and the immune response in patients with SD and their family members. The study was divided into three stages: (1) analysis of fungal and bacterial microbiotas; (2) analysis of the fungal microbiota of families and built environments; and (3) analysis of the immune response. Samples were obtained from healthy and SD subjects, their houses and pets. The microbial communities were analyzed using next generation sequencing. The immune response was assessed by quantifying cytokine serum levels. Results of stage 1 revealed that SD is associated with dysbiosis in fungal and bacterial communities, including skin areas that do not show SD symptoms, suggesting a systemic process, possibly immunological. In stage 2, dysbiosis in fungal communities was confirmed. The results revealed that fungi are shared between people and the environment, especially through the hands. In stage 3, changes in cytokine levels were observed in people with SD, suggesting that the disease is related to immunological alterations. The results collectively reveal that SD is related to the interaction between the microbiota and the host immune response. Thus, this work may contribute for understanding and treating skin diseases.

Orientadora: Profa. Dra. Luciana Campos Paulino Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2014.

Orientador: Luciana Campos Paulino Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2014

Made available in DSpace on 2019-09-12T16:53:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 Introduction: Denture stomatitis is a common lesion that affects denture wearers. Its multifactorial etiology seems to depend on a complex and poorly characterized biofilm. The purpose of this study was to assess the composition of the microbial biofilm obtained from complete denture wearers with and without denture stomatitis using culture-independent methods. Methods: Samples were collected from healthy denture wearers and from patients with denture stomatitis. Libraries comprising about 600 cloned 16S ribosomal DNA (rDNA) bacterial sequences and 192 cloned eukaryotic internal transcribed spacer (ITS) region sequences, obtained by polymerase chain reactions, were analyzed. Results: The partial 16S rDNA sequences revealed a total of 82 bacterial species identified in healthy subjects and patients with denture stomatitis. Twenty-seven bacterial species were detected in both biofilms, 29 species were exclusively present in patients with denture stomatitis, and 26 were found only in healthy subjects. Analysis of the ITS region revealed the presence of Candida sp. in both biofilms. Conclusion: The results revealed the extent of the microbial flora, suggesting the existence of distinct biofilms in healthy subjects and in patients with denture stomatitis. [Campos, M. S.] Univ Sao Paulo, Sch Dent, Dept Oral Pathol, Sao Paulo, Brazil [Campos, M. S.; Marchini, L.; Nobrega, F. G.] Univ Vale Paraiba, Lab Mol Genet & Genomes, Sao Jose Dos Campos, SP, Brazil [Marchini, L.] State Univ Sao Paulo, Sao Jose dos Campos Sch Dent, Sao Paulo, Brazil [Marchini, L.] Universidade de Taubaté (Unitau), Dept Dent [Bernardes, L. A. S.] Univ Sao Paulo, Sch Med, Dept Genet Program, Ribeirao Preto, SP, Brazil [Paulino, L. C.] NYU, Sch Med, Dept Med, New York, NY USA