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Agradecimentos: This work was supported by São Paulo Research Foundation-Agilent Technologies (Grant number 2013/50452-5); the Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel (PROEX/CAPES Process number 3300301702P1); EMBRAPA (SEG 03.13.09.004.00.00) and Amazonas Research Foundation (FAPEAM Grant number 015/2014 PAPAC) Abstract: Tambaqui (Colossoma macropomum Cuvier, 1818) is the main native fish species farmed in Brazil, and 17ß-estradiol (E2) is a natural steroid hormone commonly used for the production of female fish monosex population, which, in tambaqui, shows a higher growth rate than the male. Thus, to assess whether the fish meat of treated tambaqui contains hormonal residue levels, a high-performance liquid chromatography coupled with electrospray tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for the determination of E2 residues in fish muscle was developed and validated. A QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe) dispersive solid phase extraction method was used for the sample preparation. The chromatographic separation was performed in a Poroshel EC-18 reverse phase column. The mobile phase was a mixture of acetonitrile with 0.01% ammonium hydroxide (A) and water with 0.01% ammonium hydroxide (B). The ratio of A:B phases was 60:40 (v/v) used in an isocratic mode. The method validation was performed according to Commission Decision 2002/657/EC and Veterinary International Conference Harmonization (VICH GL49). Since matrix effects were observed, matrix-matched analytical curves are recommended for quantitation. The linearity, selectivity, intraday and interday precision, accuracy, decision limit, detection capability, and detection and quantitation limits of the method are reported. The limits of detection and quantitation were 0.3?ng/g and 1.0?ng/g, respectively. At these limits and slaughtering fish 7?months after the end of the treatment, the muscle of tambaqui did not show detectable hormone residue level. Thus, consumption of tambaqui edible tissue from fish treated with E2 for the purpose of sexual reversion is unlikely to represent a risk associated with the exposure of human subjects as residue levels of this hormone are not detected in the fish muscle COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPES FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DO AMAZONAS - FAPEAM FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP Fechado

Agradecimentos: This work was supported by São Paulo Research Foundation-Agilent Technologies (grant number 2013/50452-5) and the Brazilian Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel (CAPES/PROEX process number 23038.000795/2018-61) Abstract: The development and validation of a throughput method for the determination of 25 antibacterial drugs (two ß-lactams, eight quinolones, two macrolides, five sulfonamides, trimethoprim, four tetracyclines and three amphenicols) in pangasius fish muscle by LC-MS/MS were performed. A simple, efficient and fast extraction procedure was developed using acetonitrile and a 0.1 M EDTA solution as solvents for extraction. All compounds were determined in a single run, and chromatographic separation was achieved using a Zorbax SB C18 column with a mobile phase comprised of purified water +0.1% formic acid (A) and acetonitrile +0.1% formic acid (B) in a linear gradient program. The method was validated aaording to the requirements of European Decision 2002/657/EC. To quantify the analytes, matrix-matched analytical curves were constructed with spiked blank tissues and showed linearity (r2) higher than 0.99. For all analytes, the precision and accuracy were determined at the levels of 3 ng/g (low), 10 ng/g (low-middle), 50 ng/g (high-middle) and 100 ng/g (high). The precision (CV%) was lower than 18.6% and the accuracy (determined as recovery) was between 65% and 119%. The limit of quantitation was 3.0 ng/g, with the exception of chloramphenicol, which was 0.3 ng/g, and amoxicillin and doxycycline, which were 10 ng/g. The method was successfully applied to analyze pangasius muscle samples from Vietnam available at the Brazilian retail market, and 5 out of 40 samples showed the presence of low-residue levels of enrofloxacin and, consequently, must be considered out of conformity. It is recommended that competent authorities should avoid the commercialization of pangasius fillet contaminated with residues of this veterinary drug COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPES FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP Fechado

Orientador: Paulo Anna Bobbio Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos e Agricola Resumo: Da mucilagem de "raquetes" da palma gigante (Opuntia fiaus indica, Mill.) foi obtido por extração aquosa um polissacarídeo. O produto purificado e eletroforeticamente homogêneo foi submetido a reações de hidrólise, metilação e oxidação com periodato de sõ dio para o estudo da sua estrutura. O peso molecular do polissacarídeo foi estimado por filtração em gel de Sephadex. Foi também estudada a viscosidade de soluções aquosas do polissacarideo e o efeito de sacarose, cloreto de sódio e do pH sobre a viscosidade. Com base nos resultados obtidos foi proposta uma estrutura possível para a "unidade básica" do polissacariedo Abstract: Aqueous extraction of the mucilage obtained from "palma gigante" (Opuntia ficus indica, Mill) yielded a polysaccharide which was purified to an electrophoretically homogeneous fraction. The purified polysaccharide was hydrolysed, exhaustively methylated and oxidized with sodium periodate. The molecular weight of the polysaccharide was determined by gel filtration on sephadex. Measurements were made of the viscosity of aqueous solutions of the polysaccharide and of the effect of sucrose, sodium chloride and different pH on their viscosities. A possible structure for the basic unit of the polysaccharide was suggested Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador : Felix Guillermo Reyes Reyes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A polpa de laranja, obtida como sub-produto na produto industrial do suco, foi caracterizada física e físico-quimicamente apresentando as seguintes características; granulometria de 8,9%, 52,9% e 38,3% para partículas maiores do que 800 µm, entre 200 e 500 µm e menores que 200 µm, respectivamente; densidade aparente de 0,46 g/ml; capacidade de hidratação de 3,61 gramas de água/grama de amostra; teor de fibra detergente neutro (FDH) de 32,2% e teor de substâncias pécticas de 38,9%. Em ensaio biológico, utilizando-se ratos Wistar machos, adultos, normais e diabéticos observou-se redução (p < 0,05) da glicemia durante o teste de tolerância k glicose nos animais normais (60 minutos) e diabéticos (80 e 90 minutos) que receberam 10 mg/ml do material fibroso. Em outro ensaio, ratos foram alimentados, durante 40 dias, com dietas contendo 0% (controle), 10% e 25% da polpa de laranja, respectivamente N, NF10 e NF25 para os grupos normais e D, DF10 e DF25 para os grupos diabéticos. Com relação aos animais normais, verificou-se redução (p< 0,05) da ingestão alimentar no grupo HF25 devido, provavelmente, a diminuição da taxa de esvaziamento gástrico e a um aumento da saciedade em função da distensão estomacal provocada pelo maior tempo de retenção do alimento. Observou-se, ainda para o grupo NF25 em relação ao grupo H, redução (p < 0,05) do ganho de peso corporal como resultado não só da menor ingestão alimentar como também da redução da Digestibilidade aparente da proteína da dieta (Da) e do Quociente de Eficiência Protéica (PER.op) proporcionada pela ingestão do material fibroso. A ingestão da polpa de laranja causou, tanto nos animais normais como nos diabéticos com p < 0,05, redução do tempo de trânsito intestinal, aumento da freqüência de defecação, aumento do peso e volume fecal, alterações estruturais nas vilosidades intestinais e descamação celular da mucosa dos intestinos delgado e grosso. Esses efeitos contribuíram para o aumento da excreção de gordura fecal, tendo como conseqüência direta a redução do teor de colesterol plasmático. Diferentemente dos animais normais, a ingestão da polpa de laranja pelos animais diabéticos induziu ganho de peso corpóreo como resultado do aumento do Balanço de Nitrogênio (BN), do Valor Biológico aparente da proteína (VBa.op), da Utilização Liquida da Proteína (NPU.op) e dos teores de nitrogênio muscular total e não colágeno; foram também verificados aumento do teor de glicogênio hepático e redução dos níveis plasmáticos de glicose e uréia, atenuando os aspectos fisiopatológicos característicos do diabetes, tais como hiperfagia, polidipsia e poliüria. A menor mobilização das reservas energéticas endógenas dos grupo3 DFÍÜ e, principalmente, DF25 permitiu que se verificasse maior peso absoluto dos músculos gastrocnêmicos (não significativo) e da gordura perirrenal (p < 0,05), em relação ao grupo D. Ao final do período experimental os anirnai3 diabéticos também apresentaram redução dos teores plasmáticos de colesterol e triacilgliceròis como reflexo da maior excreção de gordura fecal. Tal fato deveu-se, provavelmente, a redução da biodisponibilidade da gordura da dieta em função dos efeitos da polpa de laranja sobre a morfologia e motilidade intestinal. Em geral, os resultados obtidos indicam que a ingestão da polpa de laranja poderá auxiliar na terapia do diabetes. Abstract: The chemical composition and some physico-chemical characteristics of orange pulp, a by-product obtained during the industrial production of the orange-juice, were determined. Among these, the particle size distribution was found to be 8.9%, 52.8% and 38.3% for particle sizes larger than 800 µm, between 200 and 500 µm and smaller than 200 µm, respectively; the density 0.46 g/ml; the water binding capacity 3.61 g water/g orange pulp; the neutral detergent fiber (HDF) 32,2% and the proportion of the pectic substances 33.9% Using male Wistar rats, adult, normal and diabetic, a reduction was observed, by the glucose tolerance test, (p < 0.05) in the glycaemia of the normal {80 minutes) and diabetic (60 and 90 minutes) rats that received 10 mg/ml of the orange pulp. Eats were fed during 40 days with diets containing 0% (control), 10% and 25% of the orange pulp, respectively. The three groups of normal rats were designated N, HF1G and MF25, respectively, and the diabetic ones D, DF10 and DF25, As to the normal rats, a reduction (p < 0.05) of food ingestion was observed in the NF25 group probably because of a decrease in gastric emptying rate and an increase in satiety due to the stomach distension caused by the higher stomach retention time of the feed. A reduction (p < 0.05) of body weight gain as result of decrease in food ingestion and lower Apparent Nitrogen Digestibility (AD) and Protein Efficiency Ratio (PER.op) values, was also observed for the NF25 group in relation to the H group, and was probably caused by the ingestion of fibrous material. The orange pulp ingestion induced in both the normal and the diabetic rata, a reduction (p < 0.05) in the intestinal transit time, an increase in the defecation frequency, fecal weight and fecal bulk, and also structural changes in the intestinal villus together with cellular damage of the mucosa of the small and large intestine. These effects increase the excretion of fecal fat thereby reducing the plasma cholesterol level. Orange pulp ingestion by the diabetic rats, unlike ingestion by the normal rata, induced increase body weight as result of higher values for the Nitrogen Balance (HB), Apparent Biological Value (ABV.op), Nitrogen Protein Utilization (NPU.op), Protein Efficiency Ratio (PER.op), total muscular nitrogen and not collagen nitrogen levels. Higher hepatic glycogen and lower post-prandial plasma glucose and urea concentrations were also observed, minimizing the physiopathological aspects such as polyuria, polydipsia and polyphagia of the diabetes, The smaller mobilization of the endogenous energetical reserves of the group DF10, and BF25 in particular, resulted in higher absolute weight of the gastrocnemius muscles (not significant} and peri-kidney fat (p < 0.05) in relation to the D group. At the end of the experimental period the diabetic rata also showed a reduction in plasma triglycerides and plasma cholesterol, as result of higher fecal fat excretion. This effect was probably due to a reduction in the bioavailability of the diet fat as a result of the orange pulp effects on morphology and intestinal motility. To conclude: orange pulp ingestion may be used in the therapy of diabetes. Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Antimicrobianos como fungicidas e/ou bactericidas têm sido utilizados para a melhoria da qualidade de produtos vegetais destinados à alimentação humana ou para sua maior produtividade em várias fases de sua obtenção, tais como: preparo do solo, crescimento, colheita, industrialização e comercialização. Entretanto, vários destes compostos podem permanecer como resíduos nos alimentos consumidos, e, dependendo de sua toxicidade e nível de exposição, podem apresentar risco à saúde do consumidor. Entre estas substâncias estão os agentes antimicrobianos usados para combater ou prevenir o aparecimento de alterações de origem microbiana no alimento. O desenvolvimento de métodos analíticos para a identificação e quantificação destes agentes em produtos vegetais é de grande interesse, uma vez que a exposição crônica em baixos níveis antimicrobianos pode promover a resistência bacteriana a antibióticos, assim como reações alérgicas. Dessa forma, o presente trabalho objetivou desenvolver metodologia para o isolamento, identificação e quantificação de resíduos de oxitetraciclina em tomate, o qual é muito sensível a bacterioses, assim como comparou os níveis residuais encontrados nos frutos de cultura protegida (estufa) e cultura de campo. A metodologia analítica desenvolvida foi aplicada na análise de tomates comercializados na região de Campinas/SP e Alfenas/MG. Os dados obtidos foram comparados com os limites máximos de resíduos (LMRs) e os intervalos de segurança estabelecidos pela legislação brasileira em condições de plantio no campo. Foi validado, ainda, um método para quantificação dos antibióticos oxitetraciclina e estreptomicina em formulações para uso agrícola utilizadas para tratamento de tomates Abstract: Antimicrobials as fungicides and/or bactericides have been used for the improvement of the quality of vegetal products destined to the human feed and for its higher productivity in some phases of its cultivation, such as: preparation of the ground, growth, harvest, industrialization and commercialization. However, several of these compounds can remain as residues in consumed foods, and, depending on its toxicity and level of exposure, they can present a risk to the health of the consumer. Among these substances are the antibiotics used to combat or to prevent the appearance of alterations of microbial origin in the food. The development of analytical methods for the identification and quantification of these agents in vegetal products is of great interest, once the chronic exposure to low levels of antimicrobials can promote bacterial resistance to the antibiotics, as well as allergic reactions. Therefore, the present study aimed to develop a methodology for the isolation, identification and quantification of residues of oxytetracycline in tomato, which is very sensible to bacterioses, as well as was compared the residual levels found in fruits cultivated in greenhouse and open field. The developed analytical methodology was applied in the analysis of tomatoes purchased in the region of Campinas/SP and Alfenas/MG. The obtained data were compared with the maximum residue limits (MRLs) and the intervals of security established by the Brazilian legislation in conditions in the field. It was validated a method for quantification of antibiotics oxytetracycline and streptomycin in agricultural formulations used for treatment of tomatoes Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador : Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Mestrado Ciência de Alimentos Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador : Felix Guilhermo Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O resíduo fibroso de milho, obtido corno subproduto na produção de flocos de milho, foi caracterizado quimicamente, avaliado em termos nutricionais e fisiológicos e utilizado no preparo de biscoitos com alto teor de fibra. Esse resíduo apresentou um teor de 72,7% de fibra detergente neutro, baixa densidade aparente (0,44 g/ml) e alta capacidade de hidratação (5,3 ml de água/g de amostra). Utilizando-se ratos Wistar e dietas contendo 1,1% (controle): 5,7% e 11,5% de fibra detergente neutro, proveniente do resíduo fibroso de milho, observou-se um decréscimo no ganho de peso dos animais e na Digetibilidade Aparente da proteína, um aumento no peso fecal e nenhuma alteração significativa com relação ao Valor Biológico Aparente da proteína e a Utilização Líquida da Proteína (NPU), com o aumento do consumo de fibra. Quanto ao ganho de peso, as diferenças foram significativas, ao nível de 5%, entre os grupos de ratos que consumiram l,1 e 11,5% de fibra detergente neutro, enquanto que para a Digestibilidade Aparente da proteína e para o peso fecal foram significativas, ao nível de 5%, entre os três grupos estudados. Observou-se ainda, através deste ensaio, que o grau de digestibilidade da fibra do resíduo fibroso foi em torno de 47%. O aumento do teor de fibra na dieta de 1,2% para 13,1% provocou nos ratos um decréscimo na absorção de ferro, zinco, magnésio e cálcio em torno de 50%, 22%, 11% e 8%, respectivamente. Quanto ao Tempo de Trânsito Intestinal Inicial dos ratos observou-se valores de 14,29 h, 7,50 h e 6,19 h. para os animais que consumiram dietas contendo 0.8%: 4.9% e 10.7% de fibra detergente neutro. respectivamente. Com a finalidade de se obter um produto com alto teor de fibra foram preparados biscoitos utilizando-se o resíduo fibroso de milho, chegando-se a uma formulação com 23,3% de fibra detergente neutro, em base seca, sendo que os biscoitos, quando avaliados sensorialmente, apresentaram boa aceitação. Os biscoitos foram testados por indivíduos portadores de constipação intestinal crônica. propiciando aumento na freqüência de evacuações no peso fecal e nos teores de umidade e fibra detergente neutro das fezes. Esses resultados indicam que os biscoitos com alto teor de fibra de milho podem auxiliar o tratamento da constipação intestinal crônica Abstract: The fibrous residue of corn, obtained as a byproduct in the production of corn flakes, was chemically caracterized and evaluated in terms of nutritional and physiological value, and utilized in the preparation of biscuit with high fiber content. This residue contained 72.7% neutral detergent fiber, low aparent density (0.44 g/ml) and a high capacity of hydration (5.3 ml of water/g of sample). A decrease in weight gain of Wiatar rata and in the Apparent Digestibility of protein was observed when diets containing 1.1%; 5.7% and 11.5% of neutral detergent fiber, from corn residue were fed. Larger consumption of fiber resulted in increase in feces weight and no significant alteration in relation to the Apparent Biological Value of the protein and to the Net Protein Utilization (NPU). With respect to the weight gain the differences was significant between the groups of rats that consumed 1.1% and 11.5% of neutral detergent fiber, whereas the differences for Apparent Digestibility of protein and feces weight where significant among all the three groups studied. It was also observed that the degree of digestibility of the fiber was about 47%. Increase in the fiber content of the diet from 1.2% to 13.1% cause a decrease in the absorption of iron, zinc, magnesium and calcium of about 50, 22,11 and 8%, respectively. The Intestinal Transit Time in the rats was significantly shorter as the consumption of the fiber increased. Biscuits prepared with 23.3% washed corn fiber (NDF), showed good acceptance by sensory evaluation in the laboratory. The biscuits were tested in individuals with chronic intestinal constipation, and produced an increase in the frequency of the evacuations, in the fecal weight, and in the moisture and neutral detergent fiber content in feces. These results suggested that the biscuit with high fiber content could be used in the treatment of the chronic intestinal constipation Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Neste estudo foi realizada a avaliação do efeito, na respiração mitocondrial, dos seguintes corantes orgânicos sintéticos artificiais, de uso permitido em alimentos no Brasil: Eritrosina, Ponceau 4R, Vermelho 40, Amarelo Crepúsculo, Amarelo de Tartrazina, Azul de Indigotina, Azul Brilhante e Amaranto, assim como dos corantes: Laranja GGN, Escarlate GN e Vermelho Sólido E. Utilizando-se mitocôndrias isoladas de fígado e de rim de ratos Wistar, verificou-se que estes corantes inibiam a respiração mitocondrial comprovada pelo decréscimo da velocidade de consumo de oxigênio no estado III, desacoplado. Após a verificação deste efeito "in vitro", foi selecionado o corante Eritrosina, para a avaliação "in vivo" de seu efeito na função respiratória mitocondrial. Para tanto, foram utilizados ratos Wistar, machos e fêmeas, submeti dos durante noventa dias, a diferentes ingestões hídricas contendo Eritrosina nas concentrações de, aproximadamente, 0, 100, 500 e 1000 mg de corante par kg de peso corpóreo medi o das ratos de cada grupo. Não foram verificadas diferenças significativas, a nível de 5%, no ganho de peso dos animais, nem efeitos na sua função respiratória mitocondrial hepática. Ao termino do estudo de 90 dias, foi procedida uma avaliação anatomo-histológica dos sistemas digestivo, respiratório, urinário e linfóide, sendo os tecidos fixados e preparados histologicamente segundo técnicas de rotina. O exame anatômico dos órgãos não demonstrou alteração significativa, com exceção da dilatação do ceco dos animais que ingeriram Eritrosina, independente da dose. A observação dos órgãos ao Microscópio Óptico não revelou ocorrência de anomalias. Com exceção do baço, não foi verificada diferença estatisticamente significativa, à nivel de 5%., no peso relativo dos órgãos estudados: fígado, rins e bexiga Abstract: Eleven organic synthetic dyes currently or formerly permitted as food colors in Brasil were tested to determine their effect on mitochondrial respiratory function using mitochondria isolated from rat liver and kidney. It was verified that these dyes inhibit the mitochondrial respiration by afecting the oxygen uptake rate on state III, in the presence of both a-ketoglutarate and succinate. Erythrosine was selected to investigate this effect, "in vivo". For this purpose, the compound was administrated, on the water, to Wistar rats, male and female, during ninety days at dose levels of , approximately, 0, 100, 500 and 1000 mg/ kg b. w. No significative difference was observed on body weight gain and no effect was found on the hepatic mitochondrial respiratory function of the animals. At the end of the sub-chronic study macroscopic examination of the following animals systems was performed; digestive, respiratory, urinary and 1infoid. The only abnormality observed was enlargement of the caecum of those animals submitted to ingestion of Erythrosine, The organs were also submitted to histological examination according to routine procedures, and their observation at the Optic Microscope revealled no tissular abnormalities. With exception of the spleen of the male rats , no significative difference, at 5% level , was found on the relative organs weight studied (liver, kidneys and bladder) Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientadores: Felix G. Reyes Reyes, Susanne Rath Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Mestrado

Orientador : Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: : Filmes de policloreto de vinila (PVC) plastificados com di-2-etil hexil ftalato (DEHP) foram expostos ao simulante de alimento gorduroso isooctano, para a obtenção das curvas de migração do plastificante. As influências da temperatura e da concentração de DEHP no processo de migração foram estudadas, utilizando-se cinco amostras de filme com teores da DEHP iguais a 19,3, 22,4, 32,6 e 38,4% (p/p) a temperaturas de 5, 20 e 40 ºC. Os filmes foram caracterizados pelas suas medidas de gramatura e espessura e pelos seus espectros de infra-vermelho. A identificação e quantificação do plastificante foram realizadas por cromatografia gasosa com detector de captura de elétrons. Verificou-se que a temperatura exerceu forte influência no processo de migração nas amostras de PVC com teores de DEHP inferiores a 30%. Nestas amostras, a migração foi significativamente reduzida com a diminuição da temperatura. Amostras contendo teores de DEHP maiores do que 30% apresentaram migração elevada tanto a 5 ºC como a 40 ºC. Nestas amostras, teores de 80 a 90% (p/p) de DEHP foram extraídos após as primeiras 24 horas de contato com o isooctano. Em geral, os dados obtidos sugerem o isooctano como um solvente promissor para os estudos da migração de plastificantes do PVC Abstract: Di-(2-ethyl)hexyl phthalate (DEHP) plasticized polyvinyl chloride (PVC) films were exposed to a fatty food simulant, isooctane, in order o obtain plasticizer migration curves. The temperature and the concentration influences in migration process were studied, employing five films samples with contents of 19.3, 22.4, 30.1, 32.6 and 38.4% (w/w) of DEHP and temperatures of 5, 20 and 40 ºC. The films were characterized by their basic measures of weight. (indicated in grams per square meter), thickness and their infra-red spectra. The plasticizer was identified and quantified by gas chromatography with an electron capture detector. It was observed that the temperature strongly influenced the migration process in the PVC samples containing less than 30% of DEHP. In these samples, the migration was markedly reduced as the temperature was decreased. Samples that contained more than 30% of DEHP showed high migration at 5 ºC and at 40 ºC, and 80 to 90% of the DEHP was leached during the first 24 hours contact with the isooctane. In general, the results suggest that isooctane is a promising solvent simulant for fatly foods. in migration studies of PVC plasticizers Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador : Felix Guilhermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: No presente trabalho foi desenvolvido um procedimento analítico para a identificação e quantificação de N-nitrosaminas voláteis em bacon e lingüiça, utilizando-se cromatografia gasosa acoplada a um detector termoiônico sem chama - nitrogênio-fósforo específico (CG-DNP). Características de resposta deste detector, tais como: linearidade, reprodutibilidade e limite de detecção, foram determinadas para nitrosodimetilamina (NDMA), nitrosodietilamina (NDEA), nitrosodipropilamina (NDPA) e nitrosopirrolidina (NPIR). As nitrosaminas foram extraídas por diclorometano a partir de amostras de bacon e lingüiça, colocadas em coluna de celite. Os extratos obtidos desta coluna, em ambos os tipos de amostras, foram de pureza insuficiente para o detector DNP sendo, portanto, necessária a sua purificação prévia à injeção no cromatógrafo. Com esta finalidade, colunas de sílica gel e alumina foram testadas, sendo que a efetividade da primeira coluna foi superior á de alumina. Com o propósito de diferenciar nitrosocompostos de outros compostos presentes nas amostras, foi estudada a velocidade de decomposição fotoquímica, das nitrosaminas, por irradiação com luz ultravioleta. Isso também permitiu a confirmação destes nitrosocompostos. Cromatografia gasosa ¿ DNP foi utilizada no estudo da fotodecomposição. Um método alternativo utilizado para a identificação dos mesmos compostos foi cromatografia em camada delgada. A recuperação e reprodutibilidade do método na quantificação de NDMA e NPIR foram determinadas utilizando-se como padrões internos NDEA e NDPA. Os teores de NDMA e NPIR determinados em quatro amostras de bacon variaram na faixa de 19 a 5l µg/kg (ppb), teores estes frequentemente encontrados neste tipo de amostra. Abstract: The information presented in this thesis covers research findings on the development of an analytical procedure for the analysis of volatile nitrosamines in bacon and sausage, using gas chromatography equiped with a Nitrogen.Phosphorous Thermoionic Detector (GC-NPD). Characteristics of the detector such as: re¬producibility, linearity and limit of detection were determined for N-nitrosodimethylamine (NDMA), N-nitrosodiethylamine (NDEA), N-nitrosodipropylamine (NDPA) and N-nitrosopyrrolidine (NPYR). The nitrosamines from bacon and sausage were extracted from a celite column using dichloromethane. Since the extracts from this column were hot sufficiently pure for the NPD detector, they were purified using silica gel or alumina columns. The effectively of the silica gel column was superior to that of the alumina column. In order to differentiate Nitrosocompounds from other compounds present in the samples the velocity of photodecomposi¬tion of the nitrosamines using UV light was studied. This also allowed us to confirm the identity of these nitrosocompounds. GC-NPD was used in this study. Thin layer chromatography was used as an alternative method for the identification of the nitrosamines. NDEA and NPYR were used as internal standards in the evaluation of the recovery and reproducibility of the method for the quantitation of the NDMA and NPYR. The concentrations of NDMA and NPYR determined in four samples of bacon were within those values frequently found for this type of samples, and varied from 19 to 51 µg /kg (ppb). Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Licio Augusto Velloso Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Vários estudos têm demonstrado que o magnésio desempenha papel importante na homeostase glicêmica. Assim, no presente trabalho foi avaliado o efeito da deficiência de magnésio, da sua duração e da interação entre estes dois fatores na secreção e ação da insulina. Ratos foram alimentados com dieta deficiente em magnésio durante 6 (DF-6) ou 11 (DF-11) semanas e comparados com ratos alimentados com dieta controle durante os mesmos períodos de tempo (CO-6 e CO-11). Os ratos dos grupos DF-6 e DF-lI apresentaram níveis de magnésio sérico mais baixos do que os CO-6 e CO-lI, porém a homeostase glicêmica entre os grupos DF-6, CO-6 e CO-II não foi diferente. Os animais do grupo DF-lI apresentaram maior velocidade de decaimento da glicose (Kg) e redução da área total sob a curva de glicose, quando comparados aos animais dos grupos CO-6, CO11 e DF-6, assim como menor área total sob a curva de insulina quando comparados com os ratos CO-II e DF-6, indicando um aumento da sensibilidade à insulina. Com a finalidade de avaliar o efeito da suplementação de magnésio, ratos alimentados com dieta controle ou com dieta deficiente durante 6 semanas receberam, ao final desse período e durante 5 semanas adicionais, uma dieta suplementada com magnésio (grupos SCO e SDF, respectivamente). No grupo SDF os níveis de magnésio sérico, a velocidade de decaimento da glicose e áreas totais sob as curvas de glicose e insulina, não foram significativamente diferentes daqueles apresentados pelo grupo CO-lI, indicando que a suplementação com magnésio evitou o aumento da sensibilidade à insulina. Não foi verificada diferença na velocidade de decaimento da glicose (Kitt) durante o teste venoso de tolerância à insulina, assim como na sinalização da insulina no músculo e figado dos grupos DF-6 e CO-6. Entre os grupos alimentados durante 11 semanas, o DF-lI apresentou maior velocidade de decaimento da glicose, enquanto que este mesmo parâmetro nos grupos SDF e SCO não se diferenciou dos ratos CO-II. Nenhuma diferença foi observada na sinalização da insulina no músculo dos animais dos grupos CO-11, DF-lI e SDF. No figado de ratos DF-11, o nível protéico e o grau de fosforilação do receptor de insulina e do substrato-I desse receptor apresentaram-se aumentados, assim como verificou-se maior associação entre o substrato-I do receptor e a subunidade p85 do fosfatidilinositol 3-quinase, quando comparados com ratos CO-II. Nenhuma diferença foi encontrada nas etapas iniciais da ação da insulina nos grupos SDF e CO-ll. Estes resultados sugerem que as mudanças nas etapas iniciais da transmissão do sinal insulínico no figado, induzidas por diferentes níveis séricos de magnésio, podem ter um papel fundamental na homeostase glicêmica Abstract: Numerous studies have demonstrated a major role for magnesium in insulin action and secretion. Therefore, we investigated the effect ofMg deficiency, duration of feeding, and the interaction between these factors on the secretion and action of insulin. Rats fed a Mgdeficient diet for 6 (DF-6) or 11 (DF-lI) weeks, and rats fed a control diet for the same periods (CO-6 and CO-ll groups) were compared. DF-6 and DF-lI rats had serum Mg levels lower than the control groups, but no change in glucose homeostasis was observed among DF-6, CO-6 and CO-II rats. DF-lI rats showed a greater glucose desappearance rate (Kg) and a reduced total area under the glucose curve compared to CO-6, CO-II and DF-6 rats, as well as a reduced total area under the insulin curve compared to the CO-ll and DF-6 rats, indicating increased sensitivity to insulin. In order to evaluate the effect of supplementation, rats fed a control or Mg-deficient diet for 6 weeks were then fed a Mgsupplemented diet for 5 weeks (SCO and SDF groups, respectively). In the SDF rats, the serum Mg levels, glucose disappearance rate and total area under the glucose and insulin curves were restored to control values, indicating that the Mg supplementation prevented the increase in sensitivity to insulin. No differences were found in the glucose desappearance rate during an i. v. insulin tolerance test (Kitt), as well as in the insulin signaling in muscle and liver ITom DF-6 and CO-6. Among the groups of rats fed for 11 weeks, the DF-ll group had a significantly greater glucose desappearance rate while the rate of the SDF and SCO groups did not differ ITom CO-II rats. No differences were observed in muscle insulin signaling of rats ITom the CO-ll, DF-lI and SDF. In DF-ll rats, insulin receptor and insulin receptor substrate-I protein and phosphorylation levels were elevated in liver and there was a greater association between the insulin receptor substrate-I and p85 subunit of phosphatidylinositol 3-kinase compared with CO-II rats. No diferences were found in the early steps of insulin action in SDF and CO-II rats. These results suggest that the changes in the early steps of insulin signal transduction in the liver, induced for different serum Mg levels, may play an important role in the glucose homeostasis Doutorado Fisiologia Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Patrícia Aparecida de Campos Braga Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A ocorrência de resíduos de antiparasitários em matrizes biológicas, em concentrações acima do Limite Máximo de Resíduos (LMR) estabelecidos pelo Codex Alimentarius, pode ocorrer quando não se aplicam as Boas Práticas de Uso de Medicamentos Veterinários. Em particular deve se levar em consideração as especificações de uso como dose, período de tratamento e período de carência. Também, o conhecimento da dimensão da exposição da população a esses compostos é de fundamental importância para direcionar as ações de vigilância sanitária por parte dos órgãos governamentais responsáveis pela proteção da saúde do consumidor. Para isto, é fundamental a disponibilidade de métodos analíticos que apresentem seletividade e detectabilidade adequadas. Dentre os diversos antiparasitários utilizados no tratamento de animais produtores de alimentos destinados ao consumo humano, a moxidectina (MOX) recebe destaque, pois é um fármaco de largo espectro de ação contra endo e ectoparasitas e tem sido utilizado em todo país. Assim, o presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e validação de um método analítico para determinação de resíduos de MOX em tecidos de cordeiros (músculo, fígado, rim e gordura) através da técnica de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS). O método foi validado levando em consideração os critérios de validação de métodos analíticos utilizados em estudos de resíduos de fármacos veterinários, bem como em estudos de depleção, que foram estabelecidos pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), União Europeia (UE) e da Cooperação Internacional para a Harmonização dos Requisitos Técnicos para o Registo de Medicamentos Veterinários (VICH). O preparo de amostra por QuEChERS garantiu seletividade adequada ao método analítico e, de acordo com os guias de validação adotados, o método mostrou-se adequado para o propósito pretendido. A quantificação do analito nas amostras foi realizada a partir de curvas analíticas construídas pela fortificação das matrizes biológicas isentas do analito, sendo possível estabelecer limite de quantificação (LOQ) de 5 ng g-1 e limite de detecção (LOD) de 1,5 ng g-1 para todas as matrizes. O método validado foi aplicado na quantificação de MOX em tecidos de cordeiros provenientes de um ensaio de depleção de resíduos. Após o período de carência foi verificada nos tecidos muscular, hepático, renal e adiposo, a presença de MOX, porém em concentrações inferiores ao LMR estabelecido de 50 ng g-1, 100 ng g-1, 50 ng g-1 e 500 ng g-1, respectivamente. Assim, conclui-se que o consumo desses alimentos não representa risco à saúde humana quanto a presença de resíduos de MOX Abstract: The occurrence of antiparasitic residues in biological matrices at levels above the Maximum Residue Limit (MRL) established by the Codex Alimentarius can occur when not applied the Good Veterinarian Practices for Use of Medicinal Products. In particular, specifications of use such as dose, treatment period and withdrawal period should be taken into account. Also, knowledge of the population exposure dimension to these compounds is of fundamental importance to implement sanitary surveillance actions by the governmental agencies responsible for the consumer health protection. For this purpose, the availability of analytical methods which have appropriate selectivity and detectability is required. Among several antiparasitic drugs used in the treatment of animals intended for production of food for human consumption, moxidectin (MOX) gets great importance because it is a drug of wide spectrum of action against endo and ectoparasites, which has been widely used throughout the country. Thus, this study aimed the development and validation of an analytical method by liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS/MS) for the determination of MOX residues in lamb tissues (muscle, liver, kidney and fat). The method was validated taking into consideration the criteria for the validation of analytical methods used in veterinary drug residue studies, as well as in depletion studies, that have been established by the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the European Union (EU) and the International Cooperation on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Veterinary Medicinal Products (VICH). The sample preparation by QuEChERS methodology ensured adequate recovery of MOX, and according to the guidelines adopted the method was reliable for the intended purpose. In order to quantify the analyte, matrix-matched calibration curves were constructed by spiked blank tissues, being possible to reach a limit of quantitation (LOQ) of 5 ng g-1, and limit of detection (LOD) of 1.5 ng g-1 for all matrices. The validated method was applied in the quantification of MOX in tissue samples from a residue depletion study. After the withdrawal period, in the muscle, liver, kidney and fat tissues it was verified the presence of MOX residues, however in concentrations lower than the established MRL of 50 ng g-1, 100 ng g-1, 50 ng g-1 and 500 ng g-1, respectively. Thus, the consumption of these foods does not represent a risk to human health with regard the presence of MOX residues Doutorado Ciência de Alimentos Doutora em Ciência de Alimentos CNPQ 141964/2012-0

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Susanne Rath Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Sulfonamidas e fluoroquinolonas são fármacos veterinários amplamente utilizados na produção aviária para prevenção e tratamento de doenças e, quando não respeitadas as boas práticas veterinárias, resíduos desses fármacos podem ser encontrados acima dos limites máximos de resíduos podendo representar risco à saúde dos consumidores. Sendo o ovo uma matriz biológica complexa, quantidades significativas de interferentes podem prejudicar a determinação dos analitos de interesse por cromatografia líquida, especialmente resíduos de fármacos veterinários, que se encontram em níveis na ordem de ng g-1. Entre as diversas técnicas de preparo de amostras capazes de eliminar interferentes e concentrar o analito de interesse, a extração em fase sólida (SPE) se destaca pela sua eficiência, robustez, seletividade e baixo consumo de solventes. Ainda assim, devido à complexidade da matriz e a baixa concentração dos analitos, o estabelecimento de métodos de preparo de amostras com seletividade na remoção de interferentes e eficiência de extração adequados ainda é um desafio na análise de resíduos. Desta forma, afim de se contornar as limitações da SPE convencional, esta tese teve como objetivo avaliar a aplicação de potencial elétrico em SPE (E-SPE) para a determinação de resíduos de sulfonamidas e fluoroquinolonas em ovos por cromatografia líquida de alta (HPLC) e ultra eficiência (UHPLC) associada à detectores por arranjo de fotodiodos (DAD), fluorescência (FLD) ou espectrômetro de massas sequencial (MS/MS). Os parâmetros de E-SPE foram avaliados de forma a obter a melhor condição no preparo de amostras e o método para a determinação de resíduos de sulfonamidas e fluoroquinolonas em ovos por E-SPE UHPLC-MS/MS foi avaliado em relação a linearidade, precisão, exatidão, além dos efeitos de supressão ou incremento de sinal analítico (efeito matriz) Abstract: Sulfonamides and fluoroquinolones are veterinary drugs widely used in the poultry production for the prevention and treatment of diseases and, when good veterinary practices are not observed, residues of these drugs can be found above the maximum residue limit and may represent a risk to the consumers health. Since egg is a complex biological matrix, significant amounts of interferents can hinder the determination of analytes by liquid chromatography, particularly residues of veterinary drugs, which are at levels in the order of ng g-1. Among the various sample preparation techniques capable to eliminate interferences and concentrate the analyte of interest, the solid phase extraction (SPE) stands out for its efficiency, robustness, selectivity and low solvent consumption. Nevertheless, due to the complexity of the matrix and the low concentration of the analytes, the establishment of sample preparation methods with selectivity in removing interferents and appropriate extraction efficiency is still a challenge in residue analysis. Thus, in order to overcome the limitations of conventional SPE, this thesis aimed to evaluate the application of electrical potential in SPE (E-SPE) for the determination of sulfonamides and fluoroquinolones residues in eggs by high efficient (HPLC) and ultra efficient (UHPLC) performance liquid chromatography associated with a photodiode array (DAD), fluorescence (FLD) or sequential mass spectrometer (MS/MS) detectors. The E-SPE parameters were evaluated to obtain the best condition for sample preparation and the method for the determination of sulfonamides and fluoroquinolones residues in eggs by E-SPE UHPLC-MS/MS was evaluated for linearity, precision, accuracy, in addition to the effects of suppression or increase of the analytical signal (matrix effect) Doutorado Ciência de Alimentos Doutora em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A aquicultura é um sistema de produção agropecuário que mais cresce no mundo e apresenta grande potencial de expansão. Dentre os sistemas de provimento de alimentos protéicos, é o que apresenta maior potencial de expansão, e com alto valor nutritivo. O Brasil apresenta elevado potencial para expansão da aquicultura: uma costa litorânea de 8,4 mil quilômetros, 5,5 milhões de hectares de reservatórios de águas continentais, clima favorável, terras disponíveis, mão de obra abundante e crescente mercado interno. Dentre as espécies com potencial produtivo, destaca-se o tambaqui (Colossoma macropomum), que atualmente é a segunda espécie de peixe de águas continentais mais criada no Brasil, e é a espécie nativa da região amazônica com maior expressão produtiva. Em pisiculturas intensivas, maximizan-se os recursos produtivos com o aumento do adensamento populacional favorecendo a difusão de doenças entre os animais. Estudos para o efetivo e correto tratamento de enfermidades que acometem os peixes em sistemas intensivos de produção, são de elevada importância. No Brasil, existem unicamente dois fármacos aprovados para utilização na aquicultura, são eles o florfenicol e a oxitetraciclina. O florfenicol (FF) é um antimicrobiano da família dos anfenicóis, que apresenta amplo espectro de ação, sendo muito eficaz no tratamento de infecções bacterianas. Sua utilização no Brasil é aprovada para tilápias (Oreochromis niloticus) e trutas (Oncorhynchus mykiss), sendo necessário a realização de estudos para utilização em espécies nativas. Assim, este trabalho contribui com o desenvolvimento e expansão da aquicultura no país, através do estudo da farmacocinética e depleção de resíduos do FF em tambaqui, após sua administração via ração medicada. O perfil farmacocinético foi obtido pela administração de FF em dose única (21,0 mg/kg de peso vivo - pv), através da ração, e posterior análise do plasma dos animais. O período de depleção foi determinado pela administração de FF, simulando o tratamento da doença, sendo administrado 10 mg/kg de pv, por 10 dias, e posterior análise do músculo dos animais. Foram desenvolvidos e validados métodos analíticos para determinação de FF na ração medicada e de FF e de seu metabólito, o florfenicol amina (FFA), no plasma e músculo. Pode-se concluir que para o tambaqui, o FF apresentou potencial para tratamento das principais bacterioses que acometem a espécie, e que o período de carência após 10 dias de tratamento, foi menor do que 24 horas Abstract: Aquaculture is a system of production that has been growing considerably throughout the entire world. Among the systems of providing protein-based food, it is the one that presents the highest potential for expansion, with high nutritional value. Brazil shows elevated potential for expansion in aquaculture: having a coastline of 8.4 thousand kilometer, 5.5 million hectares of inland water reserves, favorable weather conditions, available land, an abundance in laborers and a growing internal market. Among the species with potential production, the tambaqui (Colossoma macropomum) stands out. It is currently the second most raised inland water fish in Brazil, and is one of the native species to the Amazon region with the highest production expression. The intensive systems of production bring them the factor of proximity between the animals and a possibility of higher propagation of diseases among themselves. Studies about the effective and correct treatment of illnesses that affect the fish in intensive production are of elevated importance. In Brazil, only two drugs are approved for use in aquaculture, florphenicol (FF) and oxytetracycline. FF is a broad-spectrum antibiotic of the anphenicol family, which is very effective in the treatment of bacterial infections, mainly those that affect fish farms. Its use in Brazil is approved for tilapias and trouts. Thus, in order to use it on native species studies are necessary. Therefore, this study aimed to contribute to the development and expansion of fish farming in the country, through the study of the pharmacokinetics and depletion of FF residues in tambaqui, after its administration via medicated feed. The pharmacokinetic profile was obtained administering FF in a single dose (21 mg/kg body weight - bw), by the feed, and a posterior analysis of the animal¿s plasma. The depletion period was determined by administering FF, simulating the treatment of a disease, being administered 10 mg/kg bw, for 10 days, and a posterior analysis of the animal¿s muscles. It can be concluded that for the tambaqui, FF showed potential for the treatment of the main bacteria that attack the species, and that the withdrawal period, after 10 days of treatment, is less than 24 hours Doutorado Ciência de Alimentos Doutora em Ciência de Alimentos CAPES

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Jonas Augusto Rizzato Paschoal Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A aquicultura é um setor de produção de alimentos que apresenta grande crescimento em todo o mundo. O Brasil possui um alto potencial de expansão da atividade aquícola, com produção promissora de espécies exóticas como a tilápia (Oreochromis niloticus) e nativas como o pacu (Piaractus mesapotamicus) e o tambaqui (Colossoma macropomum),. Como em todo sistema intensivo de produção, o uso de medicamentos veterinários na produção aquícola se faz necessário para o controle e tratamento de doenças, visando garantir os rendimentos de produção esperados. Essas doenças podem ser causadas por parasitas, bactérias, fungos e vírus. Dentre os medicamentos mais utilizados estão os antimicrobianos, uma vez que as bacterioses são indicadas como um dos fatores principais de limitação da produção aquícola no mundo todo. Dentre os antimicrobianos comumente utilizados na aquicultura mundial destaca-se o grupo das fluoroquinolonas (FQ). O risco potencial da presença de resíduos de antimicrobianos nos produtos aquícolas é um assunto preocupante. Dentre os fatores de preocupação estão o uso irresponsável e não controlado, a falta de respeito às boas práticas veterinárias e carência de alternativas de medicamentos veterinários específicos para uso na aquicultura. Como consequência, tem-se a preocupação com a questão da resistência microbiana, assunto este muito discutido mundialmente, e que aflige e impacta tanto o próprio sistema de produção aquícola, como a saúde humana e o meio ambiente. Quando os resíduos dos antimicrobianos estão acima dos valores de limites máximos de resíduos (LMR) estabelecidos, passam a representar risco potencial à saúde do consumidor. Deste modo, o desenvolvimento de métodos analíticos para determinar os resíduos de fármacos veterinários presentes em produtos de origem animal se faz necessário. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um método para a determinação simultânea de resíduos de norfloxacina (NOR), danofloxacina (DAN), enrofloxacina (ENR) e ciprofloxacina (CIP) em filés de tilápia (Oreochromis niloticus) e de pacu (Piaractus mesopotamicus), utilizando a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS QToF). Para a validação analítica foram considerados os seguintes parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, efeito matriz, precisão intra-dia (com amostras fortificadas e amostras incorridas) e inter-dias, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação, limite de decisão e capacidade de detecção. Os resultados obtidos a partir da validação apresentaram conformidade com as recomendações dos guias de validação da Comunidade Europeia e do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, indicando que o método é apropriado para a determinação de FQ em filé de peixe. Nenhuma das amostras (n=31) adquiridas do comércio e analisadas pelo método validado apresentou resíduos de DAN, NOR, ENR e CIP em níveis detectáveis Abstract: Aquaculture is a food production sector that presents worldwide growth. Aquaculture activity in Brazil exhibits a high potential for expansion, that includes promising production of exotic as tilapia (Oreochromis niloticus) and native species pacu (Piaractus mesapotamicus) and tambaqui (Colossoma macropomum). As in every intensive production system, the use of veterinary drugs in aquaculture production is necessary for control and treatment of diseases, in order to guarantee the expected productivity. Those diseases can be caused by parasites, bacteria, fungi and viruses. Antibiotics are among the most widely used drugs, since bacterial diseases are listed as one of the main factors limiting the worldwide aquaculture production. The fluoroquinolones (FQ) antibiotic family is the most commonly used in aquaculture. The risk of the presence of antibiotics residues in aquaculture products is a matter of concern, the irresponsible and uncontrolled use of antibiotics, the disrespect to good veterinary practices, and the lack of alternatives of veterinary specific drugs for aquaculture use, are some of the matters of concern. As a consequence, it arises a current issue related to microbial resistance which may affect different areas such as aquaculture system, human health and the environment. Potential risk to the consumer health is presented when the antimicrobial residues in foods are above the established maximum residue limits (MRL). Therefore, it becomes necessary the development and validation of analytical methods in order to determine the veterinary drugs residues present in foods of animal origin. Thus, the objective of this work was to develop and validate a method for the simultaneous determination of norfloxacin (NOR), danofloxacin (DAN), enrofloxacin (ENR) and ciprofloxacin (CIP) residues in tilapia (Oreochromis niloticus) and pacu (Piaractus mesopotamicus) fillets, using liquid chromatography associated to mass spectrometry (LC-MS/MS QToF). To conduct the validation of the method the following parameters were considered: linearity, sensitivity, selectivity, matrix effect, intra-day (using spiked and incurred samples) and inter-day precision, accuracy, detection limit, quantification limit, decision limit and detection capability. The obtained results are in conformity with the guidelines recommendations from the European Community, and the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply, demonstrating that the method is suitable for the determination of FQ in fish fillet. None of the samples (n=31) acquired and analyzed by the validated method presented residues of DAN, NOR, ENR and CIP at detectable levels Mestrado Ciência de Alimentos Mestra em Ciência de Alimentos

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Marili Villa Nova Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Os antimicrobianos são aplicados mundialmente na tilapicultura para o tratamento de bacterioses, principais doenças que acometem esta espécie. Entre os antibióticos, a enrofloxacina (ENR), pertencente à família das quinolonas, é utilizada internacionalmente e tem demonstrado ser eficaz no tratamento de infecções bacterianas. No Brasil, seu uso na criação de peixes ainda não foi aprovado, mas o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) incluiu, em 2010, este fármaco no Plano Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes em Peixes (PNCRC). A ENR é biotransformada pelos animais à ciprofloxacina (CIP), composto este que apresenta atividade antimicrobiana e é utilizado na medicina humana. O processamento de alimentos tem mostrado ser um fator positivo para a segurança dos alimentos, devido à possível degradação de resíduos de antimicrobianos que poderiam causar o desenvolvimento de resistência em micro-organismos ou induzir efeitos adversos na saúde de seres humanos. Assim, é de grande importância, do ponto de vista da saúde pública e de conhecimento científico, conhecer o comportamento de resíduos de medicamentos veterinários nos alimentos quando submetidos ao processamento. O fishbúrguer, preparado com carne de tilápia, têm demonstrado elevada aceitação pelos consumidores. Isto reflete o novo estilo da vida em que os requisitos para a compra de um alimento incluem os benefícios nutricionais e também a conveniência de preparação. Para avaliar a diminuição dos níveis de resíduo de ENR e CIP presentes em filé de tilápia, durante processo de produção e fritura dos mesmos, torna-se necessário o desenvolvimento e validação de metodologia analítica que apresentem precisão, exatidão e sensibilidade para determinar este composto e seu metabólito. Portanto, os objetivos deste trabalho foram em filé de tilápia, bem como em um produto derivado, fishbúrguer, para avaliar a estabilidade dessas substâncias durante o processo de produção e fritura. Para este fim, um método simples, rápido e de baixo custo, utilizando LC-MS, foi desenvolvido e validado para a determinação simultânea de ENF e CIP. O preparo de amostra foi baseado na precipitação de proteínas com ácido tricloroacético, extração com acetonitrila e limpeza do extrato com hexano. A separação cromatográfica foi realizada em uma coluna C18. Para ambos os compostos, as curvas de calibração na matriz demonstraram linearidade superior a 0,99. O método foi seletivo, exato (91-100% de recuperação) e preciso (coeficientes de variação abaixo de 5%). Limites de detecção e quantificação foram, respectivamente, 3,5 e 10,4 µg/kg para ambos os compostos. Os valores calculados CCa e CCß foram, respectivamente, 107 e 114 µg/kg para ENR e 105 e 110 µg/kg para CIP (LMR estabelecido pela Comissão da UE é de 100 µg/kg para a soma de ENR e CIP). O método foi empregado para a determinação de resíduos de ENR e CIP em amostras de filés de tilápia obtidos a partir de peixes expostos a ENR (dose única de 40 mg/kg de peso corpóreo - administrado via ração). Os animais foram sacrificados após 4, 8 e 12 h de exposição. Resíduos acima do LMR foram encontrados mesmo após 12 h de administração do fármaco. A fim de avaliar a influência do processo de produção e fritura sobre os níveis residuais de ENR e CIP, fishbúrgueres foram preparados com filé de tilápias expostas a ENR. O método analítico para determinação da ENR e CIP no filé de tilápia foi adaptado e validado para a análise de fishbúrgueres antes e após fritura. Os métodos adaptados foram validados e mostraram-se linear, com coeficiente de correlação maior que 0,99, precisos (coeficiente de variação abaixo de 6%) e exatos (recuperação média de 90 a 106%). Foram analisadas amostras de fishbúrgueres (antes e após fritura) utilizando os métodos validados. Não foi verificada redução significativa dos níveis residuais da soma de ENR e CIP durante o preparo dos fishbúrgueres. No entanto, redução (p

Orientador: Felix Guillermo Reys Reys Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A presença de resíduos de medicamentos veterinários em níveis acima dos limites máximos (LMR) estabelecidos apresentam riscos à saúde humana. O conhecimento da dimensão da exposição da população a esses compostos é necessário para garantir a proteção do consumidor. Para tanto, é imprescindível que métodos de análise validados estejam disponíveis, para assegurar a confiabilidade dos resultados. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar métodos analíticos para a determinação de resíduos de estreptomicina e diidroestreptomicina em leite e empregá-los na análise de amostras comercializadas na região de Campinas, São Paulo. Os métodos analíticos desenvolvidos e validados incluem o ensaio imunoenzimático (ELISA) e a cromatografia líquida associada à espectrometria de massas em tandem (LCMS/MS QToF). A validação analítica foi realizada de acordo com as recomendações da Comunidade Européia e IUPAC. Os seguintes parâmetros foram avaliados: seletividade, curva analítica, linearidade, sensibilidade, precisão (repetibilidade intra e inter-dias), exatidão e limites de detecção e de quantificação. Os resultados do procedimento de validação dos métodos de ELISA e LC-MS/MS demonstraram que estes são adequados para a análise de triagem e confirmatória, respectivamente, de resíduos de estreptomicina e diidroestreptomicina em leite pasteurizado, em níveis de concentração inferiores ao LMR estabelecido para essas substâncias (200 µg kg-1). Nas amostras analisadas não foram encontrados resíduos de estreptomicina e diidroestreptomicina em níveis detectáveis Abstract: Veterinary drugs pose a risk to human health when there residual levels in foods exceed the maximum residue limit (MRL). Knowledge of the extent of human exposure to these compounds is necessary to provide consumer protection. To achieve this, it is essential that validated analytical methods are available to ensure reliable results. The aim of the present work was to develop and validate analytical methods for the analysis of streptomycin and dihydrostreptomycin residues in milk, and to employ these methods for analysis of samples marketed in the region of Campinas, São Paulo. The developed and/or validated methods include enzyme immunoassay (ELISA) and liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS QToF). Method validation was performed according to the recommendations established by European Community and IUPAC. The following parameters were evaluated: analytical curve, linearity, sensitivity, precision (intra and inter-day repeatability), accuracy and the detection and quantification limits. The results demonstrated the effectiveness of ELISA and LCMS/MS methods for trial and confirmatory analyses, respectively, of streptomycin and dihydrostreptomycin in milk at concentrations below the established MRL (200µg kg-1). In the analyzed samples streptomycin and dihydrostreptomycin were not found at detectable levels Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: As doenças cardiovasculares ocupam o primeiro lugar em causas de morte no mundo e, segundo pesquisas, estas podem estar associadas ao estresse oxidativo - desequilíbrio entre produção de radicais livres e defesas antioxidantes. O tratamento e prevenção não farmacológico, dessas doenças, preconizado pela Organização Mundial da Saúde (OMS), considerando os hábitos alimentares, consiste em aumentar o consumo de frutas, hortaliças, cereais integrais e grãos, devido as suas propriedades antioxidantes, assim como aos efeitos fisiológicos das fibras alimentares também presentes nessas fontes alimentares. Por outro lado, estudos mostram que algumas substâncias xenobióticas podem estar presentes nos alimentos, como por exemplo, os inseticidas piretróides, aumentando o risco do desenvolvimento ou agravamento de alterações cardiovasculares e, ao mesmo tempo, desestruturando as defesas antioxidantes e produzindo radicais livres nocivos às células, colocando em risco a saúde humana. É inquestionável a necessidade do uso de agrotóxicos na produção agrícola, em programas de saúde pública, na saúde animal, bem como na silvicultura. O não cumprimento da legislação em vigor tem sido uma realidade preocupante, pois coloca em risco a saúde dos trabalhadores que manipulam essas substâncias, as pessoas que consomem os alimentos e o ecossistema. Assim, pesquisas que dimensionem os efeitos adversos que os agrotóxicos podem causar na saúde humana, contribuem com o cumprimento da legislação específica e, até mesmo, na atualização da mesma. Este trabalho teve por objetivo avaliar a exposição aguda, por via oral, de deltametrina, agrotóxico da classe dos piretróides, na excitação e condução cardíaca e no estresse oxidativo em ratos Wistar machos adultos, através de parâmetros eletrocardiográficos e da atividade de enzimas antioxidantes nos tecidos cardíacos e hepáticos. O plano de trabalho consistiu na administração aguda, por gavagem, de deltametrina (DMT), com os animais distribuídos em 4 grupos, com 10 animais,pesando em média 200 ± 10g cada, assim constituídos: 1) Grupo controle (5 mL de óleo de milho); 2) Grupo DMT10 [10% do valor da DL50 da deltametrina (3,2 mg/5mL de óleo de milho)]; 3) Grupo DMT25 [25% do valor da DL50 da deltametrina (8 mg/5mL de óleo de milho)]; 4) Grupo DMT100 [100% do valor da DL50 de deltametrina (32mg/mL de óleo de milho)]. No início do ensaio, foi introduzida uma sonda de gavagem nos ratos. Logo após, os animais foram submetidos à anestesia para realização do eletrocardiograma (ECG). Após 5 min de início dos registros do ECG, a DMT foi administrada através de gavagem, conforme o planejamento experimental de cada grupo, registrando-se o ECG por mais 30 min. Após, fez-se o sacrifício dos animais por aprofundamento da anestesia. Foram retirados o fígado e o coração para mensurar a atividade das enzimas: catalase, superóxido dismutase, fosfatase alcalina, glutationa S-transferase e quantificação da glutationa reduzida e do produto da peroxidação lipídica malondialdeído. A deltametrina alterou a condutividade elétrica do coração. O eletrocardiograma mostrou redução significativa da frequência cardíaca e aumento do intervalo RR, indicando bradicardia. Também foi constatado aumento da duração do complexo QRS e redução da amplitude da onda R, o que sugere alterações na excitação ventricular. A amplitude P não foi significativamente diferente, mostrando que a excitação e a condução elétrica atrial não foram prejudicadas. Da mesma forma, os intervalos QT e QTc não foram alterados significativamente, embora o grupo DMT100 para o intervalo QT tenha se mostrado elevado, descartando-se assim, o risco de morte súbita. O segmento ST apresentou infradesnivelamento progressivo, embora não significativo. A onda T mostrou-se positiva e sem alterações significativas, não podendo assim sugerir possibilidade de isquemia miocárdica induzida por deltametrina. As análises bioquímicas mostraram que a deltametrina provocou estresse oxidativo tanto no fígado como no coração. A lipoperoxidação ocorreu nos hepatócitos e não parece ter ocorrido nos miócitos. No fígado, o estresse oxidativo foi confirmado pelo aumento significativo da atividade das enzimas glutationa S-transferase e fosfatase alcalina, aumento da concentração da glutationa reduzida, e significativa redução da atividade das enzimas superóxido dismutase e catalase. Já no coração, o estresse oxidativo foi evidenciado pelo significativo aumento da atividade da catalase e redução significativa da superóxido dismutase e glutationa S-transferase, assim como, pelo aumento da concentração da enzima glutationa reduzida. Em conclusão, este trabalho constatou que a deltametrina, administrada por via oral, diferentes dosagens, em ratos Wistar, causou aumento do estresse oxidativo e este pode ter ocasionado alterações na condução e excitação cardíaca verificadas no presente estudo Abstract: Cardiovascular diseases are in the first rank among causes of death in the world and, according to researches, they can be associated with oxidative stressimbalance between free radicals productions and antioxidant defenses. The treatment and non-pharmacological prevention of these diseases, advocated by the World Health Organization (WHO), consist in to increase consumption of fruits, vegetables, whole grains and beans, because of their antioxidant properties and the physiological effects of dietary fiber also present on those foods. On the other hand, studies have shown that some xenobiotic substances may be present in food, such as pyrethroid insecticides, increasing the risk of development or aggravation of cardiovascular alterations and, at the same time, destabilizing the antioxidant defenses and producing free radicals which are harmful to cells, endangering human health. There is no doubt about the necessity of the use of pesticides in agricultural production, in public health programs, animal health, as well as in forestry. The non-compliance with the legislation in force has been a troubling reality because it puts in risk the health of workers who handle those substances, the people who consume foods and the ecosystem. Researches that evaluate the harmful effects that pesticides can cause to the human health, contribute to the fulfilling of the specific legislation and, even, in the update of it. This work aims to evaluate the acute oral exposure of deltamethrin, a pyrethroid pesticide, on the excitation system of the heart and on the oxidative stress in adult male Wistar rats, by means of electrocardiographic parameters, and antioxidant enzymes in liver and heart tissues, respectively. The work consisted on the acute administration, by gavagem, of deltamethrin (DMT), to animals distributed in 4 groups, containing 10 animals each, as follows: 1) Control Group (5 mL of corn oil); 2) DMT10 Group [10% of the LD50 value of deltamethrin (3,2mg/5mL corn oil)]; 3) DMT25 Group [25% of the LD50 value of deltamethrin (8 mg/5mL corn oil)]; 4) DMT100 Group [100% of the LD50 value of deltamethrin (32mg/mL corn oil)]. At the beginning of the assay, it was introduced in the rats a probe of gavagem. Soon after, the animals were subjected to anesthesia for conduction of the electrocardiogram (EGC). After 5 minutes of the beginning of the ECG record, the deltamethrin was administered via gavagem, accordingly to the experimental planning of each group, and the ECG recorded for additional 30 minutes. Upon completion of the ECG recording, the rats were killed by deepening of anesthesia. The liver and heart were withdrawn to measure the activity of the enzymes: catalase, superoxide dismutase, glutathione transferase, alkaline phosphatase, as well as of the quantification of the malondialdehyde biomarker and reduced glutathione. Deltamethrin was capable of changing the electrical conductivity of heart. The electrocardiogram showed significant reduction of the heart rate and increase of the RR interval, indicating bradycardia. It was also found to increase of the duration QRS complex and reduction of the R wave amplitude, which means that there were alterations in ventricular excitation. The P amplitude was not significantly different, showing that arousal and atrial electrical conduction was not impaired. Similarly, the QT and QTc intervals were not altered significantly, although has been shown high of the group DMT100, discarding the risk of sudden death. The ST segment depression showed a progressive, though not significant. The T wave was positive and no significant changes and therefore can not suggest the possibility of myocardial ischemia induced by deltamethrin. Biochemical analysis showed that deltamethrin causes oxidative stress in both liver and heart. Lipid peroxidation occurred in hepatocytes and not observed in myocytes and this is confirmed by checking the increased activity of the alkaline phosphatase, glutathione s-transferase and reduced activity of the superoxide dismutase and catalase and increased of concentration of the reduced glutathione in the liver. In the heart, oxidative stress has been shown by increased activity of the catalase, increased concentration of the glutathione reduced and reduced activity of the superoxide dismutase and glutathione s-transferase. In conclusion, this study found that deltamethrin administered orally at different doses in rats, caused increased oxidative stress and this may have caused changes in cardiac excitation conduction and verified Mestrado Ciência de Alimentos Mestre em Ciência de Alimentos

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Nadia Regina Rodrigues Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A contaminação por agrotóxicos de diferentes grupos químicos e diferentes classes provocam alterações no desenvolvimento do sistema imunológico e do sistema nervoso de abelhas, afetando a polinização. No Brasil, um dos maiores produtores agrícolas mundiais, colmeias de abelhas vêm sendo perdidas devido ao manejo equivocado de agrotóxicos. O mel e a cera de abelhas podem ser utilizados como indicadores ambientais desse tipo de contaminação. O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e validação de métodos analíticos para a determinação de resíduos de agrotóxicos no mel e cera de abelhas, utilizando técnicas de cromatografia líquida e cromatografia gasosa, acopladas a sistemas de detecção por espectrometria de massas e por fluorescência. A técnica de extração QuEChERS foi aplicada em amostras de cera brasileira e as mesmas foram analisadas por cromatografia gasosa com detecção por espectrometria de massa (GC-MS/MS). Foram investigados 160 agrotóxicos e, das 19 amostras de ceras, 90% apresentaram um ou mais agrotóxicos. A estimativa do risco de exposição, calculada através do quociente de risco e dose letal (DL50), indicou um risco elevado para as abelhas devido à presença de clorpirifós e permetrina. Já na identificação e quantificação do herbicida glifosato e seu metabólito [ácido aminometilfosfônico (AMPA)] em amostras de mel, foi possível, através da técnica de cromatografia liquida acoplada ao detector específico de fluorescência, atingir níveis de LOQ de 0,04 mg kg-1, permitindo uma quantificação com exatidão e precisão necessárias. De 40 amostras de mel brasileiro, 06 apresentaram resíduos acima do limite máximo de resíduos (LMR) aceitáveis para essa matriz na Comunidade Europeia (50 µg kg-1). Por fim, no desenvolvimento de um método para a identificação dos inseticidas clorpirifós, dimetoato, imidacloprido, clotianidina, permetrina e cipermetrina em mel através da técnica cromatografia luqida acoplada a espectrometria de massas, foi aplicada a abordagem de Plackett-Burman para otimizar o preparo de amostras baseado em QuEChERS e d-SPE, economizando tempo e solventes. Este método foi então aplicado a 51 amostras de mel do Brasil e exterior, sendo que uma amostra apresentou resíduos em níveis de 102 µg kg-1 de cipermetrina, acima do LMR permitido. Os resultados obtidos demonstram a importância do monitoramento de agrotóxicos e a necessidade de novas práticas agrícolas e apícolas para a manutenção das colmeias e dos insetos polinizadores Abstract: Contamination by pesticides from different chemical groups and different classes causes changes in the development of the immune system and of the nervous system of bees, affecting pollination. In Brazil, one of the largest agricultural producers in the world, beehives have been lost due to the mismanagement of pesticides. Honey and beeswax can be used as environmental indicators of this type of contamination. The present work aimed to develop and validation of analytical methods for the determination of pesticide residues in honey and beeswax, using liquid chromatography and gas chromatography techniques, coupled to mass spectrometry and fluorescence detection systems. The QuEChERS extraction technique was applied in Brazilian wax samples, and they were analyzed by gas chromatography with mass spectrometry (GC - MS/MS). A total of 160 pesticides were investigated and, of the 19 wax samples, 90% presented one or more pesticides. The exposure risk estimate calculated using the hazard quotient and lethal dose (DL50), indicated a high risk to the bees due to the presence of chlorpyrifos and permethrin. In the identification and quantitation of the herbicide glyphosate and its metabolite [aminomethylphosphonic acid (AMPA)] in honey samples, it was possible, through the liquid chromatography technique coupled to the specific fluorescence detector, to reach LOQ levels of 0.04 mg kg-1 allowing an accurate quantitation and precision needed. Of 40 Brazilian honey samples, 06 showed residues above the permitted maximum residue limit (MRL) for honey in the European Community (50 µg kg-1). In the end, in the development of the method for the identification of the chlorpyrifos, dimethoate, imidacloprid, clothianidin, permethrin, and cypermethrin insecticides in honey by liquid chromatography wit mass spectrometry, the Plackett-Burman approach was applied to optimize sample preparation based on QuEChERS and d-SPE saving time and solvents. This method was applied to 51 honey samples from Brazil and others countries in which one sample showed residues at levels of 102 µg kg-1 of cypermethrin above the MRL. The results obtained demonstrate the importance of monitoring pesticides and the need for new agricultural and beekeeping practices for the maintenance of beehives and pollinating insects Doutorado Ciência de Alimentos Doutora em Ciência de Alimentos CAPES 001

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Este trabalho teve por objetivo avaliar a eficácia de uma formulação de lincomicina contra micro-organismos causadores de doenças em frangos de corte, após sua administração oral (através da água e da ração). Os animais receberam 10 mg de lincomicina por kg de peso corporal, por dia, durante 7 dias consecutivos. Amostras de tecido (intestino delgado e intestino grosso) foram obtidas ao longo do tempo para avaliação do comportamento farmacocinético tecidual. Também foi identificada a concentração mínima inibitória (CIM) da lincomicina pelo método de múltipla diluição e avaliação por turbidimetria. Foi desenvolvido e validado um método analítico por cromatografia líquida de alta eficiência associada à espectrometria de massas (LC-MS/MS) para quantificação dos resíduos de lincomicina nos tecidos alvo, tendo apresentado conformidade com o guia de validação adotado (VICH TOPIC GL 49, 2011). O método analítico mostrou-se sensível (LOQ = 125 µg/kg) e robusto, permitindo a quantificação da lincomicina com a exatidão e precisão necessárias. O resultado da CIM deste estudo com as principais cepas patogênicas estudadas para frangos de corte, resultou em valores entre 1 e 256 µg/mL. Verificou-se maior absorção da lincomicina no intestino grosso. Isso ocorre de forma similar quando comparamos concentrações de lincomicina administrada via água e ração e analisadas em ambos os intestinos, grosso e delgado. A eficácia abrangeu maior número de patógenos (Clostridium perfringens, Escherichia coli, Pasteurella multocida, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium) no intestino grosso em comparação com o intestino delgado, assim como o maior número de patógenos na administração via água do que via ração. A lincomicina é classificada como um antimicrobiano tempo-dependente. Assim, a formulação aqui estudada foi considerada eficaz, pois o tempo em que a concentração tecidual do ativo principal permaneceu acima da CIM das bactérias de interesse, foi no mínimo 60% do tempo total de exposição, conforme recomendação do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento do Brasil. A administração desta nova formulação via água foi eficaz contra as salmonelas estudadas, sendo a salmonelose uma das grandes preocupações da avicultura brasileira, já que a doença é responsável por perdas econômicas e por oferecer riscos à saúde humana Abstract: This study has been conducted to evaluate the efficacy of a Lincomycin formulation against microorganisms that cause illness in poultry, after its oral administration (water and feed). Individuals received 10 mg of lincomycin per kg of body weight, per day, for 7 consecutive days. Tissue samples (large and small intestines) were obtained through time, to evaluate tissue pharmacokinetics behavior. Additionally, the lincomycin’s minimal inhibitory concentration (MIC) has been identified through the multiple dilution method and turbidimetry evaluation. A highly efficient liquid chromatography analytical method has been developed and validated, associated with mass spectrometry (LC-MS/MS) to quantify lincomycin residue in target tissues, having presented conformity with the adopted validation guideline (VICH TOPIC GL 49, 2011). The analytical method showed to be sensitive (LOQ = 125 µg/kg) and robust, allowing the lincomycin’s quantification with the necessary precision and accuracy. The MIC’s result in this study, applied with main poultry pathogenic strains, presented values between 1 and 256 µg/mL. It has been observed a higher lincomycin absorption in the large intestine. This occurs in a similar way when we compare lincomycin concentrations supplied through water and feed and analyzed in both intestines, large and small. The efficacy covered a larger range of pathogens (Clostridium perfringens, Escherichia coli, Pasteurella multocida, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium) in the large intestine, when compared to the small intestine, as well as a larger range of pathogens in water supply when compared to feed. Lincomycin is classified as a time-dependent antimicrobial. Thus, the formulation analyzed in this study has been considered effective. The duration of time in which the active principle’s tissue concentration remained above the MIC for bacteria of interest, was at least 60% of the total exposure time, following recommendations from the Brazilian health authorities (Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA). Water administration of this new formulation has been effective against the studied Salmonella, being this agent one of the greatest concerns of the Brazilian poultry industry, as it causes relevant economical losses and presents a major risk to human public health Mestrado Ciência de Alimentos Mestra em Ciência de Alimentos CAPES 001

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Hamilton Hisano Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A aquicultura é a atividade econômica que mais cresce no mundo, apresentando grande potencial de expansão no Brasil. A piscicultura representa cerca de 70% da produção, tendo na tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) uma das espécies mais representativas. Com a intensificação da atividade aquícola, o surgimento de bacterioses torna-se cada vez mais frequente, fazendo-se necessário o uso de antimicrobianos para o tratamento dos animais. O florfenicol é um dos antimicrobianos mais utilizados na aquicultura mundial, sendo usado por dez dos quinze maiores produtores de pescado. O medicamento é frequentemente administrado por via oral, através da ração medicada. Esse tipo de administração pode resultar em perdas do florfenicol para o meio aquático pela lixiviação do fármaco. Na maioria dos países produtores, o controle e fiscalização do uso e descarte de efluentes são falhos. Embora sua degradação seja relativamente rápida e não apresente potencial de bioacumulação, o uso recorrente garante sua presença nos canais aquíferos, podendo provocar danos no ecossistema aquático e favorecer o desenvolvimento de bactérias resistentes. Além disso, esse tipo de administração pode proporcionar interação entre o fármaco e a dieta resultando em mudanças na farmacocinética, bem como na absorção de nutrientes. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a lixiviação do florfenicol após 5 e 15 minutos de exposição na água com duas temperaturas (22 ° C e 28 ° C) e pH (4.5 e 8.0); avaliar a influência do tamanho do pellet e a interferência de três veículos (óleo vegetal, carboximetilcelulose e baixa pectina de metoxilação) na lixiviação do fármaco; avaliar a digestibilidade aparente do florfenicol em tilápia do Nilo (35g ± 2) a 26°C e a atuação do medicamento na absorção de nutrientes da dieta. Os resultados mostraram que o tamanho do pellet, a forma de revestimento, a temperatura e o tempo de exposição afetam significativamente a lixiviação do fármaco (p

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Sonia Claudia do Nascimento de Queiroz Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A ocorrência de doenças, o manejo intensivo, variações nutricionais e nos parâmetros da qualidade da água são alguns dos entraves sanitários que desafiam a aquicultura. O uso de produtos veterinários para controle sanitário nas criações é comum, embora haja carência de informações técnicas e legislação específica quanto a sua utilização na aquicultura brasileira. Isso faz com que práticas para realizar o controle de doenças se tornem limitadas e outras possibilidades sejam exploradas. O incentivo do uso de aditivos alternativos também aumentou, visto que a proibição do uso de antibióticos promotores de crescimento em animais já é realidade em países da União Europeia. Com isso, os óleos essenciais têm se mostrado uma alternativa promissora devido aos princípios ativos redutores de estresse e contra diversos patógenos no setor aquícola. Entretanto, são necessários dados para assegurar que sua utilização em larga escala não afetará populações e colônias presentes naturalmente no ambiente que podem entrar em contato com o óleo essencial e/ou com o resíduo deste, interferindo no equilíbrio do ecossistema. No intuito de consolidar questões referentes a um procedimento ambientalmente seguro, o Capítulo 1 trata do crescente uso de óleos essenciais como alternativa para o controle sanitário na aquicultura; o Capítulo 2 aborda a caracterização da composição química de sete óleos essenciais de interesse no setor para, assim, obter e comparar dados ecotoxicológicos dos respectivos óleos frente à Daphnia magna. Ademais, no Capítulo 3 foi determinada a concentração de baixo risco ambiental (HC5) do óleo essencial de Piper aduncum, a fim de colaborar com dados ecotoxicológicos desse óleo com o intuito de obter proteção de 95% de espécies não alvo do compartimento aquático Abstract: Occurrence of diseases, intensive management, nutritional variations and water quality parameters are some of the health obstacles that challenge aquaculture. The use of veterinary drugs for sanitary control in fish farms is common, although there is shortage of technical information and specific legislation regarding its use in Brazilian aquaculture. This makes the control of diseases limited and encourages other possibilities to be explored. Also, the use of alternative additives has increased since the ban on growth-promoting antibiotics use in animals is already a reality in European Union countries. Thus, essential oils have been shown to be a promising alternative due to the active principles reducing the stress and against a variety of pathogens in the aquaculture field. Nevertheless, data are needed to ensure that its large-scale use will not affect naturally occurring populations and colonies that may come into contact with the essential oil and/or its residue, interfering in ecosystem balance. In order to consolidate issues related to an environmentally safe procedure, Chapter 1 discusses the increasing use of essential oils as an alternative to sanitary control in aquaculture; Chapter 2 deals with the characterization of the chemical composition of seven essential oils of interest in aquaculture in order to obtain and compare ecotoxicological data of these oils against Daphnia magna. Moreover in Chapter 3 the low environmental risk concentration (HC5) of Piper aduncum essential oil was determined, in order to collaborate with ecotoxicological data of that oil on non-target aquatic organism Mestrado Ciência de Alimentos Mestra em Ciência de Alimentos CNPQ 134595/2015-7

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Claudia Schinke Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A mastite bovina é uma patologia frequente e que mais causa prejuízos econômicos à indústria leiteira, sendo o uso de antimicrobianos a principal ferramenta para o tratamento. O insucesso dos tratamentos com antimicrobianos existentes diante de bactérias multirresistentes está cada vez mais comum o que torna urgente a busca por novos fármacos eficazes contra os patógenos da mastite. Os microrganismos e as plantas são fontes promissoras de produtos naturais com ação antibacteriana. Assim, o objetivo desta tese foi buscar produtos naturais com atividade antibacteriana e avaliar o potencial para serem utilizados no tratamento da mastite bovina. No período de 2010-2015, mais de 50 moléculas antibacterianas produzidas por bactérias obtidas de substratos marinhos foram relatadas na literatura. Entre elas, anthracimycin, kocurin, macrolactins A1 e B1, gageotetrins A?C e gageomacrolactins 1-3 são exemplos de moléculas com atividade antibacteriana promissora e que podem ser investigadas para o desenvolvimento de novos medicamentos. Localizado no centro do oceano Atlântico, o Arquipélago São Pedro e São Paulo (ASPSP) é um local com características únicas e que pode oferecer uma ampla biodiversidade pouco estudada. Microrganismos isolados de esponjas marinhas coletadas nas proximidades do ASPSP produziram metabólitos secundários com atividade potencial contra Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA). Um destes foi o fungo Acremonium camptosporum, um microrganismo ubíquo, isolado pela primeira vez da esponja Aplysina fulva. A análise por espectrometria de massas (UPLC-ESI-MS/MS) do extrato deste fungo revelou a presença de diversas acremonidins e acremoxantones. Esses compostos são conhecidos por apresentarem alta citotoxicidade, portanto, não foram considerados bons candidatos para serem utilizados em formulações veterinárias. No entanto, verificou-se que o arsenal químico produzido pelo A. camptosporum pode ter um papel fundamental tanto na defesa da esponja quanto do próprio fungo. Por outro lado, os óleos essenciais são produtos naturais conhecidos por suas diversificadas propriedades biológicas. Assim, o óleo essencial (OE) de Baccharis dracunculifolia foi submetido a um fracionamento por flash cromatografia, tendo-se obtido frações contendo alto teor de seus compostos majoritários, trans-nerolidol (91,47% ¿ 96,14%) e spathulenol (78,63 ¿ 84,89%). O OE e as frações trans-nerolidol e spathulenol inibiram o crescimento de linhagens de S. aureus (MIC90= 375 µg mL-1) e Streptococcus agalactiae (MIC90= 187.5 µg mL-1) isolados do leite de animais com mastite bovina. Contudo, nas concentrações mínimas inibitórias dos patógenos, essas amostras mostraram redução de mais de 50% da viabilidade das células epiteliais mamárias de bovinos (MAC-T) e de queratinócitos (HaCaT). Portanto, não são recomendados para serem utilizados em formulações para o tratamento de mastite nessas concentrações. No entanto, os compostos trans-nerolidol e spathulenol apresentam outras propriedades farmacológicas relatadas na literatura e que podem ser investigadas com a finalidade de prevenir e/ou auxiliar no tratamento da mastite bovina Abstract: Bovine mastitis is a frequent pathology that causes high economic negative impact to the dairy industry. Antimicrobials are the main tool to treat this disease. The failure of existing antimicrobial treatments against multidrug resistant bacteria is increasingly common, making the search for new drugs effective against mastitis pathogens more urgent. Microorganisms and plants are promising sources of natural products with antibacterial action. Thus, the aim of this thesis was to search for natural products with antibacterial activity and to evaluate their potential use in the bovine mastitis treatment. In the period of 2010-2015, there were reported in the literature more than 50 antibacterial molecules obtained from marine substrates. Among them, anthracimycin, kocurin, macrolactins A1 and B1, gageotetrins A-C and gageomacrolactins 1-3 are examples of molecules with promising antibacterial activity and that could be investigated for the development of new drugs. Located at mid-Atlantic Ocean, the São Pedro and São Paulo Archipelago (ASPSP) is a place with unique characteristics that could offer a wide biodiversity, nevertheless it has been little studied. Microorganisms isolated from marine sponges collected around the ASPSP produced secondary metabolites with potential activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). One of them was the fungus Acremonium camptosporum, a ubiquitous microorganism isolated for the first time from the sponge Aplysina fulva. Mass spectra data obtained by UPLC-ESI-MS/MS revealed the presence of several acremonidins and acremoxanthones in the mycelial extract. These compounds are known to present high cytotoxicity, therefore, they were not considered as candidates to be used in veterinary formulations. However, it was verified that the chemical arsenal produced by A. camptosporum might play a fundamental role in the defense of the sponge, as well as of the fungus itself. On the other hand, essential oils are natural products known for their diverse biological properties. Thus, the essential oil (OE) from Baccharis dracunculifolia was subjected to a flash chromatography fractionation, obtaining fractions with high content of its major compounds, trans-nerolidol (91.47 - 96.14%) and spathulenol (78.63 - 84.89%). The OE and the trans-nerolidol and spathulenol fractions inhibited the growth of several S. aureus (MIC90 = 375 µg mL-1) and Streptococcus agalactiae (MIC90 = 187.5 Bovine mastitis is a frequent pathology that causes high economic negative impact to the dairy industry. Antimicrobials are the main tool to treat this disease. The failure of existing antimicrobial treatments against multidrug resistant bacteria is increasingly common, making the search for new drugs effective against mastitis pathogens more urgent. Microorganisms and plants are promising sources of natural products with antibacterial action. Thus, the aim of this thesis was to search for natural products with antibacterial activity and to evaluate their potential use in the bovine mastitis treatment. In the period of 2010-2015, there were reported in the literature more than 50 antibacterial molecules obtained from marine substrates. Among them, anthracimycin, kocurin, macrolactins A1 and B1, gageotetrins A-C and gageomacrolactins 1-3 are examples of molecules with promising antibacterial activity and that could be investigated for the development of new drugs. Located at mid-Atlantic Ocean, the São Pedro and São Paulo Archipelago (ASPSP) is a place with unique characteristics that could offer a wide biodiversity, nevertheless it has been little studied. Microorganisms isolated from marine sponges collected around the ASPSP produced secondary metabolites with potential activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). One of them was the fungus Acremonium camptosporum, a ubiquitous microorganism isolated for the first time from the sponge Aplysina fulva. Mass spectra data obtained by UPLC-ESI-MS/MS revealed the presence of several acremonidins and acremoxanthones in the mycelial extract. These compounds are known to present high cytotoxicity, therefore, they were not considered as candidates to be used in veterinary formulations. However, it was verified that the chemical arsenal produced by A. camptosporum might play a fundamental role in the defense of the sponge, as well as of the fungus itself. On the other hand, essential oils are natural products known for their diverse biological properties. Thus, the essential oil (OE) from Baccharis dracunculifolia was subjected to a flash chromatography fractionation, obtaining fractions with high content of its major compounds, trans-nerolidol (91.47 - 96.14%) and spathulenol (78.63 - 84.89%). The OE and the trans-nerolidol and spathulenol fractions inhibited the growth of several S. aureus (MIC90 = 375 µg mL-1) and Streptococcus agalactiae (MIC90 = 187.5 µg mL-1) isolated from milk of animals with bovine mastitis. However, at the minimal inhibitory concentrations, these samples showed a decrease of more than 50% of bovine mammary epithelial cells (MAC-T) and keratinocytes (HaCaT) viability. Therefore, they are not recommended to be used at such concentrations in formulations intended for mastitis treatment purposes. Nevertheless, other pharmacological properties of trans-nerolidol and spathulenol were previously reported and could be investigated for preventing purposes and/or as adjuvant in the bovine mastitis treatment. g mL-1) isolated from milk of animals with bovine mastitis. However, at the minimal inhibitory concentrations, these samples showed a decrease of more than 50% of bovine mammary epithelial cells (MAC-T) and keratinocytes (HaCaT) viability. Therefore, they are not recommended to be used at such concentrations in formulations intended for mastitis treatment purposes. Nevertheless, other pharmacological properties of trans-nerolidol and spathulenol were previously reported and could be investigated for preventing purposes and/or as adjuvant in the bovine mastitis treatment Doutorado Ciência de Alimentos Doutora em Ciência de Alimentos CAPES 33003017027/P1

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Karine Valadares Guimarães Reche Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O tambaqui (Colossoma macropomum) e a segunda maior producao de pescado no Brasil e a primeira na regiao Norte do pais. Devido a grande demanda de tambaqui, produtores e pesquisadores estao procurando uma maneira que seja facil e eficiente para aumentar a produtividade desse peixe. Assim, com a finalidade de contribuir com o avanco da criacao comercial do tambaqui, a Embrapa Amazonia Ocidental vem pesquisado a utilizacao de 17 ß-estradiol, um hormonio com atividade estrogenica, para a formacao de populacao monossexo de femeas de tambaqui. Essa tecnica de inducao sexual e uma maneira de o peixe ter uma maior taxa de ganho de peso corporal. Isso e possivel quando, na mesma especie, um sexo apresenta superioridade zootecnica em relacao ao outro. Todavia, esse hormonio deve ser utilizado com muito cuidado, pois alem de contaminar o ambiente e modificar a biota exposta a ele, tambem pode causar modificacoes no sistema endocrino, gerando consequencias negativas a saude do consumidor e/ou de seus descendentes. Portanto, necessita-se de estudos para verificar se na carne do peixe que recebeu tratamento de 17ß-estradiol, ha quantidade de residuo de hormonio que possa oferecer risco a saude humana. Visando atender essa necessidade, o objetivo deste projeto foi o desenvolvimento e validacao de um metodo analitico para determinacao de residuo de 17ß-estradiol no musculo de tambaqui, utilizando LC-MS/MS. O metodo foi aplicado na determinacao de residuos desse composto no fillet de peixes tratados com o hormonio Abstract: Tambaqui (Colossoma macropomum) is the second largest fish production in Brazil and the first in the North of the country. Due to the great demand for tambaqui, producers and researchers are looking for an easily and efficient way to increase the productivity of this fish. In order to contribute to the advancement of commercial breeding of tambaqui, Embrapa Western Amazon is conducting a research that employs a hormone with estrogenic activity, 17 ß-estradiol, for the formation of monosex populations of tambaquis females. This sexual induction technique is a way for the fish to have a higher tax of body weight gain. This is possible when, in the same specie, one sex shows zootechnical superiority over the other. Nevertheless, this hormone should be used very carefully, since it could contaminate the environment and modify the biota exposed to it. Also, its residues in food can induce changes in the endocrine system causing adverse effects to the health of consumers and / or their descendants. Thus, studies are needed to evaluate if the meat, from fish that received treatment of 17ß-estradiol, contain hormone residue that may pose a risk to human health. In order to attend this need, the purpose of this study was to develop and validate an analytical method, using LC-MS/MS, to determine 17ß-estradiol residues in tambaqui muscle. The method was applicated in the determination of residues of this compound in the fish muscle of fishes treated with this hormone. Mestrado Ciência de Alimentos Mestra em Ciência de Alimentos CNPQ 131875/2014-0

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Miwa Yamamoto Miragliotta Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Este estudo avaliou um novo medicamento solúvel em água, tendo como princípio ativo à enrofloxacina (ENR), a qual é um antimicrobiano amplamente utilizado no tratamentos de doenças em animais produtores de alimentos destinados ao consumo humano, incluindo-se frangos de corte. Métodos de LC-MS/MS foram desenvolvidos e validados para a determinação de ENR e seu principal metabólito ciprofloxacina (CIP) em diversos tecidos de frangos (rim, fígado, pele/gordura, músculo e plasma). Foi utilizado um método simples e com um rápido preparo de amostras, que atende o guia de validação do MAPA e que apresenta limites de quantificação (LOQs) de 1 µg kg-1 para plasma e pele/gordura, 2 µg kg-1 para o músculo e 5 µg kg-1 para fígado e rim, menores do que aqueles atualmente relatados na literatura. Os resultados farmacocinéticos demonstraram que, após administração oral do fármaco para frangos com 41 dias de idade, a concentração máxima obtida no plasma foi de Cmax 1,345 ± 0,154 µg mL-1 e 0,079 ± 0,007 µg mL-1, que foram alcançados no tempo de 4,000 ± 0.000 h e 3,444 ± 1,014 h para ENR e CIP, respectivamente. A biotransformação observada do medicamento (ENR) em seu metabolito (CIP) não foi extensa, apresentou 4,91% de CIP em relação a ENR, calculado pela relação entre a ASC '0-INFINITO' CIP / ASC '0-INFINITO' ENR. Adicionalmente, foi estudada a farmacodinâmica, que avaliou a concentração inibitória mínima (CIM) da ENR produzida em 10 cepas bacterianas das principais doenças que ocorrem nos frangos. Com esses resultados foi possível determinar que o tratamento com ENR, na dosagem de 10 mg kg-1 em intervalos de 24h, é eficaz contra infecções bacterianas originárias de bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e Micoplasmas, com valores de CIM inferiores ou iguais a 0,125 µg mL-1. O período de carência para uso seguro da ENR na terapêutica de frangos foi calculado para os tecidos músculo, pele/gordura, fígado e rim após administração oral de ENR (10 mg kg-1 peso corporal, diariamente por 5 dias consecutivos) resultando em um tempo de carência de 8 e 9 dias, atendendo as agências regulatórias europeias (ECR, 2010) e japonesas (JPL, 2006), respectivamente Abstract: This study evaluated a new water-soluble drug which has enrofloxacin (ENR) as its active ingredient. LC-MS/MS methods were developed and validated for analysis of ENR and its main metabolite ciprofloxacin (CIP) in various tissues in broiler chickens (kidney, liver, skin/fat, muscle and plasma). A simple method with quick preparation of the samples was used, which met the standards of the Ministry of Agriculture (MAPA) validation guide and showed quantification limits (LOQs) of 1 µg kg-1 for plasma and skin/fat, 2 µg kg-1 for muscle and 5 µg kg-1 for liver and kidney, lower than those currently described in literature. The pharmacokinetic (PK) results showed that, after oral administration of the drug to the chickens at 41 days of age, the maximum concentrations obtained were Cmax 1.345 ± 0.154 µg mL-1 and 0.079 ± 0.007 µg mL-1, which were reached at 4.000 ± 0.000 h and 3.444 ± 1.014 h for ENR and CIP respectively. The biotransformation observed from the drug (ENR) into its metabolite (CIP) was not extensive, being of 4.91%, of CIP in relation to ENR calculated by the relationship between the ASC '0-INFINITO' CIP / ASC '0-INFINITO' ENR. Additionally, we studied the pharmacodynamics (PDs), which evaluated the minimum inhibitory concentration (MIC) of ENR produced in 10 bacterial strains of the main diseases which occur in chickens. With these results, it was determined that treatment with ENR at the dosage of 10 mg kg-1 in 24 h intervals, can be effective against bacterial infections originating from Gram-positive, Gram-negative and Mycoplasma bacteria, with MIC values under or equal to 0.125 ug mL-1. The withdrawal time for safe use of ENR for the treatment of chickens was calculated for the muscle, skin/fat, liver and kidney tissues after oral administration of ENR (10mg kg-1 body weight, daily for 5 consecutive days) resulting in a withdrawal time of 8 to 9 days in order to meet the standards of European (ECR, 2010) and Japanese (JPL, 2006) regulatory agencies respectively Doutorado Ciência de Alimentos Doutora em Ciência de Alimentos

Orientadores: José Alberto Fracassi da Silva, Felix Guillermo Reyes Reyes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química Resumo: Neste trabalho investigamos diferentes possibilidades para o desenvolvimento de um microdispositivo do tipo (Lab-on-a-chip - LOC) que permitisse determinar qualitativa e quantitativamente a presença de aminoácidos em matrizes complexas, em particular alimentos. Buscou-se uma análise que permitisse a detecção especialmente de glutamato monossódico ¿ que além de ser um neurotransmissor e aminoácido essencial é o principal responsável pelo gosto Umami de alimentos -de maneira prática, econômica, eficiente e rápida a partir de pequenas quantidades de amostras, visando suprir as demandas ainda existentes nas áreas de produção e fiscalização sanitária. Para isso, além do sistema de separação por eletroforese capilar, etapas anteriores de preparação da amostra foram desenvolvidas e miniaturizadas, sendo por fim acopladas ao mesmo microdispositivo. Fomos, com isso, capazes de atingir limites de detecção da ordem de 0,3 a 0,5 mmol L-1, condizentes com o que é encontrado em produtos alimentícios. Um capítulo adicional é dedicado à outras estratégias, planejadas originalmente para a detecção de glutamato, pode também adaptada a outros componentes, para os quais o desempenho foi bastante promissor Abstract: In this project we evaluated different possibilities for the development of a Lab on a chip able to detect and quantify amino acids in complex matrices, particularly foodstuff. We aimed an analysis specially focusing monosodium glutamate ¿ which is a neurotransmitter and essential amino acid as well as the main responsible for Umami taste in food. We searched for a practical, economical, efficient and fast manner, suitable for small volumes of sample, aiming to solve the demands in production and sanitary control. To this purpose, we developed both the separation process, based on capillary electrophoresis and the sample cleaning steps, miniaturized them and coupled both on a single device. With this strategy, we achieved detection limits around 0.3 to 0.5 mmol L-1, suitable to most food samples. An additional chapter was dedicated to other strategies studied with the same objective, that were not so suitable to our context, but that would be an interesting starting point for other applications, situations and products Doutorado Química Analítica Doutora em Ciências FAPESP 2011/02477-3, 2013/06625-2 CNPQ

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A enrofloxacina (ENR) é um antimicrobiano de exclusiva aplicação veterinária e possui como metabólito a ciprofloxacina (CIP), exclusiva de uso humano. No Brasil, a ENR não é permitida na aquicultura, porém, há evidências do seu uso nesse sistema de produção de alimentos. Por este motivo, em 2010, o MAPA (Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento) através do Plano Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes em produtos de origem animal (PNCRC/Animal), a incluiu na lista dos antimicrobianos a serem monitorados em peixes de cultivo. Diante da intensificação na produção de tilápias no Brasil, da possível utilização indevida da ENR na piscicultura brasileira, da falta de informações terapêuticas com ENR para esta espécie e dos danos à saúde pública que isto pode gerar através do uso indiscriminado desse antimicrobiano, o presente trabalho teve o objetivo de realizar estudo farmacocinético de dose única ENR (10 mg kg-1 p.v) através de ração medicada (0.1% de ENR) em tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus). A ENR (padrão analítico = 98%) foi dissolvida em solução alcoólica acidificada e adicionada a uma solução contendo o polímero, polivinilpirrolidona (PVP), e incorporada à ração comercial. O teor de ENR na ração foi quantificado (1.047 mg g-1) utilizando cromatografia líquida de alta eficiência, com detector de fluorescência (HPLC-FLD). Os peixes foram medicados através dessa ração e amostras de plasma e músculo foram coletadas nos seguintes tempos: 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 e 120h após a administração. Foram desenvolvidos e validados métodos analíticos em HPLC-FLD para quantificação da ENR e CIP nas matrizes plasma e músculo. Os métodos analíticos apresentaram desempenho satisfatório na matriz plasma com limites de quantificação (LOQ) de 3 ng mL-1 obtidos para ambos analitos e 10.0 e 7.0 ng g-1, no músculo, para CIP e ENR, respectivamente. Em todos os métodos foram utilizadas para quantificação dos analitos, curvas analíticas construídas pela fortificação das matrizes. Quanto aos parâmetros farmacocinéticos obtidos da ENR, para plasma e músculo, a concentração máxima obtida foi de 1.241 ± 0.423 µg mL-1 e 2.166 ± 0.742 µg g-1, respectivamente, no tempo de 8h demonstrando absorção lenta. O alto volume de distribuição (Vd) no plasma (7.03L kg-1), os valores da relação entre concentração músculo/plasma (1.12 a 3.82) indicaram boa distribuição no tecido muscular. Foi possível detectar e quantificar o metabólito (CIP), porém a taxa de conversão foi baixa (1.3%). Por último, o T1/2Ke de 2.08 dias no músculo, indica eliminação lenta e longo período de carência para que o produto cárneo possa ser consumido. O uso de antimicrobianos sem dados toxicológicos e farmacológicos para a espécie a qual se destinam tem dentre várias consequências, o aumento do risco à exposição de resíduos com valores acima daqueles permitidos (LMRs) e aumento na incidência/prevalência de resistência bacteriana no animal e no ser humano Abstract: Enrofloxacin (ENR) is an exclusive antimicrobial veterinary application and has as metabolite ciprofloxacin (CIP), exclusive for human use. In Brazil, the ENR is not permitted in aquaculture, however, there is evidence of its use in this system of food production. For this reason, in 2010, MAPA (Ministry of Agriculture, Livestock and Supply) through the National Plan for Control of Residues and Contaminants in animal products (PNCRC/Animal), included in the list of antimicrobials to be monitored in fish cultivation. Given the intensification of tilapia production in Brazil, the possible improper use of ENR in Brazilian farming, the lack of information with therapeutic ENR for this species and harm to public health this could generate through the indiscriminate use of this antimicrobial, the aim of this work was to realize a single-dose pharmacokinetic study with ENR (10 mg k-1 bw) through medicated feed (0.1% ENR) in the Nile tilapia (Oreochromis niloticus). ENR (analytical standard = 98 %) was dissolved in acidified alcohol solution and added to a solution containing the polymer, polyvinylpyrrolidone (PVP ) and incorporated into commercial feed. The content of ENR in feed medicated was quantified (1.047 mg g-1) using high performance liquid chromatography with fluorescence detection (HPLC-FLD). The fish were medicated and its plasma and muscle samples were collected at the following times: 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 and 120h after administration. Analytical methods were developed and validated for HPLC-FLD for quantification of ENR and CIP in plasma and muscle. Analytical methods showed satisfactory performance in plasma with limits of quantification (LOQ ) of 3 ng mL-1obtained for both analytes, and in muscle,7.0 and 10.0 ng g-1 for CIP and ENR, respectively. In all methods were used for quantification of analytes, standard curves constructed by fortification of matrices. About the pharmacokinetic parameters obtained from the ENR for plasma and muscle, the maximal concentration of ENR was 1.241 ± 0.423 mg ml-1 for plasma and 2.166 ± 0.742 mg g- 1 for muscle, after 8h showing slow absorption. The high volume of distribution (Vd) in plasma (7.03 L kg- 1), the values of the ratios between muscle concentration/plasma (1.12 to 3.82 ) indicated good distribution in muscle tissue. It was possible to detect and quantify the metabolites (CIP), but the conversion rate was low (1.3%). Finally, the T1/2Ke 2.08 days in muscle indicates slow elimination and suggested long period of time for the meat product to be consumed. The use of antimicrobial agents without pharmacological and toxicological data for the species which it is applied have several consequences, like increasing the risk of exposure of residues above those permitted ( MRLs) and increased incidence/prevalence of bacterial resistance in animals and humans Doutorado Ciência de Alimentos Doutora em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A ovinocultura vem despertando enorme interesse em todas as regiões do Brasil e sua produção destina-se, principalmente, na criação de cordeiros. Contudo, um dos grandes impasses nos sistemas de produção, especialmente em pastagens, são as parasitoses gastrointestinais. Os problemas associados com os parasitas acarretam danos à saúde dos animais, reduzindo o seu desempenho e os lucros do produtor. Como medida profilática, faz-se uso dos anti-parasitários, medicamentos veterinários com ação contra endo e ectoparasitas. Contudo, a utilização indiscriminada dos fármacos tem favorecido o desenvolvimento de estirpes resistentes responsáveis pela rápida ineficácia do composto. Como medida de controle dos nematoides gastrointestinais nas criações comerciais de ovinos, o fármaco costuma ser administrado baseando-se no resultado de duas formas de exame diagnóstico: contagem de ovos dos parasitas nas fezes e o teste FAMACHA® (exame da coloração da mucosa ocular) ou a aplicação do composto em períodos regulares de 28 dias, independente de exame. Na tentativa de determinar a melhor posologia (dose/frequência) do anti-helmíntico a ser empregado na prática, busca-se o melhor entendimento de suas propriedades farmacocinéticas, ou seja, determinar a quantidade do fármaco disponível no organismo para geração de um efeito terapêutico adequado. A moxidectina (MOX) é uma lactona macrocíclica que tem se destacado nos últimos anos pela sua eficiência anti-helmintica em baixas doses e pela longa persistência no organismo dos animais. Deste modo, o presente trabalho teve por objetivo desenvolver e validar um método analítico, empregando cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (LC-ESI-MS/MS), avaliar o perfil farmacocinético da MOX no soro de cordeiros, assim como comparar as concentrações dos resíduos presentes no soro de animais submetidos a diferentes métodos de controle parasitários em condições de criação comercial em pastagens. O método analítico desenvolvido foi validado apresentando exatidão entre 80-107,3 % e valores de precisão entre 1,7-6,7 %. Os limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ) determinados foram de 2,0 ng mL-1 e 5,0 ng mL-1, respectivamente. Os resultados dos parâmetros de validação demonstraram que o método foi adequado para determinar a presença da MOX no soro de cordeiro. A disposição da MOX no soro foi avaliada em cordeiros da raça suffolk (n=7), após administração subcutânea de 0,2 mg kg-1 de peso corpóreo, em uma única dose. As concentrações de MOX no soro apresentaram valores de Cmáx 8,5 ± 2,81 ng mL-1, e Tmáx de 1 ± 0,7 dias. Os valores da AUC 0-8 e T1/2 foram 82,42 ± 8,02 ng dia.mL-1 e 7,66 ± 1,62 dias, respectivamente. Os resultados indicam uma absorção subcutânea lenta e, portanto, maior tempo de exposição sistêmica e menor disponibilidade do fármaco na circulação sanguínea, quando comparado com outras espécies como caprinos, bovinos ou com a ivermectina. Nenhum dos diferentes métodos de controle parasitários avaliados apresentou resíduos de MOX no soro superiores ao limite de quantificação do método Abstract: The sheep breeding has aroused great deal of interest in all regions of Brazil and its production is mainly intended to the creation of lambs. However, the gastrointestinal parasitosis is one of the major difficulties in the production systems, especially in the field. Parasites cause animals¿ health damage, reducing their performance and the profits of the producer. As a consequence parasiticides are used as prophylactic measure. However, care on their use must be taken, since the indiscriminate use of veterinary drugs has favored the development of resistant strains, responsible for the loss of the drug effectiveness. As a control of gastrointestinal nematodes in the commercial sheep breeding, the veterinary drug is usually administered based on the result of two forms of diagnostic test: faecal egg count of parasites and the FAMACHA® test (examination of ocular mucosa color), or on the application of the veterinary drug at regular periods of 28 days, independently of any diagnostic test. In an attempt to determine the optimal dosage (dose / frequency) of the parasiticide to be used in practice, it is necessary the better understanding of their pharmacokinetic properties, in order to determine the amount of drug available in the body to generate an adequate therapeutic effect. Moxidectin (MOX) is a macrocyclic lactone that acts against endo and ecto-parasites, and has come to prominence in recent years due to its effectiveness at low doses and long persistence in the organism of the animals. Thus, the present study aimed to develop and validate an analytical method employing liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS), evaluate the pharmacokinetic profile of MOX in the serum of lambs, and to compare the MOX residue levels on the serum of animals subjected to different parasiticidal method of control in conditions of commercial breeding in the field. The validated analytical method presented between 80 to 107.3 % accuracy, and precision values between 1.7 - 6.7 %. The limits of detection (LOD) and quantitation (LOQ) were 2.0 ng mL-1 and 5.0 ng mL-1, respectively. The results of the validation parameters showed that the method was suitable to determine the presence of MOX in the lamb serum. The pharmacokinetic profile of MOX was evaluated in suffolk race lambs (n = 7), after a single subcutaneous dose administration of 0.2 mg kg-1 body weight. The serum concentrations of MOX showed Cmax value of 8.5 ± 2.81 ng mL-1, and Tmax of 1 day. The AUC0-8 and the T1/2 were 82.42 ± 8.02 ng day.mL-1 and 7.66 ± 1.62 days, respectively. The results indicated a slow MOX subcutaneous absorption and, therefore, increased systemic exposure time and low availability of the drug in blood circulation, when compared to other species such as goats or cattle, or to ivermectin. None of the different parasiticidal control methods evaluated showed MOX residue levels above the LOQ of the analytical method Mestrado Ciência de Alimentos Mestra em Ciência de Alimentos

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Sonia Claudia do Nascimento de Queiroz Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A aquicultura é hoje o setor de produção mundial de alimentos que apresenta o maior crescimento. Compreende todas as formas de criação de animais e cultivo de plantas aquáticas em água doce, salobra e marinho. Um grande constrangimento para o setor são os surtos de doenças, com uma estimativa global de perdas da ordem de muitos bilhões de dólares por ano. Este fato ocorre devido a que o ambiente aquático é mais favorável a proliferação de bactérias patogênicas, podendo atingir altas densidades em torno dos animais e ser ingeridas durante a alimentação ou durante as trocas gasosas. Assim, o risco de infecções bacterianas na criação de peixes é alto, podendo ser consequência de fatores estressantes tais como falta de higiene, alta densidade de estocagem, baixa qualidade da água, flutuação da temperatura, nutrição inadequada, más práticas de manejo, inadequados procedimentos e métodos de transporte, adaptação ao novo ambiente e captura. Na tentativa de minimizar perdas, antibióticos são administrados, através dos alimentos, aos peixes com fins terapêuticos (tratamento de doença). Devido ao seu baixo custo e relativa eficiência em combater infecções bacterianas mais comuns, as sulfonamidas pertencem a uma classe de antibióticos largamente usada. Trimetoprim é outro agente antibiótico frequentemente coadministrado com sulfonamidas para aumentar, de forma sinergética, a eficiência do tratamento contra uma variedade de infecções bacterianas. Entretanto, o uso de antimicrobianos como agentes quimioterapêuticos tem criado problemas devido ao seu efeito tóxico, desenvolvimento de resistência microbiana, resíduo acumulativo e consequências à saúde pública e ao meio ambiente. O monitoramento dos resíduos de quimioterapêuticos em alimentos tem se tornado prioritário para o controle de resíduos de contaminantes na cadeia de produção de alimentos de origem animal. Nos últimos anos, ocorreu um rápido desenvolvimento de novos métodos analíticos, para a determinação destes resíduos. Dentre os métodos de análise mais promissores, inclue-se a técnica de preparo de amostras denominada QuEChERS ("QuEChERS - Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe"), o qual foi empregado neste estudo. Para a quantificação dos resíduos foi utilizada a técnica UPLC-ESI-QToF MS, por se tratar de um método altamente seletivo na determinação de moléculas orgânicas sendo, atualmente, uma das técnicas mais modernas de quantificação de resíduos em alimentos, permitindo níveis de quantificação na ordem de ng/g de matriz. No presente estudo, para fins de desenvolvimento e validação do método analítico foi considerado o limite máximo de resíduo (LMR) estabelecido na União Europeia (EU) (100 ng g-1). O método desenvolvido foi validado en conformidade aos guias de validação da EU e do Ministério da Agricultura Pecuaria e Abastecimento (MAPA) do Brasil, tendo apresentado seletividade sem efeito matriz para as sulfonamidas estudadas. A precisão (intra e interdias) verificada apresentou coeficiente de variação (CV %) menor do que 20 %. Os limites de deteccção (LOD) e quantificação (LOQ) foram 1 ng g-1 e 5 ng g-1, respectivamente. Para as sulfonamidas o valor de CCa variou entre 102,6 e 120,0, e para CCß entre 111,7e 140,1. Para o trimetoprim o valor de CCa e CCß foi de 70,0 e 89,9, respectivamente. Os resultados obtidos indicam que o método é apropriado para a determinação de sulfonamidas e trimetoprim em filés de tilápia Abstract: The aquaculture is at present one of the food production sectors with the highest expansion. It comprises all forms of animal and vegetal aquatic cultures and plants in the fresh water, brackish and marine environments. A major drawback for the sector is the disease outbreaks, with estimated overall losses of several billion dollars per year. This fact occurs because the aquatic environment is more favorable to pathogenic bacteria, regardless of the animal specie, they could reach high densities around them and be ingested during feeding or when they ingest water. Thus, the risk of bacterial infections in fish farming is high and may be due to stress factors such as poor hygiene, overcrowding, poor water quality, temperature fluctuation, poor nutrition, poor management practices, careless handling, improper procedures and transport methods, adaptation to the new environment and capture. In an attempt to minimize losses, antibiotics are administered, by means of the food, to fish for therapeutic (to treat disease) purposes, in aquaculture facilities throughout the world. Due to its low cost and effectiveness in overcoming the most common bacterial infections, sulfonamides are a class of widely used antibiotics. Trimethoprim is another antibiotic agent frequently emplyed in conjunction with sulphonamides to increase, synergistically, the power of treatment against a variety of bacterial infections. The use of antibiotics or chemotherapeutics has created problems due to its toxic effects, bacterial resistance induction, cumulative and residual effects to public health and to the environment. The monitoring of veterinary drug residues in food has become a main concern for the control of residues of contaminants in the production chain of animal foods. In recent years, there was a fast development of new analytical methods for determination of these residues. Among the most promising methods of analysis it is found the technique of sample preparation called "QuEChERS - Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe", which was used in this study. UPLC-ESI-QToF MS technique was used in the quantification of the residues, since it is a highly selective method for the determination of organic molecules, currently, being one of the most modern techniques for quantifying residues in food, enabling the possibility to quantify residues in the order of ng g-1. In the present study, for the purpose of development and validation of the analytical method it was considered the maximum residue limit (MRL) established in Japan (20 ng g-1), which is lower than that established in the European Union (EU) (100 ng g-1). The method was validated according to the validation guidelines of the EU and the Brazilian Ministry of Agriculture Livestock and Supply (MAPA), having presented selectivity and no matrix effect for the sulfonamides studied. The precision (intra-and interday) showed a coefficient of variation (CV %) less than 20 %. The limits for detection (LOD) and quantification (LOQ) were 1 ng g-1 and 5 ng g-1, respectively. The results indicate that the method is suitable for the determination of sulfonamides and trimethoprim in tilapia fillets. For sulfonamides, the value of CCa varied between 102.6 and 120.0, and 111.7 and 140.1 between CCß. For the value of trimethoprim and CCa CCß was 70.0 and 89.9, respectively. The results indicate that the method is suitable for the determination of sulfonamides and trimethoprim in tilapia fillets Mestrado Ciência de Alimentos Mestra em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A piscicultura no Brasil tem crescido de maneira significativa ao longo dos últimos 20 anos, refletido pelo aumento da produção com elevadas densidades de estocagem. Com a intensificação da atividade aquícola, o surgimento de surtos causados por vários agentes etiológicos tornam-se cada vez mais freqüentes, dentre eles as bacterioses. Para combater o agente responsável por essas enfermidades, muitos antibióticos são utilizados de maneira ilícita, podendo, além de não apresentar efetividade durante o tratamento, causar letalidade aos animais e danos ambientais. Atualmente, o Brasil possui apenas dois antimicrobianos aprovados para uso na aquicultura: florfenicol e oxitetraciclina. A enrofloxacina (ENR) é um antibiótico largamente utilizado na medicina veterinária por apresentar elevado potencial de eficácia no tratamento de bacterioses. Porém, apesar de no Brasil ainda não ter uso regulamentado na piscicultura, muitos produtores acabam utilizando-a de forma ilícita, sendo adicionada à ração ou em banhos de imersão. Esses procedimentos de administração favorecem a perda do fármaco por meio da lixiviação, promovem a mudança do ecossistema aquático, além de prejudicar a saúde animal e do consumidor. Possíveis alternativas para facilitar a administração da ENR, minimizando os problemas causados no meio ambiente, são os revestimentos na ração, um dos mais antigos processos farmacêuticos ainda existentes e com grande aplicabilidade em diversos segmentos. Para a formação desses revestimentos, os polímeros utilizados precisam ser compatíveis com as características químicas e físico-químicas do fármaco, garantindo homogeneidade ao produto final e redução de perda do medicamento ao longo do tempo de administração da ração. Para tanto, faz-se necessário o revestimento da ração medicada seguida da avaliação das taxas de lixiviação, a fim de avaliar as perdas do fármaco para o ambiente. Para alcançar este objetivo, é necessária a disponibilidade de um método analítico devidamente validado que garanta a determinação do teor, antes e depois do processo de lixiviação da ração medicada. O método desenvolvido para quantificação da ENR na ração foi baseado na técnica de cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos (HPLC-DAD). O método foi validado considerando os seguintes parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, precisão intradia e interdias, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação. Os resultados obtidos apresentaram conformidade com as recomendações dos guias de validação da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA, 2003) e do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA, 2010), indicando que o método é apropriado para a determinação de ENR na ração medicada. O revestimento da ração medicada tanto com 0,5 % quanto com 2,0 % de polivinilpirrolidona (PVP-K30) reduziu a taxa de lixiviação da ENR na ração para a água, porém essa taxa de redução depende significativamente (p

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campiknas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Edulcorantes sao compostos quimicos de origem sintetica ou natural que tem a propriedade de adocar alimentos, em substituicao total ou parcial a sacarose ou outros acucares e reduzem o teor calorico do produto resultante. A ingestao de adocantes artificiais no mundo tem crescido nos ultimos anos, com o objetivo principal de reduzir a ingestao calorica. O aumento global de doencas cronicas relacionadas com a ingestao de acucar, particularmente a obesidade e a diabetes, e tambem uma razao para o aumento do consumo de adocantes artificiais. O objetivo deste estudo foi avaliar a ingestao de adocantes artificiais atraves do consumo de adocantes de mesa liquidos e avaliar a possibilidade de consumo superior a sua ingestao diaria aceitavel (IDA) estabelecida por FAO/WHO comite de peritos em aditivos alimentares (JECFA). Inicialmente, uma pesquisa de campo foi realizada para avaliar qual marca de adocante de mesa liquido mais consumido no Brasil e as caracteristicas de uso do mesmo. Para tanto, um questionario foi enviado por correio eletronico, para individuos, com questoes relativas ao consumo de adocantes e, caso consumidos, aspectos de uso incluindo marca do adocante, ingestao e motivo de consumo. O questionario tambem continha perguntas sobre questoes socioeconomicas, demograficas e de saude. Em base a esta pesquisa, verificou-se quais sao as marcas de adocantes liquidos de mesa mais consumidas. Os edulcorantes presentes nesses adocantes mais consumidos sao: sacarina, ciclamato, aspartame e acessulfame-K. Foi realizada a quantificacao desses edulcorantes nos adocantes de maior consumo. Para a quantificacao de sacarina, aspartame e acessulfame-K foi utilizada a cromatografia liquida de alta eficiencia acoplada ao detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD). A quantificacao de ciclamato foi realizada por espectrofotometria UV/Vis, em 314 nm, apos derivatizacao para N, Ndiclorociclohexilamina. Os metodos analiticos foram validados de acordo com os seguintes parametros de validacao: linearidade, faixa linear, especificidade, precisao (repetibilidade intra e inter dias), limite de deteccao (LOD) e limite de quantificacao (LOQ). Todos os metodos mostraram parametros de validacao de acordo com o guia para validacao de metodos analiticos estabelecidos pela Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria (ANVISA). A maioria das respostas ao questionario foram do genero feminio (70,2%) e provenientes da regiao Sudeste do Brasil (70,8%). Entre os entrevistados, 47% usavam adocantes liquidos de mesa. A maioria que relatou o uso de adocantes artificiais tinham entre 21 e 32 anos ou acima de 45 anos de idade. Destes, 83% afirmaram nao ter qualquer tipo de patologia e que a principal razao para o consumo de adocantes liquidos de mesa foi a preferencia em relacao ao acucar. Cerca da metade (54%) dos consumidores relataram sentir sabor desagradavel ou amargo quando consomem adocante e 32% nao sabiam qual era o edulcorante artificial contido no adocante. Os resultados da analise dos adocantes liquidos de mesa provenientes do mercado varejista indicou variacao significativa (p

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Claudio Antonio Barbosa de Toledo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Alimentar-se faz parte da cultura do ser humano nao estando unicamente associado a necessidades fisiologicas. Um alimento e constituido de diversas moleculas dentre elas os aminoacidos. O glutamato (GLU) e o anion de um dos principais aminoacidos encontrados nos alimentos que, alem de fazer parte da composicao dos alimentos, e uma molecula essencial para a fisiologia do ser humano. Pode tambem ser ingerido devido ao uso do aditivo alimentar glutamato monossodico (MSG). O GLU desempenha inumeras funcoes no organismo, dentre elas podemos citar: neurotransmissor excitatorio do sistema nervoso central, precursor de GABA e de aminoacidos como prolina e glutamina. Como neurotransmissor o GLU atua sobre quatro tipos de receptores: ionotropicos (AMPA, Kainato e NMDA) e metabotropicos (mGluR1-mGluR8) divididos em tres grupos de acordo com a sua homologia genetica e mecanismos de acao. Esses receptores estao presentes em praticamente todo o sistema nervoso central (SNC) e em outros orgaos como coracao, pulmao e intestino. O MSG e utilizado como realcador de sabor em todo o mundo, sendo que o descobrimento do gosto basico conferido pelo glutamato propiciou a producao industrial do seu sal, glutamato monossodico. O gosto basico conferido pelo glutamato e denominado de Umami, que traduzido do japones significa gosto bom, delicioso. Existem inumeros estudos sobre o uso do MSG como aditivo alimentar (funcao tecnologica), assim como sobre sua funcao fisiologica e seus efeitos no organismo de mamiferos. Organizacoes internacionais e agencias de regulamentacao de muitos paises tem reportado e/ou avaliado que o uso do MSG como aditivo alimentar e seguro. Todavia, alguns autores tem relatado efeitos adversos no sistema nervoso central (SNC) associados a exposicao ao MSG. Assim, o presente estudo teve como objetivo exibir dado morfologico sobre a localizacao do receptor mGluR8 no nucleo arqueado do hipotalamo (NARC) de ratos Wistar e avaliar o efeito da ingestao de dietas adicionadas de diferentes concentracoes de MSG (0% (controle), 1%, 2,5% e 5%) sobre o mGluR8. Tambem foi avaliado o ganho de peso corporeo entre os grupos de animais alimentados com as dietas adicionadas de diferentes concentracoes de MSG. Para evidenciar a presenca do receptor mGluR8 foi utilizada a tecnica de imunohistoquimica. Para avaliar o ganho de peso corporeo os animais foram pesados semanalmente. Todos os dados, tanto da contagem celular da tecnica de imunohistoquimica quanto da pesagem, foram analisados por analise de variancia. Os resultados obtidos indicam nao haver diferenca significativa (p

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O resumo poserá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The abstract is available with the full eletronic digital document Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Tem sido relatado que a administração de glutamato monossódico (MSG) por via parenteral e oral possui um efeito lesivo sobre o núcleo arqueado do hipotálamo provocando alterações na regulação do apetite e, como conseqüência, obesidade e distúrbios relacionados à síndrome metabólica, que são caracterizados por alterações no metabolismo de carboidratos (resistência à glicose e insulina), dislipidemia e doença cardiovascular. Este estudo teve como objetivo avaliar possíveis alterações metabólicas e cardiovasculares quando da exposição oral ao MSG em níveis de até 5,0% na dieta. O estudo foi realizado com ratos diabéticos e não diabéticos. A utilização de animais diabéticos se justifica por serem susceptíveis a indução de possíveis distúrbios metabólicos. Foi avaliado o perfil metabólico característico da condição diabética, incluindo eletrocardiograma, testes bioquímicos, determinação de aminoácidos livres no soro dos animais e a possível alteração histológica de órgãos que são afetados pela condição diabética (fígado, rins e coração). Concluiu-se que o uso de MSG na concentração de até 5,0% na dieta, não alterou os parâmetros estudados, tanto nos animais não diabéticos, como nos diabéticos. As alterações observadas em animais diabéticos refletiram aos distúrbios característicos desta enfermidade, independente da adição de MSG na dieta Abstract: It has been reported that the parenteral or oral administration of monosodium glutamate (MSG) has an deletereous effect on the arcuate nucleus of the hypothalamus, inducing alterations in the control of appetite that can lead to obesity and disorders related to the metabolic syndrome, such as alterations in carbohydrate metabolism (glucose and insulin resistance), dyslipidemia and cardiovascular disease. This study aimed to evaluate possible metabolic and cardiovascular alterations as a consequence to oral exposure to MSG at levels up to 5.0% in the diet. The study was carried out using diabetic and non-diabetic rats, the use of diabetic animals being justified by their susceptibility to the induction of possible metabolic disorders. The metabolic profile characteristic of the diabetic condition was evaluated, including electrocardiogram, biochemical tests, determination of amino acids in the serum and the possible histological alteration in the organs that are affected by this condition (liver, kidneys and heart). In conclusion, the use of MSG at levels up to 5.0% in the diet did not change the parameters studied in both: non diabetic and diabetic animals. The alterations observed in the diabetic animals reflected the metabolic changes characteristic of this disease, regardless the addition of MSG to the diet Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Maria Teresa de Alvarenga Freire Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The abstract is available with the full electronic document Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O setor de alimentação coletiva para os trabalhadores está em constante expansão no Brasil, destacando-se pela empregabilidade direta e indireta e pela contribuição na renda econômica do país. O PAT (Programa de Alimentação do Trabalhador) foi instituído com o objetivo de melhorar as condições das refeições oferecidas nas empresas aos trabalhadores. O cardápio oferecido contém, dentre outras preparações, saladas, carnes e embutidos de forma geral, por isso a importância de monitorar os saís de nitrito e nitrato nessas refeições. Os sais de nitrato e nitrito estão naturalmente presentes no ambiente, na água e nos vegetais, sendo também utilizados como aditivo alimentar, principalmente como agente antimicrobiano em produtos cárneos. Desta forma os trabalhadores estão sujeito à exposição aos compostos nitrogenados em função do cardápio elaborado. O nitrato é considerado um composto de baixa toxicidade e seu risco à saúde humana depende da sua redução ao nitrito, o qual pode conduzir a metamioglobinemia ou formar compostos N-nitrosos. O Comitê da Organização das Nações Unidas para Agricultura e Alimentação/Organização Mundial da Saúde (FAO/OMS) de Peritos em Aditivos Alimentares (JECFA) estabeleceu uma ingestão diária aceitável (IDA) para nitrato e nitrito de 0-3,7 mg kg-1 de peso corpóreo e de 0-0,07 mg kg-1 de peso corpóreo, respectivamente. No presente trabalho foi validado um método para a determinação de nitrito e nitrato em refeições coletivas utilizando análise por injeção em fluxo (FIA), com determinação espectrofotométrica através da formação do complexo FeSCNNO+. Foram avaliados os seguintes parâmetros analíticos: faixa linear, linearidade, sensibilidade, limite de quantificação e exatidão. O método foi utilizado para a determinação de nitrito e nitrato em refeições oferecidas a trabalhadores de Campinas e Limeira, no Estado de São Paulo. Os teores médios (mínimo e máximo) de nitrito e nitrato nas amostras analisadas foram de 6,25 (4,66 e 9,89) mg kg-1 de nitrito e 35,63 (1,56 e 75,44) mg kg-1 de nitrato. Estimou-se a ingestão de nitrito e nitrato através do consumo do almoço oferecido aos trabalhadores, considerando o teor médio (mínimo e máximo) de nitrito e nitrato nas amostras analisadas, o peso médio dos indivíduos (66 kg) e o peso médio da refeição (400g). Os valores de ingestão média (mínimos e máximos) calculados foram 0,04 (0,02 e 0,05) mg kg-1 peso corpóreo/refeição para nitrito e 0,21 (0,01 e 0,54) mg kg-1 corpóreo /refeição para nitrato. Considerando que o almoço representa 40 % do total de alimentos consumidos diariamente, a ingestão de nitrito, mais não a de nitrato, supera o valor de IDA estabelecido pelo JECFA, o que indica que medidas devam ser tomadas visando minimizar o risco à saúde dos trabalhadores decorrente da ingestão de nitrito Abstract: The sector of collective meals to the workers is continually expanding in Brazil and stands out for it¿s contribution to the countries economy and the direct and indirect number of associated jobs. The Feeding Worker Program was instituted with the objective of improving the quality of meals offered by companies to workers. Nitrate and nitrite salts are naturally presents in the atmosphere, water and in vegetables, and are also used as food additives, mainly as antimicrobial agents in meat products. Nitrate is considered to have relatively low toxicity and the risk to human health primarily depends on its reduction to nitrite, which can cause methaemoglobinaemia, or form N-nitroso compounds such as nitrosamines that may cause cancers. The menu offered in the Feeder Worker Program usually contains salads, meats and processed food all of which may contain nitrite and nitrate, potentially exposing the workers to these compounds and justifying the monitoring of these compounds in the workers food. The Joint FAO/WHO Committee on Food Additives (JECFA) established an acceptable daily intake (ADI) for nitrate and nitrite of 0-3.7 mg kg-1 of body weight and 0-0.7 mg kg-1 of body weight, respectively. In the present work a method was validated for nitrite and nitrate determination in collective meals using flow injection analysis (FIA), with spectrophotometric determination through the formation of FeSCNNO+. The following performance criteria for nitrite and nitrate were evaluated: linear range, linearity, sensitivity, limit of detection, limit of quantitation and accuracy. The method was used for the determination of nitrite and nitrate in meals offered to workers in Campinas and Limeira, in the State of São Paulo. The average levels (minimum and maximum) of nitrite and nitrate in the analyzed samples were 6.25 (4.66 and 9.89) mg kg-1 for nitrite and 35.63 (1.56 and 75.44) mg kg-1 for nitrate. Considering the daily exposure to nitrite and nitrate through the consumption of the meals offered to the workers, using an average weight of individuals of 66 kg and weight of the average meal eaten of 400 g, the average exposure (minimum and maximum) to nitrite was 0.04 (0.02 and 0.05) mg kg-1 per meal and to nitrate 0.21 (0.01 and 0.54) mg kg-1 per meal. Taking into consideration that lunch represent 40 % of total foods daily consumption, the nitrite intake, but not nitrate, overcome the ADI value established by JECFA, suggesting that measurements should be taken in order to minimize the risk to the workers health due to nitrite intake Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guilherme Reyes Reyes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The abstract is available with the full electronic document Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes, Maria Teresa de Alvarenga Freire Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade Engenharia de Alimentos Resumo: O principal enfoque do presente trabalho foi o desenvolvimento e validação de um método analítico para a determinação de contaminantes voláteis provenientes de embalagens de polietileno tereftalato (PET), utilizando na etapa de extração a técnica de concentração dinâmica do espaço livre e técnicas cromatográficas para a identificação e quantificação. O método foi validado utilizando-se cromatografia a gás com detector de ionização de chama (CG/DIC). Cromatografia a gás acoplada a espectrômetro de massas (CG-EM) foi utilizada como técnica de confirmação na identificação de substâncias oriundas da embalagem PET. Na etapa de otimização e validação do sistema, tolueno, clorobenzeno, benzaldeido e limoneno foram utilizados como representantes de classes de substâncias voláteis apolares e polares. A condição ótima de extração foi de 155°C por um tempo de 90 minutos. O método desenvolvido foi utilizado para avaliar dois processos de lavagem de embalagens PET pós-consumo atualmente empregados no Brasil. Os resultados obtidos indicaram que os contaminantes voláteis não são totalmente removidos pelos processos de lavagem avaliados, podendo causar risco à saúde do consumidor se o material reciclado for utilizado para contato direto com alimentos Abstract: The main approach of the present work was the development and validation of an analytical method for the determination of volatile contaminants from polyethylene terephthalate (PET) packaging, using the headspace dynamic concentration technique in the extraction stage and chromatographic techniques for identification and quantification. The method was validated using gas chromatography with flame ionization detector (GC/FID). Gas chromatography connected with mass spectrometer (GC-MS) was used as technique of confirmation in the substance identification of PET packaging. In the stage of system optimization and validation, toluene, chlorobenzene, benzaldehyde and limonene had been used as class representative of polar and apolar volatile substances. The best condition of extraction was 155°C for 90 minutes. The developed method was used to evaluate two washing processes of PET post-consumer packaging currently employed in Brazil. The results indicated that volatile contaminants are not totally removed by the evaluated washing processes, potentially causing risk to consumer health if the recycled material will be used in direct contact with foods Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Nitrito e nitrato são os principais ingredientes usados no processo de cura conferindo aroma e cor avermelhada caracteristicos dos produtos curados como, por exemplo, a salsicha e atuando como antioxidantes e antimicrobianos, impedindo o crescimento de Clostridium botulinum. O efeito tóxico mais relevante da presença de nitrato e nitrito é a formação de nitrosaminas as quais são compostos N-nitroso que podem ser formados da reação de agentes nitrosantes com aminas secundárias ou terciaérias. a maior exposição a estes compostos acontece através dos alimentos, onde o modo de preparo e processamento tem grande influência na quantidade de nitrosaminas presente no alimento, sendo que a formação de nitrosaminas durante o processamento pode ser reduzida por incorporação de inibidores, tais como, ácido ascórbico ou xtocoferol. A nitrosaminas voláteis são as que mais ocorrem em alimentos, e são potentes carcinógenos em animais de laboratório induzindo tumores em vários orgãos. O propósito do presente estudo foi otimizar e validar o método de amostragem "headspace" por microestração em fase sólida (SPME, do inglês Solid Phase Microextraction) usando cromatografia gasosa acoplada a um dectector de quimioluminescência ) TEA, do inglês Thermal Energy Analyser) para a determinação de nitrosaminas voláteis em salsichas "hot-dog". As amostras foram adquiridas bo comércio da cidade de Campinas, São Paulo. Nas amostras analisadas não foram encontradas nitrosaminas voláteis em níveis detectáveis. Diferentes modos de preparo, como cozimento em água e fritura, não contribuíram para a formação de nitosaminas. Os resultados indicam a ausência de nitrosaminas nas amostras analisadas devido, possivelmente, aos baixos teores de nitrito disponível para a reação com as aminas prsentes na carne e/ou pela ação efetiva do ascorbato de sódio atuando como inibidor da formação de nitrosaminas Abstract: During the curing process, nitrite and nitrate are the principal ingridients udes for curing. They confer and colored color characteristic of the cured meat as sausage, and act as antioxidants and antimicrobial, comtrolling the growth of Clostridium botulinum. The most important toxic effect of the presence of nitrate and nitrite is the formation of nitrosamines. These are N-nitroso compounds that can be formed by the reaction of the nitrosating agents with secundary or tertiary amines. The major exposure to these compounds happens through foodstuffs, where the procedures of preparation and processing have great influence in the present amount of nitrosamines in the food. The formation of nitrosamines during the processing can be reduced by incorporation of inhibitors, such as, ascorbic acid or x-tocoferol. The volatile nitrosamines are the ones that occur in foods more frequentely, and are strong carcinogens in laboratory animals inducing tumors in a variety of organs. The purpose of the present study was to optimize and to validate a simple method using headspace sampling by solid-phase microextraction gas chromatography with thermal energy analyzer detector (HS-SOME-GC-TEA) for the determination of volatile nitrosamines in hot-dog sausages. The samples were purchased from local markets (Campinas, São Paulo). In the analyzed samples volatile nitrosamines have not been found in detectable levels. Different cooking procedures, as boiled in water and frying, did not contributr to the formation of nitrosamines. The results indicate the absence of nitrosamines in the samples nalyzed possibly because of low content of available nitrite for the reaction with the amines found in the meat and because of the action of dodium ascorbate acting as inhibitor for the formation of nitrosamines Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Susanne Rath Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Os objetivos do presente estudo foram estabelecer e validar métodos analíticos (utilizando análise por injeção em fluxo - FIA, e cromatografia líquida de alta eficiência - CLAE), para a determinação de oxitetraciclina (OTC), doxiciclina (DC) e tetraciclina (TC) em medicamentos veterinários e em alimentos (leite e iogurte), assim como avaliar a estabilidade dessas tetraciclinas durante o processamento térmico do leite e durante o processo de fabricação e armazenamento do iogurte. As análises por FIA foram desenvolvidas baseadas na emissão de fluorescência das tetraciclinas em meio básico. As análises por CLAE foram realizadas utilizando-se uma fase estacionária (C8 de fase reversa), fase móvel [acetato de sódio 0,1 mol L-1 + EDTA 25 mmol L-1 + cloreto de cálcio 35 mmol L-1] : metanol (65:35, v/v) e detector de fluorescência. No processamento térmico do leite foram utilizados três procedimentos distintos de aquecimento (microondas, chapa de aquecimento e fogão). A produção do iogurte foi realizada com leite adicionado de tetraciclinas, para verificar a degradação dos antimicrobianos durante o processamento e vida-de-prateleira do produto. Os parâmetros avaliados para validação foram estabelecidos para cada matriz analisada (leite e iogurte). As análises por FIA, apresentaram detectabilidade (120 ng); e a recuperação variou de 98 a 104 % para as três tetraciclinas. Os resultados obtidos indicaram que o método FIA proposto é adequado para a determinação do princípio ativo de medicamentos de uso veterinário à base de tetraciclinas. Com relação às análises cromatográficas, as porcentagens de recuperação das tetraciclinas, nas amostras de leite e iogurte foram: 108% para OTC, 87% para DC e 99,8% para TC, com limite de quantificação de 27; 46 e 33 ng mL-1 para OTC, DC e TC respectivamente . No processamento térmico, a maior percentagem de degradação foi constatada na placa de aquecimento (11; 28 e 15 %) para OTC, DC e TC, respectivamente. Verificou-se que no processamento do iogurte, contaminações com tetraciclinas, acima do limite máximo recomendado (LMR), não foram suficientes para inibir o processo fermentativo, e ao final de 30 dias de armazenamento (sob refrigeração) do iogurte, foram obtidas degradações de 52% (OTC) , 61% (DC) e 67% (TC). Visto que na determinação das tetraciclinas no leite, a presença da riboflavina era evidenciada nos cromatogramas obtidos, foi estabelecido e validado um método analítico simples e rápido para a determinação desse composto, utilizando CLAE. O método desenvolvido para análise de riboflavina, apresentou uma recuperação satisfatória (92%) e limites de detecção e de quantificação ( 0,22 µg mL-1 e 0,75 µg mL-1, respectivamente), mostrando-se robusto na presença de substâncias fluorescentes como as tetraciclinas Abstract: The objectives of the present study were establish and validate analytical methods (using flow injection analysis - FIA and high performance liquid chromatography - HPLC) for the determination of oxitetracycline (OTC), doxycycline (DC) and tetracycline (TC) in veterinarians drugs and foods (milk and yoghurt). As well as evaluating the stability of these tetracyclines during the thermal processing of milk and during the process of manufacture and storage of the yoghurt. The analyses for FIA were developed based on the emission of fluorescence of the tetracyclines in alkaline solution. The analyses for HPLC were carried through using a stationary phase (C8 of reverse phase), mobile phase [acetate 0.1 mol L-1 + EDTA 25 mmol L-1 + calcium chloride 35 mmol L-1]: methanol (65:35, v/v) and fluorescence detection. In the thermal processing of milk, three distinct procedures of heating were used (microwaves, plate of heating and cooking-stove). The production of the yoghurt was carried through with added milk of tetracyclines, to verify the degradation of antimicrobians during the processing and shelf-life of the product. The parameters evaluated for validation were established for each analyzed matrix (milk and yoghurt). The analyses for FIA showed detectability (120 ng) and the recovery varied of (98 to 104%) for tetracyclines. The results indicated that the FIA method considered is suitable for the determination of tetracyclines in veterinarian formulations. In the chromatographic analyses, the percentage of recovery of the tetracyclines, in the samples of milk and yoghurt was: 108% for OTC, 87% for DC and 99.8% for TC, with limit of quantification of 27; 46 and 33 ng mL-1 for OTC, DC and TC respectively. Higher degradation occurs when the heating was conducted in the heating plate (11; 28 and 15%) for OTC, DC and TC, respectively. It was verified that in the processing of the yoghurt, contaminations with tetracyclines, above of the LMR, that it was not enough to inhibit the fermentative process, and to the end of 30 days of storage (under refrigeration) of the yoghurt, the tetracyclines levels were reduced in 52%, 61% and 67%, for OTC, DC and TC, respectively. The method developed for riboflavin analysis, presented a satisfactory recovery (92%) and limits of detection and quantification (0.22 µg mL-1 and 0.75 µg mL-1, respectively), showing robustness in the presence of fluorescent substances as the tetracyclines Doutorado Ciência de Alimentos Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Foi validado um método para o monitoramento de ivermectina em leite destinado ao consumo humano, utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de fluorescência. Após separação da ivermectina da matriz, por extração líquido-líquido, e etapas de purificação do extrato, a mesma foi derivatizada com 1-metilimidazol em meio de N,N-dimetilformamida para a formação de derivado fluorescente, o qual foi determinado por CLAE em fase reversa C18,fase móvel metanol:água (96:4 v/v) e fluxo de 0,7 mL/min. Os sinais de excitação e emissão do detector de fIuorescência foram fixados em 360 e 470 nm, respectivamente. A curva padrão mostrou-se linear no intervalo de 10 a 100 ng de ivermectina/mL. Considerando-se 5 mL de amostra, o limite de quantificação do método foi calculado em 2 ).Lgde ivermectina/L de leite. A taxa de recuperação variou de 70 a 87%, com uma média de 77,9 :t 3,2 %. O coeficiente de variação do método foi de 13% (n=5). Foram analisadas 168 amostras de leite disponíveis ncomércio, das quais 17,8 % apresentaram nível residual acima do limite de determinação do método. Entretanto, nenhuma das amostras apresentou resíduo de ivermectina acima do limite máximo de resíduo (10 ).Lg/L)estabelecido pelo Ministério da Agricultura e Abastecimento do Brasil. Também avaliou-se a cinética de eliminação da ivermectina no leite de bovinos (n=10, peso corpóreo 420 a 595 kg) tratados, por via subcutânea, com uma dose única de 200 ).Lg/kgpc do princípio ativo de uma formulação comercial ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. Abstract: A high performance liquid chromatography (HPLC) with fluorescence detector methodology was validated and used for the surveillance of ivermectin residues in milk intended for human consumption. After extraction of the ivermectin by liquid-liquid extraction and purification of the extract, the compound was derivatized with 1-methylimidazol in N,N-dimethyl formamide for the formation of a fluorescent derivative, which was determined by HPLC, reverse phase C18, mobile phase methanol:water (96:4 v/v) and flow rate 0,7 mL/min. The excitation and emission signals of the fluorescence detector where adjusted at 360 and 470 nm, respectively. The calibration curve was linear in the range of 10 to 100 ng ivermectin/mL. Considering a sample of 5 mL, the quantification limit for milk was calculated to be 2 j..lg ivermectin/L. The percentage of recovery varied from 70 to 87%, with an average of 77,9 :!:3,2%. The coefficient of variation of the method was 13% (n=5). Of 168 samples analyzed, 17,8 % presented residue level above the determination limit. Nevertheless, none of them presented residue level above the maximum residue limit (10 j..lg/L) established by the Brazilian Ministry of Agriculture. Also, it was studied the kinetics of elimination of ivermectin in the milk of bovine (n=10, body weigh 420 to 595 kg) treated with a single subcutaneous dose of 200 j..lg/kgof a commercial formulation. Samples of milk were collected during the morning and afternoon periods, up to 30 days after the drug application, and frozen until the drug assay. The main residue eliminated in the milk was the unalterated drug and it was detected in the milk among 13 hours and 20 days after dosing, in a level higher to the limit of determination of the method. The maximum time (Tmax) to reach the maximumconcentration(Cmax) of 47,50 :!: 6,28 47,5 mg/kg was 2 days, with a daily decay of 19.8 %. Considering the total amount of ivermectin eliminated, the main value of excretion was 1047 j..lg, which is equivalent to 1.03 % of the dose applied to the animais ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Miguel Arcanjo Areas Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: o aumento na ingestão de fibras alimentares solúveis proporciona importante efeito no metabolismo da glicose e dos lipídios. A farinha de konjac (AmorphophaJ/uskonjac c. koch) por formar soluções aquosas de alta viscosidade, apresenta efeitos fisiológicos compatíveis aos das fibras solúveis. Assim, o objetivo deste estudo foi: a) avaliar um modelo de diabetes não insulino dependente em ratos Wistar recém nascidos, induzido pela administração de streptozotocina (STZ); b) avaliar a indução da hipercolesterolemia nos ratos Wistar com diabetes neonatal induzido por streptozotocina (Dn-STZ), e c) verificar o efeito da farinha de konjac sobre os lípides plasmáticos [colesterol total (CT), triglicerídeos (TG), lipoproteina de baixa densidade-colesterol (LDL-c), lipoproteina de alta densidade-colesterol (HDL-c)], e hepáticos (CT e TG), assim como comparar o efeito hipocolesterolêmico da fibra konjac com aquele induzido por dois fármacos hipolipemiantes que atuam através de diferentes mecanismos de ação (colestiramina e pravastatina), utilizando, para tanto, ratos Wistar com diabetes neonatal e hipercolesterolemia induzida. Para a avaliação da indução do diabetes não insulino dependente os ratos Wistar, machos e fêmeas, após dois dias do nascimento, receberam, por via intraperitoneal, 100 mg/kg pc de STZ em tampão citrato pH 4,5. O grupo controle recebeu volume equivalente de tampão citrato. A confirmação da indução do diabetes foi realizada através da determinação da glicemia de jejum e pós prandial, a qual foi avaliada 45 min após o recebimento de solução de glicose (2,0 g/kg pc) por sonda oro-gástrica, através do método glicose-oxidase ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. Abstract: Not informed. Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Doutorado

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O trabalho centrou-se no estudo de absorvedores de radiação ultravioleta (UV) utilizados em garrafas de polietilenotereftalato (PET) destinadas ao acondicionamento de óleos vegetais. Duas metodologias de análise, uma utilizando a Cromatografia por Exclusão-CLAE l/UV e outra a CG/EM2, foram desenvolvidas. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. Abstract: This work was aimed to study UV stabilizers used in polyethylenterephtalate (PET) bottles intended to packaging for edible oil. Analytical methodologies employing SEC-HPLC1/UV and GC/MS2 were developed to determine UV stabilizers. The components of a synthetic mixture of antioxidants and UV stabilizers containing BHT, Tinuvin 326, Cyasorb UV 5411, Tinuvin P and Irgafos 168 were separated and quantified by SEC-HPLC/UV. Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Feliz Guillermo Reys Reys Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A estabilidade térmica de embalagens para alimentos de polietileno tereftalato (PET) foi avaliada sob diferentes condições de temperatura e tempos de exposição, através da determinação de oligômeros do PET e das substânciasvoláteis liberadas durante o aquecimento. A primeira etapa da determinação da estabilidade térmica do polímero, foi realizada aquecendo-se filmes puros de PET a 150°e por 30 e 60 minutos,260 °e, por 5 minutose 260 °e e 270 °e por 30 e 60 minutos. As principais alterações ocorreram a 260 °e e 270 °e, onde verificou-se um aumento na concentração de oligômeros alicíclicos da segunda série, em relação à concentração inicialmente presente determinada antes do processo de aquecimento. Substâncias voláteis identificadas, a 260 e 2700e, incluíram o tolueno, benzaldeído, p-xileno, derivados do ácido benzóico e ésteres do ácido tereftálico. A segunda etapa da determinação da estabilidade térmica do PET teve como objetivo verificara adequação do polímerotanto à utilização em fomos convencionaise de microondas, como a adequação do polímero a posteriores processos de reciclagem, visto que em tais processos, o material é submetido a condições severas de aquecimento.Para tanto, as substâncias voláteis liberadas por diversos materiais (garrafas, filmes multi-camadas e "roasting bags"),' foram determinadas sob condições de aquecimento de 120, 150 e 230 °e, durante 50 minutos. Embora o PET tenha se mantido estável sob condições severas de aquecimento, em relação à composição de oligômeros e substâncias voláteis, verificou-se a presença de substâncias de degradação de embalagens de materiais multicamadas,como componentes de tintas de impressão e adesivos, bem como substâncias provenientes da degradação do papel e antioxidantes. Os resultados obtidos sugerem que o PET é estável quando aquecido a temperaturas de até 230 °e durante 50 minutos, o que indica que embalagens de PET são adequadas para aquecimento de alimentos em fomos convencionais e de microondas. A estabilidade apresentada pelo PET, em relação à composição de oligômeros, quando aquecido a altas temperaturas sugere ainda, que o polímero é adequado para reutilização em processos de reciclagem secundária. Abstract: The thermal stability of PET food packaging materiais was evaluated under severe heating conditions at several exposure times, by means of the determination of PET oligomers and volatile substances released under heating. The first step for determination of thermal stability of the polymer was carried out heating PET films at 150°C for 30 and 60 minutes, 260°C, for 5 minutes and 260 °C and 270°C for 30 and 60 minutes. The main changes occurred at 260°C and 270°C, with an increase in concentration for second seires opened chain oligomers identified, in relation to their concentration determined prior to heating. Volatile substances identified at 260 and 270°C, included toluene, benzaldehyde, p-xylene, derivatives of benzoic acid and esters of terephthalic acid, and were released at 260°C and 270°C. The second step of the present study was to verify the suitability of PET as a food packaging material intended to conventional and microwave ovens, as well as the suitability of the polymerfor future recycling procedures, where PET is exposed to high temperature. For the experiments, different samples were (bottles, multi-layer films and roasting bags) were exposed at temperatures of 120, 150 and 230°C, for 50 minutes. PET showed good stability at tempertures below 150°C, with few volatile substances released in very low concentrations. Although PET had shown good stability under heating in relation to oligomer and volatiles composition, degradation compounds of other materiais in PET laminates, like printing ink and adhesive components, as well as degradation products of antioxidantsand paper were identified. The results suggest that PET is stable at temperatures up to 230°C for 50 minutes, indicating that PET is suitableas food packaging materials intended to conventional and microwave ovens. In addition, the good stability of PET, in realtion to oligomer composition, when heated to high temperatures, suggest that the polymeris also suitable for further recycling procedures. Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reys Reys Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O presente trabalho teve por objetivo avaliar o efeito da polpa de laranja, um subproduto da produção industrial de suco, em parâmetros fisiológicos, bioquímicos e nutricionais, utilizando ratos alimentados com dieta hiperlipídica. Os animais receberam água e dieta ad libitum, durante 28 dias. Os grupos Controle, NF 2,5 e NF 25 representaram os animais que consumiram respectivamente, dietas contendo 1% de celulose, 2,5 e 25% de polpa de laranja. Verificou-se que não houve variação significativa da ingestão alimentar e hídrica, do volume urinário, peso corporal e peso relativo do fígado e estômago (cheio e vazio). Por outro lado, a maior ingestão de material fibroso do grupo NF 25, aumentou significativamente a excreção fecal de nitrogênio e, conseqüentemente, diminuiu a digestibilidade aparente da proteína da dieta (Da), em relação aos demais grupos, assim como o quociente de eficiência protéica operacional (PER op.), em relação ao grupo NF 2,5. Entretanto, não foram verificadas diferenças significativas no balanço de nitrogênio (BN), valor biológico aparente operacional (VBa op.) e utilização protéica liquida operacional (NPU op.) no grupo NF 25 em relação aos grupos Controle e NF 2,5, o que sugere que a polpa de laranja não afetou o grau de utilização da proteína da dieta. A ingestão de polpa de laranja pelo grupo NF 25 proporcionou, significativo aumento da excreção fecal de gordura, contribuindo para a menor digestibilidade aparente de lipídeos, redução dos valores plasmáticos de triacilglicerol e lipídeos totais, e tendência à redução da colesterolemia. No entanto, não se observaram diferenças quanto às concentrações hepáticas desses lipídeos. Portanto, a polpa de laranja por reduzir os valores lipidêmicos observados, pode contribuir na prevenção desse fator de risco relacionado ao desenvolvimento de doenças cardiovasculares Abstract: The present work had as a purpose to evaluate physiological, nutritional and biochemical parameters in male Wistar rats which were a consequent of chronic ingestion of hiperlipidic diets containing orange pulp, a by-product obtained during the industrial production of the orange-juice. The animals were feed ad libitum during 28 days. With diets containing 1% cellulose, 2,5 and 25% orange pulp, which were called Control, NF 2.5 and NF 25 groups. 'Ihere were no significant variations in the food and water intake urinary excretion, body weight gain or relative weight of the liver and stomach (full and empty), however, the higher fiber intake of the NF 25 group increased significantly the excretion of fecal nitrogen. Consequently this decreased the apparent nitrogen digestibility (Da), in relation to the other groups, as well as the protein efficiency ratio (PER op.) in relation to the NF 2.5 group. Nevertheless, there was no significant variatiation in the nitrogen balance (NB), apparent biological value (VBa. op.) or net protein utilization (NPU op.) in the NF 25 group in comparison to the Control and NF 2.5 groups. This observation means that the orange pulp did not affected the dietary protein utilization. Orange pulp intake by the NF 25 group induced a significant increase in the fecal fat excretion, which contributed to lowering apparent lipid digestibility and reduced the plasmatic value of triacylglycerols, total lipids and also showed a tendency to reduce the serum cholesterol values. But, no diferences in hepatic concentrations of triacylglycerols, total lipids or cholesterol were observed among the Control NF 2,5 and NF 25 groups. In conclusion, the results of this study suggested that orange pulp ingestion may be used to reduce the human health risk associated with high blood lipids levels due to high dietary fat intake Mestrado Fisiologia Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A ingestão potencial de nitrato e de nitrito através das refeições oferecidas nos restaurantes universitários da UNICAMP foi estimada com base nos dados de consumo de alimentos e valores das determinações analíticas desses compostos nos alimentos consumidos. Foi feito o perfil dos usuários de acordo com as seguintes características demográficas: sexo idade, atividade profissional e peso corpóreo. Dados de consumo alimentar foram obtidos de trabalho desenvolvido previamente nestes restaurantes. Através de método colorimétrico determinou-se o conteúdo de nitrato e de nitrito em 22 alimentos componentes das refeições dos restaurantes. Os níveis mais altos de nitrato foram encontrados em salada de beterraba crua 2138,6 :t 657,5 mg/kg, salada de acelga 935,5 :t 315,6 mg/kg, salada de repolho 811, O :t 604,3 mg/kg e laranja 711,1 :t 653,3 mg/kg; enquanto que o conteúdo mais elevadp de nitrito foi encontrado em salsicha ao molho de tomate 19,3 :t 1,6 mg/kg, salada de beterraba crua 9,5 :t 7, 1 mg/kg E7 laranja 1 ,9 :t 1,9 mg/kg. Com base nos dados de peso corpóreo médio da população estudada 65,3 kg, estimou-se a ingestão potencial de nitrato e de nitrito por refeição em 3, 3mg/kg dE7 peso corpóreo e 0,02 mg/kg de peso corpóreo, respectivamente. Para o usuário que consome duas refeições, almoço e jantar, a ingestão potencial estimada para o nitrato estava acima da Ingestão Diária Aceitável IDA, enquanto que para o nitrito, esta representa um quinto de valor máximo recomendado Abstract: The potential intakes of nitrate and nitrite in meals offered at UNICAMP's universitary restaurants were estimated on the basis of average dietary intakes data and values of analytical determinations compounds. The in the food consumed of these individuals according to the following characterized were demographic characteristics: sex, age, professional activity and body weight. Data on food consumption were obtained from previous work developed in these restaurants. The 22 food items that can be used to formulate the composition of the restaurants daily meals were analyzed by colorimetric method to determine the nitrate and nitrite contento. The highest levels of nitrate were found in: crude beetroot salad 2138,6 1: 657,5 mg/kg, swiss chard salad 935,5 1: 315,6 mg/kg, crude cabbage salad 811,0 1: 604,3 mg/kg and orange 711,1 1: 653,3 mg/kg; while the highest nitrite contents were in sausage in tomato sauce 19,3 1: 1,6 mg/kg, crude beetroot salad 9,5 1: 7, 1 mg/kg and orange 1,9 1: 1,9 mg/kg. Based on the average body weight of the studied population 65,3 kg, the potential intakes estimated for nitrate and nitrite from one meal were 3,3 mg/kg body weight and 0,02 mg/kg body weight, respectively. For the individuals who consumed 2 meals, lunch and dinner, the estimated potential intake for nitrate was above its acceptable Daily Intake ADI, while for nitrite it represented one fifth of the recommended ADI Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos