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Orientador: José Luiz da Costa Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O uso abusivo de substâncias psicoativas (SPA) acompanha o homem desde o início dos tempos e, a partir da segunda metade do século XX, passou a aumentar substancialmente. A taxa de óbitos causados pelo abuso de drogas e medicamentos continua a aumentar, justificando a necessidade do desenvolvimento de estratégias analíticas que permitam a identificação de SPA em amostras biológicas, principalmente diante do grande número de novas substâncias psicoativas que vem surgindo nos últimos anos. Sendo assim, há necessidade de desenvolvimento de métodos sensíveis, porém abrangentes, que utilizem reduzido volume de solventes orgânicos. Neste trabalho, foi possível realizar uma análise crítica e avaliar a viabilidade do uso de técnicas emergentes de preparo de amostras nas análises toxicológicas realizadas em sangue postmortem, através do desenvolvimento de 3 métodos analíticos. Os métodos desenvolvidos utilizaram baixo volume de amostras, menor volume de solventes extratores (e de menor toxicidade) e de preparo mais simples do que o métodos frequentemente utilizados em laboratórios de toxicologia forense. Métodos quantitativos foram desenvolvidos e validados para determinação 49 SPA de interesse forense, utilizando a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas sequencial como técnica instrumental. No trabalho I, foi desenvolvido e validado um método quantitativo para a análise de fentanil e seus análogos, através de extração por precipitação de proteínas, com linearidade avaliada de 1 a 500 ng/mL. Os valores obtidos para imprecisão e inexatidão foram melhores que 13,8% e -10,9%, respectivamente. Nos trabalhos II e III, uma miniaturização da técnica de QuEChERS foi aplicada no preparo de amostras para a análise de 37 SPA e 4 produtos de biotransformação. No segundo trabalho, o método desenvolvido envolveu a análise de 16 antidepressivos, 7 antipsicóticos e 3 produtos de biotransformação, sendo observada linearidade de 1 a 500 ng/mL, além de valores de imprecisão e inexatidão de 19,0% e 19,7%, respectivamente. No trabalho III, um método para análises de 11 benzodiazepínicos, 1 produto de biotransformação e 1 sedativo-hipnótico em sangue postmortem foi desenvolvido e validado, com linearidade de 10 a 2000 ng/mL, imprecisão e inexatidão de 18,2% e 17,4%, respectivamente. Não foram observados interferentes exógenos, endógenos ou contaminação cruzada (carryover) em nenhuma das validações. As vantagens observadas para o método miniaturizado são o pequeno volume de amostra (100 µL), preparo simples e eficaz, além de melhores valores para o parâmetro de recuperação. Todos os métodos foram aplicados em amostras reais cedidas pelo Núcleo de Toxicologia Forense do Instituto Médico Legal, Superintendência da Polícia Técnico-científica de São Paulo (NTF/IML/SPTC-SP) ou Instituto de Análises e Pesquisas Forenses de Sergipe (IAPF-SE), demonstrando a eficiência do protocolo Abstract: The abusive use of psychoactive substances (PAS) has been with man since the beginning of time and, from the second half of the 20th century, began to increase rapidly. The death rate caused by pharmaceutical and drug abuse continues to rise, justifying the need for development of analytical strategies which allows the identification of PAS in biological samples, especially given the large number of new psychoactive substances that have been emerging in recent years. Therefore, there is a need for development of sensitive but comprehensive methods that use a reduced volume of organic solvents. In this work, through the development of 3 analytical methods, it was possible to perform a critical analysis and assess the feasibility of using emerging techniques of sample preparation for toxicological analyzes in postmortem blood. Quantitative methods were developed and validated for the determination of 49 PSA of forensic interest, using liquid chromatography-tandem mass spectrometry as instrumental technique. Work I, a method was developed and validated for quantitative analysis of fentanil and its analogues, by protein precipitation extraction, with linearity evaluated from 1 to 500 ng/mL. Value observed for imprecision and bias were better than 13.8% and -10.9%, respectively. Works II and III, a miniaturization of QuEChERS technique was applied to sample preparation for the analysis of 37 PSA and 4 metabolites. In the second work, the developed method involved the analysis of 16 antidepressants, 7 antipsychotics and 3 metabolites, being observed a linearity from 1 to 500 ng/mL, in addition to imprecision and inaccuracy values of 19.0% and 19.7%, respectively. In work III, a method for the analysis of 11 benzodiazepines, 1 metabolite and 1 hypnotic/sedative in postmortem blood was developed and validated, with linearity from 10 to 2000 ng/mL, imprecision and bias of 18.2% and 17.4%, respectively. No exogenous, endogenous or cross-contamination (carryover) interferents were observed in any of the validations. The advantages observed for the miniaturized method were low sample volume (100 µL), simple and effective preparation, in addition to better values of recovery parameter. All methods were applied on authentic samples provided by the Forensic Toxicology Laboratory of the Institute of Legal Medicine, São Paulo State Police (NTF/IML/SPTC-SP) or the Institute of Forensic Analysis and Research of Sergipe (IAPF-SE), demonstrating the efficiency of the protocol Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia CAPES 88882.435302/2019-01

Orientadora: Profª. Drª. Maria A. B. F. Vital Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 30/03/2022 Inclui referências Resumo: A melatonina é um hormônio secretado principalmente pela glândula pineal, podendo estar associada a ritmos circadianos, envelhecimento e neuroproteção. Os níveis de melatonina no líquido cefalorraquidiano estão diminuídos em pacientes com doença de Alzheimer esporádica (sAD), sugerindo uma relação entre o sistema melatonérgico e sAD. Além disso, a melatonina pode reduzir a inflamação, o estresse oxidativo, a hiperfosforilação da proteína TAU e a formação de agregados de proteína ß-amilóide (Aß), bem como reduzir a resistência à insulina no cérebro. Portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar o impacto do tratamento com 10 mg/kg de melatonina (i.p) no modelo animal de sAD induzida por infusão intracerebroventricular (ICV) de 3 mg/kg de estreptozotocina (STZ). A ICV-STZ causa alterações no cérebro de ratos semelhantes às encontradas em pacientes com sAD, como declínio progressivo da memória, formação de emaranhados neurofibrilares, placas senis, distúrbios no metabolismo da glicose, resistência à insulina e até mesmo astrogliose reativa caracterizada por upregulation dos níveis da proteína glial fibrilar ácida (GFAP).Os resultados mostram que ICV-STZ causou comprometimento da memória espacial de curto prazo em ratos após 30 dias de infusão de STZ sem comprometimento locomotor que foi avaliado no 27º dia pós-lesão. Além disso, demonstramos que o tratamento prolongado de 30 dias com melatonina pode melhorar o comprometimento cognitivo dos animais no teste do labirinto em Y, mas não no teste de localização de objetos. Finalmente, demonstramos através da quantificação de western blotting que os animais que receberam ICV-STZ apresentam altos níveis de Aß e GFAP no hipocampo e que o tratamento com melatonina reduz significativamente os níveis de Aß no hipocampo, mas não reduz os níveis de GFAP, concluindo que a melatonina pode ser útil para controlar a progressão da patologia amiloide na doença de Alzheimer. Abstract: Melatonin is a hormone secreted mainly by the pineal gland, it can be associated with circadian rhythms, aging and neuroprotection. Melatonin levels in cerebrospinal fluid are decreased in sporadic Alzheimer's disease (sAD) patients suggesting a relationship between the melatonergic system and sAD. In addition, melatonin may reduce inflammation, oxidative stress, TAU protein hyperphosphorylation, and the formation of ß-amyloid (Aß) protein aggregates, as well as reduce brain insulin resistance. Therefore, the objective of this work was to investigate the impact of treatment with 10 mg/kg of melatonin (i.p) in the animal model of sAD induced by intracerebroventricular (ICV) infusion of 3 mg/kg of streptozotocin (STZ). ICV-STZ causes changes in the brain of rats similar those found in patients with sAD, such as progressive memory decline, formation of neurofibrillary tangles, senile plaques, disturbances in glucose metabolism,in sulin resistance and even reactive astrogliosis characterized by upregulation of glucose levels and glial fibrillary acidic protein (GFAP). The results show that ICV-STZ caused short-term spatial memory impairment in rats after 30 days of STZ infusion without locomotor impairment which was evaluated on the 27th post-injury day. Furthermore, we demonstrated that prolonged 30-day treatment with melatonin can improve the cognitive impairment of animals in the Y-maze test, but not in the object location test. Finally, we demonstrated through western blotting quantification that animals receiving ICV-STZ have high levels of Aß and GFAP in the hippocampus and that treatment with melatonin significantly reduces Aß levels in the hippocampus but does not reduce GFAP levels, concluding that melatonin may be useful to control the progression of amyloid pathology in the brain.

Orientadora: profª. Dra. Cristina Aparecida Jark Stern Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 19/01/2022 Inclui referências Resumo: Memórias traumáticas desempenham um papel fundamental no transtorno de estresse pós-traumático (TEPT), um transtorno relacionado ao estresse que se desenvolve a partir da exposição a um evento traumático. Substâncias psicodélicas demonstram grande potencial para tratar o TEPT, principalmente por meio de interferências no processo de reconsolidação e facilitação de extinção de memórias traumáticas. Algumas evidências sugerem que a Ayahuasca (AYA), uma bebida psicodélica amazônica, apresenta potencial para o tratamento do TEPT. Além de relatos anedóticos que sugerem que a AYA facilita a recuperação de memórias traumáticas e permite que as pessoas lidem melhor com o trauma. Em modelos préclínicos, a AYA facilita a extinção do medo e melhora a neuroplasticidade. Entretanto, os efeitos da AYA sobre a reconsolidação de memórias de medo, evento dependente da labilização e evocação, ainda são desconhecidos. Por isso, o objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da AYA sobre a reconsolidação de memórias de medo em ratos a partir da administração de AYA em diferentes momentos da evocação. Ratos Wistar machos adultos foram condicionados ao medo no Contexto A e receberam, no dia da evocação no mesmo contexto o tratamento com AYA (60, 120 ou 240 mg/Kg) ou veículo (H2O) via oral por meio de gavagem, 20 min antes, imediatamente após, ou 3 h após a evocação da memória. Os animais foram novamente testados no Contexto A para avaliar os efeitos sobre a reconsolidação, e em um novo contexto não pareado, Contexto B, para avaliar a generalização da memória. O tempo de congelamento foi medido e usado como índice de memória de medo. Os resultados mostram que a AYA de forma dose-dependente prejudicou a reconsolidação da memória do medo quando administrada 20 min antes ou 3 h após a evocação da memória, com a dose de 60 mg/Kg sendo eficaz na redução do comportamento de congelamento dos animais em ambos os momentos. Nenhum efeito na expressão do medo foi observado quando a AYA foi administrada antes da evocação da memória. O prejuízo à reconsolidação não foi observado quando a evocação da memória foi omitida. Os efeitos do tratamento com AYA 20 minutos antes ou 3 horas após a evocação da memória duraram pelo menos 22 dias, sugerindo que não houve recuperação espontânea da memória de medo. Observou-se também que o comprometimento da memória de medo induzido pelo tratamento com a AYA em ambos os momentos não mostra reinstalação, enquanto que nos grupos controle a reinstalação da memória foi observada. Juntos, nossos resultados mostram que o tratamento com AYA reduz a expressão do medo de forma duradoura. Esse efeito é dependente da labilização e não acontece pela facilitação da extinção, sugerindo que a AYA prejudica a reconsolidação da memória de medo ao contexto na fase inicial e tardia desse processo. Abstract: Traumatic memories play a key role in posttraumatic stress disorder (PTSD), a stress-related disorder that develops from exposure to a traumatic event. Psychedelic substances show great potential for PTSD treatment, mainly through interference in the reconsolidation process and by facilitation of traumatic memories extinction. Some evidence suggests that Ayahuasca (AYA), an Amazonian psychedelic brew, has potential for the treatment of PTSD. In addition to anecdotal reports suggesting that AYA facilitates the recovery of traumatic memories and allows people to better deal with trauma. In preclinical models, AYA facilitates the extinction of fear and improves neuroplasticity. However, the effects of AYA on the reconsolidation of fear memories, an event dependent on labilization and retrieval, are still unknown. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effects of treatment with AYA on reconsolidation of fear memories in rats when AYA was given at different moments of retrieval. Adult male Wistar rats were fear conditioned in Context A and received, on the day of retrieval in the same Context A the treatment with AYA (60, 120 or 240 mg/Kg) or vehicle (H2O) orally via gavage, 20 min before, immediately after, or 3 h after memory retrieval. The animals were retested in Context A to assess the effects on reconsolidation, and in a new, unpaired Context B to assess generalization of memory. Freezing time was measured and used as an index of fear memory. The results show that AYA dose-dependently impaired fear memory reconsolidation when administered 20 min before or 3 h after memory retrieval, with the dose of 60 mg/Kg being effective in reducing freezing behavior of animals at both times. No effect on fear expression was observed when AYA was administered before memory retrieval. Impairment of reconsolidation was not observed when memory retrieval was omitted. The effects of AYA treatment 20 minutes before or 3 hours after retrieval of memory lasted for at least 22 days after, suggesting that there was no spontaneous recovery of fear memory. It was also observed that the fear memory impairment induced by the AYA treatment at both times did not show reinstatement, while in the control groups the reinstatement of memory was observed. Together, our results show that AYA treatment reduces fear expression lastingly. This effect is dependent on the labilization and does not happen through the facilitation of extinction, suggesting that AYA impairs the reconsolidation of contextual fear memories in early and late phases of this process.

Orientador: Gilberto De Nucci Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Objetivos: a 6-nitrodopamina (6-ND) foi previamente identificada como uma substância endógena com propriedades antagônicas da dopamina, este estudo visa identificar seu papel na agregação plaquetária. Principais métodos: A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa foi usada para quantificar os níveis de 6-nitrodopamina, cAMP e cGMP de amostras de plaquetas lavadas. A agregometria óptica foi usada para identificar o papel de 6-ND, Dopamina, antagonistas dopaminérgicos seletivos e agonistas dopaminérgicos seletivos na agregação estimulada por ADP e colágeno para identificar qualquer papel inibitório ou potencializador de 6-ND. As agregações foram realizadas em PRP humano e plaquetas lavadas. Resultados: As plaquetas liberam 6-ND após estimulação pela trombina. A pré-incubação de 6-ND em plaquetas antes da estimulação com trombina não afeta os níveis de cAMP ou cGMP. 6-ND não afeta a agregação de PRP induzida por ADP, colágeno ou epinefrina ou agregação de plaquetas lavadas induzida por trombina. 10 µM de dopamina é suficiente para potencializar a agregação induzida por ADP e colágeno em concentrações abaixo do limiar. 6-ND reduz a potenciação da dopamina e serotonina da agregação induzida por ADP e Colágeno. A análise de antagonistas dopaminérgicos conhecidos revelou que Haloperidol, PG01037 e SB277011A reduzem a potenciação da dopamina, mas não a potenciação do ADP basal e do colágeno. A cetanserina bloqueia a agregação potencializada pela serotonina, mas não pela dopamina. Sumanirol um agonista D2 seletivo, potencializou agregação que foi bloqueada por 6-ND e PG01037. Significado: Os dados sugerem que o 6-ND pode funcionar como um antagonista do receptor D2/3 e da serotonina. Dado que tanto a dopamina quanto o 6-ND são liberados pelo endotélio vascular, o 6-ND pode desempenhar um papel protetor contra trombose envolvendo disfunção vascular ou como antipsicótico Abstract: Aims: 6-nitrodopamine (6-ND) has been previously identified as an endogenous substance with dopamine antagonistic properties, this study aims to identify its role in platelet aggregation. Main Methods: Liquid Chromatography couple to mass spectrometry was used to quantify 6-nitrodopamine, cAMP and cGMP levels from washed platelet samples. Optical aggregometry was used to identify the role of 6-ND, Dopamine, known receptor subtype selective dopaminergic antagonists and receptor subtype selective dopaminergic agonists have in ADP and Collagen stimulated aggregation to identify any inhibitory or potentiator role of 6-ND. Aggregations were carried out in human PRP and washed platelets. Key findings: Platelets release 6-ND upon stimulation by thrombin. Preincubation of 6-ND in platelets before stimulation with thrombin, does not affect cAMP or cGMP levels. 6-ND does not affect ADP, Collagen or Epinephrine Induced PRP aggregation or Thrombin-induced washed platelet aggregation. 10 µM Dopamine is sufficient to potentiate ADP and Collagen induced aggregation at subthreshold concentrations. 6-ND reduces dopamine and serotonin potentiation of ADP and Collagen induced aggregation. Analysis of known dopaminergic antagonists revealed that Haloperidol, PG01037 and SB277011A reduce the potentiation by dopamine but not basal ADP and collagen potentiation. Ketanserin blocks serotonin-potentiated but not dopamine-potentiated aggregation. Sumanirole a selective D2 agonist, potentiated aggregation which was blocked by 6-ND and PG01037. Significance: The data suggests that 6-ND may function as a D2/3 and serotonin receptor antagonist. Given that both dopamine and 6-ND are released by the vascular endothelium, 6-ND may play a protective role against thrombosis involving vascular dysfunction or as an anti-psychotic Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia CAPES 001

Orientadores: Rodrigo Gimenez Pissutti Modolo, Gabriel Forato Anhê Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A nefropatia induzida por contraste (NIC) é definida como uma piora da função renal, devido ao aumento da creatinina sérica em relação ao nível basal, em ?25% ou ?0,5mg/dL até 72h após a exposição ao meio de contraste iodado (MCI). Além de ser considerada como a terceira causa de insuficiência renal adquirida no hospital, a NIC está intimamente relacionada a um risco aumentado de mortalidade a curto e longo prazo, prolongamento da internação hospitalar, progressão para doença renal, eventos cardiovasculares e insuficiência renal a longo prazo. Até o momento a melhor opção para prevenção de NIC tem sido a hidratação endovenosa (EV) com solução salina 0,9%, antes e após procedimentos contrastados. Pouco se sabe sobre a prevenção com hidratação por via oral (VO). Objetivo: Avaliar a eficácia do protocolo de hidratação VO como alternativa ao protocolo de hidratação EV na prevenção de NIC em pacientes submetidos a procedimentos eletivos de cateterismo cardíaco e/ou angioplastia coronariana. Métodos: Este estudo observacional, retrospectivo, de coorte e de centro único analisou dados de indivíduos atendidos no Serviço de Hemodinâmica do Hospital de Clínicas da Unicamp que realizaram procedimentos eletivos de cateterismo cardíaco e/ou angioplastia coronariana entre janeiro de 2012 e janeiro de 2020. Entre os anos de 2012 e 2015 foram coletados dados de pacientes que necessitaram de internação para receber hidratação profilática EV e entre os anos de 2016 e 2020 daqueles que realizaram hidratação profilática VO, em casa, antes e após os procedimentos, de acordo com orientação da equipe de enfermagem do serviço. Foram incluídos indivíduos classificados como grupo de risco para o desenvolvimento de NIC e que receberam hidratação profilática antes e após a administração do MCI. Foram excluídos pacientes em diálise; casos de urgência e emergência; indivíduos com insuficiência cardíaca congestiva de classe funcional III e IV; aqueles com falta de informações no prontuário e que realizaram o teste de creatinina sérica após cinco dias ou mais da administração do MCI. Resultados: Cento e dezesseis pacientes participaram deste estudo, sendo 58 no grupo de hidratação EV e 58 no grupo de hidratação por VO. O desfecho principal revelou uma incidência de 15% (9/58) de NIC no grupo que recebeu hidratação EV e 12% (7/58) no grupo que recebeu hidratação por VO (p=0,68). Conclusão: O protocolo de hidratação realizada por VO mostrou-se tão eficaz quanto o protocolo de hidratação EV na proteção renal de indivíduos suscetíveis ao desenvolvimento de NIC em exames eletivos de cateterismo cardíaco e/ou angioplastia coronariana. Para confirmação destes dados são necessárias análises mais criteriosas em ensaios clínicos multicêntricos e randomizados com maior poder Abstract: Contrast-induced nephropathy (CIN) is defined as a worsening of renal function, due to an increase in serum creatinine from baseline, of ?25% or ?0.5mg/dL up to 72 hours after exposure to iodinated contrast media (ICM). In addition to being considered the third leading cause of hospital-acquired renal failure, CIN is closely related to an increased risk of short- and long-term mortality, prolonged hospital stay, progression to kidney disease, cardiovascular events, and long-term renal failure. So far, the best option for preventing CIN has been intravenous (IV) hydration with 0.9% saline solution, before and after contrast procedures. Little is known about prevention with oral hydration. Aim: To evaluate the effectiveness of the oral hydration protocol as an alternative to the IV hydration protocol in preventing CIN in patients undergoing outpatient cardiac catheterization procedures and/or coronary angioplasty procedures. Methods: This observational, retrospective, cohort, single-center study analyzed data from individuals who were seen at the Cardiac Catheterization Laboratory of the Hospital de Clínicas - Unicamp and underwent elective cardiac catheterization and/or coronary angioplasty procedures between January 2012 and January 2020. Between 2012 and 2015, data were collected from patients who required hospitalization to receive prophylactic IV hydration and between 2016 and 2020 from those patients who underwent prophylactic oral hydration, at home, before and after the procedures, in accordance with the guidance of the nursing staff. Individuals classified as a risk group for the development of CIN and who received prophylactic hydration before and after exposure to ICM were included. We excluded: dialysis patients; urgent and emergency cases; individuals with congestive heart failure in functional class III and IV; those with lack of information in the medical record and who collected serum creatinine five or more days after the administration of the ICM. Results: One hundred and sixteen patients were included, 58 in the IV hydration group and 58 in the oral hydration group. The main outcome revealed an incidence of 15% (9/58) of CIN in the group that received IV hydration and 12% (7/58) in the group that received oral hydration (p=0.68). Conclusion: The hydration protocol performed by oral hydration proved to be as effective as the IV hydration protocol, for renal protection in individuals susceptible to the development of CIN in elective exams of cardiac catheterization or coronary angioplasty. In order to confirm these data, more careful analyzes are needed in multicenter and randomized clinical trials with greater power Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia CAPES 88882.435306/2019-01

Orientadora: Profa. Dra. Maria Aparecida Barbato Frazão Vital Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 28/04/2022 Inclui referências Resumo: A doença de Alzheimer (DA) é uma desordem neurodegenerativa progressiva caracterizada clinicamente pelo declínio gradual das funções cognitivas. A infusão intracerebroventricular (ICV) de estreptozotocina (STZ) é usada como um modelo da forma esporádica da doença, causando várias alterações que são importantes no curso da DA, como o prejuízo cognitivo, a agregação de proteínas, danos na sinalização de insulina, neuroinflamação e estresse oxidativo. No presente trabalho investigamos os efeitos do andrografolide (ANDRO) no modelo STZ-ICV com relação a memória espacial de curto prazo (Testes de Localização de objetos (TLO) e Labirinto em Y), a memória de reconhecimento de curto prazo (Teste de reconhecimento de objetos (TRO)), a atividade locomotora (Campo aberto), a expressão da proteína precursora amiloide (APP) e a ativação de astrócitos (expressão de GFAP) e da micróglia (imuno-histoquímica para Iba-1). Ratos Wistar foram submetidos a infusão ICV de 3 mg/kg de STZ ou veículo, e foram tratados com ANDRO (2 mg/kg, i.p.) ou veículo três vezes por semana por quatro semanas, com início 1h após a cirurgia. O tratamento com ANDRO atenuou o prejuízo de desempenho nos testes do Labirinto em Y e TRO, e o aumento da expressão de GFAP no córtex pré-frontal dos animais causados pela STZ. Curiosamente a STZ não piorou o desempenho dos animais no TLO, mas o ANDRO sim. Além disso, o número de células da micróglia ativadas nas regiões CA1 e CA3 do hipocampo dos animais STZ que receberam ANDRO diminuiu em relação aos animais STZ que receberam veículo. Foram observadas correlações entre a neuroinflamação e o desempenho cognitivo. Com relação a APP, nem a infusão de STZ e nem o tratamento com ANDRO alteraram significativamente sua expressão. Os resultados sugerem efeitos parcialmente positivos do ANDRO na memória espacial de curto prazo e na memória de reconhecimento de curto prazo. Além disso, o ANDRO atenuou a ativação de astrócitos e da micróglia causada pelo modelo STZ. Abstract: Alzheimer's disease (AD) is a progressive neurodegenerative disorder clinically characterized by a gradual decline in cognitive functions. The intracerebroventricular infusion (ICV) of streptozotocin (STZ) is used as a model of the sporadic form of the disease, causing several changes important to the course of AD, such as cognitive impairment, protein aggregation, damage to insulin signaling, neuroinflammation and oxidative stress. In the present study we investigated the effects of andrographolide (ANDRO) in the ICV-STZ model relative to short-term spatial memory (Object location test (OLT) and Y-Maze test), short-term recognition memory (Object recognition test (ORT)), locomotor activity (Open field), amyloid precursor protein (APP) expression and activation of astrocytes (GFAP expression) and microglia (immunohistochemistry for Iba-1). Wistar rats were given an ICV infusion of 3 mg/kg of STZ or vehicle and were treated with ANDRO (2 mg/kg, i.p.) or vehicle three times per week for four weeks, starting 1 h after the infusion. Treatment with ANDRO was capable of attenuate the impairments in the Y maze and ORT performance, and the increase in GFAP expression in the PFC induced by the ICV-STZ model. Interestingly, STZ did not worsen the animals' performance in OLT, but ANDRO did. In addition, the number of activated microglia cells in the CA1 and CA3 regions of the hippocampus of STZ animals that received ANDRO decreased in relation to STZ animals that received vehicle. Correlations were observed between neuroinflammation and cognitive performance. Regarding APP, neither STZ infusion nor ANDRO treatment significantly altered its expression. The results suggest partially positive effects of ANDRO on short-term spatial memory and short-term recognition memory. Furthermore, ANDRO attenuated the astrocyte and microglia activation caused by STZ.

Orientador: José Luiz da Costa Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O aparecimento de Novas Substâncias Psicoativas (NSP) no mercado ilícito mundial cresceu significativamente desde os anos 2000. Apesar da queda no número de novas identificações anualmente, elas ainda causam severos casos de intoxicações, diversos deles fatais. O presente trabalho desenvolveu e validou um método para a análise de mais de 100 NSP e drogas de abuso convencionais em amostras de fluido oral (OF) e analisado por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS). Foram coletadas 462 amostras em festas e festivais de música eletrônica em 3 estados brasileiros e analisadas com a metodologia desenvolvida. O 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA, 88%) ainda foi a substância mais identificada nas amostras, mas 39% das amostras continham alguma NSP. Cetamina (75%) foi a mais prevalente, seguido da metilona (15%) e N-etilpentilona (10%). Ainda assim, apenas 5% dos voluntários haviam reportado o consumo de alguma NSP. A ingestão de múltiplas substâncias foi muito prevalente, com 80% das amostras contendo duas ou mais substâncias. Este foi o primeiro dado publicado no Brasil contendo dados epidemiológicos do consumo de NSP através da análise de amostras biológicas em contexto recreacional. As amostras contendo catinonas sintéticas foram quantificadas usando microextração por sorvente empacotado (MEPS). Entre as 41 amostras, metilona, N-etilpentilona, eutilona, mefedrona e 4-CEC foram quantificadas. As amostras contendo LSD foram quantificadas, assim como seu principal produto de biotransformação, 2-oxo-3-hidroxi-LSD, com limite de detecção de 0,01 ng/mL. Este foi o primeiro dado publicado na literatura contendo quantificação de ambos analitos em amostras autênticas de fluido oral. Ainda, como forma de suprir a necessidade de obter mais informações sobre as NSP, foi realizado o ensaio de metabolismo in vitro do canabinóide sintético ADB-4en-PINACA usando microssomas hepáticos humanos (HLM) e analisado com espectrômetro de massas de alta resolução. Dos 11 metabólitos identificados in vitro, 7 foram confirmados em amostras de sangue e urina post mortem., sendo os metabólitos derivados de hidroxilação e hidroxilação seguida de hidrólise interna os mais intensos Abstract: New Psychoactive Substances (NPS) emergence of in the global illicit market has grown significantly since the 2000s. Despite the drop in the number of new identifications annually, they still cause severe cases of intoxication, many of them fatal. The present work developed and validated a method for the analysis of more than 100 NPS and conventional drugs of abuse in oral fluid (OF) samples and analyzed by liquid chromatography?tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). 462 samples were collected at parties and electronic music festivals in 3 Brazilian states and analyzed using the developed methodology. 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA, 88%) was still the most identified substance in the samples, but 39% of them contained some NPS. Ketamine (75%) was the most prevalent, followed by methylone (15%) and N-ethylpentylone (10%). Even so, only 5% of the volunteers had reported some NPS consumption. Ingestion of multiple substances was very prevalent, with 80% of samples containing two or more substances. This was the first data published in Brazil containing epidemiological data on NPS consumption through the analysis of biological samples in a recreational context. Samples containing synthetic cathinones were quantified using microextraction by packed sorbent (MEPS). Among the 41 samples, methylone, N-ethylpentylone, euthylone, mephedrone and 4-CEC were quantified. Samples containing LSD were quantified, as well as its main biotransformation product, 2-oxo-3-hydroxy-LSD, with limit of detection of 0.1 ng/mL. This was the first published data quantifying both analytes in authentic oral fluid samples. Also, to meet the need for more information regarding NPS, an in vitro metabolism assay of the synthetic cannabinoid ADB-4en-PINACA was performed using human liver microsomes (HLM) and analyzed with a high-resolution mass spectrometer. Of the 11 metabolites identified in vitro, 7 were confirmed in post mortem blood and urine samples, with the metabolites derived from hydroxylation and hydroxylation followed by internal hydrolysis being the most intense Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia FAPESP 2018/11849-0 CAPES 88887.571786/2020-00

Orientadora: Profa. Dra. Alexandra Acco Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 28/01/2022 Inclui referências Resumo: As doenças hepáticas são uma das doenças crônicas mais comuns em todo o mundo, e a osteodistrofia uma complicação importante dos pacientes com doença hepática crônica, sendo ambas as condições de difícil tratamento. Diante desse desafio, a busca de substâncias que possam atuar como hepatoprotetoras e, também, como reparadoras do tecido ósseo, é importante. Este estudo investigou os efeitos hepáticos e ósseos dos análogos antidiabéticos do GLP-1, semaglutida e dulaglutida, no modelo agudo de hepatotoxicidade induzida por tetracloreto de carbono (CCl4 a 1,5%). Dois protocolos foram utilizados em camundongos Swiss machos: Tratamento e Pré-tratamento com uma ou duas administrações de semaglutida (0,021 mg/Kg, i.p.) e dulaglutida (0,014 mg/Kg, i.p.), silimarina (100 mg/Kg, v.o., controle positivo) ou veículo (10 ml/kg, v.o.). No Tratamento os animais receberam primeiramente o agente hepatotóxico CCl4 e 2 h após receberam os tratamentos, enquanto no Pré-tratamento as administrações dos fármacos foram feitas alguns dias antes da administração do CCl4. Em ambos os protocolos os animais foram eutanasiados 48 h após o desafio com CCl4. Os resultados indicaram que a dulaglutida tem efeitos hepatoprotetores mais evidentes que a semaglutida, reduzindo a necrose hepática, a atividade da GST e o nível plasmático de ALT, e aumentando a expressão gênica de Ciclina D1. A semaglutida também aumentou a expressão deste gene e melhorou a excreção biliar de colesterol, aparentemente beneficiando o sistema biliar mais do que o parênquima hepático. Ambos os análogos do GLP-1 melhoraram a microarquitetura da tíbia, aumentando o volume trabecular e reduzindo a espaçamento entre trabéculas; enquanto a dulaglutida aumentou o número de trabéculas. Estes dados evidenciaram que a dulaglutida tem potencial para ser um tratamento alternativo à hepatotoxicidade, induzida principalmente por drogas (DILI), e que a dulaglutida e semaglutida melhoraram significativamente o desenvolvimento ósseo após apenas duas administrações, demonstrando o potencial destes fármacos no tratamento de fragilidade óssea em doenças hepáticas, diabetes ou outras condições. Abstract: Hepatic diseases are one of the most common chronic diseases in the world, and the osteodystrophy an important complication of the patients with chronic hepatic diseases. Both conditions have challenges in their treatments. Facing this situation, the search for substances that can act as hepatoprotector and also as bone tissue repairer is important. This study investigates the hepatic and bone effects of the GLP- 1 analogues, semaglutide and dulaglutide, in a model of acute hepatotoxicity induced by carbon tetrachloride (CCl4, 1.5%). Two protocols were used in male Swiss mice: Treatment and Pretreatment, with one or two administrations of semaglutide (0.021 mg/Kg, i.p.) and dulaglutide (0.014 mg/Kg, i.p.), silymarin (100 mg/Kg, p.o., positive control) or vehicle (10 ml/kg, v.o.). In Treatment the mice received first the toxic agent CCl4 and, 2 hours later, the treatments, while in Pretreatment the drug administrations were performed few days before the CCl4 administration. In both protocols, the mice were euthanized 48 h after the toxic agent administration. The results indicated that dulaglutide have more evident hepatoprotective effects than semaglutide, reducing hepatic necrosis, GST activity and plasmatic levels of ALT, and increasing the Cyclin D1 gene expression. Semaglutide also increased this gene expression and improved biliary excretion of cholesterol, apparently benefiting the biliary system more than the liver parenchyma. Both GLP-1 analogues improved the tibia microarchitecture, increasing trabeculae volume, and reducing its interspace; while dulaglutide increased the trabeculae number. These data show that dulaglutide can be an alternative treatment to hepatotoxicity, mainly induced by drugs (DILI). Both dulaglutide and semaglutide improved significantly the bone development after only two administrations, showing the potential of these drugs for the treatment of bone fragility in hepatic diseases, diabetes or other conditions.

Orientadora: Profª. Drª. Joice Maria da Cunha Coorientadora:Profª. Drª. Juliana Geremias Chichorro Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 29/04/2022 Inclui referências Resumo: A dor neuropática (DN) é um problema de saúde complexo que afeta até 8% da população global. Os sintomas da DN incluem manifestações sensoriais como dor evocada e tônica. Os canabinoides, como o canabidiol (CBD), têm demonstrado potencial no tratamento da DN. Assim, nosso estudo teve como objetivo investigar o efeito da associação de tratamento entre morfina e CBD na dor evocada e tônica, bem como o efeito do CBD na tolerância induzida por morfina no modelo de lesão por constrição crônica do nervo ciático (CCI). Além disso, investigamos o efeito de um cotratamento com CBD na hiperalgesia e nos sinais de abstinência induzidos por morfina em ratos machos e fêmeas. Ratos Wistar machos adultos tiveram seu limiar mecânico avaliado com o aparelho eletrônico de von Frey, antes e 7 dias após a cirurgia Sham ou CCI (dor evocada). Ratos Sham e CCI também foram submetidos a um protocolo de preferência condicionada ao lugar (CPP) de 4 dias, para avaliar o alívio da dor tônica (6 a 9 dias após a cirurgia Sham ou CCI). O tratamento com morfina (2 e 4 mg/kg) ou CBD sozinho (30 mg/kg) induziu efeito antinociceptivo significativo no teste de von Frey. A combinação de CBD (30 mg/kg) e uma dose baixa de morfina (1 mg/kg) induziu maior eficácia terapêutica sobre a dor evocada em ratos CCI, tanto nas patas ipsilaterais quanto nas contralaterais, quando comparada à morfina sozinha (1 mg/Kg). A combinação de CBD e morfina não causou comprometimento locomotor no teste de campo aberto. O tratamento com morfina (1 e 2 mg/kg) e CBD sozinho (30 mg/kg) não induziu escores positivos no teste de CPP, quando comparados a ratos Sham. No entanto, o tratamento combinado com CBD (30mg/kg) e morfina (1 mg/kg) induziu escores positivos e resultou em um aumento no número de entradas na câmara pareada com as drogas no teste de CPP. O tratamento com CBD atenuou a tolerância (30 mg/kg) e a tolerância cruzada (CBD 10 mg/kg) induzidas por morfina em ratos CCI. Além disso, ratos machos e fêmeas foram submetidos a um protocolo de dependência física induzida por morfina consistindo em um tratamento duas vezes ao dia com morfina (7,89 ± 0,06 mg/mL, s.c.) por 10 dias. O desenvolvimento de hiperalgesia térmica foi medido usando o teste da placa quente e a hiperalgesia térmica induzida por morfina foi igualmente alcançada após 7-10 dias de administração de morfina em ratos machos e fêmeas. O co-tratamento com CBD (30 mg/kg) foi suficiente para prevenir a hiperalgesia térmica induzida por morfina em ratos machos e fêmeas. Subsequentemente, os ratos receberam uma administração aguda de naloxona (2 mg/Kg. s.c.), 90 minutos após o tratamento com morfina no dia 11, e o número de sinais de abstinência foi avaliado. Machos e fêmeas que receberam tratamento exclusivamente com morfina apresentaram sinais de abstinência significativos em relação aos seus respectivos grupos controle (Água). Ratas dependentes de morfina mostraram um comportamento estereotipado prevalente de rearing, enquanto ratos machos tiveram o sinal somático de bater de dentes como o mais preeminente. O co-tratamento com CBD antes de cada injeção de morfina atenuou parcialmente os sinais de abstinência em ratos machos dependentes de morfina, mas não em fêmeas. Em resumo, nossos resultados apoiam a indicação do CBD como adjuvante à terapia com opioides para a atenuação da DN e tolerância analgésica e tolerância cruzada induzidas por opioides, bem como no tratamento da hiperalgesia e síndrome de abstinênciainduzidas por opioides. Abstract: Neuropathic pain (NP) is a complex health problem that affects up to 8% of the global population. Symptoms of NP include sensorial manifestations such as evoked and ongoing pain. Cannabinoids, such as cannabidiol (CBD), have shown potential in the treatment of NP. Thus, our study aimed to investigate the effect of treatment association between morphine and CBD on evoked and ongoing pain, as well as the effect of CBD on morphine-induced tolerance in the model of chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve. Moreover, this study investigated the effect of a co-treatment with CBD in the morphine-induced hyperalgesia and withdrawal signs in male and female rats. Adult male Wistar rats had their mechanical threshold evaluated with the electronic von Frey apparatus before and 7 days after Sham or CCI surgery (i.e., evoked pain). Sham and CCI rats were also submitted to a 4-day conditioned place preference (CPP) protocol, to evaluate relief of ongoing pain (6 to 9 days after Sham or CCI surgery). Treatment with morphine (2 and 4 mg/kg) or CBD alone (30 mg/kg) induced significant antinociceptive effect evaluated in the von Frey test. The combination of CBD (30 mg/kg) and a low dose of morphine (1 mg/kg) induced an enhanced therapeutic efficacy on evoked pain in CCI rats, in both ipsilateral and contralateral paws, when compared to morphine alone (1 mg/Kg). Combination of CBD and morphine was devoid of locomotor impairment evaluated in the open field test. Treatment with morphine (1 and 2 mg/kg) and CBD alone (30 mg/kg) failed to induce positive scores in the CPP test that differ between sham and CCI rats. However, combined treatment with CBD (30mg/kg) and morphine (1 mg/kg) provided significant positive scores (compared to Sham animals) and have also resulted in an increase in the number of entrances in the drug-paired chamber in the CPP test. Treament with CBD attenuated morphine-induced tolerance (CBD 30 mg/kg) and cross-tolerance (CBD 10 mg/kg) in CCI rats. In addition, male and female rats were submitted to a morphine-induced physical dependence protocol consisting of a twice daily treatment with morphine (7.89 ± 0.06 mg/mL, s.c.) for 10 days. The development of thermal hyperalgesia was measured using the hot plate test and morphine-induced thermal hyperalgesia was equally achieved following 7-10 days of morphine administration in male and female rats. Co-treatment with CBD (30 mg/kg) was sufficient to prevent morphine-induced thermal hyperalgesia in male and female rats. Subsequently, rats received an acute administration of naloxone (2 mg/Kg. s.c.), 90 minutes after the morphine treatment on day 11, the number of withdrawal signs were scored. Males and females that received treatment exclusively with morphine presented significant withdrawal signs compared to their respective control groups (Water). Morphinedependent female rats showed a prevalent stereotyped behavior of rearing, whereas male rats had the somatic sign of teeth chattering as the most preeminent. Cotreatment with CBD before every injection of morphine, partially attenuated the withdrawal signs in morphine-dependent male rats, but not female rats.In summary, our results support the indication of CBD as an adjuvant to opioid therapy for the attenuation of NP and opioid-induced analgesic tolerance and cross-tolerance, as well as treatment of opioid induced hyperalgesia and withdrawal syndrome.

Orientadora: Profa. Dra. Cristina Aparecida Jark Stern Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 17/02/2022 Inclui referências Resumo: O transtorno de ansiedade generalizada (TAG) é o transtorno mental mais prevalente no mundo, afetando consideravelmente mais mulheres do que homens. O sistema endocanabinoide (eCB) está implicado na ansiedade e transtornos afetivos, e a popularidade do uso da Cannabis sp. ou de medicamentos baseados na modulação do sistema eCB têm aumentado consideravelmente. Nesse sentido, as mulheres que fazem esse tipo de tratamento reportam mais efeitos adversos que homens, sendo o mais comum deles os sintomas de ansiedade. Mesmo com as estatísticas apontando para a importância de se conduzir estudos sobre ansiedade e canabinoides no sexo feminino, a maioria dos estudos pré-clínicos nessa área segue sendo conduzido em machos. Em vista disso, o objetivo desse estudo foi investigar o papel diferencial dos endocanabinoides (eCBs) anandamida (AEA) e 2- araquidonoilglicerol (2-AG) no comportamento tipo-ansioso em fêmeas em fase reprodutiva e ovariectomizadas (OVX) com e sem reposição hormonal, e por fim, comparar com machos. Utilizando o URB597 (URB), um inibidor da amida hidrolase de ácidos graxos (FAAH), e o MJN110 (MJN), um inibidor da monoacilglicerol lipase (MAGL), exploramos os efeitos da elevação dos níveis de AEA e 2-AG em fêmeas nas diferentes fases do ciclo estral, em fêmeas OVX tratadas com 17ß-estradiol (E2) e em machos, submetidos ao teste do labirinto em cruz elevado (LCE). Os parâmetros analisados foram: a porcentagem de tempo e de entradas nos braços abertos (%TBA e %EBA, respectivamente) e o comportamento de avaliação de risco (CAR), como parâmetros de comportamento tipo-ansioso; e as entradas nos braços fechado (EBF) como parâmetro de locomoção. A administração i.p. de URB 0,3 mg/kg reduziu a %TBA e a %EBA no estro, enquanto que a dose de 1,0 mg/kg aumentou a %TBA no diestro. Nenhum efeito foi encontrado no pró-estro ou quando o ciclo estral não foi considerado, sugerindo que o efeito do URB sobre a ansiedade em fêmeas foi dependente da fase do ciclo estral. Em machos, ambas as doses de URB apresentaram efeitos tipo-ansiolítico. Nas fêmeas OVX pré-tratadas com veículo, o efeito tipo-ansiolítico da menor dose do inibidor da FAAH persistiu, mas quando elas foram pré-tratadas com E2 esse efeito foi abolido, indicando que o efeito tipoansiolítico do URB depende de níveis baixos de E2. A administração i.p. de MJN 3,0 mg/kg aumentou a %TBA no estro e reduziu o CAR no estro e diestro, sugerindo um efeito ansiolítico. A redução no CAR também foi observada quando o ciclo estral não foi considerado. Nenhum efeito do MJN sobre os parâmetros avaliados foi encontrado em machos. Nas fêmeas OVX pré-tratadas com veículo, o efeito do inibidor da MAGL foi abolido, entretanto, quando houve administração de E2, a dose de 1.0 mg/kg gerou um efeito tipo-ansiogênico, indicando que o efeito do MJN em fêmeas provavelmente depende tanto dos níveis de E2 como de progesterona ou outros hormônios ovarianos. Juntos, nossos resultados sugerem que as fêmeas respondem de forma diferente dos machos às elevações de AEA e 2-AG. Ainda, os resultados sugerem que os efeitos da AEA sobre a ansiedade em fêmeas dependem da fase do ciclo estral, enquanto que os efeitos do 2-AG são parcialmente influenciados pelo ciclo estral, ressaltando que durante a fase reprodutiva o 2-AG pode ser mais relevante do que a AEA no controle da ansiedade em fêmeas. Por fim, esse trabalho ressalta a importância dos estudos com fêmeas na pesquisa pré-clínica. Abstract: Generalized Anxiety Disorder (GAD) is the most common mental illness in the world, affecting considerably more women than men. The endocannabinoid (eCB) system has been implicated in anxiety and affective disorders, and the use of Cannabis sp. or drugs that modulate the eCB system has gained popularity and grown exponentially. Women that adhere to these treatments report more adverse effects than their male counterparts, the most common of them being anxiety symptoms. Even with statistics pointing towards the importance of conducting studies on anxiety and cannabinoids in the female sex, the vast majority of pre-clinical studies in this area continues to be conducted in males. The objective of this study was to investigate the differential role of the endocannabinoids (eCBs) anandamide (AEA) and 2- arachidonoylglycerol (2-AG) in the anxiety-like behavior in females in reproductive age and ovariectomized (OVX) females with and without hormone replacement, and compare those results to males. Using URB597 (URB), a fatty-acid amide hydrolase (FAAH) inhibitor, and MJN110 (MJN), a monoacylglycerol lipase (MAGL) inhibitor, we explored the effects of the elevation of AEA and 2-AG levels in females in different phases of the estrous cycle, in OVX females treated with 17ß-estradiol (E2), and in males, submitted to the elevated plus maze test (EPM). The parameters analyzed were: percentage of open arms time and entries (%OAT and %OAE, respectively), and risk assessment behavior (RAB), as measures of anxiety-like behavior; and enclosed arms entries (EAE) as a locomotion parameter. The i.p. administration of URB 0.3 mg/kg reduced %OAT and %OAE on estrus, while the 0.1 mg/kg dose elevated the %OAT on diestrus. No effects were observed on pro-estrus or when the cycle phase was not considered, suggesting that the effect of URB in the anxiety-like behavior in females depends on the estrous cycle phase. In males, both doses of URB elicited anxiolytic-like responses. In OVX females pre-treated with vehicle, the anxiolytic-like effect of the lower dose of the FAAH inhibitor persisted, but when they were pre-treated with E2, the effect was abolished, indicating that the anxiolytic-like effect of URB597 depends on low levels of E2. The i.p. administration of MJN 3.0 mg/kg elevated the %OAT on estrus and reduced the RAB on estrus and diestrus, suggesting an anxiolytic-like effect. This reduction in RAB was also observed when the cycle phase was not considered. In males, no effects of MJN in the parameters evaluated were found. In OVX females pre-treated with vehicle, the effects of the MAGL inhibitor were abolished; however, when they were pre-treated with E2, the 1 mg/kg dose elicited an anxiogenic-like response, indicating that the effects of MJN in females probably depend on E2 levels as well as progesterone or other ovarian hormones' levels. Together, our results suggest that females respond differently than males to the elevations of AEA and 2-AG. They also suggest that the effects of AEA in the anxietylike behavior in females depend on the estrous cycle phase, while the effects of 2-AG are partially influenced by the estrous cycle, highlighting that during the reproductive phase 2-AG might be more relevant than AEA in the anxiety control in females. In conclusion, our research highlights the importance of studies in females in pre-clinical settings.

Orientador: Rinaldo Poncio Mendes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: Não informado Abstract: Not informed Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Armando Octavio Ramos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: Não informado Abstract: Not informed. Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Neste trabalho tivemos como objetivo a investigação dos efeitos do extrato hidroalcoólico da Acanthospermum hispidum (ERAA.hispidum) sobre o crescimento e diferenciação das células progenitoras hematopoiéticas para a série granulócitos-macrófagos (CFU-GM) da medula óssea e do baço, em animais infectados comListeria monocytogenes. Para a realização dos experimentos camundongos Balb/c foram tratados oralmente por cinco dias com ERA A.hispidum nas doses de 100, 500 ou 1000mg/kg/dia. Ao final do tratamento, os animais foram infectados intraperitonealmente com uma dose subletal de Listeria monocytogenes (lx105/animal) e sacrificados 48 e 72 horas após a infecção. Os animais somente infectados apresentaram uma diminuição no número de colônias de precursores hematopoiéticos (CFU-GM) na medula nas 48 (I-48h) e 72 (I-72h) horas após a infecção. A administração das 3 diferentes doses de ERA A.hispidum aos animais normais conduziu a uma diminuição dosedependente do CFU-GM da medula em relação ao grupo controle. Os animais tratados/infectados com as três diferentes doses de ERA A.mspidum nas 48 (TI-48h) e 72 (TI-72h) horas após a infecção, mantiveram a diminuição provocada pela infecção no número de CFU-GM da medula óssea da infecção, sendo que esta diminuição foi mais acentuada no período de 72 horas após a infecção. Com relação à hematopoiese esplênica, a inoculação de uma dose subletal de Listeria monocytogenes levou a um aumento no número de CFU-GM no baço nas 48 e 72 horas após a infecção. Os animais normais tratados com as 3 diferentes doses de ERAA.hispidum tiveram um aumento no número de CFU-GM do baço em relação ao grupo controle. Os animais tratados/infectados (TI-48h) com as três diferentes doses de ERA A.hispidum mantiveram o número de CFU-GM do baço quando comparado ao grupo infectado (I-48h). Após 72 horas, os grupos tratados/infectados (TI-72h) com as doses de 100 e 50Orng/kg de ERA A.hispidum apresentaram uma diminuição no número de CFU-GM em relação ao infectado (I-72h), enquanto que o grupo tratado com a dose de 1000 mg!kg de EHA A.hispidum, neste mesmo período de, infecção apresentou aumento significativo no número de CFU-GM em relação a todos os demais grupos. o peso do baço dos animais tratados com as doses de 500 e 1000mg!kg de EHA A.hispidum aumentou em relação ao grupo controle. A infecção produziu aumento no peso do baço nas 48 e 72 horas em relação ao controle, sendo que os animais infectados (I-48h) tiveram aumento superior aos dos infectados (I-72h). Valores normais foram observados nos animais tratados/infectados (TI-48h) com 100,500 e 1000mglkg de EHAA.hispidum. Porém, nos animais tratados/infectados (TI-72h) com as 3 doses o peso do baço não variou em relação ao grupo infectado (I-72h). Com o objetivo de verificar a resistência à infecção dos animais previamente tratados com as 3 diferentes doses do extrato hidroalcoólico de Acanthospermum hispidum realizamos uma curva de sobrevida com camundongos Balb/c infectados com uma dose letal de L .monocytogenes. Após 30 dias de observação, 30% dos animais tratados com a dose de 100mglkg, e 60% dos animais tratados com 500 e 1000 mg!kg sobreviveram a dose letal da L .monocytogenes, enquanto que 100% dos animais do grupo controle infectado morreram em seis dias. Nossos resultados sugerem que o EHA A.hispidum aumenta a resistência dos camundongos Balb/c infectados com a L. monocytogenes através de mobilização dos precursores hematopoiéticos medulares que se alojam no baço Abstract: The objective of this work was to investigate the effects of A.hispidum hidroalcoholic extract (A. hispidum HAE) on the growth and differentiation of granulocyte-macrophage hematopoietic progenitor cells (CFU-GM) ITomthe bone marrow and spleen of mice infected with L. monocytogenes. In this study, groups of Balb/c mice were treated orally for 5 days with 100, 500 or 1000mg/kgl day of A. hispidum HAE. At the end of the treatment, mice were infected intraperitoneaIly with a subletal dose of L. monocytogenes (lxl05 bacteria/animaI) and sacrificed 48 or 72 hours after infection. The administration of the 3 different doses of A. hispidum HAE to normal mice led to a dose-dependent decrease in the number ofCFU-GM in the bone marrow in relation to controI. A decrease in the number of CFU-GM in the bone marrow of infected mice at 48 (I-48h) and 72 (I-72h) hours after infection was observed, when compared with controI. The effect observed in bone marrow CFU-GM number of infected mice was mantainned when mice were pre-treated with the 3 different doses of A. hispidum HAE, however the decrease was more accentuated at 72 hours after infection. Treatment with these 3 doses of A. hispidum HAE enhanced the number of CFU-GM in the spleen of normal mice, in relations to controls. A significant increase of splenic CFU-GM was also observed in infected mice. At 48 hours after the infection, the animais previously treated with the 3 different doses of A. hispidum HAE kept the number of CFU-GM at the infected (I-48h) leveI. At 72 hours, the groups treated/infected mice with the doses of 100 and 500mg/kg after infection had a decrease in the number of CFU-GM in relation to infected group (I-72h), while, infected mice pre-treated with 1000mg/kg showed an increase in the number of splenic CFU-Gmover the leves of infection. Spleen weight also increased in the groups of 500 and 1000mglkg of A. hispidum HAE in relation to controI. The infection also increased the spleen weight at both periods after infection. A decrease was observed in groups with the 3 doses of A. hispidum HAE at 48 hours after infection, whereas at 72 hours, no changes were produced in the spleen weight of infected mice when mice were pre-treated with the 3 doses. We ana1yzed the mice resistance previously treated with the 3 different doses of A. hispidum HAE and infected with a lethal dose of L. monocytogenes (3xl05 bacteriaJanimal) and observed during 30 days after infection. Thirty percent of the 1O0mglkgtreated mice and 60% of 500mglkg and 1000 mglkg treated mice survived , while 100% of control mice died into 6 days. Based on these findings, we suggest that A. hispidum HAE may induce mobilization of hematopoietic precursors .ITomthe bon~ marrow to the spleen, thus increasing the resistance of L. monocytogenes infected mice Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Fabíola Taufic Monica Iglesias Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Duas classes de medicamentos denominadas estimuladores e ativadores da guanilato ciclase solúvel (GCs) foram desenvolvidas para uso terapêutico em situações patológicas onde há menor formação ou biodisponibilidade NO ou tolerância farmacológica. A GCs é uma enzima heterodímera, composta pelas subunidades alfa (?) e beta (?), nas quais há a presença do grupo prostético heme e que catalisa a conversão da guanosina trifosfato (GTP) em guanosina monofosfato cíclico (GMPc) pela ação do NO. Em situações patológicas o átomo de ferro pode encontrar-se na sua forma oxidada (Fe3+), diminuindo assim a resposta máxima do óxido nítrico (NO). A principal diferença entre os moduladores da GCs é que os ativadores (BAY 58-2667, HMR 1766, BAY 60-2770) atuam de maneira mais eficaz mesmo quando a enzima encontra-se no estado oxidado. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar funcionalmente o relaxamento induzido pelo BAY 60-2770 em artéria pulmonar isolada de coelho. O BAY 60-2770 (0,0001-100 ?M) relaxou de maneira potente (10,1 ± 0.04) e eficaz (105 ± 0,9 %) a artéria pulmonar, sendo este efeito significativamente potencializado na presença dos inibidores da GCs (ODQ, 10 ?M, 4,9 vezes), da fosfodiesterase tipo 5 (tadalafil, 100 ?M, 5,6 vezes) ou da sintase de óxido nítrico (LNAME, 100 ?M, 3,0 vezes). A presença do sequestrador de NO, do doador de NO, da indometacina, do bloqueador do canal de potássio ou a remoção endotelial não interferiram no relaxamento induzido pelo BAY 60-2770. A fenilefrina (0,00001-3 mM) e a estimulação elétrica (4-16 Hz) produziram contração dependente da concentração e frequência, respectivamente. Na presença de tetrodotoxina (TTX, 1 ?M) e fentolamina (1 ?M) houve abolição da resposta contrátil a estimulação elétrica, mostrando a liberação neurogênica de catecolamina. Na presença de BAY 60-2770 co-incubado com ODQ uma redução significativa na contração induzida pela estimulação elétrica foi observada. Apesar desta mesma redução ter sido observada na presença do L-NAME, a mesma não foi estatisticamente significante em comparação aos anéis incubados somente com BAY 60-2770 (1 ?M). Nossos resultados mostraram que a oxidação do grupamento heme, a inibição da fosfodiesterase e a ausência do NO favoreceram a resposta relaxante do BAY 60-2770 Abstract: Soluble guanylate cyclase (sGC) stimulators and activators have been developed for use in pathophysiological condition when NO formation or bioavailability are impaired or when NO tolerance gas developed. Soluble guanylate cyclase is a heterodimer enzyme composed by alpha (?) and beta (?) subunits and a prostetic heme group. Soluble guanylate cyclase converts guanosine triphosphate (GTP) into cyclic guanosine monophosphate (GMPc) after nitric oxide (NO) activaton. Under pathophysiological conditions heme can be oxidized (Fe3+), thus reduzing NO efficacy. The main difference between stimulators and activators (BAY 58-2667, BAY 60-2770 and HMR 1766) is that the latter class of drugs is more efficacious when heme is oxidized. The aim of the present study is to characterize the relaxation induced by BAY 60-2770 in isolated pulmonary artery from rabbit. BAY 60-2770 (0.0001-100 ?M) produced concentration dependent relaxation with potency and maxima response values of 10,1 ± 0.04 and 105 ± 0.9%, respectively. The inhibition of sGC (ODQ, 10 ?M) or phosphodiesterase type 5 (tadalafil, 100 ?M) or the nitric oxide synthase (L-NAME, 100 ?M) produced significantly leftward shifts by, approximately, 4.9, 5.4 and 3.0, respectively. The NO-scavenger, the NO-donor, the cyclooxygenase inhibition, the potassium channel blocker or endothelial removal did not interfere on the pharmacological parameters of BAY 60-2770. Phenylephrine (PE, 0.0001- 3 mM) and electrical field stimulation (EFS, 4-16 Hz) induced concentration and frequency dependent-contraction, respectively. Phentolamine (1 ?M) and tetrodotoxin (TTX, 1 ??) practically abolished EFS-induced contraction, showing the neurogenic source of catecholamines. Co-treatment with BAY 60-2770 with ODQ reduced significantly the EFS-induced contraction in comparison with BAY 60- 2770 (1 ?M) alone. Although we have observed a tendency of reduction in the amplitude of contraction when BAY 60-2770 was co-incubated with L-NAME, it was not statistically significant. Therefore, our results showed that the oxidation of heme group, the inhibition of phosphodiesterase and lower levels of NO favoured the relaxing response of BAY 60- 2770 in isolated rabbit pulmonary artery Mestrado Farmacologia Mestre em Farmacologia

Orientador: Lea Rodrigues Simioni Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações induzidas pelo glicocorticóide prednisolona sobre os processos fisiológicos normais da junção neuromuscular de ratos e camundongos, através de técnica miográfica e eletrofisiológica in vitro e in vivo. Prednisolona, na concentração de 0,3 mM, antagonizou os efeitos bloqueadores produzidos pela d-Tubocurarina (1,45 ~M) tanto in vitro como in vivo. Nesta mesma concentração, produziu um aumento na força de contração muscular induzida pela ß -BuTx 1 µM em preparação nervo frênico-diafragma de camundongo e também alterou o padrão de resposta contrátil da guanidina. Além disso, Prednisolona causou efeitos pré sinnpticos como demonstrado pelo discreto aumento da freqqüncia dos potenciais de placa terminal em' miniatura (270 :t 4%) allm do aparecimento de potenciais gigantes. Contudo a prednisolona', nno determinou qualquer alteraaço sobre os valores do potencial de membrana. Assim, estes resultados confirmam os dados da literatura que apontam para uma induuço por parte do glicocorticcide prednisolona, de efeitos diretos sobre a transmissso neuromuscular, possivelmente aumentando a liberaaço de acetilcolina no terminal nervoso motor Abstract: The neuromuscular effects of glucocorticoids have been studied extensively since the clinical benefits of these hormones in the myasthenia gravis were reported by WARMOLTs et aI. in 1970. In this work we examined neuromuscular effects of the synthetic glucocorticoid prednisolone in isolated mammalian preparations in vitro and in vivo with supramaximal stimuli of the 0,1 Hz and 0,2 ms duration. Prednisolone (0.3 mM) antagonized the blockade produced by d¬ tubocurarine in vitro and in vivo. At this same concentration prednisolone increased in the muscle twitch tension responses to ß BuTx 1 µM in isolated phrenic nerve-diaphragm preparations but did not alter the contractile responses to 3,4-diaminopyridine; prednisolone also dimi~uished the neuromuscular effects induced by guanidine. In addition, prednisolone acted presynaptically to increase the amplitude and frequency of m.e.p.ps and generated a considerable number of giant m.e.p.ps without altering the resting membrane. These results suggest that a direct action of prednisolone on the neuromuscular transmission may increase the release of acetylcholine from the nerve terminal Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Jose Pedrazzoli Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A maioria dos isolados de H. pylori é sempre susceptíveis à amoxicilina, um antibiótico comumente usado na terapia de erradicação do H. pylori. Entretanto, a resistência à amoxicilina é emergente nos isolados clínicos, especialmente em paises onde esse antibiótico pode ser obtido sem prescrição. Assim, o mecanismo molecular de resistência a amoxicilina tem sido apenas identificada em poucas H. pylori AmoxR e tolerantes. Este trabalho analisou os genes que atualmente apresentam maior probabilidade de estarem envolvidos no mecanismo de resistência e também a expressão gênica diferencial de uma linhagem resistente à amoxicilina crescida em presença e ausência da droga. Depois de realizada a transformação com o DNA genômico, foi feito também a transformação natural, da linhagem susceptível 26695 com os genes, previamente amplificados por PCR, pbp1A, pbp2, ftsI (pbp3), pbp4, hcpA, lytB, rodA1, mreC, mreB, e llm, dos isolados clínicos resistentes. Apenas a transformação realizada com o gene pbp1A resultou em colônias amoxR de todos os sete isolados clínicos estudados. A resistência foi mediada por várias alterações mutacionais no segundo e terceiro motif conservado de PBP1A e suas adjacências. Todos os 8 transformantes AmoxR analisados continham uma substituição T555R e N542Y, sete dos transformantes AmoxR apresentavam a substituição S402G, E406A, e S417T, enquanto que um transformante tinha apenas a substituição S414R. Entretanto não podemos excluir a relação de outros genes a essa resistência. Para avaliar se a resistência da linhagem Hardenberg apresenta uma expressão gênica diferencial quando entra em contato com a amoxicilina, foi realizada a técnica de RAP ¿ PCR. Foram usados 5 diferentes pares de primers arbitrários que geraram 101 bandas com expressão diferencial. Nossos resultados mostraram que a amoxicilina altera a expressão de genes envolvidos na adaptação da bactéria a nova situação. Neste sentido, os resultados que foram obtidos com este trabalho poderão contribuir para a caracterização molecular dos mecanismos de resistência das linhagens brasileiras de H. pylori à amoxicilina, droga essa usada na terapia de erradicação Abstract: Amoxicillin-based therapies are highly effective for the treatment of Helicobacter pylori infections, but the efficacy may decrease as the incidence of amoxicillin resistance is increasing. The extensive use and limited choice of the antibiotics have resulted in the development of antibiotic resistance in H. pylori. So far, the molecular mechanism underlying stable amoxicillin resistance has only been identified for a few naturally occurring amoxicillin-resistant (AmxR) In this study, we evaluated genes were selected as potential candidates for to be responsible to amoxicillin resistance and we evaluated the gene expression pattern in response to amoxicillin. No changes of genes ftsI, hcpA, llm, lytB, mreB, mreC, pbp2, pbp4, and rodA1, encoding putative PBPs or involved in cell wall synthesis were found among the transformed resistant H. pylori. Amoxicillin resistance was mediated by various mutational changes in or adjacent to the second and third PBP-motifs of the pbp1A gene. All eight AmxR transformants analyzed contained a T555S and N561Y substitution, seven of the AmxR transformants contained a S402G, E406A, and S417T substitution, while one transformant only contained a S414R substitution. Although we cannot exclude the role of other genes in amoxicillin resistance. For to evaluate the gene expression was using RNA arbitrarily primed PCR (RAP-PCR). In the experiments, c. 101 differentially expressed RAP-PCR products were identified using five arbitrary primers. The differential expression of the isolated cDNAs was confirmed by real-time PCR. The results showed that amoxicillin alters the expression of cDNAs. Further analysis of these cDNAs will allow a better comprehension of both the molecular mechanism(s) of amoxicillin resistance and the adaptative mechanism (s) used by H. pylori in the presence of this antibiotic Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A presença de um par de órgãos copuladores, os hemipênis, é a característica mais singular do grupo Squamata, que reúne as serpentes e os lagartos. Para que ocorra a ereção, o hemipênis sofre ingurgitamento dos corpos cavernosos por sangue e linfa, além de contar com o auxílio da contração do músculo propulsor do pênis e o relaxamento do músculo retrator. O coito nestes animais pode durar até 28 horas, porém, os mecanismos envolvidos, as estruturas e sua base farmacológica de funcionamento são ainda pouco conhecidas. O hemipênis consiste de dois corpos cavernosos funcionalmente concêntricos, um deles contendo feixes de fibras musculares lisas. Em mamíferos, sintases de NO neuronais e endoteliais estão presentes em estruturas neurais e no endotélio, respectivamente, enquanto a guanilato ciclase solúvel e PDE5 (fosfodiesterase tipo 5) estão expressas no músculo liso trabecular. Partindo disto, para investigar as vias presentes no tecido das cobras, foram construídas curvas concentração-resposta cumulativas de relaxamento para a acetilcolina (ACh), nitroprussiato de sódio (SNP), BAY41-2272 e tadalafil em corpos cavernosos de Crotalus (CCC) pré-contraídos com fenilefrina. Relaxamentos induzidos por estímulo elétrico (EFS) também foram feitos na ausência e presença de L-NAME (100 mm), ODQ (10 mM) e tetrodotoxina (TTX, 1 mM). Em CCC pré-contraídos, o relaxamento dependente de frequência, gerado por EFS, durou três vezes mais do que aqueles em CC mamíferos. Embora estes relaxamentos sejam praticamente abolidos por L-NAME ou ODQ, eles não foram afetados pela TTX. Em contraste, o EFS promoveu relaxamento em corpos cavernosos de sagui que haviam sido incubados com TTX Abstract: The presence of a pair of copulatory organs, the hemipenes, is the most unique feature of the group Squamata, which includes snakes and lizards. For an erection to occur, the hemipenes suffer engorgement of the corpora cavernosa with blood and lymph, besides counting with the aid of contraction of the propellant muscle and relaxation of penis retractor muscle. Coitus in these animals can last up to 28 hours, however, the mechanisms involved, the structures and their pharmacological basis are still little known. The hemipenis consists of two concentric functionally cavernous bodies, one containing bundles of smooth muscle fibers. In mammals, neuronal NO synthases and endothelial cells are present in the endothelium and neuronal structures, respectively, whereas the soluble guanylate cyclase and PDE5 (phosphodiesterase type 5) are expressed in trabecular smooth muscle. To investigas the tissue were constructed cumulative concentration-response curves for relaxation to acetylcholine (Ach), sodium nitroprusside (SNP), BAY41-2272 and tadalafil in the corpora cavernosa of Crotalus (CCC) pre contracted with phenylephrine. Relaxations induced by electrical stimulation (EFS) was also tested in the presence and absence of L-NAME (100 mm), ODQ (10 mM) and tetrodotoxin (TTX, 1 mM). In precontracted CCC, dependent relaxation frequency generated by EFS last three-times more than those in DC mammals. Although these relaxations are virtually abolished by L-NAME or ODQ, they were not affected by TTX. In contrast, EFS caused a relaxation of the corpus cavernosum in marmosets that had been incubated with TTX Mestrado Farmacologia Mestra em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A pancreatite aguda e uma doença inflamatória do pâncreas caracterizada por intensa necrose pancreática e efeitos sistêmicos secundários como lesão pulmonar, os quais são a principal causa da mortalidade observada nessa doença. Ha evidencia de que as fosfolipases A2 (PLA2) tem um importante papel na fisiopatologia da pancreatite aguda. O objetivo deste trabalho foi investigar a capacidade de PLA2s de induzir pancreatite em ratos e os mecanismos envolvidos nesse fenômeno. As seguintes PLA2s foram utilizadas: piratoxina-I (homologo Lys-49 de PLA2 desprovido de atividade catalitica), bothropstoxina-II (homologo Asp-49 de PLA2 com baixa atividade catalítica) e a PLA2 proveniente do veneno de Naja moçambique moçambique (que possui alta atividade catalítica). Ratos Wistar machos (200-250 g) provenientes do CEMIB/UNICAMP foram utilizados. As PLA2s foram injetadas no ducto biliopancreatico de animais anestesiados e apos diferentes tempos experimentais foram avaliados o extravasamento de proteínas plasmáticas no pâncreas, infiltrado de neutrofilos no pâncreas e pulmão e amilase serica. A analise histológica do pâncreas e pulmão também foi realizada em alguns grupos experimentais. Piratoxina-I foi capaz de causar extravasamento de proteínas plasmáticas no pâncreas, infiltrado de neutrofilos no pulmão e os níveis sericos de amilase. Alem disso, a piratoxina-I causou alterações histológicas nos tecidos pancreático (infiltrado de neutrofilos, necrose de células acinares e edema intersticial) e pulmonar (edema intersticial e diminuição do espaço alveolar), que foram mais evidentes nos tempos iniciais da pancreatite (4-12h). Bothropstoxina-II e a PLA2 do veneno de Naja moçambique moçambique, a semelhança da Piratoxina-I, também foram capazes de aumentar o extravasamento de proteínas plasmáticas e o influxo de neutrofilos no tecido pancreático por mecanismos nao relacionados a sua atividade catalítica. Entretanto, o influxo de neutrofilos para o pulmão e o aumento dos níveis sericos de amilase causados por essas PLA2s foi dependente de sua atividade catalítica. As PLA2s também causaram secreção deamilase de acinos pancreáticos isolados, que foi dependente da atividade catalítica dessas enzimas. Adicionalmente, com o objetivo de entender o mecanismo envolvido na pancreatite induzida pela PLA2 de Naja mocambique mocambique animais foram tratados com os seguintes agentes farmacológicos: pentoxifilina (inibidor da sintese de TNF-á), SR140333 (antagonista de receptor NK1), icatibant (antagonista de receptor B2), L-NAME (inibidor não seletivo das NOS), aminoguanidina (inibidor preferencial da NOS induzivel), indometacina (inibidor não seletivo de COX), celecoxib (inibidor seletivo de COX-2), PCA4248 (antagonista dos receptores de PAF) e AA861 (inibidor da 5-lipoxigenase). Em conjunto, nossos dados mostraram que os efeitos locais e secundários são multimediados, envolvendo a participação de bradicinina, substancia P, NO, TNF-á, PAF e metabolitos das COXs. Em conclusão, demonstramos que as PLA2s secretorias são capazes de induzir pancreatite aguda em ratos quando injetadas no ducto biliopancreatico, um quadro caracterizado por efeitos inflamatórios locais e secundários cuja mediação farmacológica envolve vários fatores. Alem disso, a pancreatite aguda induzida pelas PLA2s reproduz algumas alterações observadas na pancreatite aguda em humanos, representando uma nova estratégia de estudo da fisiopatologia da pancreatite aguda Abstract: Acute pancreatitis is an inflammatory disease of the pancreas that is characterized by intense pancreatic necrosis and remote systemic effects such as the lung injury that is the main cause of death during acute pancreatitis. There are evidences that phospholipases A2 (PLA2) have an important role in the acute pancreatitis pathophysiology. The aim of this work was to investigate the ability of PLA2 to induce acute pancreatitis in rats, and the mechanisms underlying this phenomenon. The following PLA2s were used: piratoxin-I (a Lys-49 PLA2 homologue devoid of catalytic activity), bothropstoxin-II (an Asp-49 PLA2 homologue with low catalytic activity) and PLA2 from Naja mocambique mocambique venom (high catalytic activity). Male Wistar rats (200-250g) provided by CEMIBUNICAMP have been used. The PLA2s were injected into the common bile duct of anesthetized rats, after which pancreatic plasma protein extravasation, pancreatic and lung neutrophil infiltration and serum levels of amylase were measured. Histology of the pancreatic and lung tissue has also been carried out in some experimental group. Piratoxin-I was able to increase the pancreatic plasma protein extravasation, lung neutrophil infiltration and serum amylase levels. In addition, Piratoxin-I caused histological changes in the pancreatic (neutrophil infiltration, areas of acinar cell necrosis and interstitial edema) and lung (interstitial edema and diminuition of alveolar space) tissues, which were more evident in the early periods (4-12h) after the injection. Bothropstoxin-II and PLA2 from Naja mocambique mocambique venom were also able to increase the plasma protein extravasation and neutrophil influx in the pancreatic tissue by mechanisms unrelated to their catalytic activity. However, the remote lung neutrophil influx caused by these PLA2s was shown to depend on their catalytic activity. The enhancement of serum amylase levels was also dependent on the catalytic activity of these enzymes. The PLA2s also caused amylase secretion from isolated pancreatic acini, which was dependent on their catalytic activity. Next, in order to further understand the mechanisms involved in pancreatitis induced by PLA2 Naja mocambique mocambique, animals were treated with the following pharmacological agents: pentoxifylline (TNF-á synthesis inhibitior), SR140333 (NK1receptor antagonist), icatibant (B2 receptor antagonist), L-NAME (non-selective NOS inhibitor), aminoguanidine (preferential inducible NOS inhibitor), indomethacin (nonselective COX inhibitor), celecoxib (selective COX-2 inhibitor), PCA4248 (PAF receptor antagonist) and AA861 (5-lipoxygenase inhibitor). Taken together our data showed that local and remote effects are multimediated, involving the participation of bradykinin, substance P, NO, TNF-á, PAF and COXs metabolites. In conclusion, we have shown that secretory PLA2s are able to induce acute pancreatitis in rats when injected into the common bile duct. Therefore, PLA2-induce acute pancreatitis reproduces some aspects of the human disorder representing a new strategy to study the pathophysiology of acute pancreatitis Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia

Orientador: Jose Pedrazzoli Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O objetivo do presente estudo foi comparar o comportamento in vivo e in vitro de duas formulações de pantoprazol. Além disso, foi proposta a classificação biofarmacêutica provisional do fármaco, bem como uma correlação in vitro - in vivo não linear (IVIVR). Os estudos in vivo foram conduzidos em dose única em jejum (n=28) e pós-prandial (n=62) com desenho cruzado e randomizado. As concentrações plasmáticas de pantoprazol foram determinadas por LC-MS/MS. Os parâmetros farmacocinéticos e a deconvolução dos dados de concentração plasmática versus tempo foram obtidos empregando-se o programa WinNonlin 5.2 - IVIVC toolkit (Pharsight, EUA). Os perfis de dissolução foram avaliados em meios biorelevantes (FaSSIF e FeSSIF) nos aparatos USP 2 e 3 e as curvas de dissolução foram comparadas considerando os cálculos de f2 ou modelos dependentes. Os valores da solubilidade, Log P e cLog P do pantoprazol foram obtidos do Merck Index (Whitehouse Station, EUA) e do programa ChemDraw Ultra 10.0 (Cambridgesoft, EUA). Os dados de permeabilidade do pantoprazol forma obtidos do programa ADMET Predictor (Simulations Plus, EUA). A classificação biofarmacêutica provisional do pantoprazol foi proposta considerando o fármaco metoprolol como referência. A IVIVR foi estabelecida entre as frações dissolvidas (Fd), dos ensaios no aparato 2, com as frações absorvidas dos estudos in vivo. Para o estudo em jejum os valores dos intervalos de confiança 90% para os parâmetros Cmax (0.94-1.03) e ASC0-t (0.89-0.99) apresentaram-se dentro dos limites de confiança (0.8-1.25). Entretanto, os intervalos de confiança do estudo pós-prandial não se apresentaram dentro dos limites de confiança. Os perfis de dissolução nos aparatos USP 2 e 3 demonstraram a mesma disposição das formulações nos meios FaSSIF e FeSSIF, considerando o modelos de f2 e Weibull. Os valores de solubilidade, Log P e permeabilidade para o fármaco pantoprazol obtidos in silico permitiram a classificação do fármaco como de alta solubilidade e baixa permeabilidade. A IVIVR não linear obtida para as formulações de pantoprazol indicaram que a permeabilidade é fator limitante para a absorção. Enfim, os perfis de dissolução no meio biorelevante FaSSIF, nos aparatos USP 2 e 3, puderam ser empregados para prever o comportamento in vivo das formulações. O pantoprazol foi classificado como um fármaco classe III e a IVIVR não-linear obtida confirma a classificação biofarmacêutica provisional. Além disso, pôde-se sugerir a bioisenção para formulações de pantoprazol com base nos resultados dos estudos de dissolução em meios biorelevantes e na conhecida segurança e tolerabilidade desse fármaco. Abstract: The purpose of the study was to compare the in vivo and in vitro behaviour of pantoprazole formulations. Moreover, a provisional biopharmaceutical classification of the drug (BCS) was proposed as well as a non-linear in vitro - in vivo relationship (IVIVR). The in vivo studies were conducted under single dose in fasting (n=28) and fed conditions (n=62) and randomized crossover design. Plasma concentrations of pantoprazole were determined by LC-MS/MS. Pharmacokinetic parameters and deconvolution data were calculated from the observed plasma-concentration time profiles by WinNonlin 5.2 - IVIVC toolkit (Pharsight, USA). Dissolution profiles were evaluated in biorelevant media (FaSSIF and FeSSIF) in USP apparatus 2 and 3 and the dissolution curves were compared to either f2 values or model-independent approach. The solubility, Log P and cLogP data of pantoprazole were obtained from Merck Index (Whitehouse Station, USA) and ChemDraw Ultra 10.0 (Cambridgesoft, USA). The permeability data of pantoprazole were calculated by ADMET Predictor (Simulations Plus, USA). The provisional biopharmaceutical classification of pantoprazole was proposed considering metoprolol as a reference drug. The IVIVR analysis was evaluated considering the dissolved drug fraction (Fd) from apparatus 2 and the absorved drug fraction (Fa) from the in vivo studies. Under fasting condition the 90% C.I for Cmax (0.94-1.03) and AUC0-t (0.89-0.99) were within the range of bioequivalence (0.8-1.25). However, the results of the fed study were not within the BE range. The dissolution profiles in USP apparatus 2 and 3 demonstrated a similar disposition of both formulations in FaSSIF and FeSSIF media considering f2 and Weibull's models. The solubility, Log P and permeability values of pantoprazole obtained by in silico evaluation allowed the classification of pantoprazole as a highly soluble and low permeability drug. The non-linear IVIVR obtained for the pantoprazole formulations indicated that absorption of pantoprazole is limited by permeability. In conclusion, the dissolution profiles in the biorelevant medium (FaSSIF) on both USP apparatus 2 and 3 may be used as a tool to predict the in vivo disposition of the formulations. Pantoprazole was classified as a class III drug (BCS) corroborated by the non-linear IVIVR study to support this provisional classification. Furthermore, biowaiver may be granted for pantoprazole formulations on the basis of in vitro dissolution results in biorelevant media and the data available in the literature concerning high tolerability and safety of the drug. Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador : Osvaldo Augusto Sant'Anna Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Este trabalho objetivou identificar e demonstrar a razão dos baixos títulos neutralizantes da atividade letal, do soro antiveneno de Lachesis muta, produzido pelo Instituto Butantan. O veneno de Lachesis muta é responsável por 400 acidentes anuais no Brasil e o único tratamento, comprovadamente eficaz, é a soroterapia com antiveneno específico. Os baixos títulos de anticorpos encontrados nos plasmas de equídeos levam a uma descontinuidade de produção ou a um produto com alta concentração de proteína. Estudaram-se também as possibilidades dos venenos de Bothrops jararaca e Crotalus durissus terrificus possuírem o mesmo efeito supressor. Na tentativa de elucidar a possível atividade imunossupressora do veneno de Lachesis muta, foram utilizados como modelo experimental, camundongos selecionados para boa resposta imune humoral (linhagens HQP) e um antígeno não relacionado, no caso o erítrócito de carneiro (EC). O teste de hemoaglutinação foi escolhido para se comparar o efeito do veneno de Lachesis muta na resposta imune a antígenos não relacionados. Grupos de animais receberam veneno de Lachesis muta 24h e 72h antes e concomitante ao EC. Após os primeiros ensaios, em que se verificou a presença de um fator que inibia a produção de anticorpos a um antígeno não relacionado e que este era dose-dependente, o veneno de Lachesis muta foi fracionado por cromatografia de gel filtração em Superdex® 75. Seis frações foram obtidas, porém as frações 4 e 5 apresentaram atividade imunossupressiva. Os venenos obtidos sem as frações 4 e 5 foram utilizados na imunização de equídeos e o título destes animais foi pelo menos, cinco vezes superior ao título obtido por animais imunizados com veneno total. Os resultados obtidos levam-nos às seguintes conclusões: o veneno de Lachesis muta muta apresenta um efeito imunossupressor parcial; pelo menos duas frações distintas apresentam esta atividade; a atividade imunossupressora é dose-dependente; as frações imunossupressoras quando removidas do veneno, faz com que este aumente em cinco vezes os títulos neutralizantes da atividade letal no plasma eqüino Abstract: In order to study the effect of Lachesis muta venom on the antibody response to unrelated antigens we first made an experimental analysis on mice genetically selected for high antibodies" production (HGP lines), to determine the effect of Lachesis muta venom on the anti-sheep erythrocytes (SE) response. Groups of mice received lOOug of venom in 0,5ml by intraperitoneal (ip) route 72, 24 hs before or simultaneously with 5 X 108 SE/0,5ml ip. In a second test, we repeated the same experiment as described above with B. jararaca and C. d. terrificus venoms using 18ug/0,5ml and 0,6ug/0,5ml respectively, in order to observe wether the inhibitory effect was present in venoms of other species. To elucidate if the depletory effect was present only in a particular venom fraction, around 120mg of Lachesis muta muta venom was applied to a Superdex® 75 column. Six fractions were studied for their biological activity and biochemical aspects (polyacrilamide gel electrophoresis). The results showed that in relation to the control groups (SE only) the total Lachesis muta venom promoted a clear, significant (P < 0.001) and persistent decrease in the anti-SE antibody response, mainly in the group that received venom 72hs before. The venoms of B. jararaca and C. d. terrificus did not show any inhibitory effect. After the chromatographic separation fraction 4 (molecular mass between 24 and 30 kDa) and 5 (molecular mass between 10 and 14 kDa) showed a significant supressive effect (P < 0.001 and P < 0.01 respectively). These data showed an inhibitory effect of Lachesis muta venom on an unrelated antigen. The activity is dose dependent and is present only in this species of Crotalidae family. The experiment with select mice has got subject to be applied in antivenom production. When horses were immunized with Lachesis muta venom without supressive frations, the sera were three times more effetive than the same sera from the horses which received total Lachesis muta venom Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Antonio Condino Neto Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O sistema NADPH oxidase fagocítico humano possui um papel importante na defesa contra microorganismos intracelulares, incluindo micobactérias. Mutações nas subunidades deste sistema resultam na Doença Granulomatosa Crônica (DGC). O gene CYBB, localizado no cromossomo X, codifica a subunidade gp91phox, e mutações neste gene são responsáveis por cerca de 60% dos casos de DGC. Cerca de 40 anos depois da identificação de DGC, foi identificado o primeiro dos 13 defeitos genéticos associados à Susceptibilidade Mendeliana à Micobacteriose, participantes do eixo IL12/23-IFN-?. Baseado no fato de que ambas as doenças predispõem a infecções por micobactérias e que o IFN-? is é um importante ativador do gene CYBB os autores se propuseram a estudar as características clinicas de pacientes latino-americanos com DGC e o sistema NADPH oxidase e expressão do gene CYBB em pacientes com defeitos no eixo IL-12/23-IFN-?. Em relação às características clínicas: história familiar de infecções graves e/ou de repetição, bem como reação adversa à vacina BCG, linfadenopatia, abscessos de pele e profundos estavam associados à DGC, em comparação com não-DGC avaliados pelo laboratório. Defeitos nos receptores IFNGR1 e IFNGR2 e cadeia B1 do receptor de IL-12 podem apresentar expressão do gene CYBB e atividade do sistema NADPH oxidas e diminuída ou abolida, chegando a níveis comparáveis a um paciente com DGC. O IFN- ? e seus receptores são essenciais para o desenvolvimento e ativação do sistema NADPH oxidase, e pacientes com comprometimento da função deste sistema devem também ser avaliados para defeitos do eixo IL12/23-IFN-? afetando secundariamente o sistema NADPH oxidase. Abstract: The NADPH phagocytic oxidase system plays a crucial role in host defense against intracellular microorganisms, including mycobacteria. Mutations affecting subunits of this system result in Chronic Granulomatous Disease (CGD). The CYEE gene, located in the X chromosome, encodes gp91 phox, and mutations on this gene account for more than 60% of CGD cases. Almost 40 years after, the first of 13 different genetic disorders associated with Mendelian Susceptibility to Mycobacterial Diseases (MSMD), was identified. The genes responsible for MSMD are part of the IL12/23-IFN-? axis. Based on the fact that both the diseases predispose to mycobacterial infections and that IFN-? is an important activator of CYBB gene, the authors aimed to describe clinical aspects of Latin American CGD patients and investigate ifthe NADPH oxidase system function and gp91phox expression would be affected in patients with defects in the IL-12/23-IFN-? axis. Regarding clinical features familial history of recurrent and sever infections, as well as adverse reactions to BCG vaccine, lymphadenopathy, skin and profound abscess were associated to DGC when compared to clinical features of non-CGD evaluated in the laboratory. Defects of IFNGR1 and IFNGR2 and IL12RB1 may present diminish.ed or abolished gene expression of CYBB and activity of NADPH oxidase system ate levels of a CGD patient. Based on that, we can conclude that IFN- ? and its receptor are essential for development and activation 9f NADPH oxidase system. In addition, patients who present an impaired superoxide release and/or failure on expressing gp91phox should also be evaluated for IL12/23-IFN-? axis affecting secondarily the NADPH oxidase system. Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Stephen Hyslo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A difusão de toxinas do sítio de inoculação de veneno é atribuída à ação de enzimas como colagenases, elastases, hemorraginas e hialuronidases que degradam os componentes da lâmina basal e da matriz extracelular. Neste trabalho avaliamos a atividade hialuronidásica de vários venenos animais e investigamos algumas propriedades da enzima encontrada no veneno da cascavel sul americana Crota/us durissus terrificus. A atividade hialuronidásica foi medida por um método turbidimétrico usando-se ácido hialurônico como substrato e também por detecção in situ após SDS PAGE. A hialuronidase foi parcialmente purificada por gel filtração em coluna de Sephacryl S200 HR. O perfil de eluição foi monitorado a 280nm e as frações foram testadas para atividade enzimática. A capacidade de antisoros em neutralizar a enzima foi avaliada medindo-se a atividade residual após co-incubação durante 30 min à 37°C. De modo geral, os venenos investigados possuíam atividade hialuronidásica, com níveis mais altos em venenos de artrópodes [15.3+-4.7 ¿ 166+-19.2 unidades (TRU ou "turbidity reducing units")/mg] do que em serpentes (O - 7.0+-1.7 TRU/mg; média+-E.P.M.; n=3-6). Houve variação dentro e entre espécies e subespécies, conforme observado com os venenos botrópicos e crotálicos, respectivamente. Assim, a atividade hialuronidásica de diferentes amostras de veneno de C. d. terrificus variou de 4.5:tO.5 à 13.2:t4.8 unidades TRU/mg, (n=3-6), enquanto a de C. d. cascavella e C. d. collilineatus era de 25.7:t1.2 e 6.8:t1.1 TRU/mg, respectivamente. A hialuronidase mostrou pH ótimo de 4,0, e atividade máxima na presença de 50-100 mM de NaCI. A enzima perdeu atividade acima de 37°C, e também perdeu 50% de atividade durante as primeiras 6 h em solução (acetato de sódio 0,1 M, pH 6,0, contendo 0,15 NaCI), mas depois se manteve relativamente constante até 24 h, independente da temperatura de incubação (4°C, 25°C, 37°C). A cromatografia do veneno de C. d. terrificus por gel filtração resultou em um pico de atividade hialuronidásica com peso molecular >30.000, o que foi confirmado por eletroforese (SDS-PAGE) seguido por detecção de atividade in situo Com esta técnica, apenas uma banda de atividade foi observada com os diferentes lotes de veneno e o peso molecular foi estimado em -75.000. A atividade da enzima foi inibida de forma dose-dependente por antisoros comerciais (anti-botrópico, anti-crotálico, anti-elapídico e anti-escorpiônico), sendo o anti-escorpiônico o menos eficaz; em altas doses, todos inibiram a atividade em >90%. Estes resultados indicam que há variação nos ní.veis de atividade hialuronidásica no veneno de C. d. terrificus, mas que existe apenas uma isoforma. As propriedades desta enzima se assemelharam às de outras hialuronidases de venenos. A neutralização da atividade enzimática por diferentes antisoros comerciais indicou que há identidade imunológica entre hialuronidases de diferentes venenos Abstract: Animal venoms contain enzymes capable of degrading basement membrane and extracellular matrix components. We examined the collagenase, elastase and hyaluronidase activities of several venoms and some of the properties of hyaluronidase in Crotalus durissus terrificus (South American rattlesnake) venom. Collagenase and elastase were assayed colorimetrically. Hyaluronidase activity was measured turbidimetrically and by in situ detection following SDS-PAGE. The enzyme was also partially purified by gel filtration on Sephacryl S200 HR. Neutralization of hyaluronidase by antisera was tested by measuring the residual activity afier co-incubation. Arthropod and snake venoms showed similar levels of collagenase; elastase activity varied from O - O.713 ~nm/mg/24 h. The hyaluronidase content of arthropod venoms [15.3+-4.7 to 166:!:19.2 units/mg; mean +-SEM] was higher than in snake venoms (37°C and after 6 h in solution (-50% reduction) at 4°C, 25°C and 37°C. Commercial antisera neutralized the enzyme. These propertiesof C. d. terrificus hyaluronidase were similar to those of other venom hyaluronidases Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A disfunção erétil é definida como a incapacidade de alcançar ou manter ereção peniana adequada para a satisfação sexual, e ocorre em graus variáveis prejudicando a qualidade de vida do homem. A disfunção erétil está associada a fatores de risco como doenças cardiovasculares, hipertensão arterial, diabetes mellitus, hipercolesterolemia, envelhecimento, tabagismo e sedentarismo. O óxido nítrico (NO) é o principal mediador do relaxamento do músculo liso peniano. Evidências clínicas e experimentais indicam que a redução da disponibilidade de NO ou da reatividade ao NO endógeno leva à disfunção endotelial. Trabalhos recentes mostram que parte dos benefícios da atividade física regular no sistema cardiovascular é intensificar a produção de NO e/ou expressão da NOS pelas células endoteliais. Dessa forma, usando o modelo de inibição crônica da síntese de NO em ratos pelo L-NAME, investigamos os efeitos do treinamento físico regular na função erétil de ratos. Na primeira etapa, estudamos a influência do treinamento físico na função erétil de ratos saudáveis normotensos. Na segunda etapa, estudamos a influência do pré-condicionamento físico na função erétil de ratos submetidos a bloqueio crônico de NO. Na terceira etapa, avaliamos a eficácia terapêutica da atividade física regular na função erétil de ratos submetidos a bloqueio crônico de NO. Além das respostas funcionais (medidas de relaxamento de corpo cavernoso isolado e de pressão intracavernosa in vivo), realizamos a dosagem plasmática de nitrito/nitrato (NOx). A atividade plasmática da superóxido dismutase (SOD), a expressão protéica da NO síntase neuronal (nNOS), da nitrotirosina (3-NT) e da SOD, assim como a expressão gênica da gp91phox foram analisadas no corpo cavernoso. Em ratos sedentários, nossos resultados mostraram que o exercício físico por 8 semanas ampliou a resposta relaxante mediada pelo NO (NaNO2 acidificado), nitroprussiato de sódio (SNP) e estimulação elétrica (EFS), sem alterar a resposta contrátil em resposta à fenilefrina (PE) e endotelina-1 (ET-1). Nos ratos com deficiência crônica de NO, o pré-condicionamento preveniu o aumento da pressão arterial e amplificou o relaxamento do corpo cavernoso induzido pelo SNP, ACh e EFS; porém, não alterou a resposta relaxante ao BAY 41-2272 e sildenafil. Além disso, o pré-condicionamento normalizou a pressão intracavernosa e os níveis plasmáticos de NOx. Ao avaliarmos o efeito do treinamento físico após instalação do bloqueio crônico de NO (eficácia terapêutica), notamos que a atividade física atenuou a hipertensão arterial, potencializou o relaxamento induzido pelo SNP e reverteu a redução do relaxamento em resposta à ACh e EFS. Além disso, normalizou a pressão intracavernosa e atenuou os níveis de NOx. A expressão protéica da nNOS e da PnNOS não foi alterada pela atividade física; porém, o aumento da nitração protéica (3-NT) foi previnida pelo treinamento físico nos animais hipertensos. A expressão protéica da SOD não foi alterada pelo treinamento; entretanto, a atividade física regular atenuou a redução da atividade plasmática da SOD. Os níveis de expressão gênica da subunidade catalítica da NADPH oxidase, a gp91phox, foram reduzidos pela atividade física regular nos ratos deficientes crônicos de NO, e restaurados pelo pós-condicionamento. Portanto, concluimos que o treinamento físico (pré ou pós-condicionamento), é uma estratégia nãofarmacológica eficiente capaz de reduzir o estresse oxidativo, aumentando a biodisponibilidade de NO, que resulta na melhora da disfunção erétil Abstract: Erectile dysfunction is defined as the consistent or recurrent inability of a man to attain and/or maintain a penile erection sufficient for sexual activity, and can occur in different levels leading to an impairment of men¿s quality of life. Risk factors such as cardiovascular diseases, arterial hypertension, diabetes mellitus, hypercholesterolemia, aging, smoking and life sedentary increase the prevalence of erectile dysfunction. Nitric oxide (NO) is the main mediator of relaxation of penile smooth muscle. Clinical and experimental evidences suggest that decreased NO biodisponibility or NO reactivity contribute to erectile dysfunction. Recent studies have shown that part of beneficial effects of regular physical activity in the cardiovascular system is due to an increase in NO production and/or NOS expression by endothelial cells. Therefore, the aim of this work was to study the influence of run training on the erectile function from rats under chronic NO blockade by long-term treatment with L-NAME. First, we investigated the influence of physical training in the erectile function of healthy, normotense rats. Second, we studied the influence of prior physical conditioning in the erectile function of chronic NO-defficient rats. Third, we evaluated the therapeutic efficacy of regular physical activity (pós-conditioning) in the erectile function in chronic NO-defficient rats. To achieve this, we evaluated the functional responses (measurements of cavernosal relaxation in vitro and intracavernosal pressure in vivo) and the plasma levels of nitrite/nitrate (NOx) and plasmatic superoxide dismutase (SOD) activity, protein expression of neuronal NOS (nNOS), nitrotyrosin (3-NT) and SOD, and gene expression of gp91phox in the corpus cavernosum. In healthy normotenses rats, physical training by 8 weeks improved the relaxant responses mediated by NO (added as acidified sodium nitrite solution; NaNO2), sodium nitricprusside (SNP) and electrical field stimulation (EFS), without affecting the contractile responses induced by phenilephrine (PE) and endothelin (ET-1). In NO-defficient rats, the prior physical conditioning attenuated the increased arterial pressure, and potentiated the relaxations of corpus cavernosum induced by SNP, ACh and EFS. However, no changes were found for BAY 41-2271 and sildenafil. In NO-defficient animals, the physical activity normalized the intracavernosal pressure and plasma NOx levels. The post-conditioning (therapeutic efficacy) also attenuated the L-NAME induced arterial hypertension, potentiated the SNP-induced relaxations and reverted the reductions of relaxing responses to ACh and EFS. Furthermore, post-conditioning nomalized the intracavernosal pressure and attenuated the plasma NOx levels. Protein expression of nNOS and PnNOS were not affected by post physical activity. However, the increase of protein nitration (3-NT) was reversed by postconditioning in the NO-defficient animals. The protein expression of SOD was not modified by exercise. Nevertheless, the physical activity attenuated the reduction of SOD plasma activity. The gp91phox expression was decreased in NO-defficient rats, and restored by physical training. In conclusion, we conclude that physical training (pre or post-conditioning) is an efficient nos-pharmcological approach able to reduce the oxidative stress, increasing the NO bioavailability that results in an improvement of erectile dysfunction Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O BAY 60-2770 constitui-se um novo ativador da guanilil ciclase solúvel (GCs) independente de óxido nítrico (NO). Há relatos de que ativadores da GCs independente de NO podem reativar esta enzima, mesmo em seu estado heme-oxidada, condição encontrada em doenças vasculares. Neste trabalho, temos por hipótese que a oxidação do grupamento heme da GCs pelo ODQ leva à potencialização dos efeitos antiplaquetários in vitro do BAY 60-2770. Foram utilizadas plaquetas humanas purificadas de voluntários sadios. Realizamos ensaios de agregação e de adesão plaquetária, bem como análise da ativação da integrina plaquetária, ?IIb?3, por citometria de fluxo. Realizamos Também ensaios de Western blotting para a quantificação protéica das subunidades ?1 e ?1 da GCs. Os níveis intracelulares de Ca2+ foram quantificados por fluorimetria, utilizando-se o fluoróforo FluoFort. O BAY 60-2770 (0,001 - 10 ?M) produziu inibição significativa da agregação plaquetária induzida pelo colágeno (2 ?g/mL) ou trombina (0,1 U/mL), sendo este efeito marcantemente potencializado pelo inibidor da GCs, ODQ (10 ?M). Em placas recobertas pelo fibrinogênio, o BAY 60-2770 (0,1 - 10 ?M) inibiu significativamente a adesão plaquetária, sendo esta inibição também potencializada pelo ODQ (10 ?M). O BAY 60-2770 (0,01 - 10 ?M) aumentou os níveis de GMPc e reduziu a mobilização de Ca2+, e ambos os efeitos foram potencializados pelo ODQ. O análogo permeável do GMPc, 8-Bromo-GMPc (8-Br-GMPc; 100 ?M), inibiu a agregação plaquetária e os níveis de Ca2+ de maneira ODQ-resistente. Os níveis de AMPc não foram alterados pelo BAY 60-2770. O colágeno (2 ?g/mL) e trombina (0,1 U/mL) ativaram a integrina ?IIb?3. Este efeito foi inibido pelo BAY 60-2770 (0,01 - 10 ?M), e potencializado pelo ODQ. Os efeitos antiplaquetários do nitroprussiato de sódio (SNP) foram totalmente revertidos pelo ODQ. O tratamento com ODQ (10 ?M) reduziu significativamente os níveis protéicos das subunidades ?1 e ?1 da GCs, os quais foram prevenidos pelo tratamento com BAY 60-2770. Os efeitos inibitórios do BAY 60-2770 sobre a agregação e adesão plaquetária, mobilização intracelular de Ca2+ e ativação da integrina ?IIb?3 foram todos potencializados em condições de heme-oxidação. O BAY 60-2770 impediu a diminuição dos níveis protéicos da GCs produzida por ODQ. Assim, o BAY 60-2770 pode ser de grande interesse terapêutico em doenças cardiovasculares associadas às complicações tromboembólicas Abstract: Nitric oxide-independent soluble guanylyl cyclase (sGC) activators reactivate the haem-oxidized enzyme in vascular diseases. This study was undertaken to investigate the anti-platelet mechanisms of the haem-independent sGC activator BAY 60-2770 in human washed platelets. The hypothesis that sGC oxidation potentiates the anti-platelet activities of BAY 60-2770 has been tested. Human washed platelet aggregation and adhesion assays, as well as flow cytometry for ?IIb?3 integrin activation and Western blot for ?1 and ?1 sGC subunits were performed. Intracellular calcium levels were monitored in platelets loaded with a fluorogenic calcium-binding dye (FluoForte). BAY 60-2770 (0.001-10 ?M) produced significant inhibition of collagen (2 ?g/ml)- and thrombin (0.1 U/ml)-induced platelet aggregation that was markedly potentiated by the sGC inhibitor ODQ (10 ?M). In fibrinogen-coated plates, BAY 60-2770 (0.1 - 10 ?M) significantly inhibited platelet adhesion, an effect potentiated by ODQ. BAY 60-2770 (0.01 - 10 ?M) increased the cGMP levels and reduced the intracellular Ca2+ levels, both of which were potentiated by ODQ. The cell-permeable cGMP analogue 8-Br-cGMP (100 ?M) inhibited platelet aggregation and Ca2+ levels in an ODQ-insensitive manner. The cAMP levels remained unchanged by BAY 60-2770. Collagen- and thrombin-induced ?IIb?3 activation was markedly inhibited by BAY 60-2770 that was further inhibited by ODQ. The effects of sodium nitroprusside (3 ?M) were all prevented by ODQ. Incubation with ODQ (10 ?M) significantly reduced the protein levels of ?1 and ?1 sGC subunits, which were prevented by BAY 60-2770. The inhibitory effects of BAY 60-2770 on aggregation, adhesion, intracellular Ca2+ levels and ?IIb?3 activation are all potentiated in haem-oxidizing conditions. BAY 60-2770 prevents ODQ-induced decrease in sGC protein levels. BAY 60-2770 could be of therapeutic interest in cardiovascular diseases associated with thrombotic complications Mestrado Farmacologia Mestra em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A próstata é densamente inervada pelo sistema nervoso autônomo simpático, parassimpático e não-adrenérgico não-colinérgico (NANC) os quais atuam sinergicamente para o correto funcionamento deste órgão. O principal representante da inervação NANC é o óxido nítrico (NO), porém sua função na próstata ainda não está bem definida. Sendo assim, o presente trabalho utilizou o modelo de inibição crônica da NO sintase (NOS) com L-NAME para avaliar possíveis alterações funcionais, morfológicas e bioquímicas da musculatura lisa prostática (MLP) em ratos adultos Wistar (200-250 g). Os ratos foram tratados por 4 semanas com L-NAME na dose de 20 mg/kg/dia através de ingesta hídrica. Especificamente, realizamos os seguintes experimentos na próstata dos ratos controles e tratados com L-NAME: 1) curvas concentração-efeito in vitro à fenilefrina (agonista ?1-adrenérgico) e ao carbacol (agonista muscarínico não seletivo), na presença e ausência do inibidor seletivo da rho-quinase Y27632 (1 uM), e curvas concentração-efeito ao agonista purinérgico, ?,?-metileno ATP, e à estimulação elétrica (contração neurogênica); 2) curvas concentração-efeito a agentes relaxantes como nitroprussiato de sódio (doador de NO), Y27632 (inibidor da rho-quinase) e isoproterenol (agonista ?-adrenérgico); 3) determinação dos níveis de AMPc e GMPc; e 4) análise histomorfométrica. A próstata dos animais tratados cronicamente com L-NAME apresentou aumento em seu peso relativo, alterações histomorfométricas caracterizadas como aumento na área epitelial e na muscular lisa e diminuição no índice de contorno dos ácinos. A contração da MLP induzida pela fenilefrina, carbacol, ?,?-metileno ATP e estímulo elétrico foi maior nos animais tratados cronicamente com L-NAME em relação aos animais controle. A incubação in vitro com o inibidor da rho-quinase, Y27632, restaurou ao nível controle as contrações aumentadas induzidas pela fenilefrina e carbacol no grupo L-NAME. O relaxamento da MLP nos animais do grupo L-NAME produzido pelo isoproterenol foi significativamente menor comparado ao grupo controle. Não houve diferença para o relaxamento induzido pelo SNP e Y27632 entre os grupos. Os níveis de AMPc e GMPc na próstata dos animais tratados cronicamente com L-NAME foram significativamente menores em relação aos animais do grupo controle. O tratamento com L-NAME não alterou os níveis das espécies reativas de oxigênio. Em suma, nossos dados mostram que a inibição crônica de NO leva a alterações funcionais in vitro da MLP caracterizadas por aumento na resposta contrátil à fenilefrina, carbacol, ?,?-metileno ATP e ao estímulo elétrico, além de redução no relaxamento ?-adrenérgico. A inibição da via da rho-quinase in vitro restaurou os padrões contráteis para os agonistas adrenérgicos e colinérgicos. A deficiência crônica de NO gera alterações funcionais, bioquímicas e morfológicas em próstata de ratos com participação da via da rho-quinase nesse processo Abstract: The prostate is densely innervated by the sympathetic and parasympathetic as well as non-adrenergic non-cholinergic (NANC) autonomic innervation that act synergistically for its correct functioning. The main NANC mediator is nitric oxide (NO), but the role of this mediator in the regulation of prostate smooth muscle (PSM) is not well established. Thus, the present study used the model of chronic NOS inhibition with L-NAME to evaluate the functional, morphological and biochemical alterations in PSM of Wistar adult male rats (200-250 g). Rats were treated with L-NAME (20 mg/kg/day) for 4 weeks in the drinking water. Specifically, we performed the following experiments in prostates from control and L-NAME-treated rats: 1) in vitro concentration-response curves to phenylephrine (?1-adrenergic agonist) and carbachol (non-selective muscarinic agonist) in the presence and absence of the selective rho-kinase inhibitor Y27632 (1 ?M) and concentration-response curves to the purinergic agonist ?-?-methylene-ATP, as well as electrical stimulation (neurogenic contraction); 2) in vitro concentration-response curves to the relaxing agents sodium nitroprusside (NO donor), Y27632 (rho-kinase inhibitor) and isoproterenol (non-selective ?-adrenergic receptor agonist); 3) determination of cAMP and cGMP levels, and 4) histomorphometric analysis. The relative weight of the prostate from L-NAME-treated rats was greater than control animals. Histomorphometric changes characterized by an increase in epithelial acini and smooth muscle area, as well as by a decrease in luminal contour índex were found in L-NAME treated rats. The phenylephrine and carbachol-induced prostate contractions were higher in L-NAME compared with control group. Prior incubation of PSM with the rho-kinase inhibitor Y27632 (1 ?M) significantly inhibited the enhanced carbachol- and phenylephrine-induced PSM contractions in L-NAME group, restoring the Emax to control levels. The PSM contractions induced by ?,?-methylene ATP and electrical field stimulation were also greater in L-NAME compared with control group. The PSM-induced relaxations in response to SNP remained unaltered, whereas isoproterenol-induced relaxations were lower in L-NAME compared with control group. The cAMP and cGMP levels in prostate homogenate were lower in L-NAME compared with control group. No difference was found in reactive oxygen species levels. In summary, our data showed that chronic NO inhibition led to in vitro functional changes in PSM characterized by increased contractile response to phenylephrine, carbachol, ?-?-methylene-ATP and electrical-field stimulation, accompanied by reduction of ?-adrenergic-induced relaxation. The in vitro inhibition of rho-kinase pathway restored the contractile pathway for the adrenergic and cholinergic agonists. The chronic NO-deficiency generates functional, biochemical and morphological changes in rat prostate with involvement of the rho-kinase pathway in this process Mestrado Farmacologia Mestre em Farmacologia

Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: o Citomegalovirus Humano (HCMV) é um dos mais importantes patógenos que acometem pacientes submetidos a transplante hepático, estando associado à alta morbidade e mortalidade. Atualmente faz-se necessário o emprego de técnicas laboratoriais que sejam rápidas, sensíveis e específicas,no diagnóstico do HCMV, a fim de ser instituído um tratamento antiviral o mais precoce possível. Neste estudo, foram feitas comparações entre duas técnicas laboratoriais distintas: a "Nested-PCR" e a antigenemia, avaliando a eficácia das mesmas na monitorização de infecção ativa e doença por HCMV, neste grupo de pacientes. Dessa maneira, foram pesquisados pacientes submetidos a transplante hepático no Hospital de Clínicas da FCM/UNICAMP, desde antes do transplante até seis meses após o ato cirúrgico, tanto em ambiente hospitalar, quanto ambulatorial. Posteriormente, foi feita uma análise das duas metodologias diagnósticas utilizadas, comparando-as quanto à sua eficácia. Foram avaliados 27 pacientes, de setembro de 1998 a janeiro de 2.001, acompanhando o doador no pré-transplante, e o receptor até, no mínimo, 180 dias após a cirurgia. Realizaram-se 12 coletas de sangue de cada paciente receptor, sendo essas coletas: semanais durante o primeiro mês; quinzenais, nos segundo e terceiro mês, e mensais posteriores até o sexto mês. Conforme dados anteriores na literatura confirmados por este trabalho, a cirrose hepática provocada pelo vírus C foi o principal fator etiológico (55,55%) do transplante hepático, sendo que a cirrose alcoólica aparece como segundo maior (29,63%). Foi observado no pré transplante que, dos 27 pacientes, 92% dos transplantados já haviam tido contato anterior com o HCMV (Sorologia IgG positiva), 15% dos receptores apresentaram "Nested-PCR" positiva e 5% Antigenemia positiva. Segundo os critérios de infecção ativa, 25/27 (92%) dos pacientes apresentaram infecção ativa, sendo que em 12/27 (44%) destes, foram acompanhadas manifestações clínicas compatíveis com HCMV doença, sendo a febre (72%), e a mialgia (43%) as mais comuns, tendo também alterações das enzimas hepáticas (57%) e leucopenia (11%). o trabalho demonstra que a "Nested-PCR" se positiva, em média, com 47 dias pós-transplante, precedendo em 20 dias as manifestações clínicas, enquanto que a Antigenemia, se positiva, em média, após 85 dias do transplante. Dos pacientes estudados, cinco evoluiu a óbito, e destes, três com manifestações clínicas de doença pelo HCMV. Em conformidade com estudos anteriores, a doença pelo HCMV, nos pacientes transplantados hepáticos estudados ocorreu nos três primeiros meses pós-transplante. Deste modo, releva-se a importância clínica da detecção precoce do HCMV em pacientes transplantados hepáticos, e que as técnicas da "Nested-PCR" e da Antigenemia, empregadas neste trabalho, se mostraram adequadas para a monitorização destes pacientes em relação à infecção pelo HCMV Abstract: The human cytomegalovirus (HCMV) is one of the most important pathogens that undertakes hepatic transplantation patients, with a high mortality and morbidity, being its early diagnosis by means laboratorial tests such as PCR and Antigenemia, a primary issue. In our study we assisted 27 patients ftom September 1988 to January 2001, performing serological techniques (ELISA), PCR and Antigenemia in the pretransplantation patients and two Iast tests in the follow up at least, 150 days in the post-transplantation. It was observed that among the 27 patients, 92% had a already had a previous contact with HCMV (IgG positive in the pre-transplantation). Also 15% presented a positive PCR, and only 5% presented a positive Antigenemia before transplantation. According to previous data, and confirmed by this research, the hepatic cirroshis caused by the virus C was the main cause (59%) for hepatic transplantation, from which 40% appears as an isotaded form, including that the alcoholic cirrhosis appearing as the second highest incidence (33%), 14% as an isolated form. Our research shows that PCR test becomes positive it takes around 47 days after transplant, as the Antigenemiatest takes nearly 85 days. In accordance with active infection standards, 92% (25/27) of the patients presented an active infection course, by of which 44% (12/27) were followed by clinical manifestations consistent with the HCMV disease. The most common clinical symptoms were fever (72%) and myalgia (43%), followed by hepatic enzymes alterations (57%) and leukopenia (11%). Among the analysed patients, 05 decreased and wich, 03 of them (60%) had clinical manifestation of the HCMV disease. In conformity with previous data, the HCMV disease in hepatic transplantation patients occurred in the first 3 months after transplantation. Thus we have demonstrated the clinical importance of the early detection of HCMV in hepatic transplantation patients and that HCMV infection is a frequent problem in hepatic transplant patients in Brazil, with significant clinical complications Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: No presente trabalho, foram avaliados os efeitos farmacológicos do Aspirinato de atenolol (AA T) uma potencial pró-droga mútua resultado da combinação química entre ácido acetilsalicílico (AAS) e atenolo!. As propriedades do AA T como droga antitrombótica foram avaliadas na inibição da agregação plaquetária estimulada in vitro e na inibição da produção de tromboxano estimulada ex-vivo em sangue de animais tratados. Por outro lado, o AA T foi avaliado como droga anti-hipertensiva no modelo de hipertensão induzida pela inibição crônica da síntese de NO em ratos, e seus efeitos como antagonista dos adrenoceptores 13 foram avaliados na resposta cronotrópica ao isoproterenol em átrios isolados. Foi determinada a estabilidade metabólica em diferentes frações subcelulares hepáticas, plasma e soluções tampão de diferente pH, assim como seu perfil farmacocinético após administração endovenosa. Também foram avaliadas as propriedades ulcerogênicas gástricas e o potencial mutag'ênico através do Teste de Ames. Os resultados mostraram na avaliação do efeito antiplaquetário, que o AA T não inibiu a agregação plaquetária induzida pelo ácido araquidônico em nenhuma das concentrações testadas e apesar d~ ini~ir significativamente a produção de tromboxano estimulada ex-vivo em rat6s e na maior dose testada em camundongos, este efeito inibitório foi menor quando comparado com o AAS. O acoplamento com AAS, na molécula de AAT, suprimiu os efeitos do atenolol como antagonista dos adrenoceptores 13. Igualmente, o AA T não reduziu a freqüência cardíaca e pressão arterial após tratamento oral crônico de ratos hipertensos, estes resultados indicaram que não houve liberação de atenolol desde a molécula de AA T. Na avaliação da estabilidade metabólica e farmacocinética, observamos que o AA T seguiu uma rápida e completa hidrólise no grupo orto-acetila, gerando salicilato de atenolol (SA T), este produto foi formado quando o AA T foi submetido à hidrólise plasmática (T% 7,6 min) e aquosa (T% 56,5; 24,9 e 6,4 nos pH 2,5; 7,4 e 9.4 respectivamente) metabolização hepática e também após administração endovenosa em cães. o salicilato de atenolol formado a partir do AA T nas frações subcelulares hepáticas foi metabolizado apenas na fração microssomal gerando dois metabólitos hidroxilados em posições diferentes na molécula, a formação destes metabólitos foi dependente do tempo e paralela à cinética de desaparecimento do SAT. Após administração endovenosa, concentrações de AA T não foram detectadas em plasma. Atenolol e ácido salicílico (AS), foram liberados a partir da molécula de SAT (após clivagem da ligação éster benzoato) em concentrações significativamente menores às concentrações obtidas nos grupos tratados com AAS ou atenoloL A ASC0-24h calculada para o AS no grupo tratado com AA T correspondeu ao 0,71% da área calculada para o grupo que recebeu AAS. Similarmente, a ASC0-24h do atenolol no grupo tratado com AA T correspondeu a 1,44% da área calculada para ~ grupo tratado com atenolol. O AA T e seu principal metabólito SA T, não apresentaram propriedades mutagênicas, obtendo-se resultados negativos no Teste de Ames. O AA T produziu lesões na mucosa gástrica significativamente menores às observadas com o AAS após administração oral aguda e crônica durante 4 semanas. Devido às relevantes diferenças obtidas entre o AA T, AAS ou atenolol na caracterização farmacológica e farmacocinética, concluímos que o AA T não atua como pró-droga mútua de AAS e atenolol, e modificações futuras na molécula devem ser consideradas com a finalidade de desenvolver aspirinatos cardioativos com potencial efeito farmacológico : In this study, we evaluated the pharmacologica/ effects of Atenolol Aspirinate (A TA) a potential mutual prodrug that resulted of the chemical combination between Acetyl Salicylic Acid (ASA) and atenolo!. The properties of ATA as anthithrombotic drug were evaluated on the inhibition of in vitro stimulated platelet aggregation and on the inhibiton of ex-vivo stimulated thromboxane production in blood from treated animais. Additionally, A TA was evaluated as an antihypertensive drug on the hypertension induced by chronic inhibition of NO in rats, its effects as antagonist of f3 adrenoceptors were evaluated in the chronotropic response to isoproterenol in isolated atria. The metabolic stability was determined in different hepatic subcellular fractions, plasma and buffer solutions as well as its pharmacokinetic profile after intravenous administration. The gastric ulcerogenic properties and mutagenic potencial, using the Ames test, were toa evaluated. In the evaluation of the antiplatelet effect, our results showed that ATA had no effect on arachidonic acid induced platelet aggregation. Although it inhibited significantly the ex-vivo stimulated thromboxane production in rats and in the highest tested dose in mice, ATA showed lower inhibitory effect than ASA. The coupling with ASA, in the ATA mOlecule, abolished the atenolol effects as antagonist of f3 adrenoceptors. In the sa~e"way, ATA had no effect reducing the heart rate and blood pressure after chropic oral treatment of hypertensive rats, these results showed that atenolol was not liberated from ATA molecule. In the evaluation of the metabolic stability and pharmacokinetics, we observed that ATA followed a rapid and complete hydrolysis at the o-acetyl group, generating atenolol salicylate (A T8), this product was formed when ATA was submitted to plasma hydro/ysis (T% 7;6 min) and aqueous hydrolysis (T% 56,5; 24,9 and 6,4 at pH 2,5; 7,4 and 9.4 respectively), hepatic metabolization and after intravenous administration to dogs. ATA was biotransformed to A TS in ali hepatic subcellular fractions, then A TS was metabolized only in the microsomal fraction generating two hydroxylated metabolites, whose formation was time dependent and parallel to the kinetics of A TS consumption. After intravenous administration, concentrations of A TS instead ATA were found in plasma dog samples, SA and atenolol were originated from cleavage of A TS molecule at the benzoate ester linkage, generating concentration levels to a lesser extent than levels found after treatment with an equimolar dose of the drugs ',nóiviõua Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz Tese ( doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A Chlorella vulgaris (CV) é uma alga microscópica bastante rica em nutrientes. Além de alto valor nutritivo, a Chlorella tem demonstrado possuir importantes atividades terapêuticas. Vários trabalhos do nosso laboratório e outros demonstram os efeitos protetores desta alga contra infecções virais e bacterianas, tumores, entre outros. No presente trabalho avaliamos os efeitos do tratamento profilático/terapêutico com a dose de 50mg/Kg/dia de CV sobre a resposta imunohematopoética de animais normais e portadores de tumor ascítico de Ehrlich (TAE). O estudo dos mecanismos envolvidos na proteção produzida pela alga frente às alterações induzidas pelo TAE no sistema imuno-hematopoético, demonstrou aumentos significativos na atividade de células NK, na produção de citocinas com padrão Th1 (IL-2 e INF-g) e na liberação de TNF-a por células esplênicas, paralelamente a uma diminuição na produção de IL-10 (padrão Th2). Além disso, o tratamento com CV protegeu o hospedeiro da mielossupressão provocada pelo desenvolvimento tumoral, seja agindo diretamente na formação e manutenção do estroma medular, estimulando a atividade das células estromais, ou ainda estimulando a produção de citocinas reguladoras da hematopoese como a IL-6 e a IL-1a. Constatamos ainda que o tratamento com CV aumenta a atividade estimuladora de colônias (CSA) no soro de animais portadores de tumor e a capacidade proliferativa de células esplênicas. Outros resultados que merecem destaque são aqueles relacionados à ativação macrofágica. Nossos resultados demonstram que, em animais normais, o tratamento com CV promove aumento significativo nos níveis de TNF-a nos sobrenadantes das culturas de macrófagos peritoneais e esplênicos sem alterar a produção de IFN-g e IL-10. Além disso, o restabelecimento da produção normal de TNF-a, IFN-g e IL-10 por macrófagos peritoneais de animais portadores de TAE e reversão parcial dos efeitos produzidos pela presença do tumor na atividade dos macrófagos esplênicos, também foram observados. Outro efeito do CV sobre macrófagos peritoneais de animais portadores de TAE foi o estímulo da produção de H2O2 e NO2 -. Analisando nossos resultados podemos dizer que a CV além de possuir alto valor nutritivo, capacidade antioxidante e atividade anti-viral e antibacteriana, apresenta importante atividade imunomoduladora frente ao desenvolvimento tumoral, já que na presença do tumor o hospedeiro que vem recebendo Chlorella é capaz de reagir mais prontamente e com maior vigor na indução de mecanismos essenciais de defesa imunológica. Neste sentido, sugerimos que a alga Chlorella vulgaris pode ser um candidato a agente preventivo e complementar no tratamento do câncer. Abstract: Chlorella vulgaris (CV) is a microscopic alga rich in nutrients. Besides the high nutritive value, this alga has shown important therapeutic properties. Many studies from our laboratory and others have shown the protective effects of CV against viral and bacterial infections, tumors, among others. In this work we evaluated the effects of the prophylactic/therapeutic treatment with a dose of 50 mg/Kg/day in normal and Ehrlich ascites tumor (EAT)-bearing mice. The study of the mechanisms involved in the protection produced by the CV against the EAT, induced alterations in the immune-hematopoietic system; demonstrating significant improvements in the NK cells activity, Th1 (IL-2 and INF-g) and TNF-a cytokines production by mononuclear spleen cells, concomitantly with the decrease of IL-10 (Th2) production. Moreover, treatment with CV protected the host of myelosuppression caused by tumor development, it is acting directly in the formation and maintenance of bone marrow stroma, by stimulating the activity of stromal cells, or stimulating the production of important hematopoiese regulatory cytokines like IL-6 and IL-1a. We are also certain that the treatment with CV increases the colony-stimulating activity (CSA) in the serum of tumor bearing mice and the proliferative capacity of spleen cells. Other results that deserve attention are those related to macrophage activation. Our results show that in normal mice, treatment with CV, promotes significant increase in the TNF-a levels in upernatants of the cultures of peritoneal and spleen macrophages without altering the production of IFN-g and IL-10. Moreover, restoration of the normal production of TNF-a, IFN-g and IL-10 by peritoneal macrophages from animal carriers of EAT and partial reversal of the effects produced by the presence of tumor in the splenic macrophages activity were also observed. Another effect of CV on peritoneal macrophages of tumor bearing mice was the stimulation in the production of NO2 - and H2O2. Looking at our results we can say that the alga Chorella vulgaris in addition to its high nutritional value, antioxidant capacity and antiviral and antibacterial activities, it also presents important immunomodulatory activity against tumor development, since that in the presence of the tumor, the host that has received Chlorella is able to react more promptly and with greater force in the induction of essential mechanisms of immune defense. Accordingly, we suggest that the alga Chlorella vulgaris can be a candidate for the preventive and complementary treatment of cancer by strengthening the immune system. Doutorado Doutora em Farmacologia

Orientador: Gun Birgitta Bergsten Mendes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A atuação do farmacêutico nas comissões de controle de infecção hospitalar (CCIH), tem sido de grande importância na tentativa de conseguir um uso racional de antimicrobiano em hospitais. Apesar dos princípios básicos da antibiótico- profilaxia estarem bem estabelecidos, este constitui ainda uma parcela alta de uso inadequado quanto a sua indicação e principalmente duração, geralmente superior à determinada. O uso adequado destes fármacos contribui para diminuir o tempo de internação do paciente, prevenir infecção do sítio cirúrgico (ISC), diminuir a seleção de microrganismos resistentes e os custos para a farmácia. Neste estudo foi realizado a implantação de um protocolo para o uso de antibiótico- profilaxia no Serviço de Ortopedia e Traumatologia do Hospital do Servidor Público Estadual de São Paulo. Os objetivos do estudo foram: promover uma antibiótico- profilaxia cirúrgica racional, através da implantação de um protocolo para o uso destes fármacos em uma unidade cirúrgica, com a colaboração direta de um farmacêutico em conjunto com a CCIH, avaliar a adesão da equipe de saúde ao protocolo em três períodos distintos ( pré- protocolo, pós- protocolo e um ano após) e definir o consumo e custos dos antimicrobianos utilizados em dose diária definida para os três períodos. Consideramos "erro" qualquer item discordante do protocolo. Analisamos um total de 290 cirurgias para os três períodos. Os itens avaliados foram: indicação da profilaxia, escolha do antibiótico utilizado, dose, início da primeira dose, repetição no intra- operatório, duração da profilaxia e infecção do sítio cirúrgico. O número de itens em não conformidade ("erros") passou de 93.4% para 42.4% após a padronização. A freqüência de zero "erros" para os itens analisados passou de 3.3% para 50% após implantação do protocolo. Houve também uma diminuição no consumo e custos demonstrados através da dose diária definida (DDD) e média de custo por procedimento profilático. . A padronização implantada promoveu a adequação da antibiótico- profilaxia neste serviço de ortopedia, tendo ficado clara a importância de se manter a participação de membro da ccm e do. farmacêutico nas visitas à enfermaria junto com a equipe médica a fim de estimular a utilização correta de antibióticos como profilaxia em cirurgias Abstract: The inappropriateness of surgical antibiotic prophylaxis has been extensively reported, documenting wrong dosing, for toa long, and with toa broad a spectmm of antimicrobial activity. To describe a multidisciplinary experience in implanting a protocol for prophylactic antibiotic prescription in the orthopedic department of a general hospital. A consensus protocol was developed. Prophylactic antibiotics were dispensed only with a proper fonn, and the phannacist provided for each surgery the antibiotic kit assuring that the patient received the correct intra - and postoperative doses of the indicated antibiotic. AlI surgeries in three study periods were evaluated (pre protocol, early post-protocol, and a late post-protocol) and compared. Cost of the prophylactic antibiotics was determined before and after the implemented protocol. Two hundred and ninety nine surgeries were evaluated. Forty percent of the patients were male, and the mean age of all the patients was 52.5 :t 25.7 years. More than 95% of the surgeries were elective and clean. The frequency of the appropriateness of the antibiotic prophylaxis according to the agreed protocol for the three study was evaluated. The number of times there were items in each patient's prescription which disagreed with the established protocol ("error") showed a significant shift. In the pre-protocol period, only 3.3% of the surgeries with antibiotic prophylaxis had no "errors", but this value reached 50.0% in the late post-protocol period (p < .0001). Combining educational and restrictive interventions can markedly improve the surgical antibiotic prophylaxis Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Gun Birgitta Bergsten Mendes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Os antagonistas de receptores H2 da histarnina (AH2) e os inibidores da bomba de prótons (IBP) são efetivos no tratamento de condições clinicas que se acompanham de hipersecreção ácida gástrica, sendo amplamente utilizados na prevenção de dano gastroduodenal por fármacos antiinflamatórios e de úlcera de estresse. É muito freqüente o uso destes fármacos em contexto hospitalar. Um estudo transversal determinou a prevalência de prescrição de AH2 e de IBP em três hospitais de atenção terciária, gerais: um universitário e dois filantrópicos. Foram incluídos todos os pacientes internados e com prescrição destes dia do estudo. Foram excluídos do estudo os pacientes da pediatria e da tocoginecologia. Ao prescrito r foi dirigida uma pergunta aberta sobre o motivo da prescrição. No dia do estudo 229 pacientes estavam recebendo AH2 ou IBP, o que representa 54,8% do total de pacientes internados. Dentre os pacientes do estudo 55,5% eram do sexo masculino, 28,8% tinham idade :2: 65 anos. Os principais diagnósticos dos pacientes do estudo foram: neoplasias (22,5%), doenças cardiovasculares (13,9%), envenenamentos e outras causas externas (9,7%), doenças gastrintestinais (10,6%). A ranitidina foi o fármaco antissecretor mais prescrito (200 pacientes, 87,3%). Pacientes com idade :2: 65 anos receberam significativamente mais prescrições de fármacos antissecretores, e não se observou ajuste da dose destes fármacos para pacientes deste estrato etário. Os prescritores de 121 pacientes (52,9%) deram as seguintes justificativas para as prescrições de AH2 ou IBP: profilaxia de úlcera de estresse (28,0%), uso concomitante de antiinflamatórios esteróídes (24,8%), uso concomitante de antiinflamatórios não esteroidais (15,7%), tratamento de doenças gastrintestinais (14,0%). Algumas indicações profiláticas encontradas não correspondem às recomendadas na literatura. Intervenções educativas parecem necessárias para promover o uso racional destes medicamentos Abstract: A cross sectional study was conducted in three general hospitaIs in state of São Paulo, Brazil: one teaching hospital and two private non profit hospitaIs. In 1999, age, gender, the diagnosis, concomitant use of NSAIDs or corticosteroids and the prescription of all patients on histamine 2 receptor antagonists and proton pump inhibitors on the study day were recorded. The indications, as well as the type, dose of these drugs were investigated. The prescribers were asked about the reasons for prescribing these medications. The aim of this study was to evaluate the prescription patterns and evaluates the appropriateness of H2 blockers and proton pump inhibitors. Among the 418 patients evaluated 229 ( 54.8%) received H2 blockers and proton pump inhibitors prescriptions. Among these 229 patients, 55.5% were male and 28.8% were 2: 65 years old. The most common diagnoses were: neoplasms (22.5%); diseases of the circulatory system (13.6%); injury, poisoning and certain other consequences of external causes (9.7%); diseases of the digestive system (10.6%). Ranitidine was the most prescribed drug (83.7%). None of the prescribers refused to give the reason for the prescription, put only in 52.9% of the patients the prescribers were found for interview. The most common justifications were stress ulcer prophylaxis (28.1%); concomitant use ofcorticosteroids (24.8%); concomitant use ofNSAIDs (15.7%); treatment of gastrointestinal diseases (14.0%). Some ofthe prophylactic indications did not agree with current guidelines. Educative interventions seem to be necessary to promote rational use of these drugs Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Jose Luiz Donato Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Foi desenvolvido um métdo rápido, sensível e específico para determinação de metotrexato em plasma sanguíneo humano por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas em série usando folinato de cálcio como padrão interno. O metotrexato foi extraído do plasma humano, utilizando-se precipitação de proteínas plasmáticas com acetonitrila como eluente.O método tem uma corrida cromatográfica de 3,5 minutos usando uma coluna analítica C18 (4,6 mm x 75 mm d.i, 3.5 µm tamanho das partículas) e a curva de calibração foi linear de 10 a 300 ng.mL-1.A recuperação do método de extração foi, em média, de 76,5% e o limite de quantificação para o metotrexato foi de 10 ng.mL-1 Abstract: A rapid, sensitive and specific method was developed for the determination and quantitation of methotrexate, in human blood plasma by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry using calcium folinate as internal standard. Methotrexate was extracted from 0,2 mL human plasma by protein precipitation procedure using acetonitrile as eluent. The method included a chromatographic run of 3,5 minutes using a C18 analytical column (4,6 mm x 75 mm i.d., 3.5 µm particle size) and the linear calibration curve over the range from 10 to 300 ng mL-1. Recoveries were greater than 76.5% and the limit of uantitation of methotrexate was 10 ng mL-1 Doutorado Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O sildenafil, inibidor específico de PDE5, é utilizado no tratamento da disfunção erétil. Na procura de um inibidor mais potente e seletivo de PDE5, testamos vinte novos análogos do sildenafil (6a-v), caracterizados pela presença de um grupo sulfonil ou de um substituinte n'n'etilendiamina na posição do grupo metil da piperazina. Os objetivos deste trabalho foram: 1) Avaliar a atividade inibitória da PDE5 de plaquetas humanas; 2) Avaliar o efeito relaxante dos análogos do sildenafil em corpo cavernoso de coelho; 3) Avaliar o efeito relaxante dos análogos do sildenafil em anéis de aorta de coelho. Foi utilizado sangue de voluntários sadios para a atividade inibitória da PDE5 e coelhos New Zealand machos (2-3 kg) procedentes do CEMIB-UNICAMP para os estudos funcionais. Os animais foram anestesiados com uretana, o corpo cavernoso e a artéria aorta foram rapidamente removidos. O tecido cavernoso e anéis de aorta foram montados em banho para órgão isolado contendo solução de Krebs (37oC, 95% O2 / 5% CO2). Os tecidos foram ligados a transdutores isométricos conectados a um sistema PowerLab® de aquisição de dados. Nossos resultados mostraram que a atividade inibitória da PDE5 induzida pelos análogos do sildenafil em plaquetas humanas foi de maneira dependente da concentração. Os compostos 6m, 6n e 6q mostraram valores elevados de IC50 para inibir a PDE5 plaquetária, enquanto que os compostos 6a, 6b, 6d, 6g e 6p produziram inibição inferior a 50%. A potência inibitória (IC50) dos compostos 6c, 6e, 6f, 6h, 6i, 6l e 6o foi similar ao sildenafil (IC50: 0,05 µM) com valores variando entre 0,05 e 0,15 µM. Os análogos que derivaram da molécula n'n'etilendiamina (6r, 6s, 6t e 6v) mostraram uma boa atividade inibitória com valores entre 0,20-0,51 µM. Interessantemente, o composto 6u mostrou uma potência de 0,04 µM, o qual representou o menor valor obtido dos análogos do sildenafil. Nos estudos funcionais, todos os análogos do sildenafil, à exceção do análogo 6m, relaxaram preparações de corpo cavernoso de coelho de maneira dependente da concentração. Particularmente, o análogo 6f mostrou o melhor perfil farmacológico no relaxamento, com potência similar ao sildenafil, e pode servir de base para o desenvolvimento de novos inibidores de PDE5 para o tratamento da disfunção erétil. Além disso, nossos resultados mostraram que os análogos do sildenafil produzem relaxamento dependente da concentração em anéis de aorta de coelho com endotélio íntegro ou removido. Somente o análogo 6b e 6m apresentaram valores de potência inferiores quando comparados ao sildenafil em tecidos com endotélio íntegro. A remoção do endotélio ou a adição do LNAME ou do ODQ (inibidor da NO sintase e da guanilil ciclase solúvel, respectivamente) em tecidos com endotélio íntegro, provocou deslocamento à direita para o sildenafil e seus análogos, à exceção do 6r e 6u que não apresentaram diminuição da potência decorrente da inibição do NO, seja pela remoção do endotélio, pela inibição da NO sintase ou pela inibição da guanilil ciclase solúvel. Nossos dados também mostram que o 6r e 6u, em combinação com o BAY 41-2272, aumentam a potência evocada por estes análogos tanto em anéis de aorta com endotélio íntegro ou removido. O relaxamento evocado pelo sildenafil, 6r e 6u não envolve a participação de canais de potássio e de cálcio, nem envolve a formação de prostanóides. As respostas relaxantes destes dois análogos não foram alteradas em tecidos desprovidos de endotélio, mostrando-se independentes da via NO/GMPc. Isto sugere que estes dois análogos podem ser de particular interesse em patologias decorrentes de disfunção endotelial. Abstract: Sildenafil, a cGMP-specific phosphodiesterase-5 (PDE5) inhibitor, is used for the treatment of erectile dysfunction. In the search for a potent and selective PDE5 inhibitor, new sildenafil analogues (6a-v), characterized by the presence on the sulphonyl group in the 5' position of novel N-4-substituted piperazines or ethylenediamine moiety, were synthesized. The aim of this work was 1) To evaluate the PDE5 inhibitory activity in human platelets; 2) To evaluate the relaxing effect of sildenafil analogues in rabbit corpus cavernosum; 3) To evaluate the relaxing effect of sildenafil analogues in rabbit isolated aorta. Blood from human volunteers were collected and used for PDE5 inhibitory activity and Male New Zealand rabbit (2-3 kg) for functional studies. The rabbits were anaesthetized with urethane and sacrificed. The cavernosal tissue and aortic rings were mounted in organ bath containing Krebs solution (37oC, 95% O2 / 5% CO2). Each tissue was connected to an isometric transducer which was connected to a data acquisition system Powerlab®. Our results showed that sildenafil and its analogues concentration-dependently inhibited PDE5 activity in human platelets. Compounds 6m, 6n and 6q showed higher values of IC50 to inhibit PDE5 of platelets, whereas compounds 6a, 6b, 6d, 6g and 6p did not reach 50% of inhibition. The inhibitory potency of PDE5 for 6c, 6e, 6f, 6h, 6i, 6l and 6o were similar with sildenafil (IC50: 0,05 µM) with values between 0,05-0,15 µM. Derived analogues from n'n' substitution showed great PDE5 inhibitory activity. Interesting, compound 6u exhibited greater IC50 value (0,04 µM). In functional studies, all sildenafil analogues with exception of 6m, relaxed concentration-dependently rabbit corpus cavernosum. Compound 6f exhibited great pEC50 value in corpus cavernosum and could be used as base for developing new PDE5 inhibitors. Moreover, our results showed that sildenafil analogues concentration-dependently relaxed both endothelium-intact and - denuded aortic rings with similar potency values of sildenafil. Compounds 6b and 6m showed lower values of potency when compared to sildenafil in endothelium intact. Endothelium denudation or addition of L-NAME or ODQ (NOS and sGC inhibitors, respectively) caused marked rightward shifts in the curve to sildenafil and its analogues, whereas the relaxation curves for 6r and 6u were not altered after endothelium removal or either by the NO synthase or sGC inhibition. Moreover, our data also suggest that compound 6r and 6u increased the potency values in combination with BAY 41-2272 in both intact and denuded endothelium. The relaxation evoked by sildenafil, 6r and 6u does not involve either calcium or potassium channels or prostanoids formation. The relaxing responses by these compounds were independent of NO/cGMP pathway, suggesting that these compounds may be used in several diseases involving endothelium dysfunction. Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Jose Antonio Rocha Gontijo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A angiotensina II pode contribuir com o distúrbio do metabolismo renal de sódio presente em ratos espontaneamente hipertensos. Inicialmente, o estudo atentou à possibilidade de envolvimento da expressão do supressor de sinalização de citocinas (SOCS-3) (técnica de Western blotting) em hipotálamo de SHR durante o desenvolvimento hipertensivo (método indireto para medida de pressão arterial). Segundo, pós-estimulação aguda i.c.v com angiotensina II, avaliou a dipsogênese, o ritmo de filtração glomerular (técnica de clearance de creatinina), o manuseio tubular renal de sódio (técnica de clearance de lítio) e potássio em SHR e WKy. Os resultados obtidos confirmaram a estimulação central do receptor de angiotensina II e os seus efeitos dipsogênico e natriurético. A administração i.c.v de angiotensina II diminuiu o clearance de creatinina e, reciprocamente, aumentou a excreção tubular renal de sódio e de potássio nas duas linhagens, porém acentuadamente em WKy. Por outro lado, se comparada à diferença da expressão de JACK-2/SOCS-3 idade-dependente, a alteração da resposta funcional renal pós-estímulo intracerebroventricular com angiotensina II sugere uma disfunção das vias neurais existentes em animais SHR. As evidências supracitadas acrescentam à idéia existente na literatura que, a angiotensina II atuando no sistema nervoso central é um instrumento para regulação da homeostase do fluido corporal. Possivelmente, a resposta neural inapropriada resulte na inabilidade do manuseio hidrossalino e, conseqüentemente, colabore com o desenvolvimento da hipertensão arterial em SHR. Palavras-chave: Hipertensão arterial, SNC, angiotensina II; SOCS-3; SHR; função renal; natriurese; clearance de lítio Abstract: There is a surprising lack of experimental data on the renal sodium handle mechanisms induced by i.c.v injection of AngII in hypertensive animals. Thus, we hypothesized that a presumable blunted response to centrally injected AngII may contribute to sodium metabolism disturbances observed in SHR. The study was performed after acute i.c.v AngII administration on tubular sodium handling, evaluated by lithium clearance, in conscious, unrestrained rats and their sham-operated appropriate WKy controls. The present series of experiments were also designed to investigate the possible involvement of SOCS-3 expression in AngII-induced control of water ingestion in SHR hypothalamus. Our results confirm earlier reports on the potent natriuretic effects of central AngII receptor stimulation. The i.c.v application of AngII significantly decreased CCr and reciprocally promotes increased absolute and fractional excretion rates of sodium and potassium in both WKy and SHR animals. The magnitude of the renal response to AngII was significantly greater in WKy rats than in SHR. The enhancement of renal function following the centrally applied AngII in WKy rats as compared with SHR associated with age-related difference in JACK-2/SOCS-3 expression suggest that a dysfunction in the angiotensin neural pathways exists in SHR. Our findings lend further support to the idea that AngII in CNS is an instrumental in the regulation of body fluid homeostasis. Speculatively, it seems interesting to suggest that perhaps one of the CNS inappropriate AngII pathway response defects may result in inability of renal tubules to handle the hydrosaline balance, consequently may contributing with development of arterial hypertension in genetically hypertensive rats from Kyoto. Keywords: Arterial hypertension; central nervous system; angiotensin II; SOCS-3, SHR, kidney function; natriuresis; lithium clearance Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador : Sandra Cecilia Botelho Costa Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O Helicobacter pylori (H. pylori) causa infecção muito comum no mundo inteiro e atualmente é considerada a segunda infecção de maior prevalência no homem acometendo pessoas de todas as idades. Estudos epidemiológicos indicam que o H. pylori está relacionado com o nível sócio-econômico e com os hábitos alimentares e constitui um fator ambiental adquirido, importante na patogenia de várias afecções do aparelho digestivo. Em algumas destas patologias, a relação etiológica foi suficientemente comprovada, em outras, é duvidosa ou se baseia em estudos preliminares. Os fatores de patogenicidade do H. pylori estão relacionados: com suas características, e com o meio em que ele se encontra. A capacidade do H. pylori de "não se deixar envolver" com a resposta imunológica do hospedeiro, de resistir à fagocitose, de produzir enzimas (urease, catalase, superóxido dismutase entre outras), favorece a cronicidade da infecção (no estômago) durante longos períodos, eventualmente durante toda a vida. O diagnóstico da infecção pelo Helicobacter pylori pode ser estabelecido utilizando-se vários testes, que diferem entre si em relação à sua especificidade, sensibilidade,caráter invasivo e custo. A detecção do DNA do H. pylori pela PCR (Reação em Cadeia da polimerase) é específica e sensível e pode servir como uma poderosa ferramenta para o diagnóstico da infecção causada por essa bactéria. O diagnóstico de variações em regiões funcionalmente relevantes no genoma do H. pylori tem sido usado como marcador genético em numerosos estudos clínicos para diferenciar as linhagens e associá-Ias à patogênese bacteriana. O presente trabalho teve como objetivo a padronização da técnica "PCR", com a utilização de "primers" que flanqueiam a região conservada do Helicobacter pylori (ureaseC), para a detecção do H.pylori a partir de biópsias endoscópicas, e aplicação do método em 141 pacientes, em seguimento no Gastrocentro-FCM-Unicamp, com suspeita da infecção. Também padronizamos a genotipagem do H. pylori com o auxilio de duas enzimas de restrição aplicadas ao produto da "PCR" em 60 pacientes que apresentaram PCR + para o H. pylori. Os resultados obtidos pela "PCR" foram comparados com os resultados obtidos pela Histologia nas biópsias fixadas e pelo teste rápido da uréase, nas biópsias a fresco. Para a genotipagem 60 pacientes foram avaliados. Entre os 141 pacientes estudados, obtivemos os seguintes resultados: das 59 amostras de biópsias endoscópicas gástricas fixadas em parafina, 12 amplificaram pela PCR (20,3%). Das 82 amostras de biópsias gástricas a fresco todas amplificaram, sendo que 64 amostras foram positivas e 18 amostras foram negativas. Em relação a genotipagem, os padrões encontrados foram comparados com a utilização do programa computacional BioCap 1 D: foram encontrados 11 padrões com a enzima HhaI e 12 padrões com a enzima MboI. Pelo número pequeno de amostras estudadas, não foi possível uma correlação estatisticamente significante entre genótipos específicos e padrões de patologias digestivas Abstract: The Helicobacter pylori (H. pylori) causes a very common infection all over the world and is currently considered the second infection of larger prevalence in man, attacking people of alI ages. Epidemic studies indicate that the fi. py/ori is related with the socioeconomic leveI and dietary habits, constituting an nnportant acquired environmental factor in the pathogenesis of several diseases of the digestive system. In some of these patients the etiologic relationship was sufficiently proven; in others, it is doubtful or based on prelllninarystudies. The pathogenicity factors of the H. pylori are related to its characteristics and to the environment where it is found. The capacity of the fi. py/ori of not becoming involved with the immunologic answer of the host, of resisting phagocytosis and of producing enzymes (urease, catalase and superoxide dismutase, among others) favors chronic infections (in the stomach) during long periods, eventually during a lifetnne. The diagnosis of infection by the Helicobacter pylori can be established by means of several tests that differ from each other in relation to specificity, sensitivity, invasive character and cost. Detection of the H. pylori DNA by PCR (Polymerase Chain Reaction) is specific and sensitive and can be a powerful tool for diagnosis of the infection caused by this bacterium. The diagnosis of variations in functionalIy important areas of the H. pylori genome has been used as a genetic marker in numerous clinical studies to differentiate lineages and to associate them to bacterial pathogenesis. The present work had as objective the standardization of the PCR technique, with primers flanking the conserved area of the Helicobacter pylori (urease C) for detection of H. pylori, beginning with endoscopic biopsies and application of the method to 141 patients who were being followed at Gastrocentro-FCM-Unicamp as potential infection hosts. We also standardized H. pylori genotyping, aided by two restriction enzymes applied to the product of PCR in 60 patients that presented PCR + for H. pylori. The results obtained by PCR were compared with the results obtained by histology from the fastened biopsies and for the fast urease test, in fresh biopsies. Sixty patients were appraised for genotyping purposes. Among the 141 studied patients we obtained the following results: of the 59 samples of gastric endoscopic biopsies fastened in paraffin, 12 were amplified by PCR (20.3%). Of the 82 samples of fresh gastric biopsies all were positive for PCR (100%). In relation to genotyping, patterns were compared by means of BioCap lD computer program: 11 patterns with the enzyme HhaI and 12 patterns with the enzyme MboI were found. On account of the small number of studied samples, it was not possible to find a significant statistic correlation among specific and standard genotypes of digestive pathologies Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A infecção ativa por citomegalovírus humano (HCMV) aumenta a morbidade e mortalidade de pacientes imunocomprometidos. Em transplantados renais, sabe-se que 70% a 90% dos receptores apresentam infecção ativa por HCMV, em períodos que variam de 1 a 4 meses pós-transplante e isso tem uma influência negativa na sobrevida do enxerto. A natureza variável da doença por HCMV, neste grupo de pacientes, faz com que seja essencial o diagnóstico precoce desta infecção, para não confundir suas manifestações com outros eventos do período pós-transplante. Em particular, os quadros de disfunção renal devido à infecção ativa por HCMV, que se confundem com rejeição, podem ser erroneamente tratados, resultando em imunossupressão adicional, colocando em risco a vida do paciente. O objetivo principal do presente trabalho foi estudar, prospectivamente, um grupo de transplantados renais em relação à infecção ativa pelo HCMV, comparando as técnicas "Nested"-PCR e Antigenemia para monitorização da infecção ativa e verificar a soroprevalência da infecção por HCMV no grupo análisado. Foram monitorados, prospectivamente, 48 transplantados renais em seguimento no Hospital de Clínicas da Universidade Estadual de Campinas, (UNICAMP), no período de junho de 1999 a novembro de 2000. O material para análise foi obtido no pré-transplante e por um período de quatro meses, após o transplante. Na população estudada, observou-se uma soroprevalência de 89% o que confirma a alta prevalência da infecção por HCMV em nosso meio. Como resultados globais observou-se que a infecção ativa (replicação viral) por HCMV ocorreu em 34 (71%) dos pacientes estudados. Em 18 transplantados, só a "Nested"-PCR foi capaz de identificar infecção ativa. Quatorze pacientes que não apresentaram evidências de infecção ativa por nenhum dos testes, não tiveram problemas clínicos. Durante a monitorização 15 pacientes (31%) apresentaram manifestações clínicas sugestivas de serem secundárias à replicação viral (provável doença por HCMV). Entre os pacientes sintomáticos, somente 4 apresentaram infecção primária. A técnica da "Nested"-PCR foi positiva em 100% dos casos sintomáticos e a da Antigenemia foi positiva em 87% desses. Entre os pacientes com episódios de rejeição aguda 85% apresentaram infecção ativa e em 54% ocorreram manifestações clínicas. Concluímos que as técnicas da "Nested"-PCR e da Antigenemia são sensíveis, rápidas e precoces no diagnóstico da infecção ativa por HCMV e portanto adequadas para a monitorização da infecção e provável doença por HCMV em pacientes transplantados renais Abstract: Human Cytomegalovirus (HCMV) active infection remains a significant cause of morbidity and mortality of immunocompromised patients. In the case of renal transplant recipients, it is known that 70% to 90% of them have HCMV active infection, which has a negative influence on graft survival, and that the highest risk period is between one to four months posttransplant. Early diagnosis of HCMV infection/disease and a correct differentiation from other opportunistic infections that occur during the posttransplant period are essential, considering that confusion between renal dysfunction caused by HCMV active infection and allograft rejection may lead to additional immunosuppressive therapy and life-threatening consequences to the patient. The present study was designed to follow prospectively 48 renal transplant recipients managed at the University Hospital of Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) and evaluate the usefulness of the HCMV "Nested" -PCR technique and pp65 Antigenemia assays in monitoring HCMV active infection. A further aim of the study was to establish the seroprevalence of HCMV infection in 28 donors and in the 48 recipients and verify the clinic impact caused by HCMV active infection and disease. Among 76 evaluated people, 68 (89,5%) had anti-CMV IgG, indicating that they were infected with CMV before transplantation. Considering the incidence of active HCMV infection, of 48 patients enrolled in the study, 34 (70,8%) experienced active HCMV infection and 18 of these 34 patients were only HCMV-PCR-positive. During the follow-up period, a total of 15 (31,3%) patients developed clinical disease with evocative symptoms. Thirteen (81,3%) of 16 HCMV-antigenemia-positive patients had HCMV disease, and 15 (44,1%) of 34 HCMV-PCR-positive patients developed HCMV disease. Our results indicated that PCR is more sensitive than Antigenemia; however, both are rapid and early assays for detection of cytomegalovirus infection Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A inibição crônica da síntese de óxido nítrico, através do tratamento com L-NAME, promove aumento da resistência vascular e hipertensão. O exercício físico regular tem sido empregado como tratamento não farmacológico na hipertensão. No entanto, diferentes resultados têm sido encontrados. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi analisar a influência do exercício físico por natação realizado previamente e/ou simultaneamente ao tratamento com L-NAME na pressão arterial sistólica, no tamanho dos cardiomiócitos ventriculares, no percentual de tecido conjuntivo cardíaco e nas respostas cronotrópicas de átrios direitos isolados de ratos. Nossos resultados mostram que a atividade física realizada previamente ao tratamento com L-NAME atenua o aumento da pressão arterial nesses animais. Entretanto, quando o treinamento físico foi simultâneo ao tratamento com L-NAME, ele não modificou o aumento da pressão arterial promovida pela inibição da síntese de óxido nítrico. O treinamento físico por natação prévio ou simultâneo ao tratamento com L-NAME não modificou a potência ao isoproterenol, enquanto que a potência ao carbacol foi diminuída nos animais treinados. A porcentagem de tecido conjuntivo nos átrios direitos dos animais treinados ou treinados e tratados com L-NAME foi aumentada e esse aumento foi independente da associação com a administração de L-NAME. O tamanho dos cardiomiócitos não foi alterado nos animais treinados. Concluindo, o exercício físico prévio ao desenvolvimento da hipertensão induzida pela inibição da síntese de óxido nítrico atenua a elevação dos valores de pressão arterial. No entanto, quando a hipertensão está em desenvolvimento ou já estabelecida, a atividade física não melhora o quadro hipertensivo Abstract: Chronic nitric oxide inhibition by L-NAME treatment leads to hypertension. Regular exercise has been used as a nonpharmacological approach to prevent or to treat hypertension. The aim of this study was to investigate the effect of physical preconditioning and or physical activity simultaneously to LNAME treatment by swim training on the blood pressure, cardiomyocyte size, amount of connective tissue in the heart and chronotropic responses from right atria in L-NAME-treated rats. Our study shows that physical preconditioning by swim training attenuates the increase in blood pressure in L-NAME treated rats. However, physical activity simultaneously to L-NAME treatment does not attenuate the rise of blood pressure induced by long-term treatment with L-NAME The potency of isoproterenol was not altered in alI studied groups while the potency of carbachol was significantly lower in trained groups. Swim training by itself increased the amount of connective tissues in right atria and ventric1es and it was not modified by L-NAME treatment. No changes were observed in cardiomyocytes size in trained groups. It is concluded that preconditioning physical can prevent or attenuate the hypertension induced by L-NAME treatment, but it can not improve the blood pressure values when hypertension is establishing or is already established Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Antonio Carlos Neder Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: Pesquisou-se o efeito do hipno-analgésico pentazocina sobre as pressões intra-ocular, venosa e arterial, além de sua influência sobre os teores de pH, pCO2, pO2, HCO-3, Na+, K+, Cl- e osmolaridade do sangue, do plasma sanguíneo e do humor aquoso de cães, num total de 34 animais, de ambos os sexos, previamente anestesiados com pentobarbital sódico (30 mg/kg). A administração da pentazocina se fez por via intravenosa, nas concentrações de 2,4 e 6 mg/kg, prolongando-se o experimento até 120 minutos após a administração da droga. A dose de 2 mg/kg causou hipotensão ocular estatisticamente significante, embora não ponderável do ponto de vista farmacológico. as doses de 4 a 6 mg/kg determinaram uma hipertensão ocular inicial de uma hora de duração, seguida de hipotensão. A referida fase de hipertensão poderia, eventualmente, sugerir cautelas no emprego da droga em pacientes galucomatosos. Com as três doses ocorreu uma pequena dimunição da pressão arterial, variando diferentemente com a dose empregada, ao passo que com a pressão venosa apresentaram-se variações análogas às da pressão intra-ocular. A pentazocina não parece ter alterado ponderavelmente o equilíbrio ácido básico. A diminução da pressão intra-ocular poderia ser explicada pela maior facilidade de escoamenteo do humor aquoso das vônulas do trabeculado reticular, decorrente da diminuição da pressão venosa. Não foram observadas modificações das pressões decorrentes do traumatismo do animal, na ausência da pentazocina. Por outro lado, a pentazocina não alterou a pressão intra-ocular por decorrência de sua osmolaridade Abstract: Not informed. Mestrado Farmacologia Mestre em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Objetivos: Estudos epidemiológicos mostrando que o aumento do consumo de tomate ou seus derivados reduz o risco de doenças crônicas como câncer de próstata e doenças cardiovasculares. Esses efeitos benéficos do tomate geralmente são atribuídos ao licopeno, um carotenóide acíclico e com propriedade antioxidante. Este trabalho se propõe analisar o possível efeito protetor do pré-tratamento com licopeno em condições experimentais de hipertensão arterial e propõe ainda avaliar os efeitos do tratamento agudo e crônico com esse carotenóide em modelos de inflamação aguda local e sistêmica. Desta forma, pretende-se contribuir na avaliação da eficácia do consumo regular de alimentos ricos em licopeno na terapêutica e profilaxia associadas aos modelos experimentais deste trabalho. 1º. Avaliar o efeito do pré-tratamento com licopeno nas alterações cardiovasculares funcionais induzidas pela inibição crônica da síntese de óxido nítrico em ratos Wistar; 2º. Avaliar o tratamento com licopeno em modelos de inflamação aguda local (representado pelo modelo de edema da pata) e sistêmica (isquemia e reperfusão hepática e lesão térmica). Métodos: Na primeira etapa desse estudo foi realizado tratamento com licopeno nas doses de 5, 10, 50 ou 100 mg de licopeno/kg/dia por gavagem associados ou não com L-NAME (45 mg/Kg/dia) por gavagem, por 28 dias. Os parâmetros analisados foram peso corporal, pressão arterial média (PAM), débito cardíaco (DC) e resistência vascular periférica total (RVPT). Na segunda etapa, no modelo de edema da pata, foram empregados dois tipos de tratamento com licopeno: tratamento agudo (1 - 50 mg de licopeno/Kg administradas por via intraperitonial, 15 minutos antes da injeção de carragenina para indução de edema de pata) e tratamento crônico (25 ou 50 mg de licopeno/kg/dia, por gavagem, por 14 dias antes da injeção de carragenina). Nos modelos de Isquemia e reperfusão (I/R) hepática e lesão térmica (LT), foi realizado o pré-tratamento dos animais com licopeno 25 mg/Kg/dia por 14 dias e, posteriormente, submetidos a I/R ou à LT. Para o protocolo de I/R foram analisados os testes plasmáticos de alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), lactato desidrogenase (LDH) e da gama-glutamil transferase (?GT). Já para lesão térmica foram analisadas as concentrações plasmáticas de ALT, AST, creatinina, uréia e amilase. Resultados: Os resultados obtidos na primeira etapa desse estudo mostraram que o licopeno, nas diferentes doses associadas à administração de L-NAME causou aumento significativo da PAM, RVPT e redução no DC. Os resultados obtidos na segunda etapa desse estudo nos mostraram que o licopeno, tanto no tratamento agudo quanto no tratamento crônico, inibiu significativamente a formação de edema na pata. O tratamento crônico por 14 dias de licopeno também reduziu a lesão hepática provocada pelos dois modelos de inflamação aguda sistêmica, entretanto, não reduziu o grau de lesão em outros tecidos. Conclusão: O tratamento crônico com licopeno, nas doses usadas, não preveniu as alterações cardiovasculares encontradas no modelo de inibição crônica da síntese de óxido nítrico por L-NAME. Tanto o tratamento agudo quanto o crônico de licopeno exibiram efeito antiinflamatório local, o tratamento crônico limitou o grau de lesão hepática em dois modelos de inflamação sistêmica Abstract: Objectives: There is epidemiological data supporting the association between an increased consumption of tomatoes or its products and a reduced risk for developing chronic diseases such as prostate cancer and cardiovascular disease. These beneficial effects are generally attributed to the antioxidant properties of lycopene, an acyclic carotenoid with 11 linearly arranged conjugated double bonds. Hence, we evaluated the influence of lycopene in the prevention of haemodynamics alterations found in a hypertension model induced by chronic treatment with L-NAME and we also evaluated the anti-inflammatory effect of lycopene in experimental acute inflammation model. Methods: To evaluate the influence of lycopene in the prevention of haemodynamics alterations found in an endothelial dysfunction model induced by chronic treatment with L-NAME, lycopene was administered by gavage and the dosages were 5, 10, 50 or 100 mg of the lycopene/Kg/day, during 28 day. The analyzed parameters were body weight, tail-cuff blood pressure (TCP), mean arterial pressure (MAP), cardiac output (CO) and total peripheral vascular resistance (TPVR). To evaluate the effects of lycopene in local inflammation, a carrageenan induced paw edema model, lycopene was administered as an acute treatment (1, 10, 25 or 50 mg of the lycopene/Kg, intraperitonial (i.p.), 15 minutes before the carrageenan injection) and as a chronic treatment (25 or 50 mg of the lycopene/kg/day, gavage, during 14 days before the carrageenan injection. The evaluation of the liver ischemia-reperfusion and burn injury model, lycopene was administered chronically (25mg/Kg) during 14 days. Injury was assessed by measurement of the. In this model, lycopene was administered daily at two doses (25mg/kg and 50mg/kg) in the 14 days that preceded the experiments. After I/R process, it was measured serum levels of aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, lactate dehydrogenase and gamma-glutamyl transferase. After burn injury experiment, it was measured aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, creatinine, urea and amilase. Results: The results obtained in the part of in this study showed that the chronic administration of L-NAME and chronic treatment with lycopene plus L-NAME induced to the significant increase of MAP, TPVR and reduction in CO. The second part, results showed that lycopene significantly inhibited rat paw edema formation at two doses (25 and 50 mg/Kg) in both acute and repeated administration. Repeated administration of lycopene also reduced liver injury induced by ischemia-reperfusion and by burn injury. Conclusion: The chronic treatment with lycopene did not prevent the functional cardiovascular alterations found in the model of chronic inhibition of the synthesis of nitric oxide by L-NAME. However, lycopene exhibits local anti-inflammatory activity in the carrageenan-induced paw edema model and attenuates liver injury induced by ischemia reperfusion and burn injury Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Desordens periorbitais (DPO) é um nome atribuído a um conjunto de disfunções estéticas caracterizadas por alterações na coloração e na forma das pálpebras. As principais manifestações observadas são, hipercromia da região infraorbital, formação de bolsas de gordura, de edema e de rugas finas. A hipercromia ocorre em função de um distúrbio microvascular que pode gerar a formação de edema e alteração da tonalidade da pele. A formação de bolsas de gordura é caracterizada por uma hipertrofia nos adipócitos devido ao acúmulo de triacilglicerol intracelular. Pela ação deletéria da radiação UV observa-se a degradação do tecido conectivo, o que é refletido através do aparecimento de rugas ao redor dos olhos. Neste trabalho, avaliamos a possível aplicação da associação dos extratos hidroglicólicos de Pfaffia paniculata e Ptychopetalum olacoides (AEHPPPO) na prevenção e tratamento da DPO. Os resultados clínicos obtidos demonstraram que AEHPPPO promoveu uma redução da hipercromia, do edema e das linhas finas de expressão na região periorbital. Estes efeitos podem ser atribuídos àqueles observados in vitro, onde AEHPPPO demonstrou atividades antioxidante, antiinflamatória, estimuladora da síntese dos componentes da matriz extracelular e do metabolismo do tecido adiposo. Estes resultados nos levam a sugerir que este composto poderia ser utilizado como uma alternativa eficaz em produtos para o cuidados da pele, particularmente aqueles destinados à região dos olhos, com o propósito de prevenir ou minimizar a presença da hipercromia, bolsas e rugas finas nesta área específica. Abstract: Despite the frequency in which occurs, little has been written in scientific literature on the treatment of periorbital disorders (POD). POD are characterized by alterations in color and shape of the upper and lower eyelids, manifested by hyperpigmentation ("dark circles") and puffiness resulted by fat and fluid accumulation. It has been reported that darkening around the eyes is caused by a process of postinflammatory hemodynamic congestion, characterized by melanin and hemoglobin accumulation. The puffiness caused by orbital adipose tissue is due to an overload of triacylglycerol in the adipocyte, probably as a consequence of circulatory disturbance. Another consequence of the inflammatory process is the local edema due to capillary vasodilatation, which is caused by the release of inflammatory mediators. In addition, POD is usually accompanied by local wrinkling formation, due to deterioration of extracellular matrix (ECM), especially provoked by UV radiation exposure. In this work, we have demonstrated the effects of Pfaffia paniculata/Ptychopetalum olacoides-associated compound (PPLAC) as a dermocosmetic active in the clinical improvement of periorbital disorders. The clinical evaluation showed significant improvements in skin hyperchromia, edema and flaccidity in periorbital area. These clinical observations were also confirmed by in vitro studies, which demonstrated anti-inflammatory, antioxidant and lipolytic effects, besides the ability to stimulate ECM compounds production. Our results clearly encourage the use of this compound as an adjuvant to eyecare dermocosmetics products with the purpose to reduce the local bruised appearance and puffiness improvement. Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Jr Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Fumar é um dos maiores fatores de risco para doenças coronarianas arteriais e causa disfunção endotelial. Além dos presumíveis efeitos autonômicos dependentes da nicotina, vários estudos têm demonstrado que fumar diminui a disponibilidade de óxido nítrico (NO) em artérias e veias. Nicotina está entre os diversos compostos contidos no cigarro que poderia ser responsável por esta resposta prejudicial do endotélio. Estudamos 9 não fumantes sadios e 12 fumantes sadios, eves/moderados, através da técnica da complacência da veia dorsal da mão. Curvas de dose resposta à bradicinina (BK) e nitroprussiato de sódio (NPS) foram construídas para testar o relaxamento dependente e independente do endotélio antes e durante o uso de adesivo de nicotina (21 mg). Pressão arterial média (PAM) foi medida, batimento a batimento, durante as 4 horas do estudo. Amostras de sangue foram coletadas para quantificar o tromboxano B2 (TXB2). . Co-administração de nicotina transdérmica reduziu a responsividade vascular à BK em veias de não fumantes (Emáx=88.0::!::17.9% e 54.3:t14.9%, respectivamente antes e após o adesivo de nicotina; p

Orientadores: Gilberto de Nucci, Fabíola Taufic Monica Iglesias Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O fato da cópula em serpentes ser muito prolongada, chegando a mais de 20 horas, sem que os mecanismos farmacológicos estejam conhecidos, motivou o nosso grupo a estudar o hemipênis de Crotalus durissus terrificus (cascavel). Diferentemente do observado em corpo cavernoso de outros mamíferos, o relaxamento induzido pela estimulação elétrica foi mais duradouro, além de resistente a ação da neurotoxina tetrodotoxina (TTX) em hemipênis de Crotalus. Uma hipótese inicial aventada foi que este canal, cuja cinética de abertura e fechamento é mais lenta, seria o responsável pelo relaxamento duradouro e, portanto, pelo coito mais prolongado. Baseado nestes resultados, e considerando que a resistência à TTX e duração prolongada também foram observadas na contração induzida pela estimulação elétrica, o objetivo do presente projeto foi caracterizar através de experimentos funcionais in vitro a contração mediada por agonistas ou pela estimulação elétrica. Os experimentos funcionais foram divididos em cinco etapas: 1) contração frente a noradrenalina, adrenalina e dopamina; contração frente a estimulação elétrica ou fenilefrina na presença de 2) tetrodotoxina (TTX), fentolamina e guanetidina; 3) neurotoxinas seletivas para os canais de sódio ou cálcio dependentes de voltagem; 4) após a troca de cloreto de sódio pela N-metil-D-glucamina (NMDG) e 5) determinação na noradrenalina triciada após estimulação elétrica em corpo cavernoso de Crotalus (CCC) e de coelho (RbCC). Em CCC todas as catecolaminas produziram contração dependente da concentração, sendo este efeito reduzido na presença de fentolamina. A estimulação elétrica induziu contração que foi dependente da frequência tanto em RbCC como em CCC, sendo esta contração devido, principalmente, à liberação de catecolaminas, uma vez que tanto a fentolamina como guanetidina praticamente aboliram esta resposta. Surpreendentemente, diferente de RbCC, em CCC a substituição equimolar de NaCl por N-metil-D-glucamina (NMDG) não causou nenhuma alteração na amplitude de contração frente a estimulação elétrica. Os anestésicos locais bupivacaína e ropivacaína reduziram significantemente a contração induzida pela estimulação elétrica em CCC e RbCC, enquanto a veratridina, um ativador deste canal, causou contração que foi dependente da liberação de catecolamina. Na presença das neurotoxinas GVIIA ou MVIIA pudemos observar uma redução de, aproximadamente, 50 % na contração induzida pela estimulação elétrica em CCC e RbCC. As toxinas para os canais de sódio ou cálcio não interferiram na contração induzida pela fenilefrina. Em relação aos experimentos com noradrenalina triciada não foi detectado nenhum sinal de radioatividade no sobrenadante de CCC após a estimulação elétrica, indicando a baixa sensibilidade do método ou a liberação de outra catecolamina. Por outro lado, em RbCC na presença de TTX, NMDG e na ausência de Ca+2 houve uma redução significativa na fração de [3H]-noradrenalina liberada após o estímulo elétrico, indicando a participação do influxo de sódio e de cálcio na neurotransmissão adrenérgica no RbCC. Os experimentos funcionais sugerem que em CCC a liberação de catecolaminas independe do influxo de sódio, porém é dependente do influxo de cálcio Abstract: The snake's coitus may last up to 20 hours, although the pharmacological mechanism remains unknown. Conversely to mammalian corpus cavernosum (CC), the relaxation induced by electrical field stimulation (EFS) in Crotalus corpus cavernosum (CCC) was long-lasting and resistant to tetrodotoxin (TTX). Since TTX-resistant sodium current has much slower activation and inactivation kinetics than TTX-sensitive sodium current, one may speculate that the prolonged coitus was due to persistent sodium channel activation, and thus nitric oxide release. Based on these results and considering that TTX-resistant was also observed in EFS-induced contraction, the aim of this study was to characterize the contraction in CCC. The functional assays were divided in five steps: 1) concentration response curve to noradrenaline, adrenaline and dopamine in the absence and presence of phentolamine; contraction induced by electrical field stimulation (EFS) or phenylephrine (PE) in the presence of 2) TTX, phentolamine or guanetidine; 3) of blockers for voltage gated sodium- or calcium channels; 4) EFS- and PE-induced contraction after NaCl replacement by N-methyl-D-glucamine (NMDG); 5) quantification of titrated [3H] noradrenaline after EFS in RbCC and CCC. Noradrenaline, adrenaline, dopamine and EFS induced contraction, which were practically abolished in the presence of phentolamine or guanethidine in RbCC and CCC. Surprisingly, low sodium levels did not affect EFS-induced contraction in CCC, but abolished in RbCC. The sodium channel activator, veratridine induced contraction in both RbCC and CCC being this response abolished in the presence of phentolamine. Local anaesthetics, ropivacaine and bupivacaine and the neuronal N-type calcium channel blocker, GVIA and MVIIA reduced by, approximately, 50 % EFS-induced contraction, without affecting the contraction by PE. In CCC no radioactivity was detected after EFS stimulation, whereas in RbCC TTX, sodium or calcium ions removal a significant reduction on [3H]-noradrenaline release was observed. Our results suggest that EFS-induced contraction was independent on sodium influx, but rather dependent on calcium influx Mestrado Farmacologia Mestra em Farmacologia

Orientador: Gun Birgitta Bergsten Mendes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: INTRODUÇÃO - Um dos caminhos para prevenir interações medicamentosas (1M) é utilizar as informações disponíveis na literatura para promover a melhor abordagem clínica para cada paciente. Entretanto, a consulta da literatura não está sempre disponível, em especial a identificação das IM antes da dispensação dos medicamentos prescritos pela farmácia hospitalar. Esta pesquisa calculou a prevalência das interações medicamentosas potenciais (IMP) e associou as variáveis severidade das reações por IM e a qualidade da informação disponível sobre IMP para estabelecer um indicador numérico a fim de favorecer uma prioridade para a promoção de prevenções ou monitorização das IMP. MÉTODOS- Foi realizado um estudo transversal em um hospital terciário em Brasília-DF, de 200 leitos ativos, o Hospital das Forças Armadas, para calcular a prevalência das interações medicamentosas e propor uma alteração do método de classificação de IM de TATRO, a partir da proposição de uma escala de 1 até 6, onde 6 significa as reações que podem levar a ameaça a vida dos pacientes. Foram utilizados os softwares Epi Info 6.04b para as análises estatísticas e a base de dados Drug-reax da Micromedex para identificação e análise das IM. RESULTADOS- Entre407 pacientes intemados(40,8:f:24,6 D.P anos), 205 (50,4%) eram mulheres e 202 (49,6%) eram homens. A prevalência de pacientes com IMP foi de 38,2 com 193 diferentes tipos de medicamentos distribuídos em 57 classes (terceiro nível da ATC). A média dos medicamentos prescritos foi de 5,1 :f: 3,1 D.P. e 2,3 :f: 1,8 D.P Interações Medicamentosas Potenciais (IMP) por paciente (min. 1; máx. 12). Os pacientes que foram prescritos 5 ou mais medicamentos apresentaram maiores riscos do desenvolvimento das IMP (Razão de Prevalência = 4,6 e Odds Ratio = 8,9 [95% I.C 4,7 -17,3]) quando comparados com os pacientes prescritos menos de 5 medicamentos. Da mesma forma, os pacientes idosos (60 ou mais anos) apresentaram maiores riscos do desenvolvimento das IMP (Razão de Prevalência = 1,6 e Odds Ratio = 2,4 (95% tC 1,4 - 4,0]), quando comparados com os pacientes com menos de 60 anos. DISCUSSÃO - As IMP ocorrem com elevada freqüência em nível hospitalar (38,2%). Esta situação aumenta o risco do desenvolvimento de reações adversas clinicamente importantes. Entretanto, nem todos os pacientes apresentarão as IM a partir de sinais clínicos elou laboratoriais claramente identificáveis. Por isso, o método proposto permite identificar aqueles pacientes que apresentam os maiores riscos, apesar das limitações próprias do estudo, favorecendo, assim, uma intervenção e monitorização com maior eficiência pela equipe de saúde Abstract: BACKGROUND- One of the ways to prevent Adverse Drug Interaction (ADI) is to use the information available in literature to promote the best clínical approach for each in-patient. Nevertheless, it is not always possible to obtain on-line prevention or recommendation methods for ADI during medical prescription, especially by hospital pharmacy in developing countries. The present method associates ADI related variables such as severity of adverse reactions and quality of ADI documentation to prioritise more important in-patients in clinical terms. METHODS- A cross-sectionalstudywasdevelopedin a 200- bed Tertíary Hospital in Brasilia, Brazil, in order to calculate the prevalence of ADI and to present a new ADI classification method, based on alteration in TATRO's drug interaction classification method, introducing a new score from 1 to 6 for the analysis of severity and documentation quality per each interaction, 6 being the most potential life-threatening adverse reactions. Two softwares were used: Epi Info 6.04b for statistic analyses, and Micromedex's Drug-reax for potential ADI database. RESULTS - Among 407 in-patients (average age 40.8 :t 24.6 S.D.), 205 (50.4%) were female and 202 (49.6%) were male. Considering ali in-patients presenting ADI (38.2% out of the total), 193 different types of medicines of 57 therapeutic classes (ATC) were prescribed 5.1 :t 3.1 S.D. mean medicine/inpatient and 2.3 :t 1.8 S.D ADllin-patient (1 - 12). The in-patients with 5 or more medicines prescribed were at the highest risk level for ADI (prevalence rate = 4.6 and odds ratio = 8.9 [95% C14.7 -17.3]), in comparison with in-patients with less than 5 medicines prescribed. In the other hand, the in-patients at 60 or more years of age at the were highest risk levei for ADI (prevalence rate = 1.6 and Qddsratio = 2.4 [95% C11.4 - 4.0]), in comparison with in-patients with less than 60 years of age. DISCUSSION - Potential Adverse Drug Interactions have been occurring very frequently (38.2 % of all patients) in the hospital environment. This situation increases the risk of adverse drug reaction for inpatients. However, not ali patients will present clear1yidentifiable ADI clinical or laboratorial reactions. This method, in spite of its limitations, enabled the identification of common features among patients, thus selecting the population with the highest tendencies for developing ADls and leadíng to a more efficient and intensive drug monitoring Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador : Edson Antunes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: É conhecido que o treinamento fisico de longa duração induz bradicardia. No entanto, os mecanismos pelos quais o exercício desencadeia esse fenômeno não está ainda completamente elucidado. Portanto, o objetivo desse trabalho foi investigar a participação dos receptores de adenosina na bradicardia induzida pelo treinamento fisico por natação durante 8 semanas em átrios direitos isolados. Além disso, avaliamos a participação do sistema SÜDpáticoe parassimpático nas respostas cronotrópicas atriais na bradicardia de repouso. Ratos Wistar machos foram treinados durante 8 semanas por natação, 5 dias por semana, com sessões de 60 minutos cada. Após o período de treinamento, os átrios direitos foram isolados e curvas concentração-efeito foram obtidas aos agonistas isoproterenol, carbacol, CPA, NECA, a. metil-ATP e ffi-MECA. A ftequência cardíaca e pressão arterial foram aV31i~das através da artéria femora!esquerdanos animais acordados.O treinamento fisico por natação durante 8 semanas provocou redução do peso corporal, lactato plasmático e da ftequência cardíaca. Tanto a potência quanto a resposta máxima aos agonistas ~ adrenérgico, isoproterenol, e de receptores de adenosina do subtipo A3, IB-MECA foram significativamente aumentadas nos animais treinados, enquanto que a resposta cronotrópica aos agonistas de receptores muscarimícos, carbacol, e receptores purinérgicos A}, A2 e P2X, CPA, NECA e a metil-ATP, respectivamente não foram aheradas pelo treinamento fisico durante 8 semanas. Assim, o aumento da resposta cronotrópica negativa ao agonista de receptores de adenosina do subtipo A3, ffi-MECA, parece participar da bradicardia de repouso após treinamento fisico Abstract: Endogenous adenosme is produced by the beart during ischaemia and exercise as a natural cardioprotective nucleoside. Physical training can produce many adaptations on cardiovascuJar system such as bradycardia, but the underlying mechanisms by which bradycardia is establish still not understand. Therefore the aim of this work was to mvestigate the role of adenosine receptors on the bradycardia induced by swim training. A1so we evaluated the activation of sympathetic and parasympathetic activity on the rat right atria. Adult Wistar rats were dividedm two groups, control and trained animaJs.Swim training program consisted of regular physical activity for 8 weeks, five days a week, for 60 minutes each session. Afier 48 hours of swim training, the right atria were isoJated and concentration-response curves were obtamed for isoprotereno~ carbacho~ CPA, NECA, ffi-MECA, and a methyl ATP. Heart rate and blood pressure were measured by femora! artery catheter. Swim training produced a significant reduction on plasma 1actate leve~ body weight and heart rate without changes on the blood pressure. No changes were seen at the pECsovalues for a methyI-ATP, CPA, NECA, and carbachol in both groups. However, the chronotropic responses to ~adrenergic agonist, isoprotereno~ and for A3 agonist, ffi- MECA, were markedly augmented in trained animaIs as compared to controI group. Thus, bradycardia mduced by swim training program may mvolve the participation of adenosine A3receptors in rat right atria Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Lea Rodrigues Simioni Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Neste trabalho, foi estudada a ação do veneno de Micrurus altirostris (cobra coral Uruguaiana) nas concentrações de 0,1; 0,5; 1; 5 e 10 µg/mL sobre a junção neuromuscular em preparações isoladas de ave (biventer cervicis de pintainho) e de mamífero (nervo frênico-diafragma de camundongo) e também a habilidade do antiveneno comercial produzido pelo Instituto Butantan e do anti-soro específico, produzido em coelhos em neutralizar a neurotoxicidade e a letalidade em pintainhos e camundongos (DL50 0,042 e 0,255 mg/kg), injetados i.m. e i.p., respectivamente, com misturas de veneno (5 DL50): antiveneno ou anti-soro específico (n=6), na razão de 1:1; 1:2,5; 1:5; 1:10 e 1:20. Somente a razão de 1:20 do veneno: antiveneno ou anti-soro neutralizou o bloqueio neuromuscular in vitro e protegeu pintainhos e camundongos contra 5 DL50 do veneno. O veneno causou um completo bloqueio neuromuscular em ambas as preparações, ligando-se aos receptores colinérgicos sub-sinápticos, de maneira irreversível. Inibiu as contraturas causadas por ação da acetilcolina e do carbacol, sem interferir nas respostas ao KCl. O bloqueio neuromuscular causado pelo veneno não apresentou qualquer alteração na ausência de íons Ca2+ ou com a diminuição da temperatura, tampouco foi revertido por ação da neostigmina. A resposta ao estímulo direto não foi afetada na vigência do bloqueio neuromuscular completo, indicando pela perfeita resposta muscular, que a membrana manteve-se íntegra, o que sugere a ausência de uma atividade miotóxica. Os resultados indicaram que o veneno de Micrurus altirostris interfere com a neurotransmissão pós-sináptica e que o antiveneno comercial, bem como o anti-soro específico, produzido em coelhos, possuem baixa eficácia em neutralizar a neurotoxicidade e a letalidade deste veneno. A neutralização da ação neurotóxica e também da letalidade do veneno foi obtida apenas quando a proporção de 1:20 (veneno:antiveneno) foi utilizada Abstract: In this work, we studied the neuromuscular blockade caused by Micrurus altirostris venom (0.1-10 µg/mL) in indirect stimulated chick biventer cervicis and mouse phrenic nerve-diaphragm preparations and the ability of commercial antivenom (Instituto Butantan) and antiserum raised in rabbits to neutralize neurotoxicity and lethality in chicks and mice (LD50 0.042 and 0.255 mg/kg), injected i.m. and i.p., respectively, with venom (5 LD50):antivenom or antiserum mixtures (n=6) of 1:1, 1:2.5, 1:5, 1:10 and 1:20. The venom caused a complete and irreversible neuromuscular blockade in both preparations, binding in the subsynaptics colynergic receptors; inhibited the acetylcholine and carbachol contractures, without interfering on KCl response. The neuromuscular blockade was not Ca2+ or temperature-dependent and did not affect the response to direct stimulation. Only a venom:antivenom or antiserum ratio of 1:20 neutralized the neuromuscular blockade in vitro and protected chicks and mice against 5 LD50 of venom. Our results indicated that Micrurus altirostris venom interferes with postsynaptic neurotransmission and that commercial antivenom and rabbit antiserum have low efficacy in neutralizing the neurotoxicity and lethality of this venom Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Gun Birgitta Bergsten Mendes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Este estudo de utilização de medicamentos foi realizado através da metodologia de prevalência no ponto, com finalidade de avaliar a qualidade da prescrição médica em pacientes pediátricos internados nas clínicas de um hospital de referência materno-infantil. De março a junho de 1999, através de uma coleta mensal, foram coletados dados de 355 pacientes, onde observou-se uma taxa de ocupação média em torno de 80%, com a população distribuída de igualmente entre os sexos, de forma simétrica quanto as faixas etárias e assimétrica quanto ao peso. Na amostra de 332 pacientes avaliados, pneumonia foi o diagnóstico de internação mais frequente. Propuseram-se alguns critérios para avaliação da qualidade da prescrição médica, que foram: via de administração indicada, dose entre medicamentos considerados de baixo índice terapêutica, duplicação terapêutica, medicamentos não recomendados em pediatria, medicamentos não padronizados e interações medicamentosas potenciais. Os resultados obtidos apontam para a necessidade da interação da equipe multiprofissional, com uma maior participação clínica do farmacêutico, visando a melhoria da qualidade do atendimento ao paciente Abstract: This study evaluates the prescriptions for pediatric inpatients, and proposes criteria for quality eva!uation. The hospital pharmacist determined the prevalence of drug prescription in five pediatric wards. One day collection of ali prescriptions for pediatric inpatients was performed in March through June 1999, and the data were jointly analyzed. Six cri teria were proposed for quality evaluation of the drug prescriptions. The drugs were classified according to the ATC classification index. The prescriptions of a total of 322 patients ere collected in the four collection days. The most common diagnosis was pneumonia. The three most prescribed therapeutic classes were: Nervous System ( N ) 109%, General Antiinfectives for Systemic Use ( J ) 81.9% and Respiratory System ( R ) 69,0%. The quality evaluation showed an excessive use of the intravenous route, appropriate dose schedule for drugs with narrow therapeutic index, no therapeutic duplication, prescription of unapproved and off-Iabel drugs, frequent potential adverse drug interactions, and prescription of drugs not in the therapeutic formulary of the hospital. Very simple measures can improve the quality of the health care of pediatric inpatients as inclusion of adequate drug presentations in the hospital formulary, and a careful evaluation of the need of the intravenous route. This study also shows the hospital pharmacists acting as part of the multidisciplinary health care team Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: André Almeida Schenka Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O câncer de mama é a neoplasia maligna mais prevalente e a principal causa de óbito entre mulheres, no mundo. A despeito de avanços substanciais no entendimento da biologia da doença, nos métodos de detecção precoce, e em sua farmacoterapia, a sobrevida geral não se modificou significantemente nas últimas décadas. Portanto, pode se dizer que um dos deveres primordiais das Universidades Públicas engajadas com pesquisa básica e aplicadas consiste em contribuir para o desenvolvimento de novas estratégias de tratamento sistêmico desta neoplasia. Nesse contexto, um dos alvos estratégicos mais promissores no desenvolvimento de novos fármacos antineoplásicos é representado pela célula-tronco neoplásica (CTN). As CTNs têm sido associadas em inúmeros estudos à capacidade de algumas neoplasias malignas de resistir às principais modalidades terapêuticas antineoplásicas, especialmente à: radio-, quimio-, hormônio- e imunoterapias. Em resumo, na atualidade, a detecção de CTNs constitui uma ferramenta clínica bastante promissora enquanto alvo terapêutico, fator prognóstico e preditivo de resposta terapêutica. O objetivo deste trabalho foi descrever e discutir as potencialidades e limitações do modelo de carcinogênese mamária pelo DMBA, após reclassificação das neoplasias mamárias segundo os critérios diagnósticos da OMS (2003, 2012), subtipagem molecular e quantificação de imunomarcadores prognósticos, preditivos e de CTN. Após a aplicação do protocolo experimental de indução química pelo DMBA e a eutanásia dos animais controle e experimental, suas linhas mamárias (contendo ou não tumores) foram ressecadas e avaliadas quanto à morfologia e a imunoexpressão para marcadores de CTNs. Após 13 semanas, 100% dos animais desenvolveram neoplasias macroscópicas e histologicamente compatíveis com os critérios de avaliação indicados pela OMS. Os tumores foram classificados em carcinoma ductal, carcinoma papilífero, carcinoma lobular, carcinoma mioepitelial e tumor filóide, sendo o tipo mais frequente, o ductal. Poucos marcadores imunoistoquímicos mostraram correlação com variáveis de comportamento biológico. Mesmo assim, o grau de correlação não foi elevado. A grande heterogeneidade morfológica intratumoral e interanimal, associada à presença de subtipos histológicos bifásicos (tumor filóide), tumores com diferenciação mioepitelial/basal e à grande positividade para marcadores CTN clássicos (tanto em termos de frequência na amostra como em termos de distribuição média nas neoplasias) demonstram a participação clara de CTNs no modelo, o que o torna um importante referencial como modelo in vivo para o teste de drogas anti-CTN específicas. O modelo reproduz os principais subtipos histológicos e moleculares de câncer mamário, o que significa que poderá ser utilizado no estudo pormenorizado de drogas indicadas especificamente para cada subcategoria molecular (e.g., agentes hormonais que são indicados especificamente para os tipos luminais e trastuzumab, indicado nos tumores do subtipo HER2), bem como no desenvolvimento de novas drogas com maior especificidade para a classe molecular de interesse Abstract: Breast cancer is the most common malignancy and the leading cause of death from cancer among females worldwide. Despite all the research and all the progress, methods of early detection, and its pharmacotherapy, overall survival has not changed significantly in recent decades. Therefore, the Public University has been engaged in basic and applied research is too contributed to the development of new strategies for systemic treatment of this malignancy. In this context, one of the most promising strategic targets in the development of the anticancer drugs is represented by neoplastic stem cell (NSC). Neoplastic stem cell has been linked in various studies to the capacity of some malignancies to resist major antineoplastic therapeutic modalities, especially: radio-, chemo-, hormone- and immunotherapies. In summary, the detection of NSCs is a clinical tool very promising while therapeutic target and prognostic factor predictive of therapeutic response. The aim of this study was to describe and discuss the strengths and limitations of the model of mammary carcinogenesis by DMBA, after reclassification of breast cancer according to the diagnostic criteria of the WHO (2003, 2012), and quantification of molecular subtyping prognostic immunomarkers, predictive and NSC. After application of the experimental protocol of chemical induction by DMBA and euthanasia of experimental and control animals, the mammary lines (with or without tumors) were resected and evaluated the morphology and immunostaining for markers of NSCs. After 13 weeks, 100% of the animals developed macroscopic neoplasms and histologically consistent with the evaluation criteria of evaluation indicated by WHO. Tumors were classified as ductal carcinoma, papillary carcinoma, lobular carcinoma, myoepithelial carcinoma and phyllodes tumor, being the most common type, the ductal. Few immunohistochemical markers correlated with variable behavior biological. Nevertheless, the degree of correlation was not high. The morphological intratumoral heterogeneity and interanimal associated with the presence of histological biphasic subtypes (phyllodes tumor), tumors with myoepithelial/basal differentiation and the positivity for NSCs classic markers (both in terms of frequency in the sample and in terms of the average distribution neoplasias) demonstrate a clear involvement of NSCs in the model, making it an important reference as a model for in vivo testing of anti-specific NSC. The model reproduces the main molecular and histological subtypes of breast cancer, which means that could be used in detailed study drug indicated specifically for each subcategory molecular (eg, hormonal agents that are suitable specifically for the luminal type and trastuzumab indicated in tumors HER2 subtype), as well as to develop new drugs with higher specificity for the class of molecular interest Mestrado Farmacologia Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: No presente trabalho foi padronizado um novo método para a dosagem da atividade de fosfodiesterase in vitro, por HPLC-MS/MS. Este novo método conseguiu apresentar exatidão, precisão, sensibilidade e rapidez nas análises; monitorando os nucleotídeos (AMP, GMP, AMPc e GMPc). O desenvolvimento de novos fármacos derivados de um protótipo aponta para a obtenção de moléculas com um melhor perfil farmacocinético ou uma melhor relação estrutura-atividade. Atualmente o sildenafil é considerado o principal fármaco para o tratamento de disfunção erétil. Neste trabalho, avaliaram-se novos compostos denominados análogos de sildenafil (carbonato de lodenafil, dímero uréia e dímero uretana). Os análogos foram analisados quanto à atividade em PDE5 e agregação plaquetária humana, in vitro. Foi determinada a estabilidade destes compostos, em meio ácido e plasma humano, in vitro, além de seus possíveis metabólitos em microssomas e hepatócitos de rato in vitro, e os seus parâmetros farmacocinéticos via intravenosa e oral, em cão, in vivo. Os resultados mostraram que os análogos de sildenafil inibem a atividade de PDE e não inibem a agregação plaquetária do mesmo modo que o sildenafil in vitro, no entanto potencializam a ação do doador de NO (SNP). Os análogos de sildenafil foram estáveis em meio ácido e em plasma humano. No ensaio de metabolização, os dímeros uréia e uretana não foram metabolizados, entretanto o carbonato de lodenafil foi metabolizado principalmente em lodenafil, in vitro. O carbonato de lodenafil é rapidamente biotransformado em lodenafil, após administração v.i. e v.o. em cão. Concluiu-se que este trabalho apresenta um novo método de dosagem de PDEs e uma nova perspectiva terapêutica para a disfunção erétil, representada pelo carbonato de lodenafil, o qual inibe concentração-dependente a atividade de PDE5 Abstract: In the present work a new method for the dosage of the activity of phosphodiesterase was standardized in vitro, for HPLC-MS/MS. This new method obtained to present exactness, precision, sensitivity, and rapidity in the analyses; monitoring the nucleotides (AMP, GMP, cAMP and cGMP). The development of new drug derived from an archetype points with respect to the molecule attainment with one better pharmacokinetic profile or one better relation structure-activity. Currently the sildenafil is considered the main drug for the treatment of erectile dysfunction. In this work, we evaluate new analogous called composites of sildenafil (carbonate of lodenafil, dimer urea and dimer uretana). The analogous ones had been analyzed how much the activity in PDE5 and platelet aggregation human being, in vitro. The stability of these composites was determined, in human acid way and plasma, in vitro, beyond its possible metabolites in microsomes and hepatocytes of rat in vitro, and its pharmacokinetic profile after intravenous and oral, in dog, in vivo. The results had shown that the analogous of sildenafil inhibit the activity of PDE and they do not inhibit the platelet aggregation in a similar way that the sildenafil in vitro, however potencializam the action of the giver of NO (SNP). The analogous ones of sildenafil are presented steady in human acid way and plasma. In the metabolization assay, metabolization of dimer urea and dimer uretana was not observed, however the lodenafil carbonate was metabolizado mainly in lodenafil, in vitro. The lodenafil carbonate quickly is biotransformation in lodenafil, after administration v.i. and v.o. in dog. We conclude that this work presents a new method for analyze activity of PDEs and a new therapeutically perspective for the erectile dysfunction, represented for lodenafil carbonate, which inhibits concentration-dependent the activity of PDE5 Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Sisi Marcondes Paschoal Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A sepse caracteriza-se por uma reação inflamatória sistêmica e um quadro de estresse oxidativo em decorrência da grande formação de espécies reativas de oxigênio (EROs). Há trabalhos que mostram que as plaquetas são importantes neste quadro inflamatório, mas seu verdadeiro papel na sepse ainda não está bem elucidado. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito temporal do uso do antioxidante N-acetilcisteína (NAC) na resposta inflamatória e na atividade plaquetária em modelo de sepse induzido por lipopolissacarídeo (LPS). Para tanto, ratos controle foram injetados com salina (300 ?l, i.p.) ou NAC (150 mg/kg, i.p.), enquanto os tratados foram injetados com LPS de E. coli (1 mg/kg, i.p.) ou com NAC 30 min ou 6h após a injeção de LPS. Após 48h da injeção de LPS o sangue foi coletado. O número de leucócitos totais e plaquetas foi determinado no sangue periférico. A concentração plasmática de TNF-? foi determinada utilizando kit comercial de ELISA. A agregação plaquetária foi avaliada em agregômetro de dois canais. A determinação de EROs em plaquetas foi feita por citometria de fluxo e a de GMPc por imunoensaio. A determinação da atividade da superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx) e glutationa redutase (GR) foi feita através de kits comerciais. O LPS aumentou o número de leucócitos totais e reduziu o de plaquetas no sangue periférico. A NAC, 30 min ou 6h após a injeção de LPS, levou a contagem destas células para números semelhantes ao do grupo injetado com salina ou somente com NAC. A concentração plasmática aumentada de TNF-? nos ratos injetados com LPS foi reduzida por NAC para valores próximos aos encontrados no grupo salina. A agregação plaquetária induzida por ADP (10 ?) não foi afetada por NAC, mas foi 50% menor em ratos tratados com LPS. A inibição da agregação plaquetária foi revertida pela injeção de NAC 30 min ou 6h após a injeção de LPS. O LPS aumentou 2,2 vezes os níveis de GMPc em plaquetas estimuladas com ADP quando comparado com o grupo injetado com salina, o qual foi prevenido por NAC, quer em 30 min ou 6h após a injeção de LPS. Os níveis de GMPc em plaquetas de ratos injetados com NAC foram 45% menores do que os do grupo salina. A produção aumentada de EROs em plaquetas ativadas de ratos injetados com LPS foi reduzida por NAC para níveis semelhantes aos dos controle. A NAC reduziu significativamente a formação de EROs em plaquetas em comparação com o grupo salina. A atividade enzimática da SOD em plaquetas ativadas foi reduzida em 35% por NAC em comparação com o grupo salina. O LPS aumentou, discretamente, a atividade da SOD em plaquetas, sendo este prevenido pelo tratamento com NAC. Diferente do observado com SOD, as atividades enzimáticas da GPx e da GR em plaquetas ativadas foram significativamente aumentadas pelo LPS. A NAC não modificou a atividade da GPx e da GR em comparação com o grupo salina, mas reduziu cerca de 41% e 61% a atividade da GPx e GR, respectivamente, em plaquetas do grupo injetado com LPS. Nossos resultados mostraram que a NAC previne e reverte os efeitos do tratamento de ratos com LPS na atividade plaquetária. O restabelecimento da agregação plaquetária, dos níveis de GMPc e EROs intraplaquetário podem ter sido resultado de uma ação direta de NAC nas plaquetas e/ou em decorrência da melhora do quadro inflamatório do animal Abstract: Sepsis is an oxidative stress condition characterized by a systemic inflammatory reaction. It has been demonstrated that platelets are important in this inflammatory condition, but their real role in sepsis has not been well elucidated yet. Therefore, the aim of this study was to evaluate the temporal effect of the use of the antioxidant Nacetylcysteine (NAC) in the inflammatory response and platelet activity in a model of sepsis induced by lipopolysaccharide (LPS). Control rats were injected with saline (300 ?l, i.p.) or NAC (150 mg/kg, i.p.), while those treated were injected with LPS from E. coli (1 mg/kg, i.p.) or with NAC 30 min or 6 h after LPS injection. Blood was collected 48 h after LPS injection. Total leukocytes and platelets number was determined in peripheral blood. The plasma concentration of TNF-? was determined using commercial ELISA kit. Platelet aggregation was measured in two-channel aggregometer. Determination of reactive oxygen species (ROS) in platelets was performed by flow cytometry and cGMP by immunoassay. Enzymatic activity of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and glutathione reductase (GR) was determinated using commercial kits. LPS increased the total leukocytes number and reduced platelets in peripheral blood. NAC, 30 min or 6 h after LPS injection, brought the cell counts to the similar values of rats injected with saline or with NAC. The increased plasma concentrations of TNF-? in rats injected with LPS was reduced by NAC to values close to those found in the saline group. ADP (10 ?M)-induced platelet aggregation was unaffected by NAC but was 50% lower in rats treated with LPS. Inhibition of platelet aggregation was reversed by the injection of NAC 30 min or 6 h after LPS injection. LPS increased intraplatelet cGMP levels by 2.2-fold compared to the group injected with saline, which was prevented by NAC either 30 min or 6 hours after LPS injection. cGMP levels in activated platelets of rat injected with NAC were 45% lower than those of the saline group. The increased production of ROS in activated platelets from rat injected with LPS was reduced by NAC to levels similar to the control. NAC significantly reduced the formation of ROS in platelets compared to the saline group. SOD activity in stimulated platelets was reduced 35% by NAC compared to the saline group. LPS slightly increased SOD activity in platelets, which is prevented by treatment with NAC. Different from that observed with SOD, the enzyme activities of GPx and GR in activated platelets were significantly increased by LPS. The NAC did not modify the activity of GPx and GR compared with the saline group, but decreased by 41% and 61% the GPx and GR activities, respectively, in platelets of LPS-injected group. Our results showed that NAC prevents and reverses the effects of in vivo LPS on platelet activity. Restoration of platelet aggregation and of intraplatelet cGMP and ROS levels of LPS-injected rats may be caused by a direct action of NAC in platelets or by the improvement of inflammatory condition in the animal Mestrado Farmacologia Mestra em Farmacologia

Orientadores: Mary Luci de Souza Queiroz, Giselle Zenker Justo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Neste trabalho investigamos o efeito imunomodulador do extrato seco da raiz de Echinacea purpurea (EEP) sobre o crescimento e diferenciação de precursores hematopoéticos da medula óssea e do baço para a série granulócito/macrófago (CFU-GM) de animais infectados com Listeria monocytogenes. A atividade dos fatores estimuladores de colônias do soro, alterações no peso do baço e a resistência dos animais à infecção também foram estudados. Camundongos BALB/c receberam um tratamento prévio por 7 dias, via oral, de EEP nas doses de 100 mg/kg, 300 mg/kg, 750 mg/kg e 1000 mg/kg. Ao final deste período os animais foram infectados intraperitonealmente com uma dose letal de Listeria monocytogenes (lxl06 bactérias/animal) para determinação da curva de sobrevida e com uma dose subletal (lxl03 bactérias/animal) para avaliação dos parâmetros hematopoéticos. Os resultados demonstraram que o EEP administrado previamente aos animais infectados, nas doses de 300, 750, e 1000 mg/kg protegeu contra mielossupressão característica deste modelo experimental. Valores similares aos do grupo controle foram obtidos para o número de células progenitoras de granulócitos/macrófagos (CFU-GM) na medula óssea desses animais 48 horas e 72 horas após a infecção com Listeria monocytogenes, enquanto nenhuma alteração estatisticamente significativa neste parâmetro foi encontrada nos animais apenas tratados com o extrato nos quatro níveis de doses experimentais testados. Da mesma forma que para medula óssea, apenas as doses de 300, 750, e 1000 mg/kg inibiram completamente o desenvolvimento da hematopoese extramedular nos animais infectados, apresentando níveis normais de CFU-GM no baço 48 horas e 72 horas após a inoculação da bactéria. Embora o CFU-GM no baço dos animais pré-tratados com 100 mg/kg de extrato e infectados fosse estatisticamente superior ao do grupo controle, esta dose de EEP proporcionou uma redução estatisticamente significativa no número de precursores neste órgão em relação aos grupos somente infectados, nas 48 horas e 72 horas de avaliação. O aumento no peso do baço que acompanha a hematopoese esplénica no modelo murino de listeriose foi apenas parcialmente regulado pelo EEP, quando aàninistrado nas doses de 300, 750 e 1000 mg/kg. Nenhum efeito sobre este parâmetro foi observado nos animais apenas tratados. Na avaliação da atividade do EEP sobre a produção de fatores estimuladores de colônias de células hematopoéticas foi observado um aumento no número de CFU-GM para o grupo de animais pré-tratados e infectados similar ao estímulo produzido apenas pela infecção. Nos grupos de animais somente tratados, a atividade do soro também foi estatisticamente superior à do grupo controle. Este mesmo protocolo de tratamento também aumentou a resistência de animais letalmente infectados com histeria monocytogenes, alcançando 33, 50 e 16% de sobrevida para as doses de 300, 750 e 1000 mg/kg respectivamente. Concluímos, portanto, que o EEP apresenta atividade estimuladora sobre a mielopoese de camundongos BALB/c infectados com Listeria monocytogenes crítica para a resistência à infecção letal observada Abstract: In this work, we investigated the effects of Echinacea purpurea extract (EPE) on the growth and differentiation of bone marrow and spleen hematopoietic progenitors (CFU-GM) in normal and in Listeria monocytogenes-infected mice. Serum colony-stimulating activity, changes in spleen weight and resistance to a lethal dose of bacteria were also evaluated. BALB/c mice were treated orally with 100, 300, 750 and 1000 mg/kg doses of EPE for 7 consecutive days and, at the end of this period, they were infected intraperitoneally with a sublethal dose of the bacteria (lxlO3 bacteria/animal). As expected, a significant decrease in the number of bone marrow CFU-GM in mice infected with L. monocytogenes was observed during the early phase of infection. This effect was accompanied by the development of splenic hematopoiesis with splenomegaly. Treatment of these animals with 300, 750 and 1000 mg/kg of EPE previously to infection significantly stimulated myelopoiesis, reaching normal values of bone marrow CFU-GM at 48 and 72 h after infection. In addition, these doses of EPE markedly inhibited the extramedullar hematopoiesis and significantly reduced the spleen weight in infected mice. On the other hand, no effects on these parameters were observed with the 100 mg/kg dose. In addition, this extract did not affect myelopoiesis and spleen weight when administered to normal mice. Regarding the production of colony-stimulating factors (CSFs), we observed that serum from infected animals presented a higher stimulatory activity on the CFU-GM generation, and similar degrees of serum colony-stimulating activity were found in EPE-treated infected mice at all doses tested. Treatment of normal mice with all doses of EPE for 7 days also produced higher concentrations of CSFs relative to controls. Resistance to infection was studied in mice submitted to a lethal dose of L. monocytogenes (lxlO6 bacteria/animal). Administration of EPE at 300, 750 and 1000 mg/kg significantly improved the survival of mice lethally infected with L. monocytogenes, given 33%, 50% and 16% of survival, respectively. We suggest that the modulatory effect of EPE on the myelopoietic response is related to its prophylactic activity in infected mice as a mechanism to improve immunity Mestrado Farmacologia Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Os efeitos vasculares da endotelina-1 (ET-1) , da sarafotoxina 6b (S6b) e o IRL-1620 foram investigados em leito arterial hepático isolado de cão antes e durante a infusão de inibidores da ciclo-oxigenase e da óxido nítrico sintetase (indometacina e L-NAME, respectivamente). Administrações de noradrenalina (NA) foram usadas como agente vasoconstritor controle em nossos experimentos. Após a retirada cirúrgica do órgão, a veia cava (porções abdominal e supra-diafragmática), veia porta e artéria hepática foram canuladas. O órgão foi perfundido através da artéria hepática e da veia porta com solução nutritiva de .Krebs oxigenada e aqueci da a 37oC. Injeções em bolus de ET-1 (0.4-400 pmol), S6b (0.4-400 pmol), IRL-1620 (40-1200 pmol) e NA (5-500 nmol) foram feitas através da artéria hepática e as respostas da prepa~ação foram registradas em polígrafo. A administrações de ET -1 e S6b nduziram uma resposta vasoconstritora dependente da dose e de longa duração, acompanhadas de liberação significativa de prostaciclina (PGI2). A infusão de indometacina (5,6 J.!M) neste sistema tendeu a aumentar, porém não significativamente, as respostas vasculares induzidas por estes agonistas. A subseqüente infusão de L-NAME (10 J.!M), potenciou a resposta vasoconstritora induzida tanto pela ET-1 quando pela S6b (P