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Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os primeiros registros históricos da humanidade já relatavam o uso.de plantas para tratamento de diversos males e, com o aprimoramento dos estudos e técnicas de purificação, isolamento e identificação dos princípios ativos, foi possível o desenvolvimento de medicamentos para utilização em diversas patologias, inclusive na quimioterapia do câncer. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade anticâncer de duas espécies da flora brasileira, Anacardium humile St. Hil. e Pothomorphe umbellata (L.) Miquel, de uso medicinal popular. Os extratos brutos diclorometânico (EBD) e etanólico (EBE) das folhas dessas espécies foram avaliados em ensaio de citotoxicidade in vitro em cultura de células tumorais humanas. Como o EBD de P. umbellata apresentou o melhor perfil de atividade in vitro, foi selecionado para avaliação em modelo de câncer murino, o tumor ascítico de Ehrlich. Nesse modelo, esse extrato apresentou atividade anti-tumoral dose dependente e, com isso, a identificação dos princípios responsáveis por essa atividade tomou-se fundamental. Desse modo, o EBD foi submetido a diversos procedimentos cromatográficos, sendo as frações obtidas biomonitoradas pelo teste de citotoxicidade. Esse procedimento permitiu a identificação de duas frações com elevada potência e seletividade anticâncer, sendo que na primeira fração (A) foram identificados derivados do ácido oxálico e na segunda (C), esteróides e triterpenos. A indução de morte celular por apoptose, avaliada por imunocitoquímica, foi significativa nas células UACC-62, OVCAR-3 e NCIADR/ RES quando tratadas pela fração A e nas células UACC-62, OVCAR-3 e 786-0, quando tratadas pela fração C. Uma outra fração (B), constituída principalmente do composto 4-nerolidilcatecol, não apresentou atividade anticâncer significativa. Esses resultados estimulam a continuidade dos estudos com a P. umbellata, com o objetivo de identificar os princípios ativos, determinar o mecanismo de ação anticâncer e comprovar sua atividade em modelos experimentais de câncer in vivo Abstract: Plants are used in folk medicine since old times of human history, and improvements in techonology, research, purification techniques, isolation and identification of active principIes have allowed the discovery and development of new molecules as drugs for terapheutics of many diseases, such as cancer. This work aimed the evaluation of the anticancer activity of two Brazilian species, Anacardium humile St. Hil. and Pothomorphe umbellata (L.) Miquel, used in folk medicine. Dichlorometanic (DCE) and ethanolic (ECE) crude extracts obtained from leaves of both species were tested in an in vitro citotoxicity assay against human cancer celllines. As long as P. umbellata's DCE showed the best anticancer activity profile, it was also evaluated in a murine cancer model, the Ehrlich Ascite Tumor (EAT). In this experiment, DCE also demonstrated a dose response relationship anticancer activity; therefore the isolation and identification of the active principIe responsible for that activity became the major focus of this work. As a result, DCE was submitted to many cromatographic procedures which were bioguided by the anticancer assay in vitro. This chromatographic purifications permitted identification of two main fractions with high potency and selectivity: fraction A consitituted by oxalic acid derivatives, and fraction C by steroids and triterpenes. The quantification of apoptosis induction by immuncytochemical analysis were significant for UACC-62, OVCAR-3 and NCI-ADR/ RES celllines treated with fraction A, whereas UACC-62, OVCAR-3 and 786- o cells lines went to apoptosis when exposed to fraction C. A third fraction, denominated fraction B, was rich in 4-nerolidylcathecol, widely knowm for this plant specie, and did not show any significative anticancer activity. These results encouraged following up on studies with P. umbellata, priorizing the identification of active principIes, the determination of anticancer mechanism of action and to prove the anticancer activity in experimental cancer models in vivo Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O tratamento eficaz do câncer ainda desafia a medicina, uma vez que as estratégias até então empregadas não se mostram suficientemente seguras e capazes de eliminar de maneira específica as células tumorais. O câncer de próstata (CaP) é uma neoplasia maligna altamente incidente e o desfecho dos pacientes depende diretamente do tratamento adotado, sobretudo da eficácia dos quimioterápicos utilizados. Nesse contexto, a busca por produtos naturais ativos com ação antineoplásica tem se mostrado promissora. No presente estudo é relatado o efeito citotóxico de diferentes extratos vegetais (obtidos de espécies do cerrado brasileiro) e da substância 4-nerolidilcatecol (4-NC) frente a células tumorais prostáticas. Além disso, o 4-NC foi avaliado quanto à sua capacidade de suprimir diferentes mecanismos associados ao CaP. Foram cultivadas três linhagens celulares de próstata: RWPE-01 (não tumorigênica), LNCaP (tumorigênica sensível a andrógeno) e PC3 (tumorigênica resistente à castração). Estas foram tratadas, individualmente, com extratos hexânicos, clorofórmicos e hidrometanólicos de 10 espécies vegetais e a citotoxicidade avaliada pelo método MTT. O extrato hexânico de Pothomorphe umbellata se mostrou promissor ao diminuir a viabilidade das linhagens tumorais. A substância obtida deste extrato hexânico de P. umbellata, o 4-NC, apresentou citotoxicidade seletiva contra linhagens de CaP, em especial sobre as linhagens PC3, induzindo também a apoptose, alterando o potencial de membrana mitocondrial e reduzindo a proliferação e invasão. Finalmente, a análise da expressão de 84 genes associados a diferentes vias oncogênicas demonstrou que o 4-NC é capaz de modular, além da apoptose e ciclo celular, o mecanismo de Transição epitélio-mesenquimal (EMT), angiogênese e hipóxia nas células PC3. Nossos achados elucidaram a atividade antitumoral do 4-NC frente a células de CaP, o qual se mostrou promissor sobretudo na supressão de mecanismos oncogênicos do modelo resistente à castração. Estudos adicionais são necessários para melhor descrever seu comportamento validando o 4-NC como uma nova alternativa para o tratamento do CaP avançado ou como protótipo para o desenvolvimento de novos fármacos antitumorais. Effective cancer treatment still challenges medicine, since the strategies employed so far are not sufficiently safe and capable of specifically eliminating tumor cells. Prostate cancer (PCa) is a highly incident malignant neoplasm and the outcome of patients depends directly on the treatment adopted, especially on the efficacy of the chemotherapeutic agents. In this context, the search for active natural products with antineoplastic action is promising. In the present study, is reported the cytotoxic effect of different plant extracts from Brazilian savanna and of the substance 4-nerolidylcatechol (4-NC) against prostate tumor cells. In addition, 4-NC was evaluated for its ability to suppress different mechanisms associated with CaP. Three prostate cell lines were cultured: RWPE-01 (non-tumorigenic), LNCaP (tumorigenic sensitive to androgen) and PC3 (tumorigenic resistant to castration). They were individually treated with hexanic, chloroformic and hydromethanolic extracts from 10 plant species and the cytotoxicity evaluated by the MTT method. The hexanic extract of Pothomorphe umbellata was promising by decreasing the viability of the tumor cell lines.The substance obtained from this hexanic extract of P. umbellata, 4-NC, showed selective cytotoxicity against PCa lineages, especially on PC3, inducing apoptosis, altering mitochondrial membrane potential and reducing proliferation and invasion. Finally, analysis of the expression of 84 genes associated with different oncogenic pathways demonstrated that 4-NC modulated apoptosis, cell cycle, epithelial-mesenchymal Transition (EMT), angiogenesis and hypoxia in PC3 cells. Our findings elucidated the antitumor activity of 4-NC against PCa, which was promising especially in the suppression of oncogenic mechanisms of the castration-resistant model. Further studies are needed to better describe their behavior by validating 4-NC as a new alternative for the treatment of advanced CaP or as a prototype for the development of new antitumor drugs. Dissertação (Mestrado) 2023-05-19

O trabalho demonstra os resultados obtidos de análises de toxicidade aguda e análises fitoquímicas da planta Pothomorphe umbellata, também conhecida como pariparoba, sendo este natural da mata Atlântica indo da Amazônia até a região do estado de São Paulo e Paraná, usada popularmente para fins terapêuticos pela população. Os testes foram respectivamente o DPPH, HPLC flavonoides e fenóis totais. Estudos apontam que a Pothomorphe umbellata possui atividade antioxidante e antienvelhecimento devido a presença da fenilpropanóide 4-nerolidilcatecol. A toxicologia estuda o efeito de determinadas substâncias em organismos vivos. Portanto, realizou-se o teste agudo-letal em Artemia salina, que consiste na análise da exposição do bioindicador ao composto durante um intervalo de 24 horas. Entretanto, diversos fatores ambientais como luz, umidade e concentração das substâncias influenciam na eficiência dos resultados. Pothomorphe Umbellata é composta quimicamente por nerolidilcatechol, pigmentos, flavonóides, lactonas diterpênicas, saponinas, fitosteróis, polifenóis, taninos e óleos essenciais. Os resultados sugerem boa margem de segurança em relação ao uso da planta analisada, em virtude da presença de alto nível de intoxicação provocada por esta, ou seja, o propósito deste artigo é contribuir para a análise do impacto da intoxicação por Pothomorphe Umbellata. O estudo acima foi conduzido na Universidade Anhembi Morumbi, campus Mooca, durante o período de agosto de 2017 a setembro de 2018.

Made available in DSpace on 2016-07-07T12:36:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-07T12:45:07Z : No. of bitstreams: 1 S1516-05722015000100150.pdf: 427286 bytes, checksum: 20ed0b4ec077d6f077f1197ae8e435bc (MD5) O presente trabalho visou avaliar a influência de diferentes tempos de extração no teor e composição química do óleo essencial da espécie Pothomorphe umbellata. Folhas de pariparoba foram coletadas em Cajamar – SP, no mês de junho de 2006. O delineamento experimental adotado foi inteiramente casualizado, com seis tempos de extração (90, 120, 150, 180, 210 e 240 minutos) e 4 repetições. A extração do óleo essencial foi realizada por hidrodestilação e a análise química em CG-EM. O tempo de 180 minutos proporcionou maior rendimento do óleo essencial (0,42%), enquanto a composição química não foi influenciada pelos diferentes tempos de destilação. As principais substâncias identificadas foram: D-germacreno (65,5%), alfa-selineno (9,7%), trans-cariofileno (7,5%), e espatulenol (6,58%). Conclui-se que o tempo de extração afeta diretamente o rendimento e a proporção das substâncias químicas, recomendando-se a extração em até 180 minutos. The present work aimed to evaluate the influence of different times of extraction in the yield and chemical composition of the essential oil of “pariparoba” (Pothomorphe umbellate). Leaves of “pariparoba” were collected in the municipal district of Cajamar – state of São Paulo, Brazil, in June 2006. The adopted experimental design was completely randomized, with six times of extraction (90, 120, 150, 180, 210, and 240 minutes) and 4 repetitions. The extraction of the essential oil was accomplished by hydrodistillation, and the chemical analysis was performed in GC-MS. The time of extraction of 180 minutes provided greater yield of the essential oil (0.42%), and its chemical composition was not influenced by the different times of hydrodistillation. The main substances showed are D-germacrene (65.5%), alpha-selinene (9.7%), trans-caryophyllene (7.5%) and spathulenol (6.58%). The results of this work showed that the time of extraction affects the yield and the proportion of the chemical substances and it is recommended the extraction in up to 180 minutes. Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho (UNESP), Faculdade de Ciências Agronômicas (FCA), Departamento de Horticultura, Botucatu, SP, Brasil Instituto Agronômico de Campinas (IAC), Laboratório de Produtos Naturais, Campinas, SP, Brasil Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho (UNESP), Faculdade de Ciências Agronômicas (FCA), Departamento de Horticultura, Botucatu, SP, Brasil

Aim: To assess the biocompatibility of an experimental endodontic paste based on the ethyl acetate fraction of Pothomorphe umbellata + calcium hydroxide, using propylene glycol as vehicle, in connective tissue of rats. Materials and Methods: Fifteen rats had four polyethylene tubes implanted in their backs, with each one containing the experimental paste. The tube side was considered the control group. After 7, 21, and 42 days, animals were euthanized. Results: Intense inflammatory reaction was noticed after 7 days for experimental paste and it was moderate for control group. At 21 days, the inflammatory reaction was moderate for experimental paste and discrete for control group; and at 42 days, it was discrete for experimental paste and control group. Statistical analysis (Dunn's test, P < 0.01) demonstrated significant difference between the fibrous capsule area at 7 and 42 days (P > 0.01) for experimental paste. Conclusions: Experimental endodontic paste presented satisfactory tissue reaction in the connective tissue of rats.

The cytotoxicity of the dichloromethane crude extract (DCE), obtained from the aerial parts of Pothomorphe umbellata (L.) Miq (Piperaceae), was evaluated against nine human cancer cell lines (MCF-7, NCI-ADR/RES, OVCAR-3, PC-3, HT-29, NCI-H460, 786-O, UACC-62, K-562). The DCE presented antiproliferative activity with good potency against all cell lines at low concentrations (between 4.0 and 9.5 µg/mL) and with selectivity (1.55 µg/mL) for the leukemia cell line (K-652). DCE (100, 200, 300 and 400 mg/kg, ip) was also evaluated in the Ehrlich ascites tumor model. Both the survival number and the life span of the animals that died increased by at least 45 and 50%, respectively (8 animals per group), demonstrating P. umbellata extract potential anticancer activity. The results of the in vivo antitumor activity prompted the fractionation of the crude extract. The crude extract was submitted to dry column chromatography with dichloromethane-methanol (99:1). The column effluent fractions were extracted with methanol, dried under vacuum yielding fractions FR1 (less polar), FR2 (medium polarity), and FR3 (polar), which were analyzed for their growth inhibition or cytotoxic properties by a 48-h sulforhodamine B cell viability assay by measuring the total protein content. FR1 demonstrated high potency and cytotoxicity, a result compatible with the high toxicity of oxalic acid; FR2, containing 4-nerolidylcathecol, presented the lowest cytotoxic activity compared to the other two fractions but with selectivity for prostate cancer cell line; FR3, containing a mixture of steroids described in the literature as possessing various biological activities, also presented potent anticancer in vitro activity. These results suggest that P. umbellata DCE in vivo antitumor activity may be a consequence of the activity of different active principles.

A maioria das pesquisas realizadas até hoje sobre os efeitos benéficos da pariparoba (Pothomorphe umbellata L. Miq) foi feita com o extrato da raíz desta espécie, e o seu emprego em larga escala comprometeria a exploração sustentável deste insumo natural. Neste sentido o uso das folhas da pariparoba, ao invés de raízes pela indústria cosmética, não põe em risco a existência da espécie. Neste trabalho foi determinada a concentração de 4-nerolidilcatecol (4-NC) de um extrato de folhas por metodologia analítica validada em nosso laboratório, cujo valor foi cerca de 30% menor que no extrato de raiz, obtido da mesma maneira. Na avaliação de fotoestabilidade do extrato de folhas, uma solução de 0,25 mg/mL não apresentou alterações significativas do perfil espectroscópico após 2 horas de exposição à radiação UVB, demonstrando sua estabilidade. Metaloproteinases (MMPs) são endopeptidases dependentes de zinco, envolvidas na remodelagem da matriz extracelular (MEC), e importantes na formação das rugas típicas do fotoenvelhecimento cutâneo. Também avaliamos, por técnica de zimografia, a capacidade do extrato de folhas de P. umbellata de inibir a atividade de MMPs 2 e 9 in vitro de pele de camundongos sem pêlo. O extrato de folhas (0,1 mg/mL) inibiu em 80% a atividade destas enzimas, conforme avaliação densitométrica. Most researches that have been done until today about the beneficial effects of pariparoba (Pothomorphe umbellata L. Miq) have been done with root extract of this species, but the use in large scale would compromise the sustainable exploration of this natural resource. In this sense, the utilization of pariparoba leaves, substituting the roots, in the cosmetic industry does not put in risk the existence of the species. In this work the concentration of 4-nerolidylcathecol (4-NC) in leaf extract was determined by the analytical methodology validated in our laboratory. The concentration of 4-NC in leaf extract was around 30% less than that of root extract, obtained in the same way. Concerning the study of the photostability of a leaves extract solution containing 4-NC did not demonstrate meaningful alterations in the spectrometry profile after 2 hours of exposure under UVB radiation, showing its stability under this conditions. Metalloproteinases (MMPs) are endopeptidases that are zinc-dependent, involved in remodeling extracellular matrix (ECM), that are important in the appearance of typical photoaging wrinkles. In this work the capacity of leaf extract of P. umbellata to inhibit MMP-2 and 9 activities of hairless mouse skin in vitro by zymography gel was also evaluated. The leaf extract (0,1 mg/mL) inhibit in 80% activity of this enzymes, according to the densitometric zymography evaluation.

A maioria das pesquisas realizadas até hoje sobre os efeitos benéficos da pariparoba (Pothomorphe umbellata L. Miq) foi feita com o extrato da raíz desta espécie, e o seu emprego em larga escala comprometeria a exploração sustentável deste insumo natural. Neste sentido o uso das folhas da pariparoba, ao invés de raízes pela indústria cosmética, não põe em risco a existência da espécie. Neste trabalho foi determinada a concentração de 4-nerolidilcatecol (4-NC) de um extrato de folhas por metodologia analítica validada em nosso laboratório, cujo valor foi cerca de 30% menor que no extrato de raiz, obtido da mesma maneira. Na avaliação de fotoestabilidade do extrato de folhas, uma solução de 0,25 mg/mL não apresentou alterações significativas do perfil espectroscópico após 2 horas de exposição à radiação UVB, demonstrando sua estabilidade. Metaloproteinases (MMPs) são endopeptidases dependentes de zinco, envolvidas na remodelagem da matriz extracelular (MEC), e importantes na formação das rugas típicas do fotoenvelhecimento cutâneo. Também avaliamos, por técnica de zimografia, a capacidade do extrato de folhas de P. umbellata de inibir a atividade de MMPs 2 e 9 in vitro de pele de camundongos sem pêlo. O extrato de folhas (0,1 mg/mL) inibiu em 80% a atividade destas enzimas, conforme avaliação densitométrica.Most researches that have been done until today about the beneficial effects of pariparoba (Pothomorphe umbellata L. Miq) have been done with root extract of this species, but the use in large scale would compromise the sustainable exploration of this natural resource. In this sense, the utilization of pariparoba leaves, substituting the roots, in the cosmetic industry does not put in risk the existence of the species. In this work the concentration of 4-nerolidylcathecol (4-NC) in leaf extract was determined by the analytical methodology validated in our laboratory. The concentration of 4-NC in leaf extract was around 30% less than that of root extract, obtained in the same way. Concerning the study of the photostability of a leaves extract solution containing 4-NC did not demonstrate meaningful alterations in the spectrometry profile after 2 hours of exposure under UVB radiation, showing its stability under this conditions. Metalloproteinases (MMPs) are endopeptidases that are zinc-dependent, involved in remodeling extracellular matrix (ECM), that are important in the appearance of typical photoaging wrinkles. In this work the capacity of leaf extract of P. umbellata to inhibit MMP-2 and 9 activities of hairless mouse skin in vitro by zymography gel was also evaluated. The leaf extract (0,1 mg/mL) inhibit in 80% activity of this enzymes, according to the densitometric zymography evaluation.

The in vitro ability of Pothomorphe umbellata ethanolic crude extract to inhibit matrix metalloproteinase (MMP) in normal cornea and in cornea after alkali injury was demonstrated. Corneas of albino rabbits were injured with 1 N NaOH for 20 s. After 48 h the corneas were excised, homogenized and analyzed for MMP-9 (92 kDa), pro-MMP-2 (72 kDa) and MMP-2 (67 kDa) activity by gelatin zymography. The activity was also measured in untreated corneas. After electrophoresis of 20 µg protein, gels were incubated with 50, 100, or 250 µg/mL lyophilized hydroethanolic (1:1) root crude extract of P. umbellata standardized for 4-nerolidylcatechol (7.09%). The activity of the enzymes was compared with that of untreated gel. At 48 h after injury, the activity of all MMPs was increased compared with untreated eyes. When the gels were incubated with P. umbellata extract the activity of MMP-2, pro-MMP-2 and MMP-9 decreased in a dose-dependent manner. MMP-9 activity decreased by approximately 50% after incubation with 50 µg/mL and was completely abolished at 100 and 250 µg/mL of the extract. After incubation with 50 µg/mL the activity of pro-MMP-2 and MMP-2 also decreased by 50%. The activity of pro-MMP-2 was almost completely abolished after incubation with 250 µg/mL of the extract. For MMP-2 the incubation with 100 or 250 µg/mL of the extract of P. umbellata promoted a 10-fold decrease in activity. In conclusion, P. umbellata root crude extract can be useful as an alternative therapy to control MMP activity after corneal injury.

Foi avaliada a influência dos fatores (1) tempo: 10 e 40 minutos; (2) tamanho de partícula: 840 e 420 mm; (3) hidromódulo: 1:50 e 1:100 e (4) temperatura: 40 e 60 °C na extração do 4-nerolidilcatecol, (4-NC) mediante planejamento fatorial "2(4)" em que quatro variáveis foram estudadas em dois níveis (máximo e mínimo). O método de extração foi maceração e a quantificação do 4-nerolidilcatecol foi realizada por cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE) com detetor eletroquímico. Os resultados da análise fatorial indicam que o fator principal que favorece a extração do princípio ativo é o tamanho de partícula [efeito (2): 12,2086]. Diminuindo o tamanho de partícula aumenta três vezes a quantidade de 4-nerolidilcatecol extraída, enquanto o tempo de maceração [efeito (1): -0,64198], hidromódulo [efeito (3): 1,069804] e temperatura [efeito (4): -0,64198] não influenciam de forma significativa a extração. As interações de dois fatores: (2:3) tamanho:hidromódulo: 1,181142; (2:1) tamanho:tempo: 0,9435065 e (2:4) tamanho:temperatura: 0,0817575 mostraram que apesar do fator tamanho(2) ter favorecido o processo, quando combinado com os demais fatores, não aumenta a eficiência da extração. A metodologia de otimização mediante análise fatorial aplicada ao processo de extração do 4-nerolidilcatecol demonstra a importância do estudo das interações e não de cada fator isolado.The influence of factors: (1) time, 10 and 40 minutes, (2) particle size, 840 and 420 mm; (3) hydromodule, 1:50 and 1:100, and (4) temperature, 40 and 60 °C, in the extraction of 4-nerolidylcathecol (4-NC) from the roots of P. umbellata using factorial design "2(4)" was studied in two levels (maximal and minimal). The extraction method was maceration and the measurement of 4-NC was by HPLC with electrochemical detection. The results of the factorial analysis indicated that the main factor that increases the extraction of the active principle is particle size [effect (2): 12.2086]. The reduction of the particle size (mesh 60) increases threefold the amount of 4-nerolidylchatecol in the extract, while the time of maceration [effect (1): -0.64198], hydromodule [effect (3): 1.069804] and temperature [effect (4): -0.64198] practically do not influence the extraction. Interaction between two factors (2:3) size-hydromodule 1.181142, (2:1) size-time 0.9435065 and (2:4) size-temperature 0.0817575, showed that although the main factor size (2) increases the efficiency of the process, when one of the other three factors was taken together the amount of 4-NC extracted was not significantly increased. The technique of optimization using factorial analysis to investigate the extraction of 4-nerolylilchatecol showed to be useful to notice the interactions between factors and not only the effect of each isolated factor.

The oral dosages formulations from Pothomorphe umbellata (Piperaceae) can only be therapeutically evaluated after establishing 4-nerolidylcatechol (4-NRC) pharmacokinetic profile in plasma. For that purpose, a unique analytical method validation using HPLC-UV detection was developed for analysis of rat plasma samples. The animals received 10 mg/kg b.w. of 4-NRC i.v.. Analytical conditions were set with C18 column, methanol: acetonitrile: water (62:20:18) as mobile phase, and a flow rate of 1.6 mL/min. The assay was linear from 1.0 - 80.0 mcg/mL. The recovery procedure was performed by liquid-liquid extraction showing quantitative extraction (106.4±8.7%). Limit of Quantification (LOQ) was found to be 1.0 mcg/mL. Interassay precision and accuracy ranged from values of 14.4-3.0% and 24.0-0.2%, respectively. Recovery after liquid-liquid extraction was found to be 106.5 ± 3%. The method is simple and reliable with total run time of less than 15 min.O 4-nerolidilcatecol representa o metabólito secundário mais abundante de Pothomorphe umbellata (Piperaceae), cujo uso terapêutico deve ser fundamentado após a caracterização farmacocinética do mesmo (4-nerolidicatecol). Os níveis séricos de animais tratados com 10 mg/kg do fármaco i.v. foram avaliados por validação analítica em CLAE-UV. As condições cromatográficas empregadas foram fase móvel de acetonitrila:metanol:água (62:20:18), coluna RP-18, fluxo de 1,6 mL/min e detector UV em 282 nm, com tempo total de corrida inferior a 15 minutos. Observou-se linearidade do 4-NRC em plasmas na faixa de 1,0 a 80,0 mcg/mL, com valores de precisão e exatidão entre 14,4-3,0% e 24,0-0,2%, respectivamente. O procedimento de extração líquido-líquido apresentou reprodutível e com recuperação quantitativa (106,5%±3,0%).

O objetivo do nosso trabalho foi desenvolver um método para avaliação da concentração do ±-tocoferol, considerado o antioxidante lipofílico de maior importância, e do 4-nerolidilcatecol (4-NC), uma substância natural com comprovada ação antioxidante in vitro e in vivo, em matriz biológica (homogeneizado de pele). Utilizamos a cromatografia de alta eficiência acoplada a um detector eletroquímico, sendo que o método apresentou linearidade para as concentrações de 0,025 µg/mL a 0,1 µg/mL para o ±-T (tempo de retenção 3, 4 min) e de 0,15 µg/mL a 2,5 µg/mL para o 4-NC (tempo de retenção 2,06 min), dissolvidos em etanol e etanol:água (1:1). A taxa de recuperação do ±-T adicionado nas concentrações de 0,5; 0,1 e 0,025 µg/mL aos homogeneizados de pele foi de 94,03; 111,2 e 80,7%, respectivamente. A taxa de recuperação de 4-NC adicionado nas concentrações de 2,5; 0,625 e 0,156 µg/mL foi de 103,7; 91,7 e 91,7%. Este método analítico foi e está sendo empregado, com sucesso devido à sua precisão e rapidez, em diversas análises do laboratório.Topical administration of antioxidants, such as ±-tocopherol (±-T), provides an efficient manner of enriching the endogenous cutaneous protection system, and it constitutes a successful strategy for diminishing the ultraviolet radiation-mediated oxidative damage. Besides ±-tocopherol the use of other natural occurring compounds with antioxidant activity has been proposed for the same purpose. The aim of this study was to develop a validated analytical method for the determination of a-tocopherol and 4-nerolidylcathecol (4-NC) concentrations in skin homogenates in a pharmaceutical formulations. We employed liquid chromatography with electrochemical detection. Chromatography was performed on a Supelcosil LC-8, 3 mm, 75x4.6 mm column (Supelco, Bellefonte, PA, USA) with a mobile phase of methanol:water (9:1) for 4-NC and (95:5) for a-T, both containing 20 mM LiClO4 and 2 mM KCl. The flow rate was set at 1.0 ml/min. We established validation parameters including sensitivity, precision, accuracy, stability and found a linear relationship between the concentrations ranges of 0.025 µg/mL to 0.1 µg/mL of ±-T and 0.15 mg/mL to 2.5 mg/mL of 4-NC. The recovery of ±-T from skin homogenates was 94.03, 111.2 and 80.7% for the concentrations of 0.5, 0.1 and 0.025 µg/mL respectively. The recovery for the following concentrations of 4-NC: 2.5, 0.625 and 0.156 µg/mL was 103.7, 91.7 and 91.7%. This analytical procedure has been successfully employed in cutaneous permeation studies, antioxidant activity studies and determinations of 4-NC in Pothomorphe umbellata root extracts.

The crude ethanolic extract from aerial parts ofPothomorphe umbellataL. (Piperaceae) and fractions obtained by partitions sequentially among water-methanol, methylene chloride, and ethyl acetate, as well as the major constituent, 4-nerolidylcatechol, were, respectively, evaluated and evidenced for antioxidant and cytotoxic effects through fluorometric microplate and microculture tetrazolium assays in HL-60 cells. The crude ethanolic extract demonstrated the preeminent antioxidant activity (IC50=1.2 μg/mL) against exogenous cytoplasmic reactive oxygen species, followed by the water-methanolic (IC50=4.5 μg/mL), methylene chloride (IC50=5.9 μg/mL), ethyl acetate (IC50=8.0 μg/mL), 4-nerolidylcatechol (IC50=8.6 μg/mL), and the sterol fractions (IC50>12.5 μg/mL). Vitamin C, the positive control used in this assay, presented IC50value equivalent to 1.7 μg/mL. 4-Nerolidylcatechol (IC50=0.4 μg/mL) and methylene chloride fraction (IC50=2.3 μg/mL) presented considerable cytotoxicity probably because of the presence of ano-quinone, an auto-oxidation by product of the catechol. Polar compounds, present in the ethanol extract, appear to increase the solubility and stability of the major active constituent, acting synergistically with 4-nerolidylcatechol, improving its pharmacokinetic parameters and increasing significantly its antioxidant activity which, in turn, suggests that the aqueous-ethanolic extract, used in folklore medicine, is safe and effective.

A Pothomorphe umbellata (L.) Miq. é uma espécie da família Piperaceae, conhecida no Brasil como “Caapeba”, “Caapeba do Norte” ou “Pariparoba” sendo muito utilizada como analgésico, antiinflamatório e anti-espasmódico. De acordo com estudos científicos, o 4nerolidilcatecol (4-NC) que é o principal metabólito secundário da P. umbellata, apresenta atividade antioxidante superior à da vitamina E. A incorporação dos extratos de P. umbellata (L.) Miq. em formas farmacêuticas sólidas (FFS) é uma estratégia interessante para viabilizar seu uso como agente antioxidante de uso oral e para estabilização de seu princípio ativo lábil, o 4-NC. Os pellets são FFS de uso oral que apresentam boas propriedades de escoamento, devido a sua forma esférica; estreita distribuição de tamanho, além disso, os pellets permitem obter dispersão uniforme das doses dos fármacos e incorporação de grande quantidade de substâncias ativas incompatíveis em uma mesma forma farmacêutica. O objetivo deste trabalho foi obter um extrato de P. umbellata, desenvolver e caracterizar uma forma farmacêutica sólida multiparticulada e avaliar a estabilidade do 4-NC nas formulações desenvolvidas. As raízes de P. umbellata foram submetidas às análises de umidade residual, de determinação do índice de intumescência, de teor de cinzas totais e determinação granulométrica. A identificação de constituintes da amostra vegetal foi realizada por cromatografia de camada delgada (CCD). A obtenção do extrato hidroalcoólico foi realizada por percolação. A quantificação de 4-NC foi determinada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) UV-Vis. O método analítico foi validado segundo a Resolução RE n° 899 da ANVISA. A determinação da atividade antioxidante do 4-NC isolado e do percolado foi avaliada utilizando-se espectrofotômetro UV-Vis através da técnica que avalia a atividade sequestradora do radical livre 2,2-difenil-1-picril-hidrazila, (DPPH•). Os pellets foram produzidos pela técnica de extrusão/esferonização utilizando-se líquido de granulação constituído pelo percolado, dióxido de silício coloidal e polissorbato 80. Os excipientes utilizados foram celulose microcristalina, lactose e hidroxipropilmetilcelulose (HPMC). A secagem dos pellets foi feita em estufa e o revestimento em leito fluidizado. HPMC, povidona e copolímero - composto de polivinilálcool:polietilenoglicol (75:25) - foram os polímeros testados no revestimento. O estudo da fotoestabilidade acelerada foi realizado segundo as normas descritas pelo International Conference on Harmonisation (ICH), avaliando-se a degradação do ativo em solução, na solução extrativa (percolado) e na forma farmacêutica sólida (pellets não revestidos e revestidos). Os pellets foram caracterizados através da distribuição de tamanho, morfologia e friabilidade. A morfologia externa dos pellets foi avaliada através de estereomicroscópio e a espessura do revestimento foi verificada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O teor de umidade da droga vegetal foi de 6,33% ± 0,305, o teor de cinzas totais foi de 8,25% ± 0,61 o índice de intumescência de 3,30mL ± 0,87 e o tamanho médio do pó foi de 170,26 µm. O método analítico para o 4-NC foi linear na faixa de 10 a 200 μg/mL. Os limites de quantificação (LQ) e de detecção (LD) calculados foram de 1,42 e 0,42μg/mL. A precisão apresentou desvio padrão relativo (DPR) menor que 5,0%. A percolação foi um processo eficiente na extração do 4-NC. A produção dos pellets a partir da técnica de extrusão/esferonização foi satisfatória apresentando um produto de tamanho uniforme em média de 1000 μm. No estudo da atividade antioxidante, o valor da concentração efetiva (CE50) encontrada para o 4-NC isolado e o presente no percolado foi cerca de duas vezes mais potente que a vitamina E. No estudo de fotoestabilidade do 4-NC presente nos pellets revestidos, o copolímero utilizado no revestimento foi o que ofereceu maior proteção do 4-NC contra a fotodegradação. Considerando a inviabilidade de obtenção de formas farmacêuticas sólidas com o ativo puro, conclui-se que o uso do extrato contendo o 4-NC é considerado mais vantajoso uma vez que a tecnologia farmacêutica pode melhorar a estabilidade do ativo contra a degradação. Pothomorphe umbellata (L.) Miq. Piperaceae is known in Brazil as "caapeba", "caapeba North" or "Pariparoba" being widely used as an analgesic, anti-inflammatory and antispasmodic. According to scientific studies, 4-nerolidylcatechol (4-CN) is the main secondary metabolite of P. umbellata, has antioxidant activity greater than that of vitamin E. The incorporation of the extracts of P. umbellata (L.) Miq. in solid dosage forms is an interesting strategy to enable its use as an oral antioxidant and stabilizing its active labile 4-NC. Pellets are oral dosage forms which have good flow properties due to their spherical shape, narrow size distribution, in addition, the pellets allow to obtain uniform dispersion of doses of drug and incorporation of large amounts of active substances incompatible in the same pharmaceutical form. The objective of this study was to obtain an extract of P. umbellata, develop and characterize a multi-particulate solid dosage form and evaluate the stability of the developed formulations containing 4-NC. The roots of the plant material of P. umbellata was subjected to analysis of content, residual moisture, determination of swelling index, total ash content and granulometric determination. The identification of plant constituents of the sample was made by thin layer chromatography (TLC). Obtaining the hydroalcoholic extract was made by percolation. Quantitation of 4-NC was performed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC-UV-Vis). The analytical method was validated for the parameters required in Resolution N°. 899, ANVISA. The determination of antioxidant activity of the isolated 4-NC and the percolated was evaluated using UV-Vis spectrophotometer using a technique that measures the activity of scavenging free radical 2,2-diphenyl-1-picril-hydrazyl (DPPH •). The pellets were produced by extrusion technique / spheronisation using granulation liquid consisting of the percolated, colloidal silicon dioxide and polysorbate 80. The excipients were microcrystalline cellulose, lactose and hydroxypropyl methylcellulose (HPMC). The drying of the pellets was done in an oven and fluidized bed coating. HPMC, povidone and copolymer (polyvinyl alcohol polyethylene glycol graft copolymer) were tested in the polymer coating. Accelerated photostability study was performed according to standards described by the ICH International Conference on Harmonisation evaluating 4-NC degradation in the extraction solution (percolated) and the solid dosage form (uncoated and coated pellets). The pellets were characterized by size distribution, morphology and friability. The external morphology of the pellets was evaluated through a stereomicroscope and the thickness of the coating was observed by Scanning Electron Microscopy (SEM). The result obtained for the moisture content was 6.33 ± 0.305% for total ash content: 8.25% ± 0.61 and swelling index of 3.30 ± 0.87mL and an average particle size of the powder was 170.26μm. The analytical method for 4-NC was linear in the range 10 to 200µg/mL. LQ and LD were calculated 1.42 and 0.42 µg/mL. The accuracy showed less than 5.0% relative standard deviation (RSD). The percolation process was efficient in the extraction of 4-NC. The production of pellets from the extrusion technique/spheronisation was presenting a satisfactory product was uniform with an average size of 1000 μm. In the study of antioxidant activity, the effective concentration (EC50) value found for the isolated 4-NC and present in the percolated was about two times more potent than vitamin E. In the study of photostability of 4-NC present in the coated pellets, the copolymer coating was used in which offered more protection to the active 4-NC against photodegradation. Given the impossibility of obtaining solid dosage forms with pure active, the use of the extract containing the 4-NC is considered more advantageous since the pharmaceutical technology can improve the stability of the asset against degradation. Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-21T20:46:40Z No. of bitstreams: 1 Tese - Andr?? Augusto Franco Marques.pdf: 3059275 bytes, checksum: 230e88d27aae136b483d32f432cb2f50 (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T15:18:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Andr?? Augusto Franco Marques.pdf: 3059275 bytes, checksum: 230e88d27aae136b483d32f432cb2f50 (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T15:23:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Andr?? Augusto Franco Marques.pdf: 3059275 bytes, checksum: 230e88d27aae136b483d32f432cb2f50 (MD5) Made available in DSpace on 2015-07-23T15:23:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Andr?? Augusto Franco Marques.pdf: 3059275 bytes, checksum: 230e88d27aae136b483d32f432cb2f50 (MD5) Previous issue date: 2009-06-05 N??o informada Several chemical substances are used in endodontics as intracanal medication, aiming at diminishing the bacterial contingent present in teeth with pulp necrosis. In this study 4 medicinal pastes were comparatively analyzed, namely: Calcium hydroxide + propylene glycol (Group 1), ethyl acetate fraction of Pothomorphe umbellata + propylene glycol (Group 2), ethyl acetate fraction of Pothomorphe umbellata + propylene glycol + calcium hydroxide (Group 3), ethyl acetate fraction of Pothomorphe umbellata + propylene glycol + calcium hydroxide + zinc oxide (Group 4). For this purpose, 15 male rats weighing 250 g in average were distributed in accordance with the experimental periods: 7, 21 and 42 days). The pastes were administered via polyethylene tubes that were then implanted in the subcutaneous tissue of rats, in the dorsal region, being 2 scapular and 2 pelvic regions totalizing 4 tubes per animal. After the stipulated periods, the animals were sacrificed and the tissues were processed in a laboratory to obtain the histological cuts for future histopathologic analysis. The results were classified regarding severity of the inflammatory reaction and quantified with regard to the number of cells present in pre-determined areas. The results showed diminishment of inflammatory response and good tissue tolerance during the course of experimental periods. Macrophagic activity carried out by the mononuclear phagocytes and giant inflammatory cells showed to be accentuated in the initial periods decreasing in the final periods and irritant potential becoming acceptable during the course of the periods studied. Statistical analysis showed no significant statistical difference between the pastes tested in comparison with the histopathologic events assessed, but there was a significant statistical difference regarding the histopathologic events when compared with the different experimental moments. It may be concluded that the pastes with ethyl acetate fraction of Pothomorphe umbellata presented an acceptable irritant potential when used in the subcutaneous conjunctive tissue of rats. Diversas subst??ncias qu??micas s??o utilizadas na Endodontia como medica????o intracanal, visando ?? diminui????o do contingente bacteriano presente em dentes com necrose pulpar. No presente estudo foram analisadas comparativamente 4 pastas medicamentosas, a saber: hidr??xido de c??lcio + propilenoglicol (Grupo 1), fra????o acetato de etila de Pothomorphe umbellata + propilenoglicol (Grupo 2), fra????o acetato de etila de Pothomorphe umbellata + propilenoglicol + hidr??xido de c??lcio (Grupo 3), fra????o acetato de etila de Pothomorphe umbellata + propilenoglicol + hidr??xido de c??lcio+ ??xido de zinco (Grupo 4). Para tanto, 15 ratos machos pesando em m??dia 250 g foram distribu??dos de acordo com os per??odos experimentais: 7, 21 e 42 dias. As pastas foram veiculadas em tubos de polietileno, que por sua vez foram implantados em tecido subcut??neo de ratos, na regi??o dorsal, sendo 2 escapulares e 2 p??lvicos, num total de 4 por animal. Decorridos os per??odos estipulados, os animais foram ortotamizados e os tecidos foram processados em laborat??rio para a obten????o dos cortes histol??gicos, para posterior an??lise histopatol??gica. Os resultados foram classificados quanto ?? severidade da rea????o inflamat??ria e quantificados com rela????o ao n??mero de c??lulas presentes em ??reas pr??-determinadas. Os resultados demonstraram a diminui????o da resposta inflamat??ria e boa toler??ncia tecidual no decorrer dos per??odos experimentais. A atividade macrof??gica exercida por fag??citos mononucleares e c??lulas gigantes inflamat??rias mostrou-se acentuada nos per??odos iniciais com queda nos per??odos finais e aceit??vel potencial irritativo no decorrer dos per??odos estudados. A an??lise estat??stica demonstrou n??o haver diferen??a estat??stica significante entre as pastas testadas em rela????o aos eventos histopatol??gicos avaliados, por??m ocorreu diferen??a estat??stica significante em rela????o aos eventos histopatol??gicos quando comparados os diferentes tempos experimentais. Conclui-se que as pastas contendo a fra????o acetato de etila de Pothomorphe umbellata apresentaram aceit??vel potencial irritativo quando utilizada em tecido conjuntivo subcut??neo de ratos.

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T19:05:28Z No. of bitstreams: 1 S1516-05722009000300015.pdf: 45163 bytes, checksum: 34e69424a51b61f604bb7f92b84b429e (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T19:05:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S1516-05722009000300015.pdf: 45163 bytes, checksum: 34e69424a51b61f604bb7f92b84b429e (MD5) Previous issue date: 2009-01-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T17:47:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S1516-05722009000300015.pdf: 45163 bytes, checksum: 34e69424a51b61f604bb7f92b84b429e (MD5) S1516-05722009000300015.pdf.txt: 21044 bytes, checksum: deaf25419e35ba11e4172899b90d2344 (MD5) Previous issue date: 2009-01-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T13:21:03Z No. of bitstreams: 2 S1516-05722009000300015.pdf: 45163 bytes, checksum: 34e69424a51b61f604bb7f92b84b429e (MD5) S1516-05722009000300015.pdf.txt: 21044 bytes, checksum: deaf25419e35ba11e4172899b90d2344 (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T13:21:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S1516-05722009000300015.pdf: 45163 bytes, checksum: 34e69424a51b61f604bb7f92b84b429e (MD5) S1516-05722009000300015.pdf.txt: 21044 bytes, checksum: deaf25419e35ba11e4172899b90d2344 (MD5) Previous issue date: 2009-01-01 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O presente trabalho foi conduzido no Departamento de Produção Vegetal da Faculdade de Ciências Agronômicas da UNESP de Botucatu, durante o período de agosto a dezembro de 2006. O experimento constou de dois tipos de estacas, com um e dois nós, e três diferentes substratos: areia fina, solo (Latossolo Vermelho distrófico) e um mix (solo + esterco bovino + substrato comercial + vermiculita na proporção 3:1:1:1). O delineamento experimental foi um fatorial 2 x 3 com quatro repetições em blocos inteiramente casualizados. Foram analisadas as variáveis biométricas: porcentagem de sobrevivência de plantas, número e comprimento de folhas, massa fresca e seca de folhas e raízes. Os resultados obtidos foram submetidos, à Análise de Variância e as médias ao teste de Tukey com probabilidade de 5%. As estacas com um nó apresentaram maior porcentagem de sobrevivência de plantas quando comparadas com as com dois nós e, as estacas propagadas no substrato mix, apresentaram maiores valores comprimento de folhas, massa fresca e seca de folhas e raízes. Portanto, recomenda-se propagar estacas de P. umbellata com um nó em um substrato nas proporções 3:1:1:1 (v/v) de solo + esterco bovino + substrato comercial + vermiculita. This experiment was carried out at the Department of Plant Production, College of Agronomical Sciences, São Paulo State University - UNESP, Botucatu, São Paulo State, Brazil, from August to December 2006. The experiment included two types of cuttings, with one and two nodes, and three different substrates: fine sand, soil (Dystrophic Red Latosol) and a mix (soil + cattle manure + commercial substrate + vermiculite, at the proportion 3:1:1:1). The experimental design was in a 2 x 3 factorial arrangement with four replicates in completely randomized blocks. The following biometric variables were analyzed: percentage of plant survival, leaf number and length, besides leaf and root dry and fresh mass. The obtained results were subjected to Analysis of Variance and the means to Tukey's test with 5% probability. Cuttings with one node had higher percentage of plant survival, compared to those presenting two nodes, and cuttings propagated on the mix substrate had higher values of leaf length, and leaf and root dry and fresh mass. Therefore, P. umbellata cuttings with one node are recommended to be propagated on a substrate with the proportions 3:1:1:1 of soil + cattle manure + commercial substrate + vermiculite. UNESP Faculdade de Ciências Agronômicas Departamento de Produção Vegetal UNESP Faculdade de Ciências Agronômicas Departamento de Produção Vegetal

Submitted by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2009-06-22T17:22:52Z No. of bitstreams: 1 CarolinaBecker.pdf: 503088 bytes, checksum: 6691aa24c9b4dfc671a9feae5b2172a0 (MD5) Made available in DSpace on 2009-06-22T17:22:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarolinaBecker.pdf: 503088 bytes, checksum: 6691aa24c9b4dfc671a9feae5b2172a0 (MD5) O uso de compostos químicos sintéticos para o controle de pragas é amplamente utilizado no cultivo de plantas, os quais desfavorecem a estabilidade ecológica de sistemas naturais. Por serem menos agressivos e possuírem mais de um princípio ativo, os pesticidas naturais de origem vegetal podem minimizar as conseqüências indesejadas. Avaliou-se no presente trabalho o potencial acaricida dos óleos essenciais das espécies vegetais Acanthospermum australe, Casearia sylvestris e Pothomorphe umbellata, em duas concentrações de solução etanólica (0,5% e 2,0%), além da análise de compisição dos extratos destas plantas por cromatografia gasosa e espectrometria de massas. Na análise de composição das plantas, os compostos em maior concenctração encontrados foram ß-elemeno (31,7%) e α-humuleno (28,2%) em C. sylvestris, apiol (46,6%) e dill apiol (14,5%) em P. umbellata. Em A. australe o elemento com maior concentração (81,0%) não foi identificado. A atividade acaricida foi constatada para as três plantas, após 72 horas na concentração 2,0%. O óleo de Acanthospermum australe foi o que apresentou desempenho mais próximo do acaricida comercial utilizado como controle negativo.

Pothomorphe umbellata, commonly known as pariparoba or capeba, occurs in humid environments and is used in almost entire Brazil due to its medicinal properties. The goals of this work were to understand the leaf anatomy of P. umbellata, to perform the histochemical characterization of the secretory structures present, and to describe the ontogeny of its secretory idioblasts. Regarding the structural characterization, leaf portions were fixed in FAA50 and stored in 70% ethanol. In respect to the study of the idioblast s ontogeny, leaf primordia from the middle portions of the leaf limb, under different developmental stages, were fixed in 2.5% glutaraldehyde in 0.05 M phosphate buffer, pH 7.0. Independently of the type of fixer used, the samples were dehydrated in ethylic series, included in methacrylate, and sliced in rotary microtome with 5µm of width, stained with Toluidine Blue, and mounted in coverslip with synthetic resin. The diaphanization was used in the surface study and assessment of the density of the idioblasts. For the leaf micromorphological characterization, samples of leaf primordia, under different developmental stage, were fixed in FAA50, stored in 70% ethanol, and processed for scanning electron microscopy. Concerning the histochemical analysis of the secretory structures, fresh leaves were transversally sectioned and submitted to several dyes and reagents. The leaf of P. umbellata presents thin epidermis and cuticle; it is hypostomatic, dorsiventral and presents supporting tissue restricted to the discontinuous strands of collenchyma. The idioblasts have mixed secretion, which present hydrophobic compounds (oleoresins) and hydrophilic compounds (phenolics and alkaloids). In the secretory trichomes, the secretion is comprised of flavonoids, predominantly. In the vascular bundles of the veins and petiole, there are noticed collapsed elements of the protoxylem, which accumulate mucilage. A large mucilaginous duct is observed in the petiole s medulla. The idioblasts present in the region of the veins of larger caliber were developed precociously from the fundamental meristem as well as from the protodermis. In the interveinal region, the idioblasts are originated from initials of the protodermis. At both regions, the idioblasts initials stand out from the other cells of the tissue by their large size, vacuolated cytoplasm, and presence of nucleus and nucleolus more conspicuous. The secretion of the idioblasts is kept in the leaf since the beginning until the leaf s senescence, what suggests to this structure a role of chemical defence along the leaf s life. The chemical defence, represented by the secretory structures and its secreted metabolites, compensates the lack of mechanical resistance in this species. Pothomorphe umbellata, conhecida popularmente como pariparoba ou capeba, ocorre em ambientes úmidos e é utilizada em quase todo o Brasil por suas propriedades medicinais. Os objetivos desse trabalho foram conhecer a anatomia foliar de P. umbellata, realizar a caracterização histoquímica das estruturas secretoras presentes e descrever a ontogenia dos seus idioblastos secretores. Para a caracterização estrutural, porções foliares foram fixadas em FAA50 e estocadas em etanol 70%. Para o estudo da ontogenia dos idioblastos, primórdios foliares e porções da região mediana do limbo foliar, em diferentes fases de desenvolvimento, foram fixadas em glutaraldeído 2,5% em tampão fosfato 0,05M, pH 7,0. Independente do tipo de fixador utilizado, as amostras foram desidratadas em série etílica, incluídas em metacrilato, cortadas em micrótomo rotativo com 5µm de espessura, coradas com azul de toluidina e montadas sob lamínula com resina sintética. A diafanização foi utilizada para o estudo de superfície e avaliação da densidade de idioblastos. Para a caracterização micromorfológica da folha, amostras de primórdios foliares e de folhas, em diferentes fases de desenvolvimento, foram fixadas em FAA50, estocadas em etanol 70% e processadas para microscopia eletrônica de varredura. Para a análise histoquímica das estruturas secretoras, folhas frescas foram seccionadas transversalmente em micrótomo de mesa e submetidas a diversos corantes e reagentes. A folha de P. umbellata apresenta epiderme e cutícula delgadas, é hipoestomática, dorsiventral e tem tecido de sustentação restrito às calotas de colênquima. Os idioblastos têm secreção mista, os quais apresentam compostos hidrofóbicos (oleorresinas) e hidrofílicos (fenólicos e alcalóides). Nos tricomas secretores, a secreção é composta predominantemente de flavonóides. Nos feixes vasculares das nervuras e do pecíolo são observados elementos de protoxilema colapsados, que acumulam mucilagem. Um grande canal mucilaginoso é observado na medula do pecíolo. Os idioblastos presentes na região das nervuras de maior calibre desenvolvem-se precocemente, tanto a partir do meristema fundamental como da protoderme. Na região intervenal, os idioblastos originam-se apenas a partir de iniciais da protoderme. Em ambas as regiões, as iniciais dos idioblastos se distinguem das demais células do tecido pelo seu tamanho avantajado, citoplasma vacuolado e presença de núcleo e nucléolo mais conspícuos. A secreção do idioblasto é mantida na folha desde sua origem até sua senescência, o que sugere para essa estrutura um papel de defesa química ao longo de toda a vida foliar. A falta de resistência mecânica nesta espécie é compensada pelas defesas químicas, representada pelas estruturas secretoras e seus metabólitos secretados.

Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-27T11:22:38Z No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-05-27T14:40:33Z : No. of bitstreams: 1 2-s2.0-38549176817.pdf: 85406 bytes, checksum: 555a4643c3b5c915101a9473e1c9f256 (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-27T11:22:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-01 The adventitious rooting process of in vitro cultured plantlets is a technique that has been employed for the vegetative propagation of a significant number of native and exotic species. Many factors are associated with the rooting stage influencing positive and/or negatively the establishment of micropropagation protocols. The objective of this work was a literature review of the main inherent factors concerning in vitro rooting process including the correlation among others the endogenous and exogenous auxins levels, juvenility, genotype, mineral nutrition, culture medium conditions, addition of growth regulators and other substances as phenolic compounds and active coal besides growth environmental conditions of in vitro cultures. Although the complete elucidation of all processes involved with rooting of in vitro cultured plants has not been achieved so far, a comprehensive study of the main factors that interfere on rooting is fundamental for the establishment of new researches that might contribute for the rooting of economically important plants. Universidade Estadual Paulista (UNESP) Campus de Botucatu Faz. Experimental Lageado, C.P. 237, 18603-970-Botucatu, SP Departamento de Biotecnologia de Plantas Medicinais Universidade de Ribeirão Preto (UNAERP), Av. Costábile Romano, no 2201, 14096-900-Ribeirão Preto, SP Universidade Estadual Paulista (UNESP) Campus de Botucatu Faz. Experimental Lageado, C.P. 237, 18603-970-Botucatu, SP

Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-27T11:22:36Z No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-05-27T14:29:53Z : No. of bitstreams: 1 2-s2.0-39749122077.pdf: 213140 bytes, checksum: 3862ed2e783da39e6eced64d8bb0c587 (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-27T11:22:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-10-01 The present research was aimed at standardizing the protocol of seed disinfection, seed germination and organogenesis via callus of Pothomorphe umbellata (L.) Miq.The germinated seeds were inoculated in different concentrations of BAP (benzylamine purine) and NAA (naphthalene acetic acid) in order to stimulate the callus induction. After 60 days of culture, the calluses with some shoots were taken to an organogenesis medium (GA3 0.1 mg.L -1, BAP 0.5 mg.L-1) during 40 days, to be transferred later to a development medium. Finally, the plantules were acclimatized, presenting a good index of survival. Laboratório de Micropropagação e Análises Bioquímicas Instituto de Biociências Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu, São Paulo Laboratório de Micropropagação e Análises Químicas Instituto de Biociências Universidade Estadual Paulista, UNESP, Botucatu, São Paulo Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu, São Paulo Laboratório de Micropropagação e Análises Bioquímicas Instituto de Biociências Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu, São Paulo Laboratório de Micropropagação e Análises Químicas Instituto de Biociências Universidade Estadual Paulista, UNESP, Botucatu, São Paulo Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu, São Paulo

Foi avaliada a influência dos fatores (1) tempo: 10 e 40 minutos; (2) tamanho de partícula: 840 e 420 mm; (3) hidromódulo: 1:50 e 1:100 e (4) temperatura: 40 e 60 °C na extração do 4-nerolidilcatecol, (4-NC) mediante planejamento fatorial "2(4)" em que quatro variáveis foram estudadas em dois níveis (máximo e mínimo). O método de extração foi maceração e a quantificação do 4-nerolidilcatecol foi realizada por cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE) com detetor eletroquímico. Os resultados da análise fatorial indicam que o fator principal que favorece a extração do princípio ativo é o tamanho de partícula [efeito (2): 12,2086]. Diminuindo o tamanho de partícula aumenta três vezes a quantidade de 4-nerolidilcatecol extraída, enquanto o tempo de maceração [efeito (1): -0,64198], hidromódulo [efeito (3): 1,069804] e temperatura [efeito (4): -0,64198] não influenciam de forma significativa a extração. As interações de dois fatores: (2:3) tamanho:hidromódulo: 1,181142; (2:1) tamanho:tempo: 0,9435065 e (2:4) tamanho:temperatura: 0,0817575 mostraram que apesar do fator tamanho(2) ter favorecido o processo, quando combinado com os demais fatores, não aumenta a eficiência da extração. A metodologia de otimização mediante análise fatorial aplicada ao processo de extração do 4-nerolidilcatecol demonstra a importância do estudo das interações e não de cada fator isolado. The influence of factors: (1) time, 10 and 40 minutes, (2) particle size, 840 and 420 mm; (3) hydromodule, 1:50 and 1:100, and (4) temperature, 40 and 60 °C, in the extraction of 4-nerolidylcathecol (4-NC) from the roots of P. umbellata using factorial design "2(4)" was studied in two levels (maximal and minimal). The extraction method was maceration and the measurement of 4-NC was by HPLC with electrochemical detection. The results of the factorial analysis indicated that the main factor that increases the extraction of the active principle is particle size [effect (2): 12.2086]. The reduction of the particle size (mesh 60) increases threefold the amount of 4-nerolidylchatecol in the extract, while the time of maceration [effect (1): -0.64198], hydromodule [effect (3): 1.069804] and temperature [effect (4): -0.64198] practically do not influence the extraction. Interaction between two factors (2:3) size-hydromodule 1.181142, (2:1) size-time 0.9435065 and (2:4) size-temperature 0.0817575, showed that although the main factor size (2) increases the efficiency of the process, when one of the other three factors was taken together the amount of 4-NC extracted was not significantly increased. The technique of optimization using factorial analysis to investigate the extraction of 4-nerolylilchatecol showed to be useful to notice the interactions between factors and not only the effect of each isolated factor.

The oral dosages formulations from Pothomorphe umbellata (Piperaceae) can only be therapeutically evaluated after establishing 4-nerolidylcatechol (4-NRC) pharmacokinetic profile in plasma. For that purpose, a unique analytical method validation using HPLC-UV detection was developed for analysis of rat plasma samples. The animals received 10 mg/kg b.w. of 4-NRC i.v.. Analytical conditions were set with C18 column, methanol: acetonitrile: water (62:20:18) as mobile phase, and a flow rate of 1.6 mL/min. The assay was linear from 1.0 - 80.0 mcg/mL. The recovery procedure was performed by liquid-liquid extraction showing quantitative extraction (106.4±8.7%). Limit of Quantification (LOQ) was found to be 1.0 mcg/mL. Interassay precision and accuracy ranged from values of 14.4-3.0% and 24.0-0.2%, respectively. Recovery after liquid-liquid extraction was found to be 106.5 ± 3%. The method is simple and reliable with total run time of less than 15 min. O 4-nerolidilcatecol representa o metabólito secundário mais abundante de Pothomorphe umbellata (Piperaceae), cujo uso terapêutico deve ser fundamentado após a caracterização farmacocinética do mesmo (4-nerolidicatecol). Os níveis séricos de animais tratados com 10 mg/kg do fármaco i.v. foram avaliados por validação analítica em CLAE-UV. As condições cromatográficas empregadas foram fase móvel de acetonitrila:metanol:água (62:20:18), coluna RP-18, fluxo de 1,6 mL/min e detector UV em 282 nm, com tempo total de corrida inferior a 15 minutos. Observou-se linearidade do 4-NRC em plasmas na faixa de 1,0 a 80,0 mcg/mL, com valores de precisão e exatidão entre 14,4-3,0% e 24,0-0,2%, respectivamente. O procedimento de extração líquido-líquido apresentou reprodutível e com recuperação quantitativa (106,5%±3,0%).

O objetivo do nosso trabalho foi desenvolver um método para avaliação da concentração do ±-tocoferol, considerado o antioxidante lipofílico de maior importância, e do 4-nerolidilcatecol (4-NC), uma substância natural com comprovada ação antioxidante in vitro e in vivo, em matriz biológica (homogeneizado de pele). Utilizamos a cromatografia de alta eficiência acoplada a um detector eletroquímico, sendo que o método apresentou linearidade para as concentrações de 0,025 µg/mL a 0,1 µg/mL para o ±-T (tempo de retenção 3, 4 min) e de 0,15 µg/mL a 2,5 µg/mL para o 4-NC (tempo de retenção 2,06 min), dissolvidos em etanol e etanol:água (1:1). A taxa de recuperação do ±-T adicionado nas concentrações de 0,5; 0,1 e 0,025 µg/mL aos homogeneizados de pele foi de 94,03; 111,2 e 80,7%, respectivamente. A taxa de recuperação de 4-NC adicionado nas concentrações de 2,5; 0,625 e 0,156 µg/mL foi de 103,7; 91,7 e 91,7%. Este método analítico foi e está sendo empregado, com sucesso devido à sua precisão e rapidez, em diversas análises do laboratório. Topical administration of antioxidants, such as ±-tocopherol (±-T), provides an efficient manner of enriching the endogenous cutaneous protection system, and it constitutes a successful strategy for diminishing the ultraviolet radiation-mediated oxidative damage. Besides ±-tocopherol the use of other natural occurring compounds with antioxidant activity has been proposed for the same purpose. The aim of this study was to develop a validated analytical method for the determination of a-tocopherol and 4-nerolidylcathecol (4-NC) concentrations in skin homogenates in a pharmaceutical formulations. We employed liquid chromatography with electrochemical detection. Chromatography was performed on a Supelcosil LC-8, 3 mm, 75x4.6 mm column (Supelco, Bellefonte, PA, USA) with a mobile phase of methanol:water (9:1) for 4-NC and (95:5) for a-T, both containing 20 mM LiClO4 and 2 mM KCl. The flow rate was set at 1.0 ml/min. We established validation parameters including sensitivity, precision, accuracy, stability and found a linear relationship between the concentrations ranges of 0.025 µg/mL to 0.1 µg/mL of ±-T and 0.15 mg/mL to 2.5 mg/mL of 4-NC. The recovery of ±-T from skin homogenates was 94.03, 111.2 and 80.7% for the concentrations of 0.5, 0.1 and 0.025 µg/mL respectively. The recovery for the following concentrations of 4-NC: 2.5, 0.625 and 0.156 µg/mL was 103.7, 91.7 and 91.7%. This analytical procedure has been successfully employed in cutaneous permeation studies, antioxidant activity studies and determinations of 4-NC in Pothomorphe umbellata root extracts.

Background : Due to the complex anatomy of the root canal system, biomechanical preparation is not able to completely eliminate all microorganisms present in the endodontic infections, making it necessary the use of an intracanal medication. Aim: The aim of this study was to assess the antimicrobial activity of an intracanal medication containing the ethyl-acetate fraction of Pothomorphe umbellata against Enterococcus faecalis. Materials and Methods: Fifty seven human maxillary canine teeth were used, of which 54 were infected with E. faecalis every 72 h, for 28 days, and cultured for 24 h. Contaminated teeth were randomly separated into three groups (n = 18) and treated as follows: Group I - calcium hydroxide-based medication; Group II - P. umbellata-based medication; Group III - contaminated teeth without medication. Three teeth were used as negative control. After 7, 14 and 28 days of treatment, six teeth from each group were assessed for the level of microbial growth after each period of treatment. Results: The intracanal medication containing P. umbellata was effective against E. faecalis after 7, 14, and 28 days of treatment without statistically significant difference in comparison to calcium hydroxide treatment (Kruskal-Wallis test, P > 0.05). Conclusion: Ethyl-acetate fraction of P. umbellate was efficient against E. faecalis, making this phytotherapy a viable option for endodontic treatment.